KR101213894B1

KR101213894B1 - Ｔｈ2 매개성 병태를 치료하기 위한 ｋｉｍ-1 항체

Info

Publication number: KR101213894B1
Application number: KR1020077022608A
Authority: KR
Inventors: 폴 디. 렌너트; 패트리샤 맥쿤; 베로니끄 바일리; 알렉세이 루고프스코이
Original assignee: 바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드
Priority date: 2005-03-02
Filing date: 2006-03-02
Publication date: 2012-12-20
Also published as: IL185653A; CA2599967A1; AU2006218489A1; JP2012131825A; CN101166542A; WO2006094134A3; HK1118007A1; EP2251037A1; CN103751780A; EP2251037B1; AU2006218489B2; NZ562045A; WO2006094134A2; EP1865985A2; US20130089539A1; ZA200708372B; AU2011202405B2; ATE478707T1; AU2011202405A1; DE602006016413D1

Abstract

본 발명은 Th2 및 Th1 매개성 질환을 치료하는 조성물 및 방법을 제공한다.

Description

ＴＨ2 매개성 병태를 치료하기 위한 ＫＩＭ-1 항체{KIM-1 ANTIBODIES FOR TREATMENT OF TH2-MEDIATED CONDITIONS}

본 발명은 Th2 및 Th1 매개성 질환을 치료하는데 유용한 조성물 및 방법을 제공한다.

알러지성 천식 및 아토피성 피부염과 같은 아토피 질환은 주된 Th2 면역에 대한 병원성 변이를 포함하는 것으로 여겨진다(문헌 [Umetsu 등, 2002, Nat Immunol. 3:715-20]).

천식 환경에서, Th2 사이토카인 생산은 폐 내로의 호산구 유입, 호산구 활성, IgE 생산 및 IgE 매개성 비만세포 활성 및 탈과립, 및 폐간질 공간에의 단핵 세포 축적을 구동하며, T 세포 및 활성 과립구는 Th2 사이토카인, 케모카인, 및 효과기 분자를 계속해서 분비하여 지속적인 폐 염증을 촉진시킨다. KIM 유전자 부류를 포함하는 TAPR 유전자좌는 마우스에서 아토피성 염증 발생에 관련되며, KIM-1 알러지성 변이는 환자 모집단 분석시의 아토피 빈도와 관련된다(문헌 [McIntire 등, 2001, Nat Immunol 2:1109-16; McIntire 등, 2003, Nature 425:576]).

발명의 요약

본 발명은 KIM-1의 특정 영역에 결합하는 항체와 같은 약제가 Th1 및/또는 Th2 매개성 면역을 특이적으로 조절할 수 있다는 사실의 발견을, 적어도 부분적으로, 기초로 한다. 예를 들어, KIM-1의 줄기 영역 또는 KIM-1의 시알산 결합 영역에 결합하는 약제는 Th2 사이토카인의 발현을 조절할 수 있고 Th2 매개성 질환, 예를 들어, 천식을 치료하는데 이용될 수 있으며; KIM-1의 뮤신 영역 내의 특정 에피토프에 결합하는 약제는 병원성 Th1 반응을 감소시킬 수 있고 Th1 매개성 질환, 예를 들어, 염증 질환 또는 자기 면역 질환 예컨대 염증성 장질환(IBD), 크론병, 다발성 경화증, 당뇨병, 류마티스성 관절염, 건선, 급성 이식편대숙주 질환(GVHD), 이식, 췌장염, 지연성 과민반응(DTH)을 치료하는데 이용될 수 있다.

본 발명에서는 Th2 및 Th1 매개성 질환을 치료하는데 유용한 조성물 및 방법을 제공한다.

일 양상에서, 본 발명은 Th2 매개성 병태, 예를 들어, 천식(특히 알러지성 천식), 알러지성 비염, 알러지, 습진, 및 기타 아토피성 병태를 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 Th2 매개성 병태를 갖는 포유류, 바람직하게는 인간에게 KIM-1의 줄기 영역 또는 KIM-1의 시알산 결합 모티프에 결합하는 약제를 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 본 방법은 단일 특이적 항체, 예를 들어, 병태를 치료하기에 충분한 양으로, 충분한 시간 동안 KIM-1의 줄기 영역 또는 KIM-1의 시알산 결합 모티프에 결합하는 단일 클론 항체(또는 이의 항원 결합성 단편)를 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함할 수 있다. KIM-1의 줄기 영역은 KIM-1의 막통과 도메인과 뮤신 도메인 사이에 존재하는, 고보존성 N-결합 글리코실화 부위를 포함하는 대전 도메인으로서 본원에서 확인된다. 인간 KIM-1의 줄기 영역 및 시알 산 결합 모티프는 도 1에 도시되어 있다. 본원에서 정의되는 바와 같은 이들 영역의 N- 및 C-말단은 유사하며 KIM-1 서열로부터 약간(예를 들어, 1개, 2개 또는 3개) 더 많거나 또는 더 적은 연속 잔기를 포함할 수 있음이 이해된다.

일 실시형태에서, 약제는 인간 KIM-1 줄기 영역에 결합하는 항체이다. 예를 들어, 항체는 서열 DGNDTVTESSDGLWNNNQTQLFLEHSLLTANTTK(서열 번호 1의 아미노산 236-269)를 갖는 펩티드에 결합한다. 일 실시형태에서, 항체는 서열 LLTANTTKG(서열 번호 1의 아미노산 262-270), HSLLTANTTKG(서열 번호 1의 아미노산 260-270), FLEHSLLTANTTKG(서열 번호 1의 아미노산 257-270) 또는 NQTQLFLEHSLLTANTTKG(서열 번호 1의 아미노산 252-270)를 갖는 펩티드에 결합한다. 일 실시형태에서, 항체는 서열 번호 1의 아미노산 236-250 또는 236-258의 서열을 갖는 펩티드에 결합한다.

일 실시형태에서, 항체는 KIM-1의 시알산 결합 모티프에 결합한다. 예를 들어, 항체는 서열 GVYCCRVEHRGWFNDMKITVSLEIVPP(서열 번호 1의 아미노산 81-107) 또는 RGSCSLFTCQNGIV(서열 번호 1의 아미노산 29-42)를 갖는 펩티드 내에 포함되거나 이것과 중첩되는 에피토프에, 적어도 부분적으로, 결합한다. 일 실시형태에서, 항체는 환원 및 비환원 단백질에 결합하는데, 즉, 항체는 서열 GVYCCRVEHRGWFNDMKITVSLEIVPP(서열 번호 1의 아미노산 81-107) 또는 RGSCSLFTCQNGIV(서열 번호 1의 아미노산 29-42)의 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 연속 아미노산 잔기로 이루어진 선형 에피토프에 결합한다.

또 다른 실시형태에서, 항체는 서열 GVYCCRVEHRGWFNDMKITVSLEIVPP(서열 번호 1의 아미노산 81-107) 또는 RGSCSLFTCQNGIV(서열 번호 1의 아미노산 29-42) 중 어 느 하나 또는 둘 모두가 형성하는 구조 에피토프에 결합한다. 일 실시형태에서, 에피토프는 재조합 마우스 KIM-1 IgV-인간 IgG1 Fc 융합체의 8kDa TPCK 트립신 단편에 대응하는 인간 KIM-1 서열에 포함된 구조 에피토프일 수 있다.

일 실시형태에서, 항체는 시알산 결합에 요구되는, 서열 번호 1의 잔기 R86, W92, 및 F93 중 하나 이상에 간섭한다.

본원에서 기술되는 방법이 임의의 특정 메커니즘 또는 이론에 구속되지 않음이 이해될지라도 항체는 하나 이상의 하기 특성을 가질 수 있다: (a) 항체는 KIM-1 줄기 영역의 하나 이상의 N-글리코실화 부위 상에 나타나는 탄수화물과 KIM-1의 IgV 도메인 상의 시알산 결합 모티프의 상호 작용을 간섭하고, (b) 줄기 영역 중 하나 이상의 N-결합 글리코실화 부위와 결합하거나 입체 장해를 일으키며, (c) KIM-1 신호 전달의 하향 조절을 억제하고, (d) 항체는 작용제 항체, 예를 들어, 이 항체는 결합시 KIM-1을 통해 하류 신호 전달을 촉진하거나 또는 증가시키고, (e) KIM-1의 다중 결합을 차단하고, (f) 공수용체 또는 리간드와 줄기 영역과의 상호 작용을 결합하거나 또는 입체 장해를 일으켜 정상 기능을 파괴하며, (g) KIM-1 줄기 영역에 인접한 뮤신 영역의 하나 이상의 O-글리코실화 부위 상에 나타나는 탄수화물과 KIM-1의 IgV 도메인 상의 시알산 결합 모티프의 상호 작용을 간섭하고, (h) 예를 들어, 이황화 또는 수소 결합을 간섭하거나 또는 변경시킴으로써, 단백질 형태를 변화시키기 위하여 Ig-도메인의 구조적 특성을 변경하며, (i) KIM-1 리간드와 같은 다른 단백질에의 결합을 변화시키기 위하여 KIM-1 Ig-도메인의 구조적 또는 기능적 특성을 변경한다.

일 실시형태에서, 항체는 세포 표면으로부터 KIM-1의 쉐딩(shedding)을 억제하지 않으며, 예를 들어, 배양액에서 293 Ebna(E293) 세포로부터 KIM-1의 쉐딩을 억제하지 않는다.

바람직한 실시형태에서, 항체는 단일 특이적이며, 예를 들어, 항체는 단일 클론 항체, 예를 들어, 인간화 또는 완전 인간 단일 클론 항체 또는 이의 항원 결합성 단편이다.

