KR101381755B1 - Method for producing cryptomeria japonica extracts and cosmetic composition containing the same - Google Patents
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Abstract
본 발명은 화장품의 원료로 사용될 수 있는 삼나무 추출물의 제조에 관한 것으로서, 구체적으로는 비활성 다당체를 제거함으로써 우수한 항산화효과, 항주름 및 보습효과 및 염증성 매개 인자의 발현 억제활성을 가지는 삼나무추출물의 제조에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 (A)건조된 삼나무 잎 또는 줄기에 5~10배 중량의 용매를 가하여 70~90℃에서 열수 추출하는 단계; (B)얻어진 열수 추출액을 여과 및 회수한 후, 초기 부피의 1/10~1/3이 되도록 감압 농축하는 단계; (C)최종 농축액의 2~6배 부피의 에탄올을 가하여 침전반응이 생길 때까지 교반하는 단계; 및 (D)침전물을 여과하여 제거하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 삼나무 추출물의 제조방법이 제공된다.The present invention relates to the production of cedar extracts that can be used as a raw material of cosmetics, and specifically to the production of cedar extracts having excellent antioxidant effect, anti-wrinkle and moisturizing effect and expression inhibitory activity of inflammatory mediators by removing inactive polysaccharides. It is about. According to the present invention (A) adding a solvent of 5 to 10 times the weight to the dried cedar leaves or stems to extract hot water at 70 ~ 90 ℃; (B) filtering and recovering the obtained hot water extract, and concentrating under reduced pressure to 1/10 to 1/3 of the initial volume; (C) adding 2-6 times the volume of ethanol to the final concentrate and stirring until precipitation occurs; And (D) there is provided a method of producing a cedar extract, characterized in that it comprises the step of filtering the precipitate.
Description
본 발명은 화장품의 원료로 사용될 수 있는 삼나무 추출물의 제조에 관한 것으로서, 구체적으로는 비활성 다당체를 제거함으로써 우수한 항산화효과, 항주름 및 보습효과 및 염증성 매개 인자의 발현 억제활성을 가지는 삼나무추출물의 제조에 관한 것이다.The present invention relates to the production of cedar extracts that can be used as a raw material of cosmetics, and specifically to the production of cedar extracts having excellent antioxidant effect, anti-wrinkle and moisturizing effect and expression inhibitory activity of inflammatory mediators by removing inactive polysaccharides. It is about.
화장품은 청결과 아름다움을 추구하는 것에서 시작하여, 수분, 공해 물질과 스트레스, 자외선 등의 외적인 요인과 면역세포의 기능저하, 세포 활성의 저하 등의 내적 요인에 기인한 자유 라디칼(Free Radical), 활성산소, 과산화물 등에 의한 단백질, 핵산, 세포막 지질 파괴 등의 피부 노화의 원인을 제거하거나 억제하는 것으로 확장되어 왔다. Cosmetics begin with pursuit of cleanliness and beauty, and are active due to external factors such as moisture, pollutants and stress, ultraviolet rays, and internal factors such as deactivation of immune cells and deterioration of cell activity. It has been extended to eliminate or suppress the cause of skin aging such as destruction of proteins, nucleic acids, and cell membrane lipids by oxygen and peroxides.
그 중에서도 주름개선 및 억제용 화장품은 젊음을 유지하고자하는 소비자의 많은 관심을 받고 있다. 주름살은 특정 방향으로 근육이 오랜 기간 동안 반복하여 움직임으로써 형성되는데, 연령, 외부환경, 자외선 조사 등에 영향을 받는다. 이러한 인자에 의한 피부 세포의 손상은 여러 가지 노화 현상을 일으키는데 진피 매트릭스를 구성하는 콜라겐, 엘라스틴의 생성 및 분해가 원활하지 못해 매트릭스의 견고성이 떨어져 피부의 탄력이 떨어지고 주름이 생성된다. 광노화의 기전은 자외선 조사에 의해 콜라겐의 합성이 감소하는 동시에 기질 금속 단백 분해효소의 발현이 증가하여 기질의 주요 구성 성분인 콜라겐과 엘라스틴 등의 분해가 증가되어 주름살을 비롯한 광노화 현상이 진행되는 것으로 알려져 있다. 엘라스타제 역시 탄력섬유의 분해과정에서 탄력소를 분해하는 효소로 자외선 조사에 의해 그 활성이 증가하여 광노화 현상에 관여하게 된다. Among them, cosmetics for wrinkle improvement and suppression have received much attention from consumers who want to maintain youth. Wrinkles are formed by repeated movement of muscles over a long period of time in a specific direction, which is affected by age, external environment, ultraviolet radiation, and the like. Damage to skin cells caused by these factors causes various aging phenomena. Collagen and elastin, which constitute the dermal matrix, are not easily produced and degraded. Thus, the firmness of the matrix is reduced and the elasticity of the skin is reduced and wrinkles are generated. The mechanism of photoaging is known to decrease collagen synthesis by UV irradiation and increase the expression of matrix metalloproteinase, which leads to increased degradation of collagen and elastin, which are the major constituents of the substrate, and thus photoaging including wrinkles. have. Elastase is also an enzyme that decomposes elastic fibers in the decomposition process of elastic fibers, and its activity is increased by irradiation with ultraviolet rays, which is involved in photoaging phenomenon.
또한 염증성 매개물질의 조절에 의해 면역반응을 완화시키며, 피부 장벽 강화 기능, 피부보호 기능을 통해 피부 자극을 완화시키려는 시도들이 있어 왔다. 최근 들어 안전한 천연물을 소재로 하여 피부주름을 개선하고, 피부 자극 및 염증을 완화시켜 주는 화장료를 탐색하는 많은 연구들이 발표되고 있다. In addition, attempts have been made to alleviate immune responses by controlling inflammatory mediators and to relieve skin irritation through skin barrier strengthening and skin protection. Recently, many studies have been published to search for cosmetics based on safe natural materials to improve skin wrinkles and relieve skin irritation and inflammation.
