KR101350764B1 - 아르트로스피라-계 조성물 및 그 사용 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 살생제 및/또는 치료제로 사용하는 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라 맥시마를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 포함하는 조성물의 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 유기체에 의한 대상체의 감염 또는 침입을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이기도 하다.
생리적 스트레스 부가 아르트로스피라, 살생제, 치료제, 진균, 생체 활성제.

Description

아르트로스피라-계 조성물 및 그 사용 방법{Arthrospira-based Compositions and Uses Thereof}
본 발명은 아르트로스피라(Arthrospira)를 포함하는 조성물 및 그 조성물을 살생제(biocide) 및/또는 치료제(therapeutic)로 사용하는 방법에 관한 것이다.
아르트로스피라(종래에는 스피룰리나(Spirulina)로 알려짐)는 처음에는 음식 및/또는 단백질원으로 사용하기 위해 재배되었던 시아노박테리아이다. 항바이러스제, 항암제, 콜레스테롤 감소제, 당뇨병 완화제, 고혈압 완화제 및 면역 조절제를 포함하는 아르트로스피라의 치료 용도도 공지되었다. 예컨대, 스피룰리나 소스 닷컴 웹사이트(http://www.spirulinasource.com/library.html)에 언급된 자료들을 참조하라.
본 발명의 목적은 살생제 및/또는 치료제로 사용하는 아르트로스피라 조성물을 제공하는 것이다.
생리적 스트레스 부가( physiologically stressed ) 아르트로스피라는 살생 능력을 가짐
본 발명자들은, 아르트로스피라는 생리적 스트레스를 받으면 균류, 박테리아 및 아마도 바이러스에 대해서도 작용하는 적어도 한 유형의 생체 활성제(bioactive agent)를 생산한다는 것을 발견하였다. 아르트로스피라는 예컨대 그 유기체로부터 영양분이나 빛을 박탈하거나, 그 유기체를 탈수/건조하면 생리적 스트레스를 받을 수 있다. 생리적 스트레스를 받은 아르트로스피라 필라멘트(트라코마(trachoma))의 신호는 그것이 소생 상태(anabiotic state)로 들어가는 때인데, 이 상태에서는 필라멘트(filament)가 둥글게 말리고 두꺼운 뮤코이드(mucoid) 코팅이 생성된다. 본 발명자들은 필라멘트 및/또는 두꺼운 뮤코이드 코팅은 약탈자로부터 유기체를 보호하는 하나 이상의 생체 활성제를 포함하는 것으로 믿고 있다. 하나 이상의 생체 활성제는 약탈 유기체의 세포 벽이나 외골격을 파괴할 수 있다. 하나 이상의 생체 활성제는 예컨대, 키틴, 키틴 유도체(예컨대 키토산), 또는 예컨대 N-아세틸글루코사민이나 D-글루코사민 등을 중합체 서브 유닛으로 가지는 기타 세포벽 중합체를 소화하는 키틴아제(chitinase), 키토산아제(chitosanase), 키틴 디아세틸아제(chitin deacetylase)와 같은 예컨대, 용균 내지 변경제(modifying agent)일 수 있다. 그람-양성 박테리아의 펩티도글리칸이 그러한 중합체이며, N-아세틸글루코사민과 N-아세틸무라믹산을 포함한다.
본 발명의 첫 번째 태양에 따르면, 생리적 스트레스 부가(physiologically stressed) 아르트로스피라를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키틴, 키틴 유도체 또는 N-아세틸-D-글루코사민을 중합체 서브 유닛으로 가지는 기타 중합체를 소화 또는 변경하는 조성물이 제공된다.
본 발명의 두 번째 태양에 따르면, 키틴, 키틴 유도체 또는 N-아세틸-D-글루코사민을 중합체 서브유닛으로 가지는 중합체를 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라와 접촉시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키틴, 키틴 유도체 또는 N-아세틸-D-글루코사민을 중합체 서브유닛으로 가지는 중합체를 소화하고 변경하는 방법이 제공된다.
키틴, 키틴 유도체 또는 중합체는 임의의 적절한 형태일 수 있다. 키틴, 키틴 유도체 또는 중합체는 실질적으로 정제된 형태이거나 또는 균류나 그람-양성 박테리아의 세포벽과 같은 유기체의 일부, 또는 곤충의 외골격 일 수 있다.
본 발명의 세 번째 태양에 따르면:
(Ⅰ) 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 포함하는 조성물을 아르트로스피라로부터 생체 활성제에 의해 변경될 수 있는 적어도 하나의 시험 기질(test substrate)과 결합시키는 단계
(Ⅱ) 상기 시험 기질의 변경을 검사하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 아르트로스피라로부터 생체 활성제를 식별하는 방법이 제공된다.
임의의 적절한 유형의 시험 기질이 사용될 수 있다. 상기 시험 기질의 변경에 대한 검사는 임의의 적절한 방법으로 수행될 수 있지만, 고 처리량 스크리닝(high throughput screening)이 선호된다.
바람직하게는, 상기 생체 활성제는 키틴아제, 키토산아제 또는 키틴 디아세틸아제이고, 상기 시험 기질은 키틴, 키틴 유도체 또는 N-아세틸-D-글루코사민을 중합체 서브유닛으로 가지는 중합체이다. 바람직하게는, 상기 키틴, 키틴 유도체 또는 기타 중합체의 변경(즉, 감성(degradation))에 대한 검사에는 호흡측정법이 이용된다.
상기 방법은 상기 생체 활성제를 정제하는 단계를 더 포함할 수 있다. 정제는 임의의 적절한 방법으로 수행될 수 있다. 상기 방법은 또한 상기 생체 활성제의 유전자/유전자들을 클로닝하는 단계 및 발현시키는 단계도 포함할 수 있다. 이러한 단계들은 임의의 적절한 방법으로 수행될 수 있다. 예를 들면, 상기 단계들은 Maniatis 등의 Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982에 설명된 바와 같을 수 있으며, 상기 문헌의 전체 내용은 본 명세서에 상호 참조로 포함된다.
생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 살생제 및/또는 치료제로 사용하는 방법
키틴, 키틴 유도체 및 글루코사민 함유 중합체는 자연계의 도처에서, 일반적으로 예컨대 조류, 균류, 원충류, 섬모충류, 강장 동물, 이끼벌레, 연체동물, 환형 동물, 절지 동물, 새각류, 추형 동물, 유수 동물, 및 박테리아(그람-양성 박테리아 및 근류 박테리아)의 세포벽이나 외골격의 구성 성분으로서 발견된다.
따라서, 키틴, 키틴 유도체 및 글루코사민 함유 중합체에 대한 용균 또는 변경 활성을 가지는, 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라는 광범위한 유기체들에 대한 살생제로 사용될 수 있는 잠재적 가능성을 가진다. 본 명세서에서 사용되는 "살생제"는 유기체를 죽이는 것, 또는 유기체의 성장이나 복제를 억제하는 것 중 어느 하나를 의미한다(즉, 유기체를 실제로 죽이지 않을 수도 있다). 살생제의 몇 가지 응용은 치료 목적을 위한 것임을 이해하여야 한다.
본 발명의 네 번째 태양에 따르면, 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라의 유효량을 포함하는 것을 특징으로 하는, 살생제 및/또는 치료제로 사용되는 조성물이 제공된다.
본 발명의 다섯 번째 태양에 따르면, 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 포함하는 조성물의 유효량을 대상체(subject)에 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 유기체에 의한 대상체의 감염 또는 침입을 방지 또는 치료하는 방법이 제공된다.
바람직하게는, 상기 방법은 그러한 치료나 예방을 필요로 하는 대상체를 식별하는 단계를 포함한다.
생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 유기체에 의한 대상체의 감염이나 침입을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 조제에 사용하는 방법 또한 제공된다.
놀랍게도, 본 발명자들은 아르트로스피라를 그 성장 환경에서 벗어나도록 하면 생리적 스트레스를 유발하여 살생 활성(biocidal activity)을 가지는 하나 이상의 생체 활성제의 발현을 유도하기에 충분하다는 것을 발견했다. 즉, 뉴질랜드 특허번호 336620 및 336619의 명세서에 설명된 바와 같이 아르트로스피라에 생리적 스트레스 부가 단계를 실시할 필요가 없고, 살생 활성을 가지도록 하기 위해 아르트로스피라에 대해 추가 처리(분열, 폭발성 감압, 강화, 분쇄, 중탄산나트륨에 재수화, 또는 동결 건조)를 할 필요도 없다.
또한, 본 발명자들이 테스트했던, 상업적으로 이용 가능한 모든 조제품(알약, 캡슐 및 분말)이 기질에 대한 활성을 가지는 것으로 나타났고, 그 활성은 살생 활성을 나타내는 것으로 생각된다. 그러한 조제품들은 특별한 스트레스 부가 단계가 없이, 통상 아르트로스피라를 수확하고, 세척 및 건조하여 준비한다. 사실, 두꺼운 뮤코이드 코팅은 유기체의 가공 장치에 들러붙는 경향이 있으므로 아르트로스피라의 상업적 재배자들은 가능한 한 유기체의 스트레스를 최소화하려 한다.
본 명세서에 설명된 임의의 하나 이상의 조성물에 대해, 아르트로스피라는 임의의 적절한 개체, 또는 개체나 A. 맥시마(A. maxima)를 포함하지만 그에 국한되지는 않는 아르트로스피라 변종의 혼합물일 수 있다. 아르트로스피라와 스피룰리나는 서로 다른 속(genus)이라는 것을 유의해야 한다. 이 두 종류 사이의 구별은: 나선 구조(helicity) 및 모상체(trichome) 크기, 세포벽 구조 및 기공(pore) 패턴, 기체 액포(vacuole), 틸라코이드 패턴, 모상체 이동성 및 절단(fragmentation), GC 함량, 16S rRNA의 올리고뉴클레오티드 카탈로그, 및 cpcB-cpcA에서의 변형을 포함하는 많은 특성들에 근거하여 재차 확인된다. 예컨대, J. F. Manen과 J. Falquet의 (2002) "The cpcB- cpcA locus as a tool for the genetic characterization of the genus Arthrospira (Cyanobacteria): evidence for horizontal transfer". International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, VoI 52, 861-867; 및, Chapter 1: Morphology, Ultrastructure and Taxonomy of Arthrospira (Spirulina) Maxima and Arthrospira (Spirulina) Platensis by Luisa Tomaselli, of Spirulina platensis (Arthrospira): Physiology, Cell-biology and Biotechnology. Taylor and Francis. Avigad Vonshak (Ed) 1997을 보라. 이 명세서에서 설명된 조성물들은 스피룰리나 속의 개체들은 배제한다.
