KR101207562B1 - 안개나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 안개나무 추출물을 유효 성분을 포함하는 화장료 조성물 및 화장 방법에 관한 것으로서, 안개나무 추출물을 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.00001 ~ 30.0 중량%를 함유하는 것을 특징으로 하며, 본 발명에 따른 안개나무 추출물은 멜라닌 생합성 억제 효과, 티로시나아제 활성 저해 효과가 뛰어나 피부 색소침착문제를 해결하여 주는 피부 미백용 화장료 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다. 또한 안개나무 추출물은 우수한 보습효과, 항염효과, 자극완화 효과가 있어 화장료 조성물에 유용하게 사용할 수 있다.

Description

안개나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising the extract of Cotinus coggygria as active Ingredient}

본 발명은 안개나무 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 안개나무를 용매 추출법, 초음파 추출법, 초임계 추출법, 발효법 또는 포제법 등의 다양한 방법으로 처리하여 얻은 안개나무 추출물을 포함하는 피부 미백용, 보습용 및 자극완화용 화장료 조성물 및 화장 방법에 관한 것이다.

인간의 피부는 외부 자극으로부터 보호해주는 기본적인 특징 외에 미용과도 깊은 연관을 가지고 있다. 특히 피부색은 피부 미용의 가장 근본적인 현상을 나타내고 있어 피부색을 조절하는 기작에 대한 연구가 화장품업계에서는 많이 진행되고 있다. 피부색에 영향을 주는 색소로는 멜라닌, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데 이중 가장 중요한 것은 멜라닌으로서, 이 멜라닌의 생합성에 영향을 미치는 가장 큰 요인은 자외선과 체내 호르몬 분비이다. 멜라닌은 자외선을 흡수 또는 산란시켜 자외선으로부터 피부가 손상되는 것을 방지하는데 큰 역할을 하며, 특별한 최대흡수파장이 없이 전 영역의 빛을 흡수한다. 또한 활성 산소종을 제거하는 기능이 탁월하나, 때로는 멜라닌 자체가 활성산소를 발생시키기도 하며, 멜라닌 구조내의 카테콜이나 퀴논에 의하여 다른 물질을 환원시키거나 산화시키고, 멜라닌 자체가 자유라디칼의 성질을 나타내기도 한다. 최근의 노화 예방에 대한 기술은 주로 콜라겐 합성을 촉진해주거나 멜라닌 생합성을 억제하여 피부 색소 침착을 예방하는 방향으로 진행되고 있다.

피부는 다양한 외부 자극으로부터 몸을 보호함과 동시에 내측의 수분을 막는 장벽 기능을 가지고 있다. 이를 위하여 피부의 표피층에서는 분화되는 과정을 통하여 수분을 함유하면서 얇은 각질층(stratum corneum)으로 발달하게 된다. 구조적으로 각질층의 세포들은 벽돌과 같은 역할을 하고, 각질세포의 세포간 지질들은 몰타르로 작용하여 피부 장벽을 구성하게 된다.

그러나, 사람은 나이가 들면서 건조한 피부가 증가하는 경향을 보이며, 실내난방 및 대기 오염 등으로 인해 피부 보습제의 필요가 증가하고 있다. 이를 위해 피부 보습제로 다가 알코올, 당류가 일반적인 보습제로서 화장료에 배합되어 사용되어 왔다. 하지만, 피부에 끈적임이 발생하는 결점이 있고, 피부에 충분한 보습효과를 주지 못하며, 또한 지속적인 보습효과를 주지 못하는 문제점도 있었다. 또한, 습도가 매우 높은 여름철에는 오히려 외부로부터 수분을 끌어와 피부가 끈적이고, 겨울에는 외부 대기의 습도가 낮아 오히려 피부에서 수분을 끌어당겨 오히려 피부가 건조해지는 문제들이 발생하고 있다.

사람의 피부는 상대 습도에 아주 민감하며 통상적으로 상대 습도가 40 - 70%일 때 쾌적한 느낌을 갖는다. 상대 습도는 공기 1m³ 속에 들어있는 수증기량과 같은 온도에서 포화 수증기량의 비를 %로 나타낸 값으로서 우리나라의 경우 여름철에는 습도가 높아 아주 습하며, 겨울철에는 상대 습도가 낮아 대기가 매우 건조하다. 사람의 피부 또한 계절의 변화 및 습도의 변화에 영향을 많이 받는데 고온 다습하여 상대습도가 높은 여름철에는 불쾌감이 증가하고, 건조한 겨울철에는 상대 습도가 낮아 입술이나 피부 또한 건조해져 갈라지거나 때로는 호흡의 곤란을 느끼기도 한다. 이는 상대 습도가 높을 때는 공기 중의 수분을 흡수해 끈적이게 되고, 반대로 상대 습도가 낮으면 피부의 수분이 증발해 건조해 지는 것이다. 특히, 상대 습도가 낮을 때 피부의 건조함은 당김, 가려움증을 동반하는 경우가 많다.

피부의 건조함을 개선하고자 오일, 당, 폴리올 등 다양한 보습제를 이용한 여러 가지 화장료 조성물이 개발되어왔다. 예컨대, 피부 구성 성분인 세라마이드, 콜레스테롤, 지방산 등을 이용하여 피부 장벽 기능을 강화함으로서 피부로부터 증발하는 수분을 억제하거나 피부 표면에서 수분과 결합하는 능력이 강한 당, 폴리올 등을 이용해 피부 수분 보유 능력을 강화해 피부의 보습 효과를 높이고자 하였다. 그러나 상대습도가 낮은 겨울철에는 그 효과를 오랫동안 지속시키기 어렵고, 상대습도가 높은 여름철에는 오히려 불쾌감을 주어 상대 습도의 변화에 따른 적절한 화장료 조성물의 제조에 어려움이 있다.

또한 일반적으로 피부와 관련된 많은 제품은 자극이나 염증을 유발할 수 있는 물질을 함유하고 있어서 개인 관리 제품(Personal care products)을 사용하는 사람 중 10% 이상이 피부에 대한 부작용을 호소하고 있으며, 최근에는 자신의 피부가 민감하다고 느끼는 소비자가 증가하는 추세에 있다. 일반소비자에 대한 의식 조사에서 자신이 민감 피부라고 회답한 비율이 30-40% 이상이며, 이것은 계속 증가 경향을 보이고 있다. 더구나, 최근의 화장품은 피부에 실질적인 효과(real effect)를 줄 수 있는 기능성 화장품(cosmeceutical)에 치중하는 동향이어서 화장품 등의 개인 관리 제품의 사용으로 인한 피부 부작용은 점점 증가할 것으로 예상된다. 특히, 환경오염이 심각해지고 오존층 파괴에 따른 자외선 조사량 증가, 생활공간의 건조화, 개인의 알레르기 체질, 스트레스, 화학 유해물질의 증가 등으로 인해 피부는 쉽게 손상을 받게 되고 이로 인해 여러 가지 자극원들이 발생하여 피부는 쉽게 붉어지거나 민감해지는 현상들이 나타나고 있다.

