KR101471928B1 - 세포 배양용 용기 - Google Patents

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    • C12N5/0062—General methods for three-dimensional culture

Abstract

본 발명에 따른 세포 배양 용기는 성체 줄기세포를 점착하여 줄기 세포를 증식 및 분화시키기 위한 세포 배양면을 포함하는 세포 배양용 용기에 있어서, 세포 배양용 용기는 복수의 기둥 또는 기공을 포함하고, 기둥 또는 기공의 크기는 점진적으로 변화하도록 배치되어 있다.

Description

세포 배양용 용기{CELL CULTURE CONTAINER}
본 발명은 세포 배양용 용기에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 세포 배양면에 3차원 구조물을 형성하여 세포의 부착, 증식 및 분화 효율을 향상시킨 세포 배양용 용기에 관한 것이다.
세포의 증식, 이동 및 분화에 관한 연구는 재생의학과 조직공학 분야에서 중요시 되고 있는 연구로, 이러한 세포 거동 연구를 위해서 다양한 화학적 처리를 해왔다.
그러나 화학적 처리는 결과적으로 세포에 좋지 않은 영향을 미칠 수 있어 최근에는 물리학적 환경의 변화로도 세포의 거동에 영향을 줄 수 있다는 연구가 시도되고 있다.
물리학적 환경 변화는 세포 배양 용기의 배양면의 강성도와 같은 기계적 특성을 조절 함으로서, 세포의 표면 선호도 등을 밝혀낼 수 있다.
한편, 기존의 세포 배양면에 특정 구조물을 형성하기 위해서는 금속 몰드를 이용한 핫 엠보싱 공정, 사출성형 방법을 이용하였다. 하지만, 금속 몰드를 제작하기 위해서는 비용과 시간이 많이 드는 문제점이 있다.
본 발명은 상기한 문제점을 해결하기 위한 것으로 세포 배양 용기의 물리학적 환경 변화를 통해서 세포 거동을 연구할 수 있는 세포 배양면을 가지는 세포 배양 용기를 제공하는 것이다.
상기한 과제를 달성하기 위한 본 발명에 따른 세포 배양 용기는 성체 줄기세포를 점착하여 줄기 세포를 증식 및 분화시키기 위한 세포 배양면을 포함하는 세포 배양용 용기에 있어서, 세포 배양용 용기는 복수의 기둥 또는 기공을 포함하고, 기둥 또는 기공의 크기는 점진적으로 변화하도록 배치되어 있다.
상기 기공 또는 기둥은 제1 방향으로 행을 이루고, 이웃하는 행은 서로 나란할 수 있다.
상기 크기는 상기 기둥 또는 기공의 직경 또는 평면적일 수 있다.
상기 기둥 또는 기공의 직경은 500nm 내지 150mm의 범위 내에서 점진적으로 변화하도록 배치될 수 있다.
상기 기공 사이의 간격 또는 기둥 사이의 간격은 일정하고, 간격은 500nm 내지 160mm의 범위일 수 있다.
상기한 과제를 달성하기 위한 다른 세포 배양용 용기는 성체 줄기세포를 점착하여 줄기 세포를 증식 및 분화시키기 위한 세포 배양면을 포함하는 세포 배양용 용기에 있어서, 세포 배양용 용기는 복수의 기둥 또는 기공을 포함하고, 기둥 사이의 간격 또는 기공 사이의 간격이 점진적으로 변화하도록 배치되어 있다.
상기 기공 또는 기둥은 제1 방향으로 행을 이루고, 이웃하는 행은 서로 나란할 수 있다.
상기 기둥 사이의 간격 또는 기공 사이의 간격은 500nm 내지 160mm의 범위일 수 있다.
상기 기둥 또는 기공의 크기는 일정할 수 있다.
상기 크기는 기둥 또는 기공의 직경 또는 평면적일 수 있다.
상기 기둥 또는 기공의 직경은 500nm 내지 150mm의 범위일 수 있다.
상기 기둥의 높이 또는 기공의 깊이는 일정하고, 기둥의 높이 또는 기공의 깊이는 500nm 내지 100mm의 범위일 수 있다.
