KR101429937B1 - Cosmetic compositon using herbal rice wine - Google Patents

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Abstract

본 발명은 한방 이화주 추출물을 포함하는 항산화 및 미백용 화장료 조성물에 대한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for antioxidant and whitening comprising an oriental herb extract.

Description

한방 이화주를 이용한 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITON USING HERBAL RICE WINE}{COSMETIC COMPOSITON USING HERBAL RICE WINE}

본 발명은 한방 이화주를 이용한 화장료 조성물에 대한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition using an oriental herb.

최근 화장료들은 피부에 유분 및 수분을 공급하는 것 이외에도, 미백, 항산화, 항염증 기능을 추가로 포함하는 것들이 선호된다. 또한 천연물로부터 유래한 유효성분을 이용한 화장료들의 인기가 높은바, 천연물 유래의 기능성 화장료의 개발이 이루어지고 있다.
In recent years, cosmetics are preferred not only to supply oil and moisture to the skin but also to whitening, antioxidant and anti-inflammatory functions. In addition, cosmetics using active ingredients derived from natural products are popular, and functional cosmetics derived from natural products have been developed.

한편, 막걸리는 우리나라 전통 탁주로, 최근 소비가 증가할 뿐 아니라, 일본 등지로 수출 또한 증가하고 있다. 이에 따라 막걸리의 제조 공정을 개선하거나 특정 첨가물을 첨가하여 막걸리의 특성을 개선시키고자 하는 노력이 있다. 예컨대, 한국 등록특허 제 1092482호에는 전통적인 쌀막걸리에 과일 발효액을 첨가한 과일 막걸리가 개시되어 있으며, 한국 등록특허 제 1037132 호에는 아가콩을 이용한 기능성 탁주가 기재되어 있다. 그러나 이러한 대부분의 연구 개발은 식품으로서의 막걸리에 대한 것이며, 막걸리를 기능성 화장료의 원료로 이용하는 것은 아직 연구가 미진한 실정이다.
On the other hand, makgeolli is traditional Korean takju, and consumption has increased recently, and exports to Japan and other countries are also increasing. Accordingly, there is an effort to improve the manufacturing process of makgeolli or improve the characteristics of makgeolli by adding specific additives. Korean Patent No. 1092482, for example, discloses a fruit makgeolli added with a fruit fermentation liquid to a traditional rice rice wine, and Korean Patent No. 1037132 discloses a functional takju prepared using agar bean. However, most of these researches are about makgeolli as food, and the use of makgeolli as a raw material of functional cosmetic has not yet been studied.

이에 본 발명자들은 막걸리를 개량하여 기능성 화장료를 제조하고자 연구하던 중, 일반 막걸리가 아닌, 쌀을 이용하여 제조한 쌀 누룩, 즉 이화곡을 이용한 이화주에 구기자, 삼백초, 상백피 및 감초를 첨가하여 한방 이화주를 제조하는 경우, 상기 한방 이화주 추출물의 미백, 항산화 효능 등이 뛰어난 것을 발견하고, 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the inventors of the present invention have conducted research to prepare functional cosmetics by improving the makgeolli, and have found that rice koji prepared by using rice instead of general makgeolli, that is, rice gruel, , The present inventors have found that the whitening and antioxidative effect of the herbal extract of Oriental herbarium is excellent and completed the present invention.

본 발명의 목적은 항산화 및 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a cosmetic composition for antioxidant and whitening.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 한방 이화주 추출물을 포함하는 항산화 및 미백용 화장료 조성물로, 상기 한방 이화주는 구기자, 삼백초, 상백피 및 감초의 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
In order to achieve the above object, the present invention provides an antioxidant and whitening cosmetic composition comprising a herbal extract of Oriental herbarium comprising an extract of Gugija, Saururus thunbergii, .

또한 본 발명은, 쌀을 이용하여 이화곡을 성형하는 단계;According to another aspect of the present invention,

상기 이화곡을 전분질 원료와 혼합하여 1단 담금을 수행하는 단계;Mixing the diced rice with a starch raw material to perform a single-stage dipping;

상기 1단 담금물을 구기자, 삼백초, 상백피 및 감초의 추출물, 이화곡 및 전분질 원료와 혼합하여 2단 담금을 수행하여 한방 이화주를 제조하는 단계;및Preparing a one-packed bean jam by mixing the first-step beads with an extract of Gugija, Saururus chinensis, Saururus chinensis, Saururus chinensis, Licorice root,

상기 한방 이화주를 추출하는 단계를 포함하는 항산화 및 미백용 화장료 조성물의 제조 방법을 제공한다.And extracting the oriental herbal extract. The present invention also provides a method for producing an antioxidant and whitening cosmetic composition.

본 발명의 화장료 조성물은 항산화, 미백, 피부 염증 완화능 및 주름 개선능을 갖는다.
The cosmetic composition of the present invention has antioxidant, whitening, skin inflammation relieving ability and wrinkle improving ability.

도 1 및 도 2는 한방 이화주 추출물 및 이화주 추출물의 티로시나제 저해 활성을 나타낸다.
도 3 및 도 4는 한방 이화주 추출물 및 이화주 추출물의 멜라닌 생성 억제 효능을 나타낸다.
도 5는 한방 이화주 추출물 및 이화주 추출물의 TRP-1 및 TRP-2의 발현 억제능을 나타낸다.
도 6 및 도 7은 한방 이화주 추출물 및 이화주 추출물의 엘라스타제의 효소 활성 저해능을 나타낸다.
도 8은 한방 이화주 추출물 및 이화주 추출물의 MMP-2 및 MMP-9에 대한 효소 활성 저해능을 나타내며, 도 9는 이들의 MMP-2 및 MMP-9의 발현 억제능을 나타낸다.
도 10 및 도 11은 한방 이화주 추출물 및 이화주 추출물의 세포 독성 평가 결과이다.
도 12 및 도 13은 한방 이화주 추출물 및 이화주 추출물의 피부 염증 반응 저해능을 나타낸다.
도 14 및 도 15는 한방 이화주 추출물 및 이화주 추출물의 ABTS 라디칼 소거능을 나타낸다.
Figs. 1 and 2 show tyrosinase inhibitory activities of the extracts of Oriental herbal extracts and Chinese herbal extracts.
FIGS. 3 and 4 show the melanin production inhibitory effect of the extracts of the Korean herbal extracts and the Korean herbal extracts.
FIG. 5 shows the inhibitory effect of TRP-1 and TRP-2 on the expression of Herbal Extract and Herbal Extract.
FIGS. 6 and 7 show the enzyme activity inhibitory activity of the herbal extracts of Chinese herbal extract and Chinese herbal extract.
FIG. 8 shows the inhibitory activity of MMP-2 and MMP-9 on the enzyme activity of the extracts of Oriental herbal extracts and Miltaria officinalis, and FIG. 9 shows the inhibitory effect on the expression of MMP-2 and MMP-9.
Figs. 10 and 11 show the results of the cytotoxicity evaluation of the extracts of Oriental herbal extracts and the extracts of Oriental herbivorous plants.
Figures 12 and 13 show the ability of the extracts of Oriental herbarium extract and R. indigotorum extract to inhibit skin inflammation.
Figs. 14 and 15 show the ABTS radical scavenging ability of the extracts of Oriental and Oriental hyphae.

본 발명은 한방 이화주 추출물을 포함하는 항산화 및 미백용 화장료 조성물로, 상기 한방 이화주는 구기자, 삼백초, 상백피 및 감초의 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 미백용 화장료 조성물에 대한 것이다.
The present invention relates to an antioxidant and whitening cosmetic composition comprising an extract of Oriental herbarium, and a cosmetic composition for antioxidative and whitening characterized in that the oriental herb extract contains extracts of gugija, saururus, saururus, saururus and licorice.

