KR101523139B1 - 미강 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
미강 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 미강 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환예방 또는 치료용 약제학적 조성물 및 기능성식품에 관한 것이다. 본 발명에 따른 미강 발효 추출물은 AC 활성화 → cAMP의 생성증가라는 경로를 통해 혈소판 응집 억제에 관여하고 있으며, 혈소판 응집반응을 야기할 수 있는 물질인 콜라겐(collagen), 트롬빈(thrombin) 또는 ADP를 억제하여 비정상적인 혈소판응집으로 인하여 발생하는 심혈관계 질환을 효과적으로 치료할 수 있는 효과가 있다.
Description
본 발명은 미강 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환예방 또는 치료용 약제학적 조성물 및 기능성식품에 관한 것이다.
인체 혈액은 산소, 영양분, 노폐물의 운반 기능과 완충작용, 체온유지, 삼투압 조절 및 이온 평형유지, 수분 일정유지, 액성 조절작용, 혈압의 유지 및 조절, 생체방어 등 다양한 중요 기능을 가지고 있다. 정상적인 혈액 순환은 체내에서의 혈액 응고 반응계와 혈전 용해 반응계가 상호보완적으로 조절되면서 혈액 순환을 용이하게 하며, 이들 중 혈액 응고 반응계의 기작은 혈관벽에 혈소판이 점착, 응집하여 혈소판 혈전을 형성한 후, 혈액 응고계가 활성화되어 혈소판 응집괴를 중심으로 피브로 혈전이 형성되는 것으로 보고되고 있다.
피브린 혈전의 생성은 수많은 인자들의 여러 단계반응을 거쳐 피브린 응고에 직접 관여하는 트롬빈이 활성화되어 최종적으로 피브리노겐으로부터 피브린 단량체를 생성하게 하며, 피브린 단량체들은 칼슘에 의해 중합되어 혈소판과 내피세포에 결합하게 되며 Factor XIII에 의해 교차 결합된 피브린 폴리머를 혈성하면서 영구적인 혈전을 생성하게 된다. 또한, 트롬빈은 혈소판, V 인자, VII 인자들을 활성화시켜 혈액 응고반응을 촉진시키는 등 혈전 생성에 중추적 역할을 하게 된다.
따라서, 트롬빈의 활성 저해물질은 과다한 혈액응고 이상으로 발생하는 다양한 혈전성 질환에 매우 유용한 예방 및 치료제로 사용될 수 있어 전세계적으로 트롬빈 직접저해제 개발을 목표로 하고 있다. 특히 사회의 발달과 인구의 고령화에 따라 혈전성 질환, 즉 과다한 혈전생성과 관련된 뇌혈관 질환이나 심장질환이 최근 급속히 증가되고 있어 안전한 항혈전제 개발이 절실한 상태이다. 현재까지 혈전성 질환의 예방과 치료에 헤파린, 쿠마린, 아스피린, 유로키네이즈 등의 다양한 항응고제, 항혈소판제, 혈전용해제 등이 사용되고 있으나 이들은 가격이 매우 높을 뿐 아니라 출혈성 부작용과 위장장해 및 과민반응 등으로 그 사용이 한정되고 있는 실정이다.
따라서 부작용이 없고 저렴하면서도 치료 효과가 우수한 새로운 혈소판 응집 억제제의 개발이 시급한 실정이다.
이에 본 발명자들은 미강 발효 추출물을 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물로 사용할 경우, 혈소판 응집반응을 야기할 수 있는 물질인 콜라겐, 트롬빈 또는 ADP의 억제를 효과적으로 억제하여 비정상적인 혈소판응집으로 인하여 발생하는 심혈관계 질환을 효과적으로 치료할 수 있다는 사실을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 미강 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 본 발명에 따른 조성물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환 예방 및 개선용 기능성 식품을 제공하는 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 미강 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 미강 발효 추출물은 미강 열수 추출물 100 중량 대비 락토바실러스 프랜타럼 홍(Lactobacillus plantarum HONG, 기탁번호: KFCC11556P)의 배양물을 1 내지 30 중량%로 접종하여 제조할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 미강 발효 추출물은 30 ~ 40℃의 진탕배양기에서 100 ~ 140rpm의 속도로 20 ~ 28시간 교반배양할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 미강 발효 추출물은 혈소판 응집반응을 야기할 수 있는 물질을 억제 또는 저해할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 혈소판 응집반응을 야기할 수 있는 물질은 콜라겐(collagen), 트롬빈(thrombin) 및/또는 ADP일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 심혈관계질환은 혈전증, 관상동맥질환, 협심증, 심근경색증, 동맥경화증, 뇌졸중, 부정맥, 고혈압으로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 미강 발효 추출물은 미강 열수 추출물 100 중량 대비 락토바실러스 프랜타럼 홍(Lactobacillus plantarum HONG, 기탁번호: KFCC11556P)의 배양물을 1 내지 30 중량%로 접종하여 제조시킨 미강 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환의 예방 및 개선용 기능성 식품을 제공한다.
본 발명에 따른 미강 발효 추출물은 AC 활성화 → cAMP의 생성증가라는 경로를 통해 혈소판 응집 억제에 관여하고 있으며, 혈소판 응집반응을 야기할 수 있는 물질인 콜라겐(collagen), 트롬빈(thrombin) 또는 ADP를 억제하여 비정상적인 혈소판응집으로 인하여 발생하는 심혈관계 질환을 효과적으로 치료할 수 있다.
도 1은 미강 추출물 RB가 콜라겐 유인 사람혈소판응집반응에 미치는억제효과를 나타낸 결과이다.