상기 기둥 또는 기공의 종횡비는 0.003 내지 200의 범위일 수 있다.
상기 기둥 또는 기공의 평면 모양은 원형, 타원형, 다각형 및 비정형 도형 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
상기 행을 이루는 기공 또는 기둥은 동일한 평면 모양을 가질 수 있다.
이웃하는 행의 기공 또는 기둥은 서로 다른 평면 모양을 가질 수 있다.
상기 행을 이루는 기공 또는 기둥의 평면 모양은 랜덤할 수 있다.
상기 기공 및 기둥의 평면 모양은 복수의 행을 단위로 동일한 평면 모양을 가질 수 있다.
본 발명의 한 실시예에 따른 세포 배양용 용기에 의하면 다양한 크기의 구조물을 가지도록 세포 배양면을 포함함으로써 다양한 물리학적 환경 변화를 용이하게 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명의 한 실시예에 따른 세포 배양용 용기를 나타내는 개략도이다.
도 2는 본 발명의 한 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 일면에 형성된 세포 배양면을 확대하여 나타내는 도면이다.
도 3 내지 도 6은 본 발명의 다른 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 단면도로, 도 2의 III-III선을 따라 절단한 단면도이다.
도 7 내지 9는 본 발명의 다른 실시예에 따른 구조물의 평면 형상이다.
도 10은 본 발명의 실시예들에 따른 세포 배양 용기에서 지방 유래 줄기 세포의 증식률을 나타낸 그래프이다.
도 11은 본 발명의 세포 배양 용기의 구조물에 따른 지방유래줄기 세포의 증식 상태를 도시한 사진이다.
도 12는 본 발명에 따른 세포 배양 용기의 구조물에 따른 지방유래 줄기 세포의 골분화 상태를 도시한 사진이다.
도 13은 본 발명의 한 실시예에 따라 세포 배양용 용기를 제조하는 공정을 설명하기 위한 순서도이다.
도 14 내지 도 16은 본 발명의 한 실시예에 따라 세포 배양용 용기를 제조하는 공정을 순차적으로 나타내는 도면이다.
도 17은 본 발명의 실시예에 따른 제조 방법으로 형성한 PS 몰드의 사진이다.
도 18는 본 발명의 실시예에 따른 희생 몰드의 3D 이미지이다.
도 19는 도 18의 희생 몰드로 형성한 세포 배양면에 형성된 구조물의 핫 엠보싱 공정의 온도 변화에 따른 3D 이미지이다.
도 20은 본 발명에 따른 제조 방법의 핫 엠보싱 공정의 온도에 따른 구조물의 높이를 측정한 그래프이다.
도 21은 본 발명의 한 실시예에 따른 구조물의 전계방사 주사전자현미경 사진이다.
그러면 첨부한 도면을 참고로 하여 본 발명의 실시예에 대하여 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
도면에서 여러 층 및 영역을 명확하게 표현하기 위하여 두께를 확대하여 나타내었다. 명세서 전체를 통하여 유사한 부분에 대해서는 동일한 도면 부호를 붙였다. 층, 막, 영역, 판 등의 부분이 다른 부분 "위에" 있다고 할 때, 이는 다른 부분 "바로 위에" 있는 경우 뿐만 아니라 그 중간에 또 다른 부분이 있는 경우도 포함한다. 반대로 어떤 부분이 다른 부분 "바로 위에" 있다고 할 때에는 중간에 다른 부분이 없는 것을 뜻한다.
본 발명을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였으며, 명세서 전체를 통하여 동일 또는 유사한 구성요소에 대해서는 동일한 참조 부호를 붙이도록 한다.
도 1은 본 발명의 한 실시예에 따른 세포 배양용 용기를 나타내는 개략도이다.
도 1을 참조하면, 본 실시예에 따른 세포 배양용 용기(100)는 그 일면에 세포 배양면(11)을 포함한다. 상기 일면은 세포 배양용 용기(100)의 바닥면일 수 있다.
