KR101543306B1 - Cell-preserving solution - Google Patents
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Abstract
본 발명은 수집된 객담 등의 검체 세포의 세포학적 진단을 위한 보존 용액에 관한 것으로, 증류수 100중량부에 대하여 에탄올 40~50중량부와, 케톤 2.2~3.3중량부와, 세포 코팅제 1.9~2.7중량부와, 폴리올 1.1~1.8중량부와, 완충용액 0.75~2.32중량부와, 소듐 아자이드· 구연산· 소르브산· 벤조산나트륨 및 포르말린 중에서 선택되는 적어도 하나와 황금 추출물이 혼합된 방부제 0.2~1.3중량부 및 상기 방부제에 증류수 100중량부에 대해 라벤더 분말 0.5~4.0중량부를 혼합하여 용해된 라벤더액을 첨가하여 이루어진 것을 특징으로 하고, 객담에서 점액 분리가 용이하게 하고, 수집된 검체 세포의 보존중에 세포의 건조 및 부패를 방지하며, 수집된 세포의 고정 및 코팅을 통해 세포의 형태학적 구조를 장시간 유지하고 천연 방부 기능을 갖는 방부제를 이용하여 세포의 보존성을 향상시킬 수 있도록 한다.The present invention relates to a preservation solution for cytological diagnosis of collected specimens such as sputum, which comprises 40 to 50 parts by weight of ethanol, 2.2 to 3.3 parts by weight of ketone, 1.9 to 2.7 parts by weight of a cell coating agent 1.1 to 1.8 parts by weight of a polyol, 0.75 to 2.32 parts by weight of a buffer solution, 0.2 to 1.3 parts by weight of a preservative mixed with at least one selected from sodium azide, citric acid, sorbic acid, sodium benzoate and formalin, And 0.5 to 4.0 parts by weight of lavender powder relative to 100 parts by weight of distilled water is added to the preservative, and the dissolved lavender solution is added thereto. The present invention is characterized by facilitating mucus separation from the sputum, It prevents drying and corruption, keeps the morphological structure of the cells for a long time through fixing and coating of the collected cells, and protects the cells by using a preservative having natural antiseptic function And to improve the personality.
Description
본 발명은 세포 보존용액에 관한 것으로, 특히 객담 등의 검체 세포를 액상세포검사법으로 진단하기 위해 액상에서 보존하기 위한 세포 보존용액으로서, 점액 분리가 용이하고 천연 방부 기능을 갖는 방부제를 이용하여 세포의 보존성을 향상시켜 액상에서 장시간 보존할 수 있도록 그 구조가 개선된 세포 보존용액에 관한 것이다.The present invention relates to a cell preservation solution, and more particularly, to a cell preservation solution for preserving a specimen cell such as sputum by a liquid cytology method in a liquid phase. The cell preservation solution is prepared by using a preservative having a mucus- The present invention relates to a cell preservation solution whose structure is improved so that it can be preserved in a liquid phase for a long time.
일반적으로, 세포학적 및 분자병리학적 진단을 위한 보조용액이란 인체에서 채취된 세포를 잘 보존하여 세포병리학적 진단을 하는 액상세포검사(Liquid Based Cytology)를 수행하기 위한 용액을 말한다. 이러한 액상세포검사는 부인과 검체인 자궁경부세포, 그리고 비부인과 검체인 객담, 체액, 소변 등에 이용되는 것으로 수집된 세포를 현미경으로 검사하여 암세포의 유무를 확인하는 것을 주로 한다.In general, auxiliary solutions for cytologic and molecular pathology diagnosis are solutions for performing liquid-based cytology (cytology) for cytopathological diagnosis by well preserving the cells collected from the human body. These liquid cytology tests are used for cervical cells, such as gynecologic specimens, and sputum, body fluids, and urine, which are non-gynecological specimens. The collected cells are examined with a microscope to check for the presence of cancer cells.
