KR101319772B1

KR101319772B1 - 면역 억제제를 포함하는 안과용 유제

Info

Publication number: KR101319772B1
Application number: KR1020077006312A
Authority: KR
Inventors: 필립스베띠; 세브린느 바그; 로라 라비노비치-길라뜨; 그레고리 램버트
Original assignee: 노바갈리 파르마 에스 에이
Priority date: 2004-11-09
Filing date: 2005-10-10
Publication date: 2013-10-23
Also published as: EP1809238A2; CA2586074C; WO2006050837A3; EP1827373B1; EP1827373A2; KR101333923B1; EP1809237A2; AU2005304035A1; JP5008571B2; KR20070083573A; CA2586074A1; WO2006050838A3; EP1929996A2; AU2005304035B2; WO2006050837A2; CA2578176A1; EP1809238B1; EP1929996B1; EP1809237B1; JP2008518993A

Abstract

본 발명은 계면 막으로 둘러싸인 오일성 코어를 가지는 콜로이드 입자를 포함하는 안과용 유제에 관한 것으로, 상기 유제는 바람직하게는 시클로스포린, 시롤리무스, 및 타크롤리무스로 이루어진 그룹에서 선택되는 적어도 하나의 면역 억제제를, 오일 및 티록사폴을 포함하는 용액 내에 포함한다. 본 발명의 안과용 유제는 안질환, 특히 안구 건조증의 치료에 적합하다.

시클로스포린, 시클로스포린 A, 면역 억제제, 안과용 유제, 안구 건조증

Description

면역 억제제를 포함하는 안과용 유제 {Ophthalmic emulsions containing an immunosuppressive agent}

본 발명은 안과용 유제에 관한 것으로서, 오일 및 바람직하게는 타이록사폴(tyloxapol)을 포함하는 특정 용액에 면역 억제제를 활성 성분으로 포함하는 점안용 유제에 관한 것으로서, 본 발명의 안과용 유제는 안질환, 특히 안구 건조증의 치료에 적합하다.

본 발명에 있어서, 안구 건조증이라 함은, 안구의 건조 증상 및/또는 누액 결핍 증상에 관한 것을 말하며, 각막 표면으로부터 액체의 병리학적 증발과 관련된 증상, 눈물 막(tear film) 결함 또는 일반적으로는 눈물 생성이 불충분함으로써 야기되는 각막 건조증 또는 결막 건조증과 관련된 증상, 및 이러한 각종 증상으로부터 비롯되는 각막염, 각막 상피 상처와 같은 증상을 포함하며, 하지만, 반드시 이런 증상에만 국한되는 정의되는 것은 아니다. 예를 들어, 안구 건조증은 건성 각결막염 (Keratoconjunctivitis Sicca ; KCS), 아토피 각결막염 (atopic keratoconjunctivitis : AKC), 및 봄철각결막염 (Vernal Keratoconjunctivitis ; VKC)를 포함한다.

시클로스포린(Cyclosporines)은 면역 억제 용도 및 항 염증 용도와 같은 다양한 약학적 용도를 가진 광범위한 종류의 펩티드 화합물이다. 시클로스포린은 시클로스포린 A, 시클로스포린 B, 시클로스포린 C 및 시클로스포린 D를 포함한다. 가장 광범위하게 연구되는 시클로스포린은 시클로스포린 A 및 이의 유도체이다. 기타 일반적인 면역 억제제는 시롤리무스(Silolimus) 또는 타크롤리무스(Tacrolimus) 및 이들의 유도체이다.

시클로스포린 안과용 수중유 유제(oil-in-water emulsion)가 알려져 왔는데, 이들 중 레스타시스(Restasis : 시클로스포린 안과용 유제 0.05%)라는 상표명으로 앨러간사(Allergan)에 의해 상업화된 바 있다.

미국 특허 제4,839,342호는 시클로스포린의 면역성 건성 각결막염 (Keratoconjunctivitis Sicca ; KCS) 치료 용도 및 누액 결핍에 대해 눈물 생성을 증진시키는 방법을 특히 면역 매개성 눈물샘 기능 장애로 고통받는 환자의 치료를 위해 기재하고 있다. 상기 특허에 기술되어 있는 방법은 시클로스포린, 특히 시클로스포린 A를 올리브유, 캐스터유, 및 아라치스(Arachis)유 또는 광유(Mineral oil) 등의 약학 첨가물과 함께 투여하는 것을 포함하고 있다.

