RU2499242C2 - Method for preparing biological tissue samples for histopathological examinations - Google Patents
Method for preparing biological tissue samples for histopathological examinations Download PDFInfo
- Publication number
- RU2499242C2 RU2499242C2 RU2011136016/28A RU2011136016A RU2499242C2 RU 2499242 C2 RU2499242 C2 RU 2499242C2 RU 2011136016/28 A RU2011136016/28 A RU 2011136016/28A RU 2011136016 A RU2011136016 A RU 2011136016A RU 2499242 C2 RU2499242 C2 RU 2499242C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- samples
- isopropanol
- mineral oil
- biological tissue
- tissue samples
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к получению и подготовке образцов для исследования в медицине и может быть использовано при гистологических исследованиях биологических образцов тканей, взятых у человека или животных при хирургических вмешательствах или при аутопсии.The present invention relates to the preparation and preparation of samples for research in medicine and can be used in histological studies of biological tissue samples taken from humans or animals during surgical interventions or at autopsy.
Подготовка тканей к гистологическим исследованиям, как правило, включает пропитывание образца парафином, необходимое для получения срезов, с толщиной, пригодной для исследования в световом микроскопе при проходящем свете. Парафиновый срез размещают на предметном стекле, окрашивают и исследуют под микроскопом. Пропитывание биологических тканей парафином требует предварительного обезвоживания, так как содержащие воду ткани не пропитываются парафином. Поэтому перед пропитыванием парафином образцы необходимо:The preparation of tissues for histological examinations, as a rule, involves impregnation of the sample with paraffin, which is necessary to obtain sections, with a thickness suitable for examination in a light microscope with transmitted light. A paraffin slice is placed on a glass slide, stained and examined under a microscope. Impregnation of biological tissues with paraffin requires preliminary dehydration, since water-containing tissues are not saturated with paraffin. Therefore, before impregnation with paraffin, the samples must:
1) сохранить в состоянии максимально приближенном к жизни и для этого остановить процессы аутолиза - зафиксировать;1) to keep in a state as close to life as possible and to do this, stop the processes of autolysis - fix;
2) удалить несвязанную воду из тканей - обезводить;2) remove unbound water from tissues - dehydrate;
3) подготовить ткань к пропитыванию парафином - просветлить.3) prepare the fabric for paraffin impregnation - enlighten.
За аналог заявляемого изобретения приняты технические решения того же назначения, что и заявляемый способ. Известен способ обработки гистологических и биологических образцов путем последовательных погружений образцов в водный раствор фиксирующего вещества, обезвоживания в 6 сменах обезвоживающей жидкости, последние три из которых практически не содержат воды (Р. Лилли. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. - М.: Мир, 1969, с.69). В качестве фиксирующего вещества в известном способе используют 4%-ный водный раствор формальдегида, а в качестве обезвоживающих жидкостей этиловый или изопропиловый спирты, или их смеси. Образцы последовательно выдерживают в трех порциях обезвоживающей жидкости, содержащей воду: 70% этилового спирта в течение 16 часов, 85% этилового спирта в течение 8 часов, 95% этилового спирта в течение 16 часов, а затем в-безводных жидкостей: 100% этилового спирта в течение 2 часов. Смесь 100% этилового спирта и растворителя парафина (бензола) в соотношении 1:1 в течение 1 часа является промежуточной смесью, в которой одновременно завершается обезвоживание и начинается просветление. Далее обработка проводится в двух порциях бензола по 30 минут. А затем осуществляют (пропитывание парафином в нескольких сменах парафина). В качестве растворителя парафина кроме бензола можно использовать толуол, ксилол, петролейный эфир, сероуглерод, хлороформ и четыреххлористый углерод. Кроме очень большой длительности обезвоживания недостатком этого способа является то, что все используемые в нем растворители парафина - вредные вещества, и их вредность имеет кумулятивный характер.For an analogue of the claimed invention adopted technical solutions of the same purpose as the claimed method. A known method of processing histological and biological samples by successive immersion of samples in an aqueous solution of a fixing substance, dehydration in 6 shifts of dehydrating fluid, the last three of which practically do not contain water (R. Lilly. Pathological technology and practical histochemistry. - M .: Mir, 1969 , p. 69). As a fixing substance in the known method using a 4% aqueous solution of formaldehyde, and as dehydrating liquids ethyl or isopropyl alcohols, or mixtures thereof. Samples are sequentially incubated in three portions of a dehydrating liquid containing water: 70% ethyl alcohol for 16 hours, 85% ethyl alcohol for 8 hours, 95% ethyl alcohol for 16 hours, and then non-anhydrous liquids: 100% ethyl alcohol within 2 hours. A mixture of 100% ethyl alcohol and a solvent of paraffin (benzene) in a 1: 1 ratio for 1 hour is an intermediate mixture in which dehydration is completed and enlightenment starts. Further processing is carried out in two portions of benzene for 30 minutes. And then carry out (paraffin impregnation in several changes of paraffin). Apart from benzene, toluene, xylene, petroleum ether, carbon disulfide, chloroform and carbon tetrachloride can be used as a paraffin solvent. In addition to the very long duration of dehydration, the disadvantage of this method is that all the paraffin solvents used in it are harmful substances, and their harmfulness is cumulative.
