KR101366549B1 - 수산동물 발효물의 제조 방법과 그 방법에 의하여 얻어진 수산동물 발효물 및 그 용도 - Google Patents

수산동물 발효물의 제조 방법과 그 방법에 의하여 얻어진 수산동물 발효물 및 그 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 수산동물 발효물의 제조 방법과 그 방법에 의하여 얻어진 수산동물 발효물 및 그 용도를 개시한다. 구체적으로 본 발명은 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물을 젖산균, 효모 및/또는 바실러스속 미생물로 발효시키는 것을 특징으로 하는 수산동물 발효물의 제조 방법, 그 방법에 의하여 얻어진 수산동물 발효물 그리고 그 수산동물 발효물을 이용한 아토피성 피부염 개선제 조성물, 항알러지제 조성물 또는 항히스타민제 조성물

Description

수산동물 발효물의 제조 방법과 그 방법에 의하여 얻어진 수산동물 발효물 및 그 용도{A Method for Preparing a Marine Animal Fermentation Product and the Product Obtained Thereby and Uses Thereof}
본 발명은 수산동물 발효물의 제조 방법과 그 방법에 의하여 얻어진 수산동물 발효물 및 그 용도에 관한 것이다. 구체적으로 본 발명은 수산동물 발효물의 제조 방법, 그 방법에 의하여 얻어진 수산동물 발효물 그리고 그 수산동물 발효물을 이용한 아토피성 피부염 개선제 조성물, 항알러지제 조성물 또는 항히스타민제 조성물에 관한 것이다.
어유(魚油)만이 갖고 있는 오메가3 지방산(예, EPA(Eicosapentaenoic Acid), DHA(Docosa Hexaenoic Acid) 등)에 대한 다양한 연구들이 수행되고 있으며, 최근 이들 어유에 함유된 지방산에 대한 높은 가치가 인식되고 있다. 어유에 함유된 오메가3, 오메가6 지방산들은 인체에 적절히 공급되어야만 하며, 특히 오메가3 지방산은 혈액응고방지, 항염증 효능을 나타내고, 류마티스성 관절염에도 우수한 효과가 있다는 것이 보고되고 있다.
이들 어유는 피부건강과도 밀접한 관련성이 있다. 피부는 표피, 진피, 피하조직 등 3층으로 구성되어 있고, 표피의 가장 외측에 있는 각질층은 각질세포를 덮는 세포간지질(세라마이드)과 각질층의 표면을 코팅하는 피지에 의해 외부의 세균이나 자극물질의 진입을 막고 수분의 증발을 억제하며, 피부의 장벽기능을 수행한다. 어유에 함유된 다가불포화지방산의 피부에의 공급은 표피각질포의 지방부분인 세라마이드로 리놀산을 공급하여 더욱 피부장벽기능을 강화한다. 또한 다가불포화지방산은 피부의 에너지원이 되며, 프로스타글란딘, 루이코토리엔 및 이들의 관련 대사산물을 포함하는 다양한 저분자 전구물질 및 대사물로서 작용한다.
오메가3 지방산을 함유하는 어유는 염증을 촉진하는 에이코사노이드의 생성을 저하시키고, 염증을 억제하는 에이코사노이드의 생성을 촉진시켜 결과적으로 염증에 대한 면역학적 반응을 감소시킨다. 즉, 생성되는 에이코사노이드의 타입을 바꾸어서 일련의 사이토카인 생성을 변경시키고 염증을 경감시킨다. 이러한 이유에서 다가불포화지방산은 피부염, 피부소양증 등에 우수한 효능을 나타낸다.
그러나 이러한 어유의 우수한 생리활성이 있음에도 어유의 가공은 어류 부산물로부터 단순한 정제공정을 거쳐 어유를 생산하는데 주력하고 있다. 이렇게 생산된 어유는 주로 식품 및 공업적 이용에 사용되고 있으며, 화장품 등에의 이용은 거의 없는 실정이다.
화장품 등에 이용되지 않는 것은 아토피성 피부염이나 습진, 원인을 알 수 없는 가려움을 동반하는 홍반 등에 어유를 도포하게 되면 가려움이 명확히 진정되지 않으며, 오히려 가려움이 더욱 상승하는 경우도 나타나기 때문이다. 이는 어유에 가려움을 진정시키는 성분도 있으나, 촉진하는 성분도 함유되어 있는 것으로 설명되며, 한 예로 오메가6 계열의 지방산을 과하게 사용할 경우 염증이 촉진된다고 알려져 있다.
현재 수산동물을 발효시켜 어유를 제조한 예는 없으며, 그렇게 제조된 어유가 가려움증을 전혀 유발시키지 않으면서 뛰어난 아토피성 피부염 개선 활성, 항알러지 활성, 항히스타민 활성을 보인다는 보고도 없다.
본 발명은 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물(두부, 뼈, 어피, 지느러미, 간, 난, 내장 등)의 발효물과 그 발효물의 헥산 등에 의한 추출물(미감과 촉감에서 있어 어유와 같은 성상임)이 수산동물의 비발효 추출물물에 비하여 아토피성 피부염 개선 활성, 항아토피 활성, 항히스타민 활성 등 생리 활성을 현저히 높아지는 점을 확인함으로써 완성된 것이다.
본 발명의 목적은 수산동물 발효물의 제조 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 방법에 의하여 얻어진 수산동물 발효물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 수산동물 발효물을 이용한 아토피성 피부염 개선제 조성물, 항알러지제 조성물 그리고 항히스타민제 조성물을 제공하는 데 있다.
일 측면에 있어서, 본 발명은 수산동물 발효물의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명의 수산동물 발효물의 제조 방법은 (a) 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물을 분쇄하는 단계, (b) 상기 분쇄물에 접종되는 미생물의 탄소원과 에너지원을 첨가하여 혼합하는 단계, 및 (c) 그 혼합물에 젖산균, 효모 및 바실러스 속 미생물(Bacillus sp.)로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 미생물을 접종하여 발효시키는 단계를 포함하여 구성된다.
아래의 실시예 및 실험예가 보여주듯이, 수산동물의 종류를 불문하고 수산동물 분쇄물에 젖산균, 효모 및/또는 바실러스 속 미생물을 접종하여 발효시킬 경우 얻어진 발효물은 일반적인 어유(수산동물에서 단순 추출한, 즉 발효하지 않고 추출한 어유)와 달리 가려움을 유발하지 않고 오히려 가려움은 급속히 억제시키는 활성을 보였으며, 특히 상기 발효물을 헥산, 에탄올 등으로 추출할 경우 그 추출 수율은 비발효 수산동물의 추출 수율보다 대체로 7~10배 정도 추출 수율이 높았고, 또 수산동물 발효물의 추출물은 비발효 수산동물 추출물보다 아토피성 피부염 개선 활성, 항알러지 활성, 항히스타민 활성 등 월등하게 높은 활성을 띄었다.
또한 상기 본 발명의 방법에 의하여 얻어진 수산동물 발효물은 헥산으로 추출할 경우 pH가 대략 3.5 내지 4.0 범위이며 미감과 촉감에 있어 어유와 같은 성상을 띄었으며, 진한 황갈색을 띄고, 투명하고 어유 특이취를 나타내었다.
본 명세서에서, "수산동물"은 물에서 사는 척추동물 또는 연체동물의 사체(死體)로서 정의되고 바람직하게는 바다에서 사는 척추동물 또는 연체동물의 사체로서 정의된다. 아래의 실시예를 고려할 때 구체적으로는 고등어과 어류, 정어리과 어류, 복어과 어류, 넙치과 어류, 대구과의 어류, 오징어과의 연체동물을 의미하며, 더 구체적으로는 고등어, 정어리, 복어, 넙치, 명태 또는 오징어를 의미한다.
또 본 명세서에서, "수산동물 가공 부산물"은 어육을 채취한 후의 부산물로서 통상은 두부, 어피, 지느러미, 뼈, 난, 간 등의 내장 등을 포함하는 의미이다. 반면 상기 정의된 수산동물은 수산동물 가공 부산물과의 관계에서는 어류 자체로서 이해될 수 있다.
본 명세서에서 특별히 정의되지 아니한 용어는 당업계의 통상적인 의미를 따른다.
본 발명의 수산동물 발효물의 제조 방법에서, 상기 (a) 단계에서의 사용될 수 있는 수산동물 또는 그것의 가공 부산물은 앞서 수산동물와 관련하여 정의된 바와 같이 물 특히 바다에 서식하는 모든 척추동물의 사체 또는 그것의 가공 부산물이며, 본 발명의 아래의 실시예에서 고등어, 정어리, 옥돔, 넙치, 아귀, 명태 등이 사용되었다 하더라도 이에 한정되는 것은 아니다. 당업자가 다른 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물에 본 발명의 방법을 적용하는 것이 아무런 어려움이 없기 때문이며, 또 아래의 실시예 및 실험예는 사용된 수산동물에 따라 얻어진 발효물의 생리활성이나 그 성상에 차이를 보이지 않음을 보여주기 때문이다.
본 발명의 방법에 사용되는 수산동물이나 수산동물 가공 부산물은 통상 분쇄되어 사용될 것인데, 분쇄물의 입경은 특별한 제한이 없으나, 접종되는 미생물에 의해 그 분쇄물이 균일하게 발효될 정도의 입경인 바람직하다. 여기서 입경은 분쇄물 입자의 길이 방향의 길이를 말하는데, 접종되는 미생물에 의해 균일하게 발효될 정도의 입경이 어느 정도의 입경인가는 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 결정될 수 있다. 본 발명의 아래의 실시예에서는 1-2cm 크기로 분쇄하여 사용하였다. 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물의 통상적인 수분 함량이 80~90% 정도이기 때문에 발효를 위하여 특별히 수분을 공급할 필요가 없으나, 동결건조 등의 방법으로 분말화시켜 발효의 원료로 사용할 경우에는 적정 수분을 공급하여 발효시키게 될 것이다.
또 발명의 수산동물 발효물의 제조 방법에 있어서, 상기 (b) 단계에서의 접종되는 미생물의 탄소원과 에너지원은 당업계에 잘 알려져 있고, 따라서 당업계에 알려진 임의의 것을 사용할 수 있는데, 통상은 올리고당, 유당, 포도당, 과당, 설탕, 이들의 혼합물 등이 사용될 것이다. 이러한 탄소원과 에너지원은 의도한 발효 시간, 발효 정도 등을 고려하여 임의의 범위로 첨가될 수 있다. 통상 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물의 분쇄물 100 중량부 기준 3 중량부 내지 30 중량부의 범위로 첨가될 것이다. 또한 최종적으로 얻어지는 발효물의 기능성 또는 풍미의 향상을 위해서 인삼, 대추, 은행, 영지, 운지, 두충, 당귀, 치커리, 컴프리, 오가피, 쑥, 질경이, 둥굴레, 삽주, 칡 등의 생약재 분말 또는 추출물, 토마토, 신선초, 당근 등의 야채 분말 또는 추출물 등이 첨가될 수 있다. 이들 첨가물은 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물의 분쇄물 100 중량부 기준 0.1 중량부 내지 10 중량부의 범위로 첨가될 것이다.