일반적으로 화장품을 만들기 위해서는 다양한 원료들이 사용되며 통상적으로는 20종에서 50여종까지의 원료를 사용하게 된다. 이들 원료들은 피부 자극 검사를 통하여 그 안전성이 입증되었으나 제품에 적용됨으로써 피부에 염증, 가려움증 및 알레르기 등의 자극을 일으킬 수 있다. 화장품의 사용에 의해 일어날 수 있는 피부 자극에는 가려움(itching), 따끔거림(stinging) 및 화끈거림(burning) 등의 자극감과 홍반(erythema) 및 부종(edema)등이 있다. 접촉성 피부염으로는 자극성 접촉 피부염, 알레르기성 접촉 피부염, 감각성 자극 및 광독성 피부염 등으로 대별할 수 있으나, 이들을 명확하게 구별하기는 어렵다.

최근에는, 외부의 자극으로부터 피부를 보호하기 위한 많은 노력들이 화장품회사 등에서 다양하게 진행되고 있으며 특히 천연물들을 이용하여 다양한 원료들이 개발되고 있는 실정이다.

본 발명자들은 이러한 목적으로 다양한 천연물을 이용하여 제품 개발을 해왔으며, 대표적으로 안개나무로부터 얻어낸 성분들을 이용한 화장료를 개발하기 위해 노력한 결과, 기존 데이터를 바탕으로 본 발명자들은 안개나무를 이용하여 제조된 화장료가 피부 개선에 도움을 준다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명은 상기 종래기술의 문제점을 해결하기 위하여, 안개나무를 이용하여 피부 미백 효과가 우수한 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 안개나무 추출물을 이용하여 피부 보습 효과가 우수한 보습용 화장료를 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 안개나무 추출물을 이용하여 자극완화 효과가 우수한 자극완화용 화장료를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은, 안개나무 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 피부에 적용하여, 미백 효과, 보습 효과 및 자극완화 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장 방법을 제공하는 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적은 안개나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물에 의해 달성된다.

본 발명의 다른 목적은 안개나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 자극완화용 화장료 조성물에 의해 달성된다.

본 발명의 목적은 안개나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 화장료 조성물에 의해 달성된다.

바람직하게는, 상기 안개나무 추출물은 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.00001 내지 30.0%(w/w)를 함유하는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 안개나무 추출물은 안개나무를 물, 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 클로로포름, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법, 초음파 추출법, 초임계 추출법, 미생물을 이용한 발효법 또는 포제법에 의한 추출법으로부터 얻어지는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 미생물은 효모, 유산균, 바실러스균 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 효모는 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)로 배양하여 수득한 추출물인 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 유산균은 락토바실러스, 비피도박테리움, 스트렙토코커스, 류코노스톡, 페디오코커스, 락토코커스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 미생물로 배양하여 수득한 추출물인 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 바실러스균은 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 목적은, 상기한 화장료 조성물을 이용하여 피부에 도포하여, 티로시나아제 활성저해, 멜라닌 생합성 억제, 미백효과, 세포독성완화 효과, 자극완화 효과 또는 보습효과를 갖는 것을 특징으로 하는 화장 방법에 의해 달성된다.

본 발명에 의하면, 안개나무 추출물을 화장료에 첨가함으로써 멜라닌 과생성으로 인해 나타나는 피부 색소 침착을 억제해주어, 미백 효과가 매우 좋은 화장료 조성물을 얻을 수 있다.

보다 상세하게는, 본 발명에 따른 안개나무 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물은 티로시나아제 활성 저해 효과(실험예 1), 멜라닌 생합성 억제 효과(실험예 2), 세포 독성 완화 효과(실험예 3), 항염증 효과(실험예 4), 미백 효과(실험예 5), 피부 보습효과(실험예 6) 및 피부 자극 완화효과(실험예 7)가 우수하다.

따라서, 본 발명의 안개나무 추출물을 포함하는 화장료는 우수한 미백 효과, 보습 효과 및 피부 안전성을 나타내어, 이를 화장료 소재로 개발할 경우 탁월한 피부 개선효과를 기대할 수 있다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 안개나무 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물에서 유효성분으로 이용되는 안개나무(Cotinus coggygria Scop)는 옻나무에 속하는 낙엽활엽관목으로서 남해안을 비롯한 우리나라 각지에서 자생 혹은 식재되어 있는 고급 화목류이다.

한편, 본 명세서에서 용어 “안개나무”는 안개나무의 다양한 기관(예: 잎, 꽃, 열매, 줄기, 가지, 뿌리)을 의미하며, 바람직하게는 안개나무의 가지를 의미한다.

본 발명의 안개나무 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건 하에서, 통상적인 용매를 사용하여(예컨대, 물, 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 1,3-부틸렌글리콜 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 수용액 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 70% 에탄올 수용액을 이용하여 얻어진 것이다.

한편, 본 발명의 안개나무 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

바람직한 구현예에 의하면, 본 발명의 안개나무 추출물의 제조 방법은 다음과 같다. 먼저 안개나무 가지를 정제수로 세척한 후 건조하고 입자의 크기가 300메시 이하가 되도록 작은 조각으로 파쇄한 뒤, 여기에 건조 중량의 1～10배의 물, 탄소수 1～4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 또는 1,3 부틸렌 글리콜 등을 가한다. 그 후 냉각 콘덴서가 장치되어 유효성분이 증발되는 것을 방지한 상태에서 40～100℃에서 3～20시간 가열하여 추출하거나, 4～40℃에서 1～15일간 추출하고 회전 감압 증발기로 완전히 건조시켜 제조한다. 이때 1,3 부틸렌 글리콜의 경우에는 회전 감압 증발기를 이용하여 건조시키기 어려우므로 직접 위의 조건에서 추출한 후 건조 감량이 1%(w/w)되도록 30℃~60℃ 열풍건조기에서 건조하여 본 발명의 화장료에 이용한다.

한편, 본 발명의 안개나무 추출물은 상술한 추출법에 의한 추출물뿐만 아니라, 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 초음파 추출법에 의한 추출물도 포함한다.

상기 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출법은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 의미하는 것으로, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 모두 지니고 있고, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998;479:200-205).

이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다.

지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다.

본 발명의 초임계추출법에 사용되는 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합유체를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다. 이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 디에틸에테르로 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된다.

추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되므로 상기 방법으로 얻은 추출물을 화장료 조성물로서 사용할 수 있으며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다.

