KR101519341B1 - 곤충병원성 선충 상온보관용 꿀벌부채명나방 유충 및 버미큐라이트를 함유한 배지 조성물 및 이를 이용한 곤충병원성 선충 원스톱 대량 증식방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 버미큐라이트 및 꿀벌부채명나방 유충을 함유하는 곤충병원성 선충 배지 조성물 및 곤충병원성 선충의 원스톱 대량증식 방법을 제공하는 효과가 있으며, 이 밖에도 곤충병원성 선충의 보존용 입상 또는 액상제형을 제공하는 뛰어난 효과가 있다.

Description

곤충병원성 선충 상온보관용 꿀벌부채명나방 유충 및 버미큐라이트를 함유한 배지 조성물 및 이를 이용한 곤충병원성 선충 원스톱 대량 증식방법{The culture medium composition for room temperature stock of insect infectious nematodes which comprising Galleria mellonella and vermiculite and one stop culture methods of the same}

본 발명은 꿀벌부채명나방 유충, 입상 버미큐라이트 및 곤충병원성 선충을 혼합한 곤충병원성 선충 상온보관용 배지 조성물 및 이를 이용한 곤충병원성 선충 상온보존용 입상 또는 액상제형에 관한 것이다.

농가의 시설 원예작물재배지에서 문제시되는 작은뿌리파리나 버섯재배사의 버섯파리방제, 골프장 잔디포지의 풍뎅이 유충(굼벵이) 등의 방제는 전적으로 화학살충제에 의존하고 있으며 유기농 재배지에서는 목초액이나 효과가 입증되지 않은 물질 등을 방제법으로 이용하고 있어 환경이나 인체에 대한 악영향이 우려되는 실정이다.

최근에는 원예작물재배 육묘상이나 딸기재배상에서 작은 뿌리파리의 피해가 증가하고 피해를 최소화하기 위해서 화학살충제를 사용하여 방제를 시도하고 있으나 벌레의 생태특성상 방제효과가 거의 없는 실정이다. 또 골프장의 경우 잔디뿌리 가해 해충인 굼벵이 피해가 전역에 걸쳐 발생에 따라 화학적 방제 의존도가 증가하고 있어 환경오염문제 등을 야기하고 있다.

화학농약의 문제점을 극복하고 생태적으로 안전한 방제방법으로서 천적생물을 이용하는 방법이 최근 들어 각광을 받고 있으나 천적의 대량생산, 제형화 및 유통상에 어려움 때문에 상용화가 어려운 실정이다.

곤충병원성 선충의 이용은 곤충병원성 선충이 충체내에 침입하면 24-48시간내에 치사시키는 높은 살충력 및 곤충에 대해 특이적으로 살충력을 보이고 척추동물이나 식물에 대해 안전하기 때문에 생물적 방제인자로서 주목을 받고있다(Han et al., Korean J. Appl . Entomol. 1:81-88,1996). 또 곤충병원성 선충은 이동성이 좋아 기주 탐색능력이 뛰어나고 기주범위가 넓어 해충방제에 유용한 천적으로 알려져 있다. 그러나 곤충병원성 선충을 해충의 생물적 방제인자로서 이용하기 위해서는 경제적인 대량증식법, 장기보관법, 야외포장에서의 적응력 및 제형 등의 문제점이 해결되어야 한다(Grewal, Jap. J. Nematol., 28:68-74,1998).

꿀벌부채명나방 유충은 곤충병원성 선충의 기주곤충의 증식에 가장 많이 이용되고 있다. 꿀벌부채명나방 유충을 이용한 종래기술로는 대한민국 특허출원제10-2010-0127982호에 꿀벌부채명나방의 알을 저온처리한 다음 포식성 천적의 배양에 이용하는 방법에 대하여 개시하고 있으나 저온처리 과정이 포함되어 있어 비용면에서 적합하지 않다는 문제점이 있다.

또, 대한민국 특허출원 제10-2009-0044869호에는 글리세롤 용액을 이용한 곤충병원성 선충의 장기보관방법에 대하여 개시하고 있으나, 증식에서부터 냉장보존까지의 과정이 복잡하고 시간이 많이 소요된다는 문제점이 있다.

