KR101435786B1

KR101435786B1 - Cell-preserving solution

Info

Publication number: KR101435786B1
Application number: KR1020120127172A
Authority: KR
Inventors: 김현창
Original assignee: (주)패스텍
Priority date: 2012-11-12
Filing date: 2012-11-12
Publication date: 2014-08-29
Also published as: KR20140060640A

Abstract

본 발명은 수집된 세포의 세포학적 진단을 위한 보존 용액에 관한 것으로, 수집된 세포를 세포의 건조 및 부패를 방지하고, 수집된 세포의 고정 및 코팅을 통해 세포의 형태학적 구조를 장시간 유지하고 천연 방부 기능을 갖는 방부제를 이용하여 세포의 보존성을 향상시킬 수 있도록 한다.The present invention relates to a preservation solution for cytologic diagnosis of collected cells, which prevents the collected cells from drying and decaying of the cells, maintains the morphological structure of the cells for a long time by fixing and coating the collected cells, The preservability of the cells can be improved by using a preservative having an antiseptic function.

Description

{CELL-PRESERVING SOLUTION}

본 발명은 세포 보존액에 관한 것으로, 특히 세포 고정 및 세포의 건조 및 부패를 방지할 수 있으며 세포의 형태학적 구조를 장시간 유지시켜 세포 보존성을 향상시킬 수 있도록 개선된 세포 보존액에 관한 것이다.TECHNICAL FIELD The present invention relates to a cell preservation solution, and more particularly, to an improved cell preservation solution capable of preventing cell fixation, drying and corruption of cells, and maintaining cell morphological structure for a long time to improve cell preservability.

세포학적 진단을 위한 보조용액이란 인체에서 채취된 세포를 잘 보존하여 세포병리학적 진단을 하는 액상세포검사(Liquid Based Cytology)를 하기 위한 용액을 말하는 것이다. 액상세포검사는 부인과 검체인 자궁경부세포, 그리고 비부인과 검체인 객담, 체액, 소변, 세침흡인생검 등에 이용되는 것으로 수집된 세포를 현미경으로 검사하여 암세포의 유무를 확인하는 것을 주로 한다.Ancillary solution for cytological diagnosis is a solution for Liquid Based Cytology which preserve the cells collected from the human body and diagnose cytopathologically. Liquid cell cytology is used for cervical cells, gynecologic specimens, and non-gynecologic specimens such as sputum, body fluids, urine, and fine needle aspiration biopsy. The collected cells are examined with a microscope to check for the presence of cancer cells.

종래의 세포병리학적검사는 세포를 슬라이드 위에 도말하여 검사하는 재래식 세포진 검사(Conventional Pap Smear)를 주로 시행하고 있다.Conventional cytopathologic examination is performed by Conventional Pap smear, in which cells are stained on a slide.

그러나 이 경우 세포를 유리 슬라이드 위에 도말하게 되면 세포들이 건조되고, 점액이나 적혈구가 제거되지 않아 결과 판독의 어려움이 있다.However, in this case, when the cells are coated on the glass slide, the cells are dried, and the mucous and erythrocytes are not removed.

또한 자궁경부에서 브러시로 채취한 세포들 중 10%의 세포만이 슬라이드에 도말되고 나머지 세포들은 모두 버려지므로 진단에 중요한 세포들이 슬라이드위에 도말되지 못할 가능성이 있어서 검사의 신뢰성이 낮은 문제점이 있다.In addition, only 10% of the cells collected from the cervix through the brush are smeared on the slide, and all the remaining cells are discarded. Therefore, the cells that are important for diagnosis are not likely to be spread on the slide.

상기한 문제점을 해결하기 위하여 최근에는 액상세포검사(Liquid Based [0006] Cytology)법이 개발되었다.In order to solve the above-mentioned problems, a liquid-based cytology (Liquid-Based Cytology) method has been recently developed.

