KR101548492B1

KR101548492B1 - 야누스 키나아제 1 (Janus kinase 1)의 활성을 선택적으로 저해하는 4-아미노-7-아자인돌-5-카르복사마이드 유도체

Info

Publication number: KR101548492B1
Application number: KR1020130112618A
Authority: KR
Inventors: 정유훈; 신희림; 김미경
Original assignee: 건국대학교 산학협력단
Priority date: 2013-09-23
Filing date: 2013-09-23
Publication date: 2015-09-01
Also published as: KR20150033085A

Abstract

본 발명은 4-amino-7-azaindole-5-carboxamide 유도체 및 그것의 야누스 키나아제 1의 활성을 선택적으로 저해하는 특성과 류마티스성 관절염 치료제로서의 용도이다.

Description

야누스 키나아제 1 (Janus kinase 1)의 활성을 선택적으로 저해하는 4-아미노-7-아자인돌-5-카르복사마이드 유도체 {4-Amino-7-azaindole-5-carboxamide derivatives selectively inhibiting the activity of Janus kinase 1}

자가면역질환(autoimmune disease)는 개체의 면역체계가 내인성 단백질을 외부항원으로 인식하여 형성된 항체나 면역기능을 가진 T세포들이 항원에 반응해서 조직을 파괴해서 생기는 질환으로써 류마티스(관절염), 아토피피부염, 건선, 크론씨 병, 등이 포함된다. 명확한 발생경로나 기전에 대해 밝혀지지 않아 현재는 근본적인 치료제 없이 스테로이드 등의 면역억제제에 의존하여 일시적 증상 개선효과 만을 보고 있는 실정이며, 면역억제요법은 이러한 자가면역반응을 억제하는데 효과적인 것으로 밝혀져 있다.

면역억제제는 크게 화학적 면역억제제와 생물학적 면역억제제로 나뉜다.

화학적 면역억제제는 장기이식거부반응과 자가면역질환 치료를 위해 가장 많이 처방되는 면역억제제로서, 노바티스의 사이클로스포린 A (CsA, 전체의 85%)와 작용기작이 거의 같은 Fujisawa의 FK506이 대표적이다. 그러나 화학적 면역억제제의 약물 작용점이 되는 신호전달 과정은 활성화된 면역세포에 특이적이지 않으며 따라서 비선택적인 신호전달 저해에 의해 다양하고 심각한 부작용이 나타난다는 문제점을 가지고 있다.

이에 반해, 생물학적 면역억제제 중에는 류마티스성 관절염 (RA), 건선, 크론씨병 등의 자가면역질환 치료제로 이용되는 TNF-α 저해제(etanercept, infliximab, adalimumab)가 대표적이다. 또한 장기이식 환자의 면역체계에 대한 단일항체(monoclonal antibody)나 복합항체 (polyclonal antibody)로 대표되는 치료용 항체 제제에는 Daclizumab(Zenapax)와 Basiliximab(Simulect) 등이 있으며 이외에도 Siplizumab(MEDI-507)과 ABXCBL 등이 개발되고 있다. 항체제제는 환자 면역체계요소의 작용을 소멸시켜서 면역반응이 일어나는 것을 억제하기도 하는데, 임상적으로 가장 많이 사용하는 항체는 B세포와 T세포에 대한 항체이며 그 외에도 IL-2 수용체(CD25)와 CTLA-4, CD40과 CD40 리간드에 대한 항체 등이 사용된다. 그러나, 생물학적 면역억제제는 다음과 같은 많은 문제점을 가지고 있다: 1) TNF-α의 경우, 모든 RA 환자에 효과를 나타내지 않으며 불응도가 30%를 상회하며, 2) 활성화된 면역세포에 대한 선택성의 부재로 인한 부작용이 여전한 문제로 남아 있고, 3) 개발 및 치료시 아주 많은 비용이 드는데, 면역억제제의 경우 평생 동안 복용해야 하므로 환자에게 매우 큰 경제적 부담을 줄 수 있으며, 4) 주사제로 개발되기 때문에 환자순응도가 매우 낮고 주사부작용 및 감염위험이 있다.