초임계 추출법에 의한 안개나무 추출물의 제조방법의 일례로서, 안개나무 추출물을 정제수로 세척한 후 건조하고 300메시 이하의 작은 조각으로 파쇄한 뒤, 시료를 초임계 추출용기에 놓고 액체 크로마토그래피 펌프를 이용하여, 순수한 이산화탄소를 적당한 온도 및 압력에서 초임계 상태로 만들어 흘려보내면서 안개나무 추출물을 시험관에 받는다.

초임계 추출 시에 이산화탄소는 35 내지 100℃, 바람직하게는 50 내지 70℃, 더욱 바람직하게는 약 60℃의 온도에서, 100 내지 500 기압, 바람직하게는 200 내지 400 기압, 더욱 바람직하게는 약 300 기압의 압력 하에 초임계 상태로 만들어주는 것이 좋다.

본 발명의 안개나무의 초음파 추출법은 안개나무 또는 파쇄된 안개나무를 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산, 디에틸에테르 및 이들의 혼합물로부터 선택된 추출 용매에 넣은 후, 초음파 추출기(슈퍼노닉, 미합중국)를 이용하여 25KHz의 강도로 30℃에서 약 1 내지 6시간 동안 추출하는 것이며, 상기 초음파 추출 시간은 추출하고자 하는 시료의 양에 따라 달라질 수 있다.

초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산, 디에틸에테르 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된다.

추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다.

또한, 본 발명의 안개나무 추출물은 통상적인 정제 과정 및/또는 미생물에 의한 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 안개나무 추출물에 포함된다고 해석된다.

또한, 발효과정에서 사용되는 미생물은 효모균, 유산균, 바실러스속 균 및 이의 혼합물이 사용될 수 있으며, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 따른 미생물은 20 내지 40 ℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 7을 유지하면서, 1 내지 7일간 발효시켜 얻어지는 발효물도 본 발명의 안개나무 추출물에 포함되는 것으로 해석된다.

본 발명의 안개나무를 발효시키는데 사용되는 효모는 진핵미생물(핵과 세포질이 핵막에 의하여 나누어져 있는 생물)에 속하며, 세포벽, 세포막, 핵, 사립체, 과립 등 세포 소기관을 갖추고 있다. 성의 구별이 없는 이들은 주로 budding(출아법)으로 번식하는데, 분리된 많은 효모들 중에는 발효능이 없는 것, budding 대신 fission(분열) 혹은 bud-fission 방법으로 증식하는 것, 자낭포자(ascospore)가 아닌 사출포자(ballistospore)를 형성하거나 포자(spore)형성이 관찰되지 않는 것 등 다양한 그룹의 효모도 존재한다. 크기는 보통 5?10㎛로 세균의 5~10배 크기이며, 적정 pH는 4.5-5.5이나 pH 1-10에서도 생존한다. pH 1에서 12시간 생존하는 효모는 박테리아보다 산에 강하므로 배지의 pH를 3.5~3.8 정도로 맞추면 박테리아의 오염을 어느 정도 억제할 수 있다.

효모는 균종에 따라서 조금씩 차이가 있으나, 대부분 20~25℃에서 잘 자란다. 보통은 50℃이상에서는 사멸한다고 하지만 그 온도 이상에서 합성이 되지 않는 성장요소를 배지에 직접 첨가해 줌으로써 어느 정도는 극복이 가능하다. 효모 중에서도 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)의 경우 40℃이상에서 사멸하지만 배지에 올레산(oleic acid)와 에르고스테롤(ergosterol)을 첨가해 줌으로써 이를 방지할 수 있다. 효모 균체 자체는 단세포 식물로서 단백질과 미량광물질을 다량 함유하고 있다. 따라서, 본 발명의 안개나무를 발효시키는데 사용하기에 바람직한 효모는 사카로마이세스 세레비시애이다.

또한 본 발명에서 안개나무를 발효시키는데 사용될 수 있는 유산균은, 포도당 또는 유당과 같은 탄수화물을 분해하여 유산(젖산)이나 초산과 같은 유기산을 생성하는 인체에 매우 유익한 미생물의 일종이다. 일반적으로, 유산균이 당으로부터 유산을 만드는 것을 발효라 하며, 이러한 발효과정을 거쳐서 발효식품이 만들어 진다. 본 발명에서 사용될 수 있는 유산균은 바람직하게는 락토바실러스, 스트렙토코커스, 비피도 박테리움, 류코노스톡, 페디오 코커스, 락토 코커스 및 이들의 혼합물을 포함하며, 가장 바람직하게는 락토바실러스(Lactobacillus)이다. 락토바실러스 중에서도 본 발명의 안개나무를 발효시키는데 사용하기에 가장 바람직한 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)이다.

또한 본 발명에서 안개나무를 발효시키는데 사용된 발효균으로 바실러스(Bacillus)균을 사용할 수 있으며, 바실러스는 포자 형성균으로, 토양이나 물속에 서식하며 대부분 유기물 분해와 관련되어 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 바실러스균은 바람직하게는 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물을 포함하며, 가장 바람직하게는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로서 이 균은 고초균으로도 알려져 있는데, 포도당과 같은 다양한 당류, 전분 등을 혐기적으로 대사하여, 메주나 청국장과 같은 발효 식품 제조에 이용되기도 하는 유기물 분해 미생물이다.

본 발명의 안개나무 발효액은 다음의 단계로 제조될 수 있다:

a) 안개나무 가지를 분말로 만드는 단계;

b) 상기 단계 a)에서 제조된 안개나무 가지 분말을 정제수에 희석한 후 효모균, 유산균, 바실러스균 또는 이의 혼합물을 이용하여 발효시키는 단계;

c) 상기 단계 b)의 발효에 의해 얻은 발효액을 여과하여 저온 숙성하고, 다시 여과하여 안개나무 발효액을 제조하는 단계.

상기 안개나무 발효액의 제조 단계에서, 상기 단계 a)의 안개나무 가지의 분말화는 100 내지 500 메쉬 크기 이하로 제조될 수 있으며, 이에 한정될 필요는 없다.

또한 상기 단계 b)의 발효는 안개나무 가지 분말과 정제수를 1:10으로 혼합한 후 121℃에서 멸균시킨 후 유산균(Lactobacillus sp), 효모균(Sacharomyces sp) 및/또는 바실러스균(Bacillus sp)을 접종하여 배양함으로써 달성된다. 발효 단계에서 사용된 안개나무 분말은 총 배양액 1L를 기준으로, 1 내지 50g의 양으로 사용하는 것이 바람직하다.