일 실시형태에서, 병태는 알러지성 천식이다. 이 실시형태에서, 본 방법은 경우에 따라 알러지성 천식을 갖거나 또는 이것에 위험성이 있는 피험체를 식별하는 단계도 포함한다. 경우에 따라, 본 방법은 또한 피험체에서의 천식 증상, 예를 들어, IgE 수준, 기도 과민반응, 기침, 씨근거림, 흉부 압박감, 호흡 곤란, 기도 평활근 수축, 기도 점액 분비, 염증, 혈관 확장, 염증 세포(예를 들어, 호중구, 단핵 세포, 대식 세포, 임파구, 호산구)의 점증, 배상 세포의 과증식, 비만 세포에 의한 염증 매개자의 방출 또는 염증 세포의 이동을 평가하는 단계도 포함한다. 평가 단계는 투여 단계 중에 및/또는 이후에 수행될 수 있다. 평가는 외과 의사, 기타 의료 제공자에 의해서, 또는 피험체에 의해서 수행될 수 있다. 평가는 1회 이상, 예를 들어, 투여 후 1회 이상, 예를 들어, 투여 후 1주, 1개월, 2개월, 3개월, 6개월 중에 적어도 2회, 또는 그 이상 수행될 수 있다.

바람직한 실시형태에서, 본 방법은 피험체의 기도 질환 중 하나 이상의 증상의 개시 또는 심각성을 감소시키는 약제를 투여(또는 다중 투여)할 것인지를 결정하는 단계를 포함한다.

몇몇 실시형태에서, 항체는 피험체의 천식을 치료하는데 유효한 제2 약제, 예를 들어, 코르티코스테로이드, 기관지 확장제, 류코트리엔 조절제, 항염증제, 항-IgE 약제(예를 들어, 항-IgE 항체, 예를 들어, 오말리주맵(Xolair^®))로 병용 투여된다. "병용 투여" 또는 "조합 투여"는 환자에 대한 물질의 효능이 중첩되도록 동시에 또는 일정 간격, 예를 들어, 1주 이내에 투여되는 것을 의미한다.

또 다른 실시형태에서, 병태는 알러지이며, 예를 들어, 음식 알러지 또는 계절(예를 들어, 화분) 알러지이다. 알러지의 진단은 알레르겐 피부 반응 검사의 실시; 혈청 중 IgE 농도의 측정(예를 들어, IgE > 300 ng/ml); 및 혈청 중 알레르겐 특이적 IgE 또는 IgG 항체의 측정 중 하나 이상에 의해 수행될 수 있다.

항체는 하나 이상의 다음 시기 중에, 즉, 아토피 피험체가 알레르겐에 노출되기 전; 알레르겐에 노출된 후, 그러나 증상 개시 전; 증상의 개시시; 증상 개시 후에 투여될 수 있다.

일 실시형태에서, 약제는 치료의 과정으로서, 예를 들어, 소정의 빈도로, 예를 들어, 매일, 주마다, 2주마다 또는 매달, 주기적으로 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 항체는 씨근거림, 기침, 호흡 단축, 또는 흉부 압박의 에피소드의 빈도 또는 심각성을 감소시키기(예를 들어, 실질적으로 감소시키기) 충분한 시간 동안, 예를 들어, 3개월, 6개월, 1년 이상 동안 및/또는 충분한 양으로 투여될 수 있다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 KIM-1의 줄기 영역에 특이적으로 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편을 제공한다. 항체는 배양액 중 E293 세포로부터 KIM-1의 쉐딩을 억제하지 않는다. 일 실시형태에서, 항체는 인간 KIM-1 줄기 영역에 결합한다. 예를 들어, 항체는 서열 DGNDTVTESSDGLWNNNQTQLFLEHSLLTANTTK(서열 번호 1의 아미노산 236-269)를 갖는 펩티드에 결합한다. 일 실시형태에서, 항체는 서열 LLTANTTKG(서열 번호 1의 아미노산 262-270), HSLLTANTTKG(서열 번호 1의 아미노산 260-270), FLEHSLLTANTTKG(서열 번호 1의 아미노산 257-270) 또는 NQTQLFLEHSLLTANTTKG(서열 번호 1의 아미노산 252-270)를 갖는 펩티드에 결합한다. 다른 실시형태에서, 항체는 서열 번호 1의 아미노산 241-254, 242-258, 242-255의 서열을 갖는 펩티드에 결합한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 KIM-1의 시알산 결합 모티프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편을 제공한다. 예를 들어, 항체는 서열 GVYCCRVEHRGWFNDMKITVSLEIVPP(서열 번호 1의 아미노산 81-107) 또는 RGSCSLFTCQNGIV(서열 번호 1의 아미노산 29-42)를 갖는 펩티드 내에 포함되거나 이것과 중첩되는 에피토프에, 적어도 부분적으로, 결합한다. 일 실시형태에서, 항체는 환원 및 비환원 단백질에 결합하는데, 즉, 항체는 GVYCCRVEHRGWFNDMKITVSLEIVPP(서열 번호 1의 아미노산 81-107) 또는 RGSCSLFTCQNGIV(서열 번호 1의 아미노산 29-42)의 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 연속 아미노산 잔기로 이루어진 선형 에피토프에 결합한다. 또 다른 실시형태에서, 항체는 서열 GVYCCRVEHRGWFNDMKITVSLEIVPP(서열 번호 1의 아미노산 81-107) 또는 RGSCSLFTCQNGIV(서열 번호 1의 아미노산 29-42) 중 어느 하나 또는 둘 모두가 형성하는 구조 에피토프에 결합한다. 몇몇 실시형태에서, 에피토프는 재조 합 마우스 KIM-1 IgV-인간 IgG1 Fc 융합체의 8kDa TPCK 트립신 단편에 대응하는 인간 KIM-1 영역에 포함된 구조 에피토프이다. 일 실시형태에서, 항체는 시알산 결합에 요구되는, 서열 번호 1의 잔기 R86, W92, 및 F93 중 하나 이상에 간섭한다.

단리된 항체는 하나 이상의 하기 특성을 가질 수 있다: (a) 항체는 KIM-1 줄기 영역의 하나 이상의 N-글리코실화 부위 상에 나타나는 탄수화물과 KIM-1의 IgV 도메인 상의 시알산 결합 모티프의 상호 작용을 간섭하고, (b) 줄기 영역 중 하나 또는 양쪽의 N-결합 글리코실화 부위와 결합하거나 입체 장해를 일으키며, (c) KIM-1 신호 전달의 하향 조절을 억제하고, (d) 항체는 작용제 항체, 예를 들어, 이 항체는 결합시 KIM-1을 통해 하류 신호 전달을 촉진하거나 또는 증가시키고, (e) KIM-1의 다중 결합을 차단하고, (f) 공수용체 또는 리간드와 줄기 영역과의 상호 작용을 결합하거나 또는 입체 장해를 일으켜 정상 기능을 파괴하며, (g) KIM-1 줄기 영역에 인접한 뮤신 영역의 하나 이상의 O-글리코실화 부위 상에 나타나는 탄수화물과 KIM-1의 IgV 도메인 상의 시알산 결합 모티프의 상호 작용을 간섭하고, (h) 예를 들어, 이황화 또는 수소 결합을 간섭하거나 또는 변경시킴으로써, 단백질 형태를 변화시키기 위하여 Ig-도메인의 구조적 특성을 변경하며, (i) KIM-1 리간드와 같은 다른 단백질에의 결합을 변화시키기 위하여 KIM-1 Ig-도메인의 구조적 또는 기능적 특성을 변경한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 Th1 매개성 병태, 예를 들어, 병원성 또는 점증성 Th1 반응을 특징으로 하는 병태를 치료하는 방법을 특징으로 한다. 이러한 병태는 염증성 및/또는 자기 면역 질환 예컨대 염증성 장질환(IBD), 크론병, 다발성 경화증, 당뇨병, 류마티스성 관절염, 건선, 급성 이식편대숙주 질환(GVHD), 이식, 췌장염, 지연성 과민반응(DTH)을 들 수 있다. 본 방법은 Th1 매개성 병태를 갖는 포유류, 바람직하게는 인간에게 서열 VATSPSSPQPAETHPTTLQGAIRREPTSSPLYSYTT(서열 번호 1의 잔기 200-235)에 포함된 에피토프에 결합하는 약제, 예를 들어, 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 본 방법은 단일 특이적 항체, 예를 들어, 병태를 치료하기에 충분한 양으로, 충분한 시간 동안 KIM-1의 특정 영역에 결합하는 단일 클론 항체(또는 이의 항원 결합성 단편)을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함할 수 있다. KIM-1의 특정 영역은 마우스의 KIM-1의 선택적 스플라이싱 변이형(alternatively spliced variant)에서 확인된다. 본원에서 정의되는 바와 같은 이러한 영역의 N- 및 C-말단은 유사하며 KIM-1 서열로부터 약간(예를 들어, 1개 또는 2개) 더 많거나 또는 더 적은 연속 잔기를 포함할 수 있음이 이해된다.

일 실시형태에서, 항체는 환원 및 비환원 단백질에 결합한다.

일 실시형태에서, 병태는 염증성 장질환(IBD), 크론병, 류마티스성 관절염, 건선, 급성 이식편대숙주 질환(GVHD), 이식, 췌장염 또는 지연성 과민반응(DTH)이다. 본 방법은 또한 경우에 따라 기록된 병태 중 어느 하나를 갖거나 또는 이것에 위험성이 있는 피험체를 식별하는 단계도 포함한다.

바람직한 실시형태에서, 본 방법은 피험체의 병태 중 하나 이상의 증상의 개시 또는 심각성을 감소시키는 약제를 투여(또는 다중 투여)할 것인지를 결정하는 단계를 포함한다.

몇몇 실시형태에서, 항체는 피험체의 병태를 치료하는데 유효한 제2 약제, 예를 들어, 코르티코스테로이드 또는 기타 항염증제, DMARD, 항-TNF 치료제 또는 항-CD20 치료제로 병용 투여된다. "병용 투여" 또는 "조합 투여"는 환자에 대한 물질의 효능이 중첩되도록 동시에 또는 일정 간격, 예를 들어, 1주 이내에 투여되는 것을 의미한다.