Известен способ обработки операционно-биопсийного и секционного материала для микроскопического исследования по патенту РФ на изобретение №2264608 (МПК G01N 1/28, G01N 1/30, заявлено 26.01.2004 г., опубликовано 20.11.2005 г.), в соответствии с которым проводку по растворам тканей производят на аппарате АТ-4 (автомат универсальный для гистологической обработки и окраски тканей). Фиксацию проводят 20% формалином при температуре 36°С в течение 2 часов, промывают проточной водой 4 часа, затем обезвоживают в пяти емкостях со спиртом концентрации 96% (в первой емкости 5 часов, во второй, третьей и четвертой емкостях по 3 часа, в пятой - 5 часов). Дубят в промежуточной смеси - спиртово-ксилоловом растворе 1 час и в ксилоле 1 час, затем заливают парафином при температуре 36°С на 1 час и при температуре 56°С также на 1 час. Недостатком этого способа также является неадекватная фиксация формалином: в подобной концентрации наступает избыточное образование перекрестных связей между молекулами белков тканей в поверхностной зоне образца, что препятствует равномерной фиксации образца, большая длительность обезвоживания, а также высокая токсичность ксилола, создающая экологическую опасность окружающей среды. Ксилол является нейро- и гепатоксичным ядом, вызывает патологию сердца и почек, лейкемию, оказывает токсическое воздействие на костный мозг и другие вредные воздействия на жизнедеятельность человека [Buesa RJ, Peshkov MV. Histology without xylene. Annals of diagnostic pathology, 2009. Vol.12(4), p.246-256].A known method of processing surgical biopsy and sectional material for microscopic examination according to the patent of the Russian Federation for invention No. 2264608 (IPC G01N 1/28, G01N 1/30, claimed January 26, 2004, published November 20, 2005), according to which Posting to tissue solutions is performed using the AT-4 apparatus (a universal machine for histological processing and tissue staining). Fixation is carried out with 20% formalin at a temperature of 36 ° C for 2 hours, washed with running water for 4 hours, then dehydrated in five containers with an alcohol concentration of 96% (in the first container for 5 hours, in the second, third and fourth containers for 3 hours, in fifth - 5 hours). The tanning is carried out in an intermediate mixture - an alcohol-xylene solution for 1 hour and in xylene for 1 hour, then it is poured with paraffin at a temperature of 36 ° C for 1 hour and at a temperature of 56 ° C for 1 hour. The disadvantage of this method is also the inadequate fixation with formalin: at such a concentration, excessive cross-linking occurs between the tissue protein molecules in the surface zone of the sample, which prevents uniform fixation of the sample, a long duration of dehydration, and high xylene toxicity, which creates an environmental hazard to the environment. Xylene is a neuro- and hepatoxic poison, causes pathology of the heart and kidneys, leukemia, has a toxic effect on bone marrow and other harmful effects on human life [Buesa RJ, Peshkov MV. Histology without xylene. Annals of diagnostic pathology, 2009. Vol. 12 (4), p. 246-256].