이는 수집된 조직세포를 세포학적 진단을 위한 보조용액에 보관하여 후속되는 병리학적 검사를 진행할 수 있도록 고안된 것으로서, 브러시로 세포를 채취한 후 채취된 세포들을 세포보관용 용액에 보관한 후 필요시 상기 세포보관 용액 내에 보관되던 세포를 검사하여 세포의 이상 유무를 진단하는 방법이다.This is designed to allow the collected tissue cells to be stored in an auxiliary solution for cytological diagnosis and to carry out a subsequent pathological examination. The collected cells are collected with a brush, stored in a solution for storing cells, It is a method to diagnose the abnormality of cells by examining the cells stored in the cell storage solution.

세포진 검사법에 따르면 검사체가 슬라이드에서 불균등하게 분포하므로 어느 부분을 관찰하느냐에 따라 진단이 달라질 위험이 있으나, 액상세포검사법에 따를 경우에는 검사체가 슬라이드에 균일하게 분포하므로 진단의 정확도가 높아진다.According to the cytology, the test specimen is unevenly distributed on the slide, so there is a risk that the diagnosis will be different depending on which part is observed. However, according to the liquid cell test method, the accuracy of the diagnosis is improved because the test specimen is uniformly distributed on the slide.

이러한 액상세포 검사법을 시행하기 위해서는 수집된 세포를 보관해 둘 수 있는 용액이 필요한데, 종래의 액상세포 검사법에 사용되었던 용액은 95%에탄올이었다.In order to carry out this liquid cytology, a solution that can store the collected cells is required. The solution used in conventional liquid cytology was 95% ethanol.

그러나 이 경우에는 세포를 장기간 보존할 수 없는 단점(약 일주일정도 보관가능)이 있으며, 적혈구가 제거되지 않아 적혈구를 제거하기 위한 별도의 공정이 필요한 단점이 있었다. 그리고 세포핵의 변형으로 DNA추출을 할 수 없는 단점이 있었다.However, in this case, there is a disadvantage that the cells can not be stored for a long period of time (it can be stored for about one week), and the red blood cells are not removed, thus requiring a separate process for removing red blood cells. And there was a disadvantage that DNA extraction could not be done due to modification of nucleus.

본 발명은 상기한 제반 문제점을 감안하여 이를 해결하고자 창안된 것으로서, 그 목적은 수집된 세포의 형태학적 구조를 유지하면서 장시간 보관이 가능하도록 보존성을 향상시킴과 아울러, 세포가 건조해지는 것을 방지하여 세포학적 진단을 위한 세포 보존액을 제공하는 데 있다.Disclosure of the Invention The present invention was conceived to solve the problems described above, and its object is to improve the preservability of cells so that they can be stored for a long time while maintaining the morphological structure of collected cells, And to provide a cell-preserving solution for diagnostic purposes.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명 세포 보존액은 중량 %로, 증류수 100중량%에 대하여 케톤 2.2~3.3중량%, 세포 코팅제 1.9~2.7중량%, 폴리올 1.1~1.8중량%, 완충용액 0.75~2.32중량%, 점액용해제 0.3~0.75중량%, 방부제 0.2~0.7중량%, 에탄올 40~50중량%로 이루어지되,
상기 방부제는 소듐 아자이드, 구연산, 소르브산, 벤조산나트륨, 포르말린 중 적어도 하나와, 라벤더액을 혼합한 것을 채택하되, 상기 라벤더액은 증류수 100중량%에 대해 라벤더 분말 0.5~4.0%중량%를 첨가하여 용해되고,
상기 완충용액은 트리스(Tris)인 것을 특징으로 한다.In order to attain the above object, the cell preserving solution of the present invention comprises, by weight, 2.2 to 3.3 wt% of ketone, 1.9 to 2.7 wt% of a ketone, 1.1 to 1.8 wt% of a polyol, 0.75 to 2.32 wt% of a buffer solution, 0.3 to 0.75% by weight of a mucolytic agent, 0.2 to 0.7% by weight of an antiseptic agent and 40 to 50% by weight of ethanol,
Wherein the preservative is a mixture of at least one of sodium azide, citric acid, sorbic acid, sodium benzoate, and formalin and a lavender solution, wherein the lavender solution comprises 0.5 to 4.0% by weight of lavender powder added to 100% &Lt; / RTI >
The buffer solution is characterized by being Tris.