종래의 기주곤충을 이용한 곤충병원성 선충의 대량증식 방법들 중에는 선충을 증식한 다음 다양한 소재를 통하여 제제화하거나 선충의 증식에서 보존에 이르는 단계를 하나의 단계로 단순화하기 위해 시도된 기술은 없는 실정이다.

따라서, 본 발명의 목적은 버미큐라이트 및 꿀벌부채명나방 유충을 함유하는 곤충병원성 선충 상온 보관용 배지 조성물 및 이를 이용한 곤충병원성 선충의 원스톱 대량증식 방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 곤충병원성 선충이 입상 버미큐라이트와 혼합된 다음 입상 그 자체로 처리하거나 입상을 물에 현탁하여 액상형으로 처리할 수 있도록 하는 복합형 제형을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 곤충의 생물학적 방제 방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 상기 목적은 곤충병원성 선충을 꿀벌부채명나방 유충 및 버미큐라이트를 함유한 배지 조성물에서 증식하고 입상제제를 수득하는 단계와; 상기 입상제제를 이용한 원스톱 입상형 증식방법 수립 및 효과검정 단계를 통하여 달성하였다.

본 발명은 버미큐라이트 및 꿀벌부채명나방 유충을 함유하는 곤충병원성 선충 배지 조성물 및 곤충병원성 선충의 원스톱 대량증식 방법을 제공하는 효과가 있으며, 이 밖에도 곤충병원성 선충의 입상제형을 사용목적에 따라 입상이나 액상으로 처리가 가능한 제형을 제공하는 뛰어난 효과가 있다.

도 1은 본 발명에 따른 버미큐라이트 조성물 및 버미큐라이트 조성물을 넣은 국물우림용팩과 은색지퍼팩을 촬영한 사진도이다
도 2는 본 발명에 따라 제조된 선충과 혼합처리된 버미큐라이트 조성물에서 치사된 꿀벌부채명나방 유충을 촬영한 사진도이다
도 3은 본 발명에 따라 버미큐라이트 조성물에서 증식된 곤충병원성 선충을 촬영한 사진도이다.
도 4는 본 발명에 따라 선충과 혼합처리된 버미큐라이트 조성물 팩을 수평으로 하여 액상제제를 제조하는 모습을 촬영한 사진도이다.
도 5는 본 발명에 따라 선충과 혼합처리된 버미큐라이트 조성물 팩을 수직으로 하여 액상제제를 제조하는 모습을 촬영한 사진도이다.
도 6은 본 발명에 따라 선충과 혼합처리된 버미큐라이트 조성물의 액상제제를 촬영한 사진도이다.
도 7은 본 발명에 따라 선충과 혼합처리된 버미큐라이트 조성물 밀폐용기에서 곤충병원성 선충의 감염 및 선충증식모습을 촬영한 사진도이다.
도 8은 본 발명에 따라 증식된 곤충병원성 선충이 꿀벌부채명나방 유충에서탈출하고 있는 모습을 촬영한 사진도이다
도 9는 본 발명에 따라 증식된 선충이 버미큐라이트 조성물에 유출되어 서식하고 있는 모습을 촬영한 사진도이다.
도 10은 본 발명에 따라 구획화된 팩에 꿀벌부채명나방 유충을 넣고 선충을 처리한 모습을 촬영한 사진도이다.
도 11은 본 발명에 따라 목재 절편에 곤충병원성 선충을 접종한 다음 증식하고 있는 선충을 촬영한 사진도이다.
도 12는 본 발명에 따라 목재칩에 곤충병원성 선충을 접종한 다음 증식하고 있는 선충을 촬영한 사진도이다.

본 발명은 해충방제용 곤충병원성 선충의 증식방법에 관한 것으로서 종래의 곤충을 이용한 증식방법은 증식과정이 복잡하고 증식에서 수확 내지 저장에 이르기 까지 많은 시간과 노력이 들어 대량생산에 어려움이 있을 뿐만 아니라 충 접종에서부터 트랩설치까지에서 소실되는 충수가 많다는 문제점이 있어 새로운 증식방법개발이 요구되어 왔다.

