KR20190015683A - 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 포함하는 피부상태 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 포함하는 피부상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 또는 피부 노화 방지용 화장료 조성물, 피부 외용제, 의약외품 조성물, 약학적 조성물 및 피부 미백 또는 피부 노화 방지 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체는 항산화 효과, 티로시나아제 활성 저해 효과 및 멜라닌 생성 억제 효과가 우수하며, 나아가 세포에 대하여 독성을 나타내지 않으므로, 피부 미백, 피부 노화, 피부 색소 침착 등의 방지, 개선 또는 치료에 유용하고 안전하게 활용될 수 있다.

Description

황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 포함하는 피부상태 개선용 조성물 {Composition for improving skin conditions comprising Dendropanax Morbifera extracts-metal nanoparticles complex}

본 발명은 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 포함하는 피부상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 또는 피부 노화 방지용 화장료 조성물, 피부 외용제, 의약외품 조성물, 약학적 조성물 및 피부 미백 또는 피부 노화 방지 방법에 관한 것이다.

사람의 피부색은 피부 내 멜라닌(melanin)의 농도와 분포에 따라 유전적으로 결정되나, 태양 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌 생성에 대한 화학적 작용은 현재까지 여러 논문 등을 통해 많이 보고되고 있으며, 전구물질로서 티로신(tyrosine)이 티로시나아제(tyrosinase)에 의해 디히드록시페닐알라닌(dihydroxyphenylalanine; DOPA)으로 전환되고, 그 후 도파퀴논(dopaquinone)이라는 물질 등을 거쳐 최종적으로 멜라닌으로 전환된다고 알려져 있다. 이렇게 합성된 멜라닌은 피부색을 짙게 만드는데, 건강 또는 미용상의 요구로 인해 멜라닌 합성을 억제하여 피부색을 밝게 하려는 피부 미백 방법에 관한 연구가 활발히 진행 중이며, 관련하여 수박 내피 추출물을 포함하는 피부 미백 화장료 조성물(한국 등록특허공보 제10-1325464호), 마시멜로, 카렌듈라, 성모초 등의 식물추출물을 함유하는 피부 상태 개선용 조성물(한국 공개특허공보 제 공개번호 10-2015-0112103호) 등이 개발된 바 있다.

아울러, 일반적으로 알려진 미백 성분으로는 코지산(Kojic acid) 또는 알부틴(Arbutin) 등과 같은 타이로시나아제(tyrosinase)의 활성을 억제하는 물질, 비타민 C(L-Ascorbic acid) 또는 이들의 유도체와 각종 식물 추출물이 있다. 이들은 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써, 피부 톤을 밝게 하여 피부 미백을 실현할 수 있을 뿐만 아니라, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착증의 개선이 가능하다. 그러나 피부 적용 시, 자극과 발적 등의 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나, 효과가 미미하여 실질적인 효과를 기대할 수 없는 문제점이 있었다.

멜라닌 색소의 침착뿐만 아니라 피부 노화도 다양한 요인에 의해 야기되는데, 특히 몸의 대사 과정에서 만들어지는 활성산소의 라디칼(radical)이 대표적인 요인이다. 라디칼이 피부 세포에 누적되면서 피부가 얇아지고 탄력이 떨어지며, 이로 인해 주름, 피부 처짐 노화가 야기된다. 이를 방지하기 위하여, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 A의 전구체인 베타카로틴, 및 비타민 A의 유도체인 레티노산(retinoic　acid) 등과 같은 항산화 물질을 적극적으로 이용하고 있다. 이들은 건강기능식품, 화장품 등의 유효성분으로 각광받고 있는데, 특히 비타민 C는 피부 진피에서 콜라겐의 합성과 탄력을 유지하고, 멜라닌 색소가 침착되는 것을 막아 피부 미백에 중요한 역할을 한다.

한편, 황칠나무는 산형화목 두릅나무과에 속하는 식물로서, 덴드로파녹시드(dendropanoxide) 등의 정유 성분, 사포닌, α-큐베벤(α-Cubebene), β-엘레멘(β-Elemene), β-셀리넨(β-Selinene), α-무로렌(α-Muurolene), 저마크렌 D(Germacrene D), β-시토스테롤(β-Sitosterol) 등의 다양한 생리활성 성분이 포함되어 있다고 알려져 있다. 이에 따라, 정혈작용, 간기능 개선, 항산화 작용, 경조직(뼈와 치아) 재생, 면역력 강화, 신경안정, 항균작용, 항암작용 등의 효과를 나타냄에 따라, 전통의학에서는 유용한 약재로서 사용된다. 그러나, 황칠나무의 미백 효과에 대해서는 알려진 바 없으며, 이를 이용하여 제조된 금 또는 은 나노입자의 미백 효과도 알려진 바 없었다.

