KR101443140B1 - 박테리오파지를 유효성분으로 함유하는 유해세균 제어용 조성물 및 이를 이용하여 유해세균을 제어하는 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 박테리오파지(bacteriophage)를 유효성분으로 함유하는 발효식품 내의 유해세균 제어용 조성물 또는 키트, 발효식품에 박테리오파지(bacteriophage)를 처리하여 발효식품 내의 유해세균을 제어하는 방법, 볏짚에 박테리오파지를 처리하여 유해세균이 제거된 전통 발효식품용 스타터 컬쳐(starter culture)의 제조 방법, 상기 방법에 의해 제조된 유해세균이 제거된 전통 발효식품용 스타터 컬쳐(starter culture) 및 상기 스타터 컬쳐(starter culture)를 이용하여 제조된 전통 발효식품을 제공한다.
Description
본 발명은 박테리오파지(bacteriophage)를 유효성분으로 함유하는 발효식품 내의 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)를 포함한 유해세균 제어용 조성물 또는 키트, 발효식품에 박테리오파지(bacteriophage)를 처리하여 발효식품 내의 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)를 포함한 유해세균을 제어하는 방법, 볏짚에 박테리오파지를 처리하여 유해세균이 제거된 전통 발효식품용 스타터 컬쳐(starter culture)의 제조 방법, 상기 방법에 의해 제조된 유해세균이 제거된 전통 발효식품용 스타터 컬쳐(starter culture) 및 상기 스타터 컬쳐(starter culture)를 이용하여 제조된 전통 발효식품을 제공한다.
식품은 내용물이 복잡 다양화되고 유통기간이 연장됨에 따라 세균, 효모 및 곰팡이 등의 미생물들에 의해 부패 또는 오염될 가능성이 높아지고 있다. 이러한 문제를 극복하기 위해 고온, 고압 하에서 살균처리하거나 자외선 조사처리 또는 방사선 조사 처리함으로써 미생물을 살균하고 있다.
그러나 이러한 방법들을 이용하여 살균처리를 할 경우, 즉 고온, 고압 등의 처리조건으로 인하여 식품에 함유되어 있는 영양소가 파괴되거나 식품의 맛이 저하되는 문제가 발생한다. 또한, 합성방부제를 사용하여 미생물의 생육을 억제하는 방법이 있는데, 이러한 방법 역시 합성방부제에 따른 인체에 대한 해로운 독성물질이 함유될 수 있으므로 식품에 사용하기에는 많은 어려운 점이 제기되고 있다. 더 나아가 많은 물리적 화학적 살균처리 방법들은 해로운 미생물뿐만이 아니라 유용한 미생물도 함께 불용화시키는 등의 단점이 있어 유용한 미생물의 지속적인 활성을 유지하며 유해균을 제어하는 기술이 요구된다.
국내 전통발효제품은 대량생산제품이 가지지 못한 독특한 풍미와 기능성을 보유하고 있다. 이러한 특성은 발효에 이용되는 미생물에 기인하는데, 대량생산제품의 경우 단일 또는 몇 개의 단일균주를 함께 배양하고 있는 반면, 전통발효제품은 자연계에 존재하는 마이크로플로라(microflora)를 이용하고 있기 때문이다. 우리나라 전통발효제품의 마이크로플로라(microflora)는 주로 볏짚에서 유래하고 있으며, 특히 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 및 아스퍼질러스(Aspergillus)를 포함한 다양한 곰팡이가 유용 미생물로 간주되고 있다. 그러나 볏짚의 마이크로플로라(microflora)를 직접 식품에 이용하는 것은 식품의 안전성 관점에서 큰 문제를 내포하고 있는데, 대표적으로 토양 유해균인 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)가 모든 볏짚에 오염되어 있다는 점이다.