종래의 재래식 세포진 검사(Conventional Pap Smear)는 객담을 채취하여 면봉에 적시고, 이를 유리 슬라이드 위에 도말한 다음 에탄올로 고정시키고 염색하여 현미경으로 관찰하는 방법을 사용하고 있다. 그러나 이 경우의 객담은 점액 때문에 슬라이드 위에서 도말이 어렵고, 도말이 되더라도 종양세포들이 점액 때문에 관찰이 어려운 문제점이 있다.Conventional conventional Pap smear is a method of collecting sputum, wetting it on a cotton swab, coating it on a glass slide, fixing it with ethanol, and staining it with a microscope. However, the sputum in this case is difficult to smear on the slide because of mucus, and even if smearing, tumor cells are difficult to observe due to mucus.
상기한 문제점을 해결하기 위하여 액상세포검사법이 개발되었다. 이는 수집된 조직세포를 세포학적 진단을 위한 보조용액에 보관하여 후속되는 세포병리학적 검사를 진행할 수 있도록 고안된 것으로서, 세포를 채취한 후 채취된 세포들을 세포보관용 용액에 보관하고, 필요할 경우에 상기 세포보관 용액 내에 보관되던 세포를 검사하여 세포의 이상 유무를 진단하는 방법이다. In order to solve the above-mentioned problem, a liquid cell cytometer has been developed. This is designed to allow the collected tissue cells to be stored in an auxiliary solution for cytological diagnosis and to carry out a subsequent cytopathological examination. The cells are collected and the collected cells are stored in a solution for storing cells, and if necessary, It is a method to diagnose the abnormality of cells by examining the cells stored in the cell storage solution.
세포진 검사법에 따르면 검체의 세포가 유리 슬라이드에서 불균등하게 분포하므로 어느 부분을 관찰하느냐에 따라 진단이 달라질 위험이 있으나, 액상세포검사법에 따를 경우에는 세포들이 유리 슬라이드에 균일하게 분포하므로 진단의 정확도가 높다는 것을 알 수 있다.According to the cytology, there is a risk that the specimen cells are unevenly distributed on the glass slide, so the diagnosis is different depending on which part is observed. However, according to the liquid cell cytology, the cells are uniformly distributed on the glass slide, Able to know.
이러한 액상세포검사법을 시행하기 위해서는 수집된 세포를 보관할 수 있는 용액이 필요하였고, 이에 따라 최근에는 객담의 점액을 제거한 다음 세포를 장기간 보존할 수 있는 보존용액에 대한 필요성이 증가하고 있다.In order to carry out this liquid cytology, a solution capable of storing the collected cells was required. Accordingly, there is a growing need for a preservative solution capable of preserving cells for a long period of time after removing mucus from the sputum.
대한민국 등록특허 제 579467호(2006년5월15일 공개)는 소정범위의 pH로 유지하기 위한 완충용액, 알코올, 그리고 보관되던 세포를 대상으로 하는 후속 검사 시 상기 세포가 건조되는 것을 방지하기 위한 건조방지제를 포함하는 것을 특징으로 하는 세포학적 진단을 위한 보조용액을 개시하고 있다. 또한, 대한민국 공개특허공보 제 10-2005-116689호(2005년12월13일 공개)는 증류수에 분말 형태의 한천 및 액체 상태의 알코올을 혼합한 겔상 보존제의 제조방법을 개시하고 있다.Korean Patent No. 579467 (published on May 15, 2006) discloses a method for preventing the cell from drying in a buffer solution for maintaining a predetermined pH range, an alcohol, And an auxiliary agent for cytologic diagnosis, which comprises an inhibitor. Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2005-116689 (published on December 13, 2005) discloses a method for producing a gel-like preservative in which agar powder in the form of powder and alcohol in a liquid state are mixed with distilled water.
그러나 이러한 세포의 진단을 위한 보조용액은 액상세포검사법에 사용되어 부인과 검체 중 주로 자궁경부세포를 대상으로 사용되고 있지만, 비부인과 검체인 객담, 체액, 소변 등의 보존제로 사용될 경우 세포의 종류에 따라서 특성에 차이가 있기 때문에 정확한 진단결과 판정이 어려운 문제점이 있다. However, the adjuvant solution for the diagnosis of these cells is used in the liquid cytology and is mainly used for cervical cells in gynecological specimens. However, when used as a preservative for sputum, body fluids, urine, etc., There is a problem that it is difficult to accurately determine the diagnosis result.