이러한 배경하에, 본 발명자들은 피부 미백을 촉진하고 피부 노화를 방지하는 물질을 개발하고자 예의노력 연구한 결과, 황칠나무 잎 추출물을 이용하여 제조된 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체는 우수한 미백 효과뿐만 아니라 우수한 항산화 활성을 나타냄을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 하나의 목적은 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 또는 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 또는 피부 노화 방지용 피부 외용제를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 또는 피부 노화 방지용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는, 피부 색소 침착의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는 조성물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 피부 미백 또는 피부 노화 방지 방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 하나의 양태는 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 또는 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에서는, 황칠나무 추출물을 사용하여 제조한 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체는 항산화 효과, 티로시나아제 활성 저해 효과 및 멜라닌 생성 억제 효과가 우수하며, 나아가 세포에 대하여 독성을 나타내지 않음을 확인하였다.

본 발명의 용어, "황칠나무"(Dendropanax morbifera)는 산형화목 두릅나무과에 속하는 식물을 의미한다. 황칠나무는 심신을 편하게 하고 각종 역기를 억제하며, 남성에게는 신장 강화, 여성에게는 생리불순 치료 효과 등을 나타내며, 면역세포의 생육을 촉진하여 조기 면역체계 및 생체방어체계를 강화시킬 수 있으므로 각종 질병의 예방 및 치료에 사용되고 있다. 그러나, 상기 황칠나무 추출물을 이용하여 제조된 금속염 나노입자의 미백 효과에 대해서는 알려진 바 없었다.

본 발명의 용어, "황칠나무 추출물"은 황칠나무를 용매를 이용하여 통상적인 방법으로 얻어낸 황칠나무에 속한 성분이나 물질을 의미하고, 본 발명에서 상기 황칠나무 추출물은 황칠나무 잎 추출물일 수 있다.

또한, 본 발명에서, 상기 황칠나무 추출물은 상기 황칠나무를 추출 처리하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 상기 황칠나무를 추출하는 방법 또는 추출 용매는 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 방법 또는 용매를 사용할 수 있다.

구체적으로, 상기 추출용매는 황칠나무 추출물을 제조할 수 있는 한 특별히 이에 제한되지 않으나, 물, C1 내지 C4의 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 에탄올, 메탄올 또는 물을 사용할 수 있고, 보다 구체적으로는 증류수를 사용할 수 있다.

본 발명의 용어, "금속염"은 금속염 나노입자를 제조하기 위하여 첨가하는 화합물을 의미한다. 본 발명에서, 상기 금속염은 금염 또는 은염일 수 있다. 구체적으로, 상기 금염은 테트라클로로금(III)산(HAuCl₄), NaAuCl₃, 또는 AuCl₃일 수 있으나 이에 제한되지 않으며, 상기 은염은 AgBF₄, AgCF₃SO₃, AgClO₄, AgNO₃, AgPF₆ 또는 Ag(CF₃COO)일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서, 상기 "금속염 나노입자"는 금속으로 이루어지고, 크기가 1 내지 100nm인 초미세 입자를 의미한다. 본 발명에서, 상기 금속염 나노입자는 금염 나노입자 또는 은염 나노입자일 수 있다.

본 발명의 용어, "황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체"는 황칠나무 추출물과 금속염 나노입자가 결합되거나 연결되어, 금속염 나노입자에 황칠나무 추출물이 포함된 형태를 의미한다. 본 발명의 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체는 황칠나무 추출물의 생리활성 물질을 포함하고 있으므로, 화학적인 방법으로 제조된 일반의 금속염 나노입자에 비하여 더 우수한 피부 미백 또는 피부 노화 방지 효과를 나타낼 수 있다.

본 발명의 목적상, 상기 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체는 황칠나무 추출물을 이용하여 제조된 것일 수 있다.

또한, 본 명세서에서, 상기 황칠나무 추출물-금염 나노입자 복합체는 '금 나노입자' 또는 D-AuNPs'로 혼용되어 명명될 수 있고, 또한 상기 황칠나무 추출물-은염 나노입자 복합체는 '은 나노입자' 또는 'D-AgNPs'로 혼용되어 명명될 수 있다.

본 발명의 용어, "피부 미백"은 피부 톤을 밝게 하고, 자외선, 호르몬 또는 유전 등 다양한 요인에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착을 개선하는 것을 의미한다.

본 발명의 용어, "피부 노화"는 피부의 탄력 감소, 윤기 감소, 주름 생성, 재생력 약화 또는 심한 건조 등의 증상이 나타나는 것을 의미하며, "피부 노화 방지"는 피부 노화 등의 증상을 억제 또는 저해하거나, 이미 나타난 피부 노화의 증상을 완화하는 것을 의미한다.

