KR101317748B1 - ＩｇＡ 신증의 예측 방법 및 ＩｇＡ 신증 환자의 선택 방법 - Google Patents
ＩｇＡ 신증의 예측 방법 및 ＩｇＡ 신증 환자의 선택 방법 Download PDFInfo
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뇨단백질 검사 및 뇨잠혈 검사 중 적어도 한쪽에 대하여 양성 판정을 받고 있는 피험자, 또는 IgA 신증으로 진단받은 환자의 편도 유래의 시료에 존재하는 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 검출함으로써, 피험자에 대하여 육체적인 부담을 주지 않고, 간편하고 신속하게, 또한 높은 확률로 IgA 신증인 것을 예측할 수 있다. 또한, 피험자에 대하여 육체적인 부담을 주지 않고, 간편하고 신속하게, IgA 신증의 치료에 있어서 편도 적출이 유효한 IgA 신증 환자를 높은 확률로 선택할 수 있다.
Description
본 발명은 IgA 신증(腎症)의 예측 방법 및 IgA 신증 환자의 선택 방법에 관한 것이며, 상세하게는, IgA 신증의 확정 진단 전에 높은 확률로 IgA 신증인 것을 예측할 수 있는 방법, 및 편도(扁桃) 적출이 유효한 IgA 신증 환자를 선택하는 방법에 관한 것이다.
IgA 신증은, 신장의 사구체 메산지움 영역에 IgA의 현저한 침착(沈着)을 인정하는 것을 특징으로 하는 만성 사구체 신염이다. IgA 신증은, 일본의 만성 사구체 신염의 대부분을 차지하여, 단일 신장 질환으로서는 가장 많으며, 그 중 15%∼30%는 예후 불량으로 신증으로 이행한다. 그러나, IgA 신증 질환의 원인은 아직 불분명하므로, 근본적인 치료법은 없다. IgA 신증의 확정 진단은, 신장의 일부를 생검(生檢)하고, 메산지움에 있어서의 IgA 면역 복합체의 침착을 면역학적 염색에 의해 확인하는 방법이므로, 환자에 대한 부담이 큰 문제점이 있다. 이에, 신장 생검을 실시하기 전에, 피험자에 대하여 육체적인 부담을 주지 않고, 간편하고 신속하게 실시할 수 있고, 또한 높은 확률로 IgA 신증인 것을 예측할 수 있는 방법의 개발이 요구되고 있다.
또한, IgA에는 IgA1와 IgA2의 2종류가 있으며, IgA1은, 상부 소화관, 기도, 편도에서 만들어지며, IgA2는 하부 소화관에서 만들어지는 것으로 알려져 있다. IgA 신증에 있어서 신장에 침착하고 있는 것은 IgA1인 것이므로, 최근, IgA 신증 환자의 편도를 적출하는 치료법이 행해지고 있다.
비특허 문헌 1에는, IgA 신증 환자 16명에 대하여 편도 적출을 행하고, 3년 후에 56.3%의 환자의 단백뇨가 관해(寬解)된 것이 보고되어 있다. 또한, 비특허 문헌 2에는, IgA 신증 환자 24명에 대하여 편도 적출을 행하고, 6개월 후에 41.7%, 2년 후에 50%의 환자의 단백뇨가 관해된 것이 보고되어 있다. 또한, 비특허 문헌 3에는, 편도 적출과 스테로이드 펄스 치료를 병용하는 것에 의해, 약 60%의 IgA 신증 환자에 있어서 뇨단백 및 뇨잠혈의 양쪽이 동시에 관해된 것이 보고되어 있다.
그러나, 약 40%의 IgA 신증 환자에 대해서는 편도 적출이 무효하며, 편도 적출의 유효성을 미리 예측할 수 없는 문제점이 있었다. 편도 적출에는 전신 마취를 수반한 수술이 필요하여, 육체적인 부담이 크므로, 편도 적출이 유효한 환자를 높은 확률로 선택하는 방법의 확립이 요구되고 있다.
Tokuda M et al. Acta Otolaryngol Suppl 523; 182-184, 1988.
Akagi H et al. Acta Otolaryngol Suppl 540; 64-66, 1999.
Hotta et al. Am J Kid Dis 38, pp736-743, 2001.
본 발명은, 피험자(被驗者)에 대하여 육체적인 부담을 주지않고, 간편하고 신속하게 실시할 수 있으며, 또한 높은 확률로 IgA 신증인 것을 예측할 수 있는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. 또한, 본 발명은, IgA 신증의 치료에 있어서 편도 적출이 유효한 IgA 신증 환자를 높은 확률로 선택하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은, 상기 과제를 해결하기 위하여, 이하의 발명을 포함한다.
[1] 피험자의 편도 유래의 시료에 존재하는 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 검출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 IgA 신증의 예측 방법.
[2] 상기 공정에 있어서, 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균에 특이적인 핵산을 검출하는 것을 특징으로 하는 상기 [1]에 기재된 IgA 신증의 예측 방법.
[3] 상기 공정에 있어서, 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체를 사용하는 것을 특징으로 하는 상기 [1]에 기재된 IgA 신증의 예측 방법.
[4] 트레포네마속 세균이, 트레포네마속 세균으로부터 추출한 토탈 RNA를 역전사(逆轉寫)하여 얻어지는 cDNA를 주형(鑄型)으로 하여, 서열 번호 1로 표시되는 염기 서열로 이루어지는 프라이머와, 서열 번호 2로 표시되는 염기 서열로 이루어지는 프라이머를 조합한 프라이머 세트를 사용하는 PCR에 의해 검출되는 세균으로부터 선택되는 1종 이상인 상기 [1]에 기재된 IgA 신증의 예측 방법.
[5] 트레포네마속 세균이, 트레포네마·덴티콜라(Treponema denticola), 트레포네마·빈센티(Treponema vincentii), 트레포네마·미디엄(Treponema medium), 트레포네마·소크란스키(Treponema socranskii), 트레포네마·파지데니스(Treponema phagedenis), 트레포네마·펙티노보럼(Treponema pectinovorum), 트레포네마·아밀로보럼(Treponema amylovorum), 트레포네마·말토필럼(Treponema maltophilum), 트레포네마·브리안티(Treponema bryantii), 트레포네마·팔리덤(treponema pallidum), 트레포네마·사카로필럼(Treponema saccharophilum) 및 스트레포네마·석시니페이시언스(Treponema succinifaciens)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 상기 [1]에 기재된 IgA 신증의 예측 방법.