Известен способ подготовки биологических образцов к гистологическим исследованиям, включающий обезвоживание образца в изопропиловом спирте и последующее парафинирование (заявка на изобретение РФ №94036621, заявлено 26.09.1994 г., опубликовано 10.07.1996 г.). Образцы тканей фиксируют в 4% растворе формальдегида в фосфатном буфере в течение 24 часов, отмывают проточной водой в течение 30 минут. Для обезвоживания образцы тканей последовательно выдерживают в 4-х сменах 99% изопропилового спирта по 3 часа в каждой смене. Для сохранения тканевых и клеточных структур образцов в изопропиловый спирт вводят поверхностно-активное вещество (ПАВ) в количестве 0,01-0,5 массовых частей. Обезвоженные образцы пропитывают парафином выдержкой в двух сменах расплавленного парафина по 2 часа. Недостатком этого способа является трудное удаление из тканей изопропанола при пропитывании горячим парафином. Высокий градиент параметров растворимости (9 МПа) подтверждает это. Но дегидратанты должны быть полностью удалены из парафина, что достигается увеличением температуры при низком давлении перед пропитыванием парафиномA known method of preparing biological samples for histological studies, including dehydration of the sample in isopropyl alcohol and subsequent waxing (application for invention of the Russian Federation No. 94036621, claimed September 26, 1994, published July 10, 1996). Tissue samples are fixed in a 4% solution of formaldehyde in phosphate buffer for 24 hours, washed with running water for 30 minutes. For dehydration, tissue samples are sequentially kept in 4 shifts of 99% isopropyl alcohol for 3 hours in each shift. To preserve the tissue and cellular structures of the samples, a surfactant in the amount of 0.01-0.5 mass parts is introduced into isopropyl alcohol. Dehydrated samples are impregnated with paraffin exposure in two shifts of molten paraffin for 2 hours. The disadvantage of this method is the difficult removal of isopropanol from the tissues when saturated with hot paraffin. A high gradient of solubility parameters (9 MPa) confirms this. But dehydratants must be completely removed from paraffin, which is achieved by increasing the temperature at low pressure before soaking with paraffin
Наиболее близким аналогом того же назначения, что и заявляемое изобретение, является техническое решение - способ подготовки образцов биологических тканей к гистологическим исследованиям, включающий последовательную обработку образцов биологической ткани раствором фиксатора, промывку в воде, дегидратацию в нескольких порциях изопропанола, просветление в двух порциях промежуточных смесей, содержащих изопропанол и минеральное масло, просветление в минеральном масле, пропитывание и заливку образцов парафином [Buesa RJ, Peshkov MV. Histology without xylene. Annals of diagnostic pathology, 2009. Vol.12(4), p.246-256]. В известном способе дегидратацию осуществляют путем последовательного погружения образцов в четыре емкости с изопропанолом (на 1 час в каждую), и в две емкости с подогретыми до 50°С промежуточными смесями, содержащими изопропанол и минеральное масло (на 1,5 часа в каждую), причем промежуточная смесь в первой емкости имеет соотношение ингредиентов 5:1, а во второй - 2:1. Затем образцы выдерживают в просветлителе - минеральном масле в течение не менее 2 часов, после чего осуществляют пропитывание парафином при температуре 60°С в четырех емкостях по 1 часу в каждой.The closest analogue to the same purpose as the claimed invention is a technical solution - a method of preparing biological tissue samples for histological studies, including sequential processing of biological tissue samples with a fixative solution, washing in water, dehydration in several portions of isopropanol, enlightenment in two portions of intermediate mixtures containing isopropanol and mineral oil, bleaching in mineral oil, impregnating and pouring samples with paraffin [Buesa RJ, Peshkov MV. Histology without xylene. Annals of diagnostic pathology, 2009. Vol. 12 (4), p. 246-256]. In the known method, dehydration is carried out by successively immersing the samples in four containers with isopropanol (for 1 hour each), and in two containers with intermediate mixtures heated to 50 ° C containing isopropanol and mineral oil (for 1.5 hours each), moreover, the intermediate mixture in the first container has a ratio of ingredients of 5: 1, and in the second - 2: 1. Then the samples are kept in a clarifier - mineral oil for at least 2 hours, after which they are impregnated with paraffin at a temperature of 60 ° C in four containers of 1 hour each.
К недостаткам известных технических решений, как аналога, так и прототипа, относится то, что при их реализации не исключены повторные окрашивания образцов биологических тканей, что увеличивает трудозатраты и время получения качественных срезов для гистологических исследований, и/или все они используют экологически вредные ксилол или спиртово-ксилоловые растворы.The disadvantages of the known technical solutions, both analogue and prototype, are that when they are implemented, repeated staining of samples of biological tissues is not excluded, which increases the labor costs and time to obtain high-quality sections for histological studies, and / or they all use environmentally harmful xylene or alcohol-xylene solutions.
Задачей, на решение которой направлено изобретение, является экономия трудозатрат и времени получения качественных срезов для гистологических исследований при любом уровне оснащения лабораторий: при ручной проводке, автоматической, в гистопроцессорах любого типа. Кроме того, задачей изобретения является улучшение экологических условий в гистологических лабораториях и во внешней среде.The task to which the invention is directed is to save labor and time for obtaining high-quality sections for histological studies at any level of laboratory equipment: with manual wiring, automatic, in any type of histoprocessors. In addition, the objective of the invention is to improve the environmental conditions in histological laboratories and in the external environment.