따라서 본 발명은 곤충병원성 선충의 증식이 용이하고 충과 선충을 동시에 접종하여 선충의 증식 및 보관이 한번에 이루어지는 원스톱 곤충병원성 선충 증식방법을 제공한다.

본 발명에 있어서 상기 원스톱 곤충병원성 선충 증식방법은 입상 버미큐라이트에 선충을 접종한 다음 폴리에칠렌소, 폴리프로필렌 합성소재로 구성된 부직표 또는 국물우림용팩(도 1 참조)에 담고 공시충인 꿀벌부채명나방 유충을 넣은 다음 은색지퍼팩(도 1 참조)에 넣어 항온기에서 증식하고 이에 따라 증식된 선충을 냉장조건에서 보관한다.

상기 증식된 선충의 보존온도는 5~10℃가 바람직하다.

본 발명에 있어서 공시충인 꿀벌부채명나방 유충을 담는 국물우림용팩은 작은 셀로 구분하고 각 셀에 일정수의 공시충을 첨가하고 이를 다시 은색지퍼팩에 넣은 다음 3,000마리/1mL 농도의 선충현탁액 3 mL을 핸드스프레이로 분무처리한 다음 봉합하고 이를 25℃에서 30일가량 배양시킨 다음 냉암소 조건에 보존한다.

본 발명에 따르면 곤충과 버미큐라이트를 이용하여 곤충병원성 선충을 대량증식하고 증식된 선충을 입상제형화하여 보존하여 곤충병원성 선충을 이용한 친환경적 해충방제제가 제공된다.

본 발명에 따르면 곤충은 대량사육이 간편하고 사육 비용이 경제적이므로 곤충병원성 선충 대량증식에 있어서 효율적이다.

본 발명에서 적용할 수 있는 곤충은 꿀벌부채명나방 유충, 거저리과 유충, 그리고 회양목명나방 유충이다.

본 발명에 있어서 곤충병원성 선충의 대량증식에 사용되는 버미큐라이트는 소재가 가볍고 수분보수력이 높으며 공극이 많아 곤충병원성 선충의 증식과 생존에 뛰어나 효과가 있으므로 곤충병원성 선충의 생물제형에 활용성이 매우 우수하다.

본 발명에 따르면 곤충병원성 선충의 증식과 입상제형에 사용가능한 입상의 크기는 3 내지 8 mm(대형), 1 내지 5 mm(중형), 0.3 내지 1mm(소형)가 가능하나 가장 바람직하게는 0.3 내지 1mm의 소형입상이다.

본 발명에 따르면 선충증식에 요구되는 버미큐라이트내의 수분량은 10 내지 50%이나 기주곤충의 선충침입력과 선충증식에 적합한 수분량은 10 내지 25% 내외가 바람직하나, 가장 바람직하게는 20% 이다.

본 발명에서 적용할 수 있는 선충은 Steinernematid 선충의 Steinernema속과 Neosteinernema속, 그리고 Heterorhabditid 선충의 Heterorhabditis속 이다.

이하, 본 발명의 구체적인 방법을 실시예와 실험예를 들어 상세히 설명하고자 하지만 본 발명의 권리범위는 이들 예에만 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 곤충병원성 선충의 대량증식용 배지 조성물제조 및 곤충병원성 선충의 증식력 검정

꿀벌부채명나방 유충에서의 곤충병원성 선충의 증식수를 알아보고 곤충병원성 선충 Steinernema carpocapsae이 처리된 버미큐라이트 조성물에서의 공시충인 꿀벌부채명나방의 감염효과를 검정하였으며 버미큐라이트 조성물에 첨가된 꿀벌부채명나방 유충에서의 선충유출 정도를 조사하였다.

제조예 1: 본 발명 곤충병원성 선충 보관용 배지 조성물

본 발명 곤충병원성 선충 보관용 배지 조성물은 0.3 내지 1.0mm 크기의 입상 버미큐라이트 500 mL에 곤충병원성 선충 3,0000마리를 접종한 다음 꿀벌부채명나방 10마리 및 20마리를 각각 투입하고 전제 배지조성물의 수분함량이 20중량%가 되도록 조성물을 제조하였다.