상기 조성물은 미손상 아르트로스피라 필라멘트, 상기 필라멘트의 세그먼트(segment), 분열/용해 세그먼트 또는 그 추출물/부분(fraction)을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 살아있거나 살아있지 않은 아르트로스피라를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 조성물은 분열된 아르트로스피라 필라멘트와 세그먼트를 포함한다.
아르트로스피라-계 조성물은 살생 활성을 떨어뜨리지 않는다면 임의의 적절한 방법으로 조제될 수 있다. 통상, 이는: (Ⅰ) 아르트로스피라를 임의의 적절한 방법으로 성장시키는 단계; (Ⅱ) 상기 성장한 아르트로스피라를 임의의 적절한 방법으로 수확하는 단계; 및 (Ⅲ) 상기 아르트로스피라를 임의의 적절한 방법으로 건조시키는 단계를 포함한다. 선택적 단계로: 추가적으로 임의의 적절한 방법으로 상기 아르트로스피라에 생리적 스트레스를 부가하는 단계; 상기 필라멘트 및 세그먼트를 임의의 적절한 방법으로 분열시키는 단계, 상기 유기체를 임의의 적절한 방법으로 살균하는 단계, 상기 아르트로스피라를 임의의 적절한 방법으로 표백하는 단계, 상기 엽록소를 임의의 적절한 방법으로 제거 또는 감성(degrading)하는 단계, 및 상기 건조 아르트로스피라를 분쇄하는 단계를 포함한다.
상기 단계들의 몇몇은 예컨대, 뉴질랜드 특허번호 336620 및 336619의 명세서에 설명되어 있고, 그 전체 내용은 본 명세서에 상호 참조로서 포함된다. 스트레스 부가는 예를 들어 수확기에, 성장 조건을 조절하여 죽이지는 않고 스트레스를 주기에 충분한 기간 동안 상기 아르트로스피라로부터 필수 영양분을 박탈하거나(영양분 삭감) 빛을 박탈함으로써 실시될 수 있다. 스트레스 부가는 스트레스를 받되 죽지는 않을 때까지 부분 건조시키거나 또는 상기 아르트로스피라를 수확하여 습한 환경에서 살도록 함으로써 실시될 수도 있다. 예를 들어, 아르트로스피라는 스프레이 건조되어 분열된 세포들의 미세 분말을 형성할 수 있다. 스프레이 건조는 예컨대, 50-190 ℃에서 수 분간 실시될 수도 있다. 건조는 예를 들어, 짧은 시간 동안 67 ℃ 아래에서 사이클론 건조(cyclonic drying), 열 펌프 건조, 열 튜브 건조, 내화물 건조(refractory drying) 또는 열 건조를 포함하는 임의의 적절한 방법으로 실시될 수 있다. 예를 들어, 뉴질랜드 특허번호 328013 및 328740에서 설명된 것과 같이 분쇄기 또는 폭발성 감압을 이용하여 필라멘트를 분열시킬 수 있으며, 그 전체 내용은 본 명세서에 상호 참조로서 포함된다.
상기 조성물에서 아르트로스피라의 조성은 용도에 따라 예컨대 약 0.01 % 내지 약 100%의 어느 범위에서든 변할 수 있다. 상기 조성물은 임의의 적절한 용매, 캐리어(carrier), 베이스(base), 결합제, 충전재, 바인더(binder), 가소제, 유화제, 안정제, 윤활제, 완충제, 연화제, 가용제(solubilising agent), 현탁제, 시크너(thickener), 향(fragrance), 착색제(colourant) 및 보존제(preservative)를 포함할 수 있다.
의도하는 용도에 따라, 상기 조성물은 항세균제(antimicrobial)(예컨대, 항박테리아제나 항진균제), 치료제(예컨대, 상처 치료제, 스테로이드), 또는 일반 영양제(예컨대, 아미노산, 비타민)와 같은 아르트로스피라에서 유도되지 않은 하나 이상의 작용제(active)를 더 포함한다. 그러한 작용제는 당해 분야에서 공지되어 있다.
상기 조성물은 임의의 적절한 형태일 수 있다. 상기 조성물은 임의의 적절한 방법으로 투여 또는 도포할 수 있다. 상기 조성물은 액체, 겔이나 고체, 또는 그 혼합물일 수 있다. 상기 조성물은 스프레이 형태로 뿌려지는 아르트로스피라의 액체 배양물(culture)일 수 있다. 선택적으로, 상기 조성물은 셰이킹(shake)이나 퍼퍼(puffer) 도포에 의해 목표 지점에 균일하게 살포되는 분말일 수 있다. 감염이나 침입된 대상체는 상기 조성물의 액상을 포함하는 욕조에 부위를 담글 수 있다. 상기 조성물과 도포(application) 또는 투여(administration) 방법은 뉴질랜드 특허번호 336620 및 336619의 명세서에 설명된 바와 같을 수 있다.
치료 용도로, 상기 조성물은 경구적으로, 비경구적으로, 흡입 스프레이로, 국소적으로, 직장으로, 비강으로, 구강으로, 또는 질을 통해 투여 또는 도포될 수 있다. 상기 조성물은 정제, 용액, 에어로졸, 스프레이, 크림, 연고, 로션, 에멀젼, 겔, 또는 분말일 수 있다. 상기 조성물은 아르트로스피라가 스며들어 있는 붕대, 드레싱(dressing), 반창고, 좌약, 질좌약, 또는 습포제의 형태일 수 있다.
바람직하게는, 상기 살생제는 균류, 그람-양성 박테리아, 원충, 바이러스, 갑각류, 진드기 및 곤충(insect)에 대해 작용하며, 이 중 몇 가지에 대해서는 상세히 후술한다.
본 발명의 여섯 번째 태양에 따르면:
(1) 아르트로스피라에 대해 생리적 스트레스를 부가하는 단계; 및
(2) (1)의 상기 스트레스 부가 아르트로스피라를 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 결합제와 결합시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 살생제 및/또는 치료제로 사용하는 아르트로스피라-계 조성물을 조제하는 방법이 제공된다.
본 발명의 일곱 번째 태양에 따르면:
(1) 아르트로스피라가 성장하는 액체를 약 80%까지 제거함으로써 아르트로스피라에 생리적 스트레스를 부가하는 단계;
(2) 오염 물질을 제거하기 위해 상기 스트레스 부가 아르트로스피라를 세척하는 단계;
(3) 상기 세척된 아르트로스피라를 건조시키는 단계; 및
(4) 상기 세척된 아르트로스피라를 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 결합제와 결합시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 살생제 및/또는 치료제로 사용하는 아르트로스피라-계 조성물을 조제하는 방법이 제공된다.
상기 어느 방법이건 본 명세서에서 설명된 하나 이상의 조성물을 조제하는 데 사용될 수 있다.
바람직하게는, 상기 방법은 캐리어, 용매, 베이스 또는 결합제를 첨가하기 전에 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 폭발성 감압 및/또는 동결 건조하는 특정 단계는 포함하지 않는다.
생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 항진균제로 사용하는 방법
본 발명의 여덟 번째 태양에 따르면, 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라의 유효량을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항진균제로 사용하는 조성물이 제공된다.
본 발명의 아홉 번째 태양에 따르면, 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 포함하는 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 대상체의 진균 감염 또는 침입을 예방 또는 치료하는 방법이 제공된다.
바람직하게는, 상기 방법은 그러한 치료나 예방을 필요로 하는 대상체를 식별하는 단계를 포함한다.
대상체의 진균 감염 또는 침입을 예방 또는 치료하는 약제의 조제에 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 사용하는 방법 또한 제공된다.
생리적 스트레스 부가 아르트로스피라는 적어도 하기 유형의 진균류를 치료하는데 사용될 수 있다: 접합균(zygomycotina); 자낭균류(ascomycotina); 불완전균(fungi imperfecti); 말라세지아(malassezia); 소포자균(microsporum); 백선균(trichophyton); 및 표피사상균(epidermophyton).
제1 실시예에서, 대상체는 인간 또는 포유동물이나 척추동물과 같은 동물이다. 인간 대상체에서, 상기 조성물은:
- 주로 소포자균, 백선균, 칸디다(candida) 및 표피사상균이 원인인 백선(tinea)(예컨대, 발백선증, 완선(jock itch), 백선(ringworm), 딥 네일 베드 감염(deep nail bed infection));
- 칸디나가 원인인 아구창(thrust);
- 말라세지아가 원인인 비듬;
- 마두렐라(madurella)가 원인인 열대성 진균(tropical mycetoma) - 피부 및 림프절에서의 입상 확산 성장;
- 스포로트릭스 센키(sporothrix schenkii)가 원인인 스포로트리코시스(sporothricosis) - 피부 및 림프절에서의 입상 확산 성장; 및
- 히스토플라스마 캡슐러텀(histoplasma capsulatum)이 원인인 히스모플라스마증(histoplasmosis) - 전신 확산 감염성(spreading systemic infection)의 만성 폐렴을 치료하는데 사용될 수 있다.
동물 대상체에서는, 상기 조성물은 예컨대, 백선(ring worm), 발굽 감염(칸디나, 말라세지아), 피부염 및 모낭염(소포자균(microsporum), 백선균(trichophyton), 알테나리아(alternaria), 푸사륨(fusarium))을 치료하는 데 사용될 수 있다. 동물의 국소 진균 조건은 통상 인간의 경우와 동일한 진균에 의해 발생한다.
제2 실시예에서, 대상체는 초목, 꽃, 과일, 야채, 곡물, 곡식, 콩, 버섯 균사, 목초, 또는 잔디와 같은 농산물이나 원예 작물이다. 조성물은 예컨대, 선단 고사병과 관부 썩음병(푸사리룸(fusarium)), 표피 습진(피토마이시스 카르타룸(pithomyces chartarum)), 보트리티스(보트리티스 시네리아(botrytis cineria)), 점무늬병(셉토리아(septoria), 알테리아(alteria), 바이폴라리스(bipolaris)), 흰가루병(스패로테카 마쿨라리스(sphaerotheca macularis), 에리시페(erysiphe), 스패로테카 파노사(sphaerotheca pannosa)), 복숭아나무잿빛무늬병(모닐리니아 프룩티콜라(monilinia fruiticola)) 및 밀붉은녹병/맥류줄기녹병(푸치니아(puccinia))를 치료하는 데 사용될 수 있다.