한편 이식수술이 늘고 환자의 잔여 생존기간도 길어짐에 따라 최근에는 면역억제제의 부작용을 최소화하여 이식수술을 받은 환자들의 '삶의 질'을 높이려는 노력이 요구되고 있다. 이상적인 면역억제제란 항원에 특이적으로 반응하는 클론(clone)만을 선택적으로 억제하는 특이적인 면역억제이어야 하나, 아직은 임상적 이용이 가능한 단계가 아니며, 현재 사용되고 있는 약제는 활성화된 면역세포에 대한 특이성이 없는 면역억제제로서 숙주의 정상 면역반응까지 저해하여 신장과 간 등에 치명적인 부작용을 나타내고, 감염증, 악성 종양 등의 합병증을 일으킨다. 현재까지는 단일약품으로는 거부반응을 방지할 만한 충분한 효능을 얻을 수 없기 때문에, 여러 가지 방법의 병합치료가 필요한 실정이다. 따라서 증가하는 수요와 맞물려 장기이식환자가 평생 복용해야 하는 면역억제제의 수요도 큰 폭으로 증가하고 있으나 장기복용에 따르는 부작용과 비싼 가격 등으로 인하여 신규 면역억제제의 개발에 대한 요구가 커지고 있다.

면역세포는 cytokine에 의해 신호를 전달받으며 따라서 각 cytokine에 특이적인 receptor가 존재한다. 이 중, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, IL-21 등과 결합하는 cytokine receptor는 common cytokine receptor γ-chain (γc)'라는 핵심적인 부분을 가지고 있어 γc family라고 불리는데, 이들은 림프구의 형성과 작용에 결정적인 역할을 하는 것으로 알려져 있으며 따라서 γc를 coding 하는 유전자에 mutation이 생기거나, γc로부터의 신호전달과정 다음 단계에 있는 cytoplasmic tyrosine kinase JAK3 (janus kinase 3)를 coding 하는 유전자에 mutation이 생기면 선천성면역결핍증상(SCID)가 발생하는 것으로 알려져 있다. 결과적으로 JAK3의 활성을 선택적으로 저해할 수 있는 물질을 이용한 면역억제제 개발 연구가 활발히 시도되어져 왔다.

많은 제약회사들은 JAK3의 선택적 저해활성에 의해 류마티스성 관절염(Rheumatoid arthritis, RA)과 같은 면역질환 치료제를 개발할 수 있을 것으로 기대하고 경쟁적으로 JAK3 저해제 개발 연구를 진행하였으며, 그 결과 최근 Pfizer사의 Xelianz (Tofacitinib, CP-690,550)가 류마티스성 관절염 치료제로서 FDA에 의해 승인되기에 이르렀다.

그러나 개발 초기에 JAK3 선택적 저해활성을 갖는 것으로 알려졌던 CP-690,550은 그 이후 JAK kinase family에 대한 전반적인 저해활성을 갖는 pan-JAK inhibitor 임이 밝혀졌으며(Science 2003, 302:875), 따라서 류마티스성 관절염 치료제로서의 효능에 어떠한 JAK 이소자임의 저해활성이 가장 중요한 요소인지에 대한 논란이 계속되어져 왔다.

최근 일련의 연구결과들을 종합하면(Cell 1998, 93:373; Immunity 2000, 13:561; Cell 1998, 93:385; Lancet 2008, 371:987; Chem . Biol . 2011, 18:314) c와 관련된 cytokine 수용체에 의한 신호전달 과정에 있어 핵심적인 역할을 수행하는 JAK kinase는 JAK1이며 JAK3는 단지 매우 보조적인 역할 밖에는 담당하지 않는 것을 확인할 수 있다.

따라서 RA 치료제 분야에 있어 JAK 저해제 개발 연구는 JAK3가 아닌 JAK1에 집중하고 있으며, 최근 JAK1 선택적인 활성을 갖는 물질들이 속속 발표되어지고 있다(J. Med. Chem. 2012, 55:5901; J. Med. Chem. 2012, 55:6176).