세포 배양면(11)은 인공적으로 세포의 증식 및 분화 효율을 향상시키기 위한 것으로, 배양하고자 하는 세포를 세포 배양면 상에 점착시켜 원하는 방향으로 분화를 유도하게 된다. 성체 줄기세포에는 골수유래 줄기세포, 태반유래 줄기세포, 지방유래 줄기세포 등이 있는데, 본 실시예에 따른 세포 배양용 용기는 이러한 성체 줄기세포의 증식 효율을 향상시키고, 목적 세포로의 분화 효율을 향상시키기 위한 것이다.
도 2 내지 9를 참조하여 본 발명의 다양한 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 세포 배양면에 대해서 구체적으로 설명한다.
도 2는 본 발명의 한 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 일면에 형성된 세포 배양면을 확대하여 나타내는 도면이고, 도 3 내지 도 6은 본 발명의 다른 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 단면도로, 도 2의 III-III선을 따라 절단한 단면도이고, 도 7 내지 9는 본 발명의 다른 실시예에 따른 구조물의 평면 형상이다.
도 2 내지 도 6을 참고하면, 세포 배양면(11)에는 세포가 점착할 수 있는 구조물(22)이 형성되어 있다.
구조물(22)은 세포 배양면의 표면으로부터 도 3 및 도 4에서와 같이 오목한 복수의 기공 또는 도 5 및 도 6에서와 같이 돌출한 복수의 기둥을 포함한다.
도 3 및 도 4의 기공(202)은 세포 배양면의 하부로 오목하게 형성되어 있다. 각각의 기공(202)은 관형태로 길게 뻗어 있으며, 평면 모양은 원형, 타원형, 다각형 및 비정형 도형 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
도 3에서와 같이 기공(202)의 직경 또는 평면적과 같은 크기는 점진적으로 변화하도록 배치될 수 있다.
기공(202)은 500nm 내지 150㎛ 범위에서 점진적으로 직경(D1)을 변화시킬 수 있도록 디자인 될 수 있으며, 기공(202)의 깊이(H1)는 500nm 내지 100㎛ 범위로 형성될 수 있다. 이때 이웃하는 기공 사이의 간격(S1)은 500nm 내지 160㎛ 범위 내에서 일정한 값을 가지며 기공의 종횡비는 0.003 내지 200일 수 있다.
또한, 도 4에서와 같이 기공(202)은 동일한 직경(D1)을 가지며 이웃하는 기공(202) 사이의 간격(S1)이 점진적으로 변화하도록 형성될 수 있다. 이때, 직경은 500nm 내지 150㎛ 범위일 수 있으며, 기공(202)의 깊이(H1)는 500nm 내지 100㎛ 범위로 형성될 수 있다. 그리고 기공 사이의 간격(S1)은 500nm 내지 160㎛ 범위내에서 일정한 값을 가지며 기공의 종횡비는 0.003 내지 200일 수 있다.
도 5 및 도 6의 기둥(204)은 세포 배양면으로부터 상부로 돌출되어 있다. 각각의 기둥(204)은 길게 뻗어 있으며, 평면 모양은 원형, 타원형, 다각형 및 비정형 도형 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
도 5에서와 같이, 기둥(204)의 직경 또는 평면적과 같은 크기는 점진적으로 변화하도록 배치될 수 있다.
기둥(204)은 500nm 내지 150㎛ 범위에서 점층적으로 직경(D2)을 변화시킬 수 있도록 디자인 될 수 있으며, 기둥(204)의 깊이(H2)는 500nm 내지 100㎛ 범위로 형성될 수 있다. 이때 이웃하는 기둥 사이의 간격(S2)은 500nm 내지 160㎛ 범위 내에서 일정한 값을 가지며 기둥의 종횡비는 0.003 내지 200일 수 있다.
또한, 도 6에서와 같이 기둥(204)은 동일한 직경(D2)을 가지며 이웃하는 기둥(204) 사이의 간격(S2)이 점진적으로 변화하도록 형성될 수 있다. 이때, 직경은 500nm 내지 150㎛ 범위일 수 있으며, 기둥(204)의 깊이(H2)는 500nm 내지 100㎛ 범위로 형성될 수 있다. 그리고 기둥 사이의 간격(S2)은 500nm 내지 160㎛ 범위내에서 일정한 값을 가지며 기둥의 종횡비는 0.003 내지 200일 수 있다.
