KR101457957B1 - 열안정성이 증진된 바실러스 서큘런스 자일라네이즈의 변이 효소 및 그 유전자 - Google Patents
열안정성이 증진된 바실러스 서큘런스 자일라네이즈의 변이 효소 및 그 유전자 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101457957B1 KR101457957B1 KR1020110089295A KR20110089295A KR101457957B1 KR 101457957 B1 KR101457957 B1 KR 101457957B1 KR 1020110089295 A KR1020110089295 A KR 1020110089295A KR 20110089295 A KR20110089295 A KR 20110089295A KR 101457957 B1 KR101457957 B1 KR 101457957B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- thr
- gly
- ser
- asn
- tyr
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
- C12N9/248—Xylanases
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D21—PAPER-MAKING; PRODUCTION OF CELLULOSE
- D21C—PRODUCTION OF CELLULOSE BY REMOVING NON-CELLULOSE SUBSTANCES FROM CELLULOSE-CONTAINING MATERIALS; REGENERATION OF PULPING LIQUORS; APPARATUS THEREFOR
- D21C9/00—After-treatment of cellulose pulp, e.g. of wood pulp, or cotton linters ; Treatment of dilute or dewatered pulp or process improvement taking place after obtaining the raw cellulosic material and not provided for elsewhere
- D21C9/10—Bleaching ; Apparatus therefor
- D21C9/1063—Bleaching ; Apparatus therefor with compounds not otherwise provided for, e.g. activated gases
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
본 발명은 열안정성이 증가된 돌연변이 Bacillus circulans xylanase 효소(이하 BCX) 효소 3종과 그의 조합 효소 및 그들의 유전자에 관한 것이다. 보다 상세하게, 본 발명은 Bacillus circulans 종의 xylanase 효소의 64번째 아미노산 글리신을 알라닌으로 치환한 변이 유전자와 효소, 156번째 아미노산 히스티딘을 발린으로 치환한 변이 유전자와 효소, 168번째 아미노산 발린을 이소류신으로 치환한 변이 유전자와 효소, 혹은 이들의 조합으로 이루어진 변이 효소 및 유전자에 관한 것이다. 열안정성이 증가한 변이 효소로써 산업적으로 유용한 반응에 이용할 수 있을 것으로 기대된다.
Description
본 발명은 열안정성이 증가된 돌연변이 Bacillus circulans xylanase 효소(이하 BCX) 효소 3종과 그의 조합 효소 및 그들의 유전자에 관한 것이다. 보다 상세하게, 본 발명은 Bacillus circulans 종의 xylanase 효소의 64번째 아미노산 글리신을 알라닌으로 치환한 변이 유전자와 효소, 156번째 아미노산 히스티딘을 발린으로 치환한 변이 유전자와 효소, 168번째 아미노산 발린을 이소류신으로 치환한 변이 유전자와 효소, 혹은 이들의 조합으로 이루어진 변이 효소 및 유전자에 관한 것이다. 열안정성이 증가한 변이 효소로써 산업적으로 유용한 반응에 이용할 수 있을 것으로 기대된다.
자일라네이즈는 기존 산업 중 펄프 생산 공정에서 표백을 위한 공정에서 투입되었다. 전 공정의 온도가 높아, 자일라네이즈의 투입 공정은 열을 식히는 과정 후에 투입되어야 하는데 이것이 비용과 시간의 증가를 가져온다. 또한 최근 바이오에너지 및 바이오화학 산업에서 목질계 바이오매스의 전처리 이후 당화 과정을 위한 효소 처리 공정에도 자일라네이즈가 사용된다. 이 과정 역시 전처리 과정의 온도가 고온이므로 식히는 과정이 필요하며 이것이 비용과 시간의 증가를 가져온다. 따라서 식히는 과정을 줄일 수 있도록 높은 온도에서 반응하는 자일라네이즈의 개량은 산업적으로 필요하다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, Bacillus circulans 종의 xylanase 효소의 64번째 아미노산 글리신을 알라닌으로, 156번째 아미노산 히스티딘을 발린으로, 168번째 아미노산 발린을 이소류신으로 치환하거나 이들을 조합한 변이효소를 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
본 발명은 또한, 상기 변이효소를 암호화하는 유전자를 제공하는 것을 또 다른 목적으로 한다.