제조예 2: 현탁 선충액

상기 제조예 1의 배지 조성물에서 증식된 선충 Steinernema carpocapsae 입상형을 토양관주용 또는 엽면살포용 등 사용목적에 따라 살포면적을 고려하여 입상제형 제형500mL 당 물2L를 첨가하여 이를 현탁하여 현탁액을 수득한 다음 현탁상등액을 취하여 살포용기에 붓는다. 이러한 방법을 2-3회 반복하여 수집하여 본 발명 선충현탁액을 제조하였다.

실험예 1: 본 발명에 따른 꿀벌부채명나방 유충에 감염시킨 곤충병원성 선충의 증식력 조사

상기 제조예 1에 따라 제조된 본 발명 곤충병원성 선충의 보관용 배지 조성물에서의 곤충병원성 선충의 증식수를 조사하였다.

5개의 페트리디쉬 바닥에 여과지 1매를 각각 깐 다음 꿀벌부채명나방 유충을 페트리디쉬 1개당 1마리씩 여과지 위에 서식시키고 이와 별도로 상기 제조예 2에 따라 제조된 곤충병원성 선충 Steinernema carpocapsae 200마리/1mL를 꿀벌부채명나방 유충 1마리 당 100마리의 곤충 병원성 선충이 감염되게 접종한 다음 25℃항온조건에서 7일간 배양하였다.

상기 배양이 끝난 다음 꿀벌부채명나방에 감염된 곤충병원성 선충의 증식수를 하이트트랩법을 이용하여 조사하고 그 결과를 하기 [표 1]에 나타냈다.

본 발명에 따른 꿀벌부채명나방 유충에서의 선충증식 수

반복	1일차(마리)	2일차(마리)	계(마리)
1	79,333	27,333	106,666
2	84,667	40,833	125,500
3	113,667	81,667	195,334
4	147,333	177,667	325,000
5	103,000	62,883	165,883

실험예 2 : 본 발명에 따른 꿀벌부채명나방 감염효과 검정

선충이 처리된 버미큐라이트에서의 꿀벌부채명나방 유충의 선충감염효과를 조사하였다. 수분함량이 20중량%로 조절된 선충 Steinernema carpocapsae미처리 버미큐라이트 200mL에 500마리 선충을 접종하여 제조한 버미큐라이트 조성물 3g([표 2] 선충감염원 500), 1,000마리 선충을 접종한 버미큐라이트 조성물 4g([표 2] 선충감염원 1000), 2,000마리 선충을 접종한 버미큐라이트 조성물 5g([표 2] 선충감염원 2000)을 각각 혼합한 다음 뚜껑이 있는 폴리에칠렌통에 담고 꿀벌부채명나방 유충 10마리씩을 각각 넣어 25℃ 항온기에서 24시간 동안 배양한 다음 각 선충감염에 따른 꿀벌부채명나방 유충의 치사율을 조사하였다. 대조구는 수분함량이 20중량%로 조절된 선충 Steinernema carpocapsae미처리 버미큐라이트 조성물로 하였다([표 2] 무처리)

실험결과 도 2 및 하기 [표 2]에 나타낸 바와 같이 24시간 경과 후에 전체 선충 처리구에서 선충에 의해 100% 치사한 것으로 나타났다.

접종원 처리량별 꿀벌부채명나방 유충의 선충치사 수 조사

처 리	선충감염에 따른 치사율(%)
	1반복	2반복	3반복	평균
선충감염원 500	100	100	100	100
선충감염원 1000	100	100	100	100
선충감염원 2000	100	100	100	100
무처리 0	0	0	0	0

실험예 3 : 본 발명 재지 조성물에서의 꿀벌부채명나방 유충의 선충 유출효과

상기 실험예 1에 따라 1회용 페트리디쉬에 꿀벌부채명나방 유충 10마리를 넣고 상기 제조예 2에 따라 제조된 1,000 마리/mL 선충 현탁액 1mL을 접종하여 25℃ 항온기에서 7일 동안 각각 배양하였다. 선충에 감염된 꿀벌부채명나방 유충 1마리를 수분함량 20중량%로 조정된 버미큐라이트 150mL 및 직경 15cm 유리샤아레에 시계접시를 넣고 시계접시에 직경90mm 여과지 1매를 올려놓은 다음 선충에 감염된 유충 1마리를 올려놓아 유출되는 선충수를 조사하였다.

