RU2730528C1 - Method for preparing biological tissue samples in paraffin blocks with wiring defects for histological examination - Google Patents
Method for preparing biological tissue samples in paraffin blocks with wiring defects for histological examination Download PDFInfo
- Publication number
- RU2730528C1 RU2730528C1 RU2020108145A RU2020108145A RU2730528C1 RU 2730528 C1 RU2730528 C1 RU 2730528C1 RU 2020108145 A RU2020108145 A RU 2020108145A RU 2020108145 A RU2020108145 A RU 2020108145A RU 2730528 C1 RU2730528 C1 RU 2730528C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- biological tissue
- histological
- paraffin
- paraffin blocks
- tissue samples
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области гистологического исследования, патологоанатомической и гистологической диагностики образцов нормальных и патологических тканей человека или животных при микроскопической диагностики окрашенных парафиновых срезов ткани на одном предметном стекле.The invention relates to the field of histological research, pathological and histological diagnosis of samples of normal and pathological tissues of humans or animals during microscopic diagnosis of stained paraffin tissue sections on one slide.
Решаемая изобретением техническая проблема состоит в том, что непременным и важным условием гистологической диагностики является максимальное и качественное сохранение образца биологической ткани при лабораторной обработке.The technical problem solved by the invention lies in the fact that an indispensable and important condition for histological diagnosis is the maximum and high-quality preservation of a biological tissue sample during laboratory processing.
Гистологическая техника изготовления гистологических микропрепаратов является многоэтапным процессом и состоит из следующих этапов лабораторной обработки образцов биологических тканей: 1) фиксация 2) проводка, 3) заливка в парафин с изготовлением парафиновых блоков, 4) микротомия - изготовление парафиновых срезов, монтирование их на предметные стекла и высушивание), 5) окраска парафиновых срезов на предметном стекле, 6) заключение их под покровное стекло и высушивание готовых гистологических микропрепаратов.The histological technique for the preparation of histological micropreparations is a multi-stage process and consists of the following stages of laboratory processing of biological tissue samples: 1) fixation, 2) wiring, 3) embedding in paraffin with the manufacture of paraffin blocks, 4) microtomy - making paraffin sections, mounting them on glass slides and drying), 5) staining paraffin sections on a glass slide, 6) placing them under a cover glass and drying the finished histological micropreparations.
Одной из серьезных проблем, затрудняющей гистологическую диагностику является микроскопия, связанная с дефектами лабораторной обработки биологических тканей на первых двух этапах: фиксации и проводки. Так некачественная фиксация и проводка образцов биологических тканей являются причиной изготовления микропрепаратов с различными дефектами ткани, которые затрудняют гистологическую диагностику и могут быть причиной диагностических ошибок.One of the serious problems that complicates histological diagnosis is microscopy associated with defects in laboratory processing of biological tissues at the first two stages: fixation and wiring. Thus, poor-quality fixation and wiring of biological tissue samples are the reason for the manufacture of microscope preparations with various tissue defects, which complicate histological diagnostics and can cause diagnostic errors.
Известен способ подготовки образцов биологических тканей к гистологическим исследованиям по патенту РФ №2499242, включающий последовательную обработку образцов биологической ткани раствором фиксатора, промывку в воде, дегидратацию в нескольких порциях изопропанола, просветление в двух порциях промежуточных смесей, содержащих изопропанол и минеральное масло, просветление в минеральном масле, пропитывание и заливку образцов парафином, отличающийся тем, что в качестве фиксатора используют 10%-ный раствор формалина, забуференного фосфатами натрия, обработку в промежуточных смесях ведут при комнатной температуре, при этом первая порция промежуточной смеси содержит пять частей изопропанола и одну часть минерального масла, а вторая порция содержит две части изопропанола и одну часть минерального масла, образцы биологических тканей пропитывают расплавленным парафином, в который добавляют 5% пчелиного воска, 0,8% диметилсульфоксида и 0,5% бутилкаучука.A known method of preparing biological tissue samples for histological studies according to RF patent No. 2499242, including sequential processing of biological tissue samples with a fixative solution, washing in water, dehydration in several portions of isopropanol, clarification in two portions of intermediate mixtures containing isopropanol and mineral oil, clarification in mineral oil, impregnation and filling of samples with paraffin, characterized in that a 10% solution of formalin buffered with sodium phosphates is used as a fixative, processing in intermediate mixtures is carried out at room temperature, while the first portion of the intermediate mixture contains five parts of isopropanol and one part of mineral oil, and the second portion contains two parts of isopropanol and one part of mineral oil, samples of biological tissues are impregnated with molten paraffin, to which 5% beeswax, 0.8% dimethyl sulfoxide and 0.5% butyl rubber are added.