제3 실시예에서, 대상체는 토양, 목재, 건물 재료나 건물이다. 조성물은 예를 들어, 건물 내 또는 건물 상에서 곰팡이를 처리하고, 건물 재료와 전신주 상에서 진균성 목재 분해(fungal wood rot)의 처리하는데 사용될 수 있다.
놀랍게도, 본 발명자들은 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라는 분류군 기술된(monographed) 항진균제(정-진균제)와 상승적으로 상호작용하여 우수한 광범위 항진균 활성을 제공한다는 것을 발견했다. 본 발명자들은 스트레스 부가 아르트로스피라는 진균의 성장을 억제하고, 진균을 사멸시키며 진균의 재성장을 예방한다는 것을 발견했다.
본 발명의 열 번째 태양에 따르면, 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라와 적어도 하나의 정-진균제(fungi-static agent)의 상승작용적 결합물(combination)을 포함하는 항진균 조성물이 제공된다.
본 발명의 열한 번째 태양에 따르면, 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라와 적어도 하나의 정-진균제의 상승작용적 결합물을 포함하는 조성물의 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 대상체의 진균 감염 또는 침입을 예방 또는 치료하는 방법이 제공된다.
바람직하게는, 상기 방법은 그러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체를 식별하는 단계를 포함한다.
대상체의 진균 감염 또는 침입을 예방 또는 치료하는 약을 조제하기 위해, 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 적어도 하나의 정-진균제와 결합하여 사용하는 방법 또한 제공된다.
테르비나핀(terbinafine), 비포나졸(bifonazole), 클로트리마졸(clotrimazole), 미코나졸(miconazole), 에코나졸(econazole), 케토코나졸(ketoconazole) 또는 톨나프테이트(tolnaftate)와 같은 임의의 적절한 정-진균제(분류군 기술된 작용제)가 사용될 수 있다.
생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 항박테리아제로 사용하는 방법
생리적 스트레스 부가 아르트로스피라는 그람-양성 박테리아에 대한 효과적인 항박테리아제라는 것이 본 발명자들에 의해 밝혀졌다. 항박테리아 작용의 방식은 명백하지 않다. 아르트로스피라로부터의 하나 이상의 생체 활성제에 의해 그람-양성 박테리아의 세포벽이 용해되거나, 아니면 변경될 수 있다. 세포벽은 펩티도글리칸(N-아세틸글루코사민 및 N-아세틸무람산 포함)을 포함하며, 펩티도글리칸은 하나 이상의 살생제에 의해 소화될 수 있다.
본 발명의 열두 번째 태양에 따르면, 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라의 유효량을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항박테리아제로 사용되는 조성물이 제공된다.
본 발명의 열세 번째 태양에 따르면, 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 포함하는 조성물의 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 대상체의 박테리아 감염 또는 침입을 예방 또는 치료하는 방법이 제공된다.
바람직하게는, 상기 방법은 그러한 치료나 예방을 필요로 하는 대상체를 식별하는 단계를 포함한다.
대상체의 박테리아 감염 또는 침입을 예방 또는 치료하는 약제를 조제하기 위해 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 사용하는 방법 또한 제공된다.
바람직하게는, 상기 박테리아는 그람-양성 박테리아이고, 바실리(bacilli), 클로스트리디아(clostridia), 포도상구균(staphylococci), 또는 폐렴구균(pneumococci)일 수 있다. 상기 박테리아는 바람직하게는 여드름의 원인균인 프로피오니박테리움 애크니(propionibacterium acne)이다.
제1 실시예에서, 상기 대상체는 인간, 또는 포유동물이나 척추동물과 같은 동물이다. 인간 대상체에서, 상기 조성물은 그람-양성 박테리아에 의해 감염되거나 그에 의해 유발된 상처, 여드름, 습진 또는 궤양을 치료하기 위해 사용될 수있다. 상기 조성물은 기도, 구강, 소화 및 비뇨생식계의 감염과 같은 내부 감염(예컨대, 연쇄상 구균의 인후, 중이 감염)을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
제2 실시예에서, 상기 대상체는 초목, 꽃, 과일, 채소, 곡류, 곡물, 콩 또는 버섯 균사와 같은 농작물 또는 원예작물이다.
제3 실시예에서, 상기 대상체는 박테리아가 성장할 수 있는, 예컨대, 토양, 인공 구조물 또는 수로이다.
생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 살충제로 사용하는 방법
본 발명의 열네 번째 태양에 따르면, 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라의 유효량을 포함하는 것을 특징으로 하는, 살충제로 사용하는 조성물이 제공된다.
본 발명의 열다섯 번째 태양에 따르면, 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 포함하는 조성물의 유효량을 투여 또는 도포하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 해충을 억제 또는 제거하는 방법이 제공된다.
상기 살충제는 갑각류 및 진드기와 같은 해충에 가해질 수 있다. 상기 살충제는 파리(예컨대, 먹파리), 말벌, 모기 및 흰개미와 같은 곤충에 가해질 수 있다. 상기 살충제는 말라리아나 기타 곤충-매개 질병을 유발하는 것과 같은 기생충의 전염을 멈추는 데 사용될 수 있다.
제1 실시예에서, 상기 조성물은 방충제 또는 미끼로 제형될 수 있다.
제2 실시예에서, 상기 조성물은 초목, 꽃, 과일, 채소, 곡물, 곡류, 콩 또는 버섯 균사와 같은 농작물 또는 원예작물에 가해질 수 있다.
제3 실시예에서, 상기 조성물은 예컨대, 토양, 인공 구조물, 건물, 건물재료, 개울, 호수 또는 습지에 가해질 수 있다.
아르트로스피라를 치료제로 사용하는 방법
생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 피부 치료제 및/또는 살충제로 사용할 때, 본 발명자들은 아르트로스피라의 하나 이상의 기타 치환기가 하나 이상의 생체 활성제와 상승작용적으로 반응하여 피부의 치료를 촉진하는 것을 발견했다. 이러한 기타 치환기들은 비타민, 미네랄, 추적 성분, 항산화제, 필수 오일 및 탄수화물을 포함하고, 피부에 영양을 공급하는 베타-카로틴; 항염증제인 피코시아닌; 기타 단백질; 및 기타 영양분을 포함할 것으로 보인다.
우선, 스트레스 부가 아르트로스피라는 세균-이는 진균, 박테리아 또는 바이러스일 수 있음-을 억제하거나 사멸시키고, 이어서 아르트로스피라의 기타 치환기가 그 세균에 의한 손상을 치료한다.
본 발명자들은 피부 상태의 치료와 피부 치료와 같은 경우에, 아르트로스피라가 생리적 스트레스를 받지 않았어도 치료 특성을 가진다는 것을 발견했다.
본 발명의 열여섯 번째 태양에 따르면, 아르트로스피라의 유효량을 포함하는 것을 특징으로 하는, 포유동물의 피부 결함을 치료 또는 예방하는 조성물이 제공된다.
바람직하게는, 상기 조성물은 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 포함한다.
본 발명의 열일곱 번째 태양에 따르면, 아르트로스피라를 포함하는 조성물의 유효량의 도포를 포함하는 것을 특징으로 하는, 포유동물의 피부 결함을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다.
바람직하게는, 상기 조성물은 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 포함한다.
바람직하게는, 상기 방법은 그러한 치료나 예방을 필요로 하는 포유동물을 식별하는 단계를 포함한다.
아르트로스피라, 바람직하게는 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라를 포유동물의 피부 결함을 치료 또는 예방하는 약제의 조제에 사용하는 방법 또한 제공된다.
본 발명의 열여섯 번째와 열일곱 번째 태양에 따른 조성물들은 이미 정의된 본 발명의 다른 태양들에 따른 조성물로 설명된 것과 같은 하나 이상의 성분 또는 성질을 가질 수 있다.
본 발명의 열여섯 번째와 열일곱 번째 태양에 따른 상기 조성물은 바람직하게는 전술한 방법들 중 어느 하나에 의해 조제될 수 있다.
상기 피부 결함은 예컨대, 팬 자국, 여드름 손상, 딸기코, 붉은 부위, 갈라진 틈, 화상, 수포, 건선, 습진, 스케일링, 주름, 뾰루지, 구내염, 장애, 농포, 상처, 두피의 지루성 피부염, 기저귀 발진, 궤양, 단순 포진, 면도 발진, 수두, 피부염, 갈라진 뒤꿈치 및 팔꿈치일 수 있다. 상기 조성물은 화상, 곤충 및 동물에 물린 곳을 치료하고 피부 염증을 제거하는 데 사용될 수 있다. 상기 조성물은 피부 가려움을 완화하는 데 사용될 수 있다. 상기 조성물은 탄력성을 상실한 흉터 조직, 태양-손상 피부, 및 건조 및 비늘형 피부를 치료하는 데 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 태양과 실시예들은 하기 상세한 설명을 통해 명백해질 것이다.