본 발명의 바실러스 서큘런스 자일라네이즈 변이효소는 상술한 바와 같은 목적을 달성하기 위하여, 서열목록 1 내지 7 중 어느 한 서열목록의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 바실러스 서큘런스 자일라네이즈 변이효소의 유전자는 서열목록 8 내지 16 중 어느 한 서열목록의 유전자 서열을 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명은 Bacillus circulans 종의 xylanase 효소의 64번째 아미노산 글리신을 알라닌으로 치환한 변이 유전자와 효소, 156번째 아미노산 히스티딘을 발린으로 치환한 변이 유전자와 효소, 168번째 아미노산 발린을 이소류신으로 치환한 변이 유전자와 효소, 혹은 이들의 조합으로 이루어진 변이 효소 및 유전자에 관한 것으로, 야생형에 비해 열안정성이 최고 75 배 증가하여 산업적으로 대단히 유용하다.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 또한, 하기의 설명에서는 구체적인 구성요소 등과 같은 많은 특정사항들이 설명되어 있는데, 이는 본 발명의 보다 전반적인 이해를 돕기 위해서 제공된 것일 뿐 이러한 특정 사항들 없이도 본 발명이 실시될 수 있음은 이 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게는 자명하다 할 것이다. 그리고, 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기능 혹은 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
단백질의 열안정성은 분자 내에서 3차원 공간적으로 군집해서 이루어져 있는 소수성 상호 작용에 가장 큰 영향을 받아 결정되는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 소수성 상호 작용의 특성을 이해하기 위해 네트워크 분석법을 단백질 구조에 자일라네이즈의 열안정성에 영향을 끼치는 것으로 보이는 적합한 소수성 아미노산의 무리 형성 양상을 발견하였다. 이 군집의 양상을 대상 효소인 BCX에 도입하여 열안정성을 획득하였다.
이하, 본 발명의 실시예에 대하여 설명한다.
실시예
Materials
and
methods
(재료와 방법)
Chemicals
and
enzymes
(화학물질과 효소)
따로 명시되지 않은 대부분의 chemical(화학물질)은 Sigma(St.Louis, USA), Merck(Darmstadt, Germany), Invitrogen(Carlsbad, USA)에서 구입하였으며, 모두 analytical grade(분석용 품위)이다. 제한효소의 경우, NEB(Ipswich, USA)와 Bioneer(Daejeon, Korea)에서 구입하였다. Cell culture(세포 배양)를 위한 배지의 경우 BD(Sparks, USA), Merck, Invitrogen에서 구입하였다.
Strains
and
plasmids
(품종과 플라스미드)
E.coli Top10은 Invitrogen(Carlsbad, USA)에서, E.coli BL21(DE3)는 Novagen(Madison, WI, USA)에서 구입하였다. 재조합에 쓰인 pET23b(+) 벡터는 Novagen(Madison, WI, USA)에서 구입하였다.
BCX
유전자의 돌연변이
Modify(변형)된 QuickChangeTM site-directed mutagenesis(QuickChangeTM 위치 지향적 돌연변이) 방법이 사용되었다(Nucleic Acids Research Vol. 32, No. 14, e115). 사용된 primer(프라이머)는 다음과 같다.
| Mutants (돌연변이) | Template(주형) | Primers(프라이머) |
| G64A | pET23bBCX | 5’GGTAACGCTTACCTGACACTGATGG3’ 5’CAGGTAAGCGTTACCATTCGGGGC3’ |
| H156V | pET23bBCX | 5’GGAAATCCGTCGGTATGAACCTAGGTTCTAATTG3’ 5’CATACCGACGGATTTCCATGCATTCACG3’ |
| V168I | pET23bBCX | 5’CTTATCAAATAATGGCGACCGAAGGCTACCAG3’ 5’GTCGCCATTATTTGATAAGCCCAATTAGAACC3’ |
| G64A/H156V/V168I | pET23bBCX G64A/H156V |
5’CTTATCAAATAATGGCGACCGAAGGCTACCAG3’ 5’GTCGCCATTATTTGATAAGCCCAATTAGAACC3’ |
모든 primer(프라이머)는 Cosmogenteck(Daejeon, Korea)에서 합성되었고, 돌연변이 유전자의 확인 역시 같은 회사에서 sequencing(염기서열 결정법)을 통해 확인하였다.