도 2는 미강 추출물 Lp가 콜라겐 유인 사람혈소판응집반응에 미치는억제효과를 나타낸 결과이다.
도 3은 미강 추출물 Lp+Lw가 콜라겐 유인 사람혈소판응집반응에 미치는억제효과를 나타낸 결과이다.
도 4는 미강 추출물 Lw가 콜라겐 유인 사람혈소판응집반응에 미치는억제효과를 나타낸 결과이다.
도 5는 미강 추출물 RB가 트롬빈 유인 사람혈소판 응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 6은 미강 추출물 Lp가 트롬빈 유인 사람혈소판 응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 7은 미강 추출물 Lp+Lw가 트롬빈 유인 사람혈소판 응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 8은 미강 추출물 Lw가 트롬빈 유인 사람혈소판 응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 9는 미강 추출물 RB가 ADP 유인 사람혈소판응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 10은 미강 추출물 Lp가 ADP 유인 사람혈소판응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 11은 미강 추출물 Lp+Lw가 ADP 유인 사람혈소판응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 12는 미강 추출물 Lw가 ADP 유인 사람혈소판응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 13은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 RB가 AC저해제 SQ22536에 미치는 효과를 나타낸 결과이다.
도 14는 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 Lp가 AC저해제 SQ22536에 미치는 효과를 나타낸 결과이다.
도 15는 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 Lp+Lw가 AC저해제 SQ22536에 미치는 효과를 나타낸 결과이다.
도 16은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 Lw가 AC저해제 SQ22536에 미치는 효과를 나타낸 결과이다.
도 17은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 RB가 cAMP 생성에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 18은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 Lp가 cAMP 생성에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 19는 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 Lp+Lw가 cAMP 생성에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 20은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 Lw가 cAMP 생성에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 21은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물이 A-키나아제 활성에 미치는 영향을 분석한 결과이다.
도 22는 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물이 VASP의 인산화에 미치는 영향을 분석한 결과이다.
도 2는 미강 추출물 Lp가 콜라겐 유인 사람혈소판응집반응에 미치는억제효과를 나타낸 결과이다.
도 3은 미강 추출물 Lp+Lw가 콜라겐 유인 사람혈소판응집반응에 미치는억제효과를 나타낸 결과이다.
도 4는 미강 추출물 Lw가 콜라겐 유인 사람혈소판응집반응에 미치는억제효과를 나타낸 결과이다.
도 5는 미강 추출물 RB가 트롬빈 유인 사람혈소판 응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 6은 미강 추출물 Lp가 트롬빈 유인 사람혈소판 응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 7은 미강 추출물 Lp+Lw가 트롬빈 유인 사람혈소판 응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 8은 미강 추출물 Lw가 트롬빈 유인 사람혈소판 응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 9는 미강 추출물 RB가 ADP 유인 사람혈소판응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 10은 미강 추출물 Lp가 ADP 유인 사람혈소판응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 11은 미강 추출물 Lp+Lw가 ADP 유인 사람혈소판응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 12는 미강 추출물 Lw가 ADP 유인 사람혈소판응집반응에 미치는 억제효과를 나타낸 결과이다.
도 13은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 RB가 AC저해제 SQ22536에 미치는 효과를 나타낸 결과이다.
도 14는 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 Lp가 AC저해제 SQ22536에 미치는 효과를 나타낸 결과이다.
도 15는 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 Lp+Lw가 AC저해제 SQ22536에 미치는 효과를 나타낸 결과이다.
도 16은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 Lw가 AC저해제 SQ22536에 미치는 효과를 나타낸 결과이다.
도 17은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 RB가 cAMP 생성에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 18은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 Lp가 cAMP 생성에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 19는 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 Lp+Lw가 cAMP 생성에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 20은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 Lw가 cAMP 생성에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 21은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물이 A-키나아제 활성에 미치는 영향을 분석한 결과이다.
도 22는 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물이 VASP의 인산화에 미치는 영향을 분석한 결과이다.
혈소판 응집은 혈관 벽이 손상되었을 때, 지혈을 위해 혈병(hemostatic plug)을 생성하는데 필수적인 반응이지만 혈전증, 관상동맥질환, 심근경색 등의 병리현상을 야기한다. 따라서 혈소판 응집반응의 억제는 각종 심혈관계 질환의 예방 및 치료 물질 탐색과 평가에 있어서 중요한 요소이다.
따라서 본 발명자들은 혈소판 응집 억제를 할 수 있는 새로운 치료제를 개발하기 위해 연구하던 중 미강에 주목하였다.
미강 (米糠, rice bran)은 벼의 도정과정 중 발생하는 부산물로서 12 ~ 16%의 단백질과 20 ~ 25%의 셀룰로스(cellulose), 헤미셀룰로스 (hemicellulose) 등의 식이섬유와 16 ~ 22%의 지방을 함유하고 있고 그 밖에 비타민, 미네랄 등의 미량영양소가 풍부하게 함유되어 있으며, 이 외에도 인체에 유효한 폴리페놀(polyphenol) 등의 성분이 풍부하게 함유되어 영양적으로 가치가 매우 높은 것으로 알려져 있다.
최근 미강에 함유되어 있는 다양한 종류의 폴리페놀 (polyphenol) 성분과 헤미셀룰로스(hemicellulose), 베타글루칸(β -glucan), 아라비녹실란 (arabinoxylan) 및 펙틴(pectin) 등의 다당체 성분이 면역기능을 활성화 시켜주고 항암작용 등의 기능을 갖는다는 연구들이 발표되면서 미강의 가치가 새로이 조명되고 있으나 아직까지 미강을 혈전증 등의 심혈관질환의 치료에 사용한다는 연구는 없다.