또 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 젖산균이나 효모 그리고 바실러스 속 미생물에는 특별한 제한이 없다.
젖산균의 경우 락토바실러스 속 젖산균(Lactobacillus sp .), 스트렙토코쿠스 속 젖산균(Streptococcus sp .), 페디오코쿠스 속 젖산균(Pediococcus sp .), 류코노스톡 속 젖산균(Leuconostoc sp .) 및 비피도박테리움 속 젖산균(Bifidobacterium sp.)으로 대별되는데, 본 발명의 방법에는 이러한 모든 젖산균이 사용될 수 있다. 구체적으로 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus), 페디오코커스 세레비세(Pediococcus cerevisiae), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 레코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 레코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides), 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum) 등이 모두 본 발명의 방법에 사용될 수 있다.
효모의 경우, 사카로마이세스 속 효모가 바람직하며, 이러한 효모로서는 예컨대 사카로마이세스 루시(Saccharomyces rouxii), 사카로마이세스 세레비시아에(Saccharomyces cereviciae), 사카로마이세스 오비폴미스(Saccharomyces oviformis), 사카로마이세스 스테이네리(Saccharomyces steineri) 등이 예시될 수 있다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 바릴러스 속 미생물(Bacillus sp.)로서는 청국장, 된장, 치즈 등 식품의 발효에 관여하는 미생물이면 모두 사용될 수 있다. 구체적으로는 바실러스 섭틸리스(B. subtilis), 바실러스 리크네포르미스(B. lichneformis), 바실러스 메가테리움(B. megaterium), 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(B. amyloliquefaciens), 바실러스 낫토(B. natto) 등이 대표적이며, 이외에도 바실러스 안스라시스(B. antharcis), 바실러스렌투스(B. lentus), 바실러스 퍼미러스(B. pumilus), 바실러스 더링지엔시스(B. thuringiensis), 바실러스 알베이(B. alvei), 바실러스 아조토픽산스(B. azotofixans), 바실러스 매세란스(B. macerans), 바실러스 포리믹사(B. polymyxa), 바실러스 파필리에(B. popilliae), 바실러스 코아글란스(B. coagulans), 바실러스 스테아로더모필러스(B. stearothermophilus), 바실러스 파스퇴리(B. pasteurii), 바실러스스 패리커스(B. sphaericus), 바실러스 패스티디오서스(B. fastidiosus) 등이 또한 본 발명의 방법에 사용될 수 있다.
본 발명의 방법에 있어서, 상기 (c) 단계의 발효는 접종된 미생물의 생장이 최대에 이를 때까지 발효시키는 것이 바람직하다. 접종된 미생물이 생장이 최대에 이르는 시점은 발효 온도, 발효 원료(상기 (b) 단계의 혼합물로서, 즉 수산동물 분쇄물과 미생물의 탄소원과 에너지원의 혼합물임)의 양, 접종되는 미생물의 양 등에 따라 결정될 것이다. 당업자는 그의 통상의 능력 범위 내에서 발효 온도, 발효 원료의 양, 접종되는 미생물의 양 등을 고려하여 접종된 미생물의 생장이 최대에 이르는 시점이 어느 시점인가를 결정할 수 있다. 본 발명자의 경험에 의할 때, 아래의 실시예가 보여주듯이 발효 온도가 38℃이고, 수산동물 가공 부산물의 분쇄물이 10kg이고 포도당과 과당 등이 3kg인 경우에 미생물을 5%(w/v)로 접종하였을 때, 접종된 미생물의 생장이 최대에 이르기까지 20일 정도가 소요되었다.
본 발명의 방법에 있어서, 상기 (c) 단계의 발효 온도는 15℃~45℃의 범위 내에서 이루어질 수 있다. 바람직하게는 20℃~40℃의 범위 내에서 이루어질 수 있다. 발효 온도가 위 범위보다 낮을 경우 발효 속도가 느려질 수 있고 또한 원하지 않는 발효 산물이 생겨날 수 있으며, 발효 온도가 위 범위보다 높을 경우도 발효 미생물의 사멸에 따라 마찬가지로 발효 속도가 느려지거나 원하지 발효 산물이 생겨날 수 있다.
또한 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (c) 단계 후에 숙성 단계가 추가로 포함될 수 있다. 이러한 숙성 단계는 접종된 미생물의 생장이 정지된 후에도 미생물에 의한 발효 산물이 안정화되기 위한 것인데, 이러한 숙성 단계는 5일 내지 12개월 정도 수행될 수 있다.
또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (c) 단계 후에 살균 단계가 추가로 포함될 수 있다. 이러한 살균 단계는 열 처리, 자외선 방사 등 당업계에 공지된 통상의 방법을 이용하여 수행될 수 있다.
또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (c) 단계의 발효 후에 발효물 중의 고형물의 제거를 위하여 여과 단계를 수행할 수 있으며 발효물 중의 수분을 제거하기 위하여 건조 단계를 수행할 수 있다.
또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (c) 단계의 발효 후에, 그 발효물은 어유를 포함하고 있으므로(미감과 촉감으로 봤을 때), 어유 성분의 분리·추출을 위하여 헥산 등 비극성 용매로 추출하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 추출은 발효물 바람직하게는 발효 후 여과하고 건조하여 수분이 제거된 발효물과 헥산 등 비극성 용매와 혼합·정치시킨 후에 헥산층 등의 비극성용매층을 회수하여 수행될 수 있다. 헥산층 등의 비극성 용매층의 회수 후에는 감압농축법 등으로 추출용매인 헥산 등의 비극성 용매를 제거할 수 있다.
또 본 발명의 방법에 있어서, 상기 (c) 단계의 발효 후에, 바람직하게는 상기 헥산 등 비극성 용매에 의한 추출 후에 에탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 저급 알콜과 물의 혼합 용매를 사용하여 추가의 추출 단계를 수행할 수 있다. 어유에는 양극성 물질인 인지질이 다량으로 포함되어 있으므로, 상기 추출 단계는 최종 발효물 중의 인지질의 농도를 높이기 위한 것이다. 인지질의 농도를 더욱 높이기 위해서 추가의 추출 단계를 수행할 수도 있으며 이러한 추출 단계는 극성 용매와 비극성 용매의 혼합 용매를 사용하여 혼합·정치 후의 비극성 용매층을 회수하는 단계를 포함한다. 아래의 실시예는 극성 용매와 비극성 용매의 혼합 용매로서 클로로포름, 메탄올 및 물의 80:40:30(v/v/v)의 혼합 용매를 사용하였다.
다른 측면에 있어서, 본 발명은 전술한 바의 방법에 의하여 얻어진 수산동물 발효물에 관한 것이다.
본 발명의 수산동물 발효물은 최초에는 고형물, 어유 및 수분의 혼합 형태로 얻어질 것이나, 전술한 바와 같이 여과, 건조 등에 의하여 고형물과 수분 성분을 제거하고 어유 성분이 주가 된 형태로 가공될 수 있다. 이 어유 성분은 전술한 바와 같이 헥산, 클로로포름 등 비극성 용매 또는 이러한 비극성 용매와 함께 물, 에탄올 등의 극성 용매를 추가로 사용하여 더욱 추출·정제될 수 있다.
전술하였듯이, 본 발명의 수산동물 발효물 또는 그것의 추출물은 비발효 수산동물 추출물보다 아토피성 피부염 개선 활성, 항알러지 활성, 항히스타민 활성 등 생리 활성이 월등히 높고, 미감과 촉감에 있어 어유의 성상을 띄며, 일반적인 어유와 달리 피부와 접촉시 가려움을 일으키지 않고 오히려 가려움을 급속히 억제시키는 활성을 갖고 있다. 따라서 식품 등으로 가공될 수 있을 뿐만 아니라 일반적인 어유와 달리 화장품의 화장품의 원료로 이용되기에도 적합하다.
다른 측면에 있어서, 본 발명은 전술한 바의 수산동물 발효물을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 개선제 조성물에 관한 것이다.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 전술한 바의 수산동물 발효물을 유효성분으로 포함하는 항알러지제 조성물에 관한 것이다.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 전술한 바의 수산동물 발효물을 유효성분으로 포함하는 항히스타민제 조성물에 관한 것이다.
본 명세서에서, "아토피성 피부염"은 모든 유형의 아토피성 피부염을 포함하는 의미이다. 통상 아토피성 피부염은 그 발병 시기 또는 그 발병 대상에 따라 유아형 아토피성 피부염과 소아형 아토피성 피부염과 성인형 아토피성 피부염 그리고 임산부 아토피성 피부염으로 분류되는데, 상기 아토피성 피부염이 의미에는 이러한 모든 유형의 아토피성 피부염이 포함된다.
본 명세서에서, "항알러지"는 알러지성 질환의 개선 활성으로 이해될 수 있으며, 알러지성 질환은 IgE 등에 의하여 비만세포의 활성화에 의하여 야기되는 알러지 반응으로 인하여 초래되는 임상적 증상으로서, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 습진, 소양(搔痒), 화분증, 천식, 기관지염, 두드러기, 혈관염, 비염, 위장증, 설사, 간질성 폐렴, 관절염, 안염, 결막염, 신경염, 중이염, 육아종증, 뇌척수염, 방광염, 후두염, 자반병(紫斑病), 음식물 알러지, 곤충 알러지, 약물 알러지, 금속 알러지, 아나필락시성 쇼크(anaphylactic shock) 등을 포함한다(Bierman CW,et al. (eds.) Allergy, asthma, and immunology from infancy to adulthood. page xvii, Saunders, Philadelphia, 1996).
