KR102563528B1 - Solution composition for liquid based cytology of cervical cancer - Google Patents
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Abstract
본 발명은 자궁 경부암 액상 세포 검사용 솔루션 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 자궁에서 채취한 세포의 단백질 변성을 최소화하여 형태학적 구조를 유지하면서 세포의 건조 및 부패를 방지하여 세포형태를 원래의 형태에 가깝게 장기간 보존이 가능한 자궁 경부암 액상 세포 검사용 솔루션 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a solution composition for cervical cancer liquid cytology, and more particularly, by minimizing protein denaturation of cells collected from the uterus to prevent drying and decay of cells while maintaining morphological structure, thereby changing the cell morphology to its original form. It relates to a solution composition for liquid cytology for cervical cancer that can be stored for a long period of time.
Description
본 발명은 자궁 경부암 액상 세포 검사를 위한 솔루션 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 액상 세포 검사시 검체 세포의 보존(preserving)을 위한 솔루션 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a solution composition for cervical cancer liquid cytology. Specifically, it relates to a solution composition for preserving sample cells during liquid cytology.
사람의 질병을 진단 내지는 검사하기 위한 다양한 방법이 알려져 있다. 예를 들어, 질병을 진단하기 위한 방법의 예로는 X선 촬영, 컴퓨터 단층촬영(CT) 등과 같이 병변의 시각 이미지를 통한 임상적 검사, 병변을 손으로 만져 진단하는 촉진 검사, 또는 혈액 검사, 소변 검사(urinalysis) 등과 같이 체내 성분의 이학적 성질과 상태, 생화학적 특성, 또는 기타 진단 키트를 이용한 혈청학적 특성을 판단하는 검사 등을 들 수 있다. Various methods for diagnosing or examining human diseases are known. For example, examples of methods for diagnosing diseases include clinical examinations through visual images of lesions such as X-ray imaging, computed tomography (CT), etc., palpation examinations for diagnosing lesions by touching them, or blood tests and urine tests. Tests for determining the physical properties and conditions of body components, biochemical properties, or serological properties using other diagnostic kits, such as urine analysis, may be mentioned.
이와 같이 환자에게 고통을 거의 주지 않고 질병을 조기에 진단할 수 있는 다양한 방법이 개발되고 있으나, 이러한 방법만으로 질병의 유무를 확실하게 알 수 없는 경우 세포 검사(cystoscopy) 또는 조직 검사(biopsy) 등의 진단학적 검사에 의존하게 된다.As such, various methods are being developed that can diagnose the disease early without causing little pain to the patient. However, if the presence or absence of the disease cannot be determined with only these methods, cystoscopy or biopsy may be used. Dependent on diagnostic tests.
소위 생체 검사 또는 생검이라고 부르는 조직 검사(biopsy)는 생체에서 조직의 일부를 메스나 바늘 등의 기구로 절개하여 검체를 채취하는 검사 기법을 의미한다. 조직 검사는 검체의 채취 방법에 따라 절개 생검, 절제 생검, 바늘 생검으로 구별될 수 있다. 절개 생검은 의심되는 병터의 소편을 부분적으로 소량 절개하는 방식이고, 절제 생검은 의심되는 병터 전체를 절개하는 방식이다. 그리고 바늘 생검은 바늘을 찔러 넣어 주로 액상의 검체를 흡인하는 방식이다. 조직 검사는 생체 내 다양한 부위를 검사할 수 있다는 장점을 가지고 있으며, 생체 부위에 따라 적절한 방법을 이용하게 된다.A so-called biopsy or biopsy refers to an examination technique in which a part of a tissue is cut in a living body with an instrument such as a scalpel or a needle to obtain a sample. Histological examination can be divided into incisional biopsy, excisional biopsy, and needle biopsy according to the specimen collection method. Incisional biopsy is a method of partially incising a small piece of a suspected lesion, and excisional biopsy is a method of incising the entire suspected lesion. And needle biopsy is a method in which a needle is inserted and a liquid sample is aspirated. A biopsy has the advantage of being able to examine various parts of a living body, and an appropriate method is used according to the part of a living body.
반면 환자 신체의 조직을 절개하는 등의 방식으로 직접 조직 검체를 채취하는 조직 검사와 달리 세포 검사(cystoscopy)는 주로 조직이나 점막으로부터 자연적으로 탈락한 세포(exfoliative cell)를 검체로 하여 검사하는 방법을 지칭한다. 즉, 세포 검사는 신체 부위로부터 얻은 세포 검체를 검사하여 질병의 유무, 병의 원인이나 성상, 종류 등을 밝혀내는 진단학적 분야로서, 세포 병리학에 근간을 두고 있다. 경우에 따라 전술한 바늘 생검을 세포 검사로 분류하기도 한다.On the other hand, unlike a biopsy in which a tissue sample is directly collected by incising the patient's body, cystoscopy is mainly a method of examining exfoliative cells from tissue or mucous membrane as a sample. refers to That is, cytology is a diagnostic field in which a cell sample obtained from a body part is examined to determine the presence or absence of a disease, the cause, nature, type, etc. of the disease, and is based on cell pathology. In some cases, the needle biopsy described above is classified as a cytological examination.