일 실시형태에서, 약제는 치료의 과정으로서, 예를 들어, 소정의 빈도로, 예를 들어, 매일, 주마다, 2주마다 또는 매달, 주기적으로 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 항체는 증상의 빈도 또는 심각성을 감소시키기(예를 들어, 실질적으로 감소시키기) 충분한 시간 동안, 예를 들어, 3개월, 6개월, 1년 이상 동안 및/또는 충분한 양으로 투여될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하는데", "치료하는", 및 "치료"는 병리적 조건을 특징으로 하는 증상 또는 파라미터를 개선하거나 또는 개량하고; 병리적 조건을 특징으로 하는 증상 또는 파라미터의 심각성을 감소시키며; 병리적 조건의 진행을 방지하거나, 늦추거나 또는 전도시키고; 또는 병리적 조건 중 하나 이상의 증상 또는 파라미터를 방지하기에 유효한 양, 방법, 및/또는 방식으로 치료제를 투여하는 것을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, KIM-1의 특정 도메인에 "결합하는 약제"는 K_d가 10^-6 M 미만인 특정 도메인에 결합하는 임의의 화합물을 지칭한다. KIM-1 결합성 약제의 예는 KIM-1 결합 단백질, 예를 들어, KIM-1 결합 항체, 바람직하게는 단일 특이적 항체이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "시알산 결합 영역", "시알산 결합 모티프", 및 "시알산 결합에 요구되는", 및 이러한 용어의 변형은 탄수화물 결합에 요구되는 시알산 결합 Ig형 렉틴(Siglecs)의 부류에서 확인되는 아미노산 잔기, 아미노산 서열, 및 아미노산 2차 및 3차 구조물과 유사하거나 또는 상동인 아미노산 잔기, 아미노산 서열, 및 아미노산 2차 또는 3차 구조물을 지칭한다.

용어 "항체 또는 이의 항원 결합성 단편"은 항원에 특이적으로 결합하기에 충분한 적어도 하나의 면역글로불린 가변 영역, 예를 들어, 면역글로불린 가변 도메인 또는 면역글로불린 가변 도메인 서열을 제공하는 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 포함한다. 예를 들어, 상기 용어는 중쇄(H) 가변 영역(약칭 VH), 및 경쇄(L) 가변 영역(약칭 VL)을 갖는 항원 결합 단백질을 포함한다. 또 다른 예로, 상기 용어는 2개의 중쇄(H) 가변 영역 및 2개의 경쇄(L) 가변 영역을 갖는 항원 결합 단백질을 포함한다. 상기 용어는 항체의 항원 결합성 단편(예를 들어, 단일쇄 항체, Fab 단편, F(ab')2 단편, Fd 단편, Fv 단편, 및 dAb 단편) 및 완전한 항체, 예를 들어, 온전한 면역글로불린 유형인 IgA, IgG, IgE, IgD, IgM(및 이들의 아형)을 포함한다. 면역글로불린의 경쇄는 카파 또는 람다 유형일 수 있다. 일 실시형태에 서, 항체는 글리코실화된다. 항체는 항체 의존성 세포 독성 및/또는 보체 매개성 세포 독성에 있어 기능적일 수 있고, 또는 이러한 활성 중 하나 또는 모두에 있어 비기능적일 수 있다. VH 및 VL 영역은 "골격 부위"(FR)라고 명명된 더 보존된 영역과 함께 산재된, "상보성 결정 부위"("CDR")라고 명명되는 과변이 영역으로 추가로 다시 나누어질 수 있다. FR 및 CDR의 범위는 정확히 한정된다(문헌 [Kabat, E.A. 등 (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242]; 및 [Chothia, C. 등 (1987) J. MoI. Biol. 196:901-917] 참조). 본원에서는 Kabat 정의가 사용된다. 각각의 VH 및 VL은 일반적으로 다음과 같은 순서, 즉, FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 아미노 말단으로부터 카르복실 말단으로 배열된 3개의 CDR과 4개의 FR로 구성된다.

전술한 요약 및 후술하는 상세한 설명은 청구되는 본 발명을 한정하지 않는다.

도 1은 본원에서 기술되는 다양한 도메인을 나타내는 (신호 서열이 없고 삽입 다형성 MTTVP가 없는) 인간 KIM-1의 주석을 단 폴리펩티드 서열(서열 번호 1)이다.

도 2는 OVA를 이용한 에어로졸 항원 투여를 하고 3A2로 처리한 후 기관지 세척액(BAL)에 존재하는 호산구의 백분율(y축)을 나타내는 그래프이다.

도 3은 OVA 항원으로 생체 외 자극을 하고 3A2로 처리한 후 배출 (기관지) 림프절 세포의 증식을 나타내는 그래프이다. Y축은 삼중수소화된 티미딘의 cpm 단위의 혼입량이다.

도 4는 OVA 항원으로의 생체 외 자극에 대한 배출 (기관지) 림프절 세포의 반응을 나타내는 그래프이다. OVA 에어로졸 항원 투여 후 LN을 회수하였고, 그 후 생체 외 OVA로 배양하고 3A2로 처리하였다. 이 배양액으로부터 상층액을 취하고 Th2 사이토카인(IL-4, IL-5 및 IL-10) 생산량을 분석하였다. Y축은 picagrams/ml이다.

도 5는 고정 단백질과 3A2의 상호 작용에 대해 산출된 결합 곡선을 도시한다. mAb 3A2는 mKIM-1-ECD-Fc(원형), mKIM-1-137-216-Fc(삼각형), 및 mKIM-1-196-216-Fc(마름모꼴)에 동등히 결합하였으나, mKIM-1-IgV-Fc(정사각형)와는 결합하는데 실패하였다.

도 6은 OVA를 이용한 에어로졸 항원 투여를 하고 4A2로 처리한 후 기관지 세척액(BAL)에 존재하는 호산구 및 림프구의 백분율(y축)을 나타내는 그래프이다.

도 7은 OVA 항원을 이용한 생체 외 자극 및 4A2로의 처리에 대한 배출 (기관지) 림프절 세포의 반응을 나타내는 그래프이다. OVA 에어로졸 항원 투여 후 LN을 회수하였고, 그 후 생체 외에서 OVA로 배양하였다. 이 배양액으로부터 상층액을 취하고 Th2 사이토카인(IL-4, IL-5, IL-10 및 IL-13) 생산량을 분석하였다. Y축은 picagrams/ml이다.

도 8은 OVA를 이용한 에어로졸 항원 투여를 하고 4A2로 치료적 처리를 한 후 기관지 세척액(BAL)에 존재하는 호산구의 백분율(y축)을 나타내는 그래프이다.

도 9는 정제된 KIM-1 단백질에 대한 mAb 4A2의 결합 곡선을 도시한다.

본원에서 기술되는 바와 같이, 항체 치료제로 KIM-1의 특정 영역을 표적화하는 것은 Th2 및 Th1 사이토카인의 발현에 대해 중요한 제어력을 발휘하며, Th2 매개성 질환과 기타 아토피성 질환, 및 Th1 매개성 질환을 치료하기 위한 치료 전략을 제공한다.

항체 생성

본원에서 기술되는 항체(예를 들어, KIM-1의 줄기 영역에 결합하거나 또는 KIM-1의 시알산 결합 모티프에 결합하는 항체)는, 예를 들어, 동물을 이용하는 면역법에 의해, 또는 발현 파지 기법과 같은 시험관 내 방법에 의해 생성될 수 있다. KIM-1의 표적 에피토프(예를 들어, KIM-1의 줄기 영역 또는 KIM-1의 시알산 결합 모티프)를 포함하는 폴리펩티드는 면역원으로서 이용될 수 있다. 다른 실시형태에서, KIM-1 폴리펩티드의 더 큰 부분, 예컨대 세포외 도메인은 면역원으로서 이용될 수 있고, 그 결과로 생성된 항체는 소정의 KIM-1 영역 또는 도메인에 대한 반응을 위해 스크리닝될 수 있다.

일 실시형태에서, 면역된 동물은 천연, 인간, 또는 부분적 인간 면역글로불린 유전자좌(loci)를 가지는 면역글로불린 생산 세포를 포함한다. 일 실시형태에서, 비인간 동물은 인간 면역글로불린 유전자의 적어도 일부를 포함한다. 예를 들어, 인간 Ig 유전자좌의 큰 단편을 가지는 마우스 항체 생산에 결함이 있는 마우스 품종을 개발하는 것이 가능하다. 하이브리도마 기법을 이용하여, 소정의 특이성을 가진 유전자로부터 기인한 항원-특이적 단일 클론 항체를 생산할 수 있고 선택할 수 있다(예를 들어, 문헌 [XenoMouse^TM, Green 등, Nature Genetics 7:13-21 (1994)], US 2003-0070185, US 특허 5,789,650, 및 WO 96/34096 참조).

KIM-1에 대한 비인간 항체는, 예를 들어, 설치류에서 생산될 수도 있다. 비인간 항체는, 예를 들어, US 특허 6,602,503, EP 239 400, US 특허 5,693,761, 및 US 특허 6,407,213에 기재된 바와 같이, 인체에 적용할 수도 있다.

EP 239 400(Winter 등)은 한 종의 상보성 결정 부위(CDR)를 다른 종의 상보성 결정 부위로 (소정의 가변 영역 내에) 치환함으로써 항체를 변경하는 것에 관해 기술하고 있다. CDR-치환 항체는 이것이 비인간 성분을 상당히 덜 포함하기 때문에 실제 키메릭 항체와 비교하여 인간에서 면역 반응을 덜 유도하는 경향이 있을 수 있다(문헌 [Riechmann 등, 1988, Nature 332, 323-327]; [Verhoeyen 등, 1988, Science 239, 1534-1536]). 통상적으로, 쥐과 항체의 CDR은 재조합 핵산 기법을 이용하여 인간 항체에서 대응하는 영역으로 치환하여 소정의 치환된 항체를 암호화하는 서열을 생산한다. 소정의 이소타입(대체로 CH의 경우 감마 I 및 CL의 경우 카파)의 인간 불변 영역 유전자 분절이 첨가될 수 있고 인간화 중쇄 및 경쇄 유전자가 포유류 세포에서 공발현되어 가용성있는 인간화 항체를 생산할 수 있다.