[6]
캄필로박터속 세균이, 캄필로박터·렉터스(Campylobacter rectus), 캄필로박터·제주니(Campylobacter jejuni), 캄필로박터·콜리(Campylobacter coli), 캄필로박터·콘시서스(Campylobacter consisus), 캄필로박터·커버스(Campylobacter curvus), 캄필로박터·쇼와에(Campylobacter showae), 캄필로박터·무코살리스(Campylobacter mucosalis), 캄필로박터·피터스(Campylobacter fetus), 캄필로박터·히오인테스티날리스(Campylobacter hyointestinalis), 캄필로박터·스퍼터럼(Campylobacter sputorum), 캄필로박터·헬베티커스(Campylobacter helveticus), 캄필로박터·웁살리엔시스(Campylobacter upsaliensis) 및 캄필로박터·라리(Campylobacter lari)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 상기 [1]에 기재된 IgA 신증의 예측 방법.
[7] 피험자가, 뇨단백질 검사 및 뇨잠혈 검사 중 적어도 한쪽에 대하여 양성 판정을 받는 것을 특징으로 하는 상기 [1] ∼ [6] 중 어느 하나에 기재된 IgA 신증의 예측 방법.
[8] IgA 신증을 예측하기 위한 키트로서, 이하의 (a)∼(d) 중 적어도 1개이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
(a) 트레포네마속 세균을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트.
(b) 캄필로박터속 세균을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트.
(c) 트레포네마속 세균과 특이적으로 결합하는 항체.
(d) 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체.
[9] IgA 신증의 치료에 있어서 편도 적출을 행하는 것이 유효한 IgA 신증 환자를 선택하는 방법으로서, IgA 신증 환자의 편도 유래의 시료에 존재하는 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 검출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 IgA 신증 환자의 선택 방법.
[10] IgA 신증의 치료에 있어서 편도 적출 및 스테로이드 펄스 요법을 행하는 것이 유효한 IgA 신증 환자를 선택하는 방법으로서, IgA 신증 환자의 편도 유래의 시료에 존재하는 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 검출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 IgA 신증 환자의 선택 방법.
[11] 상기 공정에 있어서, 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균에 특이적인 핵산을 검출하는 것을 특징으로 하는 상기 [9] 또는 상기 [10]에 기재된 IgA 신증 환자의 선택 방법.
[12] 상기 공정에 있어서, 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체를 사용하는 것을 특징으로 하는 상기 [9] 또는 상기 [10]에 기재된 IgA 신증 환자의 선택 방법.
[13]
트레포네마속 세균이, 트레포네마속 세균으로부터 추출한 토탈 RNA를 역전사하여 얻어지는 cDNA를 주형으로 하여, 서열 번호 1로 표시되는 염기 서열로 이루어지는 프라이머와, 서열 번호 2로 표시되는 염기 서열로 이루어지는 프라이머를 조합한 프라이머 세트를 사용하는 PCR에 의해 검출되는 세균으로부터 선택되는 1종 이상인 상기 [9] 또는 상기 [10]에 기재된 IgA 신증 환자의 선택 방법.
[14] 트레포네마속 세균이, 트레포네마·덴티콜라, 트레포네마·빈센티, 트레포네마·미디엄, 트레포네마·소크란스키, 트레포네마·파지데니스, 트레포네마·펙티노보럼, 트레포네마·아밀로보럼, 트레포네마·말토필럼, 트레포네마·브리안티, 트레포네마·팔리덤, 트레포네마·사카로필럼 및 트레포네마·석시니페이시언스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 상기 [9] 또는 [10]에 기재된 IgA 신증 환자의 선택 방법.
[15]
캄필로박터속 세균이, 캄필로박터·렉터스, 캄필로박터·제주니, 캄필로박터·콜리, 캄필로박터·콘시서스, 캄필로박터·커버스, 캄필로박터·쇼와에, 캄필로박터·무코살리스, 캄필로박터·피터스, 캄필로박터·히오인테스티날리스, 캄필로박터·스퍼터럼, 캄필로박터·헬베티커스, 캄필로박터·웁살리엔시스 및 캄필로박터·라리로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 상기 [9] 또는 [10]에 기재된 IgA 신증 환자의 선택 방법.
[16] IgA 신증의 치료에 있어서 편도 적출을 행하는 것이 유효한 IgA 신증 환자를 선택하기 위한 키트로서, 이하의 (a)∼(d) 중 적어도 1개 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
(a) 트레포네마속 세균을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트.
(b) 캄필로박터속 세균을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트.
(c) 트레포네마속 세균과 특이적으로 결합하는 항체.
(d) 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체.
본 발명에 의하면, 피험자가 IgA 신증인지의 여부를, 피험자에게 육체적인 부담을 주지 않고, 간편하고 신속하게, 또한 높은 확률로 예측할 수 있다. 또한, 본 발명에 의하면, IgA 신증의 치료에 있어서 편도 적출이 유효한 IgA 신증 환자를, 환자에게 육체적인 부담을 주지않고, 간편하고 신속하게, 또한 높은 확률로 선택할 수 있다.
도 1은 DGGE법에 의해 편도 세균총(細菌叢)을 망라하여 해석한 결과를 나타내는 전기 영동상(電氣泳動像)이다.
도 2는 적출 편도 중의 트레포네마속 세균을 RT-PCR법에 의해 검출한 결과를 나타내는 전기 영동상이다.
도 3은 적출 편도 중의 캄필로박터·렉터스를 RT-PCR법에 의해 검출한 결과를 나타내는 전기 영동상이다.
도 4의 (A)는 편도에 있어서의 트레포네마속 세균의 유무와 편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법의 치료 효과를 나타낸 도면이다.
도 4의 (B)는 편도에 있어서의 헤모필루스속 세균의 유무와 편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법의 치료 효과를 나타낸 도면이다.
도 4의 (C)는 편도에 있어서의 캄필로박터속 세균의 유무와 편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법의 치료 효과를 나타낸 도면이다.
도 2는 적출 편도 중의 트레포네마속 세균을 RT-PCR법에 의해 검출한 결과를 나타내는 전기 영동상이다.
도 3은 적출 편도 중의 캄필로박터·렉터스를 RT-PCR법에 의해 검출한 결과를 나타내는 전기 영동상이다.
도 4의 (A)는 편도에 있어서의 트레포네마속 세균의 유무와 편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법의 치료 효과를 나타낸 도면이다.
도 4의 (B)는 편도에 있어서의 헤모필루스속 세균의 유무와 편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법의 치료 효과를 나타낸 도면이다.
도 4의 (C)는 편도에 있어서의 캄필로박터속 세균의 유무와 편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법의 치료 효과를 나타낸 도면이다.