본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 황칠나무 잎 추출물을 이용하여 제조된 금 또는 은 나노입자는 우수한 항산화 활성을 갖고(도 1), 티로시나아제 활성 저해 효과(도 2 및 3) 및 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내며(도 4), 나아가 세포에 독성을 나타내지 않고(도 5), H₂O₂에 의해 감소된 세포의 라디칼을 소거함으로써 세포의 생존율을 증가시킬 수 있음을 확인하였다(도 6). 또한, 상기와 같은 금 또는 은 나노입자의 효과는 양성 대조군인 아스코르브산 또는 알부틴과 유사하거나 더 우수함을 확인하였다. 이는, 상기 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 피부 미백 또는 피부 노화 방지 용도로 유용하게 사용될 수 있음을 시사하는 것이다.

본 발명의 화장료 조성물은 상기 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 총 중량 대비 0.0001 내지 80 중량%, 구체적으로 0.0005 내지 70 중량%, 더욱 구체적으로 0.001 내지 60 중량% 포함할 수 있다. 상기 함량이 0.0001 중량% 미만이면 본래 목적하는 효과를 충분하게 달성할 수 없어 바람직하지 못하며, 80 중량%를 초과하면 증가하는 함량만큼 뚜렷한 효과의 증대가 기대되지 않아 비경제적이며, 화장료 조성물의 안전성에 문제를 발생시킬 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 피부에 사용하는 것으로서, 유연화장수(영양유액), 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 피부접착용 패취, 피부접착용 겔, 파우더, 연고, 서스펜션, 에멀젼, 스프레이 또는 미용액 등의 통상의 화장료 형태로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 상기 화장료 조성물은 화장품, 비누, 세제 및 섬유 등의 피부에 접촉하는 피부접촉물질로 제조할 수도 있다.

또한, 상기 화장료 조성물은 필요에 따라 일반 피부화장료에 배합되는 보통의 성분, 예를 들면, 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등의 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.

구체적으로, 본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화 아연 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 이용될 수 있으며, 예를 들어 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 제형이 비누인 경우에는, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 다른 하나의 양태는 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는, 피부 미백 또는 피부 노화 방지용 피부 외용제를 제공한다.

이때, 상기 용어 "황칠나무 추출물", "금속염", "황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체", "피부 미백", "피부 노화" 및 "방지"에 대한 설명은 상술한 바와 같다.

본 발명의 용어, "피부 외용제"는 일반적으로 피부 외용에 사용하는 물질 전반을 포함하는 포괄하는 개념으로, 피부 외용제 제형의 비제한적인 예로는 경고제(plasters), 로션제(lotions), 리니멘트제(liniments), 액제(liquid and solution), 에어로솔제(aerosol), 엑스제(extracts), 연고제(ointments), 유동엑스제(fluid extracts), 유제(emulsion), 현탁제(suspesions), 캅셀제(capsules), 크림제(creams), 연질, 경질 젤라틴 캅셀, 첩부제 또는 서방화제제 등이 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 따른 피부 외용제는 상용되는 무기 또는 유기의 담체, 부형제 및 희석제를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 제제화된 비경구 투여제일 수 있다. 상기 비경구 투여를 위한 제제로는 점적제, 연고, 로션, 겔, 크림, 패취, 스프레이, 현탁제 및 유제로 이루어진 군에서 선택되는 경피 투여형 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 외용제에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유를 들 수 있다.

각 제형에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 본 발명의 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체 이외의 다른 성분들을 기타 피부 외용제의 제형 또는 사용 목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 이 경우 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승효과가 일어날 수 있다.

본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 황칠나무 잎 추출물을 이용하여 제조된 금 또는 은 나노입자는 우수한 항산화 활성을 갖고(도 1), 티로시나아제 활성 저해 효과(도 2 및 3) 및 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내며(도 4), 나아가 세포에 독성을 나타내지 않고(도 5), H₂O₂에 의해 감소된 세포의 라디칼을 소거함으로써 세포의 생존율을 증가시킬 수 있음을 확인하였다(도 6). 또한, 상기와 같은 금 또는 은 나노입자의 효과는 양성 대조군인 아스코르브산 또는 알부틴과 유사하거나 더 우수함을 확인하였다. 이는, 상기 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 포함하는 본 발명의 피부 외용제는 피부 미백 또는 피부 노화 방지 용도로 유용하게 사용될 수 있음을 시사하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 양태는 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는, 피부 미백 또는 피부 노화 방지용 의약외품 조성물을 제공한다.

이때, 상기 용어 "황칠나무 추출물", "금속염", "황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체", "피부 미백", "피부 노화" 및 "방지"에 대한 설명은 상술한 바와 같다.

본 발명의 용어, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람/동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.