도 3 내지 도 6의 기공 및 기둥은 도 7 내지 도 9에서와 같이 다양한 형태로 배치될 수 있다. 복수의 기공 및 기둥은 상호 이격 배치되어 제1 방향(X)으로 행을 이루고, 제1 방향(X)과 교차하는 제2 방향(Y)으로 복수의 행을 이룰 수 있고, 이웃하는 행은 서로 나란할 수 있다. 각 행을 이루는 기공(202) 또는 기둥(204)은 도 7에서와 같이 동일한 평면 모양을 가질 수 있다.
그리고 이웃하는 행의 기공 또는 기둥은 서로 다른 평면 모양을 가질 수 있으며, 도 8에서와 같이 복수의 행을 단위로 동일한 평면 모양을 가질 수 있다. 또한, 도 9에서와 같이 각 행을 이루는 기공의 평면 모양은 랜덤할 수 있다.
이처럼 도 7 내지 도 9에서와 같이 기공(202) 및 기둥(204)의 평면 모양은 다양하게 배열될 수 있으며 기공(202) 또는 기둥(204)의 크기는 점진적으로 변화하도록 배치된다.
즉, 기공 또는 기둥의 크기는 점진적으로 증가하거나 점진적으로 감소할 수 있다. 이때, 크기는 기공 또는 기둥의 부피, 평면적, 직경, 높이 및 깊이 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
다시 도 1 내지 3을 참조하면, 세포 배양면(11)은 열가소성 수지인 폴리스티렌(polystyrene, PS)으로 형성될 수 있으며, 폴리메틸메타크릴레이트(polymethyl methacrylate, PMMA), 폴리카보네이트(polycarbonate, PC) 등의 열가소성 수지 또는 열경화성 수지를 사용할 수 있다. 또한 폴리디메틸실록산과 같은 탄성중합체로 형성할 수도 있다.
본 발명에서와 같이 다수의 구조물(22)들이 다양한 크기와 간격으로 배열됨으로써 세포의 부착, 증식 및 분화에 영향을 주어 세포가 선호하는 구조물의 형태를 용이하게 확인할 수 있다. 그리고 세포 배양면 상에서 세포의 부착력을 향상시키기 위한 표면의 플라스마 처리, 오존 처리 또는 세포 점착 증진 물질의 코팅 등의 추가적인 처리를 할 수도 있다.
도 10은 본 발명의 실시예들에 따른 세포 배양 용기에서 지방 유래 줄기 세포의 증식률을 나타낸 그래프이다.
여기서 본 발명에 따른 세포 배양 용기의 세포 배양면은 서로 다른 간격 및 직경을 가지는 구조물을 포함한다. 실시예 1과 2에서 기둥 사이의 간격은 각각 4㎛와 12㎛로 고정되며 기둥의 직경은 2㎛부터 150㎛까지 점진적으로 변화한다. 그리고 실시예 3과 4에서 기공 사이의 간격은 각각 4㎛와 12㎛로 고정되며 기공의 직경은 2㎛부터 150㎛까지 점진적으로 변화한다. 이때, 실시예 1 내지 4의 기공의 깊이 또는 기둥의 높이는 1.4㎛이다.
도 10을 참조할 때, 실시예 1 내지 4는 1일부터 4일까지 유사한 증식률을 나타내었다. 그러나 4일이 지난 후부터 실시예 1 및 2의 증식률은 실시예 3 및 4의 증식률보다 크게 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 즉, 세포에 따라서 기공 또는 기둥의 증식률이 다르게 나타나는 것을 확인할 수 있었다.
도 11은 본 발명의 세포 배양 용기의 구조물에 따른 지방유래줄기 세포의 증식 상태를 도시한 사진이다.
여기서 지방유래줄기 세포의 배양 후 5일째 이동 특성을 나타낸 사진이다.