슈린 딩(Shulin Ding) 및 오레스트 올레야닉(Orest Olejnik)은 1997년 11월 3일 AAPA 연례회의에서 전단을 발표하였는 바, 이 문서는 시클로스포린 0.1 내지 0.4%를 사용한, 캐스터유 기재의 수중유 유제로서, 시클로스포린/오일의 중량비가 0.08인 유제에 관한 것이다. 이 문서는 오일 속의 시클로스포린 A의 농도가, 특정 오일 용액에서의 시클로스포린의 용해도(해당 오일 용액가 캐스터오일의 경우 10% w/w)보다 낮은 7.4% w/w의 수준으로 최적화되어 있다고 개시하고 있다.

WO 2005/032577은 0.1% 미만의 시클로스포린을 포함하고 시클로스포린/캐스터유의 중량비가 0.08 미만인 유제를 투여하는 것으로 이루어진 인간의 눈을 치료하는 방법에 대하여 기술하고 있다.

상기 인용된 이 특허출원서는 추가의 유류에 대해서 기술하고 있음에도 불구하고, 시클로스포린이 모든 오일 용액에서 동일한 거동을 가지는지에 대해서는 당해 기술에 숙련된 자에게 자명하지 아니한 바, 그 이유는 모든 오일이 같은 용해도를 가지고 있지 아니하며 특정 오일 용액에서의 시클로스포린의 생물학적 이용 가능성이 다른 오일 용액에서의 시클로스포린의 생물학적 이용 가능성에 대한 정보를 주고 있지 아니하기 때문이다.

유제는 두 가지의 비혼화성 액체 상으로 이루어진 계로서, 둘 중 하나의 액채상이 미세한 비말의 형태로 다른 액세 상에 분산되어 있고, 제3의 성분, 즉 유화제에 의해 안정되어 있는 계를 말한다. 유제는 본래 불안정하며, 유제의 초기 생성 및 장기간의 안정화를 위하여 유화제는 반드시 필요하다.

유제 내의 작은 비말의 크기에 따라, 서브마이크론 유제 또는 나노 유제는 투명하게 보일 수도 있으며, 입자의 브라운 운동이 침전 또는 크림화를 방지토록 하여, 안정화 증가에 기여한다.

유제의 불안정성은 크림화 (농도 상이), 오스트발트 조대현상 - Ostwalt ripening (비말 크기의 불균등), 응집 - flocculation (입자간 충돌에 의한 응집), 및 융합 - coalescence (비말의 융합)에 의하여 상 분리로 발현될 수 있다. 중요한 특징은 응집이 종종 가역적인 반면, 융합은 그렇지 않다. 비말의 융합 과정은 유제가 시간이 지남에 따라 거칠게 되는 일반적인 과정으로, 저장 기간에 따라 비말 평균 입자 크기가 증가하게 된다.

더 큰 응집물이 존재하면 할수록, 크림화는 더욱 빨리 촉진되어, 융합이 용이하게 된다. 이는 특히 서로 다른 크림화 비율이 비말의 충돌 비율을 증가시키게 되는 복잡분산계(polydisperse system)에 있어서는 명확하다. 그 결과, 유제의 비말 입자 크기의 분포율이 유제의 장기 안정성과 같은 물성을 결정한다.

따라서, 비말 입자 크기의 도수 분포가 일정형(monomodal)인 경우, 약물 투여 분량이 정확해야 하는 약학적 용도에 매우 중요한 잇점 외에도, 유제의 안정성의 증가의 잇점을 가지게 된다.

레스타시스(Restasis ®)와 같은 선행 기술의 제형이 현재로서는 치료제를 거의 구할 수 없는 증상을 치료하는데 유용함에도 불구하고, 상기 선행 기술의 제형의 생물학적 이용 가능성은 최적화되어 있지 않다고 알려져 있으며, 예를 들어, 레스타시스의 알려진 약점 중 하나는, 완전한 효과를 보기 위해 수 주일이 걸릴 수 있다는 것이다. 더욱이, 레스타시스와 같은 캐스터유 기재의 시클로스포린 유제는 이정형 비말 도수 분포를 나타내고 있다(Ding, abstract AAPS 1997). 이러한 제형은 기름 비말의 융합의 결과로서 저장 기간이 단축되는 것으로 생각된다.