또한 본 발명은, 쌀을 이용하여 이화곡을 성형하는 단계;According to another aspect of the present invention,

상기 이화곡을 전분질 원료와 혼합하여 1단 담금을 수행하는 단계;Mixing the diced rice with a starch raw material to perform a single-stage dipping;

상기 1단 담금물을 구기자, 삼백초, 상백피 및 감초의 추출물, 이화곡 및 전분질 원료와 혼합하여 2단 담금을 수행하여 한방 이화주를 제조하는 단계;및Preparing a one-packed bean jam by mixing the first-step beads with an extract of Gugija, Saururus chinensis, Saururus chinensis, Saururus chinensis, Licorice root,

상기 한방 이화주를 추출하는 단계를 포함하는 항산화 및 미백용 화장료 조성물의 제조 방법에 대한 것이다.
And extracting the oriental herbal extract, and a process for producing a cosmetic composition for antioxidant and whitening.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나, 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The advantages and features of the present invention, and the manner of achieving them, will be apparent from and elucidated with reference to the embodiments described hereinafter in conjunction with the accompanying drawings. It should be understood, however, that the invention is not limited to the disclosed embodiments, but is capable of many different forms and should not be construed as limited to the embodiments set forth herein. Rather, these embodiments are provided so that this disclosure will be thorough and complete, To fully disclose the scope of the invention to those skilled in the art, and the invention is only defined by the scope of the claims.

이하, 본 발명에 관하여 상세히 설명하기로 한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.

한방 이화주Hanbang Lee Hwa-ju

본 발명의 한방 이화주는 한방 추출물을 첨가하여 제조한 이화주이다. 이화주란, 이화곡을 이용하여 제조한 탁주의 일종으로, 이화곡이란 쌀로 빚은 전통 누룩이다.
The herbal extract of Oriental herbaceous plant of the present invention is a herbal extract prepared by adding herbal extract. Ehwajo is a type of Takju produced by using Ewha songs, and rice hwa is a traditional yeast made of rice.

이화곡Ewha Song

한방 이화주 제조를 위한 이화곡은 물에 불린 쌀을 분쇄하여 특정 모양으로 빚은 후 이를 배양하여 제조한 쌀 누룩으로, 그 모양은 지름이 약 8~10cm 정도 크기인 구형이다. 이화곡의 제조는 원료 준비, 빚기(성형), 배양, 법제 및 제품화의 과정으로 이루어진다.Ryeongguk is a rice koji which is made by crushing rice called water and cultivating it in a specific shape. Its shape is spherical, about 8 ~ 10cm in diameter. The production of Rika song consists of preparation of raw materials, bending (molding), cultivation, legalization and commercialization process.

송엽 (솔잎-잘 건조된 절단 솔잎)은 이화곡을 성형하고 상자에 넣은 뒤 이화곡 표면에 뿌려주어 이화곡 배양 시, 통풍이 잘되게 하는 등의 역할을 담당하며, 이화곡 생산에 사용한 쌀의 약 5~10 중량%로 사용된다.
Pine needles (pine needles - well-dried cut pine leaves) are molded into rice cakes and placed in boxes, and then sprayed on the surface of rice cakes to play a role of providing good ventilation during cultivation of rice cakes. 5 to 10% by weight.

이화곡의 성형은 하기의 과정으로 이루어진다. 먼저, 쌀을 5~10회 세미하고, 최소 3시간 이상 10℃ 이하의 냉수에서, 세척한 쌀의 1.5배 이상의 물을 이용하여 쌀을 침지한다. 그리고, 3시간~4시간 동안, 30분 간격으로 쌀을 뒤적이면서 쌀의 물을 뺀다. 그리고, 20 메쉬 체(sieve)를 통과할 수 있는 정도로 미세하게 쌀을 분쇄하고, 쌀 분말을 선별한다. 선별된 쌀 분말을 이용하여 이화곡을 성형하는데, 이 때, 약 8~10cm 크기로 이화곡을 둥글게 뭉쳐 빚는다. 이화곡의 개 당 무게는 200~250g이 바람직하다. 종이상자에 잘 말린 솔잎 40~50g을 흩어 뿌리고 그 위에 이화곡을 넣는다. 그 위에 솔잎을 다시 흩어 뿌리고 배양기로 옮겨 배양을 시작한다. 이화곡의 배양은 온도 25~35℃, 습도 40~60%로 유지하는 항온 항습기에서 수행하며, 총 배양일은 7~10일이 소요된다. The molding of the dancing piece is performed by the following process. First, rice is sifted 5 to 10 times, and rice is immersed in cold water at 10 ° C or less for at least 3 hours and at least 1.5 times of washed rice. Then, for 3 to 4 hours, drain the rice while stirring the rice at intervals of 30 minutes. Then, rice is finely pulverized to such a degree that it can pass through a 20 mesh sieve, and rice powder is selected. The selected rice powder is used to form a dancing piece. At this time, the dancing piece is rounded to a size of about 8 to 10 cm. The weight per piece of the dough is preferably 200 to 250 g. Spread 40 ~ 50g of dried pine needles on a paper box and put a piece of rice cake on it. Spread the pine needles over it and transfer it to the incubator to start culturing. Cultivation of Ehwa is performed in a temperature and humidity chamber maintained at a temperature of 25 ~ 35 ℃ and a humidity of 40 ~ 60%, and the total cultivation time is 7 ~ 10 days.

배양이 완료된 후, 이화곡 표면의 균사와 포자 등을 깨끗이 털어내고 이화곡을 12등분으로 쪼개어 내부의 오염 여부를 검사함으로써 이화곡의 법제를 수행한다. 그리고, 바람이 약하게 불고 습하지 않고 햇볕이 잘 드는 곳에서 약 1주일 동안 이화곡의 건조와 숙성을 진행한다. After the cultivation is complete, the hyphae are cleaned by removing the hyphae and spores on the surface of the rice bran and dividing the rice bran into twelve equal parts to check the contamination of the rice bran. Then, in the place where the wind blows weakly and is not damp and sunny, it progresses the drying and ripening of the song for about one week.

이화곡의 제품화 과정은 하기와 같다. 잘 건조된 이화곡을 건식분쇄기로 미세하게 분쇄하고, 분쇄된 이화곡을 선별 취하여 glucoamylase 역가, 미생물 분석, 수분함량 등을 분석하고 포장하여 한방이화주 생산을 위하여 준비한다.
The process of commercializing Ewha Song is as follows. Fine dried rice bran is finely pulverized by a dry grinder, and the pulverized rice bran is selected and analyzed for glucoamylase activity, microbial analysis, moisture content, etc. and prepared for the production of oriental herb.

한방 이화주Hanbang Lee Hwa-ju

본 발명의 한방 이화주 생산을 위한 전분질 원료는 고두밥, 고두밥 분말, 생쌀, 침미 후 분쇄기를 이용한 후 분쇄된 쌀 또는 백설기 파쇄물 등으로, 상기 백설기 파쇄물은 쌀 또는 분쇄된 쌀을 증편하여 만든 백설기를 방냉 후 파쇄한 것이다.
The starch feedstock for the production of one-packed rice wine according to the present invention comprises rice cake, rice cake powder, uncooked rice, crushed rice after crushing with a crusher after crushing, crushed rice cake, It is crushed.