자일라네이즈의
발현과 획득
pET23b(+)-BCX 야생형과 돌연변이들의 재조합 벡터는 E.coli BL21(DE3) 품종에 electroporation(전기충격) 방법(Bio-Rad Micropulser)을 통해 transformation(형질전환)되었다. 이후 앰피실린 50μg/ml함유 LB 배지에서 selection하였다.
pET23b(+)-BCX 야생형과 돌연변이들의 재조합 DNA가 형질전환된 BL21 세포를 LB 배지 3ml에 접종하였다. Overnight(하룻밤) 후 50ml LB 배지로 2차 접종하여 OD600이 0.4~0.6 수준으로 키운 후 IPTG(isopropyl-ß-D-thiogalactopyranoside(이소프로필 1-티오-ß-D-갈락토시드))의 농도를 최종 1mM이 되도록 처리하여 induction(유도)을 시작하였다. 모든 과정은 37°C에서 진행하였다. 24시간 후 세포를 수확하여 centrifugation(원심분리)을 통하여 cell pellet(세포 집괴)을 얻었다.
15ml lysis buffer(세포 용혈 완충 용액)(50mM NaH2PO4, 300mM NaCl, 10mM imidazole(이미다졸), pH 8.0)를 처리하여 resuspension(재부유)시킨 후 sonication(음파처리)을 통하여 cell disruption(세포파열)하였다. cell lysate(세포 용해물)를 Ni2+-NTA column(칼럼)(Qiagen, Hilden, Germany)에 loading(로딩)하였다. 500μl Ni-NTA agarose resin(아가로오스 수지)이 사용되었고, cell lysate(세포 용해물)와 함께 4°C에서 1시간 동안 처리되었다. Washing buffer(세척 완충 용액)(50mM NaH2PO4, 300mM NaCl, 20mM imidazole(이미다졸), pH 8.0) 15ml을 흘려주고, 최종적으로 elution buffer(용출 완충 용액)(50mM NaH2PO4, 300mM NaCl, 250mM imidazole(이미다졸), pH 8.0) 500μl을 2번 흘려서 재조합 단백질을 얻었다.
Activity
assay
(활성 분석)
E.coli에서 발현한 BCX는 modified DNS method를 사용하여 활성을 분석하였다. 기질로는 beechwood xylan을 사용하였고, pH 5.5의 50mM sodium acetate buffer 상에서 진행하였다. 40μL 효소 용액(2μg/mL xylanase solution with 10% glycerol)과 360μL 기질 용액(1%(w/v) xylan)을 섞어 반응을 진행하였다. 반응은 50°C에서 5분 동안 진행되다가 600μL의 DNS reagent를 넣어 반응을 종결하였다. 용액을 5분 동안 100°C에서 끓이고 2분 동안 얼음에서 식힌 후, 분광광도계 Varian, CA, USA)를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
열안정성
측정
효소의 열에 의한 비활성 정도를 반감기로 측정하였다. 기질이 첨가되지 않은 효소 용액을 50 ℃ (표 2)와 55 ℃ (표 3)에서 거치하며 시간에 따른 잔여 활성을 측정하였다. 반감기는 t1/2=ln2/k(k는 비활성 상수) 식을 이용하여 계산하였다.
Results
(결과)
G64A, H156V, V168I는 증진된 열안정성을 보였다. 각각 반감기가 2배, 1.4배, 10배 증가하였다.
| 효소 | Vmax (μM/분) | Km (mM-1) | 촉매효율 (mM/분) | t1 /2 (분) |
| 야생형 BCX | 2.928 | 29.41 | 10.56 | 69 |
| G64A (Fingers) | 3.320 | 30.07 | 11.06 (105 %) | 139 |
| H156V (Helix) | 3.485 | 19.10 | 17.98 (170 %) | 99 |
| V168I (Palm) | 2.414 | 35.67 | 7.18 (68 %) | 693 |
열안정성을 더욱 높이기 위한 조합으로 G64A/H156V/V168I triple mutant를 제작하였다. Triple mutant는 야생형의 75배에 해당하는 반감기를 나타내었다.
| 효소 | Vmax (μM/분) | Km (mM-1) | 촉매효율 (mM/분) | t1 /2 (분) |
| 야생형 BCX | 2.928 | 29.41 | 10.56 | ~4 |
| G64A/H156V/V168I | 1.998 | 33.82 | 6.02 (57 %) | 300 (> ×75) |
이상에서는 본 발명의 바람직한 실시예에 대해서 설명하였으나, 본 발명은 상술한 특정의 실시예에 한정되지 아니하며, 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본원 발명의 요지를 벗어남이 없이 다양한 변형 실시가 가능함은 물론이다. 따라서, 본 발명의 범위는 위의 실시예에 국한해서 해석되어서는 안되며, 후술하는 특허청구범위 뿐만 아니라 이 특허청구범위와 균등한 것들에 의해 정해져야 할 것이다.