문헌 [Queen 등, 1989] 및 WO 90/07861은 원래 쥐과 항체의 V 영역 골격에 대한 최적의 단백질 서열 상동성을 컴퓨터 분석하여 인간 V 골격 영역을 선택하는 단계, 및 쥐과 V 영역의 3차 구조를 모델링하여 쥐과 CDR과 상호 작용하는 경향이 있는 골격 아미노산 잔기를 시각화하는 단계를 포함하는 방법에 관해 기술하고 있다. 이러한 쥐과 아미노산 잔기는 그 후 상동의 인간 골격 상에 첨가된다. 또한 US 특허 5,693,762; 5,693,761; 5,585,089; 및 5,530,101 참조. 문헌 [Tempest 등, 1991, Biotechnology 9, 266-271]은, 마우스 잔기의 근본적인 도입이 없이는 CDR 이식법을 위해, 표준 물질로서, 각각 NEWM 및 REI의 중쇄 및 경쇄로부터 기인한 V 영역 골격을 이용한다. 인간화 항체를 기초로 한 구조물인 NEWM 및 REI에 대한 Tempest 등의 접근법을 이용하는 이점은 NEWM 및 REI 가변 영역의 3차원적 구조가 X선 결정학으로부터 알려져 있어 CDR과 V 영역 골격 잔기 간의 특이적 상호 작용을 모델링할 수 있다는 점이다.

비인간 항체는 특정 위치에서, 예를 들어, 하나 이상(바람직하게는 적어도 5, 10, 12, 또는 모두)의 다음 위치에서, 즉, (경쇄 가변 도메인의 FR에서는) 4L, 35L, 36L, 38L, 43L, 44L, 58L, 46L, 62L, 63L, 64L, 65L, 66L, 67L, 68L, 69L, 7OL, 7 IL, 73L, 85L, 87L, 98L, 및/또는 (중쇄 가변 도메인의 FR에서는) 2H, 4H, 24H, 36H, 37H, 39H, 43H, 45H, 49H, 58H, 60H, 67H, 68H, 69H, 7OH, 73H, 74H, 75H, 78H, 91H, 92H, 93H, 및/또는 (Kabat 넘버링에 따르면) 103H에서 인간 면역글로불린 서열, 예를 들어, 공통 인간 아미노산 잔기를 삽입한 치환물을 포함하기 위해 변경될 수 있다(예를 들어, US 특허 6,407,213 참조).

소정의 KIM-1의 영역에 결합하는 완전 인간 단일 클론 항체는, 문헌 [Boerner 등, 1991, J. Immunol., 147, 86-95]에 기술된 바와 같이, 예를 들어, 실험실 내 초회 항원 자극을 받은 인간 비장 림프구를 이용하여 생산될 수 있다. 이는 문헌 [Persson 등, 1991, Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 88: 2432-2436]에 의해 또는 문헌 [Huang 및 Stollar, 1991, J. Immunol. Methods 141, 227-236]; 또한 US 특허 5,798,230에 의해 기술되는 바와 같은 레퍼토리 클로닝에 의해 제조될 수 있다. 많은 비면역된 인간 파지 발현 라이브러리도 표준 파지 기법을 이용하여 인간 치료법으로 개발될 수 있는 고친화성 항체를 단리하기 위해 역시 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌 [Vaughan 등, 1996]; [Hoogenboom 등, (1998) Immunotechnology 4:1-20]; 및 [Hoogenboom 등, (2000) Immunol Today 2:371-8]; US 2003-0232333 참조).

본원에서 사용되는 바와 같이, "면역글로불린 가변 도메인 서열"은 면역글로불린 가변 도메인의 구조를 형성할 수 있는 아미노산 서열을 지칭한다. 예를 들어, 상기 서열은 자연 발생적인 가변 도메인의 아미노산 서열 모두 또는 부분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 서열은 1개, 2개 또는 그 이상의 N- 또는 C- 말단 아미노산, 내부 아미노산을 생략할 수 있고, 하나 이상의 삽입물 또는 추가의 말단 아미노산을 포함할 수 있으며, 또는 기타 대체물을 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 폴리펩티드는 또 다른 면역글로불린 가변 도메인 서열과 결합시켜 표적 결합 구조(또는 "항원 결합 부위"), 예를 들어, KIM-1의 특정 영역과 상호 작용하는 구조를 형성할 수 있다.

항체의 VH쇄 또는 VL쇄는 중쇄 또는 경쇄 불변 영역 모두 또는 일부를 더 포함하여 각각 면역글로불린 중쇄 또는 면역글로불린 경쇄를 형성할 수 있다. 일 실시형태에서, 항체는 2개의 면역글로불린 중쇄와 2개의 면역글로불린 경쇄로 이루어진 4량체이다. 면역글로불린 중쇄 및 경쇄는 이황화 결합에 의해 연결될 수 있다. 중쇄 불변 영역은 일반적으로 3개의 불변 도메인, 즉, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 일반적으로 CL 도메인을 포함한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호 작용하는 결합 도메인을 포함한다. 항체의 불변 영역은 일반적으로 면역 시스템의 다양한 세포(예를 들어, 효과기 세포) 및 전형적인 보체 시스템의 제1 성분(Clq)을 비롯한 숙주 조직 또는 인자에 대한 항체의 결합을 매개한다.

항체 중 하나 이상의 영역은 인간의 것, 유효하게는 인간의 것, 또는 인간화된 것일 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역은 인간의 것 또는 유효 인간의 것일 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 CDR, 예를 들어, HC CDRl, HC CDR2, HC CDR3, LC CDRl, LC CDR2, 및 LC CDR3은 인간의 것일 수 있다. 각각의 경쇄 CDR은 유효 인간일 수 있다. HC CDR3은 인간의 것일 수 있다. 하나 이상의 골격 영역, 예를 들어, HC 또는 LC 중 FR1, FR2, FR3, 및 FR4는 인간의 것일 수 있다. 일 실시형태에서, 모든 골격 영역은 인간의 것, 예를 들어, 인간 체세포, 예를 들어, 면역글로불린을 생산하는 조혈 세포 또는 비조혈 세포로부터 기인한 것이다. 일 실시형태에서, 인간 서열은 생식 계열의 서열, 예를 들어, 생식 계열 핵산에 의해 암호화된 서열이다. 하나 이상의 불변 영역은 인간의 것, 유효 인간의 것, 또는 인간화된 것일 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 적어도 70, 75, 80, 85, 90, 92, 95, 또는 98%의 골격 영역(예를 들어, FR1, FR2, 및 FR3을 총괄한 영역, 또는 FR1, FR2, FR3, 및 FR4를 총괄한 영역) 또는 전체 항체는 인간의 것, 유효 인간의 것, 또는 인간화된 것일 수 있다. 예를 들어, FR1, FR2, 및 FR3은 총괄적으로 인간 생식 계열 분절에 의해 암호화된 인간 서열과 적어도 70, 75, 80, 85, 90, 92, 95, 98, 또는 99%가 동일할 수 있다.

"유효 인간" 면역글로불린 가변 영역은 면역글로불린 가변 영역이 정상적인 인간에게서 면역 반응을 유발하지 않도록 충분한 수의 인간 골격 아미노산 위치를 포함하는 면역글로불린 가변 영역이다. "유효 인간" 항체는 항체가 정상적인 인간에게서 면역 반응을 유발하지 않도록 충분한 수의 인간 아미노산 위치를 포함하는 항체이다.

"인간화된" 면역글로불린 가변 영역은 변경된 형태가 비변경된 형태보다 인간에게서 면역 반응을 덜 유발하도록 변경되는, 즉, 면역글로불린 가변 영역이 정상적인 인간에게서 면역 반응을 유발하지 않도록 충분한 수의 인간 골격 아미노산 위치를 포함하도록 변경되는 면역글로불린 가변 영역이다. "인간화된" 면역글로불린을 기술하는 문헌으로는, 예를 들어, US 특허 6,407,213 및 US 특허 5,693,762를 들 수 있다. 몇몇 경우에서, 인간화 면역글로불린은 하나 이상의 골격 아미노산 위치에서 비인간 아미노산을 포함할 수 있다.

모든 또는 일부 항체는 면역글로불린 유전자 또는 이의 분절에 의해 암호화될 수 있다. 예시적인 인간 면역글로불린 유전자로는 카파, 람다, 알파(IgA1 및 IgA2), 감마(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), 델타, 입실론 및 뮤 불변 영역 유전자, 및 무수한 면역글로불린 가변 영역 유전자를 들 수 있다. 전체 길이의 면역글로불린 "경쇄"(약 25 Kd 또는 214개의 아미노산)는 NH2-말단에서의 가변 영역 유전자(약 110개의 아미노산) 및 COOH-말단에서의 카파 또는 람다 불변 영역 유전자에 의해 암호화된다. 전체 길이의 면역글로불린 "중쇄"(약 50 Kd 또는 446개의 아미노산)는 유사하게 가변 영역 유전자(약 116개의 아미노산) 및 다른 전술한 불변 영역 유전자 중 하나, 예를 들어, 감마(약 330개의 아미노산을 암호화)에 의해 암호화된다.

전체 길이의 항체 중 용어 "항원 결합성 단편"은 특히 관심 표적에 결합하는 능력을 보유하는 전체 길이의 항체 중 하나 이상의 단편을 지칭한다. 전체 길이의 항체 중 용어 "항원 결합성 단편" 내에 포함된 단편에 결합하는 예로는 (i) Fab 단편, VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성되는 1가 단편; (ii) F(ab')2 단편, 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결되는 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 구성되는 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 암(single arm)인 VL 및 VH 도메인으로 구성되는 Fv 단편; (v) VH 도메인으로 구성되는 dAb 단편(문헌 [Ward 등, (1989) Nature 341:544-546]); 및 (vi) 기능성을 보유하는 단리된 상보성 결정 영역(CDR)을 들 수 있다. 또한, Fv 단편의 2개의 도메인, VL 및 VH는 별개의 유전자에 의해 암호화되지만, 이들은 재조합 방법을 이용하여 VL 및 VH 영역이 단일쇄 Fv(scFv)로서 알려진 1가 분자를 형성하도록 짝을 짓는 단일 단백질 사슬로 이루어지는 것을 가능케하는 합성 링커에 의해 연결될 수 있다(예를 들어, 문헌 [Bird 등, (1988) Science 242:423-426]; 및 [Huston 등, (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883] 참조).