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본 발명의 세포 보존액은 단순 구성의 배합비율로 ph유지가 용이하며 세포 코팅제 및 천연 기능의 방부제가 구성되어 세포 고정 및 세포의 건조 및 부패를 방지할 수 있으므로, 세포의 형태학적 구조를 장시간 유지시켜 검체 세포의 보존성을 향상시킬 수 있는 유용한 효과를 갖는다.The cell preserving solution of the present invention is easy to maintain the pH at a mixing ratio of a simple constitution, and can form a cell coating agent and a preservative of a natural function to prevent cell fixation and cell drying and corruption, And has a useful effect of improving the preservability of a specimen cell.

본 발명은 수집된 세포의 세포학적 진단을 위한 보존 용액에 관한 것으로, 수집된 세포를 세포의 건조 및 부패를 방지하고, 수집된 세포의 고정 및 코팅을 통해 장시간 형태를 유지한 상태로 보존할 수 있도록 한다.The present invention relates to a preservation solution for cytologic diagnosis of collected cells, which can prevent the cells from drying and corruption, and can be preserved for a long period of time by fixing and coating the collected cells .

본 발명에 따른 세포 보존액은, 중량 %로, 증류수 100중량부에 대하여 케톤 2.2~3.3%, 세포 코팅제 1.9~2.7%, 폴리올 1.1~1.8%, 완충용액 0.75~2.32%, 점액용해제 0.3~0.75%, 방부제 0.2~0.7%, 에탄올 40~50%로 이루어진 것이다.The cell preserving solution according to the present invention is characterized by containing 2.2 to 3.3% by weight of ketone, 1.9 to 2.7% of a cell coating, 1.1 to 1.8% of a polyol, 0.75 to 2.32% of a buffer solution, 0.3 to 0.75% 0.2 ~ 0.7% of preservative, and 40 ~ 50% of ethanol.

더 상세히 설명하면, 케톤(ketone)은 검체로부터 수집된 세포의 고정제 및 세포 침투의 기능을 수행하기 위한 것으로, 탄소가 3개인 아세톤을 채용할 수 있다.More specifically, a ketone is used to perform a cell immobilization function and a cell infiltration function of cells collected from a sample, and acetone having three carbon atoms can be employed.

케톤은 2.2% 미만일 경우, 세포 고정 및 침투의 기능을 수행하기 어렵고, 3.3%를 초과할 경우에는 과도한 산성으로 인해 ph유지가 어렵기 때문에 2.2~3.3%를 유지하는 것이 바람직하다.When the ketone content is less than 2.2%, it is difficult to perform the function of cell immobilization and penetration. When the content of the ketone is more than 3.3%, it is preferable to maintain 2.2 to 3.3% because the pH is difficult to maintain due to excessive acidity.

세포 코팅제는 세포 코팅, 수축 방지 및 핵 세부 유지 기능을 가지며, 폴리에틸렌글리콜(PEG)을 채택할 수 있다.Cellular coatings have cell coating, anti-shrinkage and nuclear detail retention and can adopt polyethylene glycol (PEG).

또한, 세포 코팅제는 1.9%미만시 제 기능을 유지하기 어렵고, 2.7% 초과시 더이상의 효과를 기대하기 어렵고 원가 상승의 요인이 된다.In addition, it is difficult to maintain the function of the cell coating agent at less than 1.9%, and it is difficult to expect a further effect when the content exceeds 2.7%, which causes a rise in cost.

에탄올은 세포 침투성, 탈수, 세균 억제 기능을 가지며, 이를 위해 에탄올 알코올을 채용할 수 있다.Ethanol has cell permeability, dehydration and bacterial inhibition, and ethanol alcohol can be used for this purpose.

폴리올(polyol)은 수집된 세포의 건조를 방지하기 위한 기능을 수행하며, 일 예로 수산기(-OH)가 3개인 글리세롤(glycerol)을 채용할 수 있다.The polyol serves to prevent drying of the collected cells, and glycerol having three hydroxyl groups (-OH) can be employed as an example.