그 일예로서 대한민국 공개특허 제2011-0024657호에는 병솔꽃나무(Callistemon lanceolatus) 추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물에 대하여 개시되어 있으며, 대한민국 공개특허 제2011-0110069호에는 생강나무 잎 추출물을 포함하는 피부 미백 및 주름개선용 화장료 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 공개특허 제2011-0120813호에는 비단풀(Euphorbia supina) 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 화장료 조성물에 대하여 개시되어 있다. 또한 대한민국 공개특허 제2011-0047374호에는 삼나무 추출물 및 대나무 추출물을 함유하여 피부 보습에 우수한 효과를 보임과 동시에 염증성 매개 인자의 발현을 억제하여 여드름으로 인한 피부자극 및 염증의 완화 효과를 보이는 남성 피부 개선용 화장료 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 등록특허 제1050613호에는 대나무, 잣나무, 삼나무, 자작나무, 감귤나무 및 녹나무로 구성된 식물들을 저온 초음파 추출하여 항산화 효과와 항주름 및 보습 효과가 우수한 식물 추출물을 함유하는 화장료 조성물이 개시되어 있다.As an example, Korean Patent Application Publication No. 2011-0024657 discloses a cosmetic composition for improving wrinkles that contains an extract of Callistemon lanceolatus, and Korean Patent Application Publication No. 2011-0110069 discloses a skin containing a ginger tree leaf extract. A cosmetic composition for whitening and anti-wrinkle is disclosed, and Korean Patent Publication No. 2011-0120813 discloses a cosmetic composition for anti-wrinkle containing Euphorbia supina extract as an active ingredient. In addition, the Republic of Korea Patent Publication No. 2011-0047374 contains cedar extract and bamboo extract showing an excellent effect on the skin moisturizing and at the same time suppress the expression of inflammatory mediators to improve male skin showing the effect of skin irritation and inflammation caused by acne The cosmetic composition is disclosed, Korean Patent No.1050613 contains low-temperature ultrasonic extraction of plants consisting of bamboo, pine, cedar, birch, citrus and camphor tree with low-temperature ultrasonic extraction and excellent antioxidant and anti-wrinkle and moisturizing effect A cosmetic composition is disclosed.
이에 본 발명자들은 주름개선, 보습 및 염증성 매개 인자의 발현 억제효과를 가지는 천연물 화장료의 제조에 대하여 연구한 결과, 특정한 방법에 의하여 삼나무 추출물에서 비활성 다당체를 제거하면 그 활성이 크게 향상된다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.Therefore, the present inventors have studied the preparation of natural cosmetics having the effect of reducing wrinkles, moisturizing and inflammatory parameters, and confirmed that the activity is greatly improved by removing the inactive polysaccharide from the cedar extract by a specific method. The invention was completed.
그러므로 본 발명은 삼나무 추출물의 제조에 있어서, 비활성 다당체를 제거함으로써 우수한 항산화효과, 항주름 및 보습효과 및 염증성 매개 인자의 발현 억제활성을 가지는 삼나무추출물을 제조하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. Therefore, it is an object of the present invention to provide a method of preparing cedar extracts having excellent antioxidant, anti-wrinkle and moisturizing effects and expression inhibitory activity of inflammatory mediators by removing inactive polysaccharides in the preparation of cedar extracts.
또한 본 발명은 상기 제조방법에 의하여 제조되어 우수한 항주름, 보습 및 함염효과를 나타내는 화장료조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다. In another aspect, the present invention is to provide a cosmetic composition prepared by the production method exhibiting excellent anti-wrinkle, moisturizing and salt-containing effect.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 따르면 삼나무 조추출물을 제조하는 단계; 및 상기 조추출물에 에탄올을 가하여 비활성 다당체를 제거하는 단계를 포함하는 삼나무 추출물의 제조방법이 제공된다. 상기 삼나무 조추출물은 열수 추출, 용매추출 또는 초음파 추출에 의하여 얻어질 수 있다. 구체적으로는 (A)건조된 삼나무 잎 또는 줄기에 5~10배 중량의 용매를 가하여 70~90℃에서 열수 추출하는 단계; In order to achieve the above object, according to the present invention comprising the steps of preparing a cedar crude extract; And adding ethanol to the crude extract to provide a method for producing cedar extracts comprising the step of removing inactive polysaccharides. The cedar crude extract can be obtained by hot water extraction, solvent extraction or ultrasonic extraction. Specifically, (A) adding a solvent of 5 to 10 times the weight to the dried cedar leaves or stems and extracting hot water at 70 ~ 90 ℃;
(B)얻어진 열수 추출액을 여과 및 회수한 후, 초기 부피의 1/10~1/3이 되도록 감압 농축하는 단계; (B) filtering and recovering the obtained hot water extract, and concentrating under reduced pressure to 1/10 to 1/3 of the initial volume;
(C)최종 농축액의 2~6배 부피의 에탄올을 가하여 침전반응이 생길 때까지 교반하는 단계; 및 (C) adding 2-6 times the volume of ethanol to the final concentrate and stirring until precipitation occurs; And
(D)침전물을 여과하여 제거하는 단계를 포함하는 삼나무 추출물의 제조방법이 제공된다.(D) there is provided a method for producing a cedar extract comprising the step of filtering out the precipitate.
상기의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 따르면 상기 추출방법에 의하여 제조된 삼나무 추출물을 0.001~50 중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.In order to achieve the above another object, according to the present invention there is provided a cosmetic composition containing 0.001 to 50% by weight of cedar extract prepared by the extraction method.