도 1은 호흡측정법(respirometry)에 의하여 평가된 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라(AMYCOT® 및 미가공 분말)의 키틴에 대한 활성도를 도시한 도면;
도 2는 AMYCOT®의 C. 알비칸스(C. albicans)에 대한 항진균 활성도를 도시한 도면;
도 3은 호흡측정법에 의하여 평가된 AMYCOT®의 P. 애크니(P. acne)에 대한 항박테리아 활성도를 도시한 도면;
도 4는 아르트로스피라(스피룰리나)의 또 다른 상업적 조제품의 T. 루브룸(T. rubrum)에 대한 항진균 활성도를 도시한 도면;
도 5는 아르트로스피라의 상업적 조제품(Life Stream)의 A.니거(A. niger)에 대한 항진균 활성도를 도시한 도면;
도 6은 AMYCOT®의 M. 카니스(M. canis)에 대한 항진균 활성도를 도시한 도 면;
도 7은 AMYCOT®의 F. 그래미니아룸(F. graminearum)에 대한 항진균 활성도를 도시한 도면;
도 8은 AMYCOT®의 M. 퍼퍼(M. furfur)에 대한 항진균 활성도를 도시한 도면;
도 9는 샴푸 AMYCOT®의 T. 루브룸에 대한 항진균 활성도를 도시한 도면;
도 10는 샴푸 AMYCOT®의 C. 알비칸스에 대한 항진균 활성도를 도시한 도면;
도 11은 AMYCOT®의 P. 카르타룸(P. chartarum)에 대한 항진균 활성도를 도시한 도면;
도 12은 AMYCOT®의 B. 시네리아(B. cinerea)에 대한 항진균 활성도를 도시한 도면;
도 13는 AMYCOT®와 다양한 분류군 기술(monographed) 항-진균 작용제를 사용한 T. 루브룸 억제 결과를 도시한 도면;
도 14은 AMYCOT®와 다양한 분류군 기술 작용제를 사용한 T. 멘타그로파이트(T. mentagrophytes) 억제 결과를 도시한 도면;
도 15는 AMYCOT®와 다양한 분류군 기술 작용제를 사용한 C. 알비칸스 억제 결과를 도시한 도면;
도 16는 분류군 기술 작용제를 사용한 C. 알비칸스 억제 결과를 도시한 도면;
도 17은 분류군 기술 작용제와 결합한 AMYCOT® 및 다양한 분류군 기술 작용 제를 사용한 T. 멘타그로파이트 억제 결과를 도시한 도면;
도 18은 분류군 기술 작용제와 결합한 AMYCOT® 및 다양한 분류군 기술 작용제를 사용한 C. 알비칸스 억제 결과를 도시한 도면;
도 19은 분류군 기술 작용제와 결합한 AMYCOT®를 사용한 T. 멘타그로파이트 억제 결과를 도시한 도면;
도 20는 분류군 기술 작용제와 결합한 AMYCOT®를 사용한 T. 멘타그로파이트 억제 결과를 도시한 도면;
도 21은 분류군 기술 작용제와 결합한 AMYCOT® 및 다양한 분류군 기술 작용제를 사용한 T. 멘타그로파이트 억제 결과를 도시한 도면;
도 22은 분류군 기술 작용제와 결합한 AMYCOT® 및 다양한 분류군 기술 작용제를 사용한 C. 알비칸스 억제 결과를 도시한 도면;
도 23는 분류군 기술 작용제와 결합한 AMYCOT®를 사용한 T. 멘타그로파이트 살진균 결과를 도시한 도면;
도 24은 분류군 기술 작용제와 결합한 AMYCOT®를 사용한 T. 루브룸 살진균 결과를 도시한 도면;
도 25는 분류군 기술 작용제와 결합한 AMYCOT®를 사용한 T. 멘타그로파이트 살진균 결과를 도시한 도면;
도 26는 분류군 기술 작용제와 결합한 AMYCOT®를 사용한 T. 멘타그로파이트 살진균 결과를 도시한 도면;
도 27은 분류군 기술 작용제와 결합한 AMYCOT®를 사용한 T. 멘타그로파이트 살진균 결과를 도시한 도면;
도 28은 분류군 기술 작용제와 결합한 AMYCOT® 및 다양한 분류군 기술 작용제를 사용한 C. 알비칸스 살진균 결과를 도시한 도면;
도 29은 AMYCOT®와 분류군 기술 작용제를 사용한 T. 루브룸 살진균 결과를 도시한 도면;
도 30는 호흡측정법에 의해 평가된 다양한 온도에서 키틴에 대한 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라(AMYCOT®)의 활성도를 도시한 도면;
도 31은 호흡측정법에 의해 평가된 다양한 pH 조건에서 키틴에 대한 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라(AMYCOT®)의 활성도를 도시한 도면;
도 32은 T. 멘타그로파이트에 대한 아르트로스피라의 항진균 활성도를 도시한 도면;
도 33는 T. 루브룸에 대한 아르트로스피라의 항진균 활성도를 도시한 도면;
도 34은 M. 프룩티콜라(M. fructicola)에 대한 아르트로스피라의 항진균 활성도를 도시한 도면; 그리고
도 35는 알테르나리아 균류(Alternaria sp)에 대한 "약효 강화 AMYCOT®" 및 "원 AMYCOT®"의 항진균 활성도를 도시한 도면.
예시로서, 하기 일련의 예들을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시예들을 상세히 설명한다.
예 1 - 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라의 조제
아르트로스피라 맥시마(Arthrospira maxima)(Biovite Australia Pty Ltd로부터 입수)의 배양물에 대해 영양분 감소 또는 부분 탈수로 스트레스를 주었다. 아르트로스피라를 탈수 및 건조시켜 "미가공" 분말을 만들었다. 그 후, 뉴질랜드 특허번호 328013 및 328740에 설명된 방법을 사용하여 건조된 아르트로스피라에 대해 폭발성 감압을 실시했다(약효 강화). 아르트로스피라를 재-수화, 탈색, 건조 및 분쇄하여 건조 "예비혼합 분말"을 만들었다. 그 후, 상기 예비혼합 분말을 적절한 캐리어(예컨대, 상업적으로 입수 가능한 수성 British Pharmacopoeia 크림 또는 물)에 분산시켰다. 상기 예비혼합 분말은 "AMYCOT® 예비혼합 분말"로 부른다.
예 2 - 스트레스 부가 아르트로스피라의 활성도의 특징 부여
호흡측정법의 결과는 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라는 키틴, 키토산 및/또는 N-아세틸-D-글루코사민을 포함하는 기질을 변경 또는 용해할 수 있음을 시사한다.
키틴 기질
AMYCOT® 예비혼합 분말과 미가공 분말의 표준 용량을 표준 기술을 사용하여 Warburg 호흡계에서 중합체 4-유닛 BHD 키틴(Sigma, 카탈로그 번호 C7170)과 개별적으로 반응시켰다. 각 조성물을 키틴과 함께 혼합하고, 방출된 기체의 양을 측정했다. 30분간의 평형 후에 이어지는 한 시간 동안 반응을 모니터했다. 동일한 조성물이지만, 수조에서 5분간 예비-비등시킨 조성물은 그 활성이 효소성일 수 있다는 것과, 하나 이상의 유형의 변성 가능 단백질에 의할 수 있다는 것을 시사하는 아무 런 기체도 생성하지 않았다.
그 결과를 도 1에 도시하였다. 미가공 분말의 활성(효소성 활성으로 예상됨)의 속도는 694.9 ml/g 세포물질/g 기질/시간이었다. AMYCOT® 예비혼합 분말의 활성 속도는 729.65 ml/g 세포물질/g 기질/시간이었다. 호흡계를 사용하여 활성의 최적 온도도 확인하였다.
AMYCOT® 예비혼합 분말(0.02 g 및 0.06 g)을 키틴(0.02 g)과 함께 2O℃, 30℃, 33℃ 및 40℃에서 배양했다. 크림 기반 AMYCOT® 예비혼합 분말(0.05 g)도 키틴(0.02 g)과 함께 이러한 온도들에서 배양했다. 그 결과는 도 30에 도시하였다. 각 경우에 활성의 최적 온도는 33℃로 결정되었다. 호흡계를 사용하여 활성의 최적 pH도 확인하였다.
AMYCOT® 예비혼합 분말(0.02 g)을 변화하는 pH의 버퍼(60-70% 에탄올, 30-40% 물, 0-0.05% 페놀프탈레인, 0-0.03% 브로모티몰 블루, 0-0.02% 메틸 레드, 나트륨염, 0-0.01% 수산화나트륨 및 0-0.01% 메틸 오렌지, 나트륨염, pH는 5, 7, 9 및 11)에 현탁시키고 33℃에서 키틴(0.02 g)과 함께 배양시켰다. 그 결과를 도 31에 도시하였다. 활성의 최적 pH는 6으로 확정되었다.
이러한 결과들은, 피부가 유사한 온도 및 pH를 가지기 때문에, 피부에 국소적으로 가해졌을 때 생체 활성제 또는 작용제들이 활성을 가져야 함을 시사한다.
N-아세틸-D-글루코사민 및 키토산 기질
AMYCOT® 예비혼합 분말(0.02g)을 33℃의 Warburg 호흡계에서 N-아세틸-D-글루코사민(0.02g, Sigma 카탈로그 번호 A8625-5G) 및 키토산(0.02g, Sigma 카탈로그 번호 C3646) 기질과 함께 배양했다. 30분간의 평형 후에 이어지는 1시간 동안 각 반응을 모니터했다.
AMYCOT®와 N-아세틸-D-글루코사민의 혼합에 대한 결과를 아래 표에 나타내었다.
AMYCOT® + N-아세틸-D-글루코사민
시간(분) 기체의 mm 기체의 mm 기체의 mm
0 0 0 0
5 9 6 7
10 12 9 11
30 12 10 11
60 12 10 11
AMYCOT®와 키토산의 혼합에 대한 결과를 아래 표에 나타내었다.
AMYCOT® + 키토산
시간 기체의 mm 기체의 mm 기체의 mm
0 0 0 0
5 12 10 10
10 14 12 14
30 17 13 15
60 17 14 16
비교를 위해, 33℃에서 배양된, AMYCOT®(0.02g)과 키틴(0.02g)의 혼합에 대한 결과를 아래 표에 나타내었다.
AMYCOT® + 키틴
시간 기체의 mm 기체의 mm 기체의 mm
0 0 0 0
5 12 10 15
10 18 18 20
30 19 18 21
60 19 19 21
이 결과들은 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라는 키틴, 키토산 및/또는 N-아세틸-D-글루코사민을 용해 또는 변경하는, 또는 N-아세틸-D-글루코사민을 중합체 서브유닛으로 가지는 다른 유형의 중합체도 용해 또는 변경할 수 있는 하나 이상의 생체 활성제를 가진다는 것을 시사한다. 상기 생체 활성제는 예를 들어, 키틴아제, 키토산아제 또는 키틴 디아세틸아제일 수 있다.
예 3 - 스트레스 부가 아르트로스피라의 항진균 및 항박테리아 활성
살아있는 진균 및 그람-양성 박테리아에 대하여 AMYCOT® 예비혼합 분말의 살생 활성을 시험관 시험하였다.
목표 병원균의 생 배양물은 American Type Culture Collection (ATCC), Australian Collection of Microorganisms (ACM) 및 Sullivan Niccolaides로부터 입수하였다. 테스트된 상기 배양물을 표 4에 나타내었다.
병원균 ATCC No . ACM No . 분리주 (isolates)
트리코피톤 멘타그로파이트(Trichophyton mentagrophytes) 4808,9533 5068
칸디다 알비칸스 753 4574
트리코피톤 루브룸 SN01 (Sullivan Niccolaides)
에피더모피톤 플로코섬(Epidermophyton floccosum) SN02 (Sullivan Niccolaides)
프로피오니박테리움 애크니 25746 5109
각 병원균의 균일한 론을 감자 포도당 한천 (Potato Dextrose Agar: PDA) 배지를 포함하는 접시에서 성장시켰다. 3-4 시간의 배양 후에, 8 mm 직경의 무균 콜크 보어러(cork borer)로 PDA 배지에서 네 개의 웰(well)을 절단했다. 측정된 양의AMYCOT® 예비혼합 분말과 컨트롤(control) 크림/분말을 각 웰에 위치시켰다. 접시를 각 병원균에 적절한 조건으로 배양하고 접시를 매일 점검했다.