한편, JAK2는 erythropoiesis에 관계된 신호전달 과정에서 결정적인 역할을 하고 있으므로, JAK2의 활성이 저해되게 되면 빈혈, 혈소판 감소증, 백혈구 감소증 등과 같은 조혈작용에 문제가 생길 수 있다. 자가면역질환 환자의 8-70%, 그리고 장기이식환자의 8-71%에서 적혈구 생성 저하에 의한 염증성 빈혈(Anemia in Inflammation, AI)이 발견되는데 염증성 cytokine IL-1, TNF-α, TGF-β등은 빈혈 상황에서 적혈구 생산을 감소시킬 수 있다. 따라서, 평생 동안 복용하게 되는 면역억제제 개발에 있어 환자의 염증성 빈혈 악화를 막기 위해서는 JAK2에 대한 선택성이 반드시 확보되어야 할 것이다.

[선행 특허 문헌]

한국특허공개번호 제1020100032886호

본 발명은 상기의 문제점을 해결하고, 상기의 필요성에 의하여 안출된 것으로서 본 발명의 목적은 JAK1/JAK2 선택성이 제고된 신규 저해제를 개발함으로써 신규 류마티스성 관절염 치료제를 개발하는데 그 목적을 두고 있다.

상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 하기 [화학식 1]의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:

[화학식 1]

상기 화학식에서 R은 메틸, 에틸, 이소프로필, 부틸, 에탄올, 에틸아민, 프로필아민, 벤질, 페네틸, 파라톨루엔메틸, 오르소-클로로페닐메틸, 파라-클로로페닐메틸 등의 작용기를 갖는 것을 특징으로 한다.

또한 본 발명은 본 발명의 상기 화합물을 유효성분으로 포함하는 야누스 키나아제 1 저해용 조성물을 제공한다.

또 본 발명은 상기 본 발명의 화합물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

또한 본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 조성물은 류마티스성 관절염 치료 또는 예방 효과를 가지는 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

또 본 발명은 상기 본 발명의 화합물을 유효성분으로 포함하는 류마티스성 관절염 개선용 식품 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 (4-chloro-7-azaindole-5-yl)lithium과 methyl chloroformate의 치환 반응, 아민과의 치환반응, methyl ester의 가수분해에 이은 아미드 커플링 반응 등을 포함하는 상기 본 발명의 화합물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 조성물은 국소적으로, 경구로, 또는 비경구로 투여될 수 있다. 예를 들면 조성물은 체외로, 두개골 내로, 질 내로, 항문 내로, 피하고, 피부 안으로, 심장 내로, 위 내로, 정맥 내로, 근육 내로, 복강내 주사에 의해, 경피적으로, 비강 안으로, 또는 흡입에 의하여 투여될 수 있다. 본원에서 사용되는 "두개골 내 투여"는 물질을 키테테르 또는 주사바늘을 통해 뇌로 직접, 이를테면 예컨대 인트라테칼로(intrathecal), 인트라시스터널로(intracisternal), 심실내로, 또는 설상골을 통하여(transsphenoidal) 전달되는 것을 의미한다.

조성물의 비경구 투여는, 사용되는 경우 일반적으로 주사에 의하여 이루어지는 것을 특징으로 한다. 주사가능한 것은 종래 형태로, 액체 용액 또는 현탁액으로서, 주사 전에 액체의 현탁 용액에 적당한 고체 형태, 또는 에멀션으로서 제조될 수 있다. 보다 최근에 개선된 비경구 투여를 위한 접근법은 느린 방출 또는 지속적인 방출 시스템을 사용함으로써 일정한 용량이 유지되도록 사는 것을 포함한다 (미국 특허 3,610,795호 참조).

필요한 조성물의 정확한 양은 환자에 따라서 종, 연령, 체중 및 일반적인 환자의 상태, 치료되고 있는 알레르기성 장애의 심각성, 그것의 투여 방식 등에 따라 다를 것이다. 그러므로 모든 조성물에 대하여 정확한 양을 규명하는 것은 불가능하다. 그러나 적절한 양은 당업자에 의해 당업계에서 제공되는 교시에 따라 기본적인 실험만을 사용하여서도 결정될 수 있다.