Технический результат, который может быть получен при осуществлении изобретения, заключается в исключении последующей повторной окраске препаратов клеток и использовании безопасных для персонала и окружающей среды реактивов, исключая пагубное действие ксилола и других вредных веществ при последовательной проводке образцов биологических тканей.The technical result that can be obtained by carrying out the invention is to exclude the subsequent re-staining of cell preparations and the use of reagents that are safe for personnel and the environment, eliminating the detrimental effect of xylene and other harmful substances during sequential wiring of samples of biological tissues.
Сущность способа подготовки образцов биологических тканей к гистологическим исследованиям, включающего последовательную обработку образцов биологической ткани раствором фиксатора, промывку в воде, дегидратацию в нескольких порциях изопропанола, просветление в двух порциях промежуточных смесей, содержащих изопропанол и минеральное масло, просветление в минеральном масле, пропитывание и заливку образцов парафином, состоит в том, что в качестве фиксатора используют 10% раствор формалина, забуференного фосфатами натрия, обработку в промежуточных смесях ведут при комнатной температуре при этом первая порция промежуточной смеси содержит пять частей изопропанола и одну часть минерального масла, а вторая порция содержит две части изопропанола и одну часть минерального масла, образцы биологических тканей пропитывают расплавленным парафином, в который добавляют 5% пчелиного воска, 0.8% диметилсульфоксида и 0,5% бутилкаучука.The essence of the method of preparing biological tissue samples for histological studies, including sequential processing of biological tissue samples with a fixative solution, washing in water, dehydration in several portions of isopropanol, enlightenment in two portions of intermediate mixtures containing isopropanol and mineral oil, enlightenment in mineral oil, impregnation and filling samples with paraffin, consists in the fact that a 10% solution of formalin buffered with sodium phosphates is used as a fixative; daily mixtures are conducted at room temperature with the first portion of the intermediate mixture containing five parts of isopropanol and one part of mineral oil, and the second portion containing two parts of isopropanol and one part of mineral oil, the biological tissue samples are impregnated with molten paraffin, to which 5% beeswax is added, 0.8% dimethyl sulfoxide and 0.5% butyl rubber.
Решению поставленной задачи способствует признаки, характеризующие изобретение в частных случаях ее выполнения или использования.The solution to the problem contributes to the signs characterizing the invention in particular cases of its implementation or use.
В фиксатор для эндоскопических образцов добавляют парфюмерную метку и цветовую метку, в качестве которой использован эозин.In the fixative for endoscopic samples add a perfume label and a color label, which is used as eosin.
В фиксатор для хирургических образцов добавляют парфюмерную метку и цветовую метку, в качестве которой использован метиленовый синий.A perfume mark and a color mark, which is used methylene blue, are added to the fixative for surgical samples.
В изопропанол и промежуточные смеси добавляют поверхностно-активное вещество, в качестве которого использован Triton X 15.A surfactant is added to isopropanol and intermediates, which is Triton X 15.
Образцы биологических тканей выдерживают в минеральном масле в качестве просветлителя по меньшей мере 2 часа.Samples of biological tissues are kept in mineral oil as a bleach for at least 2 hours.
Пропитывание парафином осуществляют при температуре 60°С в течение 4 часов, при этом в двух емкостях по 2 часа или в 4 емкостях по 1 часу.Paraffin impregnation is carried out at a temperature of 60 ° C for 4 hours, while in two containers for 2 hours or in 4 containers for 1 hour.
Из уровня техники неизвестно техническое решение с заявляемой совокупностью существенных признаков независимых пунктов формулы изобретения, что подтверждает ее соответствие условию патентоспособности - новизна.The technical solution with the claimed combination of essential features of the independent claims is not known from the prior art, which confirms its compliance with the patentability condition - novelty.
Существенные отличительные признаки независимого пункта формулы заявляемого изобретения для специалиста явным образом не следуют из уровня техники, что подтверждает соответствие изобретения условию патентоспособности - изобретательский уровень.The essential features of the independent claim of the claimed invention for a specialist do not explicitly follow from the prior art, which confirms the compliance of the invention with the condition of patentability - inventive step.