또한 본 명세서에서, "항히스타민"은 히스타민의 방출 억제 및 히스타민의 작용 억제를 포함하는 의미이다.
또한 본 명세서에서, "개선"이란 증상의 경감, 예방 및/또는 치료를 포함하는 의미이다.
또한 본 명세서에서, "유효성분"이란 단독으로 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 보조제(담체)와 함께 활성을 나타내는 성분을 말한다.
본 발명의 아토피성 피부염 개선제 조성물, 항알러지제 조성물 및 항히스타민제 조성물(이하 "본 발명의 조성물")은 그 유효성분인 수산동물 발효물을 아토피성 피부염 개선 활성을 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 99.900 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 아토피성 피부염의 예방, 개선, 치료, 또는 그 증상의 발현 지연을 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서 화장품 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 조성물이 화장품 조성물로서 파악될 경우, 그 화장품 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩 또는 분말 등의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 조성물은 그 유효성분 이외에 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다.
여기서 "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 독성 이상의 독성이 없는 것을 말한다.
상기 담체는 본 발명의 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 50 중량% 내지 약 99 중량 %로 포함될 수 있다.
그러나 상기 비율은 화장품의 전술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴이나 손)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.
한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다.
상기 담체로서 사용될 수 있는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 또 다른 구체적인 양태에 있어 비누 조성물로서 파악될 수 있다.
본 발명의 조성물이 비누 조성물로서 파악될 경우에, 본 발명의 비누 조성물은 비누 기재에 유효성분을 포함하여 제조될 수 있으며, 첨가제로서 피부 보습제, 유화제, 경수 연화제 등을 포함하여 제조될 수 있다.
상기 비누 기재로서는 야자유, 팜유, 대두유, 파마자유, 올리브유, 팜핵류 등의 식물유지 또는 우지, 돈지, 양지, 어유 등의 동물유지 등이 사용될 수 있고, 상기 피부 보습제로서는 글리세린, 에리트리톨, 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 헥실글리콜, 이소프로필미리스테이트, 실리콘 유도체, 알로에베라, 솔비톨 등이 사용될 수 있으며, 상기 유화제로서는 천연오일, 왁스 지방알콜, 탄화수소류, 천연식물 추출물 등이 사용될 수 있고, 상기 경수연화제로서는 테트라소듐 이디티에이 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 비누 조성물은 또한 첨가제로서 항균제, 분산제, 거품억제제, 용매, 물때 방지제, 부식 방지제, 향료, 색소, 금속이온 봉쇄제, 산화방지제, 방부제 등을 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 비누 조성물에 있어서, 비누 기재나 첨가제는 당업계에 일반적으로 사용되고 있는 함량으로 포함될 수 있는데, 비누 기재는 일반적으로 비누 조성물의 전체 중량을 기준으로 하였을 때 99.999 중량 % 내지 50 중량 %로 첨가될 수 있으며, 첨가제는 1 중량 % 내지 20 중량 %로 첨가될 수 있다.
본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 그 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 경구용 제형(정제, 현탁액, 과립, 에멀젼, 캡슐, 시럽 등), 비경구형 제형(멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액), 국소형 제형(크림, 로션, 연고(반고형의 외용약), 마이크로로에멀젼, 젤, 페이스트, 경피제제(TTS)(예컨대 패치제, 붕대 등) 등으로 제조될 수 있다.
상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.
약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등), 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산, 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 정제화제, 안정화제, 항산화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 들 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다.
부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 본 발명의 약제학적 조성물이 수성 현탁제로 제조될 경우에 적합한 부형제로서는 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 들 수 있다. 주사액으로 제조되는 경우 적합한 부형제로서는 링거액, 등장 염화나트륨 등을 들 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있고, 바람직하게는 국소적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니된다.
본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 기능성 음료 등의 식품 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.
감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.
미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.
또한 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다.
이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005중량％ 내지 약 0.5중량％ 범위를 의미한다.
사용될 수 있는 보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다.
사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.
사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.
사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 수산동물 발효물의 제조 방법과 그 방법에 의하여 얻어진 수산동물 발효물을 제공할 수 있다. 그 수산동물 발효물은 아토피성 피부염 개선 용도, 항알러지제 용도, 항히스타민 용도 등으로 사용될 수 있으며, 화장품 조성물, 비누 조성물, 식품 조성물, 약품 조성물 등으로 제품화될 수 있다.
도 1은 수산동물 발효물 제조 공정의 개략도이다.
도 2는 수산동물 발효물이 IFN-γ로 자극된 HaCaT 세포에서 MDC의 발현을 억제함으로 보여주는 결과이다.
도 3은 수산동물 발효물이 IFN-γ로 자극된 HaCaT 세포에서 TARC의 발현을 억제함을 보여주는 결과이다.
도 4 내지 도 11은 수산동물 발효 추출물이 IFN-γ와 TNF-α로 HaCaT 세포에서 MDC의 발현을 억제함으로 보여주는 결과이다.
도 12 내지 도 17은 수산동물 발효 추출물이 LPS로 자극된 RAW 264.7 세포에서 NO 생성을 억제함을 보여주는 결과이다.
도 18은 Compound 48/80로 가려움을 자극한 실험동물에서 수산동물 발효 추출물이 가려움을 억제하는 결과를 보여주는 결과이다.
도 19는 Compound 48/80로 자극한 실험동물에서 수산동물 발효 추출물이 히스타민 방출을 억제함을 보여주는 결과이다.
도 20은 Compound 48/80로 자극한 실험동물에서 수산동물 발효 추출물이 IgE의 생성을 억제함을 보여주는 결과이다.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 > 수산동물 발효물의 제조 및 수산동물 발효물의 추출물 제조
< 실시예 1> 수산동물 발효물의 제조
< 실시예 1-1> 고등어 가공 부산물의 발효물 제조
<실시예 1-1-1> 고등어 가공 부산물의 발효물 제조예 1
고등어 가공 부산물(어육을 채취한 가공 부산물로서, 두부, 뼈, 어피, 지르러미, 내장 등을 포함하고 있음)을 건조한 후 분쇄기로 1~2cm의 크기가 되도록 분쇄하고, 그 분쇄한 시료 10kg에 증류수를 넣어 20kg이 되도록 조절한 후 여기에 당(포도당과 과당 그리고 올리고당의 혼합물) 3kg을 첨가하였다. 당을 첨가한 시료에 바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액의 1:1 혼합액을 5%(w/w) 되게 첨가하여 혼합한 후 38℃에서 20일간 배양하였다. 배양 후 4㎛의 여과지로 여과하여 고형물을 제거하고 액상의 발효물을 얻었다.
<실시예 1-1-2> 고등어 가공 부산물의 발효물의 제조예 2