바실러스 세레우스(Bacillus cereus)는 식품에서 유래하여 설사 또는 구토증상을 야기하는 병원성 세균으로, 식품유래 감염 원인균 중 1~20%를 차지하는 것으로 알려져 있다. 이에 따라 유럽에서는 다양한 식품에서 바실러스 세레우스를 104-5 CFU(colony forming unit)/g으로 제한하고 있고, 국내에서도 최근 전통 발효식품에서 104 CFU/g 이하의 수준으로 유지하는 법안이 통과되어 시행되고 있다. 그럼에도 불구하고 바실러스 세레우스는 자연계에 매우 널리 분포되어 있고, 또한 다양한 항세균제(antibacterial agent)에 저항성을 보이는 포자를 형성하므로 식품에서의 제어에 어려움이 있다.
박테리오파지는 세균만을 감염시키는 세균성 바이러스이다. 내성균의 증가와 새로운 작용 양식(mode of action)을 가지는 항생제 개발의 어려움은 다른 패러다임(paradigm)의 항세균제를 요구하고 있으며, 이에 따라 박테리오파지 및 파지 유전자원을 이용한 유해균의 제어에 많은 관심이 집중되고 있다. 특히 최근 미국 FDA가 특정 박테리오 파지(P100 포함)를 GRAS(generally regarded as safe)로 지정하고 이에 대한 식품에서의 이용을 허가했는데 이는 비록 특정 박테리오파지에 제한되기는 하지만 항세균제로써 파지의 유용성과 안전성을 인정했다는 점에서 박테리오파지의 식품에의 적용연구에 매우 중요한 전기를 제공한 것으로 사료된다.
본 발명은 유용 마이크로플로라(microflora)의 지속적인 배양이 요구되는 전통 발효식품에서 박테리오파지를 이용하여 유해 세균인 바실러스 세레우스만을 특이적으로 제어하는 데 목표가 있다. 이를 위해 다양한 전통 발효식품에서 바실러스 세레우스를 사멸시키는 박테리오파지를 분리했고, 형태적 특성규명(morphological characterization) 및 제한효소 절단(restriction enzyme digestion) 등을 통해 이들을 분류했다. 또한 숙주 범위(host range) 분석, 게놈 분석(genomic analysis) 및 액체배지에서 바실러스 세레우스의 증식 저해능을 확인함으로써 분리된 박테리오파지들의 항균제(antimicrobial agent)로써의 가능성을 확인했다. 더 나아가 식품에 박테리오파지의 적용은 두 가지 접근법을 시도했는데 첫째, 청국장을 발효식품의 모델로 이용한 실험에서 박테리오파지를 식품에 직접 처리하여 바실러스 세레우스를 효과적으로 제어하는 방법과 둘째, 볏짚에 박테리오파지를 처리하여 바실러스 세레우스만을 특이적으로 제거한 B. cereus-free starter culture를 개발하고 이를 이용하여 B. cereus-free 전통발효식품을 개발하는 방법이다.
한국등록특허 제0781669호에는 황색포도상구균 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지가 개시되어 있으나, 본 발명의 박테리오파지를 유효성분으로 함유하는 바실러스 세레우스 제어용 조성물과는 상이하다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 박테리오파지(bacteriophage)를 유효성분으로 함유함으로써 식품유해 미생물인 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)를 포함한 유해세균을 특이적으로 저해하는 조성물과 볏짚에 박테리오파지를 처리하여 유해세균이 제거된 전통 발효식품용 스타터 컬쳐(starter culture)의 제조 방법을 제공하는 데 있다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 박테리오파지(bacteriophage)를 유효성분으로 함유하는 발효식품 내의 유해세균 제어용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 박테리오파지(bacteriophage)를 유효성분으로 함유하는 발효식품 내의 유해세균 제어용 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 발효식품에 박테리오파지(bacteriophage)를 처리하여 발효식품 내의 유해세균을 제어하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 볏짚에 박테리오파지를 처리하여 유해세균이 제거된 전통 발효식품용 스타터 컬쳐(starter culture)의 제조 방법 및 상기 방법에 의해 제조된 유해세균이 제거된 전통 발효식품용 스타터 컬쳐(starter culture)를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 스타터 컬쳐(starter culture)를 이용하여 제조된 전통 발효식품을 제공한다.