항체 생산

항체는 원핵 및 진핵 세포에서 생산될 수 있다. 일 실시형태에서, 항체(예를 들어, scFv's)는 피키아(Pichia)(예를 들어, 문헌 [Powers 등, (2001) J Immunol Methods, 251:123-35] 참조), 한세울라(Hanseula), 또는 사카로미세스(Saccharomyces)와 같은 효모 세포에서 발현된다.

일 실시형태에서, 항체, 특히 전체 길이의 항체, 예를 들어, IgG는 포유류의 세포에서 생산된다. 재조합 발현에 있어서 예시적인 포유류의 숙주 세포로는 (예를 들어, 문헌 [Kaufman 및 Sharp (1982) MoI. Biol. 159:601-621]에 기술된 바와 같은 선택 마커인 DHFR이 이용되는, 문헌 [Urlaub 및 Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220]에 기술된 dhfr- CHO 세포를 비롯하여) 중국산 햄스터 난소(Chinese Hamster Ovary, CHO 세포), 림프구 세포주, 예를 들어, NS0 골수종 세포 및 SP2 세포, COS 세포, K562, 및 형질전환 동물 유래의 세포, 예를 들어, 형질전환 포유동물을 들 수 있다. 예를 들어, 세포는 유방 상피 세포이다.

면역글로불린 도메인을 암호화하는 핵산 서열 이외에도, 재조합 발현 벡터는 추가적인 핵산 서열, 예컨대 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열(예를 들어, 복제 개시점) 및 선택 마커 유전자를 보유할 수 있다. 선택 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택을 용이하게 한다(예를 들어, US 특허 4,399,216, 4,634,665 및 5,179,017 참조). 예시적인 선택 마커 유전자로는 (메토트렉세이트 선택/증폭과 함께 dhfr- 숙주 세포에 사용되는) 디히드로폴레이트 환원 효소(DHFR) 유전자 및 (G418를 선택하기 위한) 네오(neo) 유전자를 들 수 있다.

항체(예를 들어, 전체 길이의 항체 또는 이의 항원 결합 부분)의 재조합 발현을 위한 예시적인 시스템에서, 항체 중쇄 및 항체 경쇄 모두를 암호화하는 재조합 발현 벡터는 인산칼슘 매개성 트랜스펙션에 의해 dhfr- CHO 세포 내로 유입된다. 재조합 발현 벡터 내에서, 항체 중쇄 및 경쇄 유전자는 인핸서/프로모터 조절 요소(예를 들어, SV40, CMV, 아데노바이러스 등으로부터 기인한, 예컨대 CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소 또는 SV40 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소)에 각각 효과적으로 연결되어 높은 수준의 유전자 전사를 구동한다. 재조합 발현 벡터는 또한 메토트렉세이트 선택/증폭을 이용하여 벡터로 트랜스펙션된 CHO 세포의 선택을 가능케 하는 DHFR 유전자를 보유한다. 선택된 형질전환체 숙주 세포는 항체 중쇄 및 경쇄의 발현을 가능케 하도록 배양되며 배양 배지로부터 온전한 항체가 회수된다. 표준 분자 생물학 기법은 재조합 발현 벡터를 제조하고, 숙주 세포를 트랜스펙션하며, 형질전환체를 선택하고, 숙주 세포를 배양하며, 배양 배지로부터 항체를 회수하기 위해 사용된다. 예를 들어, 몇몇 항체는 단백질 A 또는 단백질 G와 함께 친화성 크로마토그래피에 의해 단리될 수 있다.

항체는 변형물, 예를 들어, Fc 기능(예를 들어, Fc 수용체 또는 Clq, 또는 둘 모두와의 상호 작용을 감소시키거나 또는 제거하는 기능)을 변경시키는 변형물도 포함할 수 있다. 예를 들어, 인간 IgG1 불변 영역은 하나 이상의 잔기, 예를 들어, 하나 이상의 잔기 234 및 237(예를 들어, US 특허 5,648,260에서의 넘버링에 따름)에서 돌연변이될 수 있다. 다른 예시적인 변형물은 US 특허 5,648,260에 기술된 것을 포함한다.

Fc 도메인을 포함하는 몇몇 항체에 있어서, 항체 생산 시스템은 Fc 영역이 글리코실화된 항체를 합성하기 위해 디자인될 수 있다. 예를 들어, IgG 분자의 Fc 도메인은 CH2 도메인에 중 아스파라진 297에서 글리코실화된다. 이러한 아스파라진은 이중안테나형(biantennary-type) 올리고당으로 변경되는 부위이다. 이러한 글리코실화는 Fc 수용체 및 보체 CIq에 의해 매개되는 효과기 기능에 관여한다(문헌 [Burton 및 Woof (1992) Adv. Immunol. 51:1-84]; [Jefferis 등. (1998) Immunol. Rev. 163:59- 76]). Fc 도메인은 아스파라진 297에 대응하는 잔기를 적절하게 글리코실화하는 포유류 발현 시스템에서 생산될 수 있다. Fc 도메인은 또한 다른 진핵 생물의 번역 후 변경도 포함할 수 있다.

항체는 또한 형질전환 동물에 의해 생산될 수도 있다. 예를 들어, US 특허 5,849,992는 형질전환 동물의 유선에서 항체를 발현하는 방법에 관해 기술하고 있다. 유액(milk) 특이적 프로모터와 관심 항체, 예를 들어 본원에서 기술되는 항체를 암호화하는 핵산 서열 및 분비를 위한 신호 서열을 포함하는 도입 유전자(transgene)를 구성한다. 이러한 형질전환 포유류의 암컷에 의해 생산된 우유는, 체내에서 분비된, 관심 항체, 예를 들어, 본원에서 기술되는 항체를 포함한다. 항체는 우유로부터 정제될 수 있고, 또는 몇몇 적용 분야에 있어서 직접 사용될 수 있다.

항체는, 예를 들어, 순환시, 예를 들어, 혈액, 혈청, 림프, 기타 조직에서, 또는 기관지 폐포 세척시에 그 안정화 및/또는 체류를, 예를 들어, 적어도 1.5, 2, 5, 10, 또는 50배까지 개선시키는 모이어티를 갖도록 변경될 수 있다.

일 예에서, KIM-1 결합 항체는 중합체, 예를 들어, 실질적으로 비항원인 중합체, 예컨대 산화 폴리알킬렌 또는 산화 폴리에틸렌과 결합될 수 있다. 적합한 중합체는 실질적으로 중량 단위로 변화를 가할 것이다. 수 평균 분자량이 약 200 ~ 약 35,000 달톤(또는 약 1,000 ~ 약 15,000 및 2,000 ~ 약 12,500 달톤)의 범위인 중합체를 사용할 수 있다.

또 다른 예에서, KIM-1 결합 항체는 수용성 중합체, 예를 들어, 친수성 폴리비닐 중합체, 예를 들어 폴리비닐알코올 또는 폴리비닐피롤리돈에 결합될 수 있다. 이러한 중합체의 비한정적인 목록으로는 산화 폴리알킬렌 단일중합체 예컨대 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌화된 폴리올, 이의 공중합체 및 이의 블록 공중합체를 들 수 있으며, 단, 블록 공중합체의 수용해도는 유지된다. 추가적인 유용한 중합체로는 폴리옥시알킬렌 예컨대 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌, 및 폴리옥시에틸렌과 폴리옥시프로필렌의 블록 공중합체(플루로닉); 폴리메타크릴레이트; 카르보머; 당류 단량체인 D-만노스, D- 및 L-갈락토스, 푸코스, 프룩토스, D-크실로스, L-아라비노스, D-글루쿠론산, 시알산, D-갈락투론산, D-만누론산(예를 들어, 폴리만누론산, 또는 알긴산), D-글루코사민, D-갈락토사민, D-글루코스 및 뉴라민산을 포함하는 분지 또는 비분지 다당류 이외에도 동질 다당류 및 이질 다당류 예컨대 락토스, 아밀로펙틴, 전분, 히드록시에틸 전분, 아밀로스, 황산 덱스트란, 덱스트란, 덱스트린, 글리코겐, 또는 산 뮤코다당류의 다당류 하위 단위, 예를 들어, 히알루론산; 당 알코올의 중합체 예컨대 폴리솔비톨 및 폴리만니톨; 헤파린 또는 헤파론을 들 수 있다.

사용 및 투여 방법

본원에서 기술되는 방법에서, 약제, 예컨대 KIM-1의 특정 영역에 결합하는 항체는 Th2 매개성 병태 또는 Th1 매개성 병태를 치료하기 위해 피험체에 투여된다. 처리되는 피험체는 포유류, 예를 들어, 인간이다.

"투여"는 임의의 특정 제형, 전달 시스템, 또는 경로에 한정되지 않으며, 예를 들어, 기관지 내, (피하, 정맥 내, 척수 내, 관절 내, 근육 내, 또는 복막 내 주사를 비롯한) 비경구, 직장, 국부, 경피성, 또는 (예를 들어, 캡슐, 현탁액, 또는 정제 형태로) 경구 투여를 포함할 수 있다. 투여는 1회 투여량으로 또는 반복적으로, 생리학적으로 허용가능한 염의 형태를 함유하는 다양한 약학적 조성물 중 임의의 조성물로, 및/또는 허용가능한 약학적 부형제로 제공될 수 있다. 생리학적으로 허용가능한 염의 형태 및 약학적 제형 및 부형제는 공지되어 있다(예를 들어, 문헌 [2004 Physicians' Desk Reference^® (PDR) (2003) Thomson Healthcare, 58th ed]; [Gennado 등, (2000), 20th ed, Lippincott, Williams & Wilkins, Remington: The Science and Practice of Pharmacy] 참조).