본 발명자들은, 신장 생검에 의해 IgA 신증으로 진단된 환자 및 만성 편도염 환자로부터 적출(摘出)된 편도에 있어서의 세균총을 망라하여 해석한 결과, IgA 신증 환자와 만성 편도염 환자와의 사이에서 편도 세균총이 상이한 것을 발견하여, IgA 신증 환자는, 트레포네마속 세균, 헤모필루스속 세균, 캄필로박터속 세균이 존재할 확률이 높은 것을 발견하였다. 이 지견(知見)으로부터, 편도에 트레포네마속 세균, 헤모필루스속 세균, 캄필로박터속 세균 중 어느 하나가 존재하면 IgA 신증인 확률이 높은 것이 밝혀졌다. 이들 중, 헤모필루스속 세균에 대해서는 본원 출원 전에 IgA 신증과의 관련이 시사되고 있었지만, IgA 신증 환자의 편도에 있어서, 트레포네마속 세균 및 캄필로박터속 세균의 양성율이 높은 것은, 본 발명자들이 처음으로 발견한 것이다.
또한, 본 발명자들은, IgA 신증 환자 중 편도에 있어서 트레포네마속 세균이 검출된 환자, 또는 캄필로박터속 세균이 검출된 환자에 대하여 편도 적출 요법을 행하는 것이 매우 유효한 것을 발견하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 본 발명은 IgA 신증의 예측 방법이며, 피험자의 편도 유래의 시료에 존재하는 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 검출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하고 있다. 또한, 본 발명은, IgA 신증의 치료에 있어서 편도 적출을 행하는 것, 또는 편도 적출 및 스테로이드 펄스 요법을 행하는 것이 유효한 IgA 신증 환자의 선택 방법이며, IgA 신증 환자의 편도 유래의 시료에 존재하는 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 검출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하고 있다.
본 발명의 IgA 신증의 예측 방법의 대상이 되는 피험자는 특별히 한정되지 않지만, IgA 신증의 발증(發症)이 의심되는 사람인 것이 바람직하다. IgA 신증의 발증이 의심되는 사람으로서는, 뇨단백질 검사 및 뇨잠혈 검사 중 적어도 한쪽에 대하여 양성 판정을 받은 사람을 예로 들 수 있다. 보다 구체적으로는, 예를 들면, 학교 건강 진단, 회사 건강 진단 등의 건강 진단 시나 외래 진찰 시 등에 실시되는 소변 검사에 의해, 단백뇨 및 혈뇨가 지적되어 재검사에서도 소변 검사 이상(異常)이 지속되는 사람이다. IgA 신증에서는 단백뇨와 혈뇨의 양쪽을 수반하는 경우가 많지만, 혈뇨만을 나타내는 경우도 있으므로, 어느 한쪽의 양성이 지속되는 사람을 피험자로 하는 것이 바람직하다. 뇨단백질 양성(단백뇨)의 판정 및 뇨잠혈 양성(혈뇨)의 판정은, 예를 들면, 일반적인 소변 검사에 사용되는 공지의 소변 검사용 리트머스지를 사용함으로써 행할 수 있다.
종래는, IgA 신증의 발증이 의심될 경우, 신장 생검을 행하여 조직학적 검사를 행하지 않으면 진단할 수 없었기 때문에, 결과적으로 IgA 신증이 아니라고 진단된 피험자는, 불필요한 육체적 부담을 받게 된다. 본 발명의 IgA 신증의 예측 방법을 사용하면, IgA 신증 발증의 확률이 높은 피험자 만에 대하여 신장 생검을 행할 수 있고, 불필요한 육체적 부담을 회피할 수 있게 된다.
본 발명의 IgA 신증 환자의 선택 방법의 대상이 되는 IgA 신증 환자는 한정되지 않는다. 바람직하게는, 과거에 편도 적출 방법을 행하지 않았던 IgA 신증 환자이다.
종래, 약 40%의 IgA 신증 환자에게는 편도 적출이 무효였지만, 본 발명의 IgA 신증 환자의 선택 방법을 사용하면, 편도 적출이 유효한 확률이 높은 환자 만에 대하여 편도 적출을 행할 수 있으므로, 불필요한 육체적 부담 및 경제적 부담을 회피할 수 있게 된다.
이하, 본 발명의 IgA 신증의 예측 방법과 본 발명의 IgA 신증 환자의 선택 방법을 합쳐서 「본 발명의 방법」이라고 칭하며, 양쪽 방법에 공통되는 항목에 대하여 상세하게 설명한다.
본 발명의 방법에 있어서, 검출 대상이 되는 트레포네마속 세균은 특별히 한정되지 않고, 편도에 존재할 수 있는 트레포네마속 세균은 모두 검출 대상이 된다. 이와 같은 트레포네마속 세균으로서는, 예를 들면, 트레포네마속 세균으로부터 추출한 토탈 RNA를 역전사하여 얻어지는 cDNA를 주형으로 하여, 포워드 프라이머(TTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAAC, 서열 번호 1)와 리버스 프라이머(GTCRYMGGCAGTTCCGCCWGAGTC, 서열 번호 2)로 이루어지는 프라이머 세트를 사용하는 PCR에 의해 검출되는 세균이 있다. 여기서, 염기 기호의 R은 구아닌(G) 또는 아데닌(A)을 나타내고, Y는 티민(T) 또는 시토신(C)을 나타내고, M은 아데닌(A) 또는 시토신(C)을 나타내고, W는 아데닌(A) 또는 티민(T)을 나타낸다.
구체적으로는, 예를 들면, 트레포네마·덴티콜라(Treponema denticola), 트레포네마·빈센티(Treponema vincentii), 트레포네마·미디엄(Treponema medium), 트레포네마·소크란스키(Treponema socranskii), 트레포네마·파지데니스(Treponema phagedenis), 트레포네마·펙티노보럼(Treponema pectinovorum), 트레포네마·아밀로보럼(Treponema amylovorum), 트레포네마·말포필럼(Treponema maltophilum), 트레포네마·브리안티(Treponema bryantii), 트레포네마·팔리덤(Treponema pallidum), 트레포네마·사카로필럼(Treponema saccharophilum), 트레포네마·석시니페이시언스(Treponema succinifaciens) 등이 있다.