본 발명의 추출방법에 의하면 삼나무 추출물에 포함되어 있는 비활성 다당체 를 효율적으로 제거되므로 우수한 항산화효과, 항주름 및 보습효과 및 염증성 매개 인자의 발현 억제활성을 가지는 삼나무추출물이 얻어진다.According to the extraction method of the present invention, since the inactive polysaccharide contained in the cedar extract is efficiently removed, the cedar extract having excellent antioxidant effect, anti-wrinkle and moisturizing effect, and inhibitory activity of expression of inflammatory parameters is obtained.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명에 사용되는 삼나무(Japanese redwood, peacock pine)는 낙우송과(落羽松科 Taxodiaceae) 삼나무속(屬 Cryptomeria)에 속하는 상록 침엽교목이다. 목재용으로 쓰이며 아시아 동부가 원산지이다. 키는 45m 이상 자라고 둘레는 4.5~7.5m이다. 나무는 피라미드 같은 모양인데, 가지가 줄기를 빙 둘러 빽빽하게 나고 옆으로 뻗는다. 목재는 향기가 나고 붉은빛이 도는 갈색이며 배, 집, 다리, 가구, 큰 통, 장식용 조각품 등을 만드는 데 쓰인다. 잎으로는 향(香)을 만든다. 삼나무에는 식물이 해충, 병균과 박테리아 등에 저항하려고 방출하는 물질인 피톤치트가 함유되어 있어 항균 작용이 뛰어나 예로부터 유해한 균을 치유하는데 널리 이용되어 왔으며 구체적으로는 종기, 부스럼 치료나 아토피와 같은 알레르기성 피부 질환 개선을 위해 널리 이용되어 왔다. 이에 따라 종래 삼나무 추출물을 함유하는 화장료 들이 개발되어 왔다. 그런데 상기 삼나무 추출물은 일반적인 추출방법인 열수추출, 용매추출, 초음파 추출에 의하여 제조되었다. 그런데 이러한 추출물에는 비활성 다당체(inactive polysaccharides)가 함유되어 있으나, 이를 제거하기가 어려워 그대로 사용해 왔다. 이로 인하여 요구되는 효과를 얻기 위하여 많은 양을 사용해야 했으며, 이로 인해 독성을 나타내기도 하였다. 본 발명은 이러한 비활성 다당체를 간단하고도 효율적인 방법에 의하여 제거함으로써 그 활성을 높이는데 그 특징이 있다.Japanese redwood (peacock pine) used in the present invention is an evergreen conifer tree belonging to the genus Cryptomeria. It is used for timber and is native to eastern Asia. It grows over 45m tall and has a circumference of 4.5-7.5m. The tree is shaped like a pyramid, with branches growing tightly around the trunk and stretching to the side. Wood is scented and reddish brown and is used to make boats, houses, bridges, furniture, vats, and decorative sculptures. Leaves make incense. Cedar contains phytoncite, a substance that plants release to resist pests, germs, and bacteria, and has been widely used to cure harmful bacteria since ancient times. Specifically, allergic skin such as boils, swelling and atopy It has been widely used for disease improvement. Accordingly, cosmetics containing conventional cedar extracts have been developed. By the way, the cedar extract was prepared by hot water extraction, solvent extraction, ultrasonic extraction. By the way, the extract contains inactive polysaccharides (inactive polysaccharides), but it is difficult to remove it has been used as it is. This required the use of large amounts to achieve the required effect, which was toxic. The present invention is characterized by enhancing its activity by removing such inactive polysaccharides by a simple and efficient method.
본 발명의 일 구체예에 따르면, (A)건조된 삼나무 잎 또는 줄기에 5~10배 중량의 용매를 가하여 70~90도에서 열수 추출하는 단계; (B)얻어진 열수 추출액을 여과 및 회수한 후, 초기 부피의 1/10~1/3이 되도록 감압 농축하는 단계; (C)최종 농축액의 2~6배 부피의 에탄올을 가하여 침전반응이 생길 때까지 교반하는 단계; 및 (D)침전물을 여과하여 제거하는 단계를 포함하는 삼나무 추출물의 제조방법이 제공된다. According to one embodiment of the invention, (A) adding a solvent of 5 to 10 times the weight to the dried cedar leaves or stems to extract the hydrothermal at 70 ~ 90 degrees; (B) filtering and recovering the obtained hot water extract, and concentrating under reduced pressure to 1/10 to 1/3 of the initial volume; (C) adding 2-6 times the volume of ethanol to the final concentrate and stirring until precipitation occurs; And (D) there is provided a method for producing a cedar extract comprising the step of filtering out the precipitate.
삼나무의 잎, 줄기 또는 그 혼합물을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 삼나무의 잎을 사용한다. 이때 상기 용매로는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알콜, 아세톤, 클로로포름, 헥산, 아세토나이트릴 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 물 또는 에탄올을 사용한다. 건조된 삼나무 잎이나 줄기에 5~10배 중량의 용매를 가하여 70~90도에서 열수 추출한다. 얻어진 열수 추출액을 여과 및 회수한 후 초기 부피의 1/10~1/3이 되도록 감압 농축하여 삼나무 열수 추출물을 제조한다. 상기 열수 추출물에는 비활성 다당체가 포함되어 있으므로, 이를 제거하기 위하여 2~6배 부피, 바람직하게는 4~6배 부피의 에탄올을 가하여 교반한다. 교반에 따라 비활성 다당체가 침전반응에 의하여 제거된다. 상기 침전반응에 의하여 생성된 침전물을 여과하여 제거하고 잔여 용매를 제거함으로써 활성이 우수한 삼나무 추출물이 제조된다.The leaves, stems or mixtures of the cedars can be used, preferably the leaves of cedar. In this case, a solvent selected from water, anhydrous or hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, acetone, chloroform, hexane, acetonitrile, or a mixed solvent thereof may be used as the solvent, and preferably water or ethanol is used. 5-10 times the weight of the solvent is added to the dried cedar leaves or stems and extracted with hot water at 70-90 degrees. Filtration and recovery of the obtained hot water extract, and concentrated under reduced pressure to 1/10 ~ 1/3 of the initial volume to prepare a cedar hot water extract. Since the hydrothermal extract contains an inactive polysaccharide, in order to remove it, 2-6 times the volume, preferably 4-6 times the volume of ethanol is added and stirred. Upon stirring, the inactive polysaccharide is removed by precipitation. The cedar extract having excellent activity is prepared by filtering and removing the precipitate produced by the precipitation reaction and removing the residual solvent.