상기 <실시예 1-1>과 동일한 재료, 동일한 공정 그리고 동일한 공정 조건으로 발효시키되, 발효 미생물을 바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae) 배양액의 1:1 혼합액을 5%(w/w) 되게 첨가하여 혼합한 후 38℃에서 20일간 배양하였다. 배양 후 4㎛의 여과지로 여과하여 고형물을 제거하고 액상의 발효물을 얻었다.
<실시예 1-1-3> 고등어 가공 부산물의 발효물의 제조예 3
상기 <실시예 1-1>과 동일한 재료, 동일한 공정과 동일한 공정 조건으로 발효시키되, 발효 미생물을 바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액 그리고 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae) 배양액의 1:1:1 혼합액을 5%(w/w) 되게 첨가하여 혼합한 후 38℃에서 20일간 배양하였다. 배양 후 4㎛의 여과지로 여과하여 고형물을 제거하고 액상의 발효물을 얻었다.
< 실시예 1-2> 정어리 가공 부산물의 발효물의 제조
<실시예 1-2-1> 정어리 가공 부산물의 발효물의 제조예 1
상기 <실시예 1-1-1>과 동일한 공정과 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액의 1:1 혼합액을 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 정어리 가공 부산물을 사용하였다.
<실시예 1-2-2> 정어리 가공 부산물의 발효물의 제조예 2
상기 <실시예 1-1-2>와 동일한 공정 그리고 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae) 배양액의 1:1 혼합액 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 정어리 가공 부산물을 사용하였다.
<실시예 1-2-3> 정어리 가공 부산물의 발효물의 제조예 3
상기 <실시예 1-1-3>과 동일한 공정 그리고 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액 그리고 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae) 배양액의 1:1:1 혼합액 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 정어리 가공 부산물을 사용하였다.
< 실시예 1-3> 넙치 가공 부산물의 발효물의 제조
<실시예 1-3-1> 넙치 가공 부산물의 발효물의 제조예 1
상기 <실시예 1-1-1>과 동일한 공정과 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액의 1:1 혼합액을 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 옥돔 가공 부산물을 사용하였다.
<실시예 1-3-2> 넙치 가공 부산물의 발효물의 제조예 2
상기 <실시예 1-1-2>와 동일한 공정 그리고 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae) 배양액의 1:1 혼합액 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 옥돔 가공 부산물을 사용하였다.
<실시예 1-3-3> 넙치 가공 부산물의 발효물의 제조예 3
상기 <실시예 1-1-3>과 동일한 공정 그리고 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액 그리고 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae) 배양액의 1:1:1 혼합액 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 옥돔 가공 부산물을 사용하였다.
< 실시예 1-4> 복어 가공 부산물의 발효물의 제조
<실시예 1-4-1> 복어 가공 부산물의 발효물의 제조예 1
상기 <실시예 1-1-1>과 동일한 공정과 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액의 1:1 혼합액을 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 넙치 가공 부산물을 사용하였다.
<실시예 1-4-2> 넙치 가공 부산물의 발효물의 제조예 2
상기 <실시예 1-1-2>와 동일한 공정 그리고 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae) 배양액의 1:1 혼합액 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 넙치 가공 부산물을 사용하였다.
<실시예 1-4-3> 넙치 가공 부산물의 발효물의 제조예 3
상기 <실시예 1-1-3>과 동일한 공정 그리고 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액 그리고 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae) 배양액의 1:1:1 혼합액 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 넙치 가공 부산물을 사용하였다.
< 실시예 1-5> 명태 가공 부산물의 발효물의 제조
<실시예 1-5-1> 명태 가공 부산물의 발효물의 제조예 1
상기 <실시예 1-1-1>과 동일한 공정과 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액의 1:1 혼합액을 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 아귀 가공 부산물을 사용하였다.
<실시예 1-5-2> 명태 가공 부산물의 발효물의 제조예 2
상기 <실시예 1-1-2>와 동일한 공정 그리고 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae) 배양액의 1:1 혼합액 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 아귀 가공 부산물을 사용하였다.
<실시예 1-5-3> 명태 가공 부산물의 발효물의 제조예 3
상기 <실시예 1-1-3>과 동일한 공정 그리고 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액 그리고 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae) 배양액의 1:1:1 혼합액 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 아귀 가공 부산물을 사용하였다.
< 실시예 1-6> 오징어 가공 부산물의 발효물의 제조
<실시예 1-6-1> 오징어 가공 부산물의 발효물의 제조예 1
상기 <실시예 1-1-1>과 동일한 공정과 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액의 1:1 혼합액을 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 명태 가공 부산물을 사용하였다.
<실시예 1-6-2> 오징어 가공 부산물의 발효물의 제조예 2
상기 <실시예 1-1-2>와 동일한 공정 그리고 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae) 배양액의 1:1 혼합액 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 명태 가공 부산물을 사용하였다.
<실시예 1-6-3> 오징어 가공 부산물의 발효물의 제조예 3
상기 <실시예 1-1-3>과 동일한 공정 그리고 동일한 공정 조건으로 동일한 미생물을 사용하여(바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis) 배양액과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 배양액 그리고 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae) 배양액의 1:1:1 혼합액 사용) 발효시키되, 재료를 고등어 가공 부산물 대신에 명태 가공 부산물을 사용하였다.
<실시예 1>에서 제조된 수산동물 발효물(여과 후의 발효물)은 pH 3.5 내지 4.0의 범위이며 그 제조 공정의 개략도를 [도 1]에 나타내었다.
< 실시예 2> 수산동물 발효물의 추출물 제조
<실시예 2-1> < 실시예 1-1-3>에서 제조된 수산동물(고등어 가공 부산물) 발효물 의 추출물 제조
상기 <실시예 1-1-3>에서 제조된 수산동물(고등어 가공 부산물) 발효물을 건조하여 수분 성분을 제거하고, 건조된 발효물에 헥산을 1:5 비율로 첨가하여 잘 혼합한 후 헥산층을 회수하고 감압농축법으로 헥산을 제거하여 수산동물 발효물의 추출물(1차 추출물)을 제조하였다. 제조한 수산동물 발효물의 추출물은 미감과 촉감에 있어 어유와 같은 성상을 보였으며 진한 황갈색을 띄며, 투명하고 어유 특이취를 나타내었다.
이렇게 제조된 수산동물 발효물의 추출물에 여기에 5배 용량의 에탄올을 첨가하여 잘 혼합한 후 에탄올층을 회수하고, 감압농축법으로 에탄올을 제거하여 2차 추출물을 제조하였으며, 이 추출물을 더욱 정제하고자 80:40:30(V/V/V) 비율의 클로로포름: 메탄올: 물로 분배하여 클로로포름층을 회수하고, 이후 감압농축법으로 3차 추출물을 제조하였다.
추출 수율은 건조 전 원료(발효에 사용한 원료임) 2kg을 사용할 때, 1차 추출물이 200mL가 회수되었고 최종 추출물(3차 추출물)은 14mL가 회수되었다.
이렇게 얻어진 3차 추출물을 냉동보관하면서 아래의 실험에 사용하였다.
<실시예 2-2> < 실시예 1-2-3>에서 제조된 수산동물(정어리 가공 부산물) 발효물의 추출물 제조
상기 <실시예 2-1>과 동일한 용매를 사용하여 동일한 방식으로 3차 추출물을 제조하였으며, 추출 수율은 건조 전 원료 2kg을 사용할 때, 1차 추출물이 200mL가 회수되었고 최종 추출물(3차 추출물)은 18mL가 회수되었다.
1차 추출물은 그 성상이 상기 <실시예 2-1>에서 제조된 1차 추출물과 동일하였다.
<실시예 2-3> < 실시예 1-3-3>에서 제조된 수산동물(넙치 가공 부산물) 발효물의 추출물 제조
상기 <실시예 2-1>과 동일한 용매를 사용하여 동일한 방식으로 3차 추출물을 제조하였으며, 추출 수율은 건조 전 원료 2kg을 사용할 때, 1차 추출물이 200mL가 회수되었고 최종 추출물(3차 추출물)은 17mL가 회수되었다.