따라서, 적어도 동일한 물리 화학적 안정성과 제약에 있어 개선된 생물학적 이용 가능성을 가진 유제로 안구 건조 증상을 치료하기 위한 대체 해결책의 요구는 계속 있어왔다. 본 발명에서는, 생물학적 이용 가능성은 투여 후 표적이 되는 눈 조직에서 검출되는 약의 백분율을 의미한다. 약의 검출은 약역학적으로 (시클로스포린에 대한 생물학적 반응의 정량화) 또는 약물 동태학적으로 (실제 약 농도의 정량화) 수행된다.

나아가, 안구 건조 증상으로 고통받는 환자는 매우 예민한 안구를 가지므로, 본 발명의 목적은 치료와 함께 편안함을 주는 것이다.

본 발명의 목적은, 이러한 물성을 가지는 안과용 유제를 제공하는 것이다. 따라서, 본 발명의 유제는 안정성과 생물학적 이용 가능성의 요구에 모두 부합될 수 있도록 할 수 있는 성분의 조합을 포함한다.

본 발명은 계면 막으로 둘러싸인 오일성 코어를 가지는 콜로이드 입자를 포함하는 안과용 유제에 관한 것으로, 상기 유제는 바람직하게는 시클로스포린, 시롤리무스, 및 타크롤리무스로 이루어진 그룹에서 선택되는 적어도 하나의 면역 억제제를, 오일 및 티록사폴을 포함하는 용액 내에 포함한다.

본 발명자는 MCT 오일, 그 중 식물성유를 사용하는 것이 시클로스포린 함유 안과용 유제에 뜻밖의 안정성과 생물학적 이용 가능성을 제공한다는 것을 알게 되었다. MCT유 역시 시클로스포린의 용해도를 높여, 본 발명의 유제(실시예 1 내지 6)에 있어 시클로스포린의 생물학적 이용 가능성을 증진시키는데 중요한 역할을 할 수 있다는 것을 알게 되었다. 본 발명의 태양에 따르면, MCT유의 함량은, 유제의 총 오일 함량의 중량 대비 적어도 50 중량 %이다. 바람직한 태양에 따르면, 유제의 오일 함량은 MCT유 100 %이다. 유리하게는 MCT유의 함량은 유제 대비 0.5 내지 4 중량 %, 바람직하게는 0.9 내지 3 중량 %, 더욱 바람직하게는 0.9 내지 2 중량 %이다.

본 발명의 바람직한 태양에 따르면, 티록사폴의 함량은 유제 대비 1 중량 % 미만, 바람직하게는 0.01 내지 0.6 중량 %이다.

더욱 놀랍게도, 본 발명자는 MCT유가 티록사폴과 결합되는 경우, 면역 억제제의 생물학적 이용 가능성의 측면에 더욱 좋은 결과를 제공한다는 것을 알게 되었다(실시예 7). 본 발명자는, 면역 억제제, 특히 시클로스포린, 시롤리무스 또는 타크롤리무스를 함유하는 본 발명에 따른 안과용 유제에 있어서 티록사폴과 MCT유의 시너지 효과를 증명하고 있다.

WO 2005/032577호는, 1.25 % 캐스터유 기재의 유제를 개시하는 바, 시클로스포린의 함량을 0.05 % 에서 0.1 %로 증가시키는 것은(CsA/Oil 비율이 0.04 에서 0.08로 증가됨), 안구 건조 증상을 치료하는데 전체적인 효과를 증진시키지 못한다. 이러한 교시와는 반대로, 본 발명자는 본 발명의 유제에 있어서, 면역 억제제의 유제 내 함량을 증가시키면, 표적 눈 조직에 전달되는 약물의 양이 증가됨을 알게 되었으며(실시예 8), 이는 본 발명의 유제가 면역 억제제/오일의 특정 비율에 한정되지 아니함을 의미한다. 따라서, 본 발명의 유제는 표적지에 전달되는 약물의 치료학적 함량을 증가시켜, 사용된 면역 억제제의 치료학적 수치를 증가시키는 것을 가능하게 할 수 있다.

본 발명의 한 태양에 따르면, 유제는 추가로 모든 적합한 기름성 성분을 함유할 수 있으며, 특히 올리브유, 대두유, 옥수수유, 광유, 면실유, 홍화유(safflower), 및 참깨유(sesame)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 기름을 함유할 수 있다. 본 발명의 바람직한 태양에 따르면, 유제는 캐스터유를 포함하지 아니한다.