본 발명의 한방 이화주는 1단 담금 및 2단 담금을 거쳐 제조되며, 이 과정에서 별도의 입국 또는 효모를 첨가하지 않는다.The oriental herbaceous plant of the present invention is manufactured through a one-stage soaking process and a two-stage soaking process, in which no additional entry or yeast is added.

1단 담금은 전분질 원료 100중량부를 90~120 중량부의 이화곡(쌀 누룩) 및 80~120 중량부의 물과 혼합한 후 20~25℃에서 7~10일간 발효하여 수행한다. 1단 담금 시 이화곡 이외의 효모나 타 누룩은 첨가되지 않는다.The one-stage dipping is performed by mixing 100 parts by weight of the starch raw material with 90-120 parts by weight of rice cakes (rice koji) and 80-120 parts by weight of water, followed by fermentation at 20-25 ° C for 7-10 days. Yeast or other yeast other than Eichae are not added during the first stage of dipping.

2단 담금은 1단 발효와 동일하게 전분질 원료를 이화곡(쌀 누룩), 물, 한방 추출물 및 상기 1단 담금물과 혼합한 후 20~25℃에서 20~30일간 발효를 진행한다. 이 때 이 때 2단 담금의 전분질 원료는 1단 담금 시 사용한 전분질 원료의 100~200중량부, 바람직하게는 80~150 중량부, 더욱 바람직하게는 100 중량부이며, 2단 담금 시 사용하는 전분질 원료, 이화곡 및 물의 중량비는 1단 담금 시 사용한 전분질 원료, 이화곡 및 물의 중량비와 동일하다.
The fermentation is carried out at 20 ~ 25 ℃ for 20 ~ 30 days after the starch raw materials are mixed with the rice cake (rice koji), water, herbal extract, At this time, the starch raw material of the two-stage immersion is 100-200 parts by weight, preferably 80-150 parts by weight, more preferably 100 parts by weight, of the starch raw material used in the one-stage immersion, The weight ratio of the raw material, the dicer and the water is the same as the weight ratio of the starch raw material, the dicer and the water used in the first stage soaking.

상기 한방 추출물은 한약재의 추출물로, 구기자, 감초, 상백피 및 삼백초를 동량으로 혼합하여 열수 추출하여 제조한다. 바람직하게는 본 발명의 한방 추출물은 2단 담금 시 사용하는 전분질 원료의 5~10 중량%의 한약재를 사용하여 제조하며, 이 때, 한약재 중량의 2~10배, 바람직하게는 2~5배의 물을 이용하여 1~6시간, 바람직하게는 2~4시간 열수 추출한다.
The herbal extract is an extract of the herbal medicine, which is prepared by mixing the same amount of gugija, licorice, mallow, and saururus chinensis by hot water extraction. Preferably, the herbal extract of the present invention is prepared by using 5 to 10% by weight of the herbal medicine ingredient of the starch ingredient used in the two-stage soaking, wherein the weight of the herbal medicine is 2 to 10 times, preferably 2 to 5 times And extracted with hot water for 1 to 6 hours, preferably 2 to 4 hours.

상기 2단 담금 후 체별 과정을 통해 술지게미를 분리하여 한방이화주를 완성한다. 체별 과정은 발효가 끝난 술덧을 체별기를 이용하여 술지게미(덩어리 상태의 전분질원료)를 분리시키는 과정이다.
After separating the sake lees through the two-step soaking process, the one-way seaweed is completed. The fermentation process is the process of separating sake lees (starchy raw material) from fermented sake using a separator.

한방 이화주 추출물Oriental herb extract

본 발명의 한방 이화주 추출물이란, 한방 이화주를 농축하거나 동결건조하거나 물 또는 유기 용매로 추출, 분획한 것을 의미한다. 상기 유기 용매는 탄소수 6 이하의 알코올, 에틸 아세테이트, 클로로포름 등이 될 수 있으며, 바람직하게는 에탄올 또는 에틸 아세테이트이다.The herbal extract of the present invention means that the herbal extract is concentrated, lyophilized or extracted with water or an organic solvent and fractionated. The organic solvent may be an alcohol having 6 or less carbon atoms, ethyl acetate, chloroform or the like, preferably ethanol or ethyl acetate.

바람직하게는 본 발명의 한방 이화주 추출물은 한방 이화주의 알코올을 제거하고, 동결 건조한 한방 이화주 동결건조물일 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 한방 이화주 추출물은 한방 이화주를 에탄올 추출한 후, 에탄올 추출물을 동결건조한 한방 이화주의 에탄올 추출물일 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 한방 이화주 추출물은 상기 한방 이화주의 에탄올 추출물을 에틸아세테이트 분획한 분획물일 수 있다.
Preferably, the herbal extract of the present invention may be a lyophilized lyophilized product obtained by removing the alcohol from the herbal extract and lyophilized. Preferably, the herbal extract of Oriental herbarium of the present invention may be an ethanol extract of Oriental herbarium obtained by extracting the herbal extract with ethanol and then lyophilized with the ethanol extract. Preferably, the herbal extract of the present invention may be a fraction obtained by fractionating the ethanol extract of the herbal extract with ethylacetate.

한방 이화주 추출물을 포함하는 Including herbal extracts 화장료Cosmetics 조성물 Composition

본 발명의 한방 이화주 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 미백, 항산화, 피부 염증 완화능, 주름 개선능을 갖는다. 구체적으로 본 발명의 한방 이화주 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 티로시나제 활성 저해능, 멜라닌 생성 저해능 및 활성산소 소거능을 갖는다.
The cosmetic composition comprising the herbal extract of the present invention has whitening, antioxidant, skin inflammation-relieving ability and wrinkle-improving ability. Specifically, the cosmetic composition comprising the extract of Oriental herbal extract of the present invention has a tyrosinase activity inhibiting ability, a melanin formation inhibiting ability and an active oxygen scavenging ability.

화장료Cosmetics 조성물 Composition

본 발명의 화장료 조성물은, 당업계의 통상적으로 제조되는 어떠한 제형에도 제조될 수 있으며 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 본 발명의 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 또는 파우더 제형으로 제조될 수도 있다.
The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulations conventionally produced in the art and may be formulated into a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant- containing cleansing oil, powder foundation , An emulsion foundation, a wax foundation and a spray, but is not limited thereto. The cosmetic composition of the present invention may also be formulated as a softening agent, a nutritional lotion, a nutritional cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray or a powder.

<재료 및 방법>&Lt; Materials and methods >

본 발명에서는 시중에서 구입한 멥쌀(경기미)을 사용하였으며, 구기자, 삼백초, 상백피 및 감초는 시중에서 구입한 국산 제품을 이용하였다.
In the present invention, commercially purchased rice (Gyeonggi) was used, and domestic products such as Gugija, Saururus chinensis, Sambucopia and Licorice were purchased from the market.