본 발명의 조성물은 박테리오파지를 유효성분으로 함유함으로써, 식품의 유해균인 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)를 포함한 유해세균을 특이적으로 제어함으로써 식품에 함유되어 있는 영양소 파괴나 식품의 맛 저하를 예방할 수 있다. 또한 natrual microflora 중 바실러스 세레우스가 제거된 전통 발효식품용 스타터 컬쳐(starter culture)의 제조에 이용될 수 있다.
도 1은 대량생산과 순수분리를 통해 준비된 박테리오파지의 TEM(transmission electron microscopy) 사진을 나타낸 것이다(size bar, 100 nm).
도 2는 박테리오파지(BCP8-2)의 게놈(genome) 분석한 것을 나타낸 것이다.
도 3은 청국장 제조 시 박테리오파지 처리 및 이온 유무에 따른 바실러스 세레우스의 저해 효과를 나타낸 그래프이다. PW; peptone water, BCP 1-1; 박테리오파지
도 4는 박테리오파지의 흡착(adsoption)에서 이온의 역할을 나타낸 그래프이다. TA; Nutrient broth 8 g, NaCl 5 g [86 mM], MgSO4·7H2O 0.2g [0.8mM], MnSO4 0.05g [0.3mM] 및 CaCl2 0.15g [1.0mM] per 1L, pH 5.9-6.0, NB; Nutrient broth
도 5는 전통 발효식품에서 B. cereus-free starter culture의 개발과정을 나타낸 것이다.
도 6은 박테리오파지 처리 및 비처리군에 따른 B. cereus-free starter culture의 passage에 따른 총균 및 바실러스 세레우스, 박테리오파지의 수를 비교한 그래프와 마이크로플로라(microflora)의 변화를 분석한 것이다.
도 2는 박테리오파지(BCP8-2)의 게놈(genome) 분석한 것을 나타낸 것이다.
도 3은 청국장 제조 시 박테리오파지 처리 및 이온 유무에 따른 바실러스 세레우스의 저해 효과를 나타낸 그래프이다. PW; peptone water, BCP 1-1; 박테리오파지
도 4는 박테리오파지의 흡착(adsoption)에서 이온의 역할을 나타낸 그래프이다. TA; Nutrient broth 8 g, NaCl 5 g [86 mM], MgSO4·7H2O 0.2g [0.8mM], MnSO4 0.05g [0.3mM] 및 CaCl2 0.15g [1.0mM] per 1L, pH 5.9-6.0, NB; Nutrient broth
도 5는 전통 발효식품에서 B. cereus-free starter culture의 개발과정을 나타낸 것이다.
도 6은 박테리오파지 처리 및 비처리군에 따른 B. cereus-free starter culture의 passage에 따른 총균 및 바실러스 세레우스, 박테리오파지의 수를 비교한 그래프와 마이크로플로라(microflora)의 변화를 분석한 것이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 박테리오파지(bacteriophage)를 유효성분으로 함유하는 발효식품 내의 유해세균 제어용 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물에서, 상기 유해세균은 발효식품의 품질을 떨어뜨리는 미생물로서, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 등이 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물은 박테리오파지 외에 추가로 2가 양이온(divalent cation)을 포함할 수 있는데, 상기 2가 양이온은 Mg2 +, Mn2 + 또는 Ca2 +일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 발효식품 내에 존재하는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 제어를 위해 박테리오파지를 처리할 때, 1가 양이온의 존재하에서는 제어효과가 약했으나, 2가 양이온의 존재하에서는 효과적으로 증식을 제어할 수 있었다. 또한, 본 발명의 조성물은 유용균(B. subtilis)의 증식에는 영향을 미치지 않고, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)만 특이적으로 증식을 저해하는 특징이 있다.