또한, 발효단계에 사용된 효모 또는 유산균 및 바실러스 균은 총 배양액 1L 기준으로, 1 X 10⁴ 내지 1 X 10⁵ 세포수의 양으로 접종되는 것이 바람직하며, 각 균주의 성상에 따라 통상적인 조건 및 호기적 또는 통상 혐기(anaerobic)적인 조건에서 배양될 수 있다. 또한, 발효균의 배양을 더욱 활성화시키기 위하여 추가적인 탄소원 및/또는 pH 조절제가 첨가될 수도 있다. 이때 적합한 배양조건은 30 ～ 37℃, pH 5-7의 호기 또는 통상혐기적인 조건에서 바람직하게는 약 1 내지 15일간 배양되며, 더욱 바람직하게는 1 내지 7일간 배양된다.

상기 단계 c)는 단계 b)에서 얻은 발효액을 1차 여과한 후 그 여과액을 저온숙성하는 단계로서, 이때 여과는 0.25 내지 0.45μm 크기의 여과막으로 여과하여, 여분의 안개나무 분말 알갱이 및 발효균을 제거할 수 있다. 1차 여과막으로 분리된 여과액은 저온 숙성하여 안정화 시킬 수 있으며, 1차 여과막에 비해 더 세밀한 여과막으로 2차 여과한 후 농축하여 보관할 수 있으며, 이 농축물을 적절히 희석하여 사용한다. 이때 상기 여과-숙성-여과-농축의 과정은 보다 유효한 효과가 있는 안개나무 발효액을 얻기 위한 공정단계로서, 저온 숙성과정은 0-4 ℃의 온도 범위에서 5 내지 10일 동안 이루어지는 것이 바람직하며, 잔여 균의 확실한 제거를 위하여 2차 여과막의 크기는 0.25μm 이하인 것이 바람직하다.

보다 바람직한 구현예에 따르면, 안개나무 분말을 300 메쉬 크기 이하로 분말화한 뒤 배양액에 10 g/L 첨가하고, 효모균, 유산균, 바실러스균 또는 이의 혼합물을 50,000 cfu/L로 첨가하여 각각 효모는 30℃, 유산균은 37℃, 바실러스균은 37℃, 혼합균의 경우 경우에 따라 30℃ 및 37℃에서 선택하여, pH 5-7, 바람직하게는 약 pH 5.5로 호기적 또는 통성 혐기적인 조건으로 발효조에서 약 1일 내지 7일간 배양하여 발효시킨다. 배양 후 상기 발효액은 0.45μm의 여과막을 이용하여 1차 여과한 다음 이 여과액에 10일간 저온 숙성시킨 후 0.25μm 막으로 2차 여과하여 농축한 뒤 본 발명의 안개나무 발효액을 제조한다. 사용하기 전에 최종 고형분의 농도를 10g/L가 되게 유지한다.

또한, 본 발명의 안개나무 추출물은 포제법을 이용하여 얻어낸 추출물도 포함한다. 포제란 한방이론에 근거하여 약재를 가공 처리함으로써 약재 본래의 성질을 변화시키는 제약 기술이다. 주로 찌거나, 삶거나, 불에 볶거나, 불에 굽거나 달구는 공정 또는 이들이 혼합된 공정의 방법을 말한다. 처리 조건은 삶는 경우 60～100℃, 30분 내지 6시간이고, 찌는 경우 120～180℃, 10분～2시간이고, 굽는 경우 80～100℃, 10분 내지 2시간에서 용이하게 선정한다. 가장 바람직하게는 찌는 과정을 수행하며, 90℃에서 1시간 동안 처리한 후 음건한다.

본 발명에서는 안개나무를 쪄서 건조시킨 후 이를 이용하여 추출물을 제조하였으며, 가장 바람직하게는 포제법으로 얻은 추출물을 추가로 70%에탄올을 이용하여 추출한다. 또한 포제법을 이용한 추출물은 용매 추출법 뿐만 아니라, 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 초음파 추출법에 의한 추출 방법으로 추출하거나 미생물을 이용하여 발효시킬 수 있다.

본 발명의 안개나무 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 발명의 보다 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 안개나무 추출물은 티로시나아제 활성 저해 효과, 멜라닌 생합성 억제 효과, 피부 미백효과, 세포독성 완화 효과, 항염효과, 보습효과 및 자극 완화효과가 우수하며, 피부에 대한 자극이 거의 없으므로 뛰어난 피부 안전성을 가진다.

또한, 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 안개나무 추출물의 함량은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.00001～30.0중량%, 바람직하게는 0.0001～20.0중량%이다. 이때 안개나무 추출물의 총 중량이 0.00001중량% 미만일 때에는 그 효과가 나타나기 어렵고, 30.0중량%를 초과할 때에는 피부에 자극을 유발할 가능성이 높으며 제형의 안정화에도 큰 영향을 미칠 수 있다.

본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 안개나무 추출물 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수(스킨), 영양 화장수(밀크로션), 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 안개나무 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 이용하여 멜라닌 생합성을 억제하고, 티로시나아제 활성을 저해하여 피부 미백효과를 갖는 것을 특징으로 하는 화장방법을 제공한다.

본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 피부에 도포하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 피부 미백 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나, 떼어내고 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 안개나무 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 화장방법을 수행하면, 티로시나아제 활성 저해 및 멜라닌 생합성을 억제하고, 피부 색소 침착을 개선하여 피부 미백 효과를 얻을 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1. 안개나무 추출물 제조

건조된 안개나무 가지 200g을 분말화한 후 300 메시 시브를 이용하여 미세하게 만들었다. 이에 물 및 에탄올의 비율을 3:7 로 조정한 70% 에탄올 수용액 1,000 ㎖를 가하여 실온에서 4일 동안 침출하였다. 이를 여과하고 여액을 진공 농축하여 건조 추출물을 얻었다. 상기 건조추출물을 1%(w/v) 농도가 되도록 50% 1,3-부틸렌 글리콜 용액으로 용해하고 여과한 후 본 발명의 실험에 적용하였다.

실시예 2 ～ 실시예 16. 안개나무 추출물의 제조

실시예 2 ～ 실시예 14는 하기 표 1의 추출용매를 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 같은 방법으로 추출하여 안개나무 추출물을 얻었다.

또한, 실시예 15～16은 통상적인 초임계 추출법(약 60℃의 온도에서 약 300 기압의 압력 하에 초임계 상태에서 공용매를 올리브오일을 이용하여 추출함), 초음파(슈퍼노닉 초음파기기를 이용하여 25KHz의 강도로 30℃에서 약 2시간 동안 추출) 방법을 이용한 추출을 통해 안개나무 추출물을 얻었다. 단, 실시예 15의 경우에는 공용매로 올리브유를 사용하였으며, 실시예 16에서는 공용매로서 정제수를 사용하였다.