<이화곡의 제조>&Lt; Production of Rika song &

약 60kg의 쌀(멥쌀) 및 약 0.5kg의 송엽(잘 건조된 절단 솔잎)을 준비하였다. 먼저, 쌀을 8회 세미한 후 7~8℃의 90 kg 냉수에서 4시간 동안 침지하였다. 그리고 30분 간격으로 쌀을 뒤적이면서 3 시간 동안 물을 뺀 후, 20 메쉬 체를 통과할 수 있을 정도로 쌀을 분쇄하고 쌀 분말을 선별하였다. 그리고 상기 쌀 분말을 8~10 cm의 크기로 둥글게 뭉쳐 빚어 이화곡을 성형하였다. 상기 이화곡의 개당 무게는 200~250 g이었으며, 종이 상자에 송엽 40~50 g을 흩어 뿌린 후 상기 이화곡들을 넣었다. 그 위에 다시 송엽을 흩어 뿌리고 25~35℃, 습도 40~60%로 유지하는 항온 항습기(배양기)에서 9일간 배양하였다. About 60 kg of rice (rice) and about 0.5 kg of boughs (well-dried cut pine leaves) were prepared. First, rice was semi- finished 8 times and then immersed in 90 kg cold water at 7 ~ 8 ℃ for 4 hours. After 30 minutes, the rice was removed and the water was removed for 3 hours. The rice was crushed and passed through a 20 mesh sieve, and the rice powder was selected. Then, the rice powder was rolled up to a size of 8 to 10 cm, and the rice cake was formed. The weight of each of the above-mentioned Eichung songs was 200 to 250 g, and 40 to 50 g of the boughs were scattered in a paper box, and then the Eichae songs were inserted. The bloom was scattered again on it and cultured for 9 days in a constant temperature and humidity (incubator) maintaining the temperature at 25 to 35 ° C and a humidity of 40 to 60%.

그 후, 이화곡 표면의 균사와 포자 등을 깨끗이 털어내고 이화곡을 12등분으로 쪼개어 내부의 오염 여부를 검사함으로써 법제 공정을 거쳤다. 그리고 바람이 약하게 불고 습하지 않고 햇볕이 잘 드는 곳에서 약 1주일 동안 건조와 숙성을 진행하였다. 그 후 잘 건조된 이화곡을 건식분쇄기로 미세하게 분쇄하고, 분쇄된 이화곡을 glucoamylase 역가, 미생물 분석, 수분 함량 측정 등을 통하여 선별하였다.
After that, the mycelium and spores on the surface of Ryeongbyeong were cleaned out, and the rice dumplings were split into twelve equal parts to check the contamination inside. And it was dried and aged for about a week in a place where the wind was weak and it was not damp and sunny. After that, the well - dried Eichae were finely pulverized with a dry grinder, and the pulverized Eichae was selected through glucoamylase titration, microbial analysis, and moisture content measurement.

<한방 추출물의 제조>&Lt; Preparation of oriental herb extract >

구기자, 삼백초, 상백피 및 감초를 각각 1kg씩 준비하고, 이를 물 8.5kg으로 3시간 동안 열수 추출하여 한방 추출물을 제조하였다.
1 kg of Gugija, Saururus chinensis, Saururus chinensis, Lycopersicon esculentum and Licorice were prepared and extracted with 8.5 kg of water for 3 hours.

<한방 이화주의 제조>&Lt; Preparation of oriental orientalis &apos;

쌀 30kg을 세미하고 1~2시간 침미하고 분쇄기를 이용하여 분쇄하였다. 상기 분쇄된 생쌀 30kg을 32kg의 이화곡(쌀 누룩) 및 물 33 kg과 혼합한 후 20~25 ℃에서 8일간 발효시켜 1단 담금을 수행하였다. 이 때, 이화곡 이외 효모 또는 타 누룩은 첨가하지 않았다.30 kg of rice was semi-aged for 1-2 hours and pulverized using a grinder. 30 kg of the above ground rice flour was mixed with 32 kg of rice cakes (rice koji) and 33 kg of water, followed by fermentation at 20 to 25 ° C for 8 days to perform one stage of immersion. At this time, no yeast or another yeast other than the rice cake was added.

쌀 30 kg을 세미하고, 1~2시간 침미한 후 분쇄기를 이용하여 분쇄하였다. 상기 분쇄된 생쌀 30kg을 이화곡 32kg, 물 33kg, 상기 한방 추출물 3.1kg 및 상기 1단 발효물과 혼합한 후 20~25 ℃에서 25일간 발효하여 2단 담금을 수행하였다.30 kg of rice was semi-prepared and ground for 1-2 hours and then pulverized using a pulverizer. 30 kg of the above ground raw rice was mixed with 32 kg of diced rice, 33 kg of water, 3.1 kg of the herbal extract, and the first stage fermented product, followed by fermentation at 20 to 25 ° C for 25 days to perform two stages of immersion.

2단 담금이 완료된 후, 체별기를 이용하여 술덧으로부터 술지게미를 분리하여 한방 이화주를 완성하였다.
After the two - stage immersion was completed, the sake lees were separated from the sake lees using a sorting machine to complete the one - sided lees.

<이화주의 제조>&Lt; Production of Ehwaju &

2단 담금 시 한방 추출물을 첨가하지 않는 점을 제외하고는 상기 <한방 이화주의 제조>와 동일한 방법을 수행하여 이화주를 제조하였다.
Except that the herbal extract was not added during the two-stage immersion, the same procedure as in the above < preparation of oriental oriental hyaluronan &quot;

<실시예 1 내지 3> 한방 이화주 추출물&Lt; Examples 1 to 3 >

감압농축기를 이용하여 상기 한방 이화주로부터 알코올 성분을 제거한 후 동결건조하여, 한방 이화주 동결건조물을 제조하였다(실시예 1).The alcohol component was removed from the herbal extract using a vacuum concentrator and then lyophilized to prepare a lyophilized lyophilized product (Example 1).

95% 에탄올을 상기 한방 이화주에 첨가하여 한방 이화주 내 에탄올 농도가 80%가 되도록 한 후 24시간 동안 저온(10 ℃)에서 교반하였다. 그 후 80% 에탄올을 수거하고, 남은 한방 이화주 고형분에 80% 에탄올을 재첨가하여 24시간 동안 저온에서 다시 교반하여 2차 추출을 수행하였다. 이로써, 2차에 걸쳐 한방 이화주의 80% 에탄올 추출물을 수득하고, 이를 감압농축하여 에탄올을 제거한 후, 동결건조하여, 한방 이화주 에탄올 추출물의 동결건조물을 제조하였다(실시예 2).95% ethanol was added to the herbal mixture so that the concentration of ethanol in the herbal mixture became 80%, followed by stirring at low temperature (10 ° C) for 24 hours. Then, 80% ethanol was collected, and 80% ethanol was re-added to the remaining one-packed rice husk solids, and the mixture was further stirred at low temperature for 24 hours for secondary extraction. Thus, an 80% ethanol extract of Oriental herbarium was obtained in the second step. The extract was concentrated under reduced pressure to remove ethanol, followed by lyophilization to prepare a lyophilized product of the extract of Oriental herbarium (Example 2).

상기 한방 이화주 에탄올 추출물의 동결건조물 중 일부를 에틸아세테이트로 분획한 후 동결건조하였다(실시예 3).
A part of the lyophilized product of the extract of the oriental herbal extract was fractionated with ethyl acetate and lyophilized (Example 3).

<비교예 1 내지 3> 이화주 추출물&Lt; Comparative Examples 1 to 3 >

감압농축기를 이용하여 상기 이화주로부터 알코올 성분을 제거한 후 동결건조하여, 이화주 동결건조물을 제조하였다(비교예 1).The alcohol component was removed from the above-mentioned aliquot using a vacuum concentrator and then lyophilized to obtain a lyophilized product (Comparative Example 1).