도 11의 (A) 및 (B)는 각각 직경이 12㎛인 기둥과 기공을 포함하고, 기둥 사이의 간격 및 기공 사이의 간격을 2㎛ 내지 160㎛ 범위 내에서 점진적으로 변화하도록 배치하였다. 그리고 도 11의 (C) 및 (D)는 각각 기둥 사이의 간격 및 기공 사이의 간격이 12㎛이고, 기둥 및 기공의 직경이 2㎛ 내지 150㎛ 범위 내에서 점진적으로 변화하도록 배치하였다.
도 11의 (A) 내지 (D)를 참조할 때 지방유래줄기 세포는 기둥 및 기공의 간격, 직경에 따라서 세포의 이동 특성 및 증식률이 다름을 확인할 수 있었다. 이처럼 본 발명의 실시예에서와 같이 기둥 및 기공을 점진적으로 배치시키면 세포의 특성에 따라서 이동 특성 및 증식 상태를 용이하게 파악할 수 있다.
도 12는 본 발명에 따른 세포 배양 용기의 구조물에 따른 지방유래 줄기 세포의 골분화 상태를 도시한 사진이다.
도 12의 (A)는 기둥 사이의 간격은 일정하고 기둥의 직경을 점진적으로 변화시켰고, (B)는 기공 사이의 간격은 일정하고 기공의 직경을 점진적으로 변화시켰다. 도 12의 (A) 및 도 (B)에서 골세포 분화는 보라색으로 확인할 수 있다.
도 12의 (A)를 참조하면 기둥 구조물에서는 기둥의 직경이 클수록 보라색이 증가하여 골세포 분화가 직경이 작은 기둥에 비해서 많이 진행된 것을 알 수 있었다. 그리고 도 12의 (B)를 참조하면 기공 구조물에서는 기공의 직경이 작을수록 보라색이 증가하여 골세포 분화가 직경이 큰 기공에 비해서 많이 진행된 것을 알 수 있었다.
이처럼 한 세포 배양 용기 내에서 세포 배양면에 형성되는 구조물의 크기를 다양하게 조절함으로써 하나의 세포 배양 용기에서 세포의 이동, 증식 및 분화의 선호도를 용이하게 파악할 수 있다. 이후 세포의 선호도에 따라서 세포 배양 용기를 선택하면 넓은 면적으로 안정적으로 세포가 세포 배양면 표면에 점착되는 효과를 얻을 수 있어, 세포 배양용 용기에서 성체 줄기세포를 배양하는 경우, 세포 분화 효율을 증가시키고, 많은 수의 세포를 얻을 수 있을 것이다.
이하에서는 도 13 내지 도 17을 참조하여 본 발명의 한 실시예에 따라 세포 배양용 용기를 제조하는 방법을 설명한다.
도 13은 본 발명의 한 실시예에 따라 세포 배양용 용기를 제조하는 공정을 설명하기 위한 순서도이다.
도 13을 참조하면, 본 발명의 한 실시예에 따른 세포 배양용 용기는 기판 위에 사진공정으로 희생 구조물을 형성(S100)한다. 그리고 희생 구조물을 덮는 고분자 물질로 희생 몰드(S102)를 형성한다. 이후, 희생 구조물과 희생 몰드를 분리한 다음 고분자층을 희생 몰드로 가압하여 기공 또는 기둥을 포함하는 구조물(22)이 형성된 세포 배양면을 완성(S104)한다.
이하에서는 도 14 내지 도 16와 함께 도 13을 참조하여 좀 더 구체적으로 설명한다.
도 14 내지 도 16은 본 발명의 한 실시예에 따라 세포 배양용 용기를 제조하는 공정을 순차적으로 나타내는 도면이고, 도 17은 본 발명의 한 실시예에 따른 구조물의 전계방사 주사전자현미경 사진이다.
도 14 및 도 13에 도시한 바와 같이, 같이 기판(10) 위에 감광제를 도포한 후 노광 및 현상하여 희생 구조물(20)을 형성한다. 기판(10)은 실리콘 기판일 수 있다.
그런 다음 도 15 및 도 13에 도시한 바와 같이 희생 구조물(20)을 덮도록 열경화성 고분자를 도포하여 고분자층을 형성한 후 경화시켜 희생 몰드(30)를 형성한다.