세포 검사의 대상이 되는 생체 내 세포의 종류는 주로 세포진(細胞診), 객담, 말초 혈액 세포, 골수 세포, LE 세포, 흉수나 복수 등의 체강액, 척수액 등을 예시할 수 있다. 조직 검사가 불가능한 경우라도 세포 검사를 수행할 수 있는 경우가 많고, 세포 검사는 조직 검사 보다 넓은 범위에서 검체를 얻을 수 있으며 반복 검사가 가능하다는 장점이 있다. 이와 같은 세포 검사가 가장 많이 활용되는 분야 중 하나는 부인과(gynecology) 영역, 특히 자궁 경부암과 자궁 내막암의 진단에 활용되고 있다. 부인과 세포 검사는 특수하게 제작된 솔 등을 이용하여 자궁 경부 부위의 탈락 세포를 채취하고, 채취된 검체를 슬라이드 글라스에 도말(smear)한 후 표본을 염색하여 현미경으로 관찰하게 된다.Types of in vivo cells to be subjected to cytology include mainly cytodiagnosis, sputum, peripheral blood cells, bone marrow cells, LE cells, body cavity fluids such as pleural fluid and ascites, spinal fluid, and the like. Even in cases where a biopsy is impossible, cytology can often be performed, and cytology has the advantage of being able to obtain specimens in a wider range than biopsy and enabling repeated testing. One of the fields in which such a cytology test is most widely used is in the field of gynecology, particularly in the diagnosis of cervical cancer and endometrial cancer. Gynecological cytology is performed by collecting exfoliated cells from the cervix using a specially designed brush, smearing the collected specimen on a slide glass, staining the specimen, and observing it under a microscope.
특히 종래의 세포진 검사(papanicolaou)를 대체하여 체집된 세포 검체를 보존액에 보관하였다가 보존된 세포의 검체를 슬라이드 상에 올려놓고 검사하는 액상 세포 검사(liquid based cytology) 기법이 개발되어 검사의 특이성(specificity)과 민감도(sensitivity)이 크게 향상되고, 자궁 경부암의 조기 진단이 가능하게 되었다.In particular, a liquid-based cytology technique was developed to replace the conventional cytology test (papanicolaou) by storing the collected cell sample in a preservation solution and placing the preserved cell sample on a slide for examination, thereby improving the specificity of the test ( Its specificity and sensitivity were greatly improved, and early diagnosis of cervical cancer became possible.
액상 세포 검사에서 이용되는 고정액 또는 보존액은 피검자로부터 채취한 세포 등의 검체를 검사하기 전의 시간 동안 보존하는 기능을 수행한다. 예를 들어, 채취한 검체를 수용, 보관 또는 운반하는 과정에서 세포가 물리/화학적으로 손상되지 않도록, 보존액은 세포 내에 침투하여 분해 또는 부패를 방지함으로써 검체를 채취 상태로 보존하는 역할을 할 수 있다. 또한 검체의 단백질을 변성(denaturation) 내지는 응고(coagulation)시켜서 검체에 경도를 부여함으로써 추후 검체의 세포학적 진단을 용이하게 할 수 있다.A fixative or preservative solution used in liquid cytology performs a function of preserving a sample such as cells collected from a subject for a period of time before testing. For example, in order to prevent cells from being physically/chemically damaged during the process of receiving, storing, or transporting the collected specimen, the preservative solution penetrates into the cells to prevent degradation or decay, thereby preserving the specimen in the collected state. . In addition, by denaturing or coagulating the protein of the specimen to impart hardness to the specimen, cytological diagnosis of the specimen can be easily performed later.
종래의 고정액 솔루션 내지는 보존액 솔루션은 포르말린 용액이나 고농도 에탄올 등을 많이 이용하였다. 그러나 이것만으로는 세포를 장시간, 예컨대 대략 일주일 이상 보존할 수 없는 단점이 있으며, 검사의 종류에 따라 이 기간은 더 짧아지기도 하였다.Conventional fixative solutions or preservative solutions used a lot of formalin solutions or high-concentration ethanol. However, this alone has a disadvantage in that cells cannot be preserved for a long time, for example, about a week or longer, and this period may be shorter depending on the type of test.
이에 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 세포 검체의 고정 내지는 보존 특성이 더욱 개선된 액상 세포 검사용 솔루션 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, an object to be solved by the present invention is to provide a liquid cell test solution composition with further improved fixation or preservation characteristics of a cell specimen.
본 발명의 과제들은 이상에서 언급한 과제들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.The tasks of the present invention are not limited to the tasks mentioned above, and other tasks not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the following description.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 일 실시예에 따른 솔루션 조성물은 자궁 경부암 액상 세포 검사용 솔루션 조성물로서, 25 내지 55 부피%의 알코올, 10 내지 25 부피%의 완충 용액, 2 내지 5 부피% 의 아세트산 및 0.3 내지 1.5 부피%의 토코페롤을 포함한다.A solution composition according to an embodiment of the present invention for solving the above problems is a solution composition for cervical cancer liquid cell examination, comprising 25 to 55% by volume of alcohol, 10 to 25% by volume of a buffer solution, and 2 to 5% by volume of acetic acid and 0.3 to 1.5% by volume of tocopherol.