따라서, 비부인과 검체인 객담등에 최적화된 보조용액의 개발이 필수적이다. 특히, 폐암 및 결핵을 진단하기 위한 세포의 보존제로 사용될 경우 객담의 점액 제거를 위한 기구 및 시약이 별도로 필요한 문제점이 있다.Therefore, it is essential to develop an auxiliary solution optimized for sputum, such as non-gynecologic specimens. In particular, when used as a preservative for cells for diagnosing lung cancer and tuberculosis, there is a problem that a device and a reagent for removing mucus from sputum are separately required.
본 발명은 상기한 제반문제점을 감안하여 이를 해결하고자 창출된 것으로, 그 목적은 객담 등의 검체 세포를 액상에서 보존하는 과정에서 점액의 분리가 용이하고 천연방부제를 이용하여 검체 세포를 장시간 보존할 수 있도록 된 세포 보존용액을 제공하는 데 있다.DISCLOSURE Technical Problem The present invention has been made in view of the above-mentioned problems, and it is an object of the present invention to provide a method for separating mucus from a liquid sample of a sputum or the like and preserving the sample cells for a long time using a natural preservative To provide a cell preservation solution that has been made available.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명은 중량부로, 증류수 100중량부에 대하여 에탄올 40~50중량부, 케톤 2.2~3.3중량부, 세포 코팅제 1.9~2.7중량부, 폴리올 1.1~1.8중량부, 완충용액 0.75~2.32중량부, 점액용해제 0.3~0.75중량부, 방부제 0.2~1.3중량부를 포함하여 이루어지되,In order to accomplish the above object, the present invention is characterized by comprising 40 to 50 parts by weight of ethanol, 2.2 to 3.3 parts by weight of ketone, 1.9 to 2.7 parts by weight of a cell coating agent, 1.1 to 1.8 parts by weight of a polyol, 0.75 to 2.32 parts by weight, 0.3 to 0.75 parts by weight of a mucolytic agent, and 0.2 to 1.3 parts by weight of a preservative,
상기 방부제는 소듐 아자이드, 구연산, 소르브산, 벤조산나트륨, 포르말린 중 적어도 하나와, 황금(黃芩)추출물을 혼합한 것으로 이루어진 것을 특징으로 한다.The preservative may be a mixture of at least one of sodium azide, citric acid, sorbic acid, sodium benzoate, and formalin and a gold (黄 芩) extract.
상기 방부제는 에틸렌디아민테트라아세트산을 포함하는 염이 더 첨가된 것이다.The preservative is further added with a salt containing ethylenediaminetetraacetic acid.
상기 방부제는 라벤더액을 더 첨가하되,The preservative is further added with a lavender solution,
상기 라벤더액은 상기 증류수 100중량부에 대해 라벤더 분말 0.5~4.0중량부를 첨가하여 용해한 것이다.The lavender solution is prepared by adding 0.5 to 4.0 parts by weight of lavender powder to 100 parts by weight of the distilled water.
본 발명은 단순 구성의 배합비율로 ph유지가 용이하며 세포 코팅제 및 천연 기능의 방부제가 구성되어 세포의 건조 및 부패를 방지할 수 있으므로, 객담 등의 검체 세포를 보존하는 중에 세포의 형태학적 구조를 장시간 유지시켜 검체 세포의 보존성을 향상시킬 수 있는 유용한 효과를 갖는다.The present invention is easy to maintain the pH at a compounding ratio of simple constitution, and it can prevent the drying and corruption of cells by constituting a cell coating agent and a preservative of natural function. Therefore, the morphological structure of cells during sputum- It has a useful effect of being able to maintain preservation of specimen cells for a long time.
본 발명은 수집된 검체 세포의 세포학적 진단을 위한 보존 용액에 관한 것으로, 수집된 검체 세포를 보존중에 세포의 건조 및 부패를 방지하고, 수집된 검체 세포의 고정 및 코팅을 통해 장시간 형태를 유지한 상태로 보존할 수 있도록 한다.The present invention relates to a preservation solution for the cytological diagnosis of collected specimen cells, and it relates to a preservation solution for preventing the drying and corruption of cells during preservation of the collected specimen cells and keeping the collected specimen cells fixed and coated for a long time So that it can be saved in a state.