그런 다음 도 16 및 도 13에 도시한 바와 같이 희생 구조물(20)과 희생 몰드(30)를 분리한다. 이후 희생 몰드(30) 위에 열가소성 고분자, 열경화성 고분자 또는 탄성중합체로 고분자층을 형성한다. 그리고 핫 엠보싱 공정으로 고분자층을 가압하여 기공 또는 기둥을 포함하는 구조물(22)이 형성된 세포 배양면을 완성한다.
이때, 엠보싱 온도는 열가소성 고분자층의 유리 전이 온도(glass transition temperature: Tg) 보다 높은 온도에서, 0.4MPa 내지 1.6MPa의 압력으로 가압할 수 있다. 예를 들어, 열가소성 고분자층은 폴리스티렌으로 형성할 수 있으며 폴리스티렌(PS)의 유리 전이 온도 보다 높은 100℃ 내지 150℃의 온도에서 진행할 수 있다.
도 17은 본 발명의 실시예에 따른 제조 방법으로 형성한 구조물을 가지는 PS 배양면의 사진이다.
도 17는 본 발명의 실시예에 따라서 PS로 세포 배양면을 형성한 것으로 본 발명의 제조 방법에서 핫 엠보싱 공정시 각각 0.4MPa와 1.6MPa의 압력으로 가압하였다.
이때, 희생 몰드는 PDMS로 제조하였다.
도 17의 (A)를 참조하면, 0.4MPa로 가압할 때에는 제조된 PS 세포 배양면은 PDMS 몰드와 크기 차이가 나지 않으나, 1.6MPa로 가압할 때에는 PDMS 몰드에 비해서 PS로 제조한 세포 배양면의 상부 직경이 증가한 것을 확인할 수 있었다.
도 18은 본 발명의 실시예에 따른 희생 몰드의 3D 이미지이고, 도 19는 도 18의 희생 몰드로 형성한 세포 배양면에 형성된 구조물의 핫 엠보싱 공정의 온도 변화에 따른 3D 이미지이다.
도 18의 희생 몰드는 PDMS로 형성하였다. 도 19의 (A) 내지 (F)의 세포 배양면은 PS로 형성하였다. 이때, 도 18의 희생 몰드는 직경이 8.6㎛인 복수의 기공을 포함하고, 100℃, 110℃, 120℃, 130℃, 140℃, 150℃로 10℃씩 핫 엠보싱 공정의 온도를 증가시키면서 세포 배양면을 형성하였다.
도 19의 (A) 내지 (F)를 참조할 때, 핫 엠보싱 공정의 온도가 100℃에서 130℃까지 증가하는 동안 세포 배양면에 형성된 구조물의 직경은 희생 몰드의 직경과 근접한 직경을 가지도록 형성되었다. 그러나 핫 엠보싱 공정의 온도가 140℃, 150℃로 증가하면 세포 배양면에 형성된 구조물의 직경은 희생 몰드의 직경보다 커진 것을 확인할 수 있었다.
도 20은 본 발명에 따른 제조 방법의 핫 엠보싱 공정의 온도에 따른 구조물의 높이를 측정한 그래프이다.
PDMS 희생 몰드는 복수의 기공을 포함하며, 세로 배양면의 기둥의 높이는 각각 1.4㎛, 2.4㎛, 8.2㎛, 14.9㎛이고, 최대 종횡비는 각각 0.7, 1.2, 4.1, 7.5에서 측정하였다.
도 20을 참조할 때, 높이가 1.4㎛에서는 100℃를 제외하고 대부분 PDMS 희생 몰드와 거의 같은 높이로 세포 배양면의 기둥이 형성되었다. 그러나 2.4㎛, 8.2㎛, 14.9㎛에서는 130℃에서 형성한 기둥의 높이가 PDMS 희생 몰드의 깊이와 가장 근접하게 형성된 것을 확인할 수 있었다. 반대로 도 20에서와 동일한 크기 조건으로 복수의 기둥을 포함하는 PDMS 희생 몰드를 이용하여 기공을 포함하는 세포 배양면을 형성할 때도 동일한 온도 결과를 얻었다.