<110> SNU R&DB FOUNDATION
<120> Variation Enzyme of Thermostable Bacillus circulans Xylanase and
Gene thereof
<130> M11-8370-FD
<160> 14
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 185
<212> PRT
<213> Bacillus circulans
<400> 1
Ala Ser Thr Asp Tyr Trp Gln Asn Trp Thr Asp Gly Gly Gly Ile Val
1 5 10 15
Asn Ala Val Asn Gly Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Val Asn Trp Ser Asn
20 25 30
Thr Gly Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Thr Thr Gly Ser Pro Phe
35 40 45
Arg Thr Ile Asn Tyr Asn Ala Gly Val Trp Ala Pro Asn Gly Asn Ala
50 55 60
Tyr Leu Thr Leu Tyr Gly Trp Thr Arg Ser Pro Leu Ile Glu Tyr Tyr
65 70 75 80
Val Val Asp Ser Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly
85 90 95
Thr Val Lys Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Thr Thr Thr Arg
100 105 110
Tyr Asn Ala Pro Ser Ile Asp Gly Asp Arg Thr Thr Phe Thr Gln Tyr
115 120 125
Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg Pro Thr Gly Ser Asn Ala Thr Ile
130 135 140
Thr Phe Thr Asn His Val Asn Ala Trp Lys Ser His Gly Met Asn Leu
145 150 155 160
Gly Ser Asn Trp Ala Tyr Gln Val Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Ser Ser Asn Val Thr Val Trp
180 185
<210> 2
<211> 185
<212> PRT
<213> Bacillus circulans
<400> 2
Ala Ser Thr Asp Tyr Trp Gln Asn Trp Thr Asp Gly Gly Gly Ile Val
1 5 10 15
Asn Ala Val Asn Gly Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Val Asn Trp Ser Asn
20 25 30
Thr Gly Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Thr Thr Gly Ser Pro Phe
35 40 45
Arg Thr Ile Asn Tyr Asn Ala Gly Val Trp Ala Pro Asn Gly Asn Gly
50 55 60
Tyr Leu Thr Leu Tyr Gly Trp Thr Arg Ser Pro Leu Ile Glu Tyr Tyr
65 70 75 80
Val Val Asp Ser Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly
85 90 95
Thr Val Lys Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Thr Thr Thr Arg
100 105 110
Tyr Asn Ala Pro Ser Ile Asp Gly Asp Arg Thr Thr Phe Thr Gln Tyr
115 120 125
Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg Pro Thr Gly Ser Asn Ala Thr Ile
130 135 140
Thr Phe Thr Asn His Val Asn Ala Trp Lys Ser Val Gly Met Asn Leu
145 150 155 160
Gly Ser Asn Trp Ala Tyr Gln Val Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Ser Ser Asn Val Thr Val Trp
180 185
<210> 3
<211> 185
<212> PRT
<213> Bacillus circulans
<400> 3
Ala Ser Thr Asp Tyr Trp Gln Asn Trp Thr Asp Gly Gly Gly Ile Val
1 5 10 15
Asn Ala Val Asn Gly Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Val Asn Trp Ser Asn
20 25 30
Thr Gly Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Thr Thr Gly Ser Pro Phe
35 40 45
Arg Thr Ile Asn Tyr Asn Ala Gly Val Trp Ala Pro Asn Gly Asn Gly
50 55 60
Tyr Leu Thr Leu Tyr Gly Trp Thr Arg Ser Pro Leu Ile Glu Tyr Tyr
65 70 75 80
Val Val Asp Ser Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly
85 90 95
Thr Val Lys Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Thr Thr Thr Arg
100 105 110
Tyr Asn Ala Pro Ser Ile Asp Gly Asp Arg Thr Thr Phe Thr Gln Tyr
115 120 125
Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg Pro Thr Gly Ser Asn Ala Thr Ile
130 135 140
Thr Phe Thr Asn His Val Asn Ala Trp Lys Ser His Gly Met Asn Leu