또, 상기 조성물은 유화제, 혈액응고방지제, 건조방지제, 가교결합제, 세포코팅제, 점액용해제 및 증류수로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 포함할 수 있다.In addition, the composition may further include at least one selected from the group consisting of an emulsifier, an anticoagulant, an antidrying agent, a crosslinking agent, a cell coating agent, a mucolytic agent, and distilled water.
상기 알코올은 메탄올, 에탄올 및 이소프로판올로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상, 및 1,2-헥산디올을 포함할 수 있다.The alcohol may include at least one selected from the group consisting of methanol, ethanol, and isopropanol, and 1,2-hexanediol.
몇몇 실시예에서, 2.0 부피% 내지 8.0 부피%의 아세톤을 더 포함할 수 있다.In some embodiments, it may further include 2.0% by volume to 8.0% by volume of acetone.
이 경우 상기 아세톤과 상기 토코페롤의 부피의 합은 2.3 부피% 내지 9 부피%일 수 있다.In this case, the sum of the volumes of the acetone and the tocopherol may be 2.3 vol% to 9 vol%.
또, 상기 완충 용액은 pH 6.1 내지 7.5 를 갖는 1,4-피페라진다이에탄술폰산을 포함할 수 있다.In addition, the buffer solution may include 1,4-piperazinediethanesulfonic acid having a pH of 6.1 to 7.5.
몇몇 실시예에서, 0.1 내지 1 부피% 의 나프리(napre)를 더 포함할 수 있다.In some embodiments, it may further include 0.1 to 1% by volume of napre.
기타 실시예의 구체적인 사항들은 상세한 설명에 포함되어 있다. Other embodiment specifics are included in the detailed description.
본 발명의 실시예에 따른 자궁 경부암 액상 세포 검사용 솔루션 조성물을 이용하는 경우, 세포 분석에 이용될 때까지 분석의 대상이 되는, 자궁에서 채취한 세포의 단백질 변성을 최소화하여 형태학적 구조를 유지하고, 기존의 액상 세포 검사용 보존액 등에 비해, 세포의 건조 및 부패를 방지하여 세포형태를 원래의 형태에 가깝게 장기간 보존이 가능하다.In the case of using the solution composition for cervical cancer liquid cytology according to an embodiment of the present invention, protein denaturation of cells collected from the uterus, which are subject to analysis, is minimized to maintain the morphological structure until used for cell analysis, Compared to the existing liquid-based preservative solution for cell examination, it is possible to preserve the cell form close to the original form for a long time by preventing drying and decay of the cell.
본 발명의 실시예들에 따른 효과는 이상에서 예시된 내용에 의해 제한되지 않으며, 더욱 다양한 효과들이 본 명세서 내에 포함되어 있다.Effects according to the embodiments of the present invention are not limited by the contents exemplified above, and more diverse effects are included in the present specification.
도 1a 내지 도 1c 는 본 발명의 일 실시예에 따른, 1,2-헥산디올, 토코페롤 및 나프리를 포함하는 액상 세포 검사용 솔루션 조성물에 검체를 각각 1개월, 3개월 및 6개월간 보관 후의 세포 모습을 순서대로 나타낸 도면이다.
도 2a 내지 도 2c 는 본 발명의 일 실시예에 따른, 1,2-헥산디올 및 토코페롤을 포함하는 액상 세포 검사용 솔루션 조성물에 검체를 1개월, 3개월 및 6개월간 보관 후의 세포 모습을 순서대로 나타낸 도면이다.
도 3 은 본 발명의 비교예로서, 1,2-헥산디올, 토코페롤, 및 나프리 모두를 포함하지 않는 솔루션 조성물에 검체를 6개월간 보관 후의 세포 모습을 나타낸 도면이다.
도 4 는 본 발명의 비교예로서, 5 부피% 의 완충 용액 및 1 부피% 의 토코페롤 함유액을 포함하는 솔루션 조성물에 검체를 6개월간 보관 후의 세포 모습을 나타낸 도면이다.
도 5 는 본 발명의 비교예로서, 아세트산을 포함하지 않는 솔루션 조성물에 검체를 6개월간 보관 후의 세포 모습을 나타낸 도면이다.1a to 1c are cells after storage of samples in a liquid cell test solution composition containing 1,2-hexanediol, tocopherol and napri for 1 month, 3 months and 6 months, respectively, according to an embodiment of the present invention. It is a drawing showing the appearance in order.
2a to 2c show the cell appearance after storage of a sample in a liquid cell test solution composition containing 1,2-hexanediol and tocopherol for 1 month, 3 months and 6 months according to an embodiment of the present invention, in order. is the drawing shown.
Figure 3 is a comparative example of the present invention, a view showing the state of cells after storage for 6 months in a solution composition containing neither 1,2-hexanediol, tocopherol, or Napri.
Figure 4 is a comparative example of the present invention, a diagram showing the appearance of cells after storage for 6 months in a solution composition containing a 5% by volume buffer solution and 1% by volume of tocopherol-containing solution.