2-4일 후에 웰 주변에 두 개의 동심 영역이 분명히 나타났다:
1. 웰 주변의 작은 투명 원형 "정화대(clearance)" 구역. 이는 진균이 파괴되어 잔여 건조 세포질 물질만이 남은 영역이다(광 현미경 및 전자 현미경에서 관찰시).
2. 상기 정화대 구역의 주변으로부터 확장하는 큰 반투명 "영향(affected)" 구역. 상기 영향 구역은 비영향 론에 비해, 상기 론의 더 작은 높이, 그 더 작은 밀도 및 더 큰 투명도에 의해 인지된다. 이는 진균 세포벽이 크게 파괴되었지만, 몇몇은 종종 구형 세포질 구(cytoplasmic spheres)의 영역으로 잔존하는 영역이다(광 현미경 및 전자 현미경에서 관찰시).
상기 구역들의 측정은 각 경우에, 상기 웰의 외주(outside perimeter)에서 상기 구역의 외주까지 실시되었다. 이 측정은 구역 거리(zonal distance: ZD)로 불린다. 상기 구역의 반경은 시험관에서 상기 병원균에 대한 상기 살생 제제/제제들의 효능에 대한 비선형 측정이다.
상기 시험관 컨트롤 결과를 표 5에 나타내었다.
ACM No . 병원균 결과 정화대 구역의 크기( ZD )( mm ) 영향 구역의 크기( mm )
5068 트리코피톤 멘타그로파이트 정화대 6 10
4574 정화대 6.5 -
5109 프로피오니박테리움 애크니
(혐기적으로 배양됨)		 정화대 없음 - -
ATCC No .
4808 트리코피톤 멘타그로파이트 정화대 5 8
9533 트리코피톤 멘타그로파이트 정화대 6 10
753 칸디다 알비칸스 정화대 6.5 -
25746 프로피오니박테리움 애크니
(혐기적으로 배양됨)		 정화대 없음 - -
분리주 ( isolates )
No .
SN01 트리코피톤 루브룸 정화대 6 -
SN02 에피더모피톤 플로코섬 정화대 5 8
301 족부백선(Tinea pedis)-분리주 정화대 6 10
307 조키 가려움(Jockey itch)-분리주 정화대 6 10
도 2는 AMYCOT®를 사용한 칸디다 알비칸스(ACM 4574)의 정화대(clearance)를 보여주고 있는데, 이는 조건 아구창(condition thrush)에 대한 하나 이상의 살생제의 효능에 대한 증거다. AMYCOT® 예비혼합 분말은 6시 위치에 놓이고, 수성 크림 내에 12.5% w/w AMYCOT®를 가지는 "인간 시험 크림(human trial cream)"은 12시 위치에 놓인다(9 mm의 ZD).
혐기성 여드름-유발 박테리아 프로피오니박테리움 애크니의 경우, 혐기성 조건에서 테스트했을 때 아무런 정화대도 발견되지 않았다. 이에 대해서는 예 4에서 설명한다.
예 4 - 프로피오니박테리움 애크니에 대한 스트레스 부가 아르트로스피라의 항박테리아 활성
호흡측정은 AMYCOT®가 P. 애크니에 대한 항박테리아 활성을 가진다는 것을 보여주었다.
AMYCOT® 예비혼합 분말(0.02g) 및 12.5% w/w AMYCOT®를 포함하는 5g의 "인간 시험 크림"을 산소가 존재할 때 Warburg 호흡계에서 혐기성 여드름-유발 유기체 P. 애크니(ACM No. 5109)의 배양액(broth)과 개별적으로 반응시켰다. 그 결과를 AMYCOT®가 없는 P. 애크니 배양액을 포함하는 컨트롤의 결과와 비교하였다. 산소가 없을 때에는, 아무런 기체도 유리되지 않았다. 산소가 존재할 때에는, 기체가 유리되었으며, 각 조성물은 항박테리아 활성을 가졌다.
산소가 존재할 때 AMYCOT®와 인간 시험 크림의 결과를 도 3에 도시하였다. (아마도 효소성인) AMYCOT® 예비혼합 분말의 속도는 626.00 ml/g 세포물질/g 기질/시간이었다. 인간 시험 크림의 속도는 12.00 ml/g 세포물질/g 기질/시간이었다.
상기 결과는, 상기 조성물이 체내에서 P. 애크니에 대한 항박테리아제로 작용하기 위해서는, 산소가 필요하다는 것을 보여주었다. 따라서, 살생제의 적어도 하나는 산화 효소(oxidase)일 수 있다.
본 발명자들은 진균에 대한 하나 이상의 상기 살생제가 진균의 세포벽을 용해하거나 변경할 것으로 짐작한다. 그러한 작용제는 키틴아제, 키토산아제 또는 키틴 디아세틸아제일 수 있다.
비록 P. 애크니와 기타 그람-양성 박테리아는 그 세포벽에 키틴이나 키토산을 가지는 것으로 생각되지 않지만, 하나 이상의 살생제는 박테리아 세포벽의 N-아세틸-D-글루코사민/펩티도글리칸을 용해하거나 변경하는 것으로 짐작된다.
예 5 - 아르트로스피라의 다양한 상업적 출처품들이 항진균 활성을 가진다
건조 아르트로스피라의 상업적 조제품(분말, 정제 및 캡슐)들이 다양한 관할의 다양한 제조업체로부터 입수되어 항진균 활성에 대하여 테스트되었다. 상기 분말은 통상 아르트로스피라를 수확, 세척 및 건조함으로써 조제된다. 몇몇 제조업체는 젖은 상태에서 아르트로스피라를 분쇄한다. 조제는 아르트로스피라가 소생 상태로 들어가도록 수확-후 아르트로스피라에 대해 특히 스트레스를 부가하는 단계를 수반하지 않는다. 사실은, 전술한 바와 같이, 두꺼운 뮤코이드 코팅은 상기 유기체의 가공 장치에 들러붙는 경향이 있으므로, 아르트로스피라의 상업적 재배자들은 가능한 한 상기 유기체에 대한 스트레스를 최소화하려 한다.
아르트로스피라(스피룰리나) 분말은 하기 공급업체로부터 입수하였다:
1. China Spirulina - Jiangsu Cibainian Nutrition Food Co., Ltd. 중국
2. Febico - Far East Biotech Co. Ltd. 대만
3. Life Stream/Earthrise - DIC. 미국 캘리포니아
4. Pacifica - Cyanotech. 미국 하와이
5. Siam Algae Co. - DIC. 태국
6. Spirin -Yunnan Spirin Co. Ltd. 중국
7. Synergy - DIC. 중국
각 분말을 수성 크림에 12.5% w/w 농도로 혼합하였다. 그 후, 각 크림을 탈색하였다. T. 루브룸의 균일한 론을 접시 내의 PDA 배지에서 성장시켰다. 3-4 일간의 배양 후에, 멸균 콜크 보어러로 PDA 배지 내에서 웰을 절단하였다. 각 크림의 측정된 양을 각 웰에 두고, 그 후 상기 접시를 2-4 일간 배양했다.
도 4는 12.5% w/w Siam Algae Co. (3 시 위치), 12.5% w/w Life Stream (6 시 위치), 및 12.5% w/w China Spirulina (9 시 위치)의 항진균 활성을 보여준다.
그 결과는, 테스트된 모든 상업적 분말들이 다소간의 항진균 활성을 가진다는 것을 보여준다. 호흡계에 의해, 테스트된 모든 상업적 분말들이 키틴과 함께 배양되었을 때도 활성(아마도 효소성 활성)을 가진다는 것이 확인되었다(결과는 미도시). 추가 공정 없이 12.5% w/w의 농도로 일반용(over-the-counter) 수성 크림과 혼합하기 위해 분말 하나(Life Stream)를 무작위로 선택하고 아스퍼질러스 니거(Aspergillus niger)에 대한 항진균 활성을 테스트했다. 상기 크림은 도 5의 12시, 3시, 6시 및 9시 위치에 보이는 것처럼 4mm의 정화대를 형성하였다. 이것은 아마도 건조 아르트로스피라의 모든 상업적 조제품들이 추가적인 스트레스 부가 단계나 필라멘트 분열과 같은 추가 가공 공정이 없이도 다소의 항진균 활성을 보일 가망이 있음을 보여주었다.
예 6 - 포유동물의 진균성 질환에 대한 스트레스 부가 아르트로스피라의 활성
포유동물의 다양한 진균성 질환에 대하여 AMYCOT®의 항진균 활성을 시험관에서 테스트했다. 하기 병원균들을 Department of Primary Industries, Department of Agriculture, ACM 및 종묘장으로부터 입수하였다:
- 칸디다 알비칸스
- 마이크로스포룸 카니스(Microsporum canis)
- 트리코피톤 멘타그로파이트
- 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrum)
- 에피더모피톤 플로코섬
- 푸사리움 그래미니아룸(Fusarium graminearum)
- 알테르나리아 균류
- 말라세지아 퍼퍼(Malassezia furfur)
각 병원균의 균일한 론을 PDA 배지에서 성장시켰다. 1-2일간의 배양 후에, 웰을 멸균 8 mm 직경 콜크 보어러로 PDA 배지 내에서 절단했다. 측정된 양의 AMYCOT®를 각 웰에 위치시켰다. 병원균에 따라 적절한 온도에서 플레이트를 배양하였다. 웰 플레이트(welled plate)를 매일 관찰했다. 2-3일 후에 정화대를 측정했다. 구역의 측정은 웰의 외주로부터 구역의 외주까지 실시되었다.
이 구역에는 목표 병원균에 대한 AMYCOT®의 효능을 증명하는 살아있는 진균 세포가 없었다. 이 구역에는 살아있는 진균 세포가 없었고, 이는 목표 병원균에 대한 AMYCOT®의 효능을 증명한다.
12.5% w/w AMYCOT® 크림은 병원균 T. 루브룸의 8 mm 정화대를 형성하였다. T. 루브룸은 발굽 감염과 백선의 원인 병원체이다.