구분	추출 용매
실시예 2	정제수
실시예 3	25% 에탄올 수용액
실시예 4	50% 에탄올 수용액
실시예 5	100% 에탄올
실시예 6	80% 메탄올 수용액
실시예 7	100% 메탄올
실시예 8	100% 아세톤
실시예 9	100% 디에틸에테르
실시예 10	100% 헥산
실시예 11	100% 노말-프로판올
실시예 12	100% 이소프로판올
실시예 13	100% 노말-부탄올
실시예 14	100% 에틸아세테이트
실시예 15	초임계 추출
실시예 16	초음파 추출

실시예 17. 안개나무 효모 발효 추출물의 제조

정제수로 세척하고 건조시킨 안개나무 가지를 분말화한 후 300메시 시브를 이용하여 미세하게 만들었다. 이것을 10g/L되게 효모 배양배지(Potato Dextrose Broth, 아큐메디아, 미합중국)에 첨가하였다.

발효에 사용한 효모 균주는 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)를 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 첨가하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 7일간, 30℃, pH 5～7로 유지하며 배양하였다. 배양이 완료된 안개나무 효모 발효액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거한 후 0.25 μM 여과지를 이용하여 최종여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 4℃의 저온 창고에서 약 10일간 숙성시킨 후 이 여과 숙성액을 다시 0.25μM의 여과기를 이용하여 여과하여 본 발명에 사용하였으며, 편의상 이 발효 여과액을 안개나무 효모 발효 추출물이라 칭하였다. 이하 실험에 사용된 안개나무 효모 발효 추출물은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

실시예 18. 안개나무 유산균 발효 추출물의 제조

정제수로 세척하고 건조시킨 안개나무 가지를 분말화한 후 300메시 시브를 이용하여 미세하게 만들었다. 이것을 10g/L되게 유산균 배양배지(Lactobacillus MRS Broth, 디프코, 미합중국)에 첨가하여 혼합한 후 121℃에서 멸균시킨 뒤 유산균을 접종하였다.

발효에 사용한 유산균주는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)을 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 첨가하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 37℃, pH 5～7로 유지하며 배양하였다. 배양이 완료된 안개나무 발효액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거 한 후 0.25μM 여과지를 이용하여 최종여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 4℃의 저온 창고에서 약 10일간 숙성시킨 후 이 여과 숙성액을 다시 0.25μM의 여과기를 이용하여 여과하여 본 발명에 사용하였으며, 편의상 이 발효 여과액을 안개나무 유산균 발효 추출물이라 칭하였다. 이하 실험에 사용된 안개나무 유산균 발효 추출물은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

실시예 19. 안개나무 바실러스 발효 추출물의 제조

정제수로 세척하고 건조시킨 안개나무 가지를 분말화한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 이것을 10g/L되게 바실러스 배양배지에 첨가하였다.

발효에 사용한 바실러스 균주는 바실러스 서브틸리스(고초균; Bacillus subtilis)를 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 첨가하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 37℃, pH 5～7로 유지하며 배양하였다. 안개나무 추출물은 실시예 1 및 실시예 15 내지 실시예 20에서 제조한 추출물을 각각 0.05 M 인산나트륨 완충용액 (pH 6.8)으로 희석하여 각각 농도 1.0%(v/v)가 되도록 시료액을 제조하였다. 배양이 완료된 안개나무 발효액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거 한 후 0.25 μM 여과지를 이용하여 최종여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 4℃의 저온 창고에서 약 10일간 숙성시킨 후 이 여과 숙성액을 다시 0.25μM의 여과기를 이용하여 여과하여 본 발명에 사용하였으며, 편의상 이 발효 여과액을 안개나무 바실러스 발효 추출물이라 칭하였다. 이하 실험에 사용된 안개나무 바실러스 발효 추출물은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

실시예 20. 안개나무의 포제법 추출

본 발명의 안개나무의 포제법 추출물을 얻기 위하여, 삶거나, 찌거나, 불에 볶거나, 불에 굽거나 달구는 공정 또는 이들이 혼합된 공정은 다음과 같이 실시하였다. 즉, 정제수로 세척하고 건조시킨 안개나무 가지를 분말화한 후 300메시 시브를 이용하여 미세하게 만든 후, 찌는 온도 90℃, 1시간 조건으로 실시한 후 음건하였다. 이렇게 하여 만든 안개나무의 포제법 추출물은 추가로 70% 에탄올 용액을 이용하여 추출하였다.

실험예 1: 안개나무 추출물의 티로시나아제 활성 저해 실험

기질로는 인산나트륨 완충액(pH 6.8)에 용해한 1.5 mmol/ℓ의 티로신(시그마사, 미합중국) 40㎕를 사용하였다. 실시예 1, 15-20에서 제조한 안개나무 추출물을 각각 0.05 M 인산나트륨 완충용액 (pH 6.8)으로 희석하여 각각 농도 1.0%(v/v)가 되도록 시료액을 제조하였다. 티로신 40㎕에 상기 농도별 시료액 240 ㎕을 각각 첨가하고, 상기 용액에 티로시나아제 (시그마사, 1500 U/㎖) 20 ㎕을 첨가한 후 37℃에서 15분 동안 반응시킨 다음, 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때, 양성대조군으로는 안개나무 추출물 대신에 통상적으로 티로시나아제 활성 저해 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 알부틴 1.0%를 사용하였다. 흡광도 측정 시 대조군으로는 안개나무 추출물 대신에 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)을 사용하였다.

하기 수학식 1에 의하여 티로시나아제의 활성 저해율(%)을 계산하였으며 실험 결과는 하기 표 2에 기재하였다.

안개나무 추출물의 티로시나아제 활성 저해 효과

시험 물질	티로시나아제 활성저해율(%)
실시예 1(안개나무의 70%에탄올 수용액 추출물)	78.8
실시예 15(안개나무의 초임계 추출물)	75.8
실시예 16(안개나무의 초음파 추출물)	73.2
실시예 17(안개나무 효모 발효 추출물)	73.6
실시예 18(안개나무 유산균 발효 추출물)	73.5
실시예 19(안개나무 바실러스 발효 추출물)	73.4
실시예 20(안개나무의 포제법 추출물)	76.8
양성대조군(알부틴)	68.8

상기 결과를 통해, 안개나무 추출물(실시예 1, 15~20)은 티로시나아제 활성 저해 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 알부틴에 비하여 동일 농도(1.0%)에서 티로시나아제 활성 저해효과가 우수함을 확인할 수 있었고, 이로부터 본 발명의 안개나무 추출물이 티로시나아제 활성을 저해하여 피부 색소 문제를 해결할 수 있음을 알 수 있었다.