Способ подготовки образцов биологических тканей к гистологическим исследованиям может быть осуществлен с реализацией указанного назначения следующим образом. Для подготовки образцов биологических тканей к гистологическим исследованиям полученный материал фиксируют в забуференном нейтральном 10% растворе формалина (рН 7,0) в течение 24 часа при комнатной температуре или 18 часов при подогреве до 37°С. Соотношение объемов фиксатора и ткани не менее 20:1. Для забуферивания формалина используют одно- и двузамещенный фосфаты натрия в количествах, обеспечивающих рН конечного раствора на уровне 6.8-7.4. Полный рецепт нейтрального забуференного формалина: 6.5 г Na2HPO4 б/в и 4 г NaH2PO4×Н2О, 900 мл дистиллированной воды, 100 мл 37% формалина). К формалину добавляют цветовую метку: для эндоскопических образцов - эозин, для хирургических образцов - метиленовый синий, а также парфюмерную метку. В фиксатор для эндоскопических образцов биологических тканей добавляют парфюмерную метку и цветовую метку, в качестве которой использован эозин. В фиксатор для хирургических образцов биологических тканей добавляют парфюмерную метку и цветовую метку, в качестве которой использован метиленовый синий.A method of preparing samples of biological tissues for histological studies can be carried out with the implementation of this purpose as follows. To prepare samples of biological tissues for histological studies, the resulting material is fixed in a neutral buffered 10% formalin solution (pH 7.0) for 24 hours at room temperature or 18 hours when heated to 37 ° C. The ratio of the volumes of the fixative and tissue is not less than 20: 1. For formalin buffering, mono- and disubstituted sodium phosphates are used in amounts that ensure the pH of the final solution at a level of 6.8-7.4. A complete recipe for neutral buffered formalin: 6.5 g b / w Na 2 HPO 4 and 4 g NaH 2 PO 4 × H 2 O, 900 ml distilled water, 100 ml 37% formalin). A color mark is added to formalin: for endoscopic samples - eosin, for surgical samples - methylene blue, as well as a perfume label. In the fixative for endoscopic samples of biological tissues, add a perfume label and a color label, which is used as eosin. In the fixative for surgical samples of biological tissues add a perfume label and a color label, which is used methylene blue.
После фиксации в формалине образцов биологических тканей промывают в проточной воде 15-20 минут для удаления избытка фиксатора, поскольку осадки фосфатов, образующиеся при действии спирта, загрязняют трубопроводы, стенки рабочей камеры и поворотного клапана гистопрцессора, а также осложняют работу на микротоме при получении срезов.After fixation in formalin, samples of biological tissues are washed in running water for 15-20 minutes to remove excess fixative, since the precipitation of phosphates generated by the action of alcohol pollutes the pipelines, walls of the working chamber and the histoprocessor rotary valve, and also complicates the work on the microtome when obtaining sections.
Далее проводят дегидратацию образцов биологических тканей, путем последовательного их погружения образцов в обезвоживающие жидкости, первая порция содержит не более 30% воды, а затем в обезвоживающие жидкости, не содержащие воды. В качестве обезвоживающей жидкости используют изопропанол, являющийся мягким дегидратантом, не уплотняющим и не дубящим ткани. Для облегчения пропитывания тканей в него добавляют поверхностно-активное вещество, в качестве которого использован Triton X15.Next, dehydration of biological tissue samples is carried out by sequentially immersing the samples in dehydrating liquids, the first portion contains not more than 30% water, and then in dehydrating liquids that do not contain water. Isopropanol is used as a dehydrating liquid, which is a mild dehydration agent that does not condense or tan tissue. To facilitate the impregnation of tissues, a surfactant is added to it, as Triton X15 is used.
Для последующего просветления образцов биологических тканей в промежуточных смесях, в качестве которых используют смеси изопропанола и минерального масла в определенных соотношениях. Промежуточная смесь I содержит 5 частей изопропанола и 1 часть минерального масла, а промежуточная смесь II содержит 2 части изопропанола и 1 часть минерального масла. Промежуточные смеси стабильны, однородны и прозрачны при комнатной температуре и используются без нагревания при комнатной температуре благодаря наличию в их составе поверхностно-активного вещества марки Triton X 15, в них может быть добавлена парфюмерная метка. После обработки в промежуточных смесях образцы биологических тканей для просветления погружают в минеральное масло. Минеральное масло - это смесь насыщенных углеводородов, жидкая при комнатной температуре. Время воздействия минерального масла не менее 2 часов. Также образцы биологических тканей без любых неблагоприятных воздействий можно оставить в минеральном масле на любой необходимый срок: на несколько дней или до нескольких месяцев.For the subsequent enlightenment of biological tissue samples in intermediate mixtures, which use mixtures of isopropanol and mineral oil in certain proportions. Intermediate mixture I contains 5 parts of isopropanol and 1 part of mineral oil, and intermediate mixture II contains 2 parts of isopropanol and 1 part of mineral oil. Intermediate mixtures are stable, uniform and transparent at room temperature and are used without heating at room temperature due to the presence of a Triton X 15 surfactant in their composition, a perfume label can be added to them. After processing in intermediate mixtures, samples of biological tissues for enlightenment are immersed in mineral oil. Mineral oil is a mixture of saturated hydrocarbons, liquid at room temperature. The exposure time of mineral oil is at least 2 hours. Also, samples of biological tissues without any adverse effects can be left in mineral oil for any necessary period: for several days or up to several months.