5 is a comparative example of the present invention, a diagram showing the state of cells after storage of a specimen in a solution composition containing no acetic acid for 6 months.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다. 즉, 본 발명이 제시하는 실시예들에는 다양한 변경이 가해질 수 있다. 아래 설명하는 실시예들은 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 이들에 대한 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.Advantages and features of the present invention, and methods of achieving them, will become clear with reference to the detailed description of the following embodiments taken in conjunction with the accompanying drawings. However, the present invention is not limited to the embodiments disclosed below, but will be implemented in a variety of different forms, and only the embodiments make the disclosure of the present invention complete, and those skilled in the art in the art to which the present invention belongs It is provided to fully inform the person of the scope of the invention, and the invention is only defined by the scope of the claims. That is, various changes may be applied to the embodiments provided by the present invention. The embodiments described below are not intended to be limiting on the embodiments, and should be understood to include all modifications, equivalents or substitutes thereto.
다른 정의가 없다면, 본 명세서에서 사용되는 모든 용어(기술 및 과학적 용어를 포함)는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 공통적으로 이해될 수 있는 의미로 사용될 수 있을 것이다. 또 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 명백하게 특별히 정의되어 있지 않는 한 이상적으로 또는 과도하게 해석되지 않는다.Unless otherwise defined, all terms (including technical and scientific terms) used in this specification may be used in a meaning commonly understood by those of ordinary skill in the art to which the present invention belongs. In addition, terms defined in commonly used dictionaries are not interpreted ideally or excessively unless explicitly specifically defined.
본 명세서에서, '및/또는'은 언급된 아이템들의 각각 및 하나 이상의 모든 조합을 포함한다. 또, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 '포함한다(comprises)' 및/또는 '포함하는(comprising)'은 언급된 구성요소 외에 하나 이상의 다른 구성요소의 존재 또는 추가를 배제하지 않는다. '내지'를 사용하여 나타낸 수치 범위는 그 앞과 뒤에 기재된 값을 각각 하한과 상한으로서 포함하는 수치 범위를 나타낸다. '약' 또는 '대략'은 그 뒤에 기재된 값 또는 수치 범위의 20% 이내의 값 또는 수치 범위를 의미한다.In this specification, 'and/or' includes each and every combination of one or more of the recited items. In addition, singular forms also include plural forms unless otherwise specified in the text. As used herein, 'comprises' and/or 'comprising' does not exclude the presence or addition of one or more other elements other than the recited elements. A numerical range expressed using 'to' indicates a numerical range including the values listed before and after it as the lower limit and the upper limit, respectively. 'About' or 'approximately' means a value or range of values within 20% of the value or range of values subsequently recited.
이하 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 대하여 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.
자궁 경부암 액상 세포 검사용 솔루션 조성물Solution composition for cervical cancer liquid cytology
본 발명의 일 실시예에 따라 제공되는 자궁 경부암 액상 세포 검사용 솔루션 조성물은 25.0 내지 55.0 부피% 의 알코올, 10.0 내지 25.0 부피% 의 완충 용액, 2.0 내지 5.0 부피% 의 아세트산 및 3.0 내지 10.0 부피% 의 토코페롤(tocopherol) 함유액을 포함할 수 있다. 본 명세서에서, 부피%(volume %)는 솔루션 조성물의 전체 부피에 대한 부피비를 의미한다.A solution composition for cervical cancer liquid cytology provided according to an embodiment of the present invention includes 25.0 to 55.0% by volume of alcohol, 10.0 to 25.0% by volume of a buffer solution, 2.0 to 5.0% by volume of acetic acid, and 3.0 to 10.0% by volume of It may contain a solution containing tocopherol. In the present specification, volume % (volume %) means a volume ratio with respect to the total volume of the solution composition.
몇몇 실시예에서, 그 잔부는 유화제, 가교결합제, 세포코팅제, 점액용해제 및 증류수로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 포함할 수 있다.In some embodiments, the remainder may further include one or more selected from the group consisting of an emulsifying agent, a crosslinking agent, a cell coating agent, a mucolytic agent, and distilled water.
알코올은 1,2-헥산디올을 필수적으로 포함하고, 그 외 메탄올, 에탄올, 프로판올 등의 저급 알코올 등을 사용할 수 있다.The alcohol essentially includes 1,2-hexanediol, and other lower alcohols such as methanol, ethanol, and propanol may be used.
솔루션 조성물에 상기 1,2-헥산디올을 포함함으로써 방부 역할을 향상시킬 수 있어 세포의 보존성을 보다 향상시킬 수 있으며, 무색, 무취의 액체로서, 물, 알코올 등에도 잘 용해될 수 있으므로, 액상 세포 검사용 조성물에 포함되더라도 세포의 시인성을 확보할 수 있다는 장점이 있다. 따라서 본 발명에 있어서 상기 1,2-헥산디올을 필수적으로 포함하는 것이 바람직하다. By including the 1,2-hexanediol in the solution composition, the preservative role can be improved, which can further improve cell preservation, and as a colorless and odorless liquid, it can be well dissolved in water, alcohol, etc., so that the liquid cell Even if included in the composition for examination, there is an advantage in that the visibility of cells can be secured. Therefore, in the present invention, it is preferable to essentially include the 1,2-hexanediol.