95% 에탄올을 상기 이화주에 첨가하여 이화주 내 에탄올 농도가 80%가 되도록 한 후 24시간 동안 저온(10 ℃)에서 교반하였다. 그 후 80% 에탄올을 수거하고, 남은 이화주 고형분에 80% 에탄올을 재첨가하여 24시간 동안 저온에서 다시 교반하여 2차 추출을 수행하였다. 이로써, 2차에 걸쳐 이화주의 80% 에탄올 추출물을 수득하고, 이를 감압농축하여 에탄올을 제거한 후, 동결건조하여, 이화주 에탄올 추출물의 동결건조물을 제조하였다(비교예 2).95% ethanol was added to the above-mentioned aliquots to adjust the ethanol concentration in the aliquots to 80%, followed by stirring at low temperature (10 ° C) for 24 hours. Then, 80% ethanol was collected, and 80% ethanol was re-added to the remaining solid of Hwangju and further stirred at low temperature for 24 hours for secondary extraction. Thus, an 80% ethanol extract of Echinacea was obtained in a second step. The extract was concentrated under reduced pressure to remove ethanol, followed by lyophilization to prepare a lyophilized product of Ehwangju ethanol extract (Comparative Example 2).

상기 이화주 에탄올 추출물의 동결건조물 중 일부를 에틸아세테이트로 분획한 후 동결건조하였다(비교예 3).
A portion of the lyophilized product of the Ehwangju ethanol extract was fractionated with ethyl acetate and lyophilized (Comparative Example 3).

<실험예 1> 피부 미백 활성 평가<Experimental Example 1> Skin whitening activity evaluation

인 비트로 In bito 티로시나제Tyrosinase 저해 활성 평가 Evaluation of inhibitory activity

96-웰 플레이트에 0.1 M phosphate buffer (pH 6.5) 210 ㎕를 넣고 여기에 기질(L-tyrosine) 40 ㎕과 티로시나제(tyrosinase) 20 ㎕, 샘플 30 ㎕를 넣고 37 ℃에서 10분간 반응시킨 후 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이 때 대조군은 시료 대신 완충액을 넣은 것으로 하였으며 비교를 위해 Kojic acid를 사용하였다. 저해 활성은 하기 식 1에 따라 계산하였다.
To the 96-well plate, 210 μl of 0.1 M phosphate buffer (pH 6.5) was added, and 40 μl of L-tyrosine, 20 μl of tyrosinase and 30 μl of the sample were added thereto and reacted at 37 ° C. for 10 minutes. The absorbance was measured. For comparison, Kojic acid was used for the comparison. The inhibitory activity was calculated according to the following formula 1.

<식 1><Formula 1>

저해 활성(%) ={1-(sample O.D - sample blank)/대조군 O.D}×100
Inhibition activity (%) = {1- (sample OD-sample blank) / control OD} 100

멜라닌 생성 Melanin production 억제능Inhibition 평가 evaluation

세포(melanocyte cell; B16F1)를 10 % FBS가 함유된 DMEM으로 60cm 플레이트에 5 × 105 cells/ml(최종 부피 3ml)로 넣고 37℃, 10% CO2 배양기(MCO-20AIC, Sanyo)에서 24시간 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 α-MSH 40 ng/ml가 포함된 DMEM 배지에 농도별로 희석한 샘플을 첨가하여 3일간 배양하였다. 3일째에 60 φ플레이트에서 배양된 배지를 200 ㎕씩 96 웰-플레이트에 분주하여 490nm에서 흡광도를 측정하였다. 배지를 제거한 세포에 0.25% trypsin-EDTA (Sigma Chemical Co.) 용액을 처리하여 세포 펠렛(pellet)을 회수하고, 1.5 ml 튜브로 옮겨 10,000rpm으로 10분간 원심분리하여 상등액을 제거하였다. 얻어진 펠렛을 건조시킨 후 1N NaOH 200 ㎕를 넣어 80℃에서 30분 동안 세포 내 멜라닌을 녹였다. 이 용액을 ELISA reader 405nm에서 흡광도를 측정하여 샘플의 멜라닌 함량을 구하였다. 샘플을 첨가하지 않은 세포를 대조군으로 하여 대조군에서의 멜라닌 함량과 비교하여 실험물질의 멜라닌 생성 정도를 측정하여 미백효과를 측정하였다.
Cells (melanocyte cells; B16F1) were plated in DMEM containing 10% FBS at 5 × 10 5 cells / ml (final volume 3 ml) in a 60 cm plate and incubated at 37 ° C in a 10% CO 2 incubator (MCO-20AIC, Sanyo) Time. After the culture, the medium was removed and the diluted samples were added to the DMEM medium containing 40 ng / ml of α-MSH for 3 days. On day 3, 200 [mu] l of the medium cultured on a 60 [phi] plate was divided into 96 well-plates and absorbance was measured at 490 nm. Cells from which the medium was removed were treated with 0.25% trypsin-EDTA (Sigma Chemical Co.) solution to recover the cell pellet, transferred to a 1.5 ml tube and centrifuged at 10,000 rpm for 10 minutes to remove the supernatant. The resulting pellet was dried, and 200 μl of 1N NaOH was added thereto to dissolve the melanin in the cells at 80 ° C for 30 minutes. The absorbance of this solution was measured at 405 nm in an ELISA reader to determine the melanin content of the sample. Cells without addition of the sample were used as a control, and compared with the melanin content in the control, the degree of melanin production of the test material was measured to determine the whitening effect.

TRPTRP -1 및 -1 and TRPTRP -2의 발현 분석-2 expression analysis

세포(melanocyte cell; B16F1)를 1 × 106 cells/ml으로 60 φ 세포 배양 플레이트에 24시간 배양 후 PBS로 2회 세척 후 농도 별로 희석한 샘플을 세포에 처리하고 3일 동안 배양 후 protein concentration buffer로 세포를 lysis 시켰다. TRP(Tyrosine related protein)-1 또는 TRP-2의 억제활성을 측정하기 위해 웨스턴 블럿 방법을 이용하였고, Lysis된 세포 내 총 단백질 양은 Bradford법을 이용하여 정량하였다. Lysis를 통해 얻은 단백질은 10 % SDS-PAGE에서 전기영동 후 PVDF로 겔의 단백질을 전이시켰다. 각각 TRP-1 또는 TRP-2의 1차 항체를 blocking solution에 1:1000의 비율로 희석하여 12 시간 동안 4℃에서 반응시켰다. 1차 항체 반응 후 10분씩 3회에 걸쳐 0.1% TBST (Tris-buffer Saline Tween 20)로 세척하였다. TRP-1 또는 TRP-2를 인지하는 2차 항체를 5% 탈지분유에 1:1000이 되도록 희석하여 2시간 동안 상온에서 반응시키고 1차 항체 때와 마찬가지로 10분씩 3회에 걸쳐 0.1% TBST로 세척 후 화학발광법(chemiluminescence)으로 현상하여 확인하였다.
Cells were cultured in 60 × cell culture plates at 1 × 10 6 cells / ml for 24 hours, washed twice with PBS, and then diluted to a concentration of 1 × 10 6 cells / ml. Cells were treated with protein concentration buffer Lt; / RTI &gt; cells. The Western blot method was used to measure the inhibitory activity of TRP (tyrosine related protein) -1 or TRP-2, and the amount of total protein in the lysed cells was quantitated using the Bradford method. Proteins from lysis were electrophoresed on 10% SDS-PAGE and transferred to PVDF gel proteins. The primary antibodies of TRP-1 or TRP-2, respectively, were diluted in a blocking solution at a ratio of 1: 1000 and reacted at 4 ° C for 12 hours. After the primary antibody reaction, the cells were washed with 0.1% TBST (Tris-buffer Saline Tween 20) three times for 10 minutes each. The secondary antibody recognizing TRP-1 or TRP-2 was diluted to 1: 1000 in 5% non-fat milk milk, reacted at room temperature for 2 hours, washed with 0.1% TBST for 10 minutes in the same manner as the primary antibody And then developed by chemiluminescence.