따라서 핫 엠보싱 공정시 130℃에서 0.4MPa의 온도로 진행하는 것이 바람직하다.
이처럼 도 13 내지 도 16에서와 같은 방법으로 세포 배양면을 형성하면 도 21에서와 같이 기공 또는 기둥의 크기가 점진적으로 변화하는 세포 배양면을 용이하게 얻을 수 있다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.
10: 기판 11: 세포 배양면
20: 희생 구조물 22: 구조물
30: 희생 몰드 100: 세포 배양 용기
202: 기공 204: 기둥

Claims (20)

  1. 성체 줄기세포를 점착하여 상기 줄기 세포를 증식 및 분화시키기 위한 세포 배양면을 포함하는 세포 배양용 용기에 있어서,
    상기 세포 배양면의 일단으로부터 타단까지 배치되어 있으며 제1방향으로 복수의 행을 이루는 복수의 기둥 또는 기공을 포함하고,
    상기 기둥 또는 기공은 상기 세포 배양면의 일단으로부터 타단으로 갈수록 상기 기둥 또는 기공의 크기가 점진적으로 커지며, 같은 행에 위치하는 상기 기둥 또는 기공의 크기는 서로 같은 세포 배양용 용기.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에서,
    상기 기둥 또는 기공의 직경은 500nm 내지 150mm의 범위 내에서 점진적으로 변화하도록 배치되어 있는 세포 배양용 용기.
  5. 제1항에서,
    상기 기공 사이의 간격 또는 상기 기둥 사이의 간격은 일정한 세포 배양용 용기.
  6. 제5항에서,
    상기 간격은 500nm 내지 160mm의 범위인 세포 배양용 용기.
  7. 성체 줄기세포를 점착하여 상기 줄기 세포를 증식 및 분화시키기 위한 세포 배양면을 포함하는 세포 배양용 용기에 있어서,
    상기 세포 배양면의 일단으로부터 타단까지 배치되어 있으며 제1 방향으로 복수의 행을 이루는 복수의 기둥 또는 기공을 포함하고,
    상기 기둥 또는 기공은 상기 세포 배양면의 일단으로부터 타단으로 갈수록 상기 기둥 사이의 간격 또는 상기 기공 사이의 간격이 점진적으로 커지며, 같은 행에 위치하는 상기 기둥 또는 기공의 간격은 일정한 세포 배양용 용기.
  8. 삭제
  9. 제7항에서,
    상기 기둥 사이의 간격 또는 상기 기공 사이의 간격은 500nm 내지 160mm의 범위인 세포 배양용 용기.
  10. 제7항에서,
    상기 기둥 또는 상기 기공의 크기는 일정한 세포 배양용 용기.
  11. 삭제
  12. 제10항에서,
    상기 기둥 또는 상기 기공의 직경은 500nm 내지 150mm의 점진적으로 변화하도록 배치되어 있는 세포 배양용 용기.
  13. 제1항 또는 제7항에서,
    상기 기둥의 높이 또는 상기 기공의 깊이는 일정한 세포 배양용 용기.
  14. 제13항에서,
    상기 기둥의 높이 또는 상기 기공의 깊이는 500nm 내지 100mm의 범위인 세포 배양용 용기.
  15. 제14항에서,
    상기 기둥 또는 상기 기공의 종횡비는 0.003 내지 200의 범위를 가지는 세포 배양용 용기.
  16. 제1항 또는 제7항에서,
    상기 기둥 또는 상기 기공의 평면 모양은 원형, 타원형, 다각형 및 비정형 도형 중 적어도 하나를 포함하는 세포 배양용 용기.
  17. 제1항 또는 제7항에서,
    상기 행을 이루는 상기 기공 또는 기둥은 동일한 평면 모양을 가지는 세포 배양용 용기.
  18. 제1항 또는 제7항에서,
    이웃하는 행의 상기 기공 또는 기둥은 서로 다른 평면 모양을 가지는 세포 배양용 용기.
  19. 삭제
  20. 제1항 또는 제7항에서,
    상기 기공 및 기둥의 평면 모양은 복수의 행을 단위로 동일한 평면 모양을 가지는 세포 배양용 용기.
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