12.5% w/w AMYCOT® 크림은 병원균 T. 멘타그로파이트의 15 mm 정화대를 형성하였다. T. 멘타그로파이트는 발굽 감염과 백선의 원인 병원체이다.
도 6은 병원균 M. 카니스의 3 mm 정화대를 형성하는 12.5% w/w AMYCOT® 크림의 웰을 보여준다. M. 카니스는 발굽 감염과 백선의 원인 병원체이다.
12.5% w/w AMYCOT® 크림은 병원균 E. 플로코섬의 3 mm 정화대를 형성하였다. E. 플로코섬은 발굽 감염과 백선의 원인 병원체이다.
12.5% w/w AMYCOT® 크림은 병원균 C. 알비칸스의 4.5 mm 정화대를 형성하였다. C. 알비칸스는 백선과 피부염의 원인 병원체이다.
도 7은 병원균 F. 그래미니아룸의 12 mm 정화대를 형성하는 12.5% w/w AMYCOT® 크림의 웰을 보여준다. F. 그래미니아룸는 발굽 감염의 원인 병원체이다.
도 8은 M. 퍼퍼의 정화대를 형성하는 12.5% w/w AMYCOT® 크림의 웰을 보여준다. M. 퍼퍼는 비듬의 원인 병원체이다.
도 9는 병원균 T. 루브룸의 3 mm 정화대를 형성하는 5% w/w AMYCOT® 샴푸의 웰을 보여준다.
도 10는 병원균 C. 알비칸스의 4 mm 정화대를 형성하는 5% w/w AMYCOT® 샴푸의 웰을 보여준다.
예 7 - 초목의 진균성 질환에 대한 스트레스 부가 아르트로스피라의 활성
초목의 다양한 진균성 질환에 대하여 AMYCOT®의 항진균 활성을 시험관에서 테스트하였다. 하기 병원균들을 Department of Primary Industries, Department of Agriculture, ACM 및 종묘장으로부터 입수하였다:
- 푸사리움 그래미니아룸
- 피토마이시스 카르타룸
- 보트리티스 시네리아
- 알테르나리아 균류.
각 병원균의 균일한 론을 PDA 배지에서 성장시켰다. 1-2일간의 배양 후에, 웰을 멸균 8 mm 직경 콜크 보어러로 PDA 배지 내에서 절단했다. 측정된 양의 AMYCOT®를 각 웰에 위치시켰다. 병원균에 따라 적절한 온도에서 플레이트를 배양하였다. 웰 플레이트(welled plate)를 매일 관찰했다.
2-3일 후에 정화대를 측정했다. 구역의 측정은 웰의 외주로부터 구역의 외주까지 실시되었다.
상기 구역에는 목표 병원균에 대한 AMYCOT®의 효능을 증명하는 살아있는 진균 세포가 없었다.
12.5% w/w AMYCOT® 크림은 병원균 F. 그래미니아룸의 13 mm 정화대를 형성하였다. F. 그래미니아룸은 작은 곡물에서 관부 썩음병(crown rot)과 선단 고사병(head blight)의 원인 병원체이다.
도 11은 병원균 P. 카르타룸의 10 mm 정화대를 형성하는 12.5% w/w AMYCOT® 므림의 웰을 보여준다. P. 카르타룸은 양과 소의 표피 습진(facial eczema)의 원인 병원체이다.
12.5% w/w AMYCOT® 크림은 병원균 B. 시네리아의 8 mm 정화대를 형성하였다. B. 시네리아는 과일의 보트리티스의 원인 병원체이다.
12.5% w/w AMYCOT® 크림은 과일의 점무늬병(leaf spot)의 원인 병원체인 병원균 알테르나리아 균류의 9 mm 정화대를 형성하였다.
예 8 - 초목 진균성 병원균에 대한 스프레이로서 AMYCOT ®의 테스트
일반 초목 병원균인 보트리티스 시네리아에 대하여 항진균 스프레이 형태의 AMYCOT®를 시험관에서 테스트하였다. 5% w/w AMYCOT® 분말을 물로 수화시켰지만, 단지 인색하게만 용해하였다.
B. 시네리아의 균일한 론을 접시 내의 PDA 배지에서 성장시켰다. 그 후 접시의 우측에 상기 스프레이를 분무하고 실온에서 24시간 동안 두었다. 접시의 좌측에는 스프레이를 분무하지 않았다. 도 12은 접시에서 스프레이 분무된 쪽은 진균이 사멸하였음을 보여준다. 상기 스프레이는 보트리티스를 제거하고 추가 포자 형성을 억제하는 데 효과적이었다.
예 9 - 스트레스 부가 아르트로스피라와 분류군 기술 작용제에 의한 시험관 항세균 테스트
다양한 일반 판매용(over-the-counter) 진균 및 항박테리아 크림(LamisilTM, Dakta GoldTM, CanestenTM, TinadermTM, DaktarinTM, Tripod LabsTM, Resolve TineaTM, Resolve BalmTM, Resolve PlusTM, ClearasilTM, Benzac WTM 포함)과 AMYCOT®의 항진균 및 항박테리아 활성을 본 예와 기타 예에서 테스트하였다.
본 예에서, 목표 병원균 트리코피톤 멘타그로파이트, 에피더모피톤 플로코섬, 트리코피톤 루브룸 및 프로피오니박테리움 애크니에 대하여 다양한 일반 판매용 크림과 AMYCOT®의 항진균 및 항박테리아 활성을 독립적인 실험실(ConMac Laboratory Services)에서 테스트하였다.
결과를 표 6에 나타내었다.
목표 병원균 테스트 크림 정화대
1일 		정화대
2일 		정화대
3일
트리코피톤
멘타그로파이트		 1) 컨트롤 미검출 미검출 미검출
2) AMYCOT® 0.5-1 mm 불명확, 원형 4 mm 불명확, 원형 1-2 mm 명확, 원형
3-4 mm 불명확, 원형
3) Lamisil 미검출 미검출 미검출
4) Dakta Gold 미검출 미검출 미검출
에피더모피톤
플로코섬		 1) 컨트롤 미검출 미검출 미검출
2) AMYCOT® 1 mm 명확, 원형 2,5 mm 명확, 원형 2.5 mm 명확, 원형
5 mm 불명확, 원형
3) Canesten 미검출 미검출 미검출
4) Lamisil 미검출 미검출 미검출
트리코피톤
루브룸		 1) 컨트롤 미검출 미검출 미검출
2) AMYCOT® 1 mm 명확, 원형 5.5 mm 명확, 원형 5.5 mm 명확, 원형
4 mm 불명확, 원형
3) Tinaderm 미검출 미검출 미검출
4) Lamisil 미검출 1 mm 명확, 불규칙 1.5 mm 명확, 불규칙
프로피오니박테리움
애크니		 1) 컨트롤 미검출 미검출 미검출
2) AMYCOT® 미검출 미검출 미검출
3) Clearasil 미검출 미검출 미검출
4) Benzac W 미검출 미검출 미검출
결과는 AMYCOT®만 각 병원균에 대하여 활성이라는 것을 보여준다. 활성을 보여주는 유일한 크림의 다른 예는 T. 루브룸에 대한 LamisilTM이었다.
예 10 - 분류군 기술 작용제 및 AMYCOT ®와의 화합물에 의한 시험관 테스트
미코나졸(miconazole), 톨나프테이트(tolnaftate), 비포나졸(bifonazole) 및 클로트리마졸(clotrimazole)과 같은 항진균제들은 특정 단백질 생산을 억제하고, 재생산(reproduction)과 같은 정상적 기능을 방해함으로써 작용한다. 항진균 테르비나핀(terbinafine)은 생 스테롤(vital sterol)의 형성을 방해함으로써 작용한다.
이러한 시험관 테스트의 첫 번째 목적은 다양한 일반 판매용 크림의 효능이나 진균 억제제로서의 활성을 결정하고 AMYCOT®의 효능과 비교하는 것이다. 두 번째 목적은 진균 억제제로서 하나 이상의 상기 일반 판매용 크림이나 그 작용제와 결합한 AMYCOT®의 효능을 결정하는 것이다.
사부로드(Sabouraud)의 액상 배지에 선택된 병원균을 접종했다. 그 후 배양액을 28℃에서 1주일간 배양했다. 멸균 면봉을 상기 병원균의 배양액에 담그고 상기 플레이트를 직각으로 스트리킹(streaking)하여 PDA 배지 플레이트를 접종하고 상기 플레이트가 고른 론을 가지도록 하였다.
크림 베이스에 이미 들어있던 것이 아닌 분류군 기술 작용제들은 각 크림 베이스와 혼합되었다. 선정 크림을 10 mm 직경 필터 페이퍼 디스크에 두고 그 디스크를 새로 접종된 플레이트에 두었다. 네 개까지의 서로 다른 디스크들을 플레이트에 두었다. 그 후 상기 플레이트를 병원균에 따라 적절한 온도에서 24-48시간 동안 배양했다. 그 후 24-48시간이 끝나는 시점에 사진을 찍었다.
억제 테스트 결과를 도 13-22 및 하기 표 7-16에 나타내었다.