본 발명의 첫 번째 태양에 따르면, 유제는 음이온계이다. 바람직한 태양에 따르면, 본 발명의 유제는

인지질;

콜산(cholic acid)과 콜산 유도체;

금속 카르복시메틸셀룰로스;

금속 카르복시메틸하이드록시에틸셀룰로스;

금속 카르복시메틸녹말;

금속 카르복시 메틸하이드록시에틸녹말;

폴리아크릴아미드와 폴리아크릴로니트릴 가수분해물;

헤파린;

글루코아미노클리칸;

히알루론산;

황산화 콘드로이친;

황산화 더마탄;

펩티드, 폴리펩티드 및 알긴산;

금속 알긴화물; 및

아크릴산과 메타크릴산/금속 아크릴레이트와 메티크릴레이트/비닐 술폰산/금속 비닐술포네이트/아스파르트산, 글루타민산 등과 같은 아미노산/아미노산의 금속염/p-스티렌술폰산/금속 p-스티렌술포네이트/2-메타크릴로일옥시에틸술폰산/금속 2-메타크릴로일옥시에틸술포네이트/3-메타크릴로일옥시-2-하이드록시프로필술폰산/금속 3-메타크릴로일옥시-2-하이드록시프로필술포네이트/2-아크릴아미도-2-메틸프로판술폰산/금속 2-아크릴아미도-2-메틸프로판술포네이트/금속 아릴술포네이트 등/으로부터 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 성분의 단일중합체 및 공중합체;

로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 성분을 포함한다.

본 발명의 두 번째 태양에 따르면, 유제는 양이온성이다. 본 양태에 있어서, 양이온화제의 농도는 0.001 및 0.1 중량 % 사이로 이루어지는 것이 바람직하며, 0.002 및 0.05 중량 % 사이가 더욱 바람직하며, 0.003 및 0.03 중량 %가 더더욱 바람직하다. 본 두 번째 태양이 특히 바람직한데, 그 이유는 유제의 양이온 전하는 유제에 포함된 시클로스포린의 생물학적 이용 가능성을 증진시킨다는 것이 밝혀졌기 때문이다. 본 발명에 따른 양이온화 시클로스포린 함유의 안과용 유제는 수중유 타입의 유제로서, 계면 필름으로 둘러싸인 기름성 코어를 가지는 콜로이드 입자를 포함하며, 상기 유제는 하나 이상의 양이온화제, 하나 이상의 비 이온성 장력 작용성을 포함하며, 상기 유제는 양성 제타 전위를 가진다. 바람직한 태양에 따르면, 본 발명의 양이온화 안과용 유제는 하기 기술된 제타 전위 안정성 테스트 A의 요구 조건을 충족한다.

테스트 A는 열 응력 조건 하에서 유제의 제타 전위의 안정성을 측정하는 것으로 이루어진다.

유제의 제타 전위는 T = 0 일 때, 즉 유제가 제조된 즉시 측정되는 바, 이 때 얻어지는 수치는 Z₀ 이다. 유제 5 내지 10ml를 포함하고 질소 대기하에 봉인된, 유효 용량이 10ml인 유리 바이알(Type I)을 80℃에 저장한다.

T = 7일에, 제타 전위 Z₇ _일을 측정한다.

T = 15일에, 제타 전위 Z₁₅ _일을 측정한다.

δA는 (Z₇ _일- Z₀) 또는 (Z₁₅ _일- Z₀)로 계산한다.

제타 전위의 각 측정법은, 다음과 같이 수행된다.

유제의 비말 계면의 제타 전위는, 적당한 소프트웨어가 장착되고 제공된 표준에 의해 캘리브레이팅된 Malvern Zetasizer 2000(Malvern Instruments, 영국)와 같은 장치에서 전기 영동 움직임을 측정하여 얻어진다.

최적의 입자 검출이 가능할 수 있는 산란 강도를 얻기 위해, 필요한 경우, 유제는 두 배의 증류수에 희석된다. 샘플 계수율은 호모다인 검출방식에서 100 내지 1000 KCps이어야 한다(만약 헤테로다인 검출방식을 사용한다면, 레퍼런스 빔의 기여를 추론하여야 한다). 세 번의 연속적인 측정을 150mV의 콘스탄트 셀 브라이브를 사용하여 25℃에서 수행한다. 전기 영동 움직임은, 유전상수 및 점도를 이용하여 Smoluychowsky 공식을 통해 제타 전위 수치로 변환된다. 얻어진 수치는 상기 3 개의 얻어진 수치의 평균에 대응한다.

만약 δA가 측정법의 표준 오차 미만, 바람직하게는 10mV 미만, 더욱 바람직하게는 5mV 미만이라면, 유제는 제타 전위 안정성 테스트 A를 만족하는 것으로 간주된다.