Данный способ, принятый в качестве прототипа, предназначен для качественно фиксированных в растворе фиксатора образцов биологических тканей и предлагается как способ качественной проводки биологических тканей для получения качественных парафиновых блоков тканей и гистологических микропрепаратов.This method, adopted as a prototype, is intended for qualitatively fixed samples of biological tissues in a fixative solution and is proposed as a method for high-quality conduction of biological tissues to obtain high-quality paraffin tissue blocks and histological micropreparations.
Недостатком данного способа является то, что им могут быть ошибочно обработаны и образцы биологических тканей, которые были как недостаточно и некачественно фиксированы в растворе фиксатора, так и с нарушением условий проводки. В результате дефекты некачественной фиксации и проводки выявляются только после изготовления из парафиновых блоков гистологических микропрепаратов при микроскопическом исследовании.The disadvantage of this method is that it can be mistakenly processed and samples of biological tissues, which were both insufficiently and poorly fixed in the fixative solution, and in violation of the wiring conditions. As a result, defects of poor-quality fixation and wiring are detected only after the manufacture of histological micropreparations from paraffin blocks during microscopic examination.
На сегодняшний день отсутствует способ устранения дефектов некачественной проводки образцов биологических тканей. Изготовленные микропрепараты из таких образцов биологических тканей залитых в парафиновые блоки имеют дефекты, которые затрудняют гистологическую диагностику, могут быть причиной диагностических ошибок. Ошибки лабораторной обработки образцов биологических тканей могут выявляться на любом из этапов изготовления гистологических препаратов. Одной из трудных ошибок, которая не имеет решения и усложняет гистологическую диагностику является микроскопия, связанная с дефектами некачественной фиксации и проводки образцов биологических тканей.To date, there is no way to eliminate defects in poor-quality wiring of biological tissue samples. The prepared micropreparations from such biological tissue samples embedded in paraffin blocks have defects that complicate histological diagnosis and may cause diagnostic errors. Errors in laboratory processing of biological tissue samples can be detected at any stage of the preparation of histological preparations. One of the difficult mistakes that does not have a solution and complicates histological diagnostics is microscopy associated with defects in poor-quality fixation and wiring of biological tissue samples.
Задачей заявляемого изобретения является создание способа подготовки образцов биологических тканей в парафиновых блоках с дефектами проводки для гистологического исследования, который обеспечит восстановление образцов биологических тканей до состояния, соответствующего требованиям, предъявляемым к исходным биоматериалам для гистологического исследования.The objective of the claimed invention is to create a method for preparing biological tissue samples in paraffin blocks with wiring defects for histological examination, which will ensure the restoration of biological tissue samples to a state that meets the requirements for the original biomaterials for histological examination.
Сущность заявленного технического решения выражается в следующей совокупности существенных признаков, достаточной для решения указанной заявителем технической проблемы и получения обеспечиваемого изобретением технического результата.The essence of the claimed technical solution is expressed in the following set of essential features, sufficient to solve the technical problem indicated by the applicant and obtain the technical result provided by the invention.
Согласно изобретению способ подготовки образцов биологических тканей в парафиновых блоках с дефектами проводки для гистологического исследования, включающий обработку дефектных образцов биологической ткани в парафиновых блоках, отличающийся тем, что он включает три этапа обработки дефектных образцов биологической ткани в парафиновых блоках, при этом на первом этапе выполняют депарафинизация и удаляют парафин из образцов биологических тканей путем расплавления парафиновых блоков и обработке в ксилоле, затем на втором этапе восстанавливают первичную структуру биологической ткани путем высокотемпературной обработки в трис-эдта буферном растворе с рН 9.0, после чего на третьем этапе восстановленные образцы биологической ткани подвергают повторной стандартной лабораторной обработке с соблюдением стандартов фиксации, проводки, заливки в парафиновые блоки и изготовлением гистологических микропрепаратов.According to the invention, a method for preparing biological tissue samples in paraffin blocks with wiring defects for histological examination, comprising processing defective biological tissue samples in paraffin blocks, characterized in that it includes three stages of processing defective biological tissue samples in paraffin blocks, while at the first stage dewaxing and removing paraffin from biological tissue samples by melting paraffin blocks and processing in xylene, then at the second stage the primary structure of biological tissue is restored by high-temperature treatment in Tris-edta buffer solution with pH 9.0, after which at the third stage the restored biological tissue samples are subjected to repeated standard laboratory processing in compliance with the standards of fixation, wiring, embedding in paraffin blocks and the manufacture of histological slides.