이와 같이 제조된 삼나무 추출물을 열수 추출물과 대비하여 실험해 본 결과, I형 프로콜라겐 생성 분석에 있어서 월등히 우월한 항노화효과를 나타내었다. 또한 상기 삼나무 추출물은 열수 추출물에 비하여 피부내 조직 분해효소인 MMP-1의 생합성을 현저하게 저해 함으로써 피부내 콜라겐 감소 현상을 완화시켜 피부 주름의 개선효과를 나타내었다. DPPH 자유 라디칼 소거활성에 있어서도, 본 발명에 따른 삼나무 추출물은 BHT와 유사한 정도의 DPPH 자유 라디칼 소거활성을 나타내었다. 나아가 본 발명에 따른 삼나무 추출물은 염증반응 유발 인자인 LPS(Lipopolysaccharide)로 유도된 TNF-α와 COX-2의 생합성을 농도 의존적으로 감소시킴으로써 염증반응을 억제하는 것을 확인하였으며, 열수 추출물과 비교하여 피부 염증 반응을 효과적으로 억제시키며 이로써 피부 트러블을 완화시키는 효능 또한 뛰어남을 확인하였다.The cedar extract thus prepared was tested in comparison with the hydrothermal extract, and showed a superior anti-aging effect in the type I procollagen production assay. In addition, the cedar extract exhibited an improvement in skin wrinkles by relieving the collagen reduction phenomenon in the skin by significantly inhibiting the biosynthesis of the tissue decomposing enzyme MMP-1, compared to the hydrothermal extract. Also in the DPPH free radical scavenging activity, the cedar extract according to the present invention showed a similar degree of DPPH free radical scavenging activity to BHT. Furthermore, cedar extract according to the present invention was confirmed to inhibit the inflammatory response by concentration-dependently reducing the biosynthesis of TNF-α and COX-2 induced by the inflammatory trigger factors LPS (Lipopolysaccharide), and compared with the skin extract It effectively inhibits the inflammatory response, thereby easing the skin trouble.
본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 추출방법에 의하여 제조된 삼나무 추출물을 0.001~50 중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다. 상기 삼나무 추출물이 우수한 항산화활성, 보습 및 주름억제활성을 가지며, 염증성 매개 인자의 발현 억제효과 활성을 가지므로 미백, 주름개선, 여드름용 화장료등으로 유용하게 사용될 수 있다. 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형으로 적용될 수 있다. According to an embodiment of the present invention there is provided a cosmetic composition containing 0.001 to 50% by weight of the cedar extract prepared by the extraction method. The cedar extract has excellent antioxidant activity, moisturizing and anti-wrinkle activity, and has an activity of inhibiting the expression of inflammatory mediators, so it can be usefully used for whitening, wrinkle improvement, cosmetics for acne and the like. The cosmetic composition is a skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisturizing lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisture cream, hand cream, essence, nutrition essence, pack, soap, shampoo, cleansing It can be applied in the form of foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, body cleanser, latex, press powder, loose powder, eye shadow and the like.
[실시예][Example]
이하, 본 발명을 하기 실시예 및 시험예에 의거하여 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되는 것이 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on the following Examples and Test Examples. However, the following examples are only for illustrating the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.
실시예 1: 삼나무 추출물의 제조Example 1: Preparation of Cedar Extract
건조중량 1kg의 삼나무 잎을 건조 및 분쇄하여 에탄올 10kg을 첨가하여 상온에서 24시간 동안 교반 한 후, 원심분리를 하여 용매를 제거하였다. 용매가 제거된 삼나무 잎을 수거하여 건조한 후, 90℃에서 6시간 동안 열수 추출하고, 이어서 얻어진 열수 추출액을 200메쉬로 여과하고, 초기 부피의 1/3이 되도록 50℃에서 감압 농축하였다. 이어서 상기 농축액의 2배 부피의 에탄올을 가하여 50rpm의 속도로 교반하여 에탄올 침전반응을 하였다. 침전된 삼나무 다당체를 제거하기 위하여 필터프레스기기를 이용하여 여과 및 회수한 후, 잔여 용매를 전부 제거하여 진공 건조한 후 파우더 형태의 삼나무 추출물 24g을 얻었다.
1 kg of dry weight cedar leaves were dried and pulverized, 10 kg of ethanol was added thereto, stirred at room temperature for 24 hours, and then centrifuged to remove the solvent. The solvent-free cedar leaves were collected and dried, followed by hot water extraction at 90 ° C. for 6 hours, and then the obtained hot water extract was filtered through 200 mesh and concentrated under reduced pressure at 50 ° C. to obtain 1/3 of the initial volume. Then, two times the volume of ethanol was added to the concentrate, followed by stirring at a rate of 50 rpm to perform ethanol precipitation. After filtration and recovery using a filter press to remove the precipitated cedar polysaccharides, all residual solvents were removed and dried in vacuo to obtain 24 g of cedar extract in powder form.