145 150 155 160
Gly Ser Asn Trp Ala Tyr Gln Ile Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Ser Ser Asn Val Thr Val Trp
180 185
<210> 4
<211> 185
<212> PRT
<213> Bacillus circulans
<400> 4
Ala Ser Thr Asp Tyr Trp Gln Asn Trp Thr Asp Gly Gly Gly Ile Val
1 5 10 15
Asn Ala Val Asn Gly Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Val Asn Trp Ser Asn
20 25 30
Thr Gly Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Thr Thr Gly Ser Pro Phe
35 40 45
Arg Thr Ile Asn Tyr Asn Ala Gly Val Trp Ala Pro Asn Gly Asn Ala
50 55 60
Tyr Leu Thr Leu Tyr Gly Trp Thr Arg Ser Pro Leu Ile Glu Tyr Tyr
65 70 75 80
Val Val Asp Ser Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly
85 90 95
Thr Val Lys Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Thr Thr Thr Arg
100 105 110
Tyr Asn Ala Pro Ser Ile Asp Gly Asp Arg Thr Thr Phe Thr Gln Tyr
115 120 125
Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg Pro Thr Gly Ser Asn Ala Thr Ile
130 135 140
Thr Phe Thr Asn His Val Asn Ala Trp Lys Ser Val Gly Met Asn Leu
145 150 155 160
Gly Ser Asn Trp Ala Tyr Gln Val Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Ser Ser Asn Val Thr Val Trp
180 185
<210> 5
<211> 185
<212> PRT
<213> Bacillus circulans
<400> 5
Ala Ser Thr Asp Tyr Trp Gln Asn Trp Thr Asp Gly Gly Gly Ile Val
1 5 10 15
Asn Ala Val Asn Gly Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Val Asn Trp Ser Asn
20 25 30
Thr Gly Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Thr Thr Gly Ser Pro Phe
35 40 45
Arg Thr Ile Asn Tyr Asn Ala Gly Val Trp Ala Pro Asn Gly Asn Ala
50 55 60
Tyr Leu Thr Leu Tyr Gly Trp Thr Arg Ser Pro Leu Ile Glu Tyr Tyr
65 70 75 80
Val Val Asp Ser Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly
85 90 95
Thr Val Lys Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Thr Thr Thr Arg
100 105 110
Tyr Asn Ala Pro Ser Ile Asp Gly Asp Arg Thr Thr Phe Thr Gln Tyr
115 120 125
Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg Pro Thr Gly Ser Asn Ala Thr Ile
130 135 140
Thr Phe Thr Asn His Val Asn Ala Trp Lys Ser His Gly Met Asn Leu
145 150 155 160
Gly Ser Asn Trp Ala Tyr Gln Ile Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Ser Ser Asn Val Thr Val Trp
180 185
<210> 6
<211> 185
<212> PRT
<213> Bacillus circulans
<400> 6
Ala Ser Thr Asp Tyr Trp Gln Asn Trp Thr Asp Gly Gly Gly Ile Val
1 5 10 15
Asn Ala Val Asn Gly Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Val Asn Trp Ser Asn
20 25 30
Thr Gly Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Thr Thr Gly Ser Pro Phe
35 40 45
Arg Thr Ile Asn Tyr Asn Ala Gly Val Trp Ala Pro Asn Gly Asn Gly
50 55 60
Tyr Leu Thr Leu Tyr Gly Trp Thr Arg Ser Pro Leu Ile Glu Tyr Tyr
65 70 75 80
Val Val Asp Ser Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly
85 90 95
Thr Val Lys Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Thr Thr Thr Arg
100 105 110
Tyr Asn Ala Pro Ser Ile Asp Gly Asp Arg Thr Thr Phe Thr Gln Tyr
115 120 125
Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg Pro Thr Gly Ser Asn Ala Thr Ile
130 135 140
Thr Phe Thr Asn His Val Asn Ala Trp Lys Ser Val Gly Met Asn Leu
