JP6422161B2 - IgA腎症検査法 - Google Patents
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Description
従って、本発明の課題は、より早期にIgA腎症を発見するための非侵襲的な診断手法を提供することにある。
そこで本発明者は、蛋白尿は陽性ではないが、尿潜血陽性者に着目し、IgA腎症を早期発見するための手段について種々検討したところ、尿潜血陽性者に対して、血中の3種のマーカーを測定し、その3種のマーカーをロジスティック回帰モデルにより解析したところ、当該解析スコアが高い被験者がIgA腎症であると早期に診断できることを見出し、本発明を完成した。
〔2〕前記ロジスティック回帰モデルの解析スコアが、健常人に比べて高い場合にIgA腎症の可能性があると判定する〔1〕記載の検査法。
尿潜血陽性者2747名に対して、血中の糖鎖異常IgA1値、IgA−IgG免疫複合体値及び糖鎖異常IgA1特異的IgA値を測定し、ロジスティック回帰モデル解析を行った。健常人74名の同マーカー値をコントロールとして用いた。
糖鎖異常ヒトIgA1に対するモノクローナル抗体を用いたELISA測定系のキットを用いて測定した。
1)抗ヒトIgG抗体<F(ab’)2 fragments of goat a
nti−human IgG(Fcγ−specific)(Jackson ImmunoResearch Labs)>をPBSを用いて2μg/mLに調整し、ELISAプレートの各ウェルに100μLずつ添加して4℃で一晩インキュベートし、プレートをコーティングする。
2)プレートを3回洗浄する。
3)1%BSA+PBS−Tを200μLずつ各ウェルに添加し、4℃で一晩インキュベートしてプレートをブロッキングする。
4)プレートを5回洗浄する。
5)PBS−Tで至適濃度に希釈したヒト血清を各ウェルに添加し、4℃で一晩インキュベートする。
6)プレートを5回洗浄する。
7)HRP酵素標識抗ヒトIgA抗体をPBS−Tを用いて10000倍に希釈し、100μLずつ各ウェルに添加する。37℃で2時間インキュベートし、酵素標識を行う。
8)プレートを5回洗浄する。
9)発色基質液を用いて5分間発色する。1規定の硫酸で反応を止める。
10)SpectraMax 340PC (Molecular Devices)を用いて吸光度を測定する(490nm)。
1)糖鎖異常IgA1のFab領域・ヒンジ部をPBSで1.0μg/mLに調整し、4℃で一晩インキュベートしプレートをコーティングする。
2)プレートを3回洗浄する。
3)2%BSA+PBS−Tを200μLずつ各ウェルに添加し、4℃で一晩インキュベートしてプレートをブロッキングする。
4)プレートを5回洗浄する。
5)PBS−Tで至適濃度に希釈したヒト血清を各ウェルに添加し、4℃で一晩インキュベートする。
6)プレートを5回洗浄する。
7)Fc領域特異的マウス抗ヒトIgA抗体<mouse monoclonal antibody to human IgA(Fc specific)(Applied Biological Materials Inc.)>をPBS−Tで0.5μg/mLに調整し、各ウェルに100μLずつ添加し37℃で2時間インキュベートする。
8)プレートを5回洗浄する。
9)ペルオキシダーゼで酵素標識された抗マウスIgG抗体<Peroxidase−conjugated AffiniPure Goat Anti−Mouse IgG(H+L)(Jackson Immuno Research)>をPBS−Tで20000倍に希釈し、各ウェルに100μLずつ添加し、37℃2時間でインキュベートする。
10)プレートを5回洗浄する。
11)発色基質液を用いて15分間発色する。1規定の硫酸で反応を停止する。
12)SpectraMax 340PC(Molecular Devices)を用いて吸光度を測定する(490nm)。
IgA腎症患者と健常人の測定結果を用いて、各々の95%信頼区間を計算した。その結果、IgA腎症の95%信頼区間が7.7、健常人の95%信頼区間が3.0と算出され、図1に示すように、解析スコアが3.0以下の場合にIgA腎症の可能性が低い、3.1以上7.7未満の場合には要観察、7.7以上の場合にIgA腎症の可能性が高いと判定できることが判明した。
Claims (2)
- IgA腎症の診断を目的として、尿潜血陽性被験者由来の血液中の糖鎖異常IgA1値、IgA−IgG免疫複合体値及び糖鎖異常IgA1特異的IgA値を測定し、当該3種の測定値をロジスティック回帰モデルにより解析することを特徴とする検査法。
- 前記ロジスティック回帰モデルの解析スコアが健常人に比べて高いことが、IgA腎症の可能性があることを示す請求項1記載の検査法。
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