본 발명의 바람직한 태양에서는, 본 발명의 유제는 시클로스포린 A를 포함한다. 본 발명의 유제는, 0.01 내지 0.4 중량 %, 바람직하게는 0.05 내지 0.3 중량 %의 면역 억제제, 바람직하게는 시클로스포린, 더욱 바람직하게는 시클로스포린 A를 포함한다. 본 발명의 다른 태양에 따르면, 유제는 0.01 내지 0.3 중량 %, 바람직하게는 0.05 내지 0.2 중량 %의 타크로리무스를 포함한다. 본 발명의 또 다른 태양에 따르면, 유제는 0.01 내지 0.3 중량 %, 바람직하게는 0.05 내지 0.2 중량 %의 시롤리무스를 포함한다.

본 발명의 다른 태양에 있어서, 오일에 대한 면역 억제제의 중량비는 0.0125 내지 0.1이다. 본 발명의 특정 태양에 있어서, 오일에 대한 면역 억제제의 중량비는 0.083 내지 0.1이다. 본 발명의 또 다른 특정 태양에 있어서, 오일에 대한 면역 억제제의 중량비는 0.0125 내지 0.05이다. 바람직하게는, 본 발명의 유제는 서브마이크론성이며, 더욱 바람직한 태양에서는, 모노모달 서브마이크론성인 바, 즉, 본 발명의 콜로이드 입자가, 입자 크기면에서 균질하게 동일하며, 1 ㎛ 미만으로서, 0.2에 가까운 비말 크기 다분산 계수(PDI)를 가지며, 일반적으로는 0.1 내지 0.15이다. 다분산 계수의 계산은 ISO 표준서 13321 : 1996 E에 정의되어 있다.

바람직하게는, 본 발명의 유제의 콜로이드 입자의 크기는 바람직하게는 1 ㎛ 와 동일하거나 작으며, 더욱 바람직하게는 300 nm와 같거나 작고, 더더욱 바람직하게는 100 내지 250 nm 의 범위이다.

본 발명의 바람직한 태양에 따르면, 본 발명의 유제는 양이온성 서브마이크론 유제이며, 유제의 양성 제타 전위에 영향을 줄 정도의 충분한 양의 음성 전하를 발생시킬 만한 어떤 물질로 포함하고 있지 아니하다.

본 태양에서, 바람직하게는 유제는 인지질을 포함하지 아니한다.

본 발명은 시클로스포린, 바람직하게는 시클로스포린 A, 시롤리무스 또는 타크롤리무스로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 면역 억제제, MCT 및 티록사폴을 포함하는 유제를 제조하는 방법에 관한 것이기도 하며, 상기 제조 방법은 고압 균질화에 따른 전단 혼합의 단계를 포함한다.

.본 발명을 제조하거나 사용하는 베스트 모드는 하기의 실시예에 기재되어 있다. 이들 실시예는 본 발명을 제조하거나 사용하는 방법에 대한 지침과 가이드를 주기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위를 어떠한 방법으로든 제한하기 위한 의도는 가지지 아니한다.

하기의 실시예에서는, 다음과 같은 생략형이 사용된다.

MCT : medium chain triglycerides - 중쇄 중성 트리글리세라이드 (Societe des Oleagineux, 프랑스)

BAK : Benzalkonium chloride - 염화 벤즈알코늄

CsA : 시클로스포린 A

Cremophor : 크레모퍼 EL (BASF, 독일)

Lipoid E80 (Lipoid GMBH, 독일)

Lutrol : Lutrol F68 (BASF, 독일)

Pemulen TR-2 (Noveon, 미국)

Phospholipon 90G (Natterman, 독일)

실시예 1

본 발명의 유제의 제조

기름상 성분의 중량을 측정한 후, 투명한 약간의 점성상을 얻을 때까지 약한 온도에서 교반한다. 수성 상 성분의 중량을 측정한 후, 투명한 유체 상을 얻을 때까지 약한 온도에서 교반한다. 양 상을 가열하고, 수성 상을 기름상에 재빨리 첨가하고 75℃까지 재빨리 가열함으로써, 거칠은 유제를 얻는다. 예를 들어, POLYTRON PT 6100를 사용하여 고 전단 혼합을 하고 냉각시킴으로써 유제 비말 크기를 감소시킨다.