결과result

인 비트로 In bito 티로시나제Tyrosinase 저해 활성 평가 Evaluation of inhibitory activity

실시예 1은 농도의존적으로 티로시나제의 활성을 저해하는 반면, 비교예 1에서는 저해 효과가 미비했다(도 1). 또한 실시예 2 및 실시예 3 역시 농도의존적으로 티로시나제의 활성을 저해하였으며, 그 저해 활성 정도는 코직산과 동등하거나 그 이상이었다. 그러나 비교예 2 및 3은 이러한 효과가 없었다(도 2).
Example 1 inhibited the activity of tyrosinase in a dose-dependent manner, whereas the inhibitory effect was insufficient in Comparative Example 1 (Fig. 1). In addition, Example 2 and Example 3 also inhibited tyrosinase activity in a dose-dependent manner, and the inhibitory activity was equal to or higher than that of kojic acid. However, Comparative Examples 2 and 3 did not have such an effect (Fig. 2).

멜라닌 (Melanin ( MelaninMelanin ) 생성 억제 효능 평가) Production inhibition efficacy evaluation

실시예 1의 경우 100 ug/ml의 농도에서 15% 정도의 멜라닌 생성 억제 활성을 확인하였으며, 양성대조군으로 사용한 arbutin은 100 ug/ml의 농도에서 약 20% 저해활성을 보였다. 반면 비교예 1은 멜라닌 합성 저해 효과가 없었다(도 3). In the case of Example 1, melanogenesis inhibitory activity was confirmed to be about 15% at a concentration of 100 ug / ml, and arbutin used as a positive control showed about 20% inhibitory activity at a concentration of 100 ug / ml. On the other hand, Comparative Example 1 had no inhibitory effect on melanin synthesis (Fig. 3).

한편, 실시예 2는 농도의존적으로 멜라닌 생성을 저해하였으며 50 ug/ml 이상의 농도에서는 양성대조군인 arbutin과 동등 이상의 저해 활성을 보였다(도 4).
On the other hand, Example 2 inhibited melanogenesis in a concentration-dependent manner, and showed an inhibitory activity equal to or higher than that of the positive control group arbutin at a concentration of 50 ug / ml or higher (Fig. 4).

TRPTRP -1 및 -1 and TRPTRP -2 발현 분석-2 expression analysis

웨스턴 블럿을 이용하여 TRP-1 및 TRP-2의 발현을 분석한 결과, 시험예 2 및 시험예 3은 TRP-1과 TRP-2를 농도의존적으로 저해하는 반면, 비교예 2 및 비교예 3은 TRP-1 및 TRP-2를 저해하지 못하였다(도 5). 그러므로 한방이화주는 TRP-1과 TRP-2를 저해하여 멜라닌의 생합성을 저해하는 것으로 판단되었다.
Analysis of TRP-1 and TRP-2 using Western blot revealed that Test Example 2 and Test Example 3 inhibited TRP-1 and TRP-2 in a concentration-dependent manner, whereas Comparative Example 2 and Comparative Example 3 But did not inhibit TRP-1 and TRP-2 (Fig. 5). Therefore, it was judged that the herbicide inhibited the biosynthesis of melanin by inhibiting TRP-1 and TRP-2.

<실험예 2> 피부 주름 개선능 평가<Experimental Example 2> Evaluation of skin wrinkle improving ability

엘라스타제Elastase 저해 활성 평가 Evaluation of inhibitory activity

50 mM Tris-HCl (pH 8.0) 및 엘라스타제(elastase) (10 g/mL in 50 mM Tris-HCl, pH 8.0)을 각각 0.5 mL 가하고 일정 농도의 시료용액 0.1 mL을 가하여 혼합한 후, 37 ℃에서 5분간 배양하였다. 여기에 기질용액(0.8 mM N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide, in 50 mM Tris-HCl buffer (pH 8.0))를 1.0mL 가하여 37 ℃에서 10분간 반응시킨 후 405 nm에서 흡광도 변화를 측정하였다.
0.5 mL of each of 50 mM Tris-HCl (pH 8.0) and elastase (10 g / mL in 50 mM Tris-HCl, pH 8.0) was added to each well and 0.1 mL of a certain concentration of the sample solution was added thereto. &Lt; / RTI &gt; for 5 minutes. 1.0 mL of a substrate solution (0.8 mM N-succinyl- (L-Ala) 3-p-nitroanilide, in 50 mM Tris-HCl buffer (pH 8.0)) was added and reacted at 37 ° C for 10 minutes. Change was measured.

MatrixMatrix metalloproteinasemetalloproteinase (( MMPMMP )-2/-9의 효소 활성 저해능() -2 / -9 &lt; / RTI &gt; ZymographyZymography ))

세포 (keratinocyte cell; HacaT)를 1 × 106 cells/ml으로 60 φ 세포 배양 플레이트에 24시간 배양 후 배지를 제거하고 PBS로 2회 세척 후 1ml씩 PBS를 분주하여 세포가 마르지 않게 하였다. 준비된 세포에 UVB (312nm)를 20mJ/cm2으로 조사하였다. UV 조사 후, 3일이 지나면 배지를 취하여 50ml centricon에 옮겨 3,000rpm에서 30분 정도 원심분리를 수행한다. Bradford법을 이용하여 단백질의 양을 정량하여 10% SDS-PAGE에서 전기영동 수행 후, 0.1% triton-X로 30분씩 2번 세척한 다음, developing buffer를 넣어 30℃에서 18 시간 동안 반응시키고 쿠마쉬 블루로 염색을 하여 관찰하였다.
Cells were cultured for 24 h at 60 × cell culture plate at 1 × 10 6 cells / ml. After the cells were washed twice with PBS, 1 ml of PBS was added to each well. The prepared cells were irradiated with UVB (312 nm) at 20 mJ / cm 2 . After 3 days from UV irradiation, take the medium, transfer to 50 ml Centricon, and centrifuge at 3,000 rpm for 30 minutes. The amount of protein was quantitated by Bradford method and electrophoresed on 10% SDS-PAGE, washed twice with 0.1% triton-X for 30 minutes, and then incubated at 30 ° C for 18 hours in developing buffer. And stained with blue.

MatrixMatrix metalloproteinasemetalloproteinase (( MMPMMP )-2/-9의 발현 ) -2 / -9 expression 저해능Low performance