본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만,당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물은 1일 0.0001 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈,수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제,결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제,환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출액에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분,칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제,유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제,동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명은 류마티스성 관절염 개선 효과를 나타내는 본 발명의 화합물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강보조식품을 제공한다. 본 발명의 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는,예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

또한, 류마티스성 관절염 개선의 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물100 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 화합물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 화합물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 화합물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에서는 JAK2 보다 JAK1에 대해 선택적인 저해능을 가지는 저해제를 개발하고자 하였다.

구체적으로, 4-amino-7-azaindole 모핵 구조는 그대로 유지하면서 azaindole에 접합된 imidazole 고리를 해체하고 그 대신 4-amino 기와 5-carboxamide 작용기 사이에 분자간 수소결합이 가능하도록 하는, 화학식 1로 대표되는 4-amino-7-azaindole-5-carboxamide 유도체의 구조를 고안하였다.

따라서 본 발명에서는, [화학식 1]로 대표되는 4-amino-7-azaindole-5-carboxamide 유도체를 화학적으로 합성하여 [도 1], JAK1, JAK2, JAK3, 및 Tyk2 저해능을 검증함으로써 [도 2] 선택적인 JAK1 저해제로서의 새로운 용도를 발견하고 발명을 완결하였다.

4-Amino-7-azaindole-5-carboxamide 유도체의 합성은 공지된 합성법을 준용하였다 [도 1]. 상술하자면, 시장 구입 가능한 7-azaindole의 직접적인 chlorination에 의해서는 목적하는 4-chloro-7-azaindole (1)을 얻을 수 없기 때문에 일단 7-azaindole의 pyridinyl nitrogen을 mCPBA와 반응시켜 phosphoramidic dichloride로 가리운 후, POCl₃와 반응시켜 7번 위치에 선택적으로 염소원자를 도입하고, 남아있는 phosphoramidic dichloride를 가수분해하여 화합물 1을 85%의 수율로 얻었다. 화합물 1의 pyrrolo NH 작용기를 TIPSCl와 반응시켜 가리워진 화합물 2를 68%의 수율로 얻은 후, sec-BuLi을 이용하여 선택적으로 5번 위치에서 deprotonation하여 얻어진 (4-chloro-7-azaindole-5-yl)lithium과 methyl chloroformate의 치환 반응을 통해 화합물 3을 64%의 수율로 얻었다. 이렇게 하여 얻어진 주중간체 3은 DIPEA 존재하에서 다양한 아민과 치환반응을 통해 51~75%의 수율로 화합물 4로 전환되었으며, methyl ester의 가수분해에 이은 아미드 커플링 반응에 의해 최종적으로 목적한 화합물 5를 38~51% 수율로 얻을 수 있었다.

합성된 4-amino-7-azaindole-5-carboxamide 유도체의 JAK kinase 저해활성은 Z'-LYTE Kinase Assay Kit-Tyr 6 Peptide (JAK1∼JAK3) 및 Tyr 3 Peptide (Tyk2) (Invitrogen)를 이용하여 Kit와 함께 제공된 실험방법에 의하여 측정하였으며, 10 μM 농도의 4-amino-7-azaindole-5-carboxamide 유도체에 의한 각각의 JAK 이소자임의 %-inhibition 결과를 종합하면 [도 2]와 같다.

7-아자인돌 유도체의 JAK1 저해제로서의 활성을 측정한 결과 R기의 길이가 짧을수록 JAK1에 선택적인 활성을 나타냄을 확인할 수 있었고, 또한 5h와 5k의 비교를 통해 R기의 끝이 hydrogen bond가 가능할 때 JAK1에 대하여 우수한 선택적인 활성을 갖는 것으로도 확인하였다.