본 발명의 의약외품 조성물은 바디 클렌저, 폼, 비누, 마스크, 연고제, 크림, 로션, 에센스 및 스프레이로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 황칠나무 잎 추출물을 이용하여 제조된 금 또는 은 나노입자는 우수한 항산화 활성을 갖고(도 1), 티로시나아제 활성 저해 효과(도 2 및 3) 및 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내며(도 4), 나아가 세포에 독성을 나타내지 않고(도 5), H₂O₂에 의해 감소된 세포의 라디칼을 소거함으로써 세포의 생존율을 증가시킬 수 있음을 확인하였다(도 6). 또한, 상기와 같은 금 또는 은 나노입자의 효과는 양성 대조군인 아스코르브산 또는 알부틴과 유사하거나 더 우수함을 확인하였다. 이는, 상기 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 포함하는 본 발명의 의약외품은 피부 미백 또는 피부 노화 방지 용도로 유용하게 사용될 수 있음을 시사하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 양태는 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는, 피부 색소 침착의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

이때, 상기 용어 "황칠나무 추출물", "금속염" 및 "황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체"에 대한 설명은 상술한 바와 같다.

본 발명의 용어, "피부 색소 침착"은 피부, 손발톱, 구강이나 비강을 둘러싸고 있는 점막 등에 멜라닌 증가에 의해 발생한 과다 색소 침착 반(macule)을 의미하며, 과색소침착이라고도 한다.

본 발명의 용어, "예방"은 본 발명의 약학적 조성물의 투여에 의해 피부 색소 침착을 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 용어, "치료"는 본 발명의 약학적 조성물의 투여에 의해 피부 색소 침착이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 황칠나무 잎 추출물을 이용하여 제조된 금 또는 은 나노입자는 우수한 항산화 활성을 갖고(도 1), 티로시나아제 활성 저해 효과(도 2 및 3) 및 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내며(도 4), 나아가 세포에 독성을 나타내지 않고(도 5), H₂O₂에 의해 감소된 세포의 라디칼을 소거함으로써 세포의 생존율을 증가시킬 수 있음을 확인하였다(도 6). 또한, 상기와 같은 금 또는 은 나노입자의 효과는 양성 대조군인 아스코르브산 또는 알부틴과 유사하거나 더 우수함을 확인하였다. 이는, 상기 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 포함하는 본 발명의 약학적 조성물은 피부 색소 침착의 예방 또는 개선 용도로 유용하게 사용될 수 있음을 시사하는 것이다.

본 발명의 약학적 조성물은 피부 색소 침착을 예방하고 치료하기 위한 통상의 방법에 따라 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 에어로졸, 멸균 주사용액 등의 형태로 제형화가 가능하다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 포함되며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 사용될 수 있다.

비경구투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제 등을 포함할 수 있다. 비수성용제와 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일 등과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 담체, 부형제 또는 희석제로는 락토즈, 텍스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오즈, 메틸 셀루로오즈, 하이드록시 프로필 메틸 셀룰로오즈, 미정질 셀룰로오즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 플로필히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 이산화규소 등의 광물유 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물의 구체적인 투여량은 제제화 방법, 환자의 상태 및 체중, 환자의 성별, 연령, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간, 배설 속도, 반응 감응성 등과 같은 요인들에 따라 당업자에 의해 다양하게 선택될 수 있으며, 투여량 및 횟수는 어떠한 면에서든 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있으며, 예를 들어 경구, 정맥, 근육 또는 피하 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 또 다른 하나의 양태는 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는 조성물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 피부 미백 또는 피부 노화 방지 방법을 제공한다.

이때, 상기 용어 "황칠나무 추출물", "금속염", "황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체", "피부 미백", "피부 노화" 및 "방지"에 대한 설명은 상술한 바와 같다..

본 발명의 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 조성물 도입하는 것을 의미한다.

본 발명의 용어, "개체"는 피부 색소의 침착 또는 피부 노화가 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 구체적으로, 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.

상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비 내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 조성물이 피부 미백 또는 피부 노화 등의 개선에 효과가 있는 특성상, 상기 조성물의 투여 경로는 피부에 도포하여 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물을 매일 투여 또는 간헐적으로 투여해도 좋고, 1일당 투여 횟수는 1회 또는 2 내지 3회로 나누어 투여하는 것이 가능하다. 또한, 본 발명의 조성물은 피부 미백 또는 피부 노화를 위하여 단독으로, 또는 다른 약물 치료와 병용하여 사용할 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 황칠나무 잎 추출물을 이용하여 제조된 금 또는 은 나노입자는 우수한 항산화 활성을 갖고(도 1), 티로시나아제 활성 저해 효과(도 2 및 3) 및 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내며(도 4), 나아가 세포에 독성을 나타내지 않고(도 5), H₂O₂에 의해 감소된 세포의 라디칼을 소거함으로써 세포의 생존율을 증가시킬 수 있음을 확인하였다(도 6). 또한, 상기와 같은 금 또는 은 나노입자의 효과는 양성 대조군인 아스코르브산 또는 알부틴과 유사하거나 더 우수함을 확인하였다. 이는, 상기 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 포함하는 조성물을 이용하는 본 발명의 피부 미백 또는 피부 노화 방지 방법은 목적하는 효과를 우수한 정도로 달성할 수 있음을 시사하는 것이다.