1차 추출물은 그 성상이 상기 <실시예 2-1>에서 제조된 1차 추출물과 동일하였다.
<실시예 2-4> < 실시예 1-6-3>에서 제조된 수산동물(복어 가공 부산물) 발효물의 추출물 제조
상기 <실시예 2-1>과 동일한 용매를 사용하여 동일한 방식으로 3차 추출물을 제조하였으며, 추출 수율은 건조 전 원료 2kg을 사용할 때, 1차 추출물이 200mL가 회수되었고 최종 추출물(3차 추출물)은 18mL가 회수되었다.
1차 추출물은 그 성상이 상기 <실시예 2-1>에서 제조된 1차 추출물과 동일하였다.
<실시예 2-5> < 실시예 1-5-3>에서 제조된 수산동물(명태 가공 부산물) 발효물의 추출물 제조
상기 <실시예 2-1>과 동일한 용매를 사용하여 동일한 방식으로 3차 추출물을 제조하였으며, 추출 수율은 건조 전 원료 2kg을 사용할 때, 1차 추출물이 200mL가 회수되었고 최종 추출물(3차 추출물)은 19mL가 회수되었다.
1차 추출물은 그 성상이 상기 <실시예 2-1>에서 제조된 1차 추출물과 동일하였다.
<실시예 2-6> < 실시예 1-6-3>에서 제조된 수산동물(오징어 가공 부산물) 발효물의 추출물 제조
상기 <실시예 2-1>과 동일한 용매를 사용하여 동일한 방식으로 3차 추출물을 제조하였으며, 추출 수율은 건조 전 원료 2kg을 사용할 때, 1차 추출물이 200mL가 회수되었고 최종 추출물(3차 추출물)은 19mL가 회수되었다.
1차 추출물은 그 성상이 상기 <실시예 2-1>에서 제조된 1차 추출물과 동일하였다.
< 비교예 > 비발효 수산동물 추출물의 제조
<비교예 1> 고등어 가공 부산물의 추출물 제조
상기 <실시예 1-1>에서 사용한 고등어 가공 부산물을 건조하고 분쇄하여 그 분쇄물을 추출 대상으로 사용하였으며, 그 고등어 가공 부산물을 건조하고 여기에 헥산을 1:5의 비율로 첨가하여 잘 혼합한 후 헥산층을 회수하고 감압농축법으로 헥산을 제거하여 1차 추출물을 제조하였다. 제조된 1차 추출물은 상기 <실시예 2>의 수산동물 발효물의 1차 추출물과 마찬가지로 맛과 촉감에 있어서 어유와 같은 성상을 나타냈으며, 투명하고 어유 특이취를 나타내었다. 다만 상기 <실시예 2>의 수산동물 발효물의 1차 추출물과는 달리 옅은 황갈색을 띠었다.
상기 얻어진 1차 추출물을 상기 <실시예 2-1>과 동일한 용매를 사용하여 동일한 방식으로 2차 추출물과 최종 3차 추출물을 제조하였다.
추출 수율은 건조 전 원료 2kg을 사용할 때 1차 추출물이 200mL가 회수되었고 최종 추출물(3차 추출물)은 1.5mL가 회수되었다.
이렇게 얻어진 3차 추출물을 냉동보관하면서 아래의 실험에 사용하였다.
<비교예 2> 정어리 가공 부산물의 추출물 제조
상기 <비교예 1>과 동일한 용매를 사용하고 동일한 방식으로 정어리 가공 부산물의 추출물을 제조하였으며, 추출 수율은 건조 전 원료 2kg을 사용할 때 1차 추출물이 200mL가 회수되었고 최종 추출물(3차 추출물)은 2mL가 회수되었다.
1차 추출물은 그 성상이 상기 <비교예 1>에서 제조된 1차 추출물과 동일하였다.
<비교예 3> 넙치 가공 부산물의 추출물 제조
상기 <비교예 1>과 동일한 용매를 사용하고 동일한 방식으로 넙치 가공 부산물의 추출물을 제조하였으며, 추출 수율은 건조 전 원료 2kg을 사용할 때 1차 추출물이 200mL가 회수되었고 최종 추출물(3차 추출물)은 1.5mL가 회수되었다.
1차 추출물은 그 성상이 상기 <비교예 1>에서 제조된 1차 추출물과 동일하였다.
<비교예 4> 복어 가공 부산물의 추출물 제조
상기 <비교예 1>과 동일한 용매를 사용하고 동일한 방식으로 복어 가공 부산물의 추출물을 제조하였으며, 추출 수율은 건조 전 원료 2kg을 사용할 때 1차 추출물이 200mL가 회수되었고 최종 추출물(3차 추출물)은 3mL가 회수되었다.
1차 추출물은 그 성상이 상기 <비교예 1>에서 제조된 1차 추출물과 거의 동일하였다.
<비교예 5> 명태 가공 부산물의 추출물 제조
상기 <비교예 1>과 동일한 용매를 사용하고 동일한 방식으로 명태 가공 부산물의 추출물을 제조하였으며, 추출 수율은 건조 전 원료 2kg을 사용할 때 1차 추출물이 200mL가 회수되었고 최종 추출물(3차 추출물)은 1mL가 회수되었다.
1차 추출물은 그 성상이 상기 <비교예 1>에서 제조된 1차 추출물과 거의 동일하였다.
<비교예 6> 오징어 가공 부산물의 추출물 제조
상기 <비교예 1>과 동일한 용매를 사용하고 동일한 방식으로 오징어 가공 부산물의 추출물을 제조하였으며, 추출 수율은 건조 전 원료 2kg을 사용할 때 1차 추출물이 200mL가 회수되었고 최종 추출물(3차 추출물)은 2mL가 회수되었다.
1차 추출물은 그 성상이 상기 <비교예 1>에서 제조된 1차 추출물과 거의 동일하였다.
< 실험예 > 추출 수율과 수산동물 발효물 및 그 발효 추출물의 아토피성 피부염 개선 활성, 항염증 및 항알러지 활성 실험
<실험예 1> 추출 수율
추출 수율은 전술한 바와 같이 1차 추출물 기준으로는 차이가 없었지만 3차 추출물 기준으로는 대략 7~10배 정도로 발효한 경우가 수율이 높았다.
참고로 명태 어란의 경우는 건조 어란 500g 기준 발효하여 상기 <실시예 2>와 동일한 방식으로 추출한 경우 최종 추출물인 3차 추출물 기준 5mL의 추출물이 얻어졌으나, 발효하지 않고 상기 <비교예>와 동일한 방식으로 추출한 경우 명태 어란 500g 기준 2mL의 추출물이 얻어졌다.
<실험예 2> 수산동물 발효물의 아토피성 피부염 개선 활성
<실험예 2-1> 아토피성 피부염 개선 활성에 대한 세포 실험
상기 <실시예 1>에서 얻어진 총 18개의 발효물에 대해서 항아토피 활성을 평가하기 위하여, 각질형성세포주인 HaCaT 세포에, 감압 농축하고 동결건조하여 얻어진 상기 각 실시예의 시료를 처리하여 MDC 및 TARC의 발현 정도를 평가하였다.
구체적으로 HaCaT 세포 (1×106 cells/㎖)에 각 실시예의 추출물(100㎍/㎖)을 IFN-γ(10 ng/㎖)를 동시 처리하여 배양한 후, TRI-reagent를 이용하여 total RNA를 추출하고, 1 ㎍의 total RNA를 이용하여 cDNA를 합성한 후, MDC 프라이머(서열번호 1 및 서열번호 2)와 TARC 프라이머(서열번호 3 및 서열번호 4)를 이용하여 Perkin-Elmer Thermal Cycler로 PCR를 수행하고 그 PCR 산물을 전기영동하여 ethidium bromide로 염색하고 정량하였다.
결과를 [도 2] 및 [도 3]에 나타내었다.
[도 2] 및 [도 3>]을 참조하여 보면 상기 실시예의 모든 발효물이 MDC와 TARC의 발현을 억제함을 보여주며, 특히 어종을 불문하고 바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis)와 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 그리고 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae)를 이용하여 얻은 발효물이 MDC와 TARC의 발현 억제 활성이 높은 것으로 나타났다.
참고로 [도 2]에 MTT assay에 의한 세포 독성 실험 결과를 함께 나타내었다.
수산동물 발효물은 전체적으로 세포 독성을 나타내지 않음을 알 수 있으며, 경우에 따라서는 오히려 세포 증식 촉진 활성을 나타냄을 알 수 있다.
따라서 상기 MDC 및 TARC 생성 억제 활성은 세포 독성에 의한 효과가 아님을 알 수 있다.
참고로 세포독성 실험은 다음과 같이 수행하였다: 18시간 동안 전배양한 각질형성세포주인 HaCaT 세포(1.0×105 cells/mL)에 시료와 IFN-γ(10 ng/mL)를 동시 처리하고 24시간 배양한 후, MTT (Sigma, MO, USA) 용액 50 ㎕ (2 mg/mL)를 첨가하여 4시간 동안 반응시켰다. 상층액을 완전히 제거하고 dimethylsulfoxide (DMSO: Sigma, MO, USA)를 200 ㎕ 가하여 침전물을 완전히 용해시킨 후, microplate reader를 사용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 음성대조군의 흡광도 값과 비교하여 독성 정도를 평가하였다.
<실험예 2-2> 식품을 이용한 아토피성 피부염 개선 활성에 대한 관능평가
본 실험에서는 상기 세포실험 결과 활성이 높은 것으로 나타난 <실시예 1>의 발효물, 즉 바실러스 섭틸러스(Bacillus subtilis)와 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 그리고 사카로마이세스 세리비시에(Saccharomyces cerevisiae)를 이용하여 얻은 발효물(<실시예 1-1-3>, <실시예 1-2-3>, <실시예 1-3-3>, <실시예 1-4-3>, <실시예 1-5-3> 및 <실시예 1-6-3>의 발효물)을 가열하여 얻어진 어유를 이용하였다.
상기 어유는 상기 실시예에서 얻어진 발효물을 20~30분 동안 70~90℃ 가열하여 수분 성분을 증발시키고 얻어진 것으로서, 발효물을 가열하여 수분 성분을 증발시키면 진한 황갈색을 띠며, 어유 특이의 취를 나타내는데, 촉감과 미감으로도 어유임이 확인된다.
관능평가에 이용할 식품은 상기 실시예의 발효물을 가열하여 얻은 어유를 참기름과 1:1의 중량 비율로 혼합하여 제조하였으며, 갈색 유리병에 주입하여 실온 암소에서 보관하였다가 관능평가에 사용하였다. 참기름은 어유의 특이취를 저감시켜 섭취하는데 따른 저항감을 줄이기 위해 첨가한 것이다.
관능평가는 습진, 가려움증 등의 증상이 심한 아토피성 피부염 환자 12명을 선발하여 1인당 150ml씩 혼합어유를 제공하여 1일 2회(아침과 저녁), 5ml/회(성인), 3ml/회(어린이)의 양으로 섭취하도록 하였다. 각 원료당 2인을 그룹으로 하여 6그룹으로 구분하여 2주에서 3주간 평가하였다. 제공된 식품 시료는 성인인 경우 15일간, 어린이인 경우에는 23일 정도 평가할 수 있는 분량이었다. 섭취 후 설문결과는 아래의 [표 1]과 같다.
식품을 이용한 아토피성 피부염 개선 활성 관능평가 결과
그룹 나이와 성별 식품을 사용한 아토피성 환자 12명의 설문 조사 결과