한편, 1,2-헥산디올 외에 포함되는 알코올로서는 물과 임의의 비율로 혼화 가능한 것이면 특별히 한정되지는 않으나, 세포의 보존 및 탈수 작용, 단백질 응고 작용 등의 고정 작용의 효율성을 고려하였을 때, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올 등이 바람직하다. 본 실시 형태에 있어서 상기 1,2-헥산디올 외에 포함되는 알코올은 상기 나열된 알코올 1종만 이용해도 되고, 2종 이상을 병용하여 사용하는 것도 가능하다. 예를 들어, 에탄올과 이소프로판올을 임의의 비율대로 혼합한 알코올 혼합액도 1,2-헥산디올과 병용 가능하다.On the other hand, the alcohol contained other than 1,2-hexanediol is not particularly limited as long as it is miscible with water in an arbitrary ratio, but considering the efficiency of cell preservation and dehydration and protein coagulation, methanol , ethanol, isopropanol and the like are preferred. In the present embodiment, only one type of alcohol listed above may be used as the alcohol contained other than the 1,2-hexanediol, or two or more types may be used in combination. For example, an alcohol mixture obtained by mixing ethanol and isopropanol in an arbitrary ratio can also be used in combination with 1,2-hexanediol.
본 발명의 일 실시예에 따른 액상 세포 검사용 솔루션 조성물에 포함되는 알코올은 세포의 보존 기간이나 분석 방법 등에 따라 적절히 설정될 수 있으나, 예를 들어 약 25 내지 55 부피%, 또는 약 28 내지 52 부피%, 또는 약 30 내지 50 부피%, 또는 약 35 내지 45 부피%로 포함될 수 있다.Alcohol included in the liquid cell test solution composition according to an embodiment of the present invention may be appropriately set according to the storage period of the cells or the analysis method, but, for example, about 25 to 55% by volume, or about 28 to 52% by volume %, or about 30 to 50% by volume, or about 35 to 45% by volume.
만일 알코올의 함량이 25 부피% 보다 낮은 경우 세포의 수화(hydration) 및 탈수(dehydration) 작용이 어려워질 수 있으며, 55 부피% 보다 높은 경우에는 세포가 과도하게 고정될 우려가 있다. 따라서 본 발명의 액상 세포 검사용 솔루션 조성물에 사용되는 알코올은 1,2-헥산디올을 포함하여 25 부피% 이상 55 부피% 이하일 수 있으며, 바람직하게는 25 부피% 이상 50 부피% 이하, 또는 30 부피% 이상 50 부피% 이하일 수 있다. 상기와 같은 농도로 알코올을 포함함으로써, 세포의 보존 안정성을 높이는 것이 가능해진다.If the content of alcohol is lower than 25% by volume, hydration and dehydration of cells may be difficult, and if the content is higher than 55% by volume, cells may be excessively fixed. Therefore, the alcohol used in the liquid cell test solution composition of the present invention may be 25 vol% or more and 55 vol% or less, including 1,2-hexanediol, preferably 25 vol% or more and 50 vol% or less, or 30 vol%. % or more and 50 vol% or less. By containing alcohol at the concentration as described above, it becomes possible to enhance the storage stability of cells.
액상 세포 검사용 솔루션 조성물에 상기 알코올과 더불어 완충 용액 또한 포함될 수 있다. 상기 완충 용액으로서는 pH 3 내지 8 에서 완충 작용을 가지는 용액에 해당하면 특별히 한정되지는 않으나, 예를 들어, 인산염 완충 용액, 이미다졸 완충 용액, Good's buffers 등을 들 수 있고, 그 중 바람직하게는, pH 6.1 내지 7.5 를 갖는 1,4-피페라진다이에탄술폰산(PIPES)인 것일 수 있다. 상기 완충 용액의 효과로서, 더욱 pH 를 안정하게 유지할 수 있도록 하기 위해, 1,4-피페라진다이에탄술폰산(PIPES) 이외에, 항크스(Hanks)액이나 티로드(Tyrode)액 등과 같은 평형 염류 용액을 추가하여 사용하는 것도 가능하다.In addition to the alcohol, a buffer solution may also be included in the liquid cell test solution composition. The buffer solution is not particularly limited as long as it corresponds to a solution having a buffering action at pH 3 to 8, but examples include phosphate buffer solution, imidazole buffer solution, Good's buffers, etc., among which, preferably, It may be 1,4-piperazinediethanesulfonic acid (PIPES) having a pH of 6.1 to 7.5. As an effect of the buffer solution, in order to keep the pH more stable, in addition to 1,4-piperazinediethanesulfonic acid (PIPES), a balanced salt solution such as Hanks solution or Tyrode solution It is also possible to use by adding .
본 발명의 일 실시예에 따른 액상 세포 검사용 솔루션 조성물은 상기 완충 용액과 더불어, 2 내지 5 부피% 의 아세트산을 포함한다. 이는 본 발명의 솔루션 조성물이 자궁 경부암 액상 세포 검사용이라는 점에서, 약산성을 띠는 자궁 경부에서 채취한 세포의 보존 안정성을 위해 약산성의 아세트산을 포함하는 것이 바람직할 수 있다. A liquid cell test solution composition according to an embodiment of the present invention includes 2 to 5% by volume of acetic acid in addition to the buffer solution. Since the solution composition of the present invention is for cervical cancer liquid cytology, it may be preferable to include weakly acidic acetic acid for storage stability of cells taken from the weakly acidic cervix.