본 발명에 따른 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체는 항산화 효과, 티로시나아제 활성 저해 효과 및 멜라닌 생성 억제 효과가 우수하며, 나아가 세포에 대하여 독성을 나타내지 않으므로, 피부 미백, 피부 노화, 피부 색소 침착 등의 방지, 개선 또는 치료에 유용하고 안전하게 활용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따라 황칠나무 잎 추출물을 이용하여 제조한, 금 나노입자(D-AuNPs) 또는 은 나노입자(D-AgNPs)의 DPPH 라디칼 소거 활성을 보여주는 그래프이다. Vit. C(vitamin C)는 양성 대조군인 아스코르브산(ascorbic acid)을 의미한다.
도 2는 상기 D-AuNPs 또는 D-AgNPs의 시험관 내 버섯 티로시나아제(mushroom tyrosinase) 활성 저해율을 보여주는 그래프이다. DE는 황칠나무 잎 추출물, Arbutin은 양성 대조군인 알부틴을 의미한다.
도 3은 상기 D-AuNPs에 의해 감소된 세포의 티로시나아제 활성을 보여주는 그래프이다. α-MSH(α-Melanocyte-stimulating hormone)는 멜라닌 형성 자극 호르몬, DE는 황칠나무 잎 추출물, Arbutin은 양성 대조군인 알부틴을 의미한다. ###는 티로시나아제 활성을 비교하기 위한 음성 대조군을 의미하고, *, ** 및 ***는 상기 음성 대조군에 대하여 통계적 유의성이 p <0.05, p <0.01 및 p <0.001인 것을 의미한다.
도 4는 상기 D-AuNPs에 의해 감소된 세포의 멜라닌 양을 보여주는 그래프이다. α-MSH는 멜라닌 형성 자극 호르몬, DE는 황칠나무 잎 추출물, Arbutin은 양성 대조군인 알부틴을 의미한다. ##는 티로시나아제 활성을 비교하기 위한 음성 대조군을 의미하고, *, ** 및 ***는 상기 음성 대조군에 대하여 통계적 유의성이 p <0.05, p <0.01 및 p <0.001인 것을 의미한다.
도 5는 상기 D-AuNPs의 세포 독성을 보여주는 그래프로서, D-AuNPs 처리 시 HDF(Human dermal fibroblast) 또는 B16(murine melanoma B16BL6) 세포의 생존율을 보여준다. DE는 황칠나무 잎 추출물, RA(Retinoic acid)는 양성 대조군인 레티논산을 의미한다. A 내지 C는 HDF, 및 D 내지 F는 B16 세포에 관한 것이고; A 및 D는 D-AuNPs를 24시간 처리, B 및 E는 D-AuNPs를 48시간 처리, 및 C 및 F는 D-AuNPs를 72시간 처리한 결과에 관한 것이다.
도 6은 상기 D-AuNPs의 세포 라디칼 소거 활성을 보여주는 그래프로서, 라디칼에 의해 손상된 세포에 대한 세포 생존율 증가 활성을 보여준다. Pre-treatment는 H₂O₂의 전처리, Co-treatment는 H₂O₂의 공동처리, 및 Post-treatment는 H₂O₂의 후처리 조건을 의미한다. A.A는 양성 대조군인 아스코르브산, DE는 황칠나무 잎 추출물을 의미한다. ###는 티로시나아제 활성을 비교하기 위한 음성 대조군을 의미하고, *, ** 및 ***는 상기 음성 대조군에 대하여 통계적 유의성이 p <0.05, p <0.01 및 p <0.001인 것을 의미한다.

이하, 하기 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

제조예 1. 황칠나무 추출물을 이용한 금 또는 은 나노입자의 제조 방법

제조예 1-1. 황칠나무 추출물의 제조방법

황칠나무(Dendropanax Morbifera) 추출물을 이용한 친환경적인 방법으로 금 또는 은 나노입자를 제조하기 위하여, 먼저 황칠나무 추출물을 제조하였다.

구체적으로, 황칠나무의 잎을 탈이온수로 세척하고, 작게 자른 다음 건조시켰다. 건조한 상기 잎 5 g을 증류수를 포함하는 1 ℓ의 비커에 넣고 30분간 가열하였다. 실온에서 식힌 이후 5,000rpm으로 10분간 원심분리하였고, 거름종이로 여과함으로써 황칠나무 잎 추출물을 수득하였다.

제조예 1-2. 금 나노입자(D- AuNPs )의 제조방법

황칠나무 추출물을 이용한 친환경적인 방법으로 금 나노입자(D-AuNPs)를 제조하기 위하여, 다음과 같은 방법을 수행하였다.

구체적으로, 상기 제조예 1-1에서 제조한 황칠나무 잎 추출물 5 ㎖를 45 ㎖의 탈이온수와 혼합하고, 최종 농도가 1 mM이 되도록 하여 테트라클로로금(Ⅲ)산(HAuCl_4·3H₂O) 수용액을 상기 용액에 첨가하였다. 상기 용액을 80℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음, 반응혼합액의 색 변화를 관찰함으로써 금 나노입자의 생성 여부를 확인하였다. 이후, 16,000 rpm으로 20분간 원심분리하여 금 나노입자를 회수하였으며, 이를 탈이온수로 여러 번 세척한 후 건조하여 사용하였다.