따라서 선택적인 Janus kinase 1 (JAK1) 저해활성을 보이는 물질을 활용한 류마티스성 관절염 치료제 개발 연구는 전세계적으로 매우 활발하게 진행되고 있는 연구 분야이고, 본 발명자들은 JAK1에 대하여 높은 선택성을 갖는 저해제를 발굴하고자 예의 노력한 결과, 4-amino-7-azaindole-5-carboxamide 유도체 중 JAK2에 비교하여 월등히 높은 JAK1 저해능을 갖는 물질을 발굴하고 발명을 완성하였다.

이상 상세히 기술한 바와 같이, 본 발명에서는 메틸기와 같은 작은 치환기를 도입한 4-amino-7-azaindole-5-carboxamide 유도체들이 JAK2의 키나아제 활성은 저해하지 않으나 JAK1에 대해서는 선택적인 활성 저해능을 가질 수 있음을 확인하였고, 이를 통하여 효과적인 류마티스성 관절염 치료제로 사용될 수 있다는 것을 확인할 수 있었다.

도 1은 화학식 1로 대표되는 화합물들의 합성과정을 설명한다.
도 2는 10 μM 농도의 4-amino-7-azaindole-5-carboxamide 유도체 5a ~ 5k에 의한 JAK 이소자임 활성 저해활성 표

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 아니하는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1. 4- 클로로 -1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 ( 1 ) 의 제조

7-아자인돌 (3.6 g, 30 mmol)을 다이메톡시에테인 (17 ml)과 헵텐 (33 ml)에 녹인 후, 메타-클로로퍼옥시벤조익산 (mCPBA) (8.1 g, 77 %, 36 mmol)을 첨가하여 상온에서 교반한다. 이 혼합물을 다이메톡시에테인 (34 ml)과 헵텐 (64 ml)을 섞은 용액을 사용하여 여과지에 거른 후, 얻어진 화합물에 포스포러스옥시클로라이드 (POCl₃) (22 ml, 0.24 mol)을 첨가한 후, 18시간동안 80℃에서 환류가열한다. 이 혼합물을 충분히 식히고 물 (150 ml)을 넣어 희석시킨 후, 6N 소디움하이드록사이드 (NaOH)를 사용하여 pH10에 맞춰준다. 이 혼합물을 물을 사용하여 여과지에 거르면 옅은 주황색을 띄는 고체 형태의 화합물 (1)를 얻었다. (3.9 g, 85% 수율):

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ (ppm) 12.16 (s, 1H), 8.21 (d, J= 4.92 Hz, 1H), 7.63 (d, J= 2.56 Hz, 1H), 7.21 (d, J= 4.84 Hz, 1H), 6.54 (d, J= 2.52 Hz, 1H).

실시예 2: 메틸 4- 클로로 -1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 2 )의 제조

화합물 (1) (985 mg, 6.45 mmol)을 테트라히드로푸란 (15 ml)에 녹인 후, 0℃에서 소디움하이드라이드 (308 mg, 60 %, 7.74 mmol)를 조금씩 첨가한다. 이 혼합물을 상온에서 45분동안 교반한 후, TRIISOPROPYLSILYL CHLORIDE (TIPSCl) (2.05 ml, 9.68 mmol)를 한 방울씩 첨가한 후, 상온에서 8시간동안 교반한다. 이 혼합물에 물 (30 ml)을 첨가한 후, 에틸아세테이트 (30 ml)로 세 번 추출한다. 얻어진 유기 층에 황산마그네슘 (MgSO4)을 첨가하여 남은 물을 제거한 뒤, 여과지를 사용하여 걸러낸다. 이 혼합물을 감압 농축 한 뒤, 얻어진 농축액을 실리카겔 관크로마토그래피 (헥산 : 디클로로메탄 = 7 : 1)로 정제하여 화합물 (2)을 옅은 갈색의 오일 형태로 얻었다. (1350 mg, 68 % 수율):

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ (ppm) 8.12 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.02 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 6.66 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 1.81 - 1.89 (m, 3H), 1.10 (d, J= 7.6 Hz, 18H).