본 발명의 방법에 있어서, 검출 대상이 되는 캄필로박터속 세균은 특별히 한정되지 않고, 편도에 존재할 수 있는 캄필로박터속 세균은 모두 검출 대상이 된다. 이와 같은 캄필로박터속 세균으로서는, 예를 들면, 캄필로박터·렉터스(Campylobacter rectus), 캄필로박터·제주니(Campylobacter jejuni), 캄필로박터·콜리(Campylobacter coli), 캄필로박터·콘시서스(Campylobacter concisus), 캄필로박터·커버스(Campylobacter curvus), 캄필로박터·쇼와에(Campylobacter showae), 캄필로박터·무코살리스(Campylobacter mucosalis), 캄필로박터·피터스(Campylobacter fetus), 캄필로박터·히오인테스티날리스(Campylobacter hyointestinalis), 캄필로박터·스퍼터럼(Campylobacter sputorum), 캄필로박터·헬벡티커스(Campylobacter helveticus), 캄필로박터·웁살리엔시스(Campylobacter upsaliensis), 캄필로박터·라리(Campylobacter lari) 등이 있다. 그 중에서도, 캄필로박터·렉터스가 바람직하다.
본 발명의 방법에 제공되는 시료는, 피험자 또는 환자의 편도 유래의 시료이면 된다. 예를 들면, 편도 조직, 편도를 닦은 액 등으로 조제(調製)한 DNA, RNA, 세포 현탁액, 세포 파쇄액 등이 있다. 이들 시료는, 모두 당업자에게 있어서 주지의 방법으로 조제할 수 있다.
트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 검출하는 방법은, 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 특이적으로 검출할 수 있는 방법이면 특별히 한정되지 않는다. 예를 들면, 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균에 특이적인 핵산을 검출하는 방법, 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체를 사용하는 방법 등이 있다.
상기 핵산을 검출하는 방법에서의 핵산은 DNA일 수도 있고 RNA일 수도 있다. 본 발명에는, 공지의 핵산 검출 방법을 바람직하게 사용할 수 있다. 구체적으로는, 예를 들면, PCR법, 서던블로팅법, 노던블로팅법, RT-PCR법, in Situ 하이브리다이제이션법, in Situ PCR법, DNA 어레이법 등이 있다. 그 중에서도, 검출 감도, 조작의 간편함, 신속성, 저비용성의 관점에서, RT-PCR법을 사용하는 것이 바람직하다. RT-PCR법을 사용하여 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 검출할 경우, 시료에는, 편도 조직, 편도를 닦은 액 등으로 조제한 토탈 RNA가 사용된다. 토탈 RNA는, 공지의 방법으로 조제할 수 있다.
RT-PCR법은, 당업자에게 있어서 주지의 방법으로 실시할 수 있다. 예를 들면, 편도 조직, 편도를 닦은 액 등으로 조제한 토탈 RNA로부터, 역전사 효소를 사용하여 cDNA를 합성하고, 이 cDNA를 주형으로 하여 검출 대상 세균 유래의 DNA 단편을 특이적으로 증폭하는 프라이머 세트를 사용하여 PCR을 행하는 방법이 있다. 검출 대상 세균 유래의 DNA 단편을 특이적으로 증폭하는 프라이머 세트는 특별히 한정되지 않으며, 공지의 데이터베이스(예를 들면, GenBank 등)로부터 검출 대상 세균의 게놈 서열 정보나 리보조말 RNA의 배열 정보를 취득하여, 공지의 방법에 의해 프라이머를 설계하면 된다. 이하에, 본 발명의 방법으로 바람직하게 사용할 수 있는 프라이머 세트를 예시하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.
트레포네마속에 세균을 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: TTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAAC(서열 번호 1)
리버스 프라이머: GTCRYMGGCAGTTCCGCCWGAGTC(서열 번호 2)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 657bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(J Clin Microbiol, 2002. 40(9): p.3334-40.).
트레포네마·덴티콜라를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: TAATACCGAATGTGCTCATTTACAT(서열 번호 3)
리버스 프라이머: CTGCCATATCTCTATGTCATTGCTCTT(서열 번호 4)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 860bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(J Clin Microbiol, 2002. 40(9): p.3334-40.).
트레포네마·빈센티를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: GTCTCAATGGTTCATAAGAA(서열 번호 5)
리버스 프라이머: CAAGCCTTATCTCTAAGACT(서열 번호 6)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 851bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(J Clin Microbiol, 2002. 40(9): p.3334-40.).
트레포네마·미디엄을 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: CACTCAGTGCTTCATAAGGG(서열 번호 7)
리버스 프라이머: CCGGCCTTATCTCTAAGACC(서열 번호 8)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 851bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(J Clin Microbiol, 2002. 40(9): p.3334-40.).
캄필로박터·렉터스를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: TTTCGGAGCGTAAACTCCTTTTC(서열 번호 9)
리버스 프라이머: TTTCTGCAAGCAGACACTCTT(서열 번호 10)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 598bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Archives of Oral Biology, 2006. 51: p.10-14.).
캄필로박터·제주니를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: AGAATGGGTTTAACTCGTGTGATAAGT(서열 번호 11)
리버스 프라이머: TACCACGCAAAGGCAGTATAGCT(서열 번호 12)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 493bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Appl Environ Microbiol, 2008. 74(8): p.2529-33.).
캄필로박터·콜리를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: AAATGCTAGTGCTAGGGAAAAAGACTCT(서열 번호 13)
리버스 프라이머: TGAGGTTCAGGCACTTTTACACTTACTAC(서열 번호 14)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 96bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Appl Environ Microbiol, 2008. 74(8): p.2529-33.).
캄필로박터·콘시서스를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: AGCGGGCCTAACAAGAGTTATTACA(서열 번호 15)
리버스 프라이머: TGTAAGCACGTCAAAAACCATCTTT(서열 번호 16)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 217bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Appl Environ Microbiol, 2008. 74(8): p.2529-33.).
캄필로박터·커버스를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: CTGCCAAAGTAAGGACGCAAGTATA(서열 번호 17)
리버스 프라이머: GGCAAGATCGCCTGAAATACG(서열 번호 18)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 108bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Appl Environ Microbiol, 2008. 74(8): p.2529-33.).
캄필로박터·쇼와에를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: AGGGTTTAAGCATAGGAACGCTG(서열 번호 19)
리버스 프라이머: CACCAGATAAAGCTCGCTGATCG(서열 번호 20)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 86bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Appl Environ Microbiol, 2008. 74(8): p.2529-33.).
캄필로박터·무코살리스를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: TGCGATTATGAACAAGGCCCTA(서열 번호 21)
리버스 프라이머: TCGCTTGAAACACACGGTCA(서열 번호 22)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 224bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Appl Environ Microbiol, 2008. 74(8): p.2529-33.).