실시예 2: 삼나무 추출물의 제조Example 2: Preparation of Cedar Extract
건조중량 1kg의 삼나무 잎을 건조 및 분쇄하여 에탄올 10kg을 첨가하여 상온에서 24시간 동안 교반 한 후, 원심분리를 하여 용매를 제거하였다. 용매가 제거된 삼나무 잎을 수거하여 건조한 후, 90℃에서 6시간 동안 열수 추출하고, 이어서 얻어진 열수 추출액을 200메쉬로 여과하고, 초기 부피의 1/3이 되도록 50℃에서 감압 농축하였다. 이어서 상기 농축액의 4배 부피의 에탄올을 가하여 50rpm의 속도로 교반하여 에탄올 침전반응을 하였다. 침전된 삼나무 다당체를 제거하기 위하여 필터프레스기기를 이용하여 여과 및 회수한 후, 잔여 용매를 전부 제거하여 진공 건조한 후 파우더 형태의 삼나무 추출물 53g을 얻었다.
1 kg of dry weight cedar leaves were dried and pulverized, 10 kg of ethanol was added thereto, stirred at room temperature for 24 hours, and then centrifuged to remove the solvent. The solvent-free cedar leaves were collected and dried, followed by hot water extraction at 90 ° C. for 6 hours, and then the obtained hot water extract was filtered through 200 mesh and concentrated under reduced pressure at 50 ° C. to obtain 1/3 of the initial volume. Subsequently, 4 times the volume of ethanol was added to the concentrate, followed by stirring at a rate of 50 rpm to perform ethanol precipitation. After filtration and recovery using a filter press to remove the precipitated cedar polysaccharides, all residual solvents were removed, followed by vacuum drying to obtain 53 g of cedar extract in powder form.
실시예 3: 삼나무 추출물의 제조Example 3: Preparation of Cedar Extract
건조중량 1kg의 삼나무 잎을 건조 및 분쇄하여 에탄올 10kg을 첨가하여 상온에서 24시간 동안 교반 한 후, 원심분리를 하여 용매를 제거하였다. 용매가 제거된 삼나무 잎을 수거하여 건조한 후, 90℃에서 6시간 동안 열수 추출하고, 이어서 얻어진 열수 추출액을 200메쉬로 여과하고, 초기 부피의 1/3이 되도록 50℃에서 감압 농축하였다. 이어서 상기 농축액의 6배 부피의 에탄올을 가하여 50rpm의 속도로 교반하여 에탄올 침전반응을 하였다. 침전된 삼나무 다당체를 제거하기 위하여 필터프레스기기를 이용하여 여과 및 회수한 후, 잔여 용매를 전부 제거하여 진공 건조한 후 파우더 형태의 삼나무 추출물 72g을 얻었다.
1 kg of dry weight cedar leaves were dried and pulverized, 10 kg of ethanol was added thereto, stirred at room temperature for 24 hours, and then centrifuged to remove the solvent. The solvent-free cedar leaves were collected and dried, followed by hot water extraction at 90 ° C. for 6 hours, and then the obtained hot water extract was filtered through 200 mesh and concentrated under reduced pressure at 50 ° C. to obtain 1/3 of the initial volume. Subsequently, 6 times the volume of ethanol was added to the concentrate, and the mixture was stirred at a speed of 50 rpm to perform ethanol precipitation. After filtration and recovery using a filter press to remove the precipitated cedar polysaccharides, all residual solvents were removed, followed by vacuum drying to obtain 72 g of cedar extract in powder form.
비교예 1: 삼나무 추출물의 제조Comparative Example 1: Preparation of Cedar Extract
건조중량 1kg의 삼나무 잎을 건조 및 분쇄하여 에탄올 10kg을 첨가하여 상온에서 24시간 동안 교반 한 후, 원심분리를 하여 용매를 제거하였다. 용매가 제거된 삼나무 잎을 수거하여 건조한 후, 90℃에서 6시간 동안 열수 추출하고, 이어서 얻어진 열수 추출액을 200메쉬로 여과 및 회수한 후, 잔여 용매를 전부 제거하여 진공 건조한 후 파우더 형태의 삼나무 추출물 205g을 얻었다.
1 kg of dry weight cedar leaves were dried and pulverized, 10 kg of ethanol was added thereto, stirred at room temperature for 24 hours, and then centrifuged to remove the solvent. After collecting and drying the solvent-free cedar leaves, hot water extract for 6 hours at 90 ℃, then filtered and recovered the obtained hot water extract with 200 mesh, all residual solvents are removed by vacuum drying and then cedar extract in powder form 205 g was obtained.
시험예 1: I형 프로콜라겐 생성 분석(Type I procollagen assay)Test Example 1: Type I procollagen assay
인간 정상 섬유아세포를 96공 평판배양기에 1 X 105개의 농도로 배양한 다음 실시예 1 내지 3에서 얻은 3가지 삼나무 추출물을 10ppm, 100ppm, 500ppm의 농도로 포함하는 배지로 교체하였다. 양성 대조군으로 TGF-β(Human Transforming Growth Factor-β1)을 사용하였다. 배양 3일째 세포를 수확하여 ELISA 방법으로 생성된 I형 프로콜라겐(Type I procollagen)의 양을 정량하였다. 상기 실시예의 삼나무 추출물을 포함하지 않는 대조군의 프로콜라겐의 양을 0, 양성 대조군을 100으로 설정하고 각 측정값과의 비교치를 산출하였다. 결과는 아래 표 1과 같다. Human normal fibroblasts were cultured in a 96-well plate incubator at a concentration of 1 × 10 5 , and then the three cedar extracts obtained in Examples 1 to 3 were replaced with a medium containing 10 ppm, 100 ppm, and 500 ppm. TGF-β (Human Transforming Growth Factor-β1) was used as a positive control. Cells were harvested on the third day of culture to quantify the amount of type I procollagen produced by ELISA. The amount of procollagen of the control group without the cedar extract of the above example was set to 0 and the positive control group was set to 100, and the comparison with each measured value was calculated. The results are shown in Table 1 below.