실시예 3: 메틸 4-아미노-1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 3 )의 제조

화합물 (2) (900 mg, 2.91 mmol)를 테트라히드로푸란 (15 ml)에 녹인 후, -78℃에서 sec-butyllithium (2.73 ml, 1.6 M, 4.37 mmol)를 한 방울씩 첨가한다. 30분간 교반 후, 메틸클로로포메이트 (0.34 ml, 4.37 mmol)을 첨가하고 상온에서 1시간동안 교반한다. 이 혼합물을 감압 농축 한 뒤, 얻어진 농축액을 실리카겔 관크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트 = 50 : 1)로 정제하여 화합물 (3)를 갈색의 오일 형태로 얻었다. (680 mg, 64% 수율):

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ (ppm) 8.80 (s, 1H), 7.36 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 1.80 1.90 (m, 3H), 1.11 (d, J= 7.5 Hz, 18H).

실시예 4: 메틸 4-( 벤질아미노 )-1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 4a )의 제조

화합물 (3) (129 mg, 0.35 mmol)을 아이소프로필알코올 (8 ml)에 녹인 후, N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) (0.307 ml, 1.76 mmol)과 벤질아민 (0.96 ml, 1.76 mol)을 첨가한 후 8시간동안 80℃에서 환류가열한다. 이 혼합물을 감압 농축 한 뒤, 얻어진 농축액을 실리카겔 관크로마토그래피 (헥산 : 에테르 = 15 : 1)로 정제하여 화합물 (4a)을 노란색의 고체 형태로 얻었다. (108 mg, 71% 수율):

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ (ppm) 8.72 (s, 1H), 7.28 7.43 (m, 5H), 6.97 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 6.68 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 4.94 (d, J= 5.4 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 1.74 1.85 (m, 3H), 1.10 (d, J= 7.5 Hz, 18H).

실시예 5: 메틸 4-( 페닐에틸 )-1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 4b )의 제조

화합물 4a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 4b를 노란색 고체 형태로 얻었다 (108 mg, 71% 수율):

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ (ppm) 8.69 (s, 1H), 7.22 7.35 (m, 5H), 7.01 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 3.98 (dd, J= 7.1, 13.0 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.06 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 1.74 1.85 (m, 3H), 1.13 (d, J= 13.0 Hz, 18H).

실시예 6: 메틸 4-(4- 메틸페닐메틸 )-1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 4c )의 제조

화합물 4a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 4c를 노란색 고체 형태로 얻었다 (60 mg, 51% 수율):

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ (ppm) 8.71 (s, 1H), 7.30 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.18 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 6.97 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.70 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 5.4 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 1.76 1.83 (m, 3H), 1.10 1.12 (m, 18H).

실시예 7: 메틸 4-(4- 클로로페닐메틸 )-1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 4d )의 제조

화합물 4a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 4d를 노란색 고체 형태로 얻었다 (72 mg, 55% 수율):

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ (ppm) 8.74 (s, 1H), 7.22 7.27 (m, 4H), 6.93 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.45 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.99 (d, J= 6.2 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 1.74 1.81 (m, 3H), 1.09 (d, J= 7.5 Hz, 18H).

실시예 8: 메틸 4-( 메틸 )-1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 4e )의 제조

화합물 4a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 4e를 노란색 고체 형태로 얻었다 (88 mg, 60% 수율): ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ (ppm) 8.66 (s, 1H), 7.01 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.36 (d, J= 5.3 Hz, 3H), 1.76 1.87 (m, 3H), 1.11 (d, J= 7.5 Hz, 18H).

실시예 9: 메틸 4-(2- 히드록시에틸 )-1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 4f )의 제조

화합물 4a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 4f를 노란색 고체 형태로 얻었다 (124 mg, 71% 수율):

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ (ppm) 8.75 (s, 1H), 7.08 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 6.70 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.76 3.83 (m, 3H), 1.42 (t, J= 7.2 Hz, 3H).

실시예 10: 메틸 4-(2- 아미노에틸 )-1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 4g )의 제조

화합물 4a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 4g를 노란색 고체 형태로 얻었다 (77 mg, 63% 수율):

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ (ppm) 8.76 (s, 1H), 7.10 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.64 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 4.33 4.42 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 1.40 (d, J= 6.3 Hz, 6H).