또한, 본 발명의 조성물에서, 상기 발효식품은 된장, 청국장, 고추장, 장아찌 또는 메주일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 조성물에서, 상기 박테리오파지는 바람직하게는 미오비리대(Myoviridae)에 속하는 박테리오파지이며, 더욱 바람직하게는 미오비리대(Myoviridae)의 SPO1 그룹에 속하는 박테리오파지일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명은 또한, 박테리오파지(bacteriophage)를 유효성분으로 함유하는 발효식품 내의 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)를 포함하는 유해세균 제어용 키트를 제공한다. 상기 키트는 2가 양이온을 추가로 포함할 수 있으며, 상기 2가 양이온은 Mg2 +, Mn2 + 또는 Ca2+일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명은 또한, 발효식품에 박테리오파지(bacteriophage)를 처리하여 발효식품 내의 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)를 포함하는 유해세균을 제어하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 발효식품에 박테리오파지 외에 2가 양이온(divalent cation)을 추가로 처리할 수 있다. 발효식품, 박테리오파지 및 2가 양이온은 전술한 바와 같다.
본 발명은 또한, 볏짚 등에 박테리오파지를 처리하는 단계를 포함하는 유해세균이 제거된 전통 발효식품용 스타터 컬쳐(starter culture)의 제조 방법 및 상기 방법에 의해 제조된 유해세균이 제거된 전통 발효식품용 스타터 컬쳐(starter culture)를 제공한다. 대부분의 볏짚 샘플들은 바실러스 세레우스를 포함한 유해세균이 오염되어 있는데, 상기 볏짚에 본 발명의 박테리아파지를 처리함으로써 총균수에는 영향을 미치지 않으면서 유해세균은 제거할 수 있으므로, 효과적으로 바실러스 세레우스를 포함한 유해세균이 제거된 전통 발효식품용 스타터 컬쳐(starter culture)를 제조할 수 있는 것이다.
본 발명의 방법에서, 상기 유해세균은 발효식품의 품질을 떨어뜨리는 미생물로서, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) 등이 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 방법에서, 상기 발효식품은 된장, 청국장, 고추장, 장아찌 또는 메주일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 방법에서, 상기 박테리오파지는 바람직하게는 미오비리대(Myoviridae)에 속하는 박테리오파지이며, 더욱 바람직하게는 미오비리대(Myoviridae)의 SPO1 그룹에 속하는 박테리오파지일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 스타터 컬쳐(starter culture)를 이용하여 제조된 전통 발효식품을 제공한다. 상기 전통 발효식품은 된장, 청국장, 고추장, 장아찌 또는 메주일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
이하, 본 발명의 실시예를 들어 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
1. 재료 및 방법
(1) 전통장류에서 박테리오파지의 분리
된장, 고추장, 청국장 등의 전통장류와 장아찌 및 메줏가루에서 6개의 바실러스 세레우스 표준균류를 이용하여 박테리오파지를 분리하였다. 분리된 박테리오파지는 2~3차례의 단일 플라그 분리(single plaque isolation) 과정을 거쳐 순수분리하였다.
(2) 박테리오파지의 특성 분석
상기 방법으로 분리된 박테리오파지는 폴리에틸렌 글리콜 침전(PEG-precipitation)과 초원심분리기(ultracentrifuge)를 거쳐 실험실에서 대량 순수분리하였고, 이를 이용하여 TEM(transmission electron microscopy), DNA 제한효소 절단 패턴 분석(DNA restriction enzyme digestion pattern analysis), SDS-PAGE를 이용한 구조단백질 분석, 일단성장곡선(one step growth curve)을 이용한 방출수(burst size)의 결정 등의 특성분석을 실시하였다. 또한 식품 및 설사병 환자에게서 분리된 바실러스 세레우스를 이용한 숙주범위(host range) 분석을 실시하였다.