억제 테스트 (도 13) 병원균: 트리코피톤 루브룸
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 8
3:00 티나덤(Tinaderm)
(톨나프테이트 2%)		 0
6:00 플라세보(Placebo) 0
9:00 닥타린(Daktarin)
(미코나졸 2%)		 15
억제 테스트 (도 14) 병원균: 트리코피톤 멘타그로파이트
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 4
3:00 티나덤(Tinaderm)
(톨나프테이트 2%)		 1
6:00 플라세보(Placebo) 0
9:00 닥타린(Daktarin)
(미코나졸 2%)		 11
억제 테스트 (도 15) 병원균: 칸디다 알비칸스
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 2
3:00 티나덤(Tinaderm)
(톨나프테이트 2%)		 3
6:00 플라세보(Placebo) 0
9:00 닥타린(Daktarin)
(미코나졸 2%)		 15
억제 테스트 (도 16) 병원균: 칸디다 알비칸스
작용제 정화대의 크기 ( mm )
트리포드 랩스(Tripod Labs)
(클로트리마졸 1% + 티 트리 오일)		 10
억제 테스트 (도 17) 병원균: 트리코피톤 멘타그로파이트
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 50% AMYCOT® 12.5% 크림 +
50% 닥타린 (미코나졸 2%)		 10
3:00 리졸브 티니아
(Resolve Tinea)
(미코나졸 2%)		 10
6:00 리졸브 발삼
(Resolve Balm)
(미코나졸 2%)		 7
9:00 리졸브 플러스
(Resolve Plus)
(미코나졸 2%)		 11
억제 테스트 (도 18) 병원균: 칸디다 알비칸스
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® + 닥타린 10
3:00 리졸브 티니아
(미코나졸 2%)		 6
6:00 리졸브 발삼
(미코나졸 2%)		 7
9:00 리졸브 플러스
(미코나졸 2%)		 11
억제 테스트 (도 19) 병원균: 트리코피톤 멘타그로파이트
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 1
3:00 AMYCOT® 12% +
클로트리마졸 10%		 13
6:00 AMYCOT® 12% +
테르비나핀 1%		 1
9:00 AMYCOT® 12% +
톨나프테이트 10%
억제 테스트 (도 20) 병원균: 트리코피톤 멘타그로파이트
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 1
3:00 AMYCOT® 12% +
클로트리마졸 10%		 11
6:00 AMYCOT® 12% +
테르비나핀 1%		 2
9:00 AMYCOT® 12% +
톨나프테이트 10%		 4
억제 테스트 (도 21) 병원균: 트리코피톤 멘타그로파이트
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
미코나졸 2%		 11
3:00 플라세보 0
6:00 리졸브 발삼
(미코나졸 2%)		 7
9:00 리졸브 플러스
(미코나졸 2%)		 7
억제 테스트 (도 22) 병원균: 칸디다 알비칸스
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 50% AMYCOT® 12.5% 크림 +
50% 닥타린 (미코나졸 2%)		 14
3:00 1% 클로트리마졸 4
6:00 10% 톨나프테이트 0
9:00 2% 미코나졸 9
도 22에 분류군 기술된 작용제들은 통상 사용되는 스피릿 베이스(spirit base)와 달리 수성 크림 베이스이다.
시험관 테스트에서 미코나졸과 클로트리마졸은 질병성 진균의 가장 효과적인 억제제로 보인다(도 13-22 참조). 도 17 및 도 18과 표 11 및 표 12는 미코나졸이 효과적인 진균 억제제라는 것을 입증한다. AMYCOT®도 억제제로서 작용하지만, 클로트리마졸 및 미코나졸에 비해 약 40%의 효과에 불과하다(도 13-15 참조). 도 19-22 및 표 13-16은 AMYCOT®와 미코나졸 및 AMYCOT®와 클로트리마졸의 화합물이 테르비나핀과 톨나프테이트에 비교했을 때 시험관에서 가장 효과적인 진균 억제제임을 시사한다.
이러한 시험관 테스트의 세 번째 목적은 다양한 일반 판매용 크림이나 그 작용제의 살진균제로서의 효능을 결정하고, AMYCOT®의 효능과 비교하는 것이다. 네 번째 목적은 분류군 기술된 작용제들과 결합한 AMYCOT®의 효능을 결정하는 것이다.
상기 살진균 테스트는 병원균의 론을 PDA 배지 플레이트 상에서 2-3일 기간에 걸쳐 성장시킨 후 숙성 병원균을 항진균제에 노출시키는 것을 포함하였다. 이는 웰을 론 한천(lawned agar)으로 절단해 넣고, 상기 한천을 제거하며 상기 웰을 크림으로 채움으로써 이루어진다.
살진균 테스트 결과를 도 23-29 및 하기 표 17-23에 나타내었다.
살진균 테스트 (도 23) 병원균: 트리코피톤 멘타그로파이트
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 6
3:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
1% 테르비나핀		 6
6:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
10% 톨나프테이트		 6
9:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
10% 클로트리마졸		 5
살진균 테스트 (도 24) 병원균: 트리코피톤 루브룸
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 9
3:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
10% 클로트리마졸		 7
6:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
1% 미코나졸		 8
9:00 플라세보 0
살진균 테스트 (도 25) 병원균: 트리코피톤 멘타그로파이트
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 6
3:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
1% 테르비나핀		 5
6:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
10% 톨나프테이트		 5
9:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
10% 클로트리마졸		 4
살진균 테스트 (도 26) 병원균: 트리코피톤 멘타그로파이트
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 8
3:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
1% 테르비나핀		 7
6:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
10% 톨나프테이트		 5
9:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
10% 클로트리마졸		 4
살진균 테스트 (도 27) 병원균: 트리코피톤 멘타그로파이트
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 9
3:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
1% 테르비나핀		 4
6:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
10% 톨나프테이트		 5
9:00 AMYCOT® 12.5% 크림 +
10% 클로트리마졸		 5
살진균 테스트 (도 28) 병원균: 칸디다 알비칸스
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 8
3:00 닥타린 (미코나졸 2%) 0
6:00 카네스텐 (클로트리마졸 1%) 0
9:00 AMYCOT® 12% +
클로트리마졸 1%		 5
살진균 테스트 (도 29) 병원균: 트리코피톤 루브룸
위치 작용제 정화대의 크기 ( mm )
12:00 AMYCOT® 12.5% 크림 6
3:00 10% 클로트리마졸 0
6:00 10% 톨나프테이트 0
9:00 2% 미코나졸 0
도 29의 분류군 기술 작용제는 통상 사용되는 스피릿 베이스와 달리 수성 크림 베이스이다.
상기 결과는 본 일반 판매용 항진균제와 분류군 기술된 작용제들이 정-진균제일 뿐 살진균제는 아니라는 것을 시사한다. 도 23-29과 표 17-23은 AMYCOT®가 효험있는 살진균제이며, 분류군 기술된 작용제들과 결합했을 때에도 그러하다는 것을 보여준다.
AMYCOT®는 미코나졸이나 클로트리마졸과 결합했을 때, 그들의 효능을 크게 떨어뜨리지 않았다. 상기 결합은 억제 효과를 향상시켰다(도 18-22 참조). 이는 매우 효과적인 광범위 제품을 만들어냈다.
AMYCOT®를 클로트리마졸과 결합시켰을 때에는 AMYCOT®의 항진균 활성이 약간 억제되었지만(도 23-29 참조), AMYCOT®를 미코나졸과 결합시켰을 때에는 그 결합 크림의 억제 또는 항진균 활성에 크게 해로운 효과는 없었다(도 18-27 참조).
AMYCOT®를 미코나졸과 결합시켰을 때 미코나졸의 억제 성질과 AMYCOT®의 억제 및 항진균 활성으로 인해 광범위 제품으로서 더욱 효능이 우수했다.
미코나졸 단독으로 달성된 정화대는 병원균 T. 멘타그로파이트의 경우와 같이 재성장에 의해 잠식된 반면, 상기 결합 크림은 억제제로서 작용했으며 게다가 "그 기초를 유지"하였다(도 21 참조).
AMYCOT®와 2% 미코나졸을 결합시켰을 때에는 웰 주변에 정화대를 형성한 후 상기 병원균의 재성장을 제한하는 것도 발견되었다.
예 11 - 다양한 피부 조건에서의 아르트로스피라의 시험
환자는 발가락 사이에 깊은 환부를 가진 진전된 발백선증을 가지고 있었다. 상기 환자는 12.5% w/w AMYCOT® 크림의 첫 번째 도포 후 15 분 내에 진균에 의한 가려움이 멈추었다고 보고하였다. 염증이 감소하였고, 몇몇 경우에는 12시간 내에 완전히 사라졌다. 24 시간 내에 환부가 아물기 시작했고 4-5일 내에 완전히 치료되었다.
이러한 관찰들은 여드름(acne)의 경우에 반복되었으며, 환자는 관련된 염증이 사라졌고, 그들의 피부가 정상적인 색으로 돌아왔으며 새 피부처럼 부드럽고 유연하게 되었다고 보고했다. 농포도 말랐다.
본 발명자들은 하나 이상의 살생제(예컨대, 키틴아제, 키토산아제, 키틴 디아세틸아제)가 아르트로스피라의 기타 성분들과 상승작용적으로 상호작용하여 치료 효과를 증대시킨 것으로 믿고 있다. 진균 감염에서 가려움은 진균으로부터의 소화성 효소나 대사물 방출의 징후이다. 세포벽이 분열될 때 정상적인 진균 대사가 일단 붕괴되면 가려움이 멈춘다.
진균과 관계없는 조건에, 건조하고 갈라진 뒤꿈치와 팔꿈치, 빨간 코, 습진, 태양 손상 피부 및 건선에 상기 크림을 사용했을 때 유사한 결과가 얻어졌다. 환자들은 피부염의 가려움이 거의 즉시 완화되었다고 보고했다.
예 12 - "미가공" 분말을 사용하는 스트레스 부가 아르트로스피라의 항진균 활성
예 5는 건조 아르트로스피라의 상업적 조제품들이 추가 스트레스 부가 단계나 필라멘트 분열과 같은 수확-후 가공 단계를 필요로 하지 않고 다소간의 항진균 활성을 가질 가망이 있음을 확인하였다. 예 12는 이 발견을 더욱 입증한다.
아르트로스피라 맥시마의 건조 조제품은 상업적 재배자들로부터 입수하였다. 상기 조제품을 추가 처리 없이 일반 판매용 수성 크림과 12.5% w/w의 농도에서 혼합하고 T. 멘타그로파이트, T. 루브룸 및 M. 프룩티콜라에 대한 항진균 활성을 테스트하였다(예 5에서 설명한 바와 같음).
도 32에 나타난 것처럼, 상기 크림은 12시, 3시, 6시 및 9시 위치에 T. 멘타그로파이트에 대한 정화대를 생성시켰다.
도 33에 나타난 것처럼, 상기 크림은 6시 위치에 T. 루브룸에 대한 정화대를 생성시켰다.
도 34에 나타난 것처럼, 상기 크림은 6시 위치에 M. 프룩티콜라에 대한 정화대를 생성시켰다.
이러한 발견들은 살진균 활성을 가지는 아르트로스피라를 생산하기 위해 폭발성 감압, 건조 동결, 탈색 및 분쇄와 같은 수확-후 단계가 필요하지는 않음을 입증한다.
예 13 - 폭발성 감압을 실시하지 않은 아르트로스피라의 항진균 활성
본 예는 항진균 활성을 가지는 아르트로스피라를 생산하기 위해 폭발성 감압(약효 강화)의 수확-후 단계가 필요하지는 않음을 입증한다.
아르트로스피라 맥시마의 건조 조제품은 상업적 재배자로부터 입수하였다. 일례에서는, 뉴질랜드 특허번호 328013 및 328740에서 설명된 방법을 사용하여 건조 아르트로스피라를 폭발성 감압에 의해 분열(약효 강화)시켰다. 상기 아르트로스피라를 재수화, 탈색, 건조 및 분쇄하여 건조 "예비혼합 분말"을 만들었다. 그 후, 상기 예비혼합 분말을 적절한 캐리어(12.5%)에 현탁하였으며, 이는 "약효 강화 AMYCOT®"라고 불린다.