본 발명에 따른 세포 보존용액은, 중량부로, 증류수 100중량부에 대하여 에탄올 40~50중량부, 케톤 2.2~3.3중량부, 세포 코팅제 1.9~2.7중량부, 폴리올 1.1~1.8중량부, 완충용액 0.75~2.32중량부, 점액용해제 0.3~0.75중량부, 방부제 0.2~1.3중량부로 이루어진 것이다.The cell preservation solution according to the present invention comprises 40 to 50 parts by weight of ethanol, 2.2 to 3.3 parts by weight of ketone, 1.9 to 2.7 parts by weight of a cell coating agent, 1.1 to 1.8 parts by weight of a polyol, To 2.32 parts by weight, 0.3 to 0.75 parts by weight of a mucolytic agent, and 0.2 to 1.3 parts by weight of a preservative.
더 상세히 설명하면, 케톤(ketone)은 검체로부터 수집된 세포의 고정제 및 세포 침투의 기능을 수행하기 위한 것으로, 탄소가 3개인 아세톤을 채용할 수 있다.More specifically, a ketone is used to perform a cell immobilization function and a cell infiltration function of cells collected from a sample, and acetone having three carbon atoms can be employed.
에탄올은 세포 침투성, 탈수, 세균 억제 기능을 가지며, 이를 위해 에탄올 알코올을 채용할 수 있다.Ethanol has cell permeability, dehydration and bacterial inhibition, and ethanol alcohol can be used for this purpose.
케톤은 2.2중량부 미만일 경우, 세포 고정 및 침투의 기능을 수행하기 어렵고, 3.3중량부를 초과할 경우에는 과도한 산성으로 인해 ph유지가 어렵기 때문에 2.2~3.3중량부를 유지하는 것이 바람직하다.When the amount of the ketone is less than 2.2 parts by weight, it is difficult to perform the function of cell fixation and penetration. When the amount of the ketone exceeds 3.3 parts by weight, it is preferable to maintain 2.2 to 3.3 parts by weight because the pH is difficult to maintain due to excessive acidity.
세포 코팅제는 세포 코팅, 수축 방지 및 핵 세부 유지 기능을 가지며, 폴리에틸렌글리콜(PEG)을 채택할 수 있다.Cellular coatings have cell coating, anti-shrinkage and nuclear detail retention and can adopt polyethylene glycol (PEG).
또한, 세포 코팅제는 1.9중량부미만시 제 기능을 유지하기 어렵고, 2.7중량부 초과시 더이상의 효과를 기대하기 어렵고 원가 상승의 요인이 된다.Further, when the amount of the cell coating agent is less than 1.9 parts by weight, it is difficult to maintain the function, and when the amount is more than 2.7 parts by weight, the effect is not expected any more and the cost increases.
폴리올(polyol)은 수집된 세포의 건조를 방지하기 위한 기능을 수행하며, 일 예로 수산기(-OH)가 3개인 글리세롤(glycerol)을 채용할 수 있다.The polyol serves to prevent drying of the collected cells, and glycerol having three hydroxyl groups (-OH) can be employed as an example.
또한, 폴리올은 1.1중량부 미만일 경우, 세포가 건조해질 우려가 있으며, 1.8중량부를 초과할 경우 과도한 흡습성으로 인해 검체 세포의 수분 조절이 어려운 단점이 있다.When the amount of the polyol is less than 1.1 parts by weight, the cells may be dried. When the amount of the polyol is more than 1.8 parts by weight, moisture control of the test cells is difficult due to excessive hygroscopicity.
완충용액(buffer solution)은 핵탄맥질 고정 및 삼투압을 유지하기 위한 것으로, 트리스(Tris)를 채용할 수 있으며, 0.75중량부 미만시 핵탄물질 고정 및 삼투압을 유지하기 어렵고, 2.32중량부 초과시에는 수소 이온농도를 일정하게 유지하기 어려운 단점이 있다.Tris may be employed to maintain the nucleus filling and osmotic pressure. When the amount is less than 0.75 part by weight, it is difficult to maintain the nuclear material fixation and osmotic pressure. When the amount is more than 2.32 parts by weight, It is difficult to keep the concentration constant.
점액 용해제는 점액의 분산을 위한 것으로, 디티오트레이톨(dithiothreitol)을 채용할 수 있다.The mucolytic agent is for the dispersion of mucus, and dithiothreitol may be employed.