(3) 박테리오파지의 게놈 분석
순수분리된 파지 DNA는 염기서열분석(pyrosequencing)을 이용하여 DNA 염기서열을 얻었고, 다양한 분석 프로그램들을 이용하여 독성 유전자, 알레르기 유전자, 항생제 저항성 유전자 등의 존재에 대한 분석을 실시하였다.
(4) 박테리오파지의 청국장 적용실험
바실러스 세레우스(106 CFU/g)를 종균(starter)으로 이용한 청국장 제조 과정에서 인위적으로 바실러스 세레우스(103 CFU/g)를 첨가하고 여기에 분리된 박테이로파지를 첨가 후 48시간 발효하고, 총균수와 바실러스 세레우스의 수를 측정하였다.
(5) 박테리오파지를 이용한 볏짚 유래
B.
cereus
-
free
starter
culture
의 개발
다양한 볏짚 샘플에서 다양한 배지(콩 갈은 물, 볏짚 추출물, TA 등)를 이용하여 자연균총(natural microflora)을 배양하여 이를 청국장의 제조에 이용하였다. 이때, 분리된 박테리오파지를 첨가하여 B. cereus-free starter culture를 개발하였다.
실시예
1: 전통발효식품에서
바실러스
세레우스
특이적인 박테리오파지의 분리 및 특성분석
다양한 전통장류(된장, 청국장, 고추장 및 장아찌) 및 메주 가루에서 바실러스 세레우스를 사멸하는 박테리오파지를 분리했다(표 1). 메주 가루를 제외한 모든 종류의 식품(32~100%)에서 박테리오파지가 분리되었는데 이러한 결과는 전통 발효식품이 바실러스 세레우스를 사멸하는 박테리오파지의 훌륭한 분리원이며 또한 역설적으로 전통 식품에 바실러스 세레우스의 오염이 매우 빈번함을 대변한다.
| 식품종류 | 샘플의 수 | 검출 수 | 검출 확률(%) |
| 된장(D) | 11 | 7 | 63.6 |
| 청국장(C) | 3 | 3 | 100.0 |
| 메주(M) | 6 | 0 | 0.0 |
| 고추장(G) | 5 | 2 | 40.0 |
| 장아찌(J) | 22 | 7 | 31.8 |
| 총수(total) | 47 | 19 | 40.4 |
실시예
2: 분리된 박테리오파지의 특성분석
대량생산(>1011 PFU[plaque forming unit]/ml)과 순수분리(CsCl-gradient ultracentrifugation)를 통해 준비된 박테리오파지를 TEM(transmission electron microscopy)(도 1) 및 제한효소 절단 (restriction enzyme digestion) 분석을 통해 미오비리대(Myoviridae)로 분류하였다. 더 나아가 게놈 시퀀싱(genome sequencing)과 생물정보학적 분석(bioinformatic analysis)을 통해 분리된 박테리오파지가 알레르기를 일으키는 유전자나 독소성분 유전자 등의 유해 유전자와 유전적으로 연관관계를 가지는 유전자를 보유하지 않고 있음을 확인했다(도 2). 또한 파지가 코딩(coding)하고 있는 프리마아제(primase), 엑소뉴클리아제(exonuclease) 및 중합효소(polymerase) 등의 분석을 통해 분리된 박테리오파지가 Myoviridae 중에서도 SPO1 그룹에 속함을 확인할 수 있었다. SPO1 그룹에 속하는 박테리오파지는 용원성 생활사(lysogenic lifecycle)를 가지지 못하는 "strictly virulent" 특성을 가지고 있는 것으로 알려져 있으며, 식품에서 이용할 수 있는 박테리오파지로 좋은 연구 대상이 되고 있다.
실시예
3: 전통발효식품에서 박테리오파지를 이용한
바실러스
세레우스의
제어
(1)
바실러스
서브틸리스를
이용한 청국장 제조에서
바실러스
세레우스의 제어
식품에 박테리오파지 적용실험을 하기 전에 액체배지에서 박테리오파지를 이용한 바실러스 세레우스의 증식저해 실험은 박테리오파지가 MOI(multiplicity of infection) 의존적으로 매우 효과적으로 저해할 수 있음을 확인했다.