После этого образцы биологических тканей пропитывают расплавленным парафином с точкой плавления 52°-56°C с добавкой 5% пчелиного воска, 0.8% димтелисульфоксида, облегчающего пропитывание образцов биологических тканей, и 0,5% бутилкаучука, обеспечивающего большую их пластичность. Пропитывание парафином осуществляют при температуре 60°С в течение 4 часов, при этом в двух емкостях по 2 часа или в 4 емкостях по 1 часу.After that, samples of biological tissues are impregnated with molten paraffin with a melting point of 52 ° -56 ° C with the addition of 5% beeswax, 0.8% dimtelisulfoxide, which facilitates the impregnation of biological tissue samples, and 0.5% butyl rubber, which provides their great plasticity. Paraffin impregnation is carried out at a temperature of 60 ° C for 4 hours, while in two containers for 2 hours or in 4 containers for 1 hour.
Длительность проводки образцов биологических тканей по растворам определяется видом образцов и их размерами. Образцы, имеющие размеры 0.1×0.1×0.1 см проводятся по расписанию для эндоскопических образцов, а большие - по расписанию для обычных хирургических образцов.The duration of the placement of samples of biological tissues through solutions is determined by the type of samples and their sizes. Samples with dimensions of 0.1 × 0.1 × 0.1 cm are scheduled according to the schedule for endoscopic samples, while large ones are scheduled according to the schedule for conventional surgical samples.
Для хирургических образцов фиксацию осуществляют вышеописанным способом. Дегидратацию осуществляют последовательным погружением в пять емкостей с изопропанолом с выдержкой в каждой по 1 часу. Для просветления их последовательно погружают в две емкости с промежуточными смесями в каждую на 1,5 часа, а затем - в минеральное масло не менее 1,5 часов. Пропитывание парафином осуществляют при температуре 60°С в течение 4 часов (в двух емкостях по 2 часа или в 4 емкостях по 1 часу). Общее время проводки без учета фиксации 13,5 часов.For surgical specimens, fixation is carried out as described above. Dehydration is carried out by sequential immersion in five containers with isopropanol with an exposure in each of 1 hour. For enlightenment, they are successively immersed in two containers with intermediate mixtures in each for 1.5 hours, and then in mineral oil for at least 1.5 hours. Paraffin impregnation is carried out at a temperature of 60 ° C for 4 hours (in two containers for 2 hours or in 4 containers for 1 hour). The total posting time without fixing is 13.5 hours.
Фиксацию эндоскопических образцов размерами до 0.1×0.1×0.1 см осуществляют также как и хирургических образцов. Дегидратацию осуществляют последовательным погружением в две смены раствора изопропанола с выдержкой в каждом в течение 15 минут. Для просветления их последовательно погружают в две емкости с промежуточными смесями, в каждую на 30 минут, а затем в минеральное масло на 30 минут. Пропитывание парафином осуществляют при температуре 60°С в двух порциях по 15 минут. Общее время проводки без учета фиксации 2 часа 30 минут.Fixation of endoscopic samples with sizes up to 0.1 × 0.1 × 0.1 cm is carried out as well as surgical samples. Dehydration is carried out by successive immersion in two shifts of isopropanol solution with exposure in each for 15 minutes. For enlightenment, they are successively immersed in two containers with intermediate mixtures, each for 30 minutes, and then in mineral oil for 30 minutes. Paraffin impregnation is carried out at a temperature of 60 ° C in two portions of 15 minutes. The total posting time without fixing is 2 hours 30 minutes.
Оба расписания пригодны для использования как при ручной проводке, так и для использования в процессорах карусельного и вакуумного типа.Both schedules are suitable for use both with manual wiring and for use in carousel and vacuum type processors.
Способ иллюстрируется примерами.The method is illustrated by examples.
Пример 1.Example 1
Ручная проводка образца ткани молочной железы, размером 1,5×1,5×0.3 см.Manual posting of a 1.5 × 1.5 × 0.3 cm breast tissue sample.
1. 10% формалин, забуференный фосфатами, 24 часа, комнатная температура, 24 часа. Соотношение фиксатор: ткань не менее 20:1.1. 10% formalin buffered with phosphates, 24 hours, room temperature, 24 hours. The ratio of fixative: fabric is not less than 20: 1.