또한, 폴리올은 1.1% 미만일 경우, 세포가 건조해질 우려가 있으며, 1.8%를 초과할 경우 과도한 흡습성으로 인해 검체 세포의 수분 조절이 어려운 단점이 있다.If the polyol content is less than 1.1%, the cells may dry out. If the polyol content exceeds 1.8%, the moisture content of the sample cells is difficult to control due to excessive hygroscopicity.

완충용액(buffer solution)은 핵탄맥질 고정 및 삼투압을 유지하기 위한 것으로, 트리스(Tris)를 채용할 수 있으며, 0.75% 미만시 핵탄물질 고정 및 삼투압을 유지하기 어렵고, 2.32% 초과시에는 수소 이온농도를 일정하게 유지하기 어려운 단점이 있다.The buffer solution is used to maintain the nucleus filling and osmotic pressure. Tris can be used. It is difficult to maintain the fixation and osmotic pressure of the nuclear material when it is less than 0.75%, and the hydrogen ion concentration It is difficult to keep it constant.

점액 용해제는 점액의 분산을 위한 것으로, 디티오트레이톨(dithiothreitol)을 채용할 수 있다.The mucolytic agent is for the dispersion of mucus, and dithiothreitol may be employed.

또한 점액 용해제는 0.3% 미만시에는 점액의 뭉쳐짐 현상으로 인해 검체 세포의 추후 진단이 어렵고, 0.75% 초과시에는 ph 농도 유지가 어려운 단점이 있다.Further, when the concentration of the mucolytic agent is less than 0.3%, it is difficult to diagnose the specimen cells due to the accumulation of mucus, and it is difficult to maintain the pH concentration when it exceeds 0.75%.

방부제는 소듐 아자이드, 구연산, 소르브산, 벤조산나트륨, 포르말린 중 적어도 하나가 라벤더액을 혼합한 것을 채택하되, 방부제는 증류수 100중량 %에 대하여 0.2~0.7중량%를 갖는 것이 바람직하다. The preservative is preferably a mixture of at least one of sodium azide, citric acid, sorbic acid, sodium benzoate and formalin, and the preservative is preferably 0.2 to 0.7 wt% based on 100 wt% of distilled water.

방부제의 중량%는 0.2%미만일 경우 방부제의 기능을 수행하기 어렵고, 0.7중량%를 초과할 경우에는 더이상의 효과를 기대하기 어렵고 원가 상승의 요인이 된다.When the weight% of the preservative is less than 0.2%, it is difficult to perform the function of the preservative, and when it exceeds 0.7% by weight, it is difficult to expect the effect and the cost increases.

상기 라벤더액은 천연 방부제의 기능을 가지며, 증류수 100중량부에 대해 라벤더 분말 0.5~4.0%중량부를 첨가하여 용해한 것이다.The lavender solution has the function of a natural preservative and is obtained by adding 0.5 to 4.0% by weight of lavender powder to 100 parts by weight of distilled water.

이는, 라벤더 분말이 0.5중량부 미만일 경우 그 효과를 기대하기 어렵고, 4.0중량부를 초과할 경우에는 점도가 높아질 우려가 있기 때문이다.This is because the effect is not expected when the amount of the lavender powder is less than 0.5 part by weight, and when the amount is more than 4.0 parts by weight, the viscosity may increase.

상기한 본 발명의 세포 보존액은 약산성을 유지하는 것이 바람직하며, 이를 위해 별도로 기존의 ph유지제를 첨가할 수도 있다.The cell preserving solution of the present invention preferably maintains a weak acidity. To this end, a conventional pH maintenance agent may be added.

이러한 구성으로 된 세포 보존액은 수집된 세포의 검체 전 보전 처리에 사용된다.A cell-preserving solution having such a constitution is used for pre-sample preservation treatment of the collected cells.

상기한 세포 보존액을 구성하는 구성요소들 중 용매, 케톤, 세포코팅제, 폴리올을 먼저 선배합한다.Solvents, ketones, cell coatings, and polyols are preliminarily synthesized among the components constituting the above-mentioned cell preservation solution.