실험결과 도 3 및 하기 [표 3]에 나타낸 바와 같이 선충감염 꿀벌부채명나방 유충으로부터 선충의 유출율은 100% 였으며, 하기 [표 4]에 나타낸 바와 같이 꿀벌부채명나방 1마리 당 선충 Steinernema carpocapsae유출수는 하이트트랩법에서는 유충 1마리당 234,000마리 수준이었으며 버미큐라이트 처리법에서는 255,000마리의 선충이 검출되어 선충 Steinernema carpocapsae유출율이 8.9% 증가한 것으로 나타났다.

본 발명에 따른 꿀벌부채명나방 유충에서의 곤충병원성 선충의 유출효과

처 리	감염유충의 선충 유출율(%)
	1반복	2반복	3반복	평균
종래 선충배양 방법(하이트트랩법)	100	100	100	100
본 발명에 따른 선충배양 방법	100	100	100	100

본 발명에 따른 꿀벌부채명나방 유충에서의 곤충병원성 선충 유출 수

처 리	꿀벌부채명나방 유충 1마리당 곤충병원성 선충 유출 수 (마리)
	1반복	2반복	3반복	평균
종래 선충배양 방법(하이트트랩법)	185,000	283,000	235,000	234,000
본 발명에 따른 선충배양 방법	224,000	291,000	251,000	255,000

따라서 본 발명에 따른 선충 배양방법은 종래 배양법인 하이트트랩 방법보다 선충증식율 증가에 있어서 현저한 효과가 확인되었다.

종래 하이트트랩 선충 배양방법이 선충접종, 감염충 수거, 하이트트랩 설치, 선충수확, 세척, 보존 순서에 따라 복잡한 과정을 포함하는 반면에 본 발명에 따른 선충 배양방법은 버미큐라이트에 선충 및 공시충을 혼합처리하고 밀봉하는 단계만으로 증식 및 보존이 가능한 선충배양 방법이다.

따라서 본 발명에 따른 선충 배양방법은 선충의 증식과 동시에 상온보존이 가능한 경제적인 제품생산방법이다.

< 실시예 2> 본 발명에 따른 곤충병원성 선충의 대량증식 방법

곤충자원을 활용하여 곤충병원성 선충을 보다 효율적인 생산 및 제형화는 본 발명에 따라 제조된 선충이 혼합된 버미큐라이트(제조예 1)에 상기 제조예 2에 따라 제조된 현탁 선충액 3,000마리/mL을 3mL 접종하거나 또는 선충비감염 꿀벌부채나방 유충을 접종한 다음 곤충이 버미큐라이트내 선충과 접촉할 수 있는 기회를 높이기 위해 평면망을 버미큐라이트 표면에 밀착되게 처리하였다.

실험예4 : 본 발명에 다른 평면망 처리가 기주곤충의 선충감염에 미치는 영향

뚜껑이 있는 원형의 아크릴통에 수분함량이 20중량%로 제조된 버미큐라이트를 400mL을 넣은 스텐체망(화인아트, 한국)에 갈색거저리 노숙유충 10g처리구 및 꿀벌부채명나방 유충 20마리를 각각 방사한 다음 상기 제조예 2에 따라 제조된 선충 현탁액 3,000마리/mL을 3mL씩 분무처리하였다. 그리고 같은 스텐체망을 덮어 기주곤충이 탈출하지 못하게 하였으며 대조구에는 망을 처리하지 않고 25℃에서 5일간 보관한 다음 기주곤충의 감염율을 조사하였다.