아울러, 본 발명의 솔루션 조성물이 상기와 같이 아세트산을 일정량 포함함으로써, 보다 넓은 범위의 pH 에서 완충 효과를 기대할 수 있으며, 삼투압 유지와 pH 유지에 보다 효과적이라는 장점이 있다.In addition, since the solution composition of the present invention includes a certain amount of acetic acid as described above, a buffering effect can be expected in a wider range of pH, and has the advantage of being more effective in maintaining osmotic pressure and pH.
본 발명의 일 실시예에 따라 제공되는 솔루션 조성물은, 3 내지 10 부피% 의 토코페롤 함유액을 포함할 수 있다. 토코페롤은 생물학적 항산화제로서 세포 내에서 산화되기 쉬운 물질, 특히 세포막을 구성하고 있는 불포화지방산의 산화를 억제함으로써 세포막의 손상과 나아가서 조직의 손상을 막아주는 효과가 있다. 사용되는 토코페롤로서 토코페롤-α, 토코페롤-β, 토코페롤-γ, 토코페롤-δ 중 어느 형태에 해당하더라도 사용 가능하며, 이들의 혼합된 형태 또한 가능하다.The solution composition provided according to one embodiment of the present invention may include 3 to 10% by volume of a tocopherol-containing solution. As a biological antioxidant, tocopherol inhibits the oxidation of substances easily oxidized in cells, especially unsaturated fatty acids constituting cell membranes, thereby preventing cell membrane damage and further tissue damage. As the tocopherol to be used, any form of tocopherol-α, tocopherol-β, tocopherol-γ, and tocopherol-δ can be used, and a mixed form thereof is also possible.
상기 토코페롤 함유액은 에탄올 및 아세톤을 포함하는 용매에 토코페롤을 일부 용해시켜 제조할 수 있으며, 특히 1 내지 10 부피%의 토코페롤을 첨가하여 제조할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따라 제공되는 솔루션 조성물에, 상기와 같이 별도의 용매를 통해 토코페롤을 첨가하는 것은 지용성인 토코페롤의 특성을 고려한 것이며, 솔루션 조성물이 3 부피% 미만의 토코페롤 함유액을 포함하는 경우, 세포막 유지 및 항산화 작용의 토코페롤의 효과를 기대하기 어렵고, 10 부피% 를 초과하는 경우, 과량의 토코페롤 함유에 따른 용매 등과의 혼화가 어려울 가능성이 있다.The tocopherol-containing liquid may be prepared by partially dissolving tocopherol in a solvent including ethanol and acetone, and in particular, may be prepared by adding 1 to 10% by volume of tocopherol. The addition of tocopherol to the solution composition provided according to an embodiment of the present invention through a separate solvent as described above takes into account the characteristics of tocopherol, which is fat-soluble, and the solution composition contains less than 3% by volume of tocopherol-containing liquid. In this case, it is difficult to expect the effect of tocopherol on cell membrane maintenance and antioxidant action, and when it exceeds 10% by volume, there is a possibility that miscibility with a solvent or the like due to the excessive content of tocopherol may be difficult.
이에, 본 발명에서는 상기 토코페롤 등의 혼화를 보다 용이하게 하기 위해, 잔부로서, 트리아세틴 등의 유화제를 더 포함할 수 있으며, 이 외에도, 혈액응고방지제, 건조방지제, 가교결합제, 세포코팅제, 점액용해제, 증류수 및 기타 첨가물 등이 포함될 수 있다. 상기 기타 첨가물로서는, 세포의 고정, 세포의 보존 및 세포의 분석을 저해하지 않는 한 그 종류는 특별히 한정되지는 않으며, 예를 들면 염화칼륨, 염화나트륨 등의 무기 염류, 글루코스 등의 당류, 단백질 안정화제 등이 이에 해당할 수 있다.Therefore, in the present invention, in order to facilitate the mixing of the tocopherol and the like, as the balance, an emulsifier such as triacetin may be further included, in addition, an anticoagulant, an antidrying agent, a crosslinking agent, a cell coating agent, and a mucolytic agent. , distilled water and other additives may be included. As the other additives, the types are not particularly limited as long as they do not inhibit cell fixation, cell preservation, and cell analysis, and examples include inorganic salts such as potassium chloride and sodium chloride, sugars such as glucose, and protein stabilizers. This may apply.
상기 혈액응고방지제의 예로는, 구연산나트륨, EDTA, 옥살산나트륨 등에 해당할 수 있고, 상기 건조방지제로서는 글리세린 등을 들 수 있고, 상기 가교결합제의 예로서는, 포름알데히드 등을 들 수 있다. 또한, 상기 세포코팅제의 예로는 폴리에틸렌글리콜 등을 들 수 있고, 상기 점액 용해제로서는 트리톤 X-100, 디티오트레이톨 등을 그 예로 들 수 있다.Examples of the anticoagulant may correspond to sodium citrate, EDTA, sodium oxalate, and the like, examples of the anti-drying agent include glycerin, and examples of the cross-linking agent include formaldehyde and the like. Further, examples of the cell coating agent include polyethylene glycol and the like, and examples of the mucolytic agent include Triton X-100 and dithiothreitol.