또 다른 일례에서는, 조제품에 대해 뉴질랜드 특허번호 328013 및 328740에서 설명된 폭발성 감압 방법을 배제하였고, 이 조제품은 "원 AMYCOT®"라고 불린다.
도 35에 나타난 것처럼, "원 AMYCOT®"와 "약효 강화 AMYCOT®"는 둘 다 알테르나리아 균류에 대해 12시와 7시 위치에 각각 거의 동일한 정화대를 생성시켰다. 따라서, 폭발성 감압은 항진균 활성을 가지는 아르트로스피라를 생산하기 위해 필요불가결한 수확-후 단계는 아니다.
나아가, 본 발명의 범위와 영역을 벗어나지 않고 상기 예시한 조성물, 사용 및 조제 방법에 대하여 다양한 변경이 가능하다는 것을 인식해야 한다.
본 명세서에서 사용된 "포함한다"는 표현과 "포함하는"이나 "포함하고" 등 그 다양한 변형 표현들은 문맥이나 용례에서 특히 배제의 의미가 요구되는 경우가 아닌 한, 언급된 사항들을 포괄한다는 표현이며, 그 외의 사항들을 배제한다는 표현이 아니다.
본 명세서에서 언급된 참조 문헌들에 대한 어떠한 참조도 그 개시 내용이 오스트레일리아에서 공지된 기술을 구성함에 대한 자인은 아니다.

Claims (45)

  1. (1) 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 아르트로스피라(Arthrospira)에 생리적 스트레스를 부가하는 단계; 및
    (2) 살생(biocidal)에 효과적인 양의 상기 (1)의 스트레스 부가(stressed) 아르트로스피라를 대상체(subject)에 대한 국소(topical) 투여에 적절한 캐리어(carrier), 용매, 베이스(base) 또는 첨가제와 결합하는 단계를 포함하고,
    상기 살생에 효과적인 양은 진균, 박테리아 또는 바이러스에 효과적인 것을 특징으로 하고 상기 아르트로스피라는 동결 건조되지 않는 것을 특징으로 하는, 대상체에 대한 국소적 사용을 위한 아르트로스피라-계 조성물을 조제하는 방법.
  2. 제1항의 방법에 의하여 조제되는 아르트로스피라-계 조성물.
  3. (1) 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 아르트로스피라에 생리적 스트레스를 부가하는 단계;
    (2) 오염 물질을 제거하기 위해 상기 스트레스 부가 아르트로스피라를 세척하는 단계;
    (3) 상기 세척된 아르트로스피라를 동결 건조가 아닌 건조를 수행하는 단계; 및
    (4) 살생(biocidal)에 효과적인 양의 상기 건조된 아르트로스피라를 대상체에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제와 결합하는 단계를 포함하고, 대상체에 진균, 박테리아 또는 바이러스에 대한 살생제로서 국소적 사용을 위한 아르트로스피라-계 조성물을 조제하는 방법.
  4. 제3항의 방법에 의하여 조제된 국소 아르트로스피라-계 조성물.
  5. 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 생리적 스트레스가 부가된, 살진균에 효과적인 양의 건조된 아르트로스피라와 대상체에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 포함하고, 상기 아르트로스피라는 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는 국소 살진균 조성물.
  6. 대상체의 국소적인 진균 감염 또는 침입을 방지 또는 치료를 위한 약제 조제시, 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 생리적 스트레스가 부가된, 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는, 살진균에 효과적인 양의 건조된 아르트로스피라와 대상체에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 사용하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 대상체는 인간, 동물, 농작물이나 원예작물, 토양, 또는 인공 구조물인 것을 특징으로 하는, 살진균에 효과적인 양의 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라와 대상체에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 사용하는 방법.
  8. (1) 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 아르트로스피라(Arthrospira)에 생리적 스트레스를 부가하는 단계; 및
    (2) 살진균에 효과적인 양의 상기 (1)의 아르트로스피라를 대상체에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제와 결합하는 단계를 포함하고, 상기 아르트로스피라는 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는, 국소 살진균 조성물을 조제하는 방법.
  9. 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 생리적 스트레스가 부가된, 살진균에 효과적인 양의 건조된 아르트로스피라와 적어도 하나의 정-진균제(fungi-static agent)의 상승작용적 결합물(synergistic combination)과 대상체에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 포함하고, 상기 아르트로스피라는 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는 국소 살진균 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 정-진균제는 테르비나핀(terbinafine), 비포나졸(bifonazole), 클로트리마졸(clotrimazole), 미코나졸(miconazole), 에코나졸(econazole), 케토코나졸(ketoconazole) 및 톨나프테이트(tolnaftate)로 구성되는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 국소 살진균 조성물.
  11. 대상체의 국소 진균 감염의 방지 또는 치료를 위한 약제의 조제시, 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 생리적 스트레스가 부가된, 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는, 살진균에 효과적인 양의 건조된 아르트로스피라와 적어도 하나의 정-진균제, 그리고 대상체에 국소 투여 적절한 캐리어, 용매, 베이스, 또는 첨가제를 사용하는 방법.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 정-진균제는 테르비나핀, 비포나졸, 클로트리마졸, 미코나졸, 에코나졸, 케토코나졸 및 톨나프테이트로 구성되는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 살진균에 효과적인 양의 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라와 적어도 하나의 정-진균제, 그리고 대상체에 국소 투여 적절한 캐리어, 용매, 베이스, 또는 첨가제를 사용하는 방법.
  13. (1) 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 아르트로스피라(Arthrospira)에 생리적 스트레스를 부가하는 단계; 및
    (2) 살진균에 효과적인 양의 상기 (1)의 아르트로스피라를 적어도 하나의 정-진균제 및 대상체에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제와 결합시키는 단계를 포함하고, 상기 아르트로스피라는 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는, 국소 살진균 조성물을 조제하는 방법.
  14. 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 생리적 스트레스가 부가된, 살박테리아에 효과적인 양의 건조된 아르트로스피라와 대상체에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 포함하고, 상기 아르트로스피라는 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는 국소 살박테리아 조성물.
  15. 대상체의 국소 박테리아 감염 또는 침투의 방지 또는 치료를 위한 약제 제조시, 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 생리적 스트레스가 부가된, 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는, 살박테리아에 효과적인 양의 건조된 아르트로스피라와 대상체에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 사용하는 방법.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 박테리아 감염은 프로피오니박테리움 애크니(Propionibacterium acne)에 의해 일어나는 것을 특징으로 하는, 살박테리아에 효과적인 양의 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라와 대상체에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 사용하는 방법.
  17. 제15항에 있어서,
    상기 대상체는 인간인 것을 특징으로 하는, 살박테리아에 효과적인 양의 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라와 대상체에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 사용하는 방법.
  18. 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 생리적 스트레스가 부가된, 효과적인 양의 건조된 아르트로스피라와 대상체에 국소 투여에 접합한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 포함하고, 상기 아르트로스피라는 동결 건조되지 않는 것을 특징으로 하는, 국소 항바이러스 조성물.
  19. 대상체의 국소 바이러스 감염의 방지와 치료를 위한 약제 제조시, 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 생리적 스트레스가 부가된, 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는, 효과적인 양의 건조된 아르트로스피라와 대상체의 국소 투여에 적합한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 사용하는 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 대상체는 인간인 것을 특징으로 하는, 효과적인 양의 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라와 대상체에 국소 투여에 적합한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 사용하는 방법.
  21. (1) 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 아르트로스피라(Arthrospira)에 생리적 스트레스를 부가하는 단계; 및
    (2) 효과적인 양의 상기 (1)의 아르트로스피라를 대상체에 국소 투여하기 적합한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 결합하는 단계를 포함하고, 상기 아르트로스피라는 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는, 국소 항바이러스 조성물을 조제하는 방법.
  22. (1) 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 아르트로스피라(Arthrospira)에 생리적 스트레스를 부가하는 단계; 및
    (2) 살박테리아에 효과적인 양의 상기 (1)의 아르트로스피라를 대상체에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제와 결합하는 단계를 포함하고, 상기 아르트로스피라는 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는, 국소 살박테리아 조성물을 조제하는 방법.
  23. 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 생리적 스트레스가 부가된, 살생에 효과적인 양의 건조된 아르트로스피라와 포유동물에 대한 국소 투여에 적합한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 포함하고, 상기 살생에 효과적인 양은 진균, 박테리아 또는 바이러스에 효과적이고, 상기 아르트로스피라는 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는, 포유동물의 피부 흠결을 치료(repairing) 또는 예방하는 국소 조성물.
  24. 포유동물의 피부의 흠결을 치료 또는 예방하는 약제 제조시, 살생에 효과적인 양은 진균, 박테리아 또는 바이러스에 효과적이고, 영양분 또는 빛을 부족하게 하거나, 탈수하거나, 아르트로스피라가 성장하는 액체를 최대 80% 제거함으로써 생리적 스트레스가 부가된, 살생에 효과적인 양의 건조된 아르트로스피라와 포유동물에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 사용하고, 상기 아르트로스피라는 동결 건조되지 않은 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제24항에 있어서,
    상기 피부의 흠결은 팬 자국(pit), 여드름 손상(acne damage), 딸기코(rosacea), 붉은 부위(reddened area), 갈라진 틈(crack), 화상(burn), 수포(blister), 건선(psoriasis), 습진(eczema), 스케일링(scaling), 주름(wrinkles), 뾰루지(papule), 구내염(stomatitis), 손상(lesion), 농포(pustule), 상처(wound), 두피 지루성 피부염(cradle cap), 기저귀 발진(diaper rash), 궤양(ulcer), 단순 포진(cold sore), 면도 발진(shaving rash), 수두(chicken pox), 피부염(dermatitis), 및 갈라진 뒤꿈치 및 팔꿈치로 구성되는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 살생에 효과적인 양의 생리적 스트레스 부가 아르트로스피라와 포유동물에 대한 국소 투여에 적절한 캐리어, 용매, 베이스 또는 첨가제를 사용하는 방법.
  26. 제1항에 있어서, 상기 아르트로스피라는 A. 맥시마(A. maxima)인 것을 특징으로 하는, 대상체에 국소적으로 사용하는 아르트로스피라-계 조성물을 조제하는 방법.
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