실험결과 하기 [표 5]에 나타낸 바와 같이 스텐체망을 처리하였을 때 갈색거저리 처리시에는 86.0%, 꿀벌부채명나방 유충 처리시에는 100%의 선충감염율을 나타냈다. 그러나 스텐체망을 처리하지 않았을 경우에는 갈색거저리 처리구에서는 54%를, 꿀벌부채명나방 처리구에서는 75%의 선충감염율을 보였다. 이와 같이 본 발명에 따라 스텐체망을 처리할 경우 선충감염율이 높은 것은 공시충이 선충이 처리된 버미큐라이트에 접촉되는 기회가 높아 선충의 침입력이 높게 나타난 것으로 사료된다.

본 발명에 따른 선충증식원의 조건별 곤충병원성 선충 감염효과

감염원의 조건	기주곤충	조사충 수 (마리)	치사충 수 (마리)	선충 감염 충 수(마리)	치사충에 대한 감염율 (%)	조사충수에 대한 감염율 (%)
망 처리	갈색거저리 유충	50	50	43	86.0	86.0
	꿀벌부채명나방 유충	20	20	20	100	100
망 무처리	갈색거저리 유충	50	38	27	71.1	54.0
	꿀벌부채명나방 유충	20	15	15	100	75.0

< 실시예 3> 본 발명 입상제형의 곤충병원성 선충의 분리검출팩 조성물

본 발명 곤충병원성 선충의 입상제형 제조시에 선충을 액상으로 처리하고자 할 경우 가장 효율적으로 분리 검출할 수 있는 입상제형 팩 선발을 수행하였다.

본 발명 배양 조성물은 검출되지 않으면서 선충만을 쉽게 분리검출할 수 있는 입상제형 보존용 팩 조성물을 선발하였다.

실험예 5: 본 발명에 따른 팩 조성물에 다른 선충 검출율 조사

본 발명 곤충병원성 선충의 입상제형을 사용목적에 따라 액상현탁액으로 처리하기 위해서는 입상에 서식하는 선충의 검출이 좋아야 한다. 입상형 제형을 처리량별, 처리시간별, 침지방법에 따른 검출 효과를 알아보기 위하여 입상형 제형을 국물우림용팩에 넣어 선충 검출수를 조사하였다.

수분함량이 20중량%로 제조된 입상 버미큐라이트 100 mL 및 200mL에 선충 50,000마리를 각각 접종한 다음 접종물을 폴리에칠렌, 폴리프로필렌 복합섬유의 국물팩에 각각 100mL과 200mL용량으로 포장하였다. 상기 포장된 조성물을 25℃에서 24시간 동안 보관한 다음 물이 담긴 원형의 아크릴통에 체를 올려놓고 팩을 담아 물에 잠기게 처리하고는 12시간 및 24시간 후에 물에서 검출되는 선충수를 조사하였다.

실험결과 하기 [표 6]에 나타낸 바와 같이 선충 검출은 도 4와 같이 수평처리했을 때는 12시간 경과후에 100mL 처리구에서 50%가 검출되었고 24시간 후에는 80%가 검출되었으며, 도 5와 같이 수직 처리했을 때 12시간 후에 30%가, 그리고 24시간 후에는 50% 검출되는 것으로 나타나 조성물의 선충검출 효과는 소량의 수평처리가 좋은 것으로 나타났다.

본 발명에 따라 배양된 선충의 검출율

검출방법	팩의 크기	처리량(mL)	누적 검출 수 x1000, (검출율 %)
			12시간	24시간
수평처리	(18 X 25 ㎝)	100	250(50)	400(80)
	(18 X 12 ㎝)	200	200(40)	250(50)
수직처리	(18 X 25 ㎝)	100	150(30)	190(38)
	(18 X 12 ㎝)	200	75(15)	150(30)

실험예6 : 본 발명에 따른 팩 조성물에서 배양되 선충의 상온보존력

본 발명 곤충병원성 선충 Steinernema carpocapsae상온보관용 배지 조성물에서 배양된 선충의 상온조건에서의 지속력을 검정하였다.