이에 본 발명자들은 미강 발효 추출물을 심혈관계질환의 예방 및 치료를 위한 용도로 사용할 수 있음을 최초로 규명하였는데, 즉 본 발명의 일실시예에 따르면 미강 추출물에 콜라겐 유인 사람혈소판응집반응 억제효과가 있는지를 알아보기 위하여 실험한 결과, 본 발명의 미강추출물인 RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw군 모두에서 콜라겐이 유인하는 혈소판응집율을 농도의존적으로 억제하였음을 알 수 있었다(실시예 3 내지 5 참조). 다른 일실시예에 따르면 콜라겐 외에 다른 혈소판응집유도물질인 트롬빈 및 ADP에 대하여도 상기와 같은 결과를 보임을 알 수 있었다.
또한, 본 발명자들은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물이 아데닐 시클라아제 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 ADP 유인 혈소판응집반응에 미치는 미강추출물의 효과를 트롬빈 및 콜라겐 유인 혈소판응집억제율과 비교한 결과, 모든 미강추출물 군에서 ADP 유인 혈소판응집율을 저하시켰으며, AC저해제 SQ22536를 투여하였을 때는 미강추출물이 저해시킨 ADP 유인 혈소판응집이 촉진됨을 알 수 있었다(실시예 6 참조). 이러한 결과는 미강추출물에 의한 혈소판응집저해는 미강추출물의 AC 활성 촉진에 의한 cAMP의 생성에 기인한 것을 의미한다.
또한, 본 발명자들은 cAMP의 생성에 미치는 미강추출물의 효과를 알아보기 위하여 미강추출물(RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw)을 농도별로 첨가하거나 첨가하지 않은 인간 혈소판(108/ml)을 37℃에서 3분간 전배양(preincubation)한 후, 응집 유도물질로 자극하여 혈소판 응집 반응을 유도하고 5분간 반응시켰다. 그 후, 즉시 ice-cold 80% 에탄올을 첨가하여 반응을 정지시킨 후, cAMP를 추출하여 cAMP EIA 키트를 이용하여 측정한 결과, 미강추출물은 ADP에 의해 생성이 저하된 cAMP의 생성을 강력히 증가시켰음을 알 수 있었다(실시예 7 참조).
나아가 본 발명자들은 cAMP 증가에 의한 A-키나아제(cyclic AMP dependent protein kinase)의 활성화에 미치는 미강추출물의 효과를 조사하기 위해 A-키나아제의 저해제 Rp-8-Br-cAMPS를 이용하여 미강추출물이 A-키나아제 활성에 미치는 효과를 분석한 결과, 미강추출물이 혈소판응집율을 월등히 억제시킬 수 있음을 알 수 있었다(실시예 8 참조).
따라서 본 발명의 미강 발효 추출물은 심혈관계 질환 예방 또는 치료용 조성물로 사용할 수 있다. 상기 심혈관계 질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물은 상기 미강 발효 추출물 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 투여를 위해서 상기 미강 발효 추출물 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다. 상기 약제학적 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.
또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 특별히 한정되지 않지만, 성인의 경우, 본 발명의 약제학적 조성물을 1일 1회 내지 수회 투여시 1 내지 250㎎/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다. 이 투여량은 환자의 연령, 병태, 증상에 따라 적절히 증감(增減)하는 것이 바람직하다. 상기 1일량은 1일에 1회, 또는 적당한 간격을 두고 하루에 2~3회에 나눠 투여해도 되고, 수일(數日) 간격으로 간헐(間歇)투여해도 된다.
그러나 본 발명의 약제학적 조성물의 상기 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구, 직장, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 흉골내, 경피, 국소, 안구 내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다. 본 발명의 심혈관계 질환 예방 또는 치료용 식품 조성물은 상기 약제학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다.
본 발명의 심혈관계 질환 예방 또는 치료용 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제, 건강보조식품류 및 유제품 등이 있다.
이때, 식품에 첨가되는 미강 발효 추출물 양은 전체 식품 중량을 기준으로 0.01 내지 10 중량부가 바람직하다. 특히 식품이 음료류인 경우, 전체 음료 조성물 100㎖를 기준으로 0.001 내지 1g, 바람직하게는 0.1 내지 1g의 비율로 첨가할 수 있다. 첨가하는 양이 0.001g 미만인 경우 뚜렷한 심혈관계 질환 예방 또는 치료효과를 기대할 수 없으며, 첨가하는 양이 1g을 초과하는 경우 미강 발효 추출물의 맛이 강하여 식품 자체의 맛을 방해하게 된다.
본 발명의 식품 조성물은 상기 미강 발효 추출물 이외에 통상의 보조제를 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기보조제로는 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 있다.
본 발명은 또한 미강 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 심혈관계 질환 예방 또는 치료용 식품을 제공한다.
상기 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제, 건강보조식품류 및 유제품 등이 있다.
본 발명은 또한
(a) 미강과 물을 1 : 9의 중량비로 혼합한 후 110 ~ 130 ℃의 온도로 10 ~ 20분간 열수 추출하는 단계; (b) 상기 (a)단계의 미강 열수 추출물에 락토바실러스 프랜타럼 홍(Lactobacillus plantarum HONG, 기탁번호: KFCC11556P)을 접종하고 교반배양기에서 120rpm의 속도로 24시간 동안 배양 하는 단계; (c) 고압멸균기(autoclave)에서 상기 (b)단계의 배양물을 121℃의 온도로 15분간 멸균하는 단계; (d) 상기 (c)단계에서 멸균된 미강 발효물을 원심분리 후 상층액을 여과하는 단계; 및 (e) 상기 (d)단계에서 여과된 미강 발효물을 54 brix의 농도로 농축한 다음 동결건조하는 단계를 포함하는, 심혈관계 질환 치료 효과를 갖는 미강 발효 추출물을 제조하는 방법을 제공한다.