제조예 1-3. 은 나노입자(D- AgNPs )의 제조방법

친환경적인 방법으로 은 나노입자(D-AgNPs)를 제조하기 위하여, 다음과 같은 방법을 수행하였다.

구체적으로, 상기 제조예 1-1에서 제조한 황칠나무 잎 추출물 5 ㎖를 45 ㎖의 탈이온수와 혼합하고, 최종 농도가 1 mM이 되도록 하여 질산은(AgNO₃) 수용액을 상기 용액에 첨가하였다. 상기 용액을 80℃에서 1시간 인큐베이션한 다음, 반응혼합액의 색 변화를 관찰함으로써 은 나노입자의 생성 여부를 확인하였다. 이후, 16,000 rpm으로 20분간 원심분리하여 은 나노입자를 회수하였으며, 이를 탈이온수로 여러 번 세척한 후 건조하여 사용하였다.

실시예 1. 황칠나무 추출물을 이용하여 제조된 금 또는 은 나노입자(D- AuNPs 또는 D-AgNPs)의 항산화 활성 확인

상기 제조예 1을 통해 제조한 금 또는 은 나노입자(D-AuNPs 또는 D-AgNPs)의 피부상태 개선 효과를 확인하기 위하여, 먼저 항산화 이들의 활성을 확인하였다.

구체적으로, DPPH 라디칼 소거 활성을 확인하였다. DPPH의 0.1 mM 메탄올 용액 180 ㎕를 10 내지 500 ㎍/㎖의 서로 다른 농도를 갖는 D-AuNPs 또는 D-AgNP 용액 20 ㎕에 첨가하였고, 30분 후 UV-Vis 분광 광도계를 이용하여 517 nm에서 흡광도 값을 측정하였으며, 하기 수학식 1을 통해 DPPH 라디칼 소거 활성을 계산하였다. 아스코르브산(ascorbic acid)은 양성 대조군으로 사용하였다.

[수학식 1]

[(DPPH의 흡광도-샘플의 흡광도-대조군의 흡광도)/DPPH의 흡광도]×100

이때, 상기 샘플의 흡광도는 나노입자가 포함된 DPPH 용액의 흡광도이고, 대조군의 흡광도는 D-AuNPs 또는 D-AgNPs 용액의 흡광도이다.

그 결과, 도 1에서 볼 수 있듯이, D-AuNP 또는 D-AgNP는 용량 의존적으로 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타냄을 확인하였으며, 항산화제로 사용되는 아스코르브산의 DPPH 소거 활성과 많은 차이를 나타내지 않음을 확인하였다.

실시예 2. D- AuNPs 또는 D- AgNPs의 시험관 내 티로시나아제 활성 저해 효과 확인

상기 제조예 1을 통해 제조한 D-AuNPs 또는 D-AgNPs의 피부상태 개선 효과를 확인하기 위하여, 시험관 내(in vitro) 티로시나아제(tyrosinase) 활성 저해 효과를 확인하였다.

구체적으로, 버섯 티로시나아제(mushroom tyrosinase)에 대한 활성 저해 효과를 확인하였다. 2 mM의 L-DOPA 0.05 ㎖를 인산완충용액(50 mM, pH 6.8)에 녹인 후 D-AuNP, D-AgNP 또는 황칠나무 잎 추출물(DE) 시료 0.05 ㎖를 96-웰 마이크로 플레이트에 넣고 버섯 티로시나아제(200 U/㎖) 0.05 ㎖를 혼합하였다. 혼합물을 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였으며, ELISA 판독기(Bio-Tek Instrument, Vermont, USA)를 이용하여 492 nm에서 광학 밀도를 측정하였고, 하기 수학식 2를 통해 티로시나아제 활성 저해율을 계산하였다. 알부틴(arbutin)은 양성 대조군으로 사용하였다.

[수학식 2]

티로시나아제 활성 저해율(%) = [(A-B)/(C-D)]×100

이때, A는 시험 시료(D-AuNP, D-AgNP 또는 DE) 및 버섯 티로시나아제가 포함된 반응 혼합물의 흡광도, B는 시험 시료는 있으나 버섯 티로시나아제가 없는 반응 혼합물의 흡광도, C는 버섯 티로시나아제는 있으나 시험 시료가 없는 반응 혼합물의 흡광도, 및 D는 L-DOPA만 포함되어 있는 웰의 흡광도이다.

한편, 본 발명에 따른 모든 실험은 독립적으로 3번 수행하였고, 모든 데이터는 평균 ± 표준 편차 (S.D.)로 표시하였다. 시료(D-AuNP, D-AgNP 또는 양성 대조군)를 처리한 그룹의 평균값과 이들을 처리하지 않은 그룹의 평균값을 비교하였고, 이들의 통계적 유의성은 스튜던트 t-검정(Student's t-test)을 사용하여 확인하였다.