캄필로박터·피터스를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: AGAGCTGGGCTTACAAGAGCTATTACA(서열 번호 23)
리버스 프라이머: GGTAAAATCGCTTGAAACGCTCTAT(서열 번호 24)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 482 bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Appl Environ Microbiol, 2008. 74(8): p.2529-33.).
캄필로박터·히오인테스티날리스를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: CGGTCAAAAGATGACTTTTGAAGTACTT(서열 번호 25)
리버스 프라이머: GCTTCCCTGCCACGAGCT(서열 번호 26)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 108bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Appl Environ Microbiol, 2008. 74(8): p.2529-33.).
캄필로박터·스퍼터럼을 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: AGCTTTACTTGCTGCAAGAGGAAGA(서열 번호 27)
리버스 프라이머: AGGAAGCGTTCCAACAGAAAAGTT(서열 번호 28)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 94bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Appl Environ Microbiol, 2008. 74(8): p.2529-33.).
캄필로박터·헬베티커스를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: CAATAACATACGCACACCAGATGGA(서열 번호 29)
리버스 프라이머: CAGGCACTTTAACGCTCACTATGG(서열 번호 30)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 176bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Appl Environ Microbiol, 2008. 74(8): p.2529-33.).
캄필로박터·웁살리엔시스를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: GCTTACGCGTGTAATTACAAACTATGTC(서열 번호 31)
리버스 프라이머: AATTGCCTTAGCCTCGATAGGG(서열 번호 32)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 250bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Appl Environ Microbiol, 2008. 74(8): p.2529-33.).
캄필로박터·라리를 특이적으로 검출 가능한 프라이머 세트로서,
포워드 프라이머: CTATGTTCGTCCTATAGTTTCTAAGGCTTC(서열 번호 33)
리버스 프라이머: CCAGCACTATCACCCTCAACTAAATAA(서열 번호 34)
의 세트를 예로 들 수 있다. 상기 프라이머 세트를 사용함으로써, 250bp의 DNA 단편이 증폭되는 것으로 기대된다(Appl Environ Microbiol, 2008. 74(8): p.2529-33.).
트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체를 사용하는 방법에 있어서의 항체는, 트레포네마속 세균을 검출하는 경우에는 트레포네마속 세균과 특이적으로 결합하는 항체이면 되고, 캄필로박터속 세균을 검출하는 경우에는 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체이면 된다. 항체는 폴리클로날 항체일 수도 있고 단일 클론 항체일 수도 있다. 또한, 완전한 항체 분자일 수도 있으며 특이적으로 결합할 수 있는 항체 프라그먼트(예를 들면, Fab 프라그먼트, F(ab')2 프라그먼트 등)일 수도 있다. 트레포네마속 세균과 특이적으로 결합하는 항체(폴리클로날 항체, 단일 클론 항체, 항체 프라그먼트) 및 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체(폴리클로날 항체, 단일 클론 항체, 항체 프라그먼트)는, 검출 대상 세균의 구성 성분을 면역원으로서 사용함으로써, 공지의 방법으로 제조하여, 취득할 수 있다.
트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체를 사용하는 방법으로서는, 예를 들면, 효소 면역 측정법(EIA법), 고상(固狀) 효소 면역 검정법(ELISA법), 방사 면역 측정법(RIA법), 웨스턴블로팅법, 면역 침강법, 면역 조직 화학법, 항체 어레이법 등이 있다. 그 중에서도, 검출 감도, 조작의 간편성, 신속성, 저비용성의 관점에서, ELISA법을 사용하는 것이 바람직하다. ELISA법을 사용하여 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 검출하는 경우, 시료에는, 편도 조직, 편도를 닦은 액 등으로 조제한 세포 현탁액이나 세포 파쇄액 등이 바람직하게 사용된다.
ELISA법은, 당업자에게 있어서 주지의 방법으로 실시할 수 있다. 예를 들면, 검출 대상의 세균과 특이적으로 결합하는 1차 항체를 마이크로 플레이트의 웰이나 플라스틱 튜브 등의 고상에 결합시키고, 여기에 편도 유래의 시료(세포 현탁액이나 세포 파쇄액 등)를 첨가하고, 세정한 후, 효소 표지한 2차 항체를 첨가한다. 그리고, 미결합 2차 항체를 세정하여, 제거한 후, 발색 기질(基質)을 첨가하여 생성한 발색 물질의 양을 분광 광도계로 흡광도를 측정하는 방법이 있다.
본 발명의 방법은, 키트를 사용함으로써 간편하고 신속하게 실시할 수 있다. 따라서, 본 발명은, IgA 신증을 예측하기 위한 시약 키트, 및 편도 적출이 유효한 IgA 신증 환자를 선택하기 위한 시약 키트(이하, 양쪽 키트를 합하여 「본 발명의 키트」라고 칭함)를 제공한다.
본 발명의 키트의 일실시형태로서 트레포네마속 세균을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트 및 캄필로박터속 세균을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트로부터 선택되는 적어도 1종 이상의 프라이머 세트를 구비하는 RT-PCR용 키트를 제공할 수 있다. 프라이머 세트 이외의 키트의 구성품은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 조직 또는 세포로부터 RNA를 조제하기 위한 시약, 역전사 효소, 역전사 반응에 사용하는 완충액, 내열성 DNA 폴리머라제, PCR용 시약, PCR용 튜브, PCR용 플레이트 등을 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명의 키트의 다른 실시형태로서, 트레포네마속 세균과 특이적으로 결합하는 항체 및 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체로부터 선택되는 적어도 1종 이상의 항체를 구비하는 ELISA용 키트를 제공할 수 있다. 항체 이외의 키트의 구성품은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 표지된 2차 항체, 발색용 시약, 세정용 완충액, ELISA용 플레이트 등을 포함하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 키트의 다른 실시형태로서, DNA 어레이를 구비하는 키트, 항체 어레이를 구비하는 키트 등을 예로 들 수 있다.
[실시예]
이하, 실시예에 의해 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들로 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1: IgA 신증 환자에 있어서의 편도 세균총의 검토]
(1) 환자의 등록
오사카 대학 의학부 부속 병원에 입원하고 있고, 신장 생검에 의해 IgA 신증으로 진단된 환자 68명과, 만성 편도염으로 편도 적출을 행한 28명에 대하여, 서면 상으로 동의서를 얻어, 편도 적출 시의 편도 샘플을 얻었다. 편도는 적출 후, 즉시 Trizol(invitrogen)을 사용하여 RNA 추출을 행하여, RNA로서 보존하였다. IgA 신증의 환자 편도의 검토에 대해서는 오사카 대학 의학부 부속 병원 윤리 위원회의 허가를 얻어 실시하였다.