Заявленная совокупность существенных признаков обеспечивает достижение технического результата, который заключается в том, что заявленный способ позволяет устранить наиболее трудно исправляемые ошибки и дефекты гистологического процесса обработки биоматериала, которые могут выявляться в процессе изготовления гистологических препаратов, а также избежать диагностических ошибок и назначения повторной необоснованной биопсии. В частности, заявленный способ позволяет устранить следующие микроскопические ошибки, связанные с дефектами некачественной фиксации и проводки тканевых биоматериалов.The claimed set of essential features ensures the achievement of the technical result, which consists in the fact that the claimed method eliminates the most difficult to correct errors and defects in the histological process of biomaterial processing, which can be detected during the manufacture of histological preparations, and also to avoid diagnostic errors and the appointment of repeated unjustified biopsy. In particular, the claimed method eliminates the following microscopic errors associated with defects in poor-quality fixation and wiring of tissue biomaterials.
Сущность изобретения поясняется микрофотографиями образцов биологических тканей при некачественной проводки и после обработки этих образцов заявленным новым способом, где на фиг. 1 представлен гистологический микропрепарат эндометрия (соскоб из полости матки) после некачественной фиксации и проводки (белые неокрашенные структуры ткани, плохо просматривается архитектоника ткани, образец ткани неадекватный для диагностического анализа), на фиг. 2 - тот же препарат, подготовленный заявленным способом (ткань с четкой архитектоникой, качественным окрашиванием гематокислином и эозином, образец ткани адекватный для диагностического анализа).The essence of the invention is illustrated by micrographs of biological tissue samples with poor-quality wiring and after processing these samples by the claimed new method, where in FIG. 1 shows a histological micropreparation of the endometrium (scraping from the uterine cavity) after poor-quality fixation and wiring (white unstained tissue structures, the tissue architectonics is poorly visible, the tissue sample is inadequate for diagnostic analysis), Fig. 2 - the same preparation prepared by the claimed method (tissue with clear architectonics, high-quality staining with hematoxylin and eosin, tissue sample adequate for diagnostic analysis).
Пример реализации заявленного способа.An example of the implementation of the claimed method.
Для восстановления заявленным способом были выбраны 18 соскобов из полости матки после некачественной фиксации и проводки Имелись следующие дефекты: крупные кусочки были мягкими и плохо резались, слабая элективность окрашивания гематоксилином и эозином, которая проявлялась в виде белых неокрашенных участков, «проплешин», плохо различалась типовая архитектоника ткани, что затрудняло гистологическую диагностику патологического процесса.To restore the claimed method, 18 scrapings were selected from the uterine cavity after poor-quality fixation and wiring. tissue architectonics, which complicated the histological diagnosis of the pathological process.
Способ подготовки образцов данных некачественных биологических тканей к гистологическим исследованиям осуществляли следующим образом.The method of preparing samples of these low-quality biological tissues for histological studies was carried out as follows.
На первом этапе удаляли парафин из тканевых блоков путем расплавления биоптатов в горячем лотке заливочной станции и обработке в ксилоле.At the first stage, paraffin was removed from tissue blocks by melting biopsies in a hot tray of a filling station and processing in xylene.
На втором этапе восстанавливали первичную структуру тканевых биоптатов путем их высокотемпературной обработки в трис-эдта буферном растворе с рН 9.0.At the second stage, the primary structure of tissue biopsies was restored by high-temperature treatment in Tris-edta buffer solution with pH 9.0.
Затем на третьем этапе осуществляли стандартную обработку восстановленных тканевых биоптатов для приготовления гистологических парафиновых блоков, а именно, фиксировали биоптаты в 10% нейтральном забуференном формалине в течение 24 часов, после чего осуществляли проводку в серии спиртов и пропитывание в парафине, из парафиновых блоков изготавливали гистологические микропрепараты.Then, at the third stage, standard processing of reconstructed tissue biopsies was carried out for the preparation of histological paraffin blocks, namely, biopsies were fixed in 10% neutral buffered formalin for 24 hours, after which they were wired in a series of alcohols and soaked in paraffin, histological micropreparations were made from paraffin blocks. ...
После восстановления образцы ткани предложенным способом все перечисленные дефекты были устранены во всех препаратах и полностью восстановлены с хорошими свойствами окрашивания и гистоархитектоники.After restoration of tissue samples by the proposed method, all of the listed defects were eliminated in all preparations and completely restored with good staining and histoarchitectonic properties.