145 150 155 160
Gly Ser Asn Trp Ala Tyr Gln Ile Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Ser Ser Asn Val Thr Val Trp
180 185
<210> 7
<211> 185
<212> PRT
<213> Bacillus circulans
<400> 7
Ala Ser Thr Asp Tyr Trp Gln Asn Trp Thr Asp Gly Gly Gly Ile Val
1 5 10 15
Asn Ala Val Asn Gly Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Val Asn Trp Ser Asn
20 25 30
Thr Gly Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Thr Thr Gly Ser Pro Phe
35 40 45
Arg Thr Ile Asn Tyr Asn Ala Gly Val Trp Ala Pro Asn Gly Asn Ala
50 55 60
Tyr Leu Thr Leu Tyr Gly Trp Thr Arg Ser Pro Leu Ile Glu Tyr Tyr
65 70 75 80
Val Val Asp Ser Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly
85 90 95
Thr Val Lys Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Thr Thr Thr Arg
100 105 110
Tyr Asn Ala Pro Ser Ile Asp Gly Asp Arg Thr Thr Phe Thr Gln Tyr
115 120 125
Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg Pro Thr Gly Ser Asn Ala Thr Ile
130 135 140
Thr Phe Thr Asn His Val Asn Ala Trp Lys Ser Val Gly Met Asn Leu
145 150 155 160
Gly Ser Asn Trp Ala Tyr Gln Ile Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Ser Ser Asn Val Thr Val Trp
180 185
<210> 8
<211> 555
<212> DNA
<213> Bacillus circulans
<400> 8
gctagcacag attactggca aaactggaca gacggtggcg gtatcgttaa tgccgtgaac 60
ggctccggag gcaactacag cgtgaattgg tctaatactg ggaacttcgt agtcggaaaa 120
ggttggacga caggatcccc gttccgtacg atcaactaca acgctggcgt ttgggccccg 180
aatggtaacg cttacctgac actgtatggc tggacgcgtt cgccactgat tgaatattac 240
gttgtcgact cttggggaac gtaccgtccg actggaacct acaaaggcac agtcaaaagc 300
gatggtggta cctatgacat ctacaccacc acaagataca acgcaccttc catcgatggc 360
gatcggacca cctttactca gtattggagt gttagacaat ctaagcggcc gactggttcg 420
aacgccacca ttacgttcac caatcacgtg aatgcatgga aatcccacgg tatgaaccta 480
ggttctaatt gggcttatca agtaatggcg accgaaggct accagagctc tggttcttcc 540
aacgttacag tgtgg 555
<210> 9
<211> 555
<212> DNA
<213> Bacillus circulans
<400> 9
gctagcacag attactggca aaactggaca gacggtggcg gtatcgttaa tgccgtgaac 60
ggctccggag gcaactacag cgtgaattgg tctaatactg ggaacttcgt agtcggaaaa 120
ggttggacga caggatcccc gttccgtacg atcaactaca acgctggcgt ttgggccccg 180
aatggtaacg gttacctgac actgtatggc tggacgcgtt cgccactgat tgaatattac 240
gttgtcgact cttggggaac gtaccgtccg actggaacct acaaaggcac agtcaaaagc 300
gatggtggta cctatgacat ctacaccacc acaagataca acgcaccttc catcgatggc 360
gatcggacca cctttactca gtattggagt gttagacaat ctaagcggcc gactggttcg 420
aacgccacca ttacgttcac caatcacgtg aatgcatgga aatccgtcgg tatgaaccta 480
ggttctaatt gggcttatca agtaatggcg accgaaggct accagagctc tggttcttcc 540
aacgttacag tgtgg 555
<210> 10
<211> 555
<212> DNA
<213> Bacillus circulans
<400> 10
gctagcacag attactggca aaactggaca gacggtggcg gtatcgttaa tgccgtgaac 60
ggctccggag gcaactacag cgtgaattgg tctaatactg ggaacttcgt agtcggaaaa 120
ggttggacga caggatcccc gttccgtacg atcaactaca acgctggcgt ttgggccccg 180
aatggtaacg gttacctgac actgtatggc tggacgcgtt cgccactgat tgaatattac 240
gttgtcgact cttggggaac gtaccgtccg actggaacct acaaaggcac agtcaaaagc 300
gatggtggta cctatgacat ctacaccacc acaagataca acgcaccttc catcgatggc 360
gatcggacca cctttactca gtattggagt gttagacaat ctaagcggcc gactggttcg 420