다수의 치료제는 천식 관리 및 치료에 유용하다. 이러한 치료제는 기도를 이완시키기 위한 기관지 확장제, 예를 들어, 항콜린성 기관지 확장제(예를 들어, 브롬화이프라트로피움, 알부테롤/브롬화이프라트로피움); 기도 근육을 이완시키기 위한 베타 작용제(예를 들어, 에피네프린, 메타프로테레놀, 터부탈린, 이소에타린메실레이트, 이소에타린, 이수프렐, 피르부테롤, 알부테롤, 살메테롤, 비톨테롤); 염증을 감소시키기 위한 경구용 또는 흡입용 코르티코스테로이드(예를 들어, 히드로코르티손, 코르티손, 덱사메타손, 프레드니솔론, 프레드니손, 메틸프레드니솔론, 플루니솔라이드, 트리암시놀론, 베클로메토손, 플루티카손, 부데소나이드); 기도가 기류를 팽창시키거나 차단하는 것을 예방하고 점액 생산을 감소시키기 위한 류코트리엔 조절제(예를 들어, 자피르루카스트, 몬테루카스트 나트륨, 질류톤); 및 특히 기도를 개방하고 담의 방출을 감소시키도록 돕는 테오필린을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 항천식제는 또한 항-IgE, 항-IL-9, 항-IL-3, 항-IL-4, 항-IL-5, 항-IL-13, 항-VLA 단백질, 및 항-이동 억제 인자(MIF, anti-migration inhibitory factor)를 포함하나, 이에 한정되지 않는 치료용 항체(또는 이의 기능성 단편)를 포함한다. 본원에서 기술되는 항체는 알러지성 천식을 치료하기 위한 전술한 하나 이상의 약제와 조합하여 투여될 수 있다.

치료제는 Th1 매개성 염증 병태의 관리 및 처리에 유용하며, 항염증 화합물, 예를 들어, 스테로이드 및 NSAID를 포함한다.

하나의 동물 모델에서 이루어지는 치료에 효과적인 투여량은, 공지된 전환 인자를 이용하여, 인간을 포함한 또 다른 동물에 사용하는 경우에 전환될 수 있다(예를 들어, 문헌 [Freireich 등, (1966) Cancer Chemother. Reports, 50(4): 219-244] 참조).

하기 실시예는 예시적인 실시형태를 제공한다. 실시예는 어떠한 방식으로든 본 발명을 제한하지 않는다. 당업자는 본 발명의 범위 내에서 수행될 수 있는 다수의 변형예 및 변경예를 알 수 있을 것이다. 따라서, 이러한 변형예 및 변경예는 본 발명에 의해 포함된다.

실시예 1: 마우스 KIM -1에 대한 래트 단일 클론 항체의 특성화

표준 PCR 및 클로닝 기법을 이용하여, 전체 길이의 세포외 도메인 및 IgV 도메인 전용 쥐과 KIM-1 발현 구조물을 생성하였고 CHO 세포 내로 안정하게 트랜스펙션하였다. 이러한 융합 단백질을 단백질 A 및 SEC 크로마토그래피에 의해 CHO 세포주의 상층액으로부터 정제하였다. 인간 IgG1-Fc 도메인에 융합된 전체 길이 KIM-1은 차등적 글리코실화가 일관적인, 이중체로서 나타났다. 래트를 완전한 세포외 도메인으로 구성되는 전체 길이의 마우스 KIM-1-Ig 융합 단백질로 면역시켰다. mKIM-1에 대한 래트 단일 클론 항체의 패널을 ELISA 분석 및 FACS 스크리닝에 의해 확인하였고, 이들 중 한 세트를 웨스턴 블롯 분석과 도메인 특이적 ELISA에 의해 및 Biacore에 의해 추가로 특성화하였고, 이것은 다중 항체 결합성의 독특한 에피토프가 상기 패널에서 나타났음을 증명하였다. 이리하여, 7개의 항체가 Biacore 및 ELISA 분석에서 전체 길이 단백질에 결합하였고, 한편 이들 7개 중 4개는 IgV-도메인만을 암호화하는 단백질과의 결합에 실패하였다(표 1). Biacore 포맷에서 결합하기 위해 뮤신 줄기 도메인의 존재를 필요로 하는 것으로 보이는 4개의 항체 중 3개는 ELISA 및 웨스턴 블롯 분석에 의해 뮤신 도메인 내에 결합하는 것으로 추가 확인하였으며, 한편 1개는 줄기 도메인에 결합하였다(표 1). 뮤신 도메인 내에서, 몇몇 항체는 엑손 4에 의해 암호화되는 독특한 영역을 인지하였다(표 1). 이리하여, IgV, 뮤신, 및 줄기 도메인을 인지하는 항체를 식별하였다. 하기 표 1은 래트-항-mKIM-1 mAb의 전체 에피토프 맵핑의 결과를 나타낸다. 하기 표 1의 데이터는 KIM-1-Ig, KIM-1-IgV-Ig의 전체 ECD, 및 KIM-1-Ig 단백질의 단백질 가수분해성 단편을 이용한 다중 분석(Biacore, ELISA, 웨스턴 블롯, 및 FACS)으로부터 수집하였다.

	ECD 도메인	IgV 도메인	ECD 선택적 스플라이싱 엑손에 의해 암호화된 - 영역	줄기 전용
1H9	+	+	+	-
1D9	+	-	-	-
1C11	+	-	-	-
3A2	+	-	+	+
1H8	+	-	-	-
4A2	+	+	+	-^*
2A7	+	+	+	-^*
^* 예상치

실시예 2: 과활동성 폐에서 KIM -1 발현 유도

Balb/c 마우스를 OVA/명반으로 2회 초회 항원 자극한 후, 3주 동안 휴지하였고, 그 때 네뷸라이져를 이용하여 상기 마우스를 OVA 에어로졸에 3일간 노출시켰다. 폐 조직, 배출 (기관지) 림프절 및 비장을 적출하여 RT-PCR에 의한 KIM-1 발현 유도에 대해 조사하였다. 네뷸라이져를 이용한 노출 24시간 후에 의해 기관지 LN 및 폐 조직 모두에서 KIM-1 mRNA가 유도되었다. KIM-1 mRNA 수준과는 대조적으로, KIM-3 mRNA 수준은 OVA 에어로졸을 이용한 항원 투여 후 조절하지 않았다. KIM-2 수준은 KIM-1과 유사한 방법으로 상향 조절하였다.

실시예 3: OVA 유도성 과민반응에 대한 항- KIM -1 항체의 효과

상이한 에피토프 특이성을 가진 항-KIM-1 항체를 OVA 에어로졸 모델을 이용하고, 예방 및 치료 투여 계획 모두를 이용하여 폐 염증 발생에 영향을 미치는 능력에 대하여 시험하였다.

예방 연구에 있어서, OVA 유도성 폐 염증 및 회수 분석(recall assay)을 하기와 같이 수행하였다: Balb/c 마우스에 1일째 및 7일째에 100 ㎕ ImjectAlum(미국 일리노이주 록포드 소재의 Pierce사)과 혼합한 100 ㎕ 0.5 mg/ml OVA(Grade V, Sigma사)를 복강 주사하였다. 2차 주사를 한 지 3주 후, 마우스를 초음파 네뷸라이져(미국 캘리포니아주 칼스배드 소재의 Devilbiss사)를 이용하여 PBS 중 1% OVA의 에어로졸에 3일 동안 매일 20분씩 노출시켰다. mAb로의 투여는 하기와 같았다: 1, 3, 6, 및 9일째에 200 ㎍을 복강 주사한 후, 네뷸라이저를 이용한 노출을 시작한 날에 500 ㎍을 복강 주사하였다.

치료 연구에 있어서, 마우스를 전술한 바와 같이 명반 중 OVA로 면역화시켰으나, 네뷸라이져를 이용한 일련의 노출 바로 전까지는 어떠한 mAb도 투여하지 않았다: 따라서 제1 네뷸라이져를 이용한 노출 전 날에 250 ㎍ mAb 4A2를 제공하였고, 제2 네뷸라이져를 이용한 노출을 실시하는 아침에 250 ㎍ mAb 4A2를 제공하였다.

예방 및 치료 연구 모두에서, 최종 네뷸화기 2일 후에, 마우스를 분석을 위해 희생시켰다. 기관지 세척액(BAL)을 0.1% BSA 및 0.02 mM EDTA를 함유하는 PBS로 3회 세척하여 기관 절개를 통해 수집하였다. BAL 세포를 사이토스핀 및 코팅 슬라이드(미국 필라델피아주 피츠버그 소재의 Shandon사)를 이용하여 펠릿화한 후 공기를 건조시키고 다른 세포 개체군을 식별하기 위해 Hema3 염료(미국 필라델피아주 피츠버그 소재의 Fisher Scientific사)로 염색하였다. 폐 조직을 적출하여 통상적인 조직학적 분석을 위해 중성 완충 포르말린에 첨가하거나, 추후 RNA 단리를 위해 급속 동결시켰다. 배출 (기관지) 림프절 및 비장을, OVA의 농도를 변화시키면서 RPMI/10% FBS 중 배양액 내로 배치된 단핵 세포를 단리하기 위해, 적출하였다. 72시간 후, 상층액을 회수하였고 세포를 1 μCi의 삼중수소화된 티미딘(미국 뉴저지주 피스캐터웨이 소재의 Amersham Biosciences사)으로 8시간 동안 펄싱(pulsing)하였으며, Microbetajet system(미국 메릴랜드주 게디스버그 소재의 Wallac사)을 사용하여 평판을 카운팅하였다. CBA Th1/Th2와 염증 키트(BD Biosciences사) 및 IL-13 ELISA 분석법(미국 미네소타주 미네아폴리스 소재의 R&D Systems사)을 이용하여 상층액을 분석하였다.

