KR101115196B1 - 2-아미노벤조일 유도체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 2-아미노벤조일-알킬아민, -알킬아미드 및 -알킬티오아미드, 그리고 이들의 다양한 생리적 증상의 치료 또는 예방에의 적용에 관한 것이다.

2-아미노벤조일-알킬아민

Description

2-아미노벤조일 유도체{2-AMINOBENZOYL DERIVATIVES}

본 발명은 새로운 2-아미노벤조일 유도체, 이를 포함하는 약학 제제, 및 다양한 질병의 치료 또는 예방을 위한 이 화합물의 의약 제조에의 사용에 관한 것이다.

본 발명은 대체로 새로운 화합물, 치료에 있어서의 이들의 사용, 및 이를 함유하는 약학 제제에 관한 것이다.

아미노산 트립토판은 생물학적으로 "키누레닌 경로(kynurenine pathway)"를통해 전환된다(Beadle, G. W., Mitchell, H. K., and Nyc, J. F., Proc. Nat. Acad. SC., 33,155 (1948); Charles Heidelberger, Mary E. Gullberg, Agnes Fay Morgan, and Samuel Lepkovsky TRYPTOPHAN METABOLISM. I. CONCERNING THE MECHANISM OF THE MAMMALIAN CONVERSION OF TRYPTOPHAN INTO KYNURENINE, KYNURENIC ACID, AND NICOTINIC ACID. J. Biol. Chem. (1949) 179: 143-150을 참조하라). 섭취되는 모든 트립토판의 95% 이상이 키누레닌으로 대사된다(Wolf, H. - Studies on tryptophan metabolism in man. Scand J Clin Lab Invest 136(suppl.J: 1-186, 1974). 주변 조직, 특히 간에서, 트립토판의 인돌 고리는 트립토판 디옥시게네이즈 또는 인돌아민 2,3-디옥시게네이즈 중 하나에 의해 수정되는데, 이는 포 르밀키누레닌을 형성하게 된다. 키누레닌 포밀레이즈는 그 후 포르밀키누레닌을 키누레닌 경로에 있어 핵심 화합물인 L-키누레닌으로 재빨리 전환시킨다(W. Eugene Knox and Alan H. Mehler THE CONVERSION OF TRYPTOPHAN TO KYNURENINE IN LIVER. I. THE COUPLED TRYPTOPHAN PEROXIDASE-OXIDASE SYSTEM FORMING FORMYLKYNURENINE J. Biol. Chem. (1950) 187: 419-430). L-키누레닌은 혈액, 뇌 및 주변 기관들 중에 낮은 농도로 존재하며, 큰 천연 아미노산 캐리어를 통해 혈액-뇌 장벽을 쉽게 통과할 수 있다. L-키누레닌은 포유동물 조직에서 세 개의 다른 효소들에 의해 대사된다: 3-히드록시키누레닌(3-HK)을 형성하는 키누레닌 3-히드록실레이즈; 안쓰라닐산을 형성하는 키누레니네이즈 및 키누렌산을 형성시키는 키누레닌 아미노트랜스퍼라제(KAT). 3-HK는 동일한 KAT에 의해 대사되어 대사적으로 안정한 경로 부산물인 잔투렌산(xanthurenic acid)을 생성하거나, 또는 키누레니네이즈에 의해 대사되어 궁극적으로 퀴놀린산으로 전환되는 3-히드록시안쓰라닐산을 생성시킨다. 최종적으로, 퀴놀린산은 퀴놀린산 포스포리보실트랜스퍼레이즈에 의해 대사되어 니코틴산 모노뉴클레오티드 및 최종 생성물 NAD⁺를 포함하는 연속 분해 산물을 생성한다.

키누렌산, 3-히드록시키누레닌 및 퀴놀란산은 모두 이 이화작용 흐름(catabolic cascade)의 신경자극성 중간체들이다. 3-히드록시키누레닌은 자유 라디칼 생성체로서 아폽토시스(apoptosis), 엑시토톡시시티(excitotoxicity)의 강화, 백내장 형성, 신경퇴행성 질병, 뇌졸증, 외상성 상해(traumatic injury), 신경바이 러스성(neurovirological) 질병 및 신경염증(neuroinflammation)을 유도하는 것으로 보여지고 있다. 퀴놀린산은 N-메틸-D-아스파테이트(NMDA) 수용체 아고니스트이며 자유 라디칼 생성체로서, 그로 인해 엑시토톡시시티, 신경퇴행성 질환, 뇌졸증, 외상성 뇌 상해, 간질, 대뇌 말라리아(cerebral malaria), 주산기 저산소증(perinatal hypoxia), 신경바이러스성 질병 및 신경염증을 일으킬 수 있다. 내생 퀴놀린산은 NMDA 수용체 아고니스트로 이끌어 엑티토톡시시티 및 신경독성을 촉진하여 NMDA 수용체에 의해 중재되는 생리적 및 병리학적 과정으로 이끌 수도 있다. 세 가지 신경활성 키누레닌 중, 키누렌산(KYNA)이 최근 가장 주목받고 있다. 20년 전 신경억제 화합물로서 처음 기술된 KYNA는 비생리학적인 높은 농도에서 이온통로성(ionotropic) 글루타메이트 수용체의 광역 스펙트럼 안타고니스트이다. 높은 농도의 KYNA는 경련억제제이며, 따라서 엑시토톡식 상해에 대해 우수한 보호 효과를 제공한다. 훨씬 낮은 농도에서는, KYNA는 NMDA 수용체의 글리신 코아고니스(coagonist)의 경쟁적 블로커(blocker) 및α7 니코틴 아세틸콜린 수용체의 비경쟁적 억제제로서 작용한다. KYNA의 이들 두 CA^{2 +}-침투성 수용체에 대한 친화도가 인간 뇌에서의 KYNA 수준의 범위에 있다는 것 및 쥐 뇌의 (보다 낮은) KYNA 농도에 꽤 근접하다는 사실은 글루타메이트성 및 콜린성 신경전달에서의 생리학적 작용을 암시한다. 그러한 역할에 대한 직접적인 뒷받침은, 예를 들어, KYNA 수준에 있어서의 감소가 엑시토톡식 손상에 대한 취약성을 증가시키는 반면, 역으로 KYNA의 완만한 증가가 글루타메이트 분비를 억제하는 래트 선조체(striatum)에서의 in vivo 연구에 의해 보여진다(Schwarcz R. Pellicciari R. Manipulation of brain kynurenines: glial targets, neuronal effects, and clinical opportunities. J Pharmacol Exp Ther. 2002: 303: 1-10).

키누레닌이 신경퇴행성 및 졸중풍(seizure) 질환의 병리생리학에 관여할 뿐만 아니라 많은 원인적으로 다양한 CNS 질병에서도 어떤 역할을 할 것이라고 제안되고 있기 때문에, 그것의 형성을 조절하는 것은 중요하다. 우리는 여기 기술된 2-아미노벤조일 유도체(키누레닌과 같은 화합물들)가 그러한 치료적 개입을 위해 유용할 것으로 제안한다. 제안되는 활성 기작은, 이에 제한되지 않으나, 키누레닌 경로 내에서 효소를 억제하고, 및/또는 중간체 화합물들을 억제하고, 및/또는 자유 라디칼 형성을 억제함으로써 달성될 수 있을 것이다.

본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물:

(I)

및 이들의 입체이성질체 및 