또한 점액 용해제는 0.3중량부 미만시에는 점액의 뭉쳐짐 현상으로 인해 검체 세포의 추후 진단이 어렵고, 0.75중량부 초과시에는 ph 농도 유지가 어려운 단점이 있다.Further, when the amount of the mucolytic agent is less than 0.3 parts by weight, it is difficult to diagnose the specimen cells due to the accumulation of mucus, and when the amount is more than 0.75 parts by weight, it is difficult to maintain the pH concentration.
방부제는 소듐 아자이드, 구연산, 소르브산, 벤조산나트륨, 포르말린 중 적어도 하나가 황금 추출물과 혼합된 것이다.The preservative is a mixture of at least one of sodium azide, citric acid, sorbic acid, sodium benzoate, and formalin with the gold extract.
방부제는 0.2중량부 미만일 경우 방부제의 기능을 수행하기 어렵고, 1.3중량중량부를 초과할 경우에는 더이상의 효과를 기대하기 어렵고 원가 상승의 요인이 된다.When the preservative is less than 0.2 parts by weight, it is difficult to perform the function of the preservative. When the preservative is more than 1.3 parts by weight, it is difficult to expect the effect and the cost increases.
황금 추출물(Scutellaria Baicalensis Root Extract)은 꿀풀과 식물인 황금(黃芩)의 뿌리에서 추출하는 것으로서, 항균효과가 우수하고 항염증 기능을 갖는 천연 방부제의 기능을 갖는다.The Golden Extract (Scutellaria Baicalensis Root Extract) is extracted from the roots of the mung bean and plant golden (黄 芩), and has the function of a natural antiseptic with excellent antimicrobial activity and anti-inflammatory function.
또한, 방부제는 에틸렌디아민테트라아세트산 등의 기타염을 첨가할 수 있다.Further, other preservatives such as ethylenediaminetetraacetic acid may be added.
에틸렌디아민테트라아세트산은 약칭 EDT이라 불리고, 에데트산(edetic acid)의 염이며, 많은 금속이온과 착염(킬레이트)을 형성하고, 항균 활성 또는 항진균 활성을 지닌 약물로서, 중금속이온을 봉쇄하여(킬레이트제) 산화방지효과를 나타내기 때문에, 변색방지, 향기보존, 산패방지, 부식방지, 변색방지 등에 EDTA의 칼슘·나트륨염을 첨가물로 이용할 수 있다.Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) is a salt of edetic acid, which forms a complex salt with many metal ions and has antimicrobial activity or antifungal activity. It contains a heavy metal ion (chelating agent ), It is possible to use calcium and sodium salts of EDTA as an additive to prevent discoloration, preserve fragrance, prevent rancidity, prevent corrosion, prevent discoloration and the like.
또한, 방부제는 라벤더액을 더 첨가한 것을 채택하되, 상기 라벤더액은 천연 방부제의 기능을 가지며, 증류수 100중량부에 대해 라벤더 분말 0.5~4.0중량부를 첨가하여 용해한 것이다.The lavender liquid has a function of a natural preservative and is prepared by adding 0.5 to 4.0 parts by weight of lavender powder to 100 parts by weight of distilled water to dissolve the preservative.
이는, 라벤더 분말이 0.5중량부 미만일 경우 그 효과를 기대하기 어렵고, 4.0중량부를 초과할 경우에는 점도가 높아질 우려가 있기 때문이다.This is because the effect is not expected when the amount of the lavender powder is less than 0.5 part by weight, and when the amount is more than 4.0 parts by weight, the viscosity may increase.
상기한 천연 방부제 황금 추출물과 라벤더액을 포함하는 경우, 세포의 보존성이 향상되는 이점을 갖는다.When the above-described natural antiseptic gold extract and lavender solution are contained, the preservability of the cells is improved.
본 발명의 세포 보존용액은 약산성을 유지하는 것이 바람직하며, 이를 위해 별도로 기존의 ph유지제를 첨가할 수도 있다.The cell preserving solution of the present invention preferably maintains a weak acidity. To this end, a conventional pH maintenance agent may be added.