실험예 2 : 안개나무 추출물의 멜라닌 생합성 억제 실험

B-16 세포(쥐 멜라노마 세포, 한국세포주은행)를 6-웰 플레이트 (well plate)에 1× 10⁵ cell/well이 되도록 접종한 후에 24시간 배양하였다. 실시예 1 및 실시예 15 내지 실시예 20에서 제조한 안개나무 추출물을 각각 0.05 M 인산나트륨 완충용액 (pH 6.8)으로 희석하여 각각 농도 1.0%(v/v)가 되도록 시료액을 제조하였다. 각 웰에 안개나무 추출물을 각각 1.0%(v/v)를 처리하고 3-4일 동안 배양한 후 각 웰의 배양액을 원심 분리하였다. 분리된 세포는 디메틸설폭사이드(DMSO)에 용해한 1N NaOH 용액 500㎕로 용해하여 10분간 90℃ 수욕 (water bath)에서 가열하고, 상등액을 채취하여, 이 상등액을 490㎚에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로는 안개나무 추출물 대신 통상적으로 멜라닌 생합성 억제 효과가 있는 것으로 알려진 알부틴 1.0%를 사용하였다. 대조군으로는 안개나무 추출물 대신 0.05 M 인산나트륨 완충용액 (pH 6.8)을 사용하였다.

멜라닌 생합성 억제율(%)은 하기 수학식 2에 따라 계산하였으며, 그 결과는 표 3에 나타나 있다.

안개나무 추출물의 멜라닌 생합성 억제 효과

시험 물질	멜라닌 생합성 억제율(%)
실시예 1 (안개 나무의 70% 에탄올 추출물)	74.8
실시예 15 (안개 나무의 초임계 추출물)	76.4
실시예 16 (안개 나무의 초음파 추출물)	75.8
실시예 17 (안개 나무 효모 발효 추출물)	73.4
실시예 18 (안개나무 유산균 발효 추출물)	73.3
실시예 19 (안개나무 바실러스 발효 추출물)	73.2
실시예 20 (안개 나무의 포제법 추출물)	72.8
양성대조군 (알부틴)	66.4

상기 결과를 통해, 안개나무 추출물을 처리한 경우는 양성대조군인 알부틴에 비하여 동일 농도(1.0%)에서 멜라닌 생합성 억제효과가 우수함을 확인할 수 있었으며, 또한 이로부터 안개나무 추출물이 멜라닌 생합성을 억제하여 피부 색소 문제를 해결할 수 있음을 알 수 있었다.

실험예 3. 안개나무 추출물의 세포 독성 억제 효과

본 발명의 실시예에 따른 안개나무 추출물의 세포 독성 억제 효과를 알아보기 위하여 MTT 분석법을 통하여 독성여부를 확인하였다. MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyl-tetrazolium bromide) assay는 세포의 성장을 알아보는 방법 중 하나로, 수용성의 노란색 tetrazolium salt MTT는 살아있는 세포에서 청자색의 비수용성인 formazan crystal로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 이용하는 검사법이다. 그리고, 세포 증식율이 95% 이상일 경우 세포에 안정하기 때문에 적정 사용농도를 확인하기에 적당한 것이다. 섬유아세포(Fibroblast, 한국세포주은행)를 48-웰 플레이트에 각 웰당 1× 10⁵ cells/well로 접종하여 1.0㎖의 DMEM (Dulbecco Minimum Essential Medium) 배지에서 24시간 동안 배양한 후, 각 웰당 실시예의 안개나무 추출물을 처리하여 다시 24시간 동안 배양하였다. 배양한 플레이트는 0.5 ㎎/㎖ MTT 용액(시그마, 미합중국)을 첨가한 후 4 시간 후에 배지를 제거하고 1.0 ㎖의 DMSO 용액으로 세포를 용해하였고, 그 반응액을 ELISA Reader(Molecular Device, 미합중국)를 이용하여 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이 때 안개나무 추출물을 처리하지 않은 무처리군을 대조군으로 하여 하기 수학식 3에 따라 세포의 증식율을 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 4 에 기재하였다.

시험 물질	세포증식율(%)
실시예 1 (안개나무의 70% 에탄올 추출물)	113.5
실시예 17 (안개나무의 효모 발효 추출물)	119.2
실시예 18 (안개나무의 유산균 발효 추출물)	115.5
실시예 20 (안개나무의 포제법 추출물)	118.2
대조군	100.0

상기 표 4의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명의 추출물은 상대적으로 고농도에서도 섬유아세포에 대하여 세포독성을 나타내지 않으므로, 본 발명의 안개나무 추출물은 용매추출법, 미생물 발효법, 포제법에 의한 추출물 모두 100% 이상의 세포증식율을 나타내었다. 이러한 결과로서, 본 발명의 안개나무 추출물은 세포독성에 대해서 상당히 안전함을 확인할 수 있었다.

실험예 4. 안개나무 추출물의 항 염증 효과 - 카라키난 족 부종 실험

본 발명의 안개나무 추출물이 항염증 효과를 나타내는지 확인하기 위하여 카라키난 족 부종 (Carrageenan foot edema) 실험을 수행하였다. 실시예 1에서 얻은 안개나무 추출물을 각각 10-100mg/kg 용량으로 복강에 투여한 후 1시간 뒤 0.1% 카라기난 용액 0.5ml를 실험동물의 뒷발바닥에 주입하여 염증을 유발하였다. 카라기난 주입 직후와 주입 후 4시간 경과 후의 쥐의 발부피의 변화를 측정하여 하기 수학식 4에 따라 부종 억제율을 계산하였으며, 결과는 하기 표 5에 나타내었다

상기 수학식에서 △V는 발 부피의 변화이다.

부종 억제율(%)

안개나무 추출물 투여량(mg)	부종 억제율(%)
10	12.6
20	25.3
50	43.2
100	65.8

상기 표 5의 결과에서 보는 바와 같이, 카라키난 족 부종 실험을 통하여 안개나무 추출물의 투여량에 의존적으로 부종 억제율 효과가 상승함을 알 수 있었고, 따라서 안개나무 추출물에 의한 항염증 효과가 상승함을 알 수 있다.

이하 상기한 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명의 안개나무 추출물을 포함하는 화장료를 조성하여 제시한다. 그러나 본 발명의 조성물을 하기의 처방예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.

처방예 1: 수렴화장수

안개나무 추출물을 함유한 화장료 중 수렴화장수의 처방예는 다음과 같다.

성 분	함량(단위:중량%)
안개나무 추출물 글리세린 1.3-부틸렌글리콜 알란토인 DL-판테놀 이.디.티.에이-2NA 벤조페논-9 소듐 히아루로네이트 니콜 HCO 60 메틸 파라벤 향, 증류수	0.5 5.0 3.0 0.1 0.3 0.02 0.04 5.0 0.4 0.2 0.01 잔량
합 계	100

처방예 2: 영양화장수

안개나무 추출물을 함유한 화장료 중 영양화장수의 처방예는 다음과 같다.