수 차례 연속적인 사이클을 통해, microfluidizer(C5, Avestin)와 같은 적합한 장치를 사용하여 고압 균질화함으로써 최종 유제가 얻어진다. 최종 유제는 우유상이며 매우 유동성이다. 유제 온도를 25℃까지 냉각시키고, 유제의 pH를 측정하고, 0.1M 염산 용액 또는 0.1M 수산화나트륨 용액을 사용하여 유제의 pH를 6.0, 7.0 및 8.0으로 조정한다. 121℃에서 20분간 오토클레이브에 의해 소독하거나, 0.22㎛ 필터를 통한 필터링에 의해 소독한다.

실시예 2

본 발명에 따른 유제의 특성 측정

유제 비말의 평균 입자 크기는, 예를 들어, Hign Performance Particle Sizer(Malvern Instruments, 영국)을 사용하여 물에 희석시킨 다음 준탄성 광 스캐터링에 의해 측정한다. 상기 장치는 다분산 지수 (multydispersity index)를 측정하는 경우에도 사용된다. 유제의 전기영동 움직임은 이차 증류수에 1:200으로 희석시킨 다음 Malvern Zetasizer 2000(Malvern Instruments, 영국)과 같은 적합한 장치를 사용하여 25℃에서 측정하며, Smoluchowski 공식에 의해 제타 전위로 변환된다.

유제 내의 CsA는 인증된 HPLC-UV법에 의해 측정된다.

실시예 3

CsA/기름/티록사폴을 포함하는 본 발명의 화합물

성분	EM 047	EM 048	EM 049	EM 050	EM 051	EM 052	EM 053
CsA	0.025	0.025	0.05	0.05	0.2	0.2	0.1
MCT	0.75	2	1	2	2	4	2
BAK	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
티록사폴	0.12	0.3	0.16	0.3	0.3	0.3	0.3
폴록사머	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
비타민 E	0.01	0.01	0.01	0.01	0.01	0.01	0.01
글리세린	2.25	2.25	2.25	2.25	2.25	2.25	2.25
정화수	충분량	충분량	충분량	충분량	충분량	충분량	충분량

실시예 4

본 발명에 따른 혼합물의 안정성

측정방법

유제의 안정성은, 오트클레이브 또는 필터화에 의해 소독한 후, 80℃하에서 가속 안정성 시험 중에, 오일 비말 크기, 제타 전위 및 CsA 함량 등과 같은 물리 화학적 계수를 측정함으로써 평가된다.

결과

성분		EM 047	EM 048	EM 049	EM 050	EM 051	EM 052	EM 053
유제비말크기 (nm)	T0	172	182	151	211	188	170	204
	T7	188	193	173	212	195	201	211
	T14	194	200	177	221	206	195	226
다분산 지수	T0	0.155	0.144	0.148	0.116	0.078	0.138	0.108
제타 전위(mV)	T0	20.9	19.6	25.0	17.9	20.1	28.4	23.5
	T7	18.9	19.6	24.7	20.3	21.9	24.5	23.2
	T14	16.9	19.4	19.2	18.5	19.0	23.0	ND
초기 대비 CsA 함량비(%)	T0	100.0	100.0	100.0	100.0	100.0	100.0	100.0
	T7	96.4	97.5	97.8	95.8	92.8	96.0	97.4
	T14	94.6	96.4	96.0	94.2	88.2	96.6	94.8

ND: 측정불가

결론

전단 혼합 단계 후 고압 균질화 단계를 포함하는 본 발명에 따른 제조 방법에 의해 제조된, MCT/티록사폴 기재의 CsA 유제는 후속의 과정에서 안정하며, 적어도 2주간 80℃하에서 안정하다.

실시예 5

비교예 - CsA/캐스터유를 포함하는 화합물

EMCIC 007		EMCIC 003		Restasis ®
성분	중량%(%w/w)	성분	중량%(%w/w)	성분	중량%(%w/w)
CsA	0.2	CsA	0.2	CsA	0.2
캐스터유	2.5	캐스터유	2.5	캐스터유	1.25
올레일아민	0.12	스테아릴아민	0.12	-	-
Phospholipon 90G	0.5	Lipoid E80	0.5	Polysorbate 80	1
Lutrol F68	0.42	Lutrol F68	0.42	Premulen TR-2	0.05
글리세린	2.25	글리세린	2.25	글리세린	2.2
정화수	충분량	정화수	충분량	정화수	충분량

실시예 6

Cas/캐스터유를 포함하는 유제의 안정성

측정방법

실시예 1 내지 4와 같다.