실시예
1-1-3		 36세, 남 (1) 주요 증상: 전신 염증 및 가려움(아토피)
(2) 복 용: 1일 2회, 5ml/회
(3) 경 과: 2일 째부터 가려움 소멸
초6, 남 (1) 주요 증상: 전신 가려움 및 태선화(아토피)
(2) 복 용: 1일 2회, 3ml/회
(3) 경 과: 2일 째부터 가려움 소멸



실시예
1-2-3
초1, 남		 (1) 주요 증상: 팔, 다리, 목 등 접히는 곳의 염증 및 가려움(아토피)
(2) 복 용: 1일 2회, 3ml/회
(3) 경 과: 1일 저녁부터 가려움 완화, 2일째부터 긁는 행위 없음
중3, 남 (1) 주요 증상: 목 각질화 및 가려움(아토피)
(2) 복 용: 1일 2회, 3ml/회
(3) 경 과: 3일째부터 가려움 상당히 억제, 4일째부터 수면 중 긁는 행위 없음



실시예
1-3-3
초2, 남		 (1) 주요 증상: 팔, 다리, 목 등의 접히는 곳의 염증 및 가려움(아토피)
(2) 복 용: 1일 2회, 3ml/회
(3) 경 과: 2일째부터 가려움 상당히 억제
34세, 여 (1) 주요 증상: 귀를 중심으로 가려움(습진)
(2) 복 용: 1일 2회, 5ml/회
(3) 경 과: 2일째부터 가려움 상당히 억제



실시예
1-4-3
고2, 여		 (1) 주요 증상: 팔 접히는 곳, 옆구리 가려움(아토피)
(2) 복 용: 1일 2회, 5ml/회
(3) 경 과: 섭취한 날부터 가려움 상당히 억제, 2일째부터 수면 중 긁는행위 없음
고1, 남 (1) 주요 증상: 전신 가려움 및 염증(아토피)
(2) 복 용: 1일 2회, 5ml/회
(3) 경 과: 2일째부터 가려움 상당히 억제, 3일째부터 수면 중 긁는 행위 없음


실시예
1-5-3
초6, 여		 (1) 주요 증상: 다리, 목 등의 접히는 곳의 염증 및 가려움(아토피)
(2) 복 용: 1일 2회, 3ml/회
(3) 경 과: 2일째부터 가려움 상당히 억제, 2일째부터 숙면
초3, 여 (1) 주요 증상: 등, 배 가려움 및 태선화(아토피)
(2) 복 용: 1일 2회, 3ml/회
(3) 경 과: 2일째부터 가려움 상당히 억제



실시예
1-6-3
 고1, 여 (1) 주요 증상: 전신 가려움 및 염증(아토피)
(2) 복 용: 1일 2회, 5ml/회
(3) 경 과: 섭취한 날부터 가려움 상당히 억제, 2일째부터 숙면
고1, 남 (1) 주요 증상: 전신 가려움 및 염증(아토피)
(2) 복 용: 1일 2회, 5ml/회
(3) 경 과: 2일째부터 가려움 상당히 억제, 3일째부터 수면 중 긁는 행위 없음
상기 [표 1]에서는 참기름 혼합 어유를 복용하고 며칠째부터 가려움이 완화되었는지를 중심으로 명기하였다. 전반적으로 소비자들의 가려움이 완화되기 시작하면 섭취 중에는 긁을 정도의 가려움이 발생하지 않았으며, 모든 환자에서 긁지 않게 되면 점점 피부상태가 좋아지는 것이 공통된 의견이었다.
또 상기 [표 1]에서 확인할 수 있듯이 어종에 따른 뚜렷한 차이를 보이지 않았다.
참고로 본 관능평가에서 일반 어유를 대조구로 평가하지 않은 것은 아토피, 습진 등의 환자가 어유를 복용하고 가려움이 진정되었다는 보고가 없었기 때문이다.
<실험예 2-3> 화장품을 이용한 아토피성 피부염 개선 활성에 대한 관능평가
관능평가를 위하여, 상기 <실험예 1-2>에서 얻은 어유를 30 중량% 함유하는 크림 성상의 화장품을 제조하였는데, 상기 화장품은 어유 30 중량%, 정제수 60 중량%, 비즈왁스 5 중량%, 유화제 4.5 중량%, 미량의 항료 등의 첨가제로 구성되어 있다.
관능평가는 습진, 가려움이 심한 아토피성 피부염 환자 12명을 선발하여 1인당 30g의 크림 2병씩 제공하여 1일 2회(아침과 저녁) 가려운 부위에 바르도록 하였다. 각 원료당 2인을 그룹으로 하여 6그룹으로 구분하여 3주에서 4주간 평가하였다. 제공된 크림은 성인인 경우 20일간, 어린이인 경우에는 30일 정도 사용할 수 있는 분량이었다. 크림 사용에 따른 설문결과는 아래의 <표 2>와 같다.
화장품을 이용한 아토피성 피부염 개선 활성에 대한 관능평가 결과
그룹 나이와
성별		 화장품을 사용한 아토피성 피부염 환자 12명의 설문 조사 결과