상기 결과를 통해, D-AuNP 또는 D-AgNP는 알부틴과 유사한 시험관 내 티로시나아제 저해 활성을 나타내므로, 우수한 피부 미백 효과를 나타낼 것임을 알 수 있었다.

실시예 3.　D- AuNPs의 피부 미백 효과 확인

실시예 3-1. 세포의 티로시나아제 활성 저해 효과 확인

상기 제조예 1을 통해 제조한 D-AuNPs의 피부상태 개선 효과를 확인하기 위하여, 세포의 티로시나아제에 대한 활성 저해 효과를 확인하였다.

구체적으로, 마우스 멜라닌 형성 세포인 B16(murine melanoma B16BL6) 세포를 4 × 10⁵ 세포/웰의 밀도로 100 mm 플레이트에 배양하였고, 100 nM α-MSH(α-Melanocyte-stimulating hormone)를 처리한 상태로 24시간 동안 배양하였다. 이후, 상기 세포를 1-100 ㎍/㎖ 농도의 D-AuNPs를 처리하여 24시간 동안 배양하였으며, 이후 배지를 제거하고 1% Triton X-100을 포함하는 인산 완충액(pH 6.9)으로 용해하였다. 상기 용해물을 -80℃에서 15분 동안 동결-해동시킨 후 실온에서 10분간 유지하였다. 이후, 12,000g에서 15분간 원심 분리한 후, 기질 용액(50 mM 인산완충용액(pH 7.1)에 포함된 15 mM L-DOPA)을 90 ㎕의 용해물 상등액에 넣고 1시간 동안 37℃에서 배양하였으며, ELISA 판독기를 사용하여 흡광도를 475 nm에서 측정하였다.

그 결과, 도 3에서 볼 수 있듯이, D-AuNPs는 알부틴 또는 황칠나무 잎 추출물보다 우수한 세포의 티로시나아제 저해 활성을 나타냄을 확인하였다. 구체적으로, 100 ㎍/㎖ 농도의 알부틴을 처리하는 경우 B16 세포의 티로시나아제 활성은 약 80%이고, 25 ㎍/㎖ 농도의 황칠나무 잎 추출물을 처리하는 경우 B16 세포의 티로시나아제 활성은 약 70%인 것에 비하여, 25 ㎍/㎖ 농도의 D-AuNPs를 처리하는 경우 B16 세포의 티로시나아제 활성은 약 40%인 것을 확인하였다.

상기 결과를 통해, D-AuNP는 낮은 농도에서도 알부틴 또는 황칠나무 잎 추출물보다 현저히 우수한 세포의 티로시나아제 저해 활성을 나타내므로, 우수한 피부 미백 효과를 나타낼 것임을 알 수 있었다.

실시예 3-2. 세포의 멜라닌 생성 저해 효과 확인

상기 제조예 1을 통해 제조한 D-AuNPs의 피부상태 개선 효과를 확인하기 위하여, 세포의 멜라닌 생성 저해 효과를 확인하였다.

구체적으로, 마우스 멜라닌 형성 세포인 B16 세포를 4 × 10⁵ 세포/웰의 밀도로 100 mm 플레이트에 배양하였고, 100 nM α-MSH를 처리한 상태로 24시간 동안 배양하였다. 이후, 상기 세포를 1 내지 100 ㎍/㎖ 농도의 D-AuNPs를 처리하여 24시간 동안 배양하였으며, 배지를 제거하고 세포를 수득한 후 10% DMSO가 함유 된 1 N NaOH 500 ㎕에 용해하여 80℃에서 1시간 동안 보관하였다. 이후, ELISA 판독기를 이용하여 475 nm에서 흡광도를 측정함으로써 생성된 멜라닌 양을 확인하였다. 이때, 합성 멜라닌(0 내지 100 ㎍/㎖)에 대한 표준 곡선과 비교하여 멜라닌 양을 확인하였으며, 생성된 멜라닌 양은 시료가 처리되지 않은 음성 대조군에 대한 백분율로 나타내었다.

그 결과, 도 4에서 볼 수 있듯이, D-AuNPs는 알부틴 또는 황칠나무 잎 추출물보다 우수한 멜라닌 생성 저해 활성을 나타냄을 확인하였다. 구체적으로, 100 ㎍/㎖ 농도의 알부틴을 처리하는 경우 B16 세포의 멜라닌 양은 약 80%인 것에 비하여, 25 ㎍/㎖ 농도의 D-AuNPs를 처리하는 경우 생성된 B16 세포의 멜라닌 양은 약 70%인 것을 확인하였다.