Заявленный способ восстановления тканевых биоптатов позволяет устранить дефекты фиксации и проводки тканевых биоптатов, повысить точность гистологической диагностики, а в ряде случаев и предотвратить выполнение повторной биопсии пациентам.The claimed method for restoring tissue biopsies allows you to eliminate defects in fixation and wiring of tissue biopsies, to increase the accuracy of histological diagnostics, and in some cases to prevent repeated biopsy in patients.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020108145A RU2730528C1 (en) | 2020-02-25 | 2020-02-25 | Method for preparing biological tissue samples in paraffin blocks with wiring defects for histological examination |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020108145A RU2730528C1 (en) | 2020-02-25 | 2020-02-25 | Method for preparing biological tissue samples in paraffin blocks with wiring defects for histological examination |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2730528C1 true RU2730528C1 (en) | 2020-08-24 |
Family
ID=72237937
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020108145A RU2730528C1 (en) | 2020-02-25 | 2020-02-25 | Method for preparing biological tissue samples in paraffin blocks with wiring defects for histological examination |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2730528C1 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1642301A1 (en) * | 1988-07-01 | 1991-04-15 | 1-Й Ленинградский Медицинский Институт Им.Акад.И.П.Павлова | Method for preparatory treatment of biological tissue for electron-microscopic examination |
| RU2089871C1 (en) * | 1994-09-26 | 1997-09-10 | Извозчиков Илья Борисович | Method of preparing biological sample for histological examination |
| RU2499242C2 (en) * | 2011-08-29 | 2013-11-20 | Андрей Викторович Иванченко | Method for preparing biological tissue samples for histopathological examinations |
| RU2564895C1 (en) * | 2014-06-09 | 2015-10-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний" (НИИ КПССЗ) | Method for making biological tissue samples with implanted elements for light microscopy study |
-
2020
- 2020-02-25 RU RU2020108145A patent/RU2730528C1/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1642301A1 (en) * | 1988-07-01 | 1991-04-15 | 1-Й Ленинградский Медицинский Институт Им.Акад.И.П.Павлова | Method for preparatory treatment of biological tissue for electron-microscopic examination |
| RU2089871C1 (en) * | 1994-09-26 | 1997-09-10 | Извозчиков Илья Борисович | Method of preparing biological sample for histological examination |
| RU2499242C2 (en) * | 2011-08-29 | 2013-11-20 | Андрей Викторович Иванченко | Method for preparing biological tissue samples for histopathological examinations |
| RU2564895C1 (en) * | 2014-06-09 | 2015-10-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний" (НИИ КПССЗ) | Method for making biological tissue samples with implanted elements for light microscopy study |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gardella et al. | Differential tissue shrinkage and compression in the z-axis: implications for optical disector counting in vibratome-, plastic-and cryosections | |
| Jordan | A Text-book of Histology | |
| Grahn et al. | Veterinary ophthalmic pathology | |
| Wolfe | Tissue processing | |
| Boersma et al. | Influence of random factors and two different staining procedures on computer‐assisted sperm head morphometry in bulls | |
| RU2730528C1 (en) | Method for preparing biological tissue samples in paraffin blocks with wiring defects for histological examination | |
| CN110132673B (en) | Method for preparing needle mushroom fruiting body tissue slices | |
| Levenson et al. | Some studies of wound healing: experimental methods, effect of ascorbic acid and effect of deuterium oxide | |
| Haque et al. | Alcohol-based fixatives can better preserve tissue morphology than formalin | |
| JP7053860B2 (en) | A composition for clearing a spheroid, a method for clearing a spheroid using the composition, and a kit comprising the same. | |
| KR20170119936A (en) | A refractive index matching composition for biological tissue | |
| Blackstad | Tract tracing by electron microscopy of Golgi preparations | |
| Schmuck et al. | A method for the study of chromosomes in entire insect eggs | |
| Jackson | The cytology of the contagious (venereal) tumour of the dog | |
| Miko et al. | Histological methods for assessing myelin sheaths and axons in human nerve trunks | |
| CN113945722B (en) | Aplastic anemia diagnosis marker and application thereof in preparation of kit | |
| US20240161277A1 (en) | Method for determining total number of fibers in muscle tissue based on panoramic scanning | |
| EP3510397B1 (en) | In-vitro method for identifying and analysis of secretion proteins using a three-dimensional cell culture model of the perspiratory gland | |
| Dzurjašková et al. | A method to prepare large resin sections for counting myelinated axons in rodent CNS and PNS structures | |
| RU2801049C1 (en) | Method of establishing the age of an unknown person during a forensic medical examination | |
| Geuna | Morpho-quantitative stereological analysis of peripheral and optic nerve fibers | |
| Alfonsi et al. | Updates on the methodological approaches for carrying out an in-depth study of the cardiac conduction system and the autonomic nervous system of victims of sudden unexplained fetal and infant death | |
| Maloth et al. | Evaluation of decalcified teeth sections by routine processing & hot air oven technique | |
| De Jonge et al. | Embedding of large specimens in glycol methacrylate: Prerequisites for multi‐signal detection and high‐resolution imaging | |
| AKBAŞ et al. | Application of Several Special Staining Methods for Paraffin Sections on Epon-Embedded Semithin Sections |