2. Промывка в проточной воде 20-30 минут.2. Rinsing in running water for 20-30 minutes.
3. 70% изопропанол 1 час.3. 70% isopropanol 1 hour.
4. 80% изопропанол 1 час.4. 80% isopropanol 1 hour.
5. 95% изопропанол 1 час.5. 95% isopropanol 1 hour.
6. 99.7% изопропанол 1 час.6. 99.7% isopropanol 1 hour.
7. 99.7% изопропанол 1 час.7. 99.7% isopropanol 1 hour.
8. Промежуточная смесь I, 1.5 часа.8. The intermediate mixture I, 1.5 hours.
9. Промежуточная смесь II, 1.5 часа.9. The intermediate mixture II, 1.5 hours.
10. Минеральное масло 1.5 часа.10. Mineral oil 1.5 hours.
11. Парафин, 60°С, 1 час.11. Paraffin, 60 ° C, 1 hour.
12. Парафин, 60°С, 1 час.12. Paraffin, 60 ° C, 1 hour.
13. Парафин, 60°С, 1 час.13. Paraffin, 60 ° C, 1 hour.
14. Парафин, 60°С, 1 час.14. Paraffin, 60 ° C, 1 hour.
Заливка в парафин.Pouring in paraffin.
Пример 2.Example 2
Ручная проводка образца ткани желудка, размером 0,1×0,1×0,1 см.Manual posting of a sample of tissue of the stomach, size 0.1 × 0.1 × 0.1 cm.
1. 10% формалин, забуференный фосфатами, 24 часа, комнатная температура, 24 часа. Соотношение фиксатор: ткань не менее 20:1.1. 10% formalin buffered with phosphates, 24 hours, room temperature, 24 hours. The ratio of fixative: fabric is not less than 20: 1.
2. Промывка в проточной воде 5 минут.2. Rinse in running water for 5 minutes.
3. 70% изопропанол 15 минут.3. 70% isopropanol 15 minutes.
4. 99.7% изопропанол 15 минут.4. 99.7% isopropanol 15 minutes.
5. Промежуточная смесь I, 30 минут.5. The intermediate mixture I, 30 minutes.
6. Промежуточная смесь II, 30 минут.6. The intermediate mixture II, 30 minutes.
7. Минеральное масло 30 минут.7. Mineral oil for 30 minutes.
8. Парафин, 60°С, 30 минут.8. Paraffin, 60 ° C, 30 minutes.
9. Парафин, 60°С, 30 минут.9. Paraffin, 60 ° C, 30 minutes.
Заливка в парафин.Pouring in paraffin.
Описанные средства и методы, с помощью которых возможно осуществление способа подготовки образцов биологических тканей к гистологическим исследованиям, с реализацией указанного назначения, подтверждает соответствие заявленного изобретения условию патентоспособности - промышленная применимость.The described means and methods by which it is possible to implement a method of preparing samples of biological tissues for histological studies, with the implementation of this purpose, confirms the compliance of the claimed invention with the patentability condition - industrial applicability.
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011136016/28A RU2499242C2 (en) | 2011-08-29 | 2011-08-29 | Method for preparing biological tissue samples for histopathological examinations |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011136016/28A RU2499242C2 (en) | 2011-08-29 | 2011-08-29 | Method for preparing biological tissue samples for histopathological examinations |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011136016A RU2011136016A (en) | 2013-03-10 |
| RU2499242C2 true RU2499242C2 (en) | 2013-11-20 |
Family
ID=49123086
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011136016/28A RU2499242C2 (en) | 2011-08-29 | 2011-08-29 | Method for preparing biological tissue samples for histopathological examinations |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2499242C2 (en) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2564895C1 (en) * | 2014-06-09 | 2015-10-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний" (НИИ КПССЗ) | Method for making biological tissue samples with implanted elements for light microscopy study |
| RU2568903C2 (en) * | 2014-04-07 | 2015-11-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for assessing anabolic action of medicinal preparations |
| RU2705594C1 (en) * | 2019-07-25 | 2019-11-11 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Федеральный исследовательский центр "Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук" (ИЦиГ СО РАН) | Method of preparation of histological preparations for detection of intracellular lipid inclusions in human and animal tissues |
| RU2730528C1 (en) * | 2020-02-25 | 2020-08-24 | Вера Николаевна Эллиниди | Method for preparing biological tissue samples in paraffin blocks with wiring defects for histological examination |
| RU2797125C1 (en) * | 2022-04-06 | 2023-05-31 | Сергей Владимирович Сирак | Method for preparing bone tissue samples with implanted metal for histological study |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU94036621A (en) * | 1994-09-26 | 1996-07-10 | И.Б. Извозчиков | Method for preparing biological samples for histologic examination |
| EP1005633B1 (en) * | 1997-08-20 | 2008-09-03 | The University Of Miami | A high quality, continuous throughput, tissue fixation-dehydration-fat removal-impregnation method |