실시예
1-1-3
4세, 남		 (1) 주요 증상: 전신 가려움 및 염증(아토피)
(2) 도 포: 1일 2회
(3) 경 과: 바른 후부터 가려움 소멸, 1회 도포 후 10시간 효과지속

6세, 남		 (1) 주요 증상: 팔, 다리 접히는 곳 가려움 및 염증(아토피)
(2) 도 포: 1일 2회
(3) 경 과: 바른 후부터 가려움 소멸, 1회 도포 후 10시간 효과지속



실시예
1-2-3

초6, 여		 (1) 주요 증상: 팔, 다리, 목 등 접히는 곳의 가려움 및 염증(아토피)
(2) 도 포: 1일 2회
(3) 경 과: 바른 후부터 가려움 소멸, 1회 도포 후 8시간 효과지속

중1, 여		 (1) 주요 증상: 전신 가려움 및 염증(아토피)
(2) 도 포: 1일 2회
(3) 경 과: 바른 후부터 가려움 소멸, 1회 도포 후 6시간 효과지속


실시예
1-3-3
5세, 남		 (1) 주요 증상: 팔, 다리 등 접히는 곳의 가려움 및 염증(아토피)
(2) 도 포: 1일 2회
(3) 경 과: 바른 후부터 가려움 소멸, 1회 도포 후 10시간 효과지속

26세, 여		 (1) 주요 증상: 전신 가려움 및 염증(아토피)
(2) 도 포: 1일 2회
(3) 경 과: 바른 후부터 가려움 소멸, 1회 도포 후 5시간 효과지속


실시예
1-4-3
고2, 여		 (1) 주요 증상: 팔, 다리 가려움 및 염증(아토피)
(2) 도 포: 1일 2회
(3) 경 과: 바른 후부터 가려움 소멸, 1회 도포 후 8시간 효과지속

초6, 여		 (1) 주요 증상: 전신 가려움 및 염증(아토피)
(2) 도 포: 1일 2회
(3) 경 과: 바른 후부터 가려움 소멸, 1회 도포 후 10시간 효과지속


실시예
1-5-3
6세, 여		 (1) 주요 증상: 허벅지 뒷부분 가려움 및 염증(아토피)
(2) 도 포: 1일 2회
(3) 경 과: 바른 후부터 가려움 소멸, 1회 도포 후 10시간 효과지속

3세, 남		 (1) 주요 증상: 등, 배 가려움 및 태선화(아토피)
(2) 도 포: 1일 2회
(3) 경 과: 바른 날부터 숙면 취함(바른 날부터 우유먹고 숙면)


실시예
1-6-3
6세, 남		 (1) 주요 증상: 전신 가려움 및 염증(아토피)
(2) 도 포: 1일 2회
(3) 경 과: 바른 후부터 가려움 소멸, 1회 도포 후 10시간 효과지속

5세, 여		 (1) 주요 증상: 팔, 다리 가려움 및 염증(아토피)
(2) 도 포: 1일 2회
(3) 경 과: 바른 후부터 가려움 소멸, 1회 도포 후 10시간 효과지속
상기 [표 2]에 나타난 것처럼, 실시예의 발효물로부터 얻어진 어유를 함유한 화장품은 어종에 구분없이 전반적으로 가려움을 억제시키는 효능이 나타났으며, 도포 후 20분 정도 지나서 가려움이 없어진다는 평가가 대부분이었다. 또한, 지속적인 도포에 따라서 긁는 행위가 감소할수록 염증부위가 소실되어 갔다.
<실험예 3> 수산동물 발효물의 추출물의 아토피성 피부염 개선 활성 실험
시료는 <실시예 2>에서 제조한 각 수산동물 발효물의 추출물을 사용하였으며, 대조군 시료는 <비교예>에서 제조한 각 비발효 수산동물 추출물을 사용하였다.
아토피성 피부염 개선 활성 실험은 IFN-γ(10 ng/㎖) 및 TNF-α(10 ng/mL)로 자극된 각질형성세포주인 HaCaT 세포에서 MDC의 발현의 억제 정도를 평가하여 실시하였다.
HaCaT 세포를 DMEM 배지를 이용하여 3 × 105 cells/㎖로 조절한 후 24 well plate에 접종하고, 5% CO2 항온기에서 18시간 전배양 하였다. 이후 배지를 제거하고 10배 농도로 조제된 시험물질 50 ㎕를 hIFN-γ (최종농도 20 ng/㎖)와 TNF-α(최종농도 20 ng/ml)를 포함하는 새로운 배지 (FBS(-)) 450 ㎕에 가하여 전 배양과 동일 조건에서 배양하였다. 24시간 후 배양 배지를 원심분리 (12,000 rpm, 3 min)하여 얻어진 상층액의 MDC 함량을 각각 human MDC immunoassay kit (R&D, Germany)를 이용하여 정량하였으며, standard에 대한 표준곡선의 r2 값은 0.99 이상이었다.
결과를 IFN-γ TNF-α 처리군(시료의 비처리군)의 값과 비교하여 백분율로 [도 4] 내지 [도 9]에 나타내었다.
[도 4] 내지 [도 9]를 참조하여 보면, 각 발효물 추출물은 농도 의존적으로 뚜렷하게 MDC의 생성을 억제함을 알 수 있으며, 비발효 추출물은 추출물에 따라서 100 ㎍/㎖의 농도에서 미약한 억제 활성을 보이는 경우가 있었으며, 억제 활성을 보이지 않는 경우도 있었다.
[도 4] 내지 [도 9]에서 A, B 및 C 항목은 각각 25, 50 및 100 ㎍/㎖의 처리 농도를 가리킨다.
<실험예 4> 수산동물 발효물의 추출물의 항염 활성 실험
여기서도 시료는 <실시예 2>에서 제조한 각 수산동물 발효물의 추출물을 사용하였으며, 대조군 시료는 <비교예>에서 제조한 각 비발효 수산동물 추출물을 사용하였다.
Murine macrophage cell line인 RAW264.7 세포에 대하여 DMEM 배지를 이용하여 5.0 × 104 cells/㎖로 조절한 후 96 well plate 에 접종하고, 시험물질과 LPS (1 ㎍/㎖)를 함유한 새로운 배지를 동시에 처리하여 24시간 배양하였다. 생성된 NO의 양을 Griess 시약을 이용하여 세포배양액 중에 존재하는 NO2 -의 형태로 측정하였다. 세포배양 상등액 100 ㎕와 Griess시약 [1 % (w/v) sulfani-lamide, 0.1 % (w/v) naphylethylenediamine in 2.5 % (v/v) phosphoric acid] 100 ㎕를 혼합하여 96 well plates에서 10분 동안 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준농도 곡선은 sodium nitrite (NaNO2)를 serial dilution(연속 희석)하여 얻었다(1-100 μM).
결과를 LPS만의 처리군(시료의 비처리군) 값과 비교하여 백분율로 [도 10] 내지 [도 15]에 나타내었다.
[도 10] 내지 [도 15]를 참조하여 보면 수산동물 발효 추출물은 농도 의존적으로 NO 생성을 억제함을 알 수 있으며, 수산동물 비발효 추출물의 경우는 거의 대부분이 NO 생성 억제 활성을 보이지 않음을 알 수 있다.
[도 10] 내지 [도 15]에서 YBL은 실험군을 가리키며, A, B, C 및 D 항목은 각각 25, 50, 100 및 200 ㎍/㎖의 처리 농도를 가리킨다.
< 실험예 5> 수산동물 발효물의 추출물의 항알러지 활성 실험
<실험예 5-1> 수산동물 발효물의 추출물의 동물실험에서의 가려움 억제 효과
동물 실험에는 BALB/c mice (7주령, 암컷)를 사용하였다. 오일 발효물 (100mg/kg)을 경구투여 하고 1시간 후, 가려움증을 유발하는 것으로 알려진 compound48/80 (5mg/kg)을 뒷목덜미부분에 피하주사 하였다. 이후, 20분간 관찰케이지에서 마우스를 촬영하고, 긁는 횟수를 측정하였다. 양성 대조군으로는 항히스타민제인 diphenhydramine을 사용하였다.
여기서 시료는 <실험예 3> 및 <실험예 4>에서 어종에 따른 차이를 보이지 않으므로 경제적 및 시간적 이유로 <실시예 2-1>에서 제조한 수산동물 발효물의 추출물을 대표적으로 사용하였으며, 양성대조군 시료는 약국에서 판매되는 비처방 항히스타민제(Diphenhydramine)를 사용하였다. 그리고 비발효 수산동물 추출물은 <실험예 3> 및 <실험예 4>에서 효과가 거의 없는 것으로 판명되었기 때문에 동물실험에서는 제외시켰다.
결과를 [도 16]에 나타내었다. Compound 48/80으로 자극한 군은 자극하지 않은 군에 비해서 긁는 횟수가 시간이 경과 할수록 증가하였다. 양성대조군으로 사용한 항히스타민제인 diphenhydramine과 수산동물 발효 추출물의 경우는 compound 48/80으로 자극한 군과 비교할 때 긁는 횟수가 감소하였음을 알 수 있다.
<실험예 5-2> 수산동물 발효물의 추출물의 동물실험에서의 IgE 생성 억제 효과 및 항히스타민 효과
여기서도 시료는 <실시예 2-1>에서 제조한 수산동물 발효물의 추출물을 사용하였으며, 양성대조군 시료는 약국에서 판매되는 비처방 항히스타민제(Diphenhydramine)를 사용하였다.
Histamine과 IgE 수준은 compound48/80으로 자극한 BALB/c mice의 혈청에서 측정하였다. 물질 처리 그룹에 발효물 추출물 (100mg/kg)을 1시간 전 경구투여 하였다. 이후, compound48/80 (5mg/kg)을 뒷목덜미부분에 피하주사 하고 20분경과 후 각 그룹에서 혈액을 채취하여 혈청을 분리한 뒤, histamine과 IgE 생성에 대한 효과를 ELISA assay로 확인하였다.
결과를 [도 17] 및 [도 18]에 나타내었다.
[도 17] 및 [도 18]을 참조하여 보면, Compound 48/80자극으로 인해서 혈청 내 히스타민과 IgE 수준이 증가하였고, 발효물의 추출물의 투여로 혈청 히스타민과 IgE 수준이 감소하였음을 알 수 있다.