본 발명 상기 제조예 1에 따라 제조된 곤충병원성 선충 보관용 배지 조성물에서 선충을 배양시킨 다음 선충을 포함하는 배양 조성물인 입상제제를 은색지퍼팩에 넣어 25℃항온기에서 60일동안 보관하였다. 25℃항온기에 보관 후 15, 30, 45, 60일 경과 후 각각 수분 20%함량 중량% 버미큐라이트 150mL 1g당 선충수가 679~734마리인 상기 은색지퍼팩에서 보관된 본 발명 입상제제를 1g 및 2g 씩 각각 혼합처리한 다음 꿀벌부채명나방 유충을 10마리씩 넣어 4일동안 처리하였고 도 7 내지 10에 선충의 증식과정을 나타냈다. 유충 처리 4일 후 꿀벌부채나방 유충의 치사율을 조사하고 치사된 충으로부터 선충감염여부를 확인하였다.

실험결과 하기 [표 7]에 나타낸 바와 같이 선충을 처리하지 않은 대조구에서는 꿀벌부채명나방 유충의 치사가 일어나지 않았으나, 본 발명 입상제제를 처리한 모든 실험구에서는 100%의 꿀벌부채명나방의 치사율을 확인할 수 있었다.

본 발명에 따른 선충 임상제형의 보관기간별 꿀벌부채명나방 유충의 치사율

처리량	보관기간 경과일별 치사율 (선충감염율, %)
	15일	30일	45일	60일
입상 선충제형 1g	100(100)	100(100)	100(100)	100
입상 선충제형 2g	100(100	100(100	100(100	100
무처리	0	0	0	0

< 실시예 4 > 본 발명 곤충병원성 선충의 증식 보존 원스톱방법

그물망 팩을 이용하여 공시충인 꿀벌부채나방 유충을 10마리씩 넣을 수 있는 방을 만든 다음 상기 제조예 2에 따라 제조된 선충현탁액 3,000마리/mL을 3mL씩 각각 분무처리하여 은색지퍼팩에 수분이 있는 스폰지(다이소아성산업, 매직스폰지) 1매를 깔고 그 위해 상기 선충현탁액이 접종된 그물망 팩을 올린다음 밀봉하고 이를 25℃에서 30일 동안 증식시킨다. 대조구로는 도 11 내지 12에 나타낸 바와 같이 0.5mm 뚜께의 얇은 나무박판지(대관령물산)를 이면지파쇄기로 파쇄한 절편과 목재칩(버드나무칩, 자체제조)에 꿀벌부채명나방 유충을 넣고 상기 제조예 2에 따라 제조된 선충현탁액 3,000마리/mL을 3mL씩 각각 분무처리하여 25℃에서 30일 동안 선충을 증식시킨 후 보관한다.

증식이 완료되는 시점인 선충처리 20일~30일 경과 후에 상온이나 냉장상태에 보존한다. 이때 팩의 크기와 조성물의 량, 공시충의 수는 증식량에 따라 달리할 수도 있으며 스폰지 대신 탈지면이나 기타 수분을 함유할 수 있는 조성물이면 어느 것이여도 무방하다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명은 곤충병원성 선충의 원스톱 대량증식 방법에 관한 것으로 해충방제용 천적생물인 곤충병원성 선충을 이용한 농림해충의 친환경적방제제를 제공함으로써 농림산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

Claims (6)

1. 입상 버미큐라이트와 곤충병원성 선충과 및 꿀벌부채명나방 유충을 함유하는 것을 특징으로 하는 수분함량 20중량%의 곤충병원성 선충 보관용 배지 조성물.
2. 제 1항의 곤충병원성 선충 보관용 배지 조성물을 국물우림용팩 또는 은색지퍼팩에 넣고 밀폐하여 밀폐용기를 수득하는 단계와; 상기 밀폐 용기를 25℃ 항온기에 보관하여 곤충병원성 선충 배식물을 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 곤충병원성 선충의 대량증식 방법.
   
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4. 제 1항의 곤충병원성 선충 보관용 배지 조성물을 물에 현탁하여 제조된 것이 특징인 곤충병원성 선충 보관용 액상배지 조성물.
   
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