결과

유제		EMCIC 003	Restasis ?	EMCIC 007
유제 비말 크기 (nm)	T0	유제 상분리	279	유제 상분리
	T7	ND	514(56%)/2467(43%)	ND
	T14	ND	유제 상분리	ND
제타 전위 (mV)	T0	ND	-43.7	ND
	T7	ND	-41.6	ND
	T14	ND	ND	ND
초기 대비 CsA 함량비(%)	T0	ND	100.0	ND
	T7	ND	55.3	ND
	T14	ND	ND	ND

ND :측정불가

백분률(%)은 광 스캐터링에 의해 측정된 상대 개체수를 나타낸다.

결론

상기 기재된 균질화 기술에 의해 제조된 CsA의 캐스터유 유제는 이후 과정이나 80℃하에서 1주일 이후에는 안정하지 아니하였다.

실시예 7

약물 동태학적 계수에 의해 평가되는 본 발명의 유제의 효능

측정 방법

HYRNZ014 품종의 유색 가토(pigmented rabbit) 96 마리를 랜덤하게 48 마리씩의 2 개의 치료 군으로 나누고, 각 군은, 0.33 시간, 0.66 시간, 1 시간, 2 시간, 4 시간, 8 시간, 12 시간 및 24 시간의 시간 구분에 따라 6 마리씩 각 8개의 하위군으로 나눈다. 각 개체에 대하여, 상기 기술된 EM 050 또는 Restasis®(Allergan, 미국)를 오른쪽 눈에 단일 주입을 실시한다. 각각의 대응되는 시간 구분에서, 개체를 안락사시키고 결막을 채취한다. CsA 함량을 HPLC-MS법에 의해 측정한다.

결과

결론

본 발명에 따른 유제는 조직내 농도가 적어도 캐스터유 기재의 상용화된 유제인 Restasis®이상으로 높다.

실시예 8

약물 동태학적 계수에 의해 평가되는 유제의 효능에 대하여, 본 발명의 유제의 CsA/오일 비가 미치는 영향

측정 방법

HYRNZ014 품종의 유색 가토(pigmented rabbit) 144 마리를 랜덤하게 48 마리씩의 3 개의 치료 군으로 나누고, 각 군은, 0.33 시간, 0.66 시간, 1 시간, 2 시간, 4 시간, 8 시간, 12 시간 및 24 시간의 시간 구분에 따라 6 마리씩 각 8개의 하위군으로 나눈다. 각 개체에 대하여, 상기 기술된 EM 048, EM 050 또는 EM 053 (각각은 2% MCT 내 0.025, 0.05 및 0.1 중량 % CsA 유제)를 오른쪽 눈에 단일 주입을 실시한다. 각각의 대응되는 시간 구분에서, 개체를 안락사시키고 결막을 채취한다. CsA 함량을 HPLC-MS법에 의해 측정한다. 화합물에 대한 개체 노출을 나타내는 곡선 하 면적 (AUT)을 사다리꼴 공식으로 계산한다.

결과

결론

본 발명의 따른 유제는 CsA/MCT 비와 결막내 농도 사이에 직선형 배열을 보여주고 있다. 임상학적 효능은 CsA의 농도와 상호 관련이 있으므로, 본 특정 용액은 CsA의 양을 올려 치료 가치를 증진시키는데 기여를 할 수 있다.

실시예 9

본 연구의 목적은 본 발명에 따른 유제(전기 실시예에 기술된 EM 048 및 EM 053)에 대하여, 연속하여 28일 동안 백색 가토의 오른쪽 눈에 국소 주입한 후의 안 과적 내용도를 측정하는 것이다.

측정 방법

군당 10 마리(5 마리 수컷 및 5 마리의 암컷)의 뉴질랜드 백색 가토가 본 연구에 사용되었다. 연속하여 28일간 하루에 4회 50 ㎕씩 눈에 국소 주입하였다. 일반적 관용도(체중, 음식 및 물 섭취, 일반 증상, 임상적 증세, 혈액학 및 혈액 생화학), 안과적 관용도(검안경에 의한 관찰, 세극등 현미경 검사 및 안조직학) 및 검시(거시적 실험 및 주요 기관 중량)가 검사되었다. 통계학적 분석(MANOVA LSD 검사)이 개체의 몸체 및 기관 중량에 대해서, 음식과 물 섭취에 대해서, 그리고 혈액학적 및 생화학적 수치에 대하여 행하여졌다.,

결과

일반 행동 특성, 음식 섭취 및 물 섭취, 체중량, 기관 중량은 치료에 의하여 영향받지 아니하였다. 검시에 있어서도, 치료와 관련하여 주목할만한 소견도 없었다. 안과적 관찰 및 눈과 눈부속기에 대한 미시적 검사 결과, 어떠한 부정적 효과는 없었다. 눈의 반응은 약간의 결막 충혈이 있는 바, 이는 실험의 모든 개체에서 관찰되었으며, 안과용 제제를 반복 주입한 후 실험토에 일반적으로 관찰되는 것이다.