(2) DGGE(Denaturing Gradient Gel Electroforesis) 법에 따른 편도 세균총의 망라적 해석
IgA 신증의 환자 및 만성 편도염 환자의 편도로부터 얻은 RNA를 역전사하여, 얻어진 cDNA를 주형으로 하여, 세균의 16S 리보조말 RNA의 V6·V8 영역에 대한 PCR 프라이머 세트인 universal bacterial primers 954f(CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGGCCCGCCGCCCCCGCCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGG, 서열 번호 35)와 1369r(GCCCGGGAACGTATTCACCG, 서열 번호 36)을 사용하여, PCR을 행하였다(참고 문헌: Yu, Z. and M. Morrison, Comparisons of different hypervariable regions of rrs genes for use in fingerprinting of microbial communities by PCR-denaturing gradient gel electrophoresis. Appl Environ Microbiol, 2004. 70(8): p.4800-6.). 각 PCR 반응액은 100ng의 DNA, 10pmol의 각각의 프라이머, 0.16mM의 데옥시뉴클레오티드 삼인산, 5μL의 10×Blend Taq buffer(도요보), 및 1.25U의 Blend Taq polymerase(도요보)를 함유하고, 증류수로 최종 용량을 50μL로 만들었다. PCR의 조건은 1회째에, 95℃로 4분간의 융해, 95℃로 30초간의 변성, 61℃로 30초간의 어닐링, 및 72℃로 1분간의 신장(伸長)을 행한 후, 0.5℃씩 어닐링 온도를 내리면서, 95℃로 4분간 융해, 95℃로 30초간의 변성, 사이클마다의 온도로 30초간의 어닐링, 및 72℃로 1분간의 신장으로 10 사이클을 행하였다. 또한, 56℃의 익스텐션(extension)을 사용하여 25 사이클 행하고, 마지막으로 72℃로 2시간의 신장을 행하였다.
PCR 산물을 DCode universal mutation detection System(Bio-Rad laboratories)을 사용하여 82V, 60℃로 15시간의 전기 영동을 행하였다. 전기 영동용 겔은, 아크릴아미드/비스 30% 용액 29:1(Bio-Rad laboratories Cat_No.161-0156)을 사용하여 제조하였다. 마커에는, DGGE Marker II(10 fragments)(가부시키가이샤니폰진사 Cat_No.315-06404)를 사용하였다. 전기 영동 후의 겔을 SYBR Green I(Lonza, Rockland, ME USA)으로 염색 후, 겔 촬영 장치 GelDoc XR(Bio-Rad laboratories)를 사용하여, 샘플마다의 밴드의 위치와 강도(밴드의 진한 정도)의 데이터를 얻었다(참고 문헌: Muyzer, G., et al., Denaturant gradient gel electrophoresis in microbial ecology. Molecular Microbial Ecology Manual, Vol. 3.4.4, 1998: p. pp.1-27.).
얻어진 밴드의 위치와 강도의 데이터에 대하여 다변량해석(PLS-DA)을 행함으로써, IgA 신증과 만성 편도염과의 사이에서 편도 세균총이 상이한 것이 나타내어졌다. 또한, Loading plot analysis를 행함으로써, IgA 신증에 특징적인 밴드가 발견되었다.
전기 영동의 결과를 도 1에 나타낸다. 도 1에 있어서, 염색된 밴드가 각각 편도에 존재하는 균을 나타내고, A, B 및 C의 화살표로 나타낸 밴드가 IgA 신증에 특징적인 밴드이다. 이들 밴드를 잘라내어, TA 클로닝을 행하고, 정법(定法)에 따라 염기 서열을 결정하고, 공지의 유전자 데이터베이스에 등록된 염기 서열과의 상동성(相同性) 검색을 행한 바에 의하면, A의 밴드가 트레포네마속 세균(Treponema sp.)과 높은 상동성을 나타내고, B의 밴드가 헤모필루스·세그니스(Haemophilus segnis)와 높은 상동성을 나타내며, C의 밴드가 캄필로박터·렉터스(Campylobacter rectus)와 높은 상동성을 나타내는 것이 명확해졌다.
IgA 신증 환자 68명과, 만성 편도염 환자 28명에 대하여, 상기 A, B, C의 밴드에 해당하는 세균의 양성율을 표 1에 나타낸다. 데이터의 통계학적 해석에는 t검정을 사용하였다. 표 1로부터 명백한 바와 같이, IgA 신증 환자의 편도에는, 트레포네마(Treponema) 속의 세균, 헤모필루스(Haemophilus) 속의 세균, 캄필로박터(Campylobactor) 속의 세균이 존재하는 확률이 높은 것이 나타내어졌다. 이 중, 헤모필루스(Haemophilus) 속의 세균에 대해서는, IgA 신증 환자의 사구체 내 및 혈청 중에 Haemophilus parainfluenzae의 구성 성분이 검출된 것이 보고되어 있어(Suzuki, et al. Lancet 1994), IgA 신증과의 관련이 시사되어 있지만, IgA 신증 환자의 편도에 있어서, 트레포네마속의 세균 및 캄필로박터속의 세균의 양성율이 높은 것은, 이번에 처음으로 밝혀지게 되어, 편도에 있어서의 트레포네마속의 세균, 또는 캄필로박터속의 세균의 존재를 검출하는 것이, IgA 신증의 진단에 유용한 것이 실증되었다.
[표 1]
[실시예 2: RT-PCR법에 따른 적출 편도 중의 트레포네마속 세균의 검출]
트레포네마속 세균(Treponema sp.)에 특이적인 프라이머 세트로서, 문헌 「Asai, Y., et al., Detection and quantification of oral treponemes in subgingival plaque by real-time PCR. J Clin Microbiol, 2002. 40(9): p.3334-40.」에 기재된 total treponemas 프라이머(Forward Primer: TTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAAC(서열 번호 1), Reverse Primer: GTCRYMGGCAGTTCCGCCWGAGTC(서열 번호 2)를 합성하여, 사용하였다. 구체적으로는, 실시예 1에 기재된 IgA 신증의 환자 및 만성 편도염의 환자의 편도로부터 얻은 RNA를 역전사하여, 얻어진 cDNA를 주형으로 하여, 상기 프라이머 세트(서열 번호 1 및 2)를 사용하여 PCR을 행하였다. PCR 조건은, 95℃로 5분간 변성시킨 후, 95℃로 30초간, 69.5℃로 60초, 72℃로 1 분의 사이클을 25회 행하였다. 반응액을 아가로스겔로 전기 영동 한 후, 겔 영동 후 SYBR Green I(Lonza, Rockland, ME USA)으로 염색하고, 겔 촬영 장치 GelDoc XR(Bio-Rad laboratories)로 화상을 얻었다.