성분	함량(단위:중량%)
안개나무 추출물 글리세릴 스테아레이트SE 스테아릴 알콜 라놀린 폴리솔베이트 60 솔비탄스테아레이트 경화식물유 광물유 스쿠알란 트리옥타노인 디메치콘 초산토코페롤 카르복시비닐폴리머 글리세린 1.3-부틸렌글리콜 소듐히아루로네이트 트리 에탄올아민 메틸파라벤 향 증류수	2.0 1.5 1.5 1.5 1.3 0.5 1.0 5.0 3.0 2.0 0.8 0.5 0.12 5.0 3.0 5.0 0.12 0.2 0.02 잔량
합계	100

처방예 3: 영양크림

안개나무 추출물을 함유한 화장료 중 영양크림의 처방예는 다음과 같다.

성 분	함량(단위:중량%)
안개나무 추출물 친유형 모노스테아린산글리세린 세테아릴알콜 스테아린산 밀납 폴리솔베이트 60 솔비탄스테아레이트 경화식물유 스쿠알란 광물유 트리옥타노인 디메치콘 소듐마그네슘실리케이트 글리세린 베타인 트리에타올아민 소듐히아루로네이트 메틸파라벤 향 증류수	3.0 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 0.2 0.05 잔량
합계	100

처방예 4. 마사지 크림

마사지 크림의 처방예는 통상의 방법에 따라 다음 표 9과 같이 제조하였다.

성분	함량(단위:중량%)
안개나무 추출물 친유형 모노스케아린산 글리세린 스테아릴알콜 스테아린산 폴리솔베이트 60 솔비탄스테아레이트 이소스테아릴이소스테레이트 스쿠알란 광물유 디메치콘 히드록시에칠셀룰로오스 글리세린 트리에타올아민 방부제, 향, 색소 정제수	3.0 1.5 1.5 1.0 1.5 0.6 5.0 5.0 5.0 0.5 0.12 6.0 0.7 미량 잔량
합 계	100

처방예 5. 에센스

에센스의 제형예는 통상의 방법에 따라 다음 표 10과 같이 제조하였다.

성분	함량(단위:중량%)
안개나무 추출물 글리세린 베타인 피이지 1500 알란토인 DL-판테놀 이.디.티.에이-2Na 벤조페논 - 9 히드록시에칠 셀룰로오스 소듐히아루로네이트 카르복시비닐폴리머 트리에탄올아민 옥틸도데칸올 옥틸도데세스 -16 에탄올 방부제, 향, 색소 정제수	5.0 10.0 5.0 2.0 0.1 0.3 0.02 0.04 0.1 8.0 0.2 0.18 0.3 0.4 6.0 미량 잔량
합계	100

처방예 6. 팩

팩의 처방예는 통상의 방법에 따라 다음 표 11과 같이 제조하였다.

성 분	함량(단위:중량%)
안개나무 추출물 폴리비닐알콜 셀룰로오스 검 글리세린 피이지1500 사이크로데스트린 DL - 판테놀 알란토인 글리시리진산모노암모늄 니코틴아미드 에탄올 피이지 40 경화피마자유 향, 색소, 방부제 정제수	3.0 15.0 0.15 3.0 2.0 0.15 0.4 0.1 0.3 0.5 6.0 0.3 미량 잔량
합계	100

실험예 5: 안개나무 효모 발효 추출물을 함유한 화장료의 미백 효과 실험

20～40세의 특히 피부가 검은 한국 여성 20명을 대상으로 본 발명의 화장료 조성물의 미백 효과 실험을 실시하였다.

실험군으로 실시예 17의 안개나무 효모 발효 추출물 3.0%를 함유한 화장료를 사용하였으며, 그 조성물은 하기 표 12에 나타내었다. 대조군으로 안개나무 효모 발효 추출물 대신 동량의 정제수를 함유한 화장료 및 양성대조군으로 미백효과가 있는 것으로 알려진 물질인 알부틴을 함유하는 화장료를 이용하여 실험을 실시하였다.

성 분	함량(단위:중량%)
안개나무 효모 발효 추출물 친유형 모노스테아린산글리세린 세테아릴알콜 스테아린산 밀납 폴리솔베이트 60 솔비탄스테아레이트 경화식물유 스쿠알란 광물유 트리옥타노인 디메치콘 소듐마그네슘실리케이트 글리세린 베타인 트리에타올아민 소듐히아루로네이트 메틸파라벤 향 증류수	3.0 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 0.2 0.05 잔량
합계	100

실험은 먼저 대조군과 안개나무 효모 발효 추출물이 함유된 화장료를 20명의 피검자 각각 얼굴의 양쪽면에 적용 하였다. 실험자(20세-40세의 여성) 20 명을 2개의 군으로 나누어, 한 군에는 얼굴 오른쪽 부위에 안개나무 효모 발효 추출물이 함유된 화장료를, 얼굴 왼쪽 부위에는 대조군이 함유된 화장료를, 또한 한 군에는 양성 대조군이 함유된 화장료를 각각 1일 2회씩 연속 8주간 도포하였다. 측정 장비로는 Minolta CR 300을 사용하였으며 8주 동안 측정하였다. 실험 결과는 8주에 찍은 피부 밝기값(Lightness)인 L값과 실험 시작 전인 0주에 찍은 L값의 차이를 △L 값으로 나타내어 비교하였으며 그 결과는 하기 표 13에 나타나있다.

구분	대조군	안개나무 효모 발효추출물	양성대조군(알부틴)
△L 값	0.168	0.764	0.436

상기 표 13에 나타난 바와 같이, 안개나무 효모 발효 추출물을 함유한 화장료의 △L 값이 대조군 및 양성대조군의 화장료에 비하여 높게 측정되어, 본 발명의 안개나무 추출물을 함유하는 화장료의 미백 효과가 우수한 것으로 나타났다. 또한 피부 미백 효과가 있는 것으로 알려진 알부틴을 함유하는 화장료에 비해서 현저히 우수한 피부 밝기 변화(△L 값)를 확인할 수 있었다. 따라서 본 발명의 안개나무 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 매우 우수한 미백 효과를 갖고 있음을 알 수 있다.

실험예 6. 안개나무 효모 발효 추출물을 함유하는 화장료의 피부 보습력 개 선효과

6-1. 기기평가

본 발명의 안개나무 효모 발효 추출물을 함유하는 화장료의 피부 보습력 개선효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였다. 피부 질환이 없는 20-40대 40명을 대상으로 1조 당 20명 씩 2개조로 나누고, 각 조별로 본 발명의 안개나무 효모 발효추출물을 함유하는 유연 화장수 조성물을 하기 표 13의 조성으로 제조하였으며, 이를 처방예 7이라 하였다. 이때 비교를 위하여, 안개나무 효모 발효추출물이 포함되지 않은 대조예를 함께 제조하고, 매일 2회씩 1개월간 얼굴 및 전박부에 도포하게 하였다.