실시예 11: 메틸 4-에틸-1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 4h )의 제조

화합물 4a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 4h를 노란색 고체 형태로 얻었다 (58 mg, 61% 수율):

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ (ppm) 8.60 (s, 1H), 6.92 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.61 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.62 3.66 (m, 2H), 1.64 1.76 (m, 4H), 1.40 1.50(m, 3H), 0.97 (s, 21H).

실시예 12: 메틸 4-(이소프로필)-1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 4i )의 제조

화합물 4a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 4i를 노란색 고체 형태로 얻었다 (98 mg, 75% 수율):

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ (ppm) 8.74 (s, 1H), 7.01 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 3.88 3.98 (m, 4H), 3.81 (s, 3H), 1.69 1.86 (m, 3H), 1.11 (d, J= 7.6 Hz, 18H).

실시예 13: 메틸 4-부틸-1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 4j )의 제조

화합물 4a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 4j를 노란색 고체 형태로 얻었다 (121 mg, 75% 수율):

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ (ppm) 8.54 (s, 1H), 7.09 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 6.75 (dd, J= 3.5, 13.7 Hz, 1H), 3.98 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 3.88 (d, J= 3.3 Hz, 1H), 3.79 (t, J= 6.5 Hz, 1H), 3.59 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 2.99 (t, J= 6.4 Hz, 1H).

실시예 14: 메틸 4-(4- 아미노부틸 )-1-( 트리이소프로필실릴 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 4k )의 제조

화합물 4a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 4k를 노란색 고체 형태로 얻었다 (97 mg, 63% 수율):

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ (ppm) 8.52 (s, 1H), 7.07 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.72 3.75 (m, 2H), 2.85 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 1.88 1.93 (m, 2H).

실시예 15: 4- 벤질아미노 -1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 5a )의 제조

Hydroxybenzotriazole (HOBT) (5 g, 37 mmol)을 테트라히드로푸란 (60 ml)에 녹인 후, 암모니아 수용액 (3.1 ml, 80 mmol)을 첨가한 후, 5시간 동안 상온에서 교반한다. 이 혼합물을 이소프로필에테르 (100 ml)를 사용하여 여과지에 걸러 흰색 고체를 얻었다. 화합물 4a (49 mg, 0.11 mmol)를 에탄올(5 ml)에 녹인 후, 6N 소디움하이드록사이드 (1 ml)를 넣고 2시간동안 60℃에서 환류가열한다. 이 혼합물을 충분히 식힌 후 2N 염산을 이용하여 pH를 5로 맞춘 후 감압농축한다. 얻어진 화합물 (27 mg, 0.1 mmol)을 아세토나이트릴 (4 ml)과 다이메틸폼아마이드 (1 ml)에 녹인 후, 0℃에서 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide (EDC) (31 mg, 0.2 mmol)와 위에서 얻은 흰색 고체(30 mg, 0.2 mmol)을 첨가하고 상온에서 하루 동안 교반한다. 이 혼합물에 물 (10 ml)을 첨가한 후, 에틸아세테이트(10 ml)로 세 번 추출하고, 얻어진 유기층을 탄산수소나트륨 수용액으로 한 번 더 씻어준 뒤 황산마그네슘 (MgSO4)을 첨가하여 남은 물을 제거한 뒤, 여과지를 사용하여 걸러낸다. 이 혼합물을 감압 농축 한 뒤, 얻어진 농축액을 실리카겔 관크로마토그래피 ( 디클로로메탄 : 메탄올 : 암모니아수용액 : 물 = 80 : 20 : 1 : 1)로 정제하여 화합물 (5a)을 갈색의 오일 형태로 얻었다. (11 mg, 38% 수율):

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ (ppm) 11.44 (m, 1H), 9.88 (t, J= 5.8, 5.7 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.25 7.43 (m, 5H), 7.04 7.05 (m, 1H), 6.54 6.56 (m, 1H), 4.87 (d, J= 5.9 Hz, 2H).