Claims (22)

  1. 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물의 발효물을 유효성분으로 포함하되,
    상기 수산동물은 고등어, 정어리, 넙치, 복어, 명태 및 오징어로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 수산동물이고,
    상기 발효물은 아래의 (a) 내지 (c)를 포함하는 제조 방법에 의하여 얻어진 것을 특징을 하는 아토피성 피부염 개선제 화장품 조성물
    (a) 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물을 분쇄하는 단계,
    (b) 상기 분쇄물에 접종되는 미생물의 탄소원과 에너지원을 첨가하여 혼합하는 단계, 및
    (c) 그 혼합물에 젖산균, 효모 및 바실러스 속 미생물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 미생물을 접종하여 발효시키는 단계.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 (b) 단계의 접종되는 미생물의 탄소원과 에너지원은 올리고당, 유당, 포도당, 과당, 설탕 또는 이들의 혼합물이고, 그것의 첨가량은 수산동물 분쇄물 또는 수산동물 가공 부산물의 분쇄물 100 중량부 기준 3 중량부 내지 30 중량부인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선제 화장품 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 젖산균은 락토바실러스 속 젖산균(Lactobacillus sp.), 스트렙토코쿠스 속 젖산균(Streptococcus sp.), 페디오코쿠스 속 젖산균(Pediococcus sp.), 류코노스톡 속 젖산균(Leuconostoc sp.) 및 비피도박테리움 속 젖산균(Bifidobacterium sp.)으로 구성된 군에서 선택된 젖산균인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선제 화장품 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 젖산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus), 페디오코커스 세레비세(Pediococcus cerevisiae), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 레코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 레코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides), 및 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum)으로 구성된 군에서 선택된 젖산균인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선제 화장품 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 효모는 사카로마이세스 속 효모인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선제 화장품 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 효모는 사카로마이세스 루시(Saccharomyces rouxii), 사카로마이세스 세레비시아에(Saccharomyces cereviciae), 사카로마이세스 오비폴미스(Saccharomyces oviformis), 및 사카로마이세스 스테이네리(Saccharomyces steineri)로 구성된 군에서 선택된 효모인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선제 화장품 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 바릴러스 속 미생물(Bacillus sp.)은 바실러스 섭틸리스(B. subtilis), 바실러스 리크네포르미스(B. lichneformis), 바실러스 메가테리움(B. megaterium), 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(B. amyloliquefaciens), 바실러스 낫토(B. natto) 등이 대표적이며, 이외에도 바실러스 안스라시스(B.antharcis), 바실러스렌투스(B.lentus), 바실러스 퍼미러스(B.pumilus), 바실러스 더링지엔시스(B.thuringiensis), 바실러스 알베이(B.alvei), 바실러스 아조토픽산스(B.azotofixans), 바실러스 매세란스(B.macerans), 바실러스 포리믹사(B.polymyxa), 바실러스 파필리에(B.popilliae), 바실러스 코아글란스(B.coagulans), 바실러스 스테아로더모필러스(B.stearothermophilus), 바실러스 파스퇴리(B.pasteurii), 바실러스스 패리커스(B.sphaericus) 및 바실러스 패스티디오서스(B.fastidiosus)로 구성된 군에서 선택된 미생물인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선제 화장품 조성물.
  8. 제1항에 있어서
    상기 (c) 단계의 발효는 20℃~40℃의 온도 범위에서 이루어지는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선제 화장품 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 제조 방법에는 상기 (c) 단계 후에 발효물 중의 고형물의 제거를 위하여 여과 단계 및 발효물 중의 수분을 제거하기 위하여 건조 단계가 추가로 포함되는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선제 화장품 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 여과 단계 및 건조 단계 후에 그 발효물을 헥산과 혼합하고 정치하여 헥산층을 회수하는 단계가 추가로 포함되는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 개선제 화장품 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 헥산층을 수거하는 단계 후에, 헥산을 제거하고 헥산이 제거된 결과물에 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜과 혼합하고 정치하여 알콜층의 회수하는 단계, 그 알콜을 제거하는 단계, 알콜이 제거된 결과물을 클로로포름, 메탄올 및 물의 혼합 용매와 혼합하고 정치하는 단계, 및 클로로포름층을 회수하고 그 클로로포름을 제거하는 단계를 추가로 포함하는 아토피성 피부염 개선제 화장품 조성물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항 기재의 발효물의 제조 방법에 의하여 얻어진 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 치료 또는 예방용 약제학적 조성물.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항 기재의 발효물의 제조 방법에 의하여 얻어진 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부 개선용 식품 조성물.
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  17. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항 기재의 발효물의 제조 방법에 의하여 얻어진 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물의 발효물을 유효성분으로 포함하되,
    상기 수산동물은 고등어인 것을 특징으로 하는 알러지성 질환의 개선용 화장품 조성물.
  18. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항 기재의 발효물의 제조 방법에 의하여 얻어진 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물의 발효물을 유효성분으로 포함하되,
    상기 수산동물은 고등어인 것을 특징으로 하는 알러지성 질환의 개선용 식품 조성물.
  19. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항 기재의 발효물의 제조 방법에 의하여 얻어진 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물의 발효물을 유효성분으로 포함하되,
    상기 수산동물은 고등어인 것을 특징으로 하는 알러지성 질환의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물.
  20. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항 기재의 발효물의 제조 방법에 의하여 얻어진 수산동물 또는 수산동물 가공 부산물의 발효물을 유효성분으로 포함하되,
    상기 수산동물은 고등어인 것을 특징으로 하는 항히스타민제 약제학적 조성물.
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