상기 (b) 단계에서는 락토바실러스 프랜타럼 홍(Lactobacillus plantarum HONG, 기탁번호: KFCC11556P) 균주를 미강 열수 추출물 100 중량 대비 1 내지 30 중량%로 접종하여 제조하는 것이 바람직하다.
나아가 본 발명은 신규한 락토바실러스 프랜타럼 홍(Lactobacillus plantarum HONG) KFCC11556P 균주를 제공하며, 본 발명의 신균주는 다음과 같은 염기서열을 갖는다.
또한, 본 발명의 심혈관계 질환은 혈전증, 관상동맥질환, 협심증, 심근경색증, 동맥경화증, 뇌졸중, 부정맥, 고혈압으로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있으며, 보다 바람직하게는 혈전증일 수 있다.
이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
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실시예
1>
미강발효
추출물 제조방법
<1-1>
미강
열수
추출물 제조
미강 열수 추출물은 고형물과 물을 1:9의 비율로 섞어준 다음 121℃에서 15분간 추출하여 제조하였다.
<1-2>
미강
발효 추출물 제조
본 발명자들은 미강 발효 추출물을 제조하기 위하여 상기 실시예 <1-1>에서 제조된 미강 열수 추출물에 자체 분리 동정한 신균주인 락토바실러스 프랜타럼 홍(Lactobacillus plantarum HONG, 기탁번호: KFCC11556P)을 5 내지 20%를 첨가하여 35℃ 진탕배양기(Shaking incubator)에서 120rpm의 속도로 24시간 교반배양 한 다음 유산균주 불활성화를 위해 오토클레이브(Autoclave)를 이용하여 121℃에서 15분간 멸균처리 하였다. 멸균 처리된 미강발효 샘플을 원심분리(10,000×g, 15min)하여 상층액을 취한 다음 여과지(Whatman No. 40)를 이용하여 강압여과 한 후 54 Brix로 농축한 후 동결건조 하여 미강 발효 추출물을 제조하였다.
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실시예
2>
혈소판 준비
본 발명에서 수행하는 모든 사람혈소판응집실험은 (재)국가생명윤리정책연구원 공용기관생명윤리위원회(IRB File No. PIRB12-071-01, 대한민국)의 승인을 얻어 수행되었다.
먼저, 대한 적십자사 경남 혈액원으로부터 구입한 혈소판풍부혈장(platelet rich plasma)을 1650× g에서 10분간 원심분리하여 하층의 혈소판 펠렛(platelet pellets)을 얻고, 워싱 버퍼(138 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 12 mM NaHCO3, 0.36mM NaH2PO4, 5.5mM glucose, 1mM EDTA, pH 6.5)로 혈소판 펠렛(platelet pellets)을 세척한 후, 서스펜션 버퍼(suspension buffer; 138 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 12 mM NaHCO3, 0.36mM NaH2PO4, 0.49mM MgCl2, 5.5mM glucose, 0.25% gelatin, pH 6.9)에 부유하여 5× 108 platelets/ml 농도의 혈소판부유액(platelet suspension)을 준비하였다.
<
실시예
3>
콜라겐이 유도하는 사람혈소판응집반응에 미치는
미강추출물의
효과 분석
본 발명자들은 미강 추출물(RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw)에 콜라겐 유인 사람혈소판응집반응 억제 효과가 있는지 유무를 알아보기 위하여 하기와 같이 실험을 진행하였다. 여기서 RB은 미강열수추출물을 의미하며, Lp는 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하되 본 발명의 락토바실러스 프랜타럼 홍(Lactobacillus plantarum HONG, 기탁번호: KFCC11556P) 균주가 아닌 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KCCM 12116을 사용하여 제조한 추출물을 의미하고, Lw는 실시예 1의 방법으로 제조한 본 발명의 미강 발효 추출물(Lactobacillus plantarum HONG, 기탁번호: KFCC11556P)을 의미한다.
먼저, 사람 혈소판(108/ml)을 37℃에서 미강으로부터 제조한 추출물(RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw)을 첨가하거나 첨가하지 않은 상태로 3분간 전배양(preincubation) 시킨 후, 응집 유도물질로 자극하여 5분간 응집율을 측정하였다. 응집 유도물질인 콜라겐의 자극에 의해 혈소판 응집이 일어나면 응집검출계(aggregometer; hrono-Log, Corp., Havertown, PA)에서 측정되는 빛의 투과도(suspension buffer를 blank로 함)가 증가하게 되고, 이 투과도를 혈소판 응집율로 평가하였다.
그 결과, 미강추출물 RB(12.5~100 μg/ml)은 콜라겐(10 μg/ml)이 유인한 혈소판응집율(66.0%)을 농도의존적으로 억제하였으며, 특히 RB 100 μg/ml은 콜라겐(10 μg/ml)에 의한 혈소판응집율(66.0%)을 22.67%까지 저하시켰고, 이것에 의한 콜라겐 응집억제정도는 66%임을 알 수 있었다(도 1A 참조). 콜라겐(10 μg/ml)이 유도한 혈소판 응집반응을 50% 억제시키는 RB의 IC50 value는 21.2 μg/ml로 계산되었다(도 1B 참조).