결과:

OVA 초회 항원 자극 및 항원 투여 단계 중에 마우스에 항체를 투여하였다. 항원 투여 후, 기관지 세척액(BAL), 기관지 림프절, 비장, 및 폐 조직을 적출하였다. BAL에 존재하는 호산구, 호중구, 및 림프구의 백분율을 계산하였다. mAb 1H8 유도성의 원기왕성한 호산구는, 대조군과 비교하여 볼 때 호산구의 백분율이 2배 이상 나타나도록 처리된 마우스의 BAL을 포함하였다. BAL 세포질의 작은 부분을 구성하는 호중구 및 림프구에 있어서의 중간 정도의 증가(%)도 역시 관찰되었다. 이러한 결과와 일관되게, 기관지 LN 세포는 1H8로 처리된 마우스로부터 단리하였고, 생체 외에서 더욱 증식된 OVA로 항원 투여를 하였으며, 대조군 배양액에서보다 더 높은 수준의 Th2 관련 사이토카인을 발현하였다. 특히, IL-4, IL-6, 및 IL-10의 수준 역시 증가하였지만, 대조군과 비교하여 볼 때, 매우 높은 수준의 IL-5 및 IL-13을 생산하였다. 흥미있는 것은, 전체적으로 이러한 사이토카인의 수준은 낮았으나, IFN-감마 수준은 역시 증가하였다. Th2 사이토카인의 차등적 유도는, MS, RA, 크론병과 같은 Th1 사이토카인 의존성 병리학의 환경에서 유효하다.

1H8과는 대조적으로, mAb 3A2는 BAL에서 호산구의 백분율을 감소시키고, 기관지 림프절 회수 분석에서 Th2 관련 사이토카인의 생산을 감소시켰다(도 2). 따라서, 상기 항체 1H8 및 3A2는 이러한 분석시 반대의 효과를 나타낸다. IgV 도메인 내의 에피토프를 인지하는, 1H9를 포함하는, 몇몇의 다른 항체는 이러한 모델에서 폐 염증 또는 사이토카인 생산에 대한 어떠한 영향도 없었다. 3A2를 갖는 OVA 항원으로 생체 외 자극에 대한 배출 (기관지) 림프절 세포의 반응 분석은 항원 자극에 대한 세포 증식의 감소를 나타내었다(도 3). 또한, 이러한 배양액의 상층액 분석은 IL-4, IL-5, 및 IL-10를 비롯한 Th2 사이토카인의 발현에 대한 현저한 감소를 나타내었다(도 4). IL-13의 수준 역시 이러한 분석시 감소하였다.

항-Ig 도메인 mAb 4A2로의 처리는 OVA에 의한 감작화 및 네뷸라이져를 이용한 노출 처리 후 BAL 내로의 호산구 및 림프구 유입을 현저히 감소시켰다(도 6). BAL 중 호산구 백분율의 평균 감소치는 대조군과 비교하여 볼 때 84%였고(p < 0.0001, 평균 당량 시험) 림프구 백분율의 평균 감소치는 대조군과 비교하여 볼 때 90%였다(p < 0.001, 평균 당량 시험). 기관지 림프절 세포를 생체 외 OVA로 재자극한 경우, IL-4, IL-5, IL-10, 및 IL-13을 비롯한 Th2 생산에 대한 극적인 감소가 있었다(도 7). 따라서, mAb 4A2로의 처리는 천식 반응과 관련된 사이토카인의 생산 및 폐 염증을 감소시켰다.

mAb 4A2의 임상적 효능을 추가로 특성화하기 위해, 치료적 투여 실험을 수행하였다. 이러한 모델에서, 어떠한 mAb 처리도 제공하지 않고, 마우스를 면역시켜 OVA 항원에 대한 민감성을 발생시켰다. 그 후 상기 마우스를 역시 어떠한 처리도 없이 3주 동안 휴지한 후, 1% OVA로 내뷸라이져를 이용한 노출의 3기 중 제1 기 전 날에 4A2 mAb로 투여하였다. mAb로의 투여를 제2기 전에 반복하였다. 이러한 처리 프로토콜은 BAL 내로의 호산구 유입에 의해 측정된 바와 같이 폐 염증의 감소를 초래하였다(도 8). 호산구의 백분율을 평균 70%로 감소시켰다(p < 0.001, 평균 당량 시험). 따라서, mAb 4A2는 OVA 유도성 폐 염증 모델에서 예방 및 치료 투여 계획 모두에 유효하였다. 이는 4A2에 의해 인지된 에피토프가 Th2 매개성 질환의 치료에 대한 치료적 관련 표적임을 시사한다.

기타 항-KIM-1 mAb도 또한, 예를 들어, mAb 2A7 및 mAb 2B3을 비롯한 OVA 유도성 폐 염증 모델에서 치료 활성을 나타냄을 증명하였다. mAb 2A7은 Biocore^® 분석시 고정 KIM-1에 결합하기 위해 4A2와 경쟁함을 나타내었으며, 이는 이들이 공유되거나 중첩되는 에피토프를 보유함을 시사하였다.

실시예 4: 항원에 대한 CD4 T 세포 반응에서 KIM -1 항체의 효과

KLH 항원 회수 분석법을 이용하여 항-KIM-1 mAb의 활성을 평가하였다. 마우스를 항-KIM-1 mAb, 대조군 mAb, 또는 PBS로 처리하고, 그 후 KLH로 면역시켰으며 6일 후 배출 LN을 절단하였다. LN CD4+ T 세포를 단리하였고 비처리된 마우스로부터 단리된 방사선으로 조사된 전체 비장 림프구의 존재 하에서 정제된 OVA로 생체 외 재자극하였다. 생체 외 자극 48시간 후 세포질 증식 및 사이토카인 생산을 분석하였다. 이러한 분석에서, 항-KIM-1 mAb 중 몇몇은 현저한 효과를 나타내었다. mAb 1H8은 생체 외 KLH 항원 투여에 반응하여 T 세포 증식을 극적으로 증가시켰다. 대조적으로 mAb 3A2는 상기 분석시 T 세포 증식을 감소시켰다. mAb 1H8로 처리된 세포의 배양액에서 생산된 사이토카인을 측정하였다. 처리된 배양액은 대조군보다 IFN-감마 및 Th2 관련 사이토카인을 더 함유하는 것으로 확인되었다. 대조적으로 TNF 및 IL-2의 수준은 대조군과 유사하였다.

상기 데이터는 1H8이 병원성 Th1 반응을 감소시킬 수 있음을 나타낸다. 상기 데이터는 또한 1H8 및 1H8에 대해 본원에서 정의되는 바와 같은 KIM-1 영역에 결합하는 다른 항체가 면역 반응을 증가시킴으로써 보조제로서 작용할 수 있음도 나타낸다. 본 발명은 또한 면역 반응을 증가시키는, 예를 들어, 백신의 효능을 증가시키는 방법도 포함한다. 이러한 보조성은 또한 백신 접종, 면역 결핍, 및 항-종양 면역에서 이용할 수 있다.

1H8은 웨스턴 블롯에서 Dba/2 서열이 아닌 Balb/C 서열의 KIM-1 ECD에 결합한다. 이는 항체가 서열 EPTTFCPHETTAEVTGIPSHTPT(서열 번호 2)를 포함하는 선택적 스플라이싱 마우스 대립 유전자 변이형에 결합함을 나타낸다. 상기 서열은 인간 KIM-1의 서열 VATSPSSPQPAETHPTTLQGAIRREPTSSPLYSYTT(서열 번호 1의 잔기 200-235)에 대응한다.

실시예 5: mAb 3A2의 특성화

3A2 mAb가 OVA 모델에서 치료 효과를 나타내었기 때문에, KIM-1에 대한 3A2 mAb의 결합을 더욱 상세히 특성화하였다.

다양한 정제 단백질을 ELISA 분석에서 이용하여 mAb 3A2의 에피토프를 결정하였다(표 2). 고정 단백질과 3A2의 상호 작용에 대해서 전체 결합 곡선을 산출하였다(도 5). mAb 3A2는 다음과 같은 마우스 단백질, 즉, 쥐과 KIM-1 세포외 도메인(KIM-1-ECD-1-216), mKIM-1-137-216 및 mKIM-1-196-216-Fc에 동등하게 결합하였다. 대조적으로, mAb 3A2는 전체 뮤신 및 줄기 영역이 결핍된 단독 mKIM-1-IgV 도메인에 결합하는데 실패하였다. 상기 데이터는 3A2에 대한 에피토프가 KIM-1의 줄기 영역 부분에 맵핑되는 mKIM-1로부터의 21개의 아미노산 잔기 196-216 내에 존재함을 나타낸다. 이러한 에피토프는 도 1에 도시되는 바와 같이 인간 KIM-1의 잔기 247-272와 동등하다.

도메인	서열	3A2 결합
mKIM-1-ECD (1-216)	SYVEVKGVVGHPVTLPCTYSTYRGITTTCWGRGQCPSSACQNTLIWTNGHRVTYQKSSRYNLKGHISEGDVSLTIENSVESDSGLYCCRVEIPGWFNDQKVTFSLQVKPEIPTRPPTRPTTTRPTATGRPTTISTRSTHVPTSIRVSTSTPPTSTHTWTHKPEPTTFCPHETTAEVTGIPSHTPTDWNGTATSSGDTWSNHTEAIPPGKPQKNPTK (밑줄 친 영역은 상호적 스플라이싱 엑손에 의해 암호화된다)	유
mKIM-1-IgV (1-109)	SYVEVKGVVGHPVTLPCTYSTYRGITTTCWGRGQCPSSACQNTLIWTNGHRVTYQKSSRYNLKGHISEGDVSLTIENSVESDSGLYCCRVEIPGWFNDQKVTFSLQVKP	무
mKIM-1-137-216 (137-216)	STHVPTSIRVSTSTPPTSTHTWTHKPEPTTFCPHETTAEVTGIPSHTPTDWNGTATSSGDTWSNHTEAIPPGKPQKNPTK	유
mKIM-1-196-216 (196-216)	DTWSNHTEAIPPGKPQKNPTK	유

마우스 KIM-1의 아미노산 196-216(인간 KIM-1의 아미노산 247-272에 대응)을 포함하는 줄기 영역이 N-글리코실화 부위를 포함하기 때문에, N-글리코실화 부위에 결합하는 당 모이어티가 3A2의 결합에 요구되는 지를 측정하는 것은 흥미로웠다. 글리코실화 및 탈글리코실화된 KIM-1-196-216-Fc의 웨스턴 블롯 분석을 수행하였다(도 2). 이러한 분석은 탈글리코실화가 KIM-1-196-216-Fc에 결합하는 3A2의 능력과 충돌하지 않음을 나타내었다. 따라서, 당 모이어티는 이의 에피토프를 인지하는 3A2를 필요로 하지 않는다.