한편, 본 발명의 일 실시예에 따른 액상 세포 검사용 솔루션 조성물이 보다 향상된 방부 효과를 나타내기 위해, 추가적인 천연 방부제를 포함할 수 있으며, 바람직하게는, 산초, 백두홍, 이끼의 추출물로 제조한 나프리(napre)를 예로 들 수 있다. 이를 통해, 1,2-헥산디올 및 토코페롤의 효과와 동등 또는 그 이상으로 우수한 세포 보존성을 나타낼 수 있다.On the other hand, in order to exhibit a more improved antiseptic effect, the liquid cell test solution composition according to an embodiment of the present invention may include an additional natural preservative, preferably, prepared with extracts of Sancho, baekduhong, and moss. For example, napre. Through this, the effect of 1,2-hexanediol and tocopherol can be equivalent to or more excellent in cell preservation.
실시예Example
제조예: 솔루션 조성물의 제조Preparation Example: Preparation of solution composition
하기에 표시된 성분에 따라 솔루션 조성물을 제조하였다. 예컨대, 하기 표 1의 실시예 1에서 에탄올은 총 34 부피%로 포함되었다.A solution composition was prepared according to the components indicated below. For example, in Example 1 of Table 1 below, ethanol was included in a total of 34% by volume.
실험예: 보존성 평가Experimental Example: Preservation Evaluation
상기 표 1의 배합 비율에 따라 제조된 솔루션 조성물에, 피검자의 자궁 경부로부터 채취한 자궁 경부 세포를 침지하였으며, 상기 세포가 침지된 솔루션 조성물을 각각 1개월, 3개월 및 6개월동안 실온에서 보관하였다. 이후, 보관된 솔루션 조성물을 각각 2 ml 를 채취하여 슬라이드 글라스에 도포 후 염색하여 현미경으로 세포 보존성을 관찰하였다. Cervical cells collected from the cervix of the subject were immersed in the solution composition prepared according to the mixing ratio of Table 1, and the solution composition in which the cells were immersed was stored at room temperature for 1 month, 3 months and 6 months, respectively. . Thereafter, 2 ml of each of the stored solution compositions was collected, applied to a slide glass, stained, and cell preservation was observed under a microscope.
그 결과, 도 1a 내지 도 1c에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예 1의 조성을 가지는(1,2-헥산디올, 토코페롤 및 나프리를 모두 포함하는) 솔루션 조성물에 자궁 경부 세포를 침지하여 보관하였을 경우, 1개월, 3개월 및 6개월이 경과하더라도, 세포핵의 크기나 염색성, 염색질, 핵막 등이 잘 보존된 상태로 관찰되며, 세포질의 모양이나 내용물 보존 상태 등이 우수한 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in FIGS. 1A to 1C, when cervical cells were immersed in the solution composition having the composition of Example 1 (containing all of 1,2-hexanediol, tocopherol, and napri) and stored, Even after 1 month, 3 months, and 6 months, it was confirmed that the size of the cell nuclei, chromatin, nuclear membrane, etc. were well preserved, and the shape of the cytoplasm and the preservation of contents were excellent.
또한, 실시예 2의 조성을 가지는(1,2-헥산디올 및 토코페롤을 함유하는) 솔루션 조성물에 자궁 경부 세포를 침지하여 보관하였을 경우에도, 1개월, 3개월 및 6개월이 경과하더라도, 핵의 크기나 염색성, 염색질, 핵막 등이 잘 보존된 상태로 관찰되고, 세포질의 모양이나 염색성 내용물 보존 상태 또한 우수한 것을 확인할 수 있었다(도 2a 내지 도 2c).In addition, even when the cervical cells were immersed and stored in the solution composition having the composition of Example 2 (containing 1,2-hexanediol and tocopherol), even after 1 month, 3 months and 6 months, the size of the nucleus It was observed that the chromatin, chromatin, and nuclear membranes were well preserved, and the shape of the cytoplasm and the state of preservation of the chromatin contents were also excellent (FIGS. 2a to 2c).
다만, 비교예 1의 조성을 가지는(1,2-헥산디올, 토코페롤 및 나프리 모두를 포함하지 않는) 솔루션 조성물에 검체를 침지하여 보관하여 6개월 경과 후 세포의 모습을 관찰하였을 경우에는, 세포핵의 크기가 일정하지 않고, 핵막의 존재를 잘 찾아볼 수 없었으며, 세포질의 모양 등도 보존 상태가 불량한 것으로 관찰되었다. 이를 통해, 1,2-헥산디올, 토코페롤 및 나프리의 포함 여부에 따른 본 발명의 일 실시예에 따른 효과상의 차이를 확인할 수 있었다(도 3).However, when the specimen was immersed in and stored in a solution composition having the composition of Comparative Example 1 (not containing all of 1,2-hexanediol, tocopherol, and napri) and the appearance of cells was observed after 6 months, the cell nucleus It was observed that the size was not constant, the presence of a nuclear membrane was not well found, and the shape of the cytoplasm was also poorly preserved. Through this, it was confirmed that there was a difference in effect according to an embodiment of the present invention depending on whether 1,2-hexanediol, tocopherol, and napri were included (FIG. 3).