세포(keratinocyte cell; HacaT)를 1 × 106 cells/ml으로 60 φ 세포 배양 플레이트에 24시간 배양 후 PBS로 2회 세척 후 1ml씩 PBS를 분주하여 세포가 마르지 않게 한다. 준비된 세포에 UVB(312nm)를 20mJ/cm2으로 조사한다. UV 조사 후 PBS를 제거하고 농도별로 희석한 샘플을 세포에 처리하고 3일 동안 배양 후 protein concentration buffer로 세포를 lysis 시켰다. MMP-2 또는 MMP-9의 억제활성을 측정하기 위해 웨스턴 블럿 방법을 이용하였고, Lysis된 세포 내 총 단백질 양은 Bradford법을 이용하여 정량하였다. Lysis를 통해 얻은 단백질은 10 % SDS-PAGE에서 전기영동 후 PVDF로 겔의 단백질을 전이시켰다. 각각 MMP-2 또는 MMP-9의 1차 항체를 blocking solution에 1:1000의 비율로 희석하여 12 시간 동안 4℃에서 반응시켰다. 1차 항체 반응 후 10분씩 3회에 걸쳐 0.1% TBST (Tris-buffer Saline Tween 20)로 세척한다. MMP-2 또는 MMP-9를 인지하는 2차 항체를 5% 탈지분유에 1:1000이 되도록 희석하여 2시간 동안 상온에서 반응시키고 1차 항체 때와 마찬가지로 10분씩 3회에 걸쳐 0.1% TBST로 세척 후 화학발광법(chemiluminescence)으로 현상하여 확인하였다.
Cells (keratinocyte cells; HacaT) are cultured on a 60 φ cell culture plate at 1 × 10 6 cells / ml for 24 hours, washed twice with PBS, and then the PBS is dispensed in 1 ml increments. The prepared cells are irradiated with UVB (312 nm) at 20 mJ / cm 2 . After UV irradiation, the PBS was removed, and the diluted samples were treated with the cells for 3 days, and the cells were lysed with protein concentration buffer. The Western blot method was used to measure the inhibitory activity of MMP-2 or MMP-9, and the amount of total protein in the lysed cells was quantified using the Bradford method. Proteins from lysis were electrophoresed on 10% SDS-PAGE and transferred to PVDF gel proteins. The primary antibodies of MMP-2 or MMP-9, respectively, were diluted in a blocking solution at a ratio of 1: 1000 and reacted at 4 ° C for 12 hours. After the primary antibody reaction, wash with 0.1% TBST (Tris-buffer Saline Tween 20) three times for 10 minutes each. The secondary antibody recognizing MMP-2 or MMP-9 was diluted to 1: 1000 in 5% skim milk and reacted at room temperature for 2 hours. The antibody was washed with 0.1% TBST for 10 minutes in the same manner as the primary antibody And then developed by chemiluminescence.

결과result

엘라스타제Elastase 저해 활성 평가 Evaluation of inhibitory activity

실시예 1 및 비교예 1의 동결건조물은 엘라스타제의 효소 활성을 농도의존적으로 저해하였으며, 두 실험군간 저해 활성은 유사한 것으로 확인되었다(도 6). 또한 실시예 2 및 비교예 2 역시 농도의존적으로 엘라스타제의 효소 활성을 저해하였다(도 7).
The lyophilizates of Example 1 and Comparative Example 1 inhibited the enzymatic activity of elastase in a concentration-dependent manner, and the inhibitory activities between the two experimental groups were confirmed to be similar (FIG. 6). In addition, Example 2 and Comparative Example 2 also inhibited the enzymatic activity of elastase in a concentration-dependent manner (Fig. 7).

MMPMMP -2 및 -2 and MMPMMP -9 활성 저해 평가 -9 Activity Inhibition Assessment

실시예 2 및 실시예 3은 농도의존적으로 MMP-2 및 MMP-9의 효소 활성을 저해하고(도 8), 이들 단백질들의 세포 내 단백질 발현을 저해하였다(도 9). 한방 이화주의 이런 효과는 비교예 2 및 비교예 3의 효과와 유사한 것으로 관찰되었는바, 한방 이화주의 주름 개선 효과는 이화주에 의한 것으로 생각되었다.
Example 2 and Example 3 inhibited the enzyme activity of MMP-2 and MMP-9 in a concentration-dependent manner (Fig. 8), and inhibited intracellular protein expression of these proteins (Fig. This effect of the oriental oriental herb has been observed to be similar to the effects of Comparative Example 2 and Comparative Example 3.

<실험예 3> 피부 진정 및 항염증 활성 평가<Experimental Example 3> Evaluation of skin sedation and anti-inflammatory activity

세포 독성 평가Cytotoxicity Assessment

피부의 주름개선효과를 검정하는 세포 생존률을 확인하기 위하여 Murine 대식 세포주인 RAW264.7 세포를 이용한 MTT 시험법[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide reduction method]을 수행하였다. 먼저, RAW264.7 세포를 96-웰 플레이트의 각 웰 당 2×105 세포가 되도록 분주하여 FBS 10%가 함유된 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2 조건하에서 24시간 동안 1차 배양하였다. 상기 1차 배양 후 실시예 2 및 실시예 3을 각각 농도별로 처리하고, FBS가 첨가되지 않은 배지로 교체하여 24시간 동안 2차 배양하였다. 그리고 MTT 용액 100 ㎕씩을 배지에 첨가한 후 4시간 동안 방치한 다음 배지를 제거하였다. 각 웰 당 DMSO 용액 100 ㎕씩을 가하여 20분간 교반한 후 마이크로 플레이트 판독기(microplate reader)로 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
In order to confirm the cell survival rate to evaluate the wrinkle-improving effect of the skin, MTT assay [3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide reduction using RAW264.7 cell, Murine macrophage cell line method]. First, RAW 264.7 cells were seeded at 2 × 10 5 cells per well of a 96-well plate and cultured in DMEM medium containing 10% FBS at 37 ° C. under 5% CO 2 for 24 hours. After the primary culturing, Example 2 and Example 3 were treated for each concentration, and the medium was replaced with a medium to which no FBS was added, followed by secondary culturing for 24 hours. Then, 100 μl of MTT solution was added to the medium, left for 4 hours, and then the medium was removed. 100 μl of DMSO solution was added to each well, stirred for 20 minutes, and then absorbance was measured at 540 nm using a microplate reader.

LPSLPS 를 이용한 피부 염증 반응 저해 활성 평가 Evaluation of Inhibitory Activity on Skin Inflammation

Murine 대식 세포주인 RAW264.7 세포를 페니실린(100 IU/ml), 스트렙토마이신(100 μg/ml) 및 5%의 FBS를 함유하는 RPMI 1640 배지를 이용해서 1×106 cell/ml의 농도로 조절한 후, 24 웰 플레이트에 접종하고, 5% CO2 및 37℃ 조건 하 18시간 동안 전배양하였다. 이후 배지를 제거하고 10배 농도로 조제된 시험물질 50 ㎕와 450 ㎕의 LPS (최종농도 1 μg/ml) 함유 배지를 동시에 처리하여 배양하였다. 24시간 후 배지를 원심분리 (12,000 rpm, 3분간)하고, 상층액 일부를 정량 전까지 -20℃ 이하에서 보관하였다. NO 정량은 Griess 용액 (0.5% naphthylethylenediamine dihydrochloride, 5% sulfanilamide, 25% H3PO4)을 이용하여 실시하였으며, 표준물질로 sodium nitrite를 사용하여 검량선을 작성하였다.
Murine macrophage cell line RAW264.7 cells were adjusted to a concentration of 1 x 106 cells / ml using RPMI 1640 medium containing penicillin (100 IU / ml), streptomycin (100 μg / ml) and 5% FBS , And then inoculated in a 24-well plate and pre-cultured for 18 hours under the conditions of 5% CO 2 and 37 ° C. Then, the medium was removed and 50 ㎕ of the test substance prepared at a 10-fold concentration and 450 쨉 L of a medium containing LPS (final concentration 1 g g / ml) were simultaneously treated and cultured. After 24 hours, the culture medium was centrifuged (12,000 rpm, 3 minutes), and a portion of the supernatant was stored at -20 ° C or lower before quantification. NO determination was carried out using Griess solution (0.5% naphthylethylenediamine dihydrochloride, 5% sulfanilamide, 25% H3PO4) and the calibration curve was prepared using sodium nitrite as a standard.