Comparative Example 1
Example 1
Example 2
Example 3
상기 표 1에서 확인되는 바와 같이, 인간 정상 섬유아세포 배양실험에서 실시예 1 내지 3의 삼나무 추출물은 음성대조군과 비교하여 I형 프로콜라겐 생성을 농도 의존적으로 촉진시켰다. 특히 실시예 2 및 실시예 3의 경우 더욱 우수한 효과를 나타내었다. 따라서 본 발명 삼나무 추출물은 콜라겐 생성을 촉진함으로써 피부 내 콜라겐 감소 현상을 완화시켜 항노화 효과를 나타냄을 알 수 있다. 또한, 열수 추출물과 동일농도로 처리한 실험에서도 월등히 우월한 항노화 효과를 확인할 수 있었다.As confirmed in Table 1, the cedar extracts of Examples 1 to 3 in human normal fibroblast culture experiments promoted type I procollagen production in a concentration-dependent manner compared to the negative control group. In particular, Example 2 and Example 3 showed a more excellent effect. Therefore, it can be seen that the cedar extract of the present invention exhibits an anti-aging effect by alleviating collagen reduction in the skin by promoting collagen production. In addition, the experiments treated with the same concentration as the hydrothermal extract was able to confirm the superior anti-aging effect.
시험예 2: MMP-1 생합성 억제 분석(MMP-1 biosynthesis inhibition assay)Test Example 2: MMP-1 biosynthesis inhibition assay
인간 정상 섬유아세포를 12공 평판배양기에 1 X 105개의 농도로 배양한 다음 자외선 B를 40mJ/cm2로 조사한 후, 상기 실시예 1 내지 3 및 비교예 1에서 얻은 삼나무 추출물을 각각 10ppm, 100ppm, 500ppm의 농도로 포함하는 배지로 교체하였다. 양성 대조군으로 레티노익산(Retinoic acid)을 사용하였다. 배양 2일째 세포를 수확하여 ELISA 방법으로 생성된 MMP-1(matrix metalloproteinase I)의 양을 정량하였다. 상기 실시예의 삼나무 추출물을 포함하지 않고 자외선을 조사하지 않은 대조군을 100으로 하여 측정값과의 비교치를 산출하였다. 결과는 아래 표 2와 같다. After culturing human normal fibroblasts at a concentration of 1 X 10 5 in a 12-hole plate incubator and irradiating UVB at 40 mJ / cm 2 , the cedar extracts obtained in Examples 1 to 3 and Comparative Example 1 were 10 ppm and 100 ppm, respectively. , Was replaced with a medium containing a concentration of 500ppm. Retinoic acid was used as a positive control. Cells were harvested on the second day of culture to quantify the amount of MMP-1 (matrix metalloproteinase I) produced by ELISA. A comparison value with the measured value was calculated using 100 as the control group which did not include the cedar extract of Example and was not irradiated with ultraviolet rays. The results are shown in Table 2 below.
Control group
Comparative Example 1
Example 1
Example 2
Example 3
상기 표 2에서 확인되는 바와 같이, 인간 정상 섬유아세포 배양실험에서 실시예 1 내지 3의 삼나무 추출물은 자외선 B에 의해 생성되는 MMP-1의 생합성을 유의적으로 억제하였다. 또한, 실시예 2의 4배 에탄올 500ppm의 농도와 실시예 3의 6배 에탄올 500ppm의 농도로 처리한 경우에는 UV 조사를 하지 않은 대조군과 유사한 정도의 MMP-1 생합성을 억제하였다. 따라서 본 발명의 제조방법에 의하여 제조된 삼나무 추출물은 피부내 조직 분해효소인 MMP-1의 생합성을 저해함으로써 피부 내 콜라겐 감소 현상을 완화시켜 피부 주름의 개선효과를 나타냄을 알 수 있다. 또한, 열수 추출물과 동일농도로 처리한 실험에서도 월등히 우월한 피부 주름의 개선효과를 확인할 수 있었다.As confirmed in Table 2, the cedar extract of Examples 1 to 3 in human normal fibroblast culture experiments significantly inhibited the biosynthesis of MMP-1 produced by ultraviolet B. In addition, when treated with a concentration of 500 ppm of 4-fold ethanol of Example 2 and 500 ppm of 6-fold ethanol of Example 3, MMP-1 biosynthesis was inhibited to a similar degree to the control group not subjected to UV irradiation. Therefore, the cedar extract prepared by the production method of the present invention can be seen that by reducing the biosynthesis of MMP-1, a tissue degrading enzyme in the skin to alleviate the collagen reduction in the skin to improve the skin wrinkles. In addition, the experiments treated with the same concentration as the hydrothermal extract was able to confirm the superior effect of improving the skin wrinkles.
시험예 3: DPPH 자유 라디칼 소거활성 측정Test Example 3: Determination of DPPH Free Radical Scavenging Activity
96공 평판배양기에 에탄올에 용해한 DPPH 용액 100ul(0.4mM)과 상시 실시예 1 내지 3 및 비교예 1에서 제조된 삼나무 추출물을 10ppm, 100ppm, 500ppm의 농도로 동량의 시료를 가하여 37℃에서 30분간 반응하였다. 반응 후 517nm에서 ELISA 방법으로 흡광도를 측정하여 DPPH 라디칼 소거활성을 측정하였다. 양성 대조군으로 비에이치티(BHT)를 사용하였다. 결과는 아래 표 3과 같다. 100 μl (0.4 mM) of DPPH solution dissolved in ethanol and cedar extracts prepared in Examples 1 to 3 and Comparative Example 1 were added to the 96-hole plate incubator at the concentration of 10 ppm, 100 ppm, and 500 ppm at the same concentration. Reacted. After the reaction, the absorbance was measured by ELISA at 517 nm to measure DPPH radical scavenging activity. BHT was used as a positive control. The results are shown in Table 3 below.