전기 영동의 결과를 도 2에 나타낸다. 실시예 1의 DGGE법으로 트레포네마속양성의 샘플은, 657bp의 위치의 밴드가 출현하고, 음성의 샘플은 밴드가 출현하지 않는 것이 확인되었다. 이 결과로부터, 편도 중에 존재하는 트레포네마속 세균을 RT-PCR에 의해 검출할 수 있는 것이 나타내어졌다.
[실시예 3: RT-PCR법에 따른 적출 편도 중의 캄필로박터·렉터스의 검출]
캄필로박터·렉터스에 특이적인 프라이머 세트로서, 문헌 「Hayashi, F., et al., Subgingival distribution of Campylobacter rectus and Tannerella for sythensis in healthy children with primary dentition. Archives of Oral Biology, 2006. 51: p.10-14.」에 기재된 프라이머(Forward Primer: TTTCGGAGCGTAAACTCCTTTTC(서열 번호 9), Reverse Primer: TTTCTGCAAGCAGACACTCTT(서열 번호 10)를 합성하여, 사용하였다. 프라이머 이외는, 실시예 2와 동일하게 행하였다.
전기 영동의 결과를 도 3에 나타낸다. 실시예 1의 DGGE법으로 캄필로박터·렉터스 양성의 샘플은, 598bp의 위치의 밴드가 출현하고, 음성의 샘플은 밴드가 출현하지 않는 것이 확인되었다. 이 결과로부터, 편도 중에 존재하는 캄필로박터·렉터스를 RT-PCR에 의해 검출할 수 있는 것이 나타내어졌다.
[실시예 4: 편도를 닦은 액 중의 트레포네마속 세균 및 캄필로박터·렉터스의 RT-PCR법에 따른 검출]
IgA 신증의 환자의 편도를 직시 하에, 청결한 면봉으로 찰과하여 편도를 닦은 액을 채취했다. 채취한 편도를 닦은 액으로부터 Trizol(invitrogen)을 사용하여 RNA를 추출했다. 이 RNA를 역전사하여 얻어진 cDNA를 주형으로 하고, 상기 트레포네마속 세균에 특이적인 프라이머 세트(서열 번호 1, 2) 또는 캄필로박터·렉터스에 특이적인 프라이머 세트(서열 번호 9, 10)를 사용하여, 실시예 2와 동일한 조건으로 PCR을 행하였다. 그 결과, 편도를 닦은 액을 샘플로 한 경우에도, 트레포네마속 세균 및 캄필로박터·렉터스가 RT-PCR법에 의해 검출 가능한 것이 나타내어졌다. 이로써, 샘플 채취에 있어서의 환자의 부담을 대폭 경감할 수 있는 것이 밝혀졌다.
[실시예 5: 편도에 존재하는 세균과 치료 효과와의 상관 관계]
편도로부터 검출되는 세균의 종류와 편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법의 유효성과의 상관 관계의 유무를 조사하였다.
편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법의 프로토콜은 이하에 기재한 바와 같다. 즉, 편도 절제의 1주일 후∼10일 후에, 3일간의 스테로이드 펄스 요법(500mg의 스테로이드의 정맥 투여)을 행하고, 10∼14 일간, 체중 1Kg당 1mg(최대 60mg)의 프레드닌(스테로이드제)을 경구(經口) 투여한다. 그 후, 다시 한번 3일간의 스테로이드 펄스 요법을 행하고, 30mg의 스테로이드제를 경구 투여한다. 이 시기에 퇴원하고, 그 후 외래에 의해 5mg씩 감량하고, 반년∼1년 사이에 투여를 중지한다.
입원중(2회의 스테로이드 펄스 종료까지)에는 약 3회/주의 소변 검사를 행하고, 퇴원 후에는 1∼2개월에 1회의 소변 검사를 행함으로써, 뇨단백 및 뇨잠혈이 음성화했는지의 여부를 확인하였다.
결과를 도 4의 (A)∼(C)에 나타낸다. (A)는 트레포네마속의 세균, (B)는 헤모필루스속의 세균, (C)는 캄필로박터속의 세균에 대한 결과를 각각 나타낸 것이다. 세로축의 양성율은, 뇨단백 및 뇨잠혈 중 어느 한쪽이 양성이면 양성으로서 산출하였다. 또한, 통계 해석 소프트웨어 JMP를 사용하여, Kaplan-Meiermethod를 사용한 생존 곡선 해석을 행하였다.
도 4의 (A)로부터 명백한 바와 같이, 편도로부터 트레포네마속 세균이 검출된 IgA 신증 환자에게 편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법을 행하면, 2년 이내에 전체 환자의 뇨단백 및 뇨잠혈의 양쪽이 음성(완전 관해)이 되었다. 한편, 편도로부터 트레포네마속 세균이 검출되지 않은 환자에서는, 완전 관해한 환자는 40% 미만이었다.
도 4의 (B)로부터 명백한 바와 같이, 편도에 있어서의 헤모필루스속 세균의 존재의 유무는, 편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법의 유효성에 영향을 미치지 않았다.
도 4의 (C)로부터 명백한 바와 같이, 편도로부터 캄필로박터속 세균이 검출된 IgA 신증 환자에게 편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법을 행하면, 40개월 후에 약 70%의 환자가 완전 관해(뇨단백 음성+뇨잠혈 음성)했다. 한편, 편도로부터 캄필로박터속 세균이 검출되지 않은 환자에서는, 완전 관해한 환자는 30% 미만이었다.
이 결과로부터, 편도에 있어서의 트레포네마속 세균 양성, 또는 캄필로박터속 세균 양성의 IgA 신증 환자에 대하여 편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법을 행하는 것은 매우 유효한 것으로 밝혀졌다.
이상의 결과로부터, 소변 검사에 있어서 뇨단백 및 뇨잠혈이 양성인 피험자의 편도로부터 트레포네마속 세균 및 캄필로박터속 세균 중 어느 하나, 또는 양쪽이 검출된 경우, IgA 신증일 가능성이 매우 높은 것으로 판정할 수 있다. 또한, 편도에 있어서 트레포네마속 세균 및 캄필로박터속 세균 중 어느 하나, 또는 양쪽이 검출된 IgA 신증 환자에게는, 편도 적출 + 스테로이드 펄스 요법이 매우 유효한 것으로 편도 적출 전에 예측할 수 있다.