또한, 미강추출물 Lp(100~1000 μg/ml)는 콜라겐(10 μg/ml)이 유인한 혈소판응집율(66.67%)을 농도의존적으로 억제함을 알 수 있었고, 콜라겐 (10 μg/ml)유인 혈소판응집반응을 50% 억제시키는 Lp의 IC50 value는 637.2 μg/ml임을 알 수 있었다(도 2 참조).
미강추출물 Lp+Lw(100~400 μg/ml)은 콜라겐(10 μg/ml)이 유인하는혈소판응집율(59.33%)을 농도의존적으로 억제하였으며, 콜라겐(10 μg/ml)유인 혈소판응집반응을 50% 억제시키는 Lp+Lw의 IC50 value는 218.8 μg/ml로 계산되었다(도 3 참조).
나아가, 미강추출물 Lw(50~1000 μg/ml)은 콜라겐(10 μg/ml)이 유인하는 혈소판응집율(80.00%)을 농도의존적으로 억제하였으며(도 4A 참조), 콜라겐(10 μg/ml)유인 혈소판응집을 50% 억제시키는 Lw의 IC50 value는 725.9 μg/ml으로 계산되었다(도 4B 참조).
<
실시예
4>
트롬빈이
유도하는 사람혈소판응집반응에 미치는
미강추출물의
효과 분석
본 발명자들은 미강 추출물(RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw)에 트롬빈 유인 사람혈소판응집반응 억제 효과가 있는지 유무를 알아보기 위하여 하기와 같이 실험을 진행하였다.
먼저, 사람 혈소판(108/ml)을 37℃에서 미강으로부터 제조한 추출물(RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw)을 첨가하거나 첨가하지 않은 상태로 3분간 전배양(preincubation) 시킨 후, 응집 유도물질로 자극하여 5분간 응집율을 측정하였다. 응집 유도물질인 트롬빈(Thrombin)의 자극에 의해 혈소판 응집이 일어나면 응집검출계(aggregometer; hrono-Log, Corp., Havertown, PA)에서 측정되는 빛의 투과도(suspension buffer를 blank로 함)가 증가하게 되고, 이 투과도를 혈소판 응집율로 평가하였다.
그 결과, 미강추출물 RB(100 ~ 1000 /ml)는 트롬빈(0.2 U/ml)이 유인한 혈소판 응집율(64.33%)을 농도의존적으로 억제하였으며, 트롬빈(0.2 U/ml)이 유인한 혈소판 응집반응을 50% 억제시키는 RB의 IC50 value는 841 /ml임을 알 수 있었다(도 5 참조).
또한, 미강추출물 Lp(100 ~ 2000 /ml)는 트롬빈(0.2 U/ml)이 유인한 혈소판 응집율(68.33%)을 농도의존적으로 억제하였으며, 트롬빈(0.2 U/ml)이 유인한 혈소판 응집반응을 50% 억제시키는 Lp의 IC50 value는 2000 /ml 이상으로서 IC50 범위를 초과하는 높은 농도임을 알 수 있었다(도 6 참조).
미강추출물 Lp+Lw (100~1000 /ml)는 트롬빈(0.2 U/ml)이 유인한 혈소판 응집률 (73.67%)를 농도의존적으로 억제하였으며, 트롬빈(0.2 U/ml)이 유인한 혈소판 응집반응을 50% 억제시키는 Lp+Lw의 IC50 value는 740.7 /ml를 보임을 알 수 있었다(도 7 참조).
나아가, 미강추출물 Lw (500~1000 /ml)는 트롬빈(0.2 U/ml)이 유인한 혈소판 응집률 (71%)를 농도의존적으로 억제하였으며, 트롬빈(0.2 U/ml)이 유인한 혈소판 응집반응을 50% 억제시키는 Lw의 IC50 value는 389.4 /ml임을 알 수 있었다(도 8 참조).
<
실시예
5>
ADP
가 유도하는 사람혈소판응집반응에 미치는
미강추출물의
효과 분석
본 발명자들은 미강 추출물(RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw)에 ADP 유인 사람혈소판응집반응 억제 효과가 있는지 유무를 알아보기 위하여 하기와 같이 실험을 진행하였다.
먼저, 사람 혈소판(108/ml)을 37℃에서 미강으로부터 제조한 추출물(RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw)을 첨가하거나 첨가하지 않은 상태로 3분간 전배양(preincubation) 시킨 후, 응집 유도물질로 자극하여 5분간 응집율을 측정하였다. 응집 유도물질인 ADP의 자극에 의해 혈소판 응집이 일어나면 응집검출계(aggregometer; hrono-Log, Corp., Havertown, PA)에서 측정되는 빛의 투과도(suspension buffer를 blank로 함)가 증가하게 되고, 이 투과도를 혈소판 응집율로 평가하였다.
그 결과, 미강추출물 RB(50~1000 μg/ml)는 ADP(20 μM)가 유인한 혈소판응집율(64.5%)을 농도의존적으로 억제하였으며, ADP(20 μM)에 의한 혈소판응집반응을 50% 억제시키는 RB의 IC50 value는 비교적 낮은 농도로서 224.0 μg/ml로 계산되었음을 알 수 있었다(도 9 참조).
또한, 미강추출물 Lp(100~1000 μg/ml)은 ADP(20 μM)에 의한 혈소판응집율(56.25%)을 농도의존적으로 억제하였으며, ADP(20 μM)에 의한 혈소판응집반응을 50% 억제시키는 Lp의 IC50 value는 501.1μg/ml임을 알 수 있었다(도 10 참조).