식품에서의 효율을 확인하기 위해 바실러스 서브틸리스(B. subtilis)와 바실러스 세레우스(B. cereus)를 함께 접종한 콩에서 유해균(B. cereus)의 증식 저해를 확인했는데, 유용균(B. subtilis)의 증식에는 영향을 미치지 않았으나 바실러스 세레우스는 검출수준<101 CFU/g에서 검출되지 않았다. 재미있는 것은 바실러스 세레우스의 효과적인 증식저해가 2가 양이온(divalent cation, Mg2 +, Mn2 + 또는 Ca2 +)의 존재하에서 가능하다는 것이다. 1가 양이온(monovalent cation, Na+)의 존재하에서도 바실러스 세레우스 제어효과는 있었으나(p<0.05) 2가 양이온(divalent cation)보다는 적었다(도 3).
(2) 박테리오파지 흡착 조사
파지의 감염주기(infection cycle) 중 어디에서 2가 양이온(divalent cation)이 필요한지를 확인하기 위해 흡착 연구(adsorption study)를 수행했는데, 그 결과에서 1가 양이온(monovalent cation)은 영향이 없었으나, 2가 양이온(divalent cation)이 큰 영향을 끼치고 있음을 확인하였다(도 4).
실시예
4: 박테리오파지를 이용한
B.
cereus
free
starter
culture
의 개발 연구
분리된 박테리오파지(BCP8-2 또는 BCP901)를 이용하여 볏짚에서 전통 발효식품용 B. cereus-free starter culture의 개발을 시도하였다(도 5). 시도한 모든 볏짚 샘플들은 모두 B. cereus가 오염되어 있었고, 증식 과정 중 매우 높은 농도로 그 수가 증가했다(105-6 CFU/ml). 자연에 있는 바실러스 세레우스가 오염된 샘플에 박테리오파지를 처리했을 때 몇몇 샘플에서 총균수에는 영향을 미치지 않으나 유해균인 바실러스 세레우스가 발견되지 않았는데(<101 CFU/ml), 이러한 결과는 전통 발효식품을 위한 B. cereus-free starter culture의 개발 가능성을 보여주는 것이다.
구체적으로, 볏짚에 5% 콩 갈은 물을 첨가하고, 여기에 박테리오파지(BCP8-2)를 첨가 후 37℃에서 12시간 동안 배양하여, B. cereus-free starter culture를 개발하였다(P1, Passage 1). P3 샘플에서 바실러스 세레우스가 존재하지 않음을 확인하였다. P1에서 총균수(total bacterial counts)가 파지 처리군과 차이가 없음을 확인하였다. P1에서 파지 처리군과 비처리군 사이에 마이크로플로라(microflora) 변화가 없음을 DGGE 방법으로 확인하였으며, 구체적인 DGGE 분석방법은 하기와 같다.
Beadbeater 및 Ultraclean Soil DNA Isolation kit를 이용한 total genomic DNA를 순수분리하였다. 16s rDNA 서열의 증폭을 위한 PCR 조건은 프라이머(338f-CGCCCGCCGCGCCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGACTCCTACGGGGAGGCAGCAG; 서열번호 1과 518r-ATTCCGCGGCTGCTGG; 서열번호 2)를 사용하여 94℃ 5분, 30 사이클(94℃ 1분, 52℃ 1분, 72℃ 1분) 반응 후, 72℃, 10분에서 최종 신장하였다. 다양한 배지에서 증식한 미생물을 대상으로 DGGE(denatured gradient gel electrophoresis) 분석을 통한 미생물군(microflora)을 분석하였다 (20-60% gradient, 8시간 또는 16시간 프로토콜 이용, 에티디움 브로마이드 염색).