Comparative Example 1
Example 1
Example 2
Example 3
상기 표에서 확인되는 바와 같이, DPPH 자유라디칼 소거활성 실험에서 실시예 1 내지 3의 삼나무 추출물은 농도 의존적으로 항산화활성이 증가하였다. 또한, 실시예 2의 4배 에탄올 100ppm의 농도와 실시예 3의 6배 에탄올 100ppm의 농도로 처리한 경우에는 BHT 대조군과 유사한 정도의 DPPH 자유 라디칼 소거활성을 나타내었다. 따라서 본 발명의 알코올 침전법으로 다당체가 제거 된 삼나무 추출물은 뛰어난 항산화 활성을 나타냄을 알 수 있다. As confirmed in the table, the cedar extracts of Examples 1 to 3 in the DPPH free radical scavenging activity experiment increased the antioxidant activity in a concentration-dependent manner. In addition, when treated with a concentration of 100 ppm of 4-fold ethanol of Example 2 and a concentration of 100 ppm of 6-fold ethanol of Example 3, DPPH free radical scavenging activity was similar to that of the BHT control group. Therefore, it can be seen that the cedar extract from which the polysaccharide is removed by the alcohol precipitation method of the present invention exhibits excellent antioxidant activity.
시험예 4: SOD(Superoxide dismutase) 유사활성 측정Test Example 4: Determination of SOD (Superoxide Dismutase) -like Activity
96공 평판배양기에 50mM phosphate buffer(pH 7.5), 1.5mM NBT, 3mM Xanthine, 0.13 units/ml Xanthine oxidase와 상기 실시예 1 내지 3, 비교예 1의 삼나무 추출물을 10ppm, 100ppm, 500ppm의 농도로 시료를 가하여 37℃에서 30분간 반응하였다. 반응 후 560nm에서 ELISA 방법으로 흡광도를 측정하여 SOD 유사활성을 측정하였다. 양성 대조군으로 아스코빅에씨드(L-ascorbic acid)를 사용하였다. 결과는 아래 표 4와 같다.50mM phosphate buffer (pH 7.5), 1.5mM NBT, 3mM Xanthine, 0.13 units / ml Xanthine oxidase and cedar extracts of Examples 1 to 3 and Comparative Example 1 were prepared at a concentration of 10 ppm, 100 ppm, and 500 ppm in a 96-hole plate incubator. Was added and reacted at 37 ° C. for 30 minutes. After the reaction, the absorbance was measured by ELISA at 560 nm to determine SOD-like activity. Ascorbic acid (L-ascorbic acid) was used as a positive control. The results are shown in Table 4 below.
Comparative Example 1
Example 1
Example 2
Example 3
상기 표에서 확인되는 바와 같이, SOD 유사활성 실험에서 실시예 1 내지 3의 삼나무 추출물은 농도 의존적으로 항산화활성이 증가하였다. As confirmed in the table, the cedar extracts of Examples 1 to 3 in the SOD-like activity experiment increased the antioxidant activity in a concentration-dependent manner.
시험예 5:LPS(Lipopolysaccharide)로 유도된 TNF-α(Tumor necrosis factor), COX-2(cyclooxygenase-2)의 생합성 억제 효과Test Example 5: Inhibitory effect of TNF-α (Tumor necrosis factor) and COX-2 (cyclooxygenase-2) induced by LPS (Lipopolysaccharide)
인간 정상 섬유아세포를 12공 평판배양기에 1 X 105개의 농도로 배양한 다음 LPS를 처리한 후, 상기 실시예 1 내지 3, 비교예 1에서 얻은 삼나무 추출물을 10ppm, 100ppm, 500ppm의 농도로 포함하는 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확하여 웨스턴블랏(Western blot) 방법을 사용하여 유도된 TNF-α와 COX-2의 양을 정량하였다. 상기 삼나무 추출물을 포함하지 않고 배양한 미처리군을 대조군으로 하여 100으로 잡고 측정값과의 비교치를 산출하였다. 결과는 아래 표 5와 같다. Human normal fibroblasts were cultured in a 12-hole plate incubator at a concentration of 1 X 10 5 and then treated with LPS, and the cedar extracts obtained in Examples 1 to 3 and Comparative Example 1 were included at concentrations of 10 ppm, 100 ppm and 500 ppm. Was replaced with medium. Cells were harvested on day 2 and cultured to quantify the amount of TNF-α and COX-2 induced using Western blot method. The untreated group cultured without the cedar extract was taken as 100 as a control and a comparison with the measured value was calculated. The results are shown in Table 5 below.
Comparative Example 1
Example 1
Example 2
Example 3
상기 표에서 확인되는 바와 같이, 실시예 1 내지 3의 삼나무 추출물은 염증반응 유발 인자인 LPS를 처리함으로써 생성된 TNF-α와 COX-2의 생합성을 농도 의존적으로 감소시킴으로써 염증반응을 억제하는 것을 확인하였다. 또한, 본 발명의 제조방법에 의하여 제조된 삼나무 추출물은 열수 추출물과 비교하여 피부 염증 반응을 효과적으로 억제시키며 이로써 피부 트러블을 완화시키는 효능 또한 뛰어남을 확인하였다.