-
2011
- 2011-08-29 RU RU2011136016/28A patent/RU2499242C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU94036621A (en) * | 1994-09-26 | 1996-07-10 | И.Б. Извозчиков | Method for preparing biological samples for histologic examination |
| RU2089871C1 (en) * | 1994-09-26 | 1997-09-10 | Извозчиков Илья Борисович | Method of preparing biological sample for histological examination |
| EP1005633B1 (en) * | 1997-08-20 | 2008-09-03 | The University Of Miami | A high quality, continuous throughput, tissue fixation-dehydration-fat removal-impregnation method |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Buesa RJ, Peshkov MV. Histology without xylene. Annals of diagnostic pathology, Vol.12 (4), стр.246-256, 2009. * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2568903C2 (en) * | 2014-04-07 | 2015-11-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for assessing anabolic action of medicinal preparations |
| RU2564895C1 (en) * | 2014-06-09 | 2015-10-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний" (НИИ КПССЗ) | Method for making biological tissue samples with implanted elements for light microscopy study |
| RU2705594C1 (en) * | 2019-07-25 | 2019-11-11 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Федеральный исследовательский центр "Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук" (ИЦиГ СО РАН) | Method of preparation of histological preparations for detection of intracellular lipid inclusions in human and animal tissues |
| RU2730528C1 (en) * | 2020-02-25 | 2020-08-24 | Вера Николаевна Эллиниди | Method for preparing biological tissue samples in paraffin blocks with wiring defects for histological examination |
| RU2797125C1 (en) * | 2022-04-06 | 2023-05-31 | Сергей Владимирович Сирак | Method for preparing bone tissue samples with implanted metal for histological study |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2011136016A (en) | 2013-03-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Foissner | An update of ‘basic light and scanning electron microscopic methods for taxonomic studies of ciliated protozoa’ | |
| US4911915A (en) | Method of processing tissue specimens and dehydrant solvent for use therein | |
| US11035763B2 (en) | Kit for producing cleared biological specimens and method for producing cleared biological specimens | |
| RU2499242C2 (en) | Method for preparing biological tissue samples for histopathological examinations | |
| US7618828B2 (en) | Method for histoprocessing | |
| CN109470534B (en) | Pathological tissue transparent dewaxing liquid and preparation method thereof | |
| WO2013191274A1 (en) | Method for rendering biological material transparent and processing kit for rendering biological material transparent | |
| CN105973673A (en) | Paraffin sectioning method for eucalyptus tissue | |
| JP2011002453A (en) | Method of automatically treating tissue sample in tissue treatment device | |
| ATE485502T1 (en) | METHOD AND DEVICE FOR PRODUCING AND PRESENTING A TISSUE SAMPLE FOR HISTOLOGICAL EXAMINATION | |
| Alwahaibi et al. | A substitute to xylene in deparaffinization and clearing prior to coverslipping in histopathology | |
| RU2397472C1 (en) | Method of preparing biological tissue samples for analysis in scanning electron microscope | |
| RU2530612C1 (en) | Method for nematode preparation for morphological and histological examination | |
| Henson et al. | High resolution imaging of the cortex isolated from sea urchin eggs and embryos | |
| RU2668879C1 (en) | Method for preparing the surface of bone tissue samples to study their microstructure using a scanning electron microscope | |
| Madhura et al. | Bleached vegetable oil as a suitable bio-safe alternative to xylene: An exploratory study | |
| CN101785876A (en) | Decalcification method for bone implant materials | |
| KR101543306B1 (en) | Cell-preserving solution | |
| RU2593343C1 (en) | Method for staining the histological cuts in diagnosing trichinosis | |
| RU2089871C1 (en) | Method of preparing biological sample for histological examination | |
| CN114088480A (en) | Preparation method of paraffin sections of root and stem tissues of asafetida | |
| Haghbin et al. | Automated variable power cold microwave tissue processing: A novel universal tissue processing protocol without using formaldehyde and xylene | |
| Vanický et al. | Formaldehyde–hardened albumin as a non-penetrating embedding matrix for frozen and vibratome sectioning | |
| Manskikh et al. | An adaptation of Twort’s method for polychromatic staining of epoxy-embedded semithin sections | |
| Van Cleave et al. | Use of trisodium phosphate in microscopical technic |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130830 |