P1 샘플로부터 10배 희석(10% inoculum) 또는 100배 희석(1% inoculum)을 이용하여 접종 후 8시간에서 10시간 계대배양하여 P2~P6 샘플을 생산하였다. P3 이후의 샘플들에서 바실러스 세레우스가 존재하지 않음을 확인하였다. 또한, 각 샘플들에서 총균수(total bacterial counts)가 파지 처리군과 차이가 없음을 확인하였다. 그리고 각 샘플들에서 파지 처리군과 비처리군 사이에 마이크로플로라(microflora) 변화가 없음을 DGGE 방법으로 확인하였다.
파지 처리군과 비처리군의 P1과 P6 샘플을 이용하여 청국장을 제조(1% inoculum)하여, 청국장의 특성을 분석(관능검사, exopolysaccharide 분석 등)하였다.
파지 비처리군(no phage)에서는 바실러스 세레우스가 107 CFU/ml까지 증식하였다. 파지 처리군의 P3에서부터 바실러스 세레우스가 검출되지 않았다. 파지 처리군과 비처리군에서 총균수(total bacterial counts)는 109 CFU/ml 수준으로 차이 없었고, P3 이후 샘플에서도 미생물 수에서의 변화는 없었다(도 6의 A 및 B).
Passage의 증가에 따른 박테리오파지의 숫자를 확인한 결과, 박테리오파지의 숫자는 Inoculum에 따라 비례적으로 감소하였고, 특히 1% inoculum의 경우 P6에서 박테리오파지가 검출되지 않았다(도 6의 C).
Passage의 증가에 따른 마이크로플로라(microflora)의 변화를 분석한 결과, 파지 처리군과 비처리군 사이에서 마이크로플로라(microflora)의 차이는 없었고, Passage의 증가에 따라서도 마이크로플로라(microflora)는 안정적으로 유지됨을 확인하였다(도 6의 D 및 E).
<110> SUNCH'ANG
Sunchang Research Center for Fermentation Microbes(SRCM)
<120> Composition for controlling harmful bacteria comprising
bacteriophage as effective component and method for controlling
harmful bacteria using the same
<130> PN12373
<160> 2
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 338f primer
<400> 1
cgcccgccgc gccggcgggc ggggcggggg cacgggggga ctcctacggg gaggcagcag 60
60
<210> 2
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 518r primer
<400> 2
attccgcggc tgctgg 16
Claims (14)
- 미오비리대(Myoviridae)에 속하는 박테리오파지(bacteriophage) 및 2가 양이온(divalent cation)을 유효성분으로 함유하는 발효식품 내의 유해세균 제어용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 유해세균은 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 발효식품은 된장, 청국장, 고추장, 장아찌 또는 메주인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 삭제
- 미오비리대(Myoviridae)에 속하는 박테리오파지(bacteriophage) 및 2가 양이온(divalent cation)을 유효성분으로 함유하는 발효식품 내의 유해세균 제어용 키트.
- 발효식품에 미오비리대(Myoviridae)에 속하는 박테리오파지(bacteriophage) 및 2가 양이온(divalent cation)을 처리하여 발효식품 내의 유해세균을 제어하는 방법.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
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-
2012
- 2012-12-14 KR KR1020120145854A patent/KR101443140B1/ko active IP Right Grant
-
2013
- 2013-02-26 KR KR1020130020393A patent/KR101443141B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (3)
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Research in Microbiology 제162권, 791~797쪽(Prevalence of bacillus cereus bacteriophages in fermented foods and characterization of phage JBP901', 2011.7.20.) * |
| Research in Microbiology 제162권, 791~797쪽(Prevalence of bacillus cereus bacteriophages in fermented foods and characterization of phage JBP901’, 2011.7.20.)* |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR101443141B1 (ko) | 2014-09-24 |
| KR20130069672A (ko) | 2013-06-26 |
| KR20130069467A (ko) | 2013-06-26 |
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