이러한 구성으로 된 세포 보존용액은 수집된 세포의 검체 전 보전 처리에 사용된다.Cell preservation solutions with this configuration are used for pre-sample preservation treatment of the collected cells.
상기한 세포 보존용액을 구성하는 구성요소들 중 용매, 케톤, 세포코팅제, 폴리올을 먼저 선배합한다.Solvents, ketones, cell coatings, and polyols are preliminarily synthesized among the components constituting the cell preserving solution.
이후에, 증류수, 완충 용액, 점액용해제, 방부제를 배합한 후에 선 배합된 용액과 혼합한다.Thereafter, distilled water, a buffer solution, a mucolytic agent and an antiseptic are mixed and then mixed with the pre-blended solution.
이때, 선 배합된 용액과 후 배합된 용액의 배합 순서는 상관없이 진행할 수 있으며 배합된 두 용액을 혼합하여 사용한다.At this time, the mixing procedure of the pre-blended solution and the post-blended solution can be carried out independently of each other, and the two blended solutions are used.
혼합된 세포 보존용액은 실온(15~30℃)에서 유지하는 것이 바람직하다.The mixed cell preservation solution is preferably maintained at room temperature (15-30 ° C).
한편, 검체 작업의 실시 예로는 검체를 원심분리기에 넣어서 회전 동작으로 원심 분리한 후에, 원심 분리된 검체의 상층액을 제거한 후에 MonoLex를 첨가한 다음에, 믹싱 작업을 한 후에 검체를 원심 분리한다.On the other hand, as an example of the specimen work, a specimen is put into a centrifuge, centrifuged by a rotary motion, the supernatant of the centrifuged specimen is removed, MonoLex is added, and the specimen is centrifuged after mixing.
이어서, 원심 분리된 검체의 상층액을 제거한 후에 분리된 검체를 검체병에 넣어서 장비를 이용하여 슬라이드를 제작하는 과정을 갖는다.Then, after removing the supernatant of the centrifuged specimen, the separated specimen is put into a specimen bottle and the slides are manufactured by using the equipment.
이러한 검체 처리방식은 혈성이나 점액도에 따라 다소 차이를 보일 수 있다.Such a sample treatment method may show a slight difference depending on the blood or mucus.
본 발명은 브러시로 세포를 채취한 후 채취된 세포들을 세포 보존용액에 보관한 후에 필요시 세포 보존용액 내에 보관되던 세포를 검사하여 세포의 이상 유무를 진단할 수 있다.In the present invention, after collecting cells with a brush, the collected cells are stored in a cell preservation solution, and if necessary, the cells stored in the cell preservation solution can be examined to diagnose the abnormality of the cells.
본 발명의 세포 보존용액은 단순 구성의 배합비율로 ph유지가 용이하며 세포 코팅제 및 천연 기능의 방부제가 구성되어 세포 고정 및 세포의 건조 및 부패를 방지할 수 있으며 세포의 형태학적 구조를 장시간 유지시켜 보존성을 향상시킬 수 있는 이점을 갖는다.The cell preserving solution of the present invention is easy to maintain the pH at a compounding ratio of a simple constitution, and can be used as a cell coating agent and a preservative of a natural function to prevent cell fixation, drying and corruption of cells and maintain the morphological structure of cells for a long time And has an advantage that the preservability can be improved.
본 발명에 따른 세포 보존용액에 담겨진 검체 세포는 중합효소 연쇄반응(PCR : Polymerase Chain Reaction)을 수회 반복하여 유전자 검사를 할 수 있으며, 특히 실온에서 보관중인 세포를 이용하더라도 유전자 검사가 가능하므로, 세포학적 진단을 위한 세포의 보관 비용을 대폭 절감할 수 있다.The test cells contained in the cell preservation solution according to the present invention can be subjected to gene testing by repeating PCR (Polymerase Chain Reaction) several times. Particularly, even if cells stored at room temperature are used, The cost of storing cells for diagnostic purposes can be greatly reduced.
Claims (3)
상기 방부제는 에틸렌디아민테트라아세트산을 포함하는 염이 더 첨가되는 것을 특징으로 하는 세포 보존용액.The method according to claim 1,
Wherein the preservative is further added with a salt comprising ethylenediaminetetraacetic acid.
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