aacgccacca ttacgttcac caatcacgtg aatgcatgga aatcccacgg tatgaaccta 480
ggttctaatt gggcttatca aataatggcg accgaaggct accagagctc tggttcttcc 540
aacgttacag tgtgg 555
<210> 11
<211> 555
<212> DNA
<213> Bacillus circulans
<400> 11
gctagcacag attactggca aaactggaca gacggtggcg gtatcgttaa tgccgtgaac 60
ggctccggag gcaactacag cgtgaattgg tctaatactg ggaacttcgt agtcggaaaa 120
ggttggacga caggatcccc gttccgtacg atcaactaca acgctggcgt ttgggccccg 180
aatggtaacg cttacctgac actgtatggc tggacgcgtt cgccactgat tgaatattac 240
gttgtcgact cttggggaac gtaccgtccg actggaacct acaaaggcac agtcaaaagc 300
gatggtggta cctatgacat ctacaccacc acaagataca acgcaccttc catcgatggc 360
gatcggacca cctttactca gtattggagt gttagacaat ctaagcggcc gactggttcg 420
aacgccacca ttacgttcac caatcacgtg aatgcatgga aatccgtcgg tatgaaccta 480
ggttctaatt gggcttatca agtaatggcg accgaaggct accagagctc tggttcttcc 540
aacgttacag tgtgg 555
<210> 12
<211> 555
<212> DNA
<213> Bacillus circulans
<400> 12
gctagcacag attactggca aaactggaca gacggtggcg gtatcgttaa tgccgtgaac 60
ggctccggag gcaactacag cgtgaattgg tctaatactg ggaacttcgt agtcggaaaa 120
ggttggacga caggatcccc gttccgtacg atcaactaca acgctggcgt ttgggccccg 180
aatggtaacg cttacctgac actgtatggc tggacgcgtt cgccactgat tgaatattac 240
gttgtcgact cttggggaac gtaccgtccg actggaacct acaaaggcac agtcaaaagc 300
gatggtggta cctatgacat ctacaccacc acaagataca acgcaccttc catcgatggc 360
gatcggacca cctttactca gtattggagt gttagacaat ctaagcggcc gactggttcg 420
aacgccacca ttacgttcac caatcacgtg aatgcatgga aatcccacgg tatgaaccta 480
ggttctaatt gggcttatca aataatggcg accgaaggct accagagctc tggttcttcc 540
aacgttacag tgtgg 555
<210> 13
<211> 555
<212> DNA
<213> Bacillus circulans
<400> 13
gctagcacag attactggca aaactggaca gacggtggcg gtatcgttaa tgccgtgaac 60
ggctccggag gcaactacag cgtgaattgg tctaatactg ggaacttcgt agtcggaaaa 120
ggttggacga caggatcccc gttccgtacg atcaactaca acgctggcgt ttgggccccg 180
aatggtaacg gttacctgac actgtatggc tggacgcgtt cgccactgat tgaatattac 240
gttgtcgact cttggggaac gtaccgtccg actggaacct acaaaggcac agtcaaaagc 300
gatggtggta cctatgacat ctacaccacc acaagataca acgcaccttc catcgatggc 360
gatcggacca cctttactca gtattggagt gttagacaat ctaagcggcc gactggttcg 420
aacgccacca ttacgttcac caatcacgtg aatgcatgga aatccgtcgg tatgaaccta 480
ggttctaatt gggcttatca aataatggcg accgaaggct accagagctc tggttcttcc 540
aacgttacag tgtgg 555
<210> 14
<211> 555
<212> DNA
<213> Bacillus circulans
<400> 14
gctagcacag attactggca aaactggaca gacggtggcg gtatcgttaa tgccgtgaac 60
ggctccggag gcaactacag cgtgaattgg tctaatactg ggaacttcgt agtcggaaaa 120
ggttggacga caggatcccc gttccgtacg atcaactaca acgctggcgt ttgggccccg 180
aatggtaacg cttacctgac actgtatggc tggacgcgtt cgccactgat tgaatattac 240
gttgtcgact cttggggaac gtaccgtccg actggaacct acaaaggcac agtcaaaagc 300
gatggtggta cctatgacat ctacaccacc acaagataca acgcaccttc catcgatggc 360
gatcggacca cctttactca gtattggagt gttagacaat ctaagcggcc gactggttcg 420
aacgccacca ttacgttcac caatcacgtg aatgcatgga aatccgtcgg tatgaaccta 480
ggttctaatt gggcttatca aataatggcg accgaaggct accagagctc tggttcttcc 540
aacgttacag tgtgg 555
Claims (2)
- 서열목록 7의 아미노산 서열을 포함하는 바실러스 서큘런스 자일라네이즈 변이효소.