실시예 16: 4- 페닐에틸 -1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 5b )의 제조

화합물 5a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 5b를 갈색 오일 형태로 얻었다 (18 mg, 51% 수율):

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ (ppm) 8.28 (s, 1H), 7.19 7.46 (m, 5H), 7.08 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 6.76 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 3.97 (t, J= 7.1 Hz, 2H), 3.02 (t, J= 7.1 Hz, 2H).

실시예 17: 4-(4- 메틸페닐메틸 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 5c )의 제조

화합물 5a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 5c를 갈색 오일 형태로 얻었다 (14 mg, 37% 수율):

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ (ppm) 8.96 (s, 1H), 7.27 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.22 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.13 (d, J= 7.9 Hz, 2H), 6.68 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.91 (d, J= 5.6 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H).

실시예 18: 4-(4- 클로로페닐메틸 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 5d )의 제조

화합물 5a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 5d를 갈색 오일 형태로 얻었다 (21 mg, 44% 수율):

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ (ppm) 7.78 (s, 1H), 7.42 7.44 (m, 2H), 7.22 7.26 (m, 2H), 7.41 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 6.38 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 6.1 Hz, 2H).

실시예 19: 4- 메틸 -1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 5e )의 제조

화합물 5a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 5e를 갈색 오일 형태로 얻었다 (12 mg, 42% 수율):

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ (ppm) 8.33 (s, 1H), 7.08 7.09 (m, 1H), 6.74 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 3.24 (d, J= 5.4 Hz, 3H).

실시예 20: 4-(2- 히드록시에틸 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 5f )의 제조

화합물 5a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 5f를 갈색 오일 형태로 얻었다 (27 mg, 54% 수율):

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ (ppm) 8.28 (s, 1H), 7.06 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 3.75 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.36 (t, J= 7.2 Hz, 3H).

실시예 21: 4-(2- 아미노에틸 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 5g )의 제조

화합물 5a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 5g를 갈색 오일 형태로 얻었다 (18 mg, 47% 수율):

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ (ppm) 8.34 (s, 1H), 7.11 7.13 (m, 1H), 6.56 6.57 (m, 1H), 4.22 4.28 (m, 1H), 1.26 (d, J= 6.2 Hz, 6H).

실시예 22: 4-에틸-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 5h )의 제조

화합물 5a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 5h를 갈색 오일 형태로 얻었다 (17 mg, 31% 수율):

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ (ppm) 8.29 (s, 1H), 7.06 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 3.71 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 1.70 1.77 (m, 2H), 1.48 1.58 (m, 2H), 1.00 (t, J= 7.3 Hz, 3H).

실시예 23: 4-이소프로필-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 5i )의 제조

화합물 5a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 5i를 갈색 오일 형태로 얻었다 (15 mg, 42% 수율):

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ (ppm) 8.32 (s, 1H), 7.11 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 4.36 (t, J= 5.4 Hz, 2H), 3.99 (t, J= 5.4 Hz, 2H).

실시예 24: 4-부틸-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 5j )의 제조

화합물 5a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 5j를 갈색 오일 형태로 얻었다 (21 mg, 48% 수율):

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ (ppm) 8.62 (s, 1H), 7.08 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 6.60 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 3.66 (t, J= 3.9 Hz, 2H), 3.51 (t, J= 3.9 Hz, 2H).

실시예 25: 4-(4- 아미노부틸 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -5- 카르복실레이트( 5k )의 제조

화합물 5a의 합성과 같은 실험방법에 의해 목적하는 화합물 5k를 갈색 오일 형태로 얻었다 (23 mg, 39% 수율): ¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ (ppm) 8.08 (s, 1H), 7.08 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 6.57 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 3.49 3.52 (m, 2H), 2.01 2.03 (m, 2H), 1.68 1.83 (m, 2H).

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구 항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

하기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:
[화학식 1]

상기 화학식에서 R은 메틸, 에틸, 이소프로필, 부틸, 2-하이드록시에틸, 2-아미노에틸, 3-아미노프로필 또는 페네틸.
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제1항의 화합물을 유효성분으로 포함하는 류마티스성 관절염 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
제 1항의 화합물을 유효성분으로 포함하는 류마티스성 관절염 개선용 식품 조성물.
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