미강추출물 Lp+Lw(10 ~ 500 μg/ml)은 ADP(20 μM)에 의한 혈소판응집율(56.25%)를 농도의존적으로 억제하였으며, ADP(20 μM)에 의한 혈소판응집반응을 50% 억제시키는 Lp+Lw의 IC50 value는 131.9 μg/ml로서 비교적 낮은 농도를 보임을 알 수 있었다(도 11 참조).
나아가 미강추출물 Lp+Lw(10~500 μg/ml)은 ADP(20 μM)에 의한 혈소판응집율(56.25%)를 농도의존적으로 억제하였으며, ADP(20 μM)에 의한 혈소판응집반응을 50% 억제시키는 Lw의 IC50 value는 아주 낮은 농도로서 104.2 μg/ml임을 알 수 있었다(도 12 참조).
<
실시예
6>
ADP
유인 혈소판응집반응에서
미강추출물이
아데닐
시클라아제
활성에 미치는 영향 분석
본 발명자들은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 미강추출물이 아데닐 시클라아제 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 ADP 유인 혈소판응집반응에 미치는 미강추출물의 효과를 트롬빈 및 콜라겐 유인 혈소판응집억제율과 비교하였다.
ADP 유인 혈소판응집의 저해는 혈소판응집이 유인하는 혈전증의 치료에 중요하며, 혈소판의 응집이 일어나기 위해서는 Ca2 +이 필수적이다. Ca2 +의 증가를 감소시켜 혈소판의 응집을 억제시키는 분자는 혈소판 내부의 ATP (adenosine triphosphate)에 adenylate cyclase, AC)가 작용하여 생성시키는 cAMP(cyclic adenosine monophosphate)이다. 특히 ADP는 그 수용체 P2Y12의 Gαi에 작용하여 AC의 활성 억제를 거쳐 cAMP의 생성을 억제시킴으로서 혈소판 내부에 Ca2 +을 증가시켜 혈소판의 응집을 촉진한다. 미강추출물은 ADP에 의한 혈소판응집을 억제시키기 위해 AC의 활성 촉진과 더불어 cAMP의 생성을 촉진시킬 수 있다.
따라서 본 발명에서는 ADP유인 혈소판응집반응에 있어서 미강추출물의 AC활성에 미치는 효과를 조사하기 위해 AC저해제 SQ22536를 이용하여 혈소판응집율을 측정한 결과, 미강추출물 RB(250 μg/ml)은 ADP유인 혈소판응집율(64.5%)을 28.7%까지 저하시켰음을 알 수 있었다. 또한, RB(250 μg/ml)에 의해 28.7%까지 저하된 ADP유인 혈소판응집반응은 AC저해제 SQ22536에 의해 51.7%까지 증가되었다(도 13 참조). 이러한 결과는 SQ22536이 본 발명의 미강추출물 RB(250 μg/ml)이 저해시킨 혈소판응집율(28.7%)에 대해 80.1%까지 혈소판응집을 촉진시키고 있음을 의미한다.
또한, 미강추출물 Lp(750 μg/ml)은 ADP유인 혈소판응집율(56.25%)을 18.25%까지 저하시켰으며, Lp(750 μg/ml)에 의해 18.25%까지 저하된 ADP유인 혈소판응집반응은 AC저해제 SQ22536에 의해 29.0%까지 증가하였음을 알 수 있었다(도 14 참조). 이러한 결과는 SQ22536이 Lp(750 μg/ml)가 저해시킨 ADP유인 혈소판응집율(18.25%)에 대해 58.9%까지 혈소판응집을 촉진시키고 있음을 의미한다.
미강추출물 Lp+Lw(250 μg/ml)은 ADP유인 혈소판응집율(56.25%)을 18.25%까지 저하시켰으며, Lp+Lw(250 μg/ml)에 의해 18.25%까지 저하된 ADP유인 혈소판응집반응은 AC저해제 SQ22536에 의해 30.67%까지 증가하였음을 알 수 있었다(도 15 참조). 이러한 결과는 SQ22536이 Lp+Lw(250 μg/ml)가 저해시킨 ADP유인 혈소판응집율(18.25%)에 대해 68.0%까지 혈소판응집을 촉진시키고 있음을 의미한다.
나아가 미강추출물 Lw(250 μg/ml)은 ADP 유인 혈소판응집율(56.25%)을 10.25%까지 저하시켰으며, Lw(250 μg/ml)에 의해 10.25%까지 저해된 ADP유인 혈소판응집반응은 AC저해제 SQ22536에 의해 30.0%까지 증가하였고(도 16 참조), 이것은 SQ22536이 Lw(250 μg/ml)가 저해시킨 ADP유인 혈소판응집율(10.25%)에 대해 192.7%까지 혈소판응집을 촉진시키고 있음을 의미한다.
도 13 내지 16의 결과로 본 발명의 미강 추출물인 RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw는 미강 추출물에 의한 혈소판응집저해는 미강 추출물의 AC 활성 촉진에 의한 cAMP의 생성에 기인한 것을 의미한다.
<
실시예
7>
본 발명의
미강
추출물이
ADP
유인 혈소판응집반응에서
cAMP
생성에 미치는 영향 분석
cAMP는 혈소판응집억제분자로서 어떤 물질이 혈소판내부의 cAMP 생성을 촉진시킨다면 그 물질은 항혈소판작용을 가짐으로써 혈전증치료에 이용되므로 cAMP의 생성량은 혈소판응집억제능의 평가지표가 된다. 실시예 6의 결과에서 보았듯이 미강추출물은 AC의 활성을 강하게 촉진시키기 때문에 미강추출물은 AC의 활성촉진을 거쳐 cAMP의 생성을 증가시킬 수 있다.