그리고, 본 발명은 전술한 각 실시형태 및 실시예로 한정되지 않고, 청구항에 나타낸 범위에서 각종 변경이 가능하며, 상이한 실시형태에 각각 개시된 기술적 수단을 적절하게 조합하여 얻어지는 실시형태도 본 발명의 기술적 범위에 포함된다. 또한, 본 명세서 중에 기재된 학술 문헌 및 특허 문헌 모두, 본 명세서 중에서 참고로서 원용된다.
[서열목록] IgA신증의예측방법
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Claims (16)
- 피험자(被驗者)의 편도(扁桃) 유래의 시료에 존재하는 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 검출하는 공정을 포함하는 IgA 신증(腎症)의 진단을 위한 정보의 제공 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 공정에 있어서, 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균에 특이적인 핵산을 검출하는, IgA 신증의 진단을 위한 정보의 제공 방법. - 제1항에 있어서,
상기 공정에 있어서, 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체를 사용하는, IgA 신증의 진단을 위한 정보의 제공 방법. - 제1항에 있어서,
트레포네마속 세균이, 트레포네마속 세균으로부터 추출한 토탈 RNA를 역전사(逆轉寫)하여 얻어지는 cDNA를 주형(鑄型)으로 하여, 서열 번호 1로 표시되는 염기 서열로 이루어지는 프라이머와, 서열 번호 2로 표시되는 염기 서열로 이루어지는 프라이머를 조합한 프라이머 세트를 사용하는 PCR에 의해 검출되는 세균으로부터 선택되는 1종 이상인, IgA 신증의 진단을 위한 정보의 제공 방법. - 제1항에 있어서,
트레포네마속 세균이, 트레포네마·덴티콜라, 트레포네마·빈센티, 트레포네마·미디엄, 트레포네마·소크란스키, 트레포네마·파지데니스, 트레포네마·펙티노보럼, 트레포네마·아밀로보럼, 트레포네마·말토필럼, 트레포네마·브리안티, 트레포네마·팔리덤, 트레포네마·사카로필럼 및 트레포네마·석시니페이시언스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인, IgA 신증의 진단을 위한 정보의 제공 방법. - 제1항에 있어서,
캄필로박터속 세균이, 캄필로박터·렉터스, 캄필로박터·제주니, 캄필로박터·콜리, 캄필로박터·콘시서스, 캄필로박터·커버스, 캄필로박터·쇼와에, 캄필로박터·무코살리스, 캄필로박터·피터스, 캄필로박터·히오인테스티날리스, 캄필로박터·스퍼터럼, 캄필로박터·헬베티커스, 캄필로박터·웁살리엔시스 및 캄필로박터·라리로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인, IgA 신증의 진단을 위한 정보의 제공 방법. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
피험자가, 뇨단백질 검사 및 뇨잠혈 검사 중 적어도 한쪽에 대하여 양성 판정을 받는, IgA 신증의 진단을 위한 정보의 제공 방법. - IgA 신증을 예측하기 위한 키트로서, 이하의 (a)∼(d) 중 적어도 1개 이상을 포함하는 키트:
(a) 트레포네마속 세균을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트
(b) 캄필로박터속 세균을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트
(c) 트레포네마속 세균과 특이적으로 결합하는 항체
(d) 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체. - IgA 신증의 치료에 있어서 편도 적출을 행하는 것이 유효한 IgA 신증 환자를 선별하기 위한 정보의 제공 방법으로서,
IgA 신증 환자의 편도 유래의 시료에 존재하는 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 검출하는 공정을 포함하는 IgA 신증 환자를 선별하기 위한 정보의 제공 방법. - IgA 신증의 치료에 있어서 편도 적출 및 스테로이드 펄스 요법을 행하는 것이 유효한 IgA 신증 환자를 선별하기 위한 정보의 제공 방법으로서,
IgA 신증 환자의 편도 유래의 시료에 존재하는 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균을 검출하는 공정을 포함하는 IgA 신증 환자를 선별하기 위한 정보의 제공 방법. - 제9항 또는 제10항에 있어서,
상기 공정에 있어서, 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균에 특이적인 핵산을 검출하는, IgA 신증 환자를 선별하기 위한 정보의 제공 방법. - 제9항 또는 제10항에 있어서,
상기 공정에 있어서, 트레포네마속 세균 또는 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체를 사용하는, IgA 신증 환자를 선별하기 위한 정보의 제공 방법. - 제9항 또는 제10항에 있어서,
트레포네마속 세균이, 트레포네마속 세균으로부터 추출한 토탈 RNA를 역전사하여 얻어지는 cDNA를 주형으로 하여, 서열 번호 1로 표시되는 염기 서열로 이루어지는 프라이머와, 서열 번호 2로 표시되는 염기 서열로 이루어지는 프라이머를 조합한 프라이머 세트를 사용하는 PCR에 의해 검출되는 세균으로부터 선택되는 1종 이상인, IgA 신증 환자를 선별하기 위한 정보의 제공 방법. - 제9항 또는 제10항에 있어서,
트레포네마속 세균이, 트레포네마·덴티콜라, 트레포네마·빈센티, 트레포네마·미디엄, 트레포네마·소크란스키, 트레포네마·파지데니스, 트레포네마·펙티노보럼, 트레포네마·아밀로보럼, 트레포네마·말토필럼, 트레포네마·브리안티, 트레포네마·팔리덤, 트레포네마·사카로필럼 및 트레포네마·석시니페이시언스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인, IgA 신증 환자를 선별하기 위한 정보의 제공 방법. - 제9항 또는 제10항에 있어서,
캄필로박터속 세균이, 캄필로박터·렉터스, 캄필로박터·제주니, 캄필로박터·콜리, 캄필로박터·콘시서스, 캄필로박터·커버스, 캄필로박터·쇼와에, 캄필로박터·무코살리스, 캄필로박터·피터스, 캄필로박터·히오인테스티날리스, 캄필로박터·스퍼터럼, 캄필로박터·헬베티커스, 캄필로박터·웁살리엔시스 및 캄필로박터·라리로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인, IgA 신증 환자를 선별하기 위한 정보의 제공 방법. - IgA 신증의 치료에 있어서 편도 적출을 행하는 것이 유효한 IgA 신증 환자를 선택하기 위한 키트로서, 이하의 (a)∼(d) 중 적어도 1개 이상을 포함하는 키트:
(a) 트레포네마속 세균을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트
(b) 캄필로박터속 세균을 특이적으로 검출하기 위한 프라이머 세트
(c) 트레포네마속 세균과 특이적으로 결합하는 항체
(d) 캄필로박터속 세균과 특이적으로 결합하는 항체.
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