- 서열목록 14의 유전자 서열을 포함하는 바실러스 서큘런스 자일라네이즈 변이효소의 유전자.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020110089295A KR101457957B1 (ko) | 2011-09-02 | 2011-09-02 | 열안정성이 증진된 바실러스 서큘런스 자일라네이즈의 변이 효소 및 그 유전자 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020110089295A KR101457957B1 (ko) | 2011-09-02 | 2011-09-02 | 열안정성이 증진된 바실러스 서큘런스 자일라네이즈의 변이 효소 및 그 유전자 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20130025770A KR20130025770A (ko) | 2013-03-12 |
| KR101457957B1 true KR101457957B1 (ko) | 2014-11-05 |
Family
ID=48177335
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020110089295A KR101457957B1 (ko) | 2011-09-02 | 2011-09-02 | 열안정성이 증진된 바실러스 서큘런스 자일라네이즈의 변이 효소 및 그 유전자 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101457957B1 (ko) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102502711B1 (ko) * | 2020-12-15 | 2023-02-23 | 씨제이제일제당 주식회사 | 자일라나제 활성을 갖는 변이형 폴리펩티드 |
| KR102511917B1 (ko) * | 2020-12-15 | 2023-03-20 | 씨제이제일제당 주식회사 | 자일라나제 활성을 갖는 변이형 폴리펩티드 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6682923B1 (en) | 1999-05-12 | 2004-01-27 | Xencor | Thermostable alkaliphilic xylanase |
-
2011
- 2011-09-02 KR KR1020110089295A patent/KR101457957B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6682923B1 (en) | 1999-05-12 | 2004-01-27 | Xencor | Thermostable alkaliphilic xylanase |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20130025770A (ko) | 2013-03-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Anbar et al. | Thermostability enhancement of Clostridium thermocellum cellulosomal endoglucanase Cel8A by a single glycine substitution | |
| CN108588052B (zh) | Pet降解酶的突变体及其应用 | |
| Santos et al. | Crystal structure and biochemical characterization of the recombinant ThBgl, a GH1 β-glucosidase overexpressed in Trichoderma harzianum under biomass degradation conditions | |
| RU2007124552A (ru) | Глюкоамилаза trichoderma reesei и ее гомологи | |
| US10655118B2 (en) | Heat-resistant agarase and monosaccharide production method using same | |
| Feng et al. | Enhancing the thermostability of β-glucuronidase by rationally redesigning the catalytic domain based on sequence alignment strategy | |
| Liu et al. | Improvement in thermostability of an alkaline lipase I from Penicillium cyclopium by directed evolution | |
| Huang et al. | Directed evolution of α-amylase from Bacillus licheniformis to enhance its acid-stable performance | |
| KR101457957B1 (ko) | 열안정성이 증진된 바실러스 서큘런스 자일라네이즈의 변이 효소 및 그 유전자 | |
| JP6691558B2 (ja) | 改善された活性を持つ新規のｐ４５０−ｂｍ３バリアント | |
| Sha et al. | Efficient xylan-to-sugar biotransformation using an engineered xylanase in hyperthermic environment | |
| US9334544B2 (en) | Cellulase compositions having improved thermostability and synergy | |
| Zhang et al. | The addition of Co2+ enhances the catalytic efficiency and thermostability of recombinant glucose isomerase from Thermobifida fusca | |
| CN109182301B (zh) | 一种二糖降解酶基因及其应用 | |
| KR101708974B1 (ko) | 신규한 수크로스이성화효소 및 이의 제조방법 | |
| Wang et al. | Improvement of Aspergillus niger glucoamylase thermostability by directed evolution | |
| CN114934035B (zh) | 一种淀粉降解能力提高的嗜热酸性iii型普鲁兰水解酶突变体及其制备方法和应用 | |
| CN108277212B (zh) | 脂肪酶突变体Gly183Cys/Gly212Cys及其基因和应用 | |
| CN106995809B (zh) | 一种低温木聚糖酶Xyn27及其基因和应用 | |
| WO2016175202A1 (ja) | 耐熱性を有するキシラナーゼ | |
| KR20190095429A (ko) | 글루타티온 환원 효소 | |
| CN112301011B (zh) | 糖基转移酶变体及其应用 | |
| US20140308713A1 (en) | Endoglucanase having enhanced thermostability and activity | |
| KR101430967B1 (ko) | 활성이 증진된 목질 분해효소 및 그 유전자 | |
| Wang et al. | The binding, synergistic and structural characteristics of BsEXLX1 for loosening the main components of lignocellulose: Lignin, xylan, and cellulose |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20170925 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20181002 Year of fee payment: 5 |