결론

본 발명에 따른 유제는 임상 국소 주입에 있어서도 잘 관용되었다.

Claims

계면 막으로 둘러싸인 오일성 코어를 가지는 콜로이드 입자를 포함하는 것을 특징으로 하며, 면역 억제제, 오일 및 티록사폴을 포함하며,

상기 면역억제제는 시클로스포린, 시롤리무스 및 타크롤리무스로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상이고, 상기 오일은 중쇄 중성 트리글리세라이드인 안과용 수중유 유제.
제 1항에 있어서, 국소 투여되는 것을 특징으로 하는 안과용 수중유 유제.
삭제
제 1항에 있어서, 상기 유제는 중쇄 중성 트리글리세라이드(medium chain triglyceride, MCT)를 유제 총 중량 대비 0.5 내지 4 %를 포함하는 안과용 수중유 유제.
삭제
제 1항에 있어서, 상기 시클로스포린은 시클로스포린 A이거나 시클로스포린 A를 포함하는 안과용 수중유 유제.
제 1항에 있어서, 상기 면역 억제제의 함량은 유제의 0.01 내지 4 중량 %인 안과용 수중유 유제.
제 1항에 있어서, 상기 티록사폴의 함량은 유제의 총 중량의 1% 미만인 안과용 수중유 유제.
제 1항에 있어서, 상기 유제는 올리브유, 대두유, 옥수수유, 광유, 면실유, 홍화유 및 참깨유로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 오일을 추가로 포함하는 안과용 수중유 유제.
제 1항에 있어서, 상기 유제는 음이온성인 안과용 수중유 유제.
제 1항에 있어서, 상기 유제는 양이온성인 안과용 수중유 유제.
제 11항에 있어서, 상기 유제는 0.001 내지 0.1 중량 %의 양이온화제를 더 포함하는 안과용 수중유 유제.
제 12항에 있어서, 상기 양이온화제는 염화 벤즈알코늄인 안과용 수중유 유제.
제 11항에 있어서, 하기 제타 전위 안정성 시험 A의 조건을 만족시키는 안과용 수중유 유제.

상기 유제가 제조된 즉시 제타 전위 Z₀를 측정하고, 유제 5 내지 10ml를 포함하고 버블링 없이 질소 대기 하에 유효 용량이 10ml인 유리 바이알(Type I)에 유제 5 내지 10ml를 봉인하고, 상기 봉인된 유리 바이알을 80℃에서 15시간 동안 저장하고, 상기 15시간 저장된 유제의 제타 전위 Z₁₅를 측정하고, 상기 제타 전위 Z₁₅와 상기 제타 전위 Z₀의 차이(Z₁₅-Z₀)인 δA 값을 결정하되,

상기 유제의 δA 값이 제타 전위 측정의 표준 오차보다 작아야 하는 제타 전위 안정성 시험 A 조건을 만족함.
제 1항에 있어서, 유제의 콜로이드 입자의 평균 입자 크기가 1 ㎛와 같거나 작고, 입자 크기의 도수 분포는 모노모달(monomodal)인 안과용 수중유 유제.
제 1항에 있어서, 유제의 콜로이드 입자의 평균 입자 크기는 1 ㎛와 같거나 작은 안과용 수중유 유제.
수상을 오일상에 첨가하는 단계, 및 후속으로 전단 혼합과 고압 균질화를 하는 단계를 포함함을 특징으로 하는, 면역 억제제, 오일 및 티록사폴을 포함하며,

상기 면역억제제는 시클로스포린, 시롤리무스 및 타크롤리무스로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상이고, 상기 오일은 중쇄 중성 트리글리세라이드인 안과용 수중유 유제를 제조하는 방법.
제 1항에 있어서, 안과용 증상을 치료하기 위한 안과용 수중유 유제.
제 18항에 있어서, 상기 안과용 증상은 건성각결막염(keratoconjunctiviti ssicca, KCS), 알레르기 건성각결막염(atopic keratoconjunctivitis ssica, AKC) 및 봄철 건성각결막염(vernal keratoconjunctivitis ssica, VKC) 중 선택된 어느 하나 이상인 안과용 수중유 유제.