이후에, 증류수, 완충 용액, 점액용해제, 방부제를 배합한 후에 선 배합된 용액과 혼합한다.Thereafter, distilled water, a buffer solution, a mucolytic agent and an antiseptic are mixed and then mixed with the pre-blended solution.

이때, 선 배합된 용액과 후 배합된 용액의 배합 순서는 상관없이 진행할 수 있으며 배합된 두 용액을 혼합하여 사용한다.At this time, the mixing procedure of the pre-blended solution and the post-blended solution can be carried out independently of each other, and the two blended solutions are used.

혼합된 세포 보존액은 실온(15~30℃)에서 유지하는 것이 바람직하다.The mixed cell stock solution is preferably maintained at room temperature (15 to 30 ° C).

한편, 검체 작업의 실시 예로는 검체를 원심분리기에 넣어서 회전 동작으로 원심 분리한 후에, 원심 분리된 검체의 상층액을 제거한 후에 MonoLex를 첨가한 다음에, 믹싱 작업을 한 후에 검체를 원심 분리한다.On the other hand, as an example of the specimen work, a specimen is put into a centrifuge, centrifuged by a rotary motion, the supernatant of the centrifuged specimen is removed, MonoLex is added, and the specimen is centrifuged after mixing.

이어서, 원심 분리된 검체의 상층액을 제거한 후에 분리된 검체를 검체병에 넣어서 장비를 이용하여 슬라이드를 제작하는 과정을 갖는다.Then, after removing the supernatant of the centrifuged specimen, the separated specimen is put into a specimen bottle and the slides are manufactured by using the equipment.

이러한 검체 처리방식은 혈성이나 점액도에 따라 다소 차이를 보일 수 있다.Such a sample treatment method may show a slight difference depending on the blood or mucus.

본 발명은 브러시로 세포를 채취한 후 채취된 세포들을 세포 보존액에 보관한 후에 필요시 세포 보존액 내에 보관되던 세포를 검사하여 세포의 이상 유무를 진단할 수 있다.In the present invention, after collecting cells with a brush, the collected cells are stored in a cell preservation solution, and if necessary, cells stored in the cell preservation solution can be examined to diagnose the presence or absence of a cell.

본 발명의 세포 보존액은 단순 구성의 배합비율로 ph유지가 용이하며 세포 코팅제 및 천연 기능의 방부제가 구성되어 세포 고정 및 세포의 건조 및 부패를 방지할 수 있으며 세포의 형태학적 구조를 장시간 유지시켜 보존성을 향상시킬 수 있는 이점을 갖는다.The cell preserving solution of the present invention is easy to maintain the pH at a compounding ratio of a simple constitution, and can constitute a cell coating agent and a preservative of a natural function to prevent cell fixation and drying and corruption of cells and maintain the morphological structure of cells for a long time Can be improved.

본 발명에 따른 세포 보존액에 담겨진 검체 세포는 중합효소 연쇄반응(PCR : Polymerase Chain Reaction)을 수회 반복하여 유전자 검사를 할 수 있으며, 특히 실온에서 보관중인 세포를 이용하더라도 유전자 검사가 가능하므로, 세포학적 진단을 위한 세포의 보관 비용을 대폭 절감할 수 있다.The sample cells contained in the cell preservation solution according to the present invention can be subjected to gene testing by repeating PCR (Polymerase Chain Reaction) several times. Particularly, even if cells stored at room temperature are used, The cost of storing cells for diagnosis can be greatly reduced.

Claims

Wherein the coating composition comprises from 2.2 to 3.3 wt% of ketone, from 1.9 to 2.7 wt% of a cell coating agent, from 1.1 to 1.8 wt% of a polyol, from 0.75 to 2.32 wt% of a buffer solution, from 0.3 to 0.75 wt% of a mucolytic agent, To 0.7% by weight, and ethanol 40 to 50% by weight,
Wherein the preservative is a mixture of at least one of sodium azide, citric acid, sorbic acid, sodium benzoate, and formalin and a lavender solution, wherein the lavender solution comprises 0.5 to 4.0% by weight of lavender powder added to 100% &Lt; / RTI >
Wherein the buffer solution is Tris.

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