성분	처방예 7	대조예
안개나무 효모 발효추출물	3.0	-
글리세린	5.1	5.1
프로필렌글리콜	4.2	4.2
토코페릴아세테이트	3.0	3.0
유동파라핀	4.6	4.6
트리에탄올아민	1.0	1.0
스쿠알란	3.1	3.1
마카다미아너트오일	2.5	2.5
폴리솔베이트60	1.6	1.6
솔비탄세스퀴롤레이트	1.6	1.6
프로필파라벤	0.6	0.6
카르복실비닐폴리머	1.5	1.5
향	미량	미량
방부제	미량	미량
정제수	잔량	잔량
계	100	100

미리 도포 시작 전 항온, 항습 조건(24도, 습도 40%)에서 corneometer(CM820 courage Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 피부 전도도를 측정하여 기본 값을 삼고, 1주, 2주, 4주 경과 후의 피부 전도도를 측정하여 그 증가율을 평가하였다. 그 결과를 하기 표 15에 나타내었다.

피부 전도도 증가율(%)

시료	1 주 후	2 주 후	4 주 후
처방예 7 (안개나무 효모 발효추출물)	57	63	58
대조예 (정제수)	11	13	12

상기 표 15의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 안개나무 효모 발효추출물을 함유하는 화장료인 처방예 7의 경우 대조예에 비하여 피부 전도도 증가율이 매우 우수하였다. 일반적으로 피부 전도도는 피부 수분량에 비례하므로, 상기의 결과로부터 본 발명에 안개나무 효모 발효추출물을 함유하는 화장료는 정제수를 함유하는 화장료에 비해 피부 수분 함량도 높게 유지한다는 것을 확인할 수 있다. 따라서, 본 발명의 안개나무 효모 발효 추출물을 함유하는 화장료는 피부 보습력 개선 효과가 탁월함을 알 수 있다.

6-2. 임상평가

상기 처방예에 따라 제조된 화장료 조성물에 대한 임상 보습 효과를 다음과 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 20명을 선정한 후 상박을 10개 사이트로 나눈 후 각 시료를 1일 2회씩 4주간 도포하게 하였다. 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820 (Corage +Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였다. 상기 실험 결과는 하기 표 16에 나타나 있다.

안개나무 효모 발효추출물의 피부 보습력 개선 효과

구분	TEWL(g/h/m2)
	사용 전	사용 2주후	사용 4주후
처방예 7 (안개나무 효모 발효추출물)	32.5	48.6	58.8
대조예 (정제수)	32.6	33.6	34.6

상기 표 16에 나타난 바와 같이, 사용 2주 후 및 사용 4주 후 보습력 개선 효과 측정 결과, 본 발명의 안개나무 효모 발효추출물을 함유하는 화장료를 사용하면 추출물 대신에 정제수를 사용하는 경우보다 보습력 개선 효과가 매우 우수함을 확인할 수 있었다.

실험예 7. 피부 안전성 비교

안개나무 효모 발효추출물이 포함된 화장료의 피부 안전성 비교를 위하여 안개나무 효모 발효추출물과 자극원으로 AHA 및 레티놀이 포함된 화장료 조성물을 하기 표 17의 조성으로 제조하였다.

안개나무 효모 발효추출물과 자극원이 함유된 화장료(중량%)

성분	대조예	실시예 1	실시예 2	실시예 3	비교예 1	비교예 2
안개나무 효모 발효추출물	-	3.0	3.0	3.0	-	-
AHA	-	-	5.0	-	5.0	-
레티놀	-	-	-	0.1	-	0.1
글리세린	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
프로필렌글리콜	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0
유동파라핀	4.6	4.6	4.6	4.6	4.6	4.6
트리에탄올아민	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
스쿠알란	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
마카다미아너트오일	2.5	2.5	2.5	2.5	2.5	2.5
폴리솔베이트60	1.6	1.6	1.6	1.6	1.6	1.6
솔비탄세스퀴롤레이트	1.6	1.6	1.6	1.6	1.6	1.6
카르복실비닐폴리머	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
향	미량	미량	미량	미량	미량	미량
방부제	미량	미량	미량	미량	미량	미량
정제수	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량
계	100	100	100	100	100	100

상기 표 17의 조성으로 제조된 실시예 1 내지 실시예 3, 대조군 및 비교예 1 내지 2의 화장료 조성물을 20?30대 여성 20명을 대상으로 피부 자극 확인실험을 하였다. 피검자들에게 상기 화장료 조성물을 이용하여 피검자의 상박에 첩포하고 24시간 경과 후 피부 자극 유무를 확인하였다.

피부 자극 효과

피부 반응 정도	대조예	실시예 1	실시예 2	실시예 3	비교예 2	비교예 3
홍반 없음	10	15	12	13	-	-
아주 경미한 홍반	10	5	7	7	2	4
명료한 홍반	-	-	1	-	18	16
중증 홍반	-	-	-	-	-	-

상기 표 18의 결과에서 보는 바와 같이, 화장료를 이용한 임상실험 결과 안개나무 효모 발효추출물은 AHA 및 레티놀에 의한 피부 자극을 완화시켜주는데 매우 높은 효과를 보여주었으며 특히, 아무것도 처리하지 않은 일반 제형에서의 자극을 완화시켜주는 효과도 보였다. 이는 본 발명의 안개나무 효모 발효추출물이 화장품 원료에 의한 피부 자극들을 현저하게 줄여주는 효과가 있다는 것을 보여주는 것이다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (10)

1. 안개나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
2. 안개나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 자극완화용 화장료 조성물.
3. 삭제
4. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 안개나무 추출물은 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.00001 내지 30.0%(w/w)를 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 안개나무 추출물은 안개나무를 물, 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 클로로포름, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법, 초음파 추출법, 초임계 추출법, 미생물을 이용한 발효법 또는 포제법에 의한 추출법으로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
6. 제 5항에 있어서, 상기 미생물은 효모, 유산균, 바실러스균 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
7. 제 6항에 있어서, 상기 효모는 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)로 배양하여 수득한 추출물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
8. 제 6항에 있어서, 상기 유산균은, 락토바실러스, 비피도박테리움, 스트렙토코커스, 류코노스톡, 페디오코커스, 락토코커스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 미생물로 배양하여 수득한 추출물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
9. 제 6항에 있어서, 상기 바실러스균은 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
10. 삭제