상기 결과를 통해, D-AuNP는 낮은 농도에서도 알부틴보다 우수한 멜라닌 생성 저해 활성을 나타내는 등 우수한 피부 미백 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

실시예 4.　D- AuNPs의 피부 안전성 확인

실시예 4-1. 세포 독성 확인

상기 제조예 1을 통해 제조한 D-AuNPs의 피부 안전성을 확인하기 위하여, 세포에 대한 독성을 확인하였다.

구체적으로, 세포 독성은 MTT 어세이를 통한 세포 생존율을 측정하여 확인하였다. 인간 피부 섬유아세포(Human dermal fibroblast; HDF) 및 마우스 멜라닌 형성 세포인 B16 세포를 96-웰 플레이트에 1×10⁵ 세포/웰의 밀도로 접종하고 24시간 동안 배양하였으며, 90%의 세포 밀도를 가질 때 1 내지 100 ㎍/㎖의 D-AuNP 또는 RA(Retinoic acid, 양성 대조군)를 처리하여 24, 48 및 72시간 동안 배양하였다. 이후, MTT 분석 용액(PBS 중 5 mg/㎖) 10 ㎕를 각 웰에 첨가하고 37℃에서 3 시간 동안 배양한 다음 최종적으로 100 ㎕ DMSO를 첨가하여 형성된 포르마잔(formazan) 결정을 용해시켜 그의 흡광도를 ELISA 판독기로 570 nm에서 측정하였다.

그 결과, 도 5에서 볼 수 있듯이, 인간 및 마우스 세포 모두에 대하여, D-AuNP는 100 ㎍/㎖의 고농도에서 72시간 동안 배양하여도 세포에 독성을 나타내지 않으며, 오히려 세포 생존율을 증가시키는 것을 확인하였다.

상기 결과를 통해, D-AuNP는 세포 독성을 나타내지 않으므로, 화장료 조성물의 유효성분으로서 유용하고 안전하게 사용될 수 있음을 알 수 있었다.

실시예 4-2. 손상된 세포의 라디칼 소거 활성 확인

상기 제조예 1을 통해 제조한 D-AuNPs의 피부 안전성을 확인하기 위하여, H₂O₂에 의해 손상된 세포에 대한 라디칼 소거 활성, 즉 세포의 재생 능력을 확인하였다.

구체적으로, 인간 피부 섬유아세포를 96웰 플레이트에 1 × 10⁵ 세포/웰의 밀도로 접종하고 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 세포를 황칠나무 잎 추출물 또는 5, 10 및 25 ㎍/㎖의 D-AuNP로 처리하였으며, 이때 H₂O₂는 각각 전처리(Pre-treatment), 공동처리(Co-treatment) 및 후처리(Post-treatment)하였다. 전처리 조건으로는 세포에 시료(황칠나무 잎 추출물 또는 D-AuNPs)를 처리한 후 H₂O₂를 1시간 동안 처리하였고, 공동처리 조건으로는 H₂O₂ 및 시료를 동시에 1시간 동안 처리하였고, 후처리 조건으로는 H₂O₂를 1시간 동안 처리하고 이를 헹구어낸 후 시료를 처리하였다. 이후, 실시예 4-1에 따른 방법으로 MTT 어세이를 수행하였다. 양성 대조군으로는 아스코르브산(100 ㎍/㎖)을 사용하였다.

그 결과, 도 6에서 볼 수 있듯이, D-AuNPs는 H₂O₂ 처리에 의해 감소된 세포의 라디칼을 소거하여 세포의 생존율을 증가시킬 수 있음을 확인하였다. 구체적으로, 전처리, 공동처리 및 후처리의 모든 조건에서, H₂O₂만 처리한 음성 대조군의 경우에는 세포의 생존율이 약 80%인 것에 비하여, D-AuNPs를 처리하는 경우에는 세포의 생존율이 약 90%로서 양성 대조군인 아스코르브산을 처리한 세포와 유사한 정도임을 확인하였다.

상기 결과를 통해, D-AuNP는 H₂O₂에 의해 손상된 세포의 라디칼을 소거하여 이들을 회복 및 재생시킬 수 있으므로, 라디칼에 의한 피부 노화 등에 대하여 우수한 개선 효과를 나타낼 것임을 알 수 있었다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예 및 실험예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (8)

1. 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 또는 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 황칠나무 추출물은 황칠나무 잎 추출물인 것인, 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 유연화장수(영양유액), 수렴 화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 피부접착용 패취, 피부접착용 겔, 파우더, 연고, 서스펜션, 에멀젼, 스프레이 또는 미용액에서 선택되는 제형인 것인, 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제 및 향료로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상의 담체를 추가로 포함하는 것인, 조성물.
5. 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 또는 피부 노화 방지용 피부 외용제.
6. 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 또는 피부 노화 방지용 의약외품 조성물.
7. 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는, 피부 색소 침착의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
8. 황칠나무 추출물 및 금속염을 포함하는 황칠나무 추출물-금속염 나노입자 복합체를 유효성분으로 포함하는 조성물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 피부 미백 또는 피부 노화 방지 방법.

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