As confirmed in the table, it is confirmed that the cedar extracts of Examples 1 to 3 inhibited the inflammatory response by concentration-dependently reducing the biosynthesis of TNF-α and COX-2 produced by treating LPS which is an inflammatory trigger. It was. In addition, it was confirmed that the cedar extract prepared by the production method of the present invention effectively inhibits the skin inflammatory response as compared to the hot water extract and thereby also has an excellent effect of alleviating skin problems.
시험예 6: 세포 생존율 측정실험(MTT assay)Test Example 6: MTT assay
인간 정상 섬유아세포를 96공 평판배양기에 1 X 105개의 농도로 배양한 다음 상기 실시예 1 내지 3, 비교예 1에서 얻은 삼나무 추출물을 100pm, 500ppm, 1000ppm의 농도로 포함하는 배지로 교체하여 배양하였다. 배양 1일 후 배지를 제거하고 인산완충용액으로 세포를 두 번씩 세척해주었다. MTT를 3mg/ml 농도가 되도록 인산완충용액에 녹이고 이를 다시 새 배지에 1/10로 희석한 후 첨가하여 4시간 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 모두 제거하고 DMSO를 교반 용해시킨 후 ELISA 방법으로 정량하였다. 상기 삼나무 알코올 침전법 추출물을 포함하지 않는 대조군의 세포생존율을 100으로 설정하고 각 측정값과의 비교치를 산출하였다. 아래 계산식에 따른 결과는 표 6과 같다. Human normal fibroblasts were cultured in a 96-hole plate incubator at a concentration of 1 X 10 5 and then cultured by replacing the cedar extract obtained in Examples 1 to 3 and Comparative Example 1 with a medium containing 100pm, 500ppm and 1000ppm. It was. After 1 day of culture, the medium was removed and the cells were washed twice with phosphate buffer solution. MTT was dissolved in phosphate buffer solution at a concentration of 3 mg / ml, and diluted with 1/10 of the fresh medium, and then added thereto, followed by incubation for 4 hours. After incubation, all medium was removed, DMSO was dissolved and dissolved, and quantified by ELISA method. The cell viability of the control group not containing the cedar alcohol precipitation method extract was set to 100, and the comparison with each measured value was calculated. Results according to the following formula are shown in Table 6.
세포생존율(%)=(시료 첨가구의 흠광도/대조구의 흡광도) × 100Cell survival rate (%) = (blemish of sample added / absorbance of control) × 100
Comparative Example 1
Example 1
Example 2
Example 3
상기 표에서 알 수 있듯이, 세포 생존율 측정실험에서 상기 실시예의 삼나무 추출물은 열수 추출물과 비교하여 동일농도로 처리한 후 세포 생존율을 확인한 결과, 100ppm, 500ppm에서는 10% 내외의 차이를 보였으나, 1000ppm에서는 4배, 6배 에탄올 조건으로 45%이상 세포괴사 차이를 나타내었다. 따라서, 본 발명의 제조방법에 따른 삼나무 추출물은 열수 추출물과 동일농도로 처리한 실험에서 월등히 우월한 세포 생존율 효과를 가짐을 확인할 수 있었다.
As can be seen from the table, in the cell viability measurement experiment, the cedar extract of the example was treated with the same concentration as compared to the hydrothermal extract and confirmed the cell viability, showed a difference of about 10% at 100ppm, 500ppm, but at 1000ppm Cell death was more than 45% under 4 and 6 times ethanol conditions. Therefore, the cedar extract according to the production method of the present invention was confirmed to have a significantly superior cell viability effect in the experiment treated with the same concentration as the hot water extract.
제조 실시예 1 : 크림 제조Preparation Example 1 Cream Preparation
본 발명의 상기 실시예 3에서 제조된 삼나무 추출물을 함유하는 화장료를 하기 표 7의 조성에 따라 크림을 제조하였다.A cosmetic containing cedar extract prepared in Example 3 of the present invention was prepared according to the composition of Table 7 below.
제조 실시예 2: 유연 화장수 Preparation Example 2 Flexible Lotion
하기 표 8에 기재된 조성으로 실시예 3의 삼나무 추출물을 함유하는 유연 화장수를 통상의 방법으로 제조하였다.A flexible lotion containing the cedar extract of Example 3 in the composition shown in Table 8 below was prepared by a conventional method.
제조 실시예 3: 에멀젼 베이스 Preparation Example 3: Emulsion Base
하기 표 9에 기재된 조성으로 삼나무 추출물을 함유하는 에멀젼 베이스를 통상의 방법으로 제조하였다.An emulsion base containing cedar extract with the composition shown in Table 9 below was prepared in a conventional manner.
Claims (10)
(A)건조된 삼나무 잎 또는 줄기에 5~10배 중량의 용매를 가하여 70~90℃에서 열수 추출하는 단계;
(B)얻어진 열수 추출액을 여과 및 회수한 후, 초기 부피의 1/10~1/3이 되도록 감압 농축하는 단계;
(C)최종 농축액의 2~6배 부피의 에탄올을 가하여 침전반응이 생길 때까지 교반하는 단계; 및
(D)침전물을 여과하여 제거하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 삼나무 추출물의 제조방법.According to claim 1, The cedar extract manufacturing method
(A) adding a solvent of 5 to 10 times the weight to the dried cedar leaves or stems and extracting hot water at 70 ~ 90 ℃;
(B) filtering and recovering the obtained hot water extract, and concentrating under reduced pressure to 1/10 to 1/3 of the initial volume;
(C) adding 2-6 times the volume of ethanol to the final concentrate and stirring until precipitation occurs; And
(D) a method of producing a cedar extract, characterized in that it comprises the step of filtering out the precipitate.
The cosmetic composition according to claim 4, wherein the composition is for stimulating alleviation.
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