따라서 본 발명자들은 cAMP의 생성에 미치는 미강추출물의 효과를 알아보기 위하여 하기와 같은 방법으로 실험을 하였다.
먼저, 미강으로부터 제조한 추출물(RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw)을 농도별로 첨가하거나 첨가하지 않은 인간 혈소판(108/ml)을 37℃에서 3분간 전배양(preincubation)한 후, 응집 유도물질로 자극하여 혈소판 응집 반응을 유도하고 5분간 반응시켰다. 그 후, 즉시 ice-cold 80% 에탄올을 첨가하여 반응을 정지시킨 후, cAMP를 추출하여 cAMP EIA 키트를 이용하여 측정하였다.
그 결과, ADP(20 μM)는 완전한 혈소판(intact platelets) 즉 대조군의 cAMP(2.09± 0.17 pmol/109 platelets)를 유의성있게 0.99± 0.28 pmol/109 platelets까지 저하시켰다. 이것은 ADP가 AC의 활성을 억제시킴으로써 ATP로부터 cAMP의 생성을 억제시킨 것을 의미한다.
그러나, 미강추출물 RB(150, 250 μg/ml)는 ADP(20 μM)에 의해 생성이 저하된 cAMP의 생성을 강력히 증가시키고 있으며, 특히 미강추출물 RB 250 μg/ml은 ADP 유인 혈소판응집반응에서 0.99± 0.28 pmol/109 platelets로부터 2.38± 0.19 pmol/109 platelets까지 cAMP 생성을 증가시켰음을 알 수 있었다(도 17 참조).
또한, Lp은 비교적 높은 농도(500, 750 μg/ml)의 Lp에 의해서도 ADP에 의해 저하된 cAMP의 농도(0.99± 0.28 pmol/109 platelets)에 비해 증가되지 않았다. 아주 높은 농도(1000 μg/ml)의 Lp에 의해서만 cAMP가 2.35± 0.13 pmol/109 platelets까지 증가되었다(도 18 참조). Lp(750 μg/ml)에 의해 ADP유인 혈소판응집이 억제되고(도 10A 참조), Lp 750 μg/ml에 의해서 AC의 활성이 증가하는 것으로 관찰되었음에도 불구하고(도 15 참조), Lp 750 μg/ml에 의해서 cAMP의 생성이 증가하지 않고 이것보다 높은 농도인 1000 μg/ml의 Lp에 의해서 cAMP의 생성이 증가한 것은 cAMP의 생성을 높이기 위해서는 아주 높은 농도의 Lp가 필요하다는 것을 의미한다.
미강추출물 Lp+Lw(150 ~ 500 μg/ml)은 ADP(20 μM)에 의해 생성이 저하된 cAMP의 생성을 강력히 농도의존적으로 증가시키고 있다(도 19 참조). 특히 미강추출물 Lp+Lw 250 μg/ml은 ADP유인 혈소판응집반응에서 cAMP생성을 0.99± 0.28 pmol/109 platelets에서 1.66± 0.07 pmol/109 platelets까지 증가되었음을 알 수 있었다(도 19 참조).
나아가 미강추출물 Lw(150~500 μg/ml)은 ADP(20 μM)에 의해 생성이 저하된 cAMP의 생성을 강력히 증가시키고 있다. 특히 미강추출물 Lw 250 μg/ml은 ADP유인 혈소판응집반응에서 cAMP의 생성을 0.99± 0.28 pmol/109 platelets로부터 2.03± 0.31 pmol/109 platelets까지 증가시켰다(도 20 참조).
상기의 결과로 미루어 보아 미강추출물 RB, Lp+Lw 및 Lw는 혈소판에서 AC의 활성을 증가시킴으로써 cAMP의 생성을 촉진시킨 것을 의미한다. 이것은 또한 미강추출물 RB, Lp+Lw 및 Lw가 ADP에 의한 혈소판응집을 강하게 억제시킨 것과 깊은 연관이 있음을 알 수 있었다.
<
실시예
8>
ADP
유인 혈소판응집반응에서 본 발명의
미강추출물이
A-
키나아제
활성에 미치는 효과 분석
미강추출물은 [AC 활성화 → cAMP의 생성증가]라는 경로를 통해 혈소판의 응집억제에 관여하고 있으며, 혈소판에서 생성된 cAMP는 [A-kinase의 활성화 → VASP 또는 IP3 receptor 인산화 → Ca2 +의 동원억제]경로를 통해서 혈소판응집억제에 관여하고 있다.
본 발명의 미강추출물은 cAMP의 생성을 증가시켰으므로(도 17 ~ 20 참조), 미강추출물은 ADP 유인 혈소판응집을 억제하기 위해(도 9 ~ 12 참조), [AC활성화 → cAMP 생성증가 → A-kinase 활성화 → VASP 또는 IP3 receptor 인산화 → Ca2 + 동원억제]의 경로에 관여할 것으로 생각된다.
따라서, 본 발명자들은 cAMP 증가에 의한 A-키나아제(cyclic AMP dependent protein kinase)의 활성화에 미치는 미강추출물의 효과를 조사하기 위해 A-키나아제의 저해제 Rp-8-Br-cAMPS를 이용하여 미강추출물이 A-키나아제 활성에 미치는 효과를 분석하였다.
그 결과, 미강추출물 RB(250 μg/ml), Lp(750 μg/ml), Lp+Lw(250 μg/ml) 및 Lw(250 μg/ml)은 ADP(20 μM)이 유인하는 혈소판응집율(64.5± 3.0%)을 RB(250 μg/ml)은 28.7± 1.5%(도 21A 참조), Lp(750 μg/ml)은 56.25± 0.96%에서 18.25± 2.50%(도 21B 참조), Lp+Lw(250 μg/ml)은 56.25± 0.96%에서 18.25± 2.63%(도 21C 참조), Lw(250 μg/ml)은 56.25± 0.96%에서 10.25± 0.96%까지(도 21D 참조) 저하시켰음을 알 수 있었다.