아울러, 비교예 2의 조성을 가지는(5 부피% 의 완충 용액 및 1 부피% 의 토코페롤 함유액을 함유하는) 솔루션 조성물에 검체를 침지한 후 6개월 보관하여 세포의 모습을 관찰하였을 경우, 완충 용액의 불충분으로 인해, 세포 세척이 불완전하여 세포핵에 대한 염색성이 불량하다는 것을 알 수 있으며, 세포막의 형태 또한 쉽게 구분이 되지 않는 것을 확인하였는 바, 이는 세포막을 보호 및 유지하는 토코페롤의 효과를 기대할 수 없을 만큼의 양을 함유함으로써 나타난 결과인 것으로 생각된다. 결과적으로 액상 세포 검사를 실시할만큼 세포의 보존 상태가 양호하지 않다는 것을 알 수 있었다(도 4).In addition, when the specimen was immersed in a solution composition having the composition of Comparative Example 2 (containing 5% by volume of a buffer solution and 1% by volume of a tocopherol-containing solution) and stored for 6 months to observe the appearance of cells, Due to insufficient cell washing, it can be seen that the staining of the cell nucleus is poor due to incomplete cell washing, and it is confirmed that the shape of the cell membrane is also not easily distinguished, which is so much that the effect of tocopherol to protect and maintain the cell membrane cannot be expected. It is thought to be the result of containing the amount of. As a result, it was found that the state of preservation of the cells was not good enough to perform liquid cytology (FIG. 4).
마지막으로, 비교예 3의 조성을 가지는(아세트산을 포함하지 않는) 솔루션 조성물에 검체를 침지한 후 6개월 보관하여 세포의 모습을 관찰하였을 경우에는, 도 5 에 나타낸 바와 같이, 세포핵의 염색이 제대로 이루어지지 않았음을 확인할 수 있는데, 이는 약산성을 나타내는 자궁 경부에서 채취한 세포의 보존을 위해서는 이와 유사한 약산성 상태에 고정화 될 수 있는 환경이 조성될 수 있어야 할 것으로 생각되나, 상기 비교예 3 의 솔루션 조성물 내에는 별도의 아세트산이 존재하지 않아 솔루션 조성물에서의 이온 불안정 등이 발생하여 헤마톡실린(hematoxylin)이 적절하게 제거되지 않은 것을 확인할 수 있었다.Finally, when the sample was immersed in the solution composition having the composition of Comparative Example 3 (not containing acetic acid) and stored for 6 months to observe the appearance of the cells, as shown in FIG. 5, the cell nuclei were stained properly. It can be confirmed that it did not lose, which means that in order to preserve the cells taken from the cervix showing weak acidity, an environment that can be immobilized in a similar weakly acidic state should be created, but in the solution composition of Comparative Example 3 It was confirmed that hematoxylin was not properly removed due to the occurrence of ionic instability in the solution composition due to the absence of separate acetic acid.
따라서, 상기와 같은 실험을 통해, 1,2-헥산디올, 토코페롤 및 나프리의 존재가 다른 조성의 솔루션 조성물에 비해 세포의 보존성이 보다 뛰어남을 확인할 수 있고, 완충 용액의 일정 함량 및 아세트산의 존재에 따라, 자궁 경부 세포의 보존 및 액상 세포 검사에 있어서, 보다 적합한 환경을 조성할 수 있다는 것을 알 수 있다.Therefore, through the experiment as described above, it can be confirmed that the presence of 1,2-hexanediol, tocopherol, and napri is superior to the solution composition of other compositions, and the preservation of the cells is superior, and the constant content of the buffer solution and the presence of acetic acid Accordingly, it can be seen that a more suitable environment can be created for preservation of cervical cells and liquid cytology.
이상에서 본 발명의 실시예를 중심으로 설명하였으나 이는 단지 예시일 뿐 본 발명을 한정하는 것이 아니며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 실시예의 본질적인 특성을 벗어나지 않는 범위에서 이상에 예시되지 않은 여러 가지의 변형과 응용이 가능함을 알 수 있을 것이다. Although the above has been described with reference to the embodiments of the present invention, this is only an example and does not limit the present invention, and those skilled in the art to which the present invention belongs will be able to It will be appreciated that various modifications and applications not exemplified above are possible.
따라서 본 발명의 범위는 이상에서 예시된 기술 사상의 변경물, 균등물 내지는 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 본 발명의 실시예에 구체적으로 나타난 각 구성요소는 변형하여 실시할 수 있다. 그리고 이러한 변형과 응용에 관계된 차이점들은 첨부된 청구 범위에서 규정하는 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.Therefore, it should be understood that the scope of the present invention includes modifications, equivalents, or substitutes of the technical ideas exemplified above. For example, each component specifically shown in the embodiment of the present invention can be modified and implemented. And differences related to these modifications and applications should be construed as being included in the scope of the present invention as defined in the appended claims.
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