3A2가 세포 표면으로부터 KIM-1의 쉐딩을 억제하는 지를 측정하기 위해, KIM-1로 트랜스펙션된 E293 세포를 5 ㎍/ml 3A2, 25 ㎍/ml 3A2로 또는 3A2가 없는 대조군으로 처리하였다. 3A2로 처리된 세포의 양 세트로부터의 상층액은, 비오틴화된 1H8 항체로 탐침된 웨스턴 블롯을 실시하는 경우, KIM-1 염색에서 대조군과 차이점을 전혀 나타내지 않았다. 이는 3A2가 KIM-1의 쉐딩을 막지 않음을 시사한다.

실시예 6: 4A2 mAb 의 특성화

ELISA 및 Biacore 분석법을 이용하여 mAb 4A2가 쥐과 KIM-1의 Ig-도메인을 인지함을 측정하였다(도 9, 표 1). mAb 4A2에 의해 인지된 에피토프를 추가로 특성화하기 위해, 재조합 쥐과 KIM-1 IgV-인간 IgG1 Fc 융합체를, 단독으로 및 4A2와 복합체로 하여, TPCK 트립신으로 분해하였다. 8kDa의 밴드를 KIM-1 단독으로부터 생성하였으며, 4A2가 결합된 경우에는 생성하지 않았다. 이는 KIM-1에 대한 4A2의 결합이 상기 밴드를 생성하기 위해 요구되는 분절 부위에 대한 트립신의 접근을 차단함을 나타낸다. 비환원 조건 하에서 8kDa 밴드의 분해는 4A2가 인간 KIM-1 서열 GVYCCRVEHRGWFNDMKITVSLEIVPP(서열 번호 1의 아미노산 81-107)에 대응하는 단편을 보호함을 나타내었다. 따라서, 4A2 항체는 적어도 부분적으로 서열 번호 1의 아미노산 81-107 내의, 또는 중첩되는 TPCK 트립신 부위를 보호한다.

동일한 TPCK 트립신 분해 실험을 2A7로 수행하였고 대략 동일한 크기의 밴드를 얻었다. 동일한 실험을 1H9(역시 Ig 도메인에 결합하는 천식 모델에서 효능이 없는 mAb)로 수행한 경우 상기 밴드를 얻지 못했으며, 이는 에피토프가 천식에서 유효하게 일치함을 나타내었다.

본 명세서는 명세서 내에 인용된 참고 문헌의 교시에 비추어 볼 때 가장 철저하게 이해된다. 본 명세서 내의 실시형태는 본 발명의 실시형태를 설명하며, 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되지는 않아야 한다. 당업자는 많은 다른 실시형태가 본 발명에 의해 포함됨을 용이하게 인지한다. 본 개시 문헌에 인용된 모든 공보, 특허, 및 생물학적 서열은 온전히 참고로 인용된다. 참고로 인용된 자료가 본 명세서와 모순되거나 불일치한 범위 내에서는, 본 명세서는 임의의 그러한 자료를 대체할 것이다. 본원에서 임의의 참고 문헌의 인용은 이러한 참고 문헌이 본 발명에 대한 선행 기술임을 인정하는 것은 아니다.

달리 언급되지 않는 한, 청구 범위를 비롯하여 본 명세서에 사용되는 성분, 세포 배양액, 처리 조건 등의 양을 나타내는 모든 수치는 모든 경우에서 용어 "약"에 의해 변경되는 것으로써 이해되어야 한다. 따라서, 반대로 달리 언급되지 않는 한, 수적 파라미터는 근사치이며 본 발명에 의해 얻고자 하는 소정의 특성에 따라 변화할 수 있다. 달리 언급되지 않는 한, 시리즈 또는 구성 성분에 선행하는 용어 "적어도"는 시리즈에서의 모든 구성 성분을 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 당업자는, 단지 일상적 실험 방법을 이용하여, 본원에서 기술되는 본 발명의 구체적인 실시형태에 대한 많은 등가물을 이해하거나 또는 확인할 수 있다. 이러한 등가물은 하기 청구 범위에 의해 포함한다.

SEQUENCE LISTING <110> Biogen Idec MA Inc Rennert, Paul McCoon, Patricia Bailly, Veronique Lugovskoy, Alexey <120> KIM-1 ANTIBODIES FOR TREATMENT OF Th2-MEDIATED CONDITIONS <130> P0643 <150> 60/657,789 <151> 2005-03-02 <160> 2 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 339 <212> PRT <213> human <400> 1 Ser Val Lys Val Gly Gly Glu Ala Gly Pro Ser Val Thr Leu Pro Cys 1 5 10 15 His Tyr Ser Gly Ala Val Thr Ser Met Cys Trp Asn Arg Gly Ser Cys 20 25 30 Ser Leu Phe Thr Cys Gln Asn Gly Ile Val Trp Thr Asn Gly Thr His 35 40 45 Val Thr Tyr Arg Lys Asp Thr Arg Tyr Lys Leu Leu Gly Asp Leu Ser 50 55 60 Arg Arg Asp Val Ser Leu Thr Ile Glu Asn Thr Ala Val Ser Asp Ser 65 70 75 80 Gly Val Tyr Cys Cys Arg Val Glu His Arg Gly Trp Phe Asn Asp Met 85 90 95 Lys Ile Thr Val Ser Leu Glu Ile Val Pro Pro Lys Val Thr Thr Thr 100 105 110 Pro Ile Val Thr Thr Val Pro Thr Val Thr Thr Val Arg Thr Ser Thr 115 120 125 Thr Val Pro Thr Thr Thr Thr Val Pro Thr Thr Thr Val Pro Thr Thr 130 135 140 Met Ser Ile Pro Thr Thr Thr Thr Val Pro Thr Thr Met Thr Val Ser 145 150 155 160 Thr Thr Thr Ser Val Pro Thr Thr Thr Ser Ile Pro Thr Thr Thr Ser 165 170 175 Val Pro Val Thr Thr Thr Val Ser Thr Phe Val Pro Pro Met Pro Leu 180 185 190 Pro Arg Gln Asn His Glu Pro Val Ala Thr Ser Pro Ser Ser Pro Gln 195 200 205 Pro Ala Glu Thr His Pro Thr Thr Leu Gln Gly Ala Ile Arg Arg Glu 210 215 220 Pro Thr Ser Ser Pro Leu Tyr Ser Tyr Thr Thr Asp Gly Asn Asp Thr 225 230 235 240 Val Thr Glu Ser Ser Asp Gly Leu Trp Asn Asn Asn Gln Thr Gln Leu 245 250 255 Phe Leu Glu His Ser Leu Leu Thr Ala Asn Thr Thr Lys Gly Ile Tyr 260 265 270 Ala Gly Val Cys Ile Ser Val Leu Val Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val 275 280 285 Ile Ile Ala Lys Lys Tyr Phe Phe Lys Lys Glu Val Gln Gln Leu Ser 290 295 300 Val Ser Phe Ser Ser Leu Gln Ile Lys Ala Leu Gln Asn Ala Val Glu 305 310 315 320 Lys Glu Val Gln Ala Glu Asp Asn Ile Tyr Ile Glu Asn Ser Leu Tyr 325 330 335 Ala Thr Asp <210> 2 <211> 23 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Glu Pro Thr Thr Phe Cys Pro His Glu Thr Thr Ala Glu Val Thr Gly 1 5 10 15 Ile Pro Ser His Thr Pro Thr 20

Claims

포유동물에서 천식, 아토피, 알러지성 비염, 알러지 또는 습진의 치료에 사용하기 위한, 서열 번호 1의 아미노산 236-269 내에 포함된 에피토프에서 KIM-1의 줄기 영역에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
제1항에 있어서, 항체는

(a) 서열 번호 1의 아미노산 262-270,

(b) 서열 번호 1의 아미노산 260-269,

(c) 서열 번호 1의 아미노산 257-270,

(d) 서열 번호 1의 아미노산 252-270,

(e) 서열 번호 1의 아미노산 236-250, 및

(f) 서열 번호 1의 아미노산 236-258

로 구성된 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 펩티드에 결합하는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
포유동물에서 천식, 아토피, 알러지성 비염, 알러지 또는 습진의 치료에 사용하기 위한, 서열 번호 1의 아미노산 29-42 또는 아미노산 81-107 내에 포함된 에피토프에서 KIM-1의 시알산 결합 모티프에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
제3항에 있어서, 항체는 서열 번호 1의 R86, W92 및 F93 잔기 중 하나 이상에 간섭하는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 천식은 알러지성 천식인 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
포유동물에서 면역 반응을 증가시키는 데 사용하기 위한, 서열 번호 1의 아미노산 200-235 내에 포함된 에피토프에서 KIM-1에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
제1항 내지 제4항 또는 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물은 인간인 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
제1항 내지 제4항 또는 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 인간화 또는 완전 인간 단일 특이적 항체인 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
제1항 내지 제4항 또는 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 전체 길이 항체가 투여되는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
제1항 내지 제4항 또는 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합성 단편이 투여되는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
제10항에 있어서, 항원 결합성 단편은 단일쇄 항체, Fab 단편, F(ab')₂ 단편, Fd 단편, Fv 단편 및 dAb 단편으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
제1항 내지 제4항 또는 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 치료제와 조합되어 투여되는 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
제1항 내지 제4항 또는 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 0.05 내지 20 mg/kg의 투여량으로 투여되는 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
서열 번호 1의 아미노산 236-269 내에 포함된 에피토프에서 KIM-1의 줄기 영역에 특이적으로 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편으로서, 항체는 배양액에서 E293 세포로부터 KIM-1의 쉐딩(shedding)을 억제하지 않는 것인 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편.
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