그러나, A-키나아제 저해제 Rp-8-Br-cAMPS(150 μM)은 ADP유인 혈소판응집반응에서 미강추출물 RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw가 저해시키는 혈소판응집을 증가시켰다. 이것은 A-키나아제 저해제 Rp-8-Br-cAMPS가 cAMP의 기능을 억제시킨 결과로서 미강추출물은 [cAMP → A-kinase]경로를 거쳐 ADP유인 혈소판응집의 억제에 관여함을 의미한다.
<
실시예
9>
ADP
유인 혈소판응집반응에서
VASP
의 인산화에 미치는
미강추출물의
효과 분석
cAMP/A-kinase는 VASP의 Ser157에 인산염(phosphate)을 결합시켜 VASP-Ser157로 인산화시켜, 혈액 중의 피브리노겐이 혈소판막의 표면에 있는 integrin αⅡb/β3에 결합되는 것을 억제시킴으로써 혈소판의 완전한 응집을 억제시킬 뿐만 아니라 혈소판응집에 필요한 Ca2 +의 동원을 억제시킨다.
본 발명자들은 미강추출물에 ADP 유인 혈소판응집반응에서 VASP의 인산화에 영향을 미치는지 여부를 알아보기 위하여 확인한 결과, 미강추출물 RB(도 22A lane3, 4), Lp(도 22B lane3, 4), Lp+Lw(도 22C lane3, 4) 및 Lw(도 22D lane3, 4)는 각각 ADP유인 혈소판응집반응에서 VASP(Ser157)의 인산화를 촉진시키고 있음을 알 수 있었다. 이것은 미강추출물이 cAMP 생성증가/A-kinase 활성화 촉진을 통해 VASP(Ser157)을 강하게 인산화시킴을 의미한다.
반대로 미강추출물 RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw에 의해 인산화된 VASP(Ser157)은 AC저해제 SQ22536 및 A-키나아제 저해제인 Rp-8-Br-cAMPS에 의해 아주 완전히 억제되었음을 알 수 있었다(SQ22536: lane 5, Rp-8-Br-cAMPS: lane 6)(도 22 참조).
이러한 결과는 미강추출물 RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw는 ADP유인 혈소판응집을 억제시키기 위해 cAMP/A-kinase의 경로를 거쳐 VASP(Ser157)를 인산화시켰음을 의미하며, 그렇지 않으면 미강추출물에 의해 인산화된 VASP(Ser157)은 AC저해제 SQ22536에 의해 억제되지 않았을 것이며, A-kinase 저해제 Rp-8-Br-cAMPS에 의해서도 억제되지 않을 것이다.
따라서 상기 실시예의 결과를 통해 본 발명의 미강추출물인 RB, Lp, Lp+Lw 및 Lw은 혈소판 응집반응을 효과적으로 억제하여 혈전증, 관상동맥질환 및 심근경색 등의 각종 심혈관계 질환의 예방 또는 치료에 있어 효과적임을 알 수 있었다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에 대한 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허 청구 범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
Claims (7)
- 미강 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전증 예방 또는 치료용 약학적 조성물로써,
상기 미강 발효 추출물은 미강 열수 추출물 100 중량부 대비 락토바실러스 프랜타럼 홍(Lactobacillus plantarum HONG, 기탁번호: KFCC11556P)의 배양물을 1 내지 30 중량부로 접종하여 제조된 것을 특징으로 하는 혈전증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 미강 발효 추출물은 30 ~ 40℃의 진탕배양기에서 100 ~ 140rpm의 속도로 20 ~ 28시간 교반배양된 것을 특징으로 하는 혈전증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 미강 발효 추출물은 혈소판 응집반응을 야기할 수 있는 물질을 억제 또는 저해하는 것을 특징으로 하는 혈전증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 제4항에 있어서,
상기 혈소판 응집반응을 야기할 수 있는 물질은 콜라겐(collagen), 트롬빈(thrombin) 및/또는 ADP(adenosine diphosphate)인 것을 특징으로 하는 혈전증 예방 또는 치료용 약학적 조성물. - 삭제
- 미강 발효 추출물은 미강 열수 추출물 100 중량부 대비 락토바실러스 프랜타럼 홍(Lactobacillus plantarum HONG, 기탁번호: KFCC11556P)의 배양물을 1 내지 30 중량부로 접종하여 제조시킨 미강 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전증 예방 및 개선용 기능성 식품.
Priority Applications (1)
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Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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Publications (2)
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| Country | Link |
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Cited By (4)
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| KR101941871B1 (ko) | 2017-09-05 | 2019-01-24 | 서원대학교산학협력단 | 쌀도정 부산물과 한방생약의 발효 추출물을 포함하는 항혈전용 조성물 |
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| KR20210048446A (ko) | 2021-01-19 | 2021-05-03 | 조선대학교산학협력단 | 김치로부터 분리된 유산균을 이용한 미강 발효물 제조방법 및 그로부터 제조된 미강 발효물 |
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-
2013
- 2013-09-30 KR KR1020130116649A patent/KR101523139B1/ko active IP Right Grant
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| KR20210048110A (ko) | 2019-10-23 | 2021-05-03 | 조선대학교산학협력단 | 김치로부터 분리된 유산균을 이용한 미강 발효물 제조방법 및 그로부터 제조된 미강 발효물 |
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