결과result

세포 독성 평가Cytotoxicity Assessment

실시예 1 및 비교예 1은 대식세포주인 RAW264.7에 세포독성을 유발하지 않았다(도 10). 또한 실시예 2 및 3, 비교예 2 및 3에 대한 세포 독성을 MTT 분석법으로 수행한 결과, RAW264.7 세포에 독성을 유발하지 않았다(도 11 A). 특히, 항염증활성이 우수한 실시예 3의 경우, 80% 이상의 세포 생존율을 확인하였다(도 11 B).
Example 1 and Comparative Example 1 did not induce cytotoxicity in the macrophage cell line RAW264.7 (FIG. 10). In addition, cytotoxicity of Examples 2 and 3 and Comparative Examples 2 and 3 was evaluated by MTT assay, which did not cause toxicity to RAW264.7 cells (FIG. 11A). Particularly, in Example 3 having excellent anti-inflammatory activity, cell viability of 80% or more was confirmed (FIG. 11B).

LPSLPS 를 이용한 피부 염증 반응 저해 활성 평가Evaluation of Inhibitory Activity on Skin Inflammation

실시예 1은 농도의존적으로 LPS에 의해 유도된 염증 반응의 일종인 nitric oxide (NO)의 생성을 억제하였으며 특히, 100 ug/ml의 농도에서 약 50% 정도 NO 생성을 억제하였다. 이는 앞서, 실시예 1이 RAW264.7 세포에 대한 독성이 없는 것으로 확인하였으므로 실시예 1 내 성분에 의한 효과로 판단된다. 하지만, 비교예 1에서는 염증 반응 저해 활성을 확인하지 못하였다(도 12). Example 1 inhibited the production of nitric oxide (NO), a kind of inflammatory reaction induced by LPS in a concentration dependent manner, and inhibited NO production about 50% at a concentration of 100 ug / ml. This confirms that the Example 1 was not toxic to RAW264.7 cells, and thus, it is judged that the effect of the ingredient in Example 1 is effective. However, in Comparative Example 1, no inflammatory reaction inhibitory activity was confirmed (FIG. 12).

또한 LPS로 유도한 염증 반응 저해 실험과 관련하여, 실시예 2 및 실시예 3은 50% 이상 NO 생성을 저해하는 것으로 확인되었다(도 13 A). 특히 실시예 3은 농도의존적으로 NO의 생성을 억제하였으며, 50 ug/ml 이상의 농도에서는 세포 독성 없이 70% 이상 NO 생성을 저해하는 효과를 확인하였다(도 13 B). 하지만 비교예 2 및 비교예 3은 염증을 저해하는 효과를 확인하지 못하였다.
In addition, with respect to the LPS-induced inflammatory reaction inhibition experiment, Example 2 and Example 3 were confirmed to inhibit NO production by 50% or more (Fig. 13A). In particular, Example 3 inhibited the production of NO in a concentration-dependent manner, and inhibited NO production by 70% or more without cytotoxicity at a concentration of 50 ug / ml or more (Fig. 13B). However, Comparative Example 2 and Comparative Example 3 failed to confirm the effect of inhibiting inflammation.

<실험예 4> 항산화 활성 평가<Experimental Example 4> Evaluation of antioxidative activity

ABTSABTS 라디칼Radical 소거능Scatters

ABTS와 1.0 mM AAPH를 150 mM NaCl이 더해진 100 mM phosphate buffer (pH 7.4)와 함께 혼합하여 68℃ water bath에서 30분 동안 열을 가하고 실온에서 10분 동안 식혔다. ABTS 용액은 734 nm에서 흡광도 값이 0.7±0.02가 나오도록 버퍼로 희석시켜 사용하였다. 시료용액 10 ul에 흡광도 값을 맞춘 ABTS 용액 990 ul를 혼합하여 37℃에서 10분간 반응시키고, 734 nm에서 흡광도를 측정하였다.
ABTS and 1.0 mM AAPH were mixed with 100 mM phosphate buffer (pH 7.4) supplemented with 150 mM NaCl, heated in a 68 ° C water bath for 30 minutes, and cooled at room temperature for 10 minutes. The ABTS solution was diluted with buffer to give an absorbance value of 0.7 ± 0.02 at 734 nm. 990 μl of ABTS solution with absorbance value was added to 10 μl of sample solution, incubated at 37 ° C for 10 minutes, and absorbance was measured at 734 nm.

결과result

ABTSABTS 라디칼Radical 소거능Scatters

실시예 1은 비교예 1보다 약 10% 이상 높은 활성산소 소거능을 나타내었다(도 14). 또한 한방 이화주 및 이화주 모두 에탄올 추출물보다는 에틸아세테이트 분획물에서 우수한 활성산소 소거능을 보였다(도 15).
Example 1 showed about 10% higher activity oxygen scavenging ability than Comparative Example 1 (FIG. 14). In addition, both of Hanwha Ewha and Hwajae showed excellent active oxygen scavenging ability in ethyl acetate fraction rather than ethanol extract (Fig. 15).

Claims (10)

한방 이화주 추출물을 포함하는 미백용 화장료 조성물로,
상기 한방 이화주는 구기자, 삼백초, 상백피 및 감초의 열수 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 미백용 화장료 조성물.
A cosmetic composition for whitening comprising an oriental herb extract,
The cosmetic composition for antioxidant and whitening according to claim 1, wherein the herbal extract contains hot water extract of Gugija, Saururus chinensis, Saururus chinensis, Saururus chinensis and Licorice.
제 1항에 있어서,
상기 한방 이화주는 이화곡을 이용하여 제조하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Characterized in that said oriental herbaceous plant is produced by using an Eichae song.
제 2항에 있어서,
상기 이화곡은 물에 불린 쌀을 분쇄하여 특정 모양으로 빚은 후 이를 배양하여 제조한 쌀 누룩인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. The method of claim 2,
The cosmetic composition according to claim 1, wherein the rice cake is rice koji prepared by pulverizing rice called water to obtain a specific shape and culturing it.
제 1항에 있어서,
상기 한방 이화주는 입국 또는 효모를 첨가하지 않고 제조되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the oriental herb is produced without admission or yeast.
제 1항에 있어서,
상기 한방 이화주 추출물은 한방 이화주를 에탄올 추출한 후, 에탄올 추출물을 동결건조하고, 상기 동결건조물을 에틸아세테이트 분획한 분획물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
The cosmetic composition according to claim 1, wherein the herbal extract is a fraction obtained by extracting the herbal extract with ethanol, lyophilizing the ethanol extract, and fractionating the lyophilized product with ethyl acetate.
제 1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 피부 염증 완화능을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the cosmetic composition has skin inflammation-relieving ability.
제 1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 티로시나제 활성 저해능 및 멜라닌 생성 저해능을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the cosmetic composition has a tyrosinase activity inhibiting activity and a melanin formation inhibiting activity.
제 1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 활성산소 소거능을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the cosmetic composition has an active oxygen scavenging ability.
쌀을 이용하여 이화곡을 성형하는 단계;
상기 이화곡을 전분질 원료와 혼합하여 1단 담금을 수행하는 단계;
상기 1단 담금물을 구기자, 삼백초, 상백피 및 감초의 열수 추출물, 이화곡 및 전분질 원료와 혼합하여 2단 담금을 수행하여 한방 이화주를 제조하는 단계;및
상기 한방 이화주를 추출하는 단계를 포함하는 미백용 화장료 조성물의 제조 방법.
Molding rice cake using rice;
Mixing the diced rice with a starch raw material to perform a single-stage dipping;
Preparing a one-packed bean jam by mixing the first-step bean curd with the hot-water extract of Gugija, Saururus saurus, Saururus saururis, Saururus saururis and Licorice,
And extracting the oriental bean curd refuse.
제 9항에 있어서,
상기 한방 이화주의 제조 시 입국 또는 효모를 첨가하지 않는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
10. The method of claim 9,
Characterized in that no entry is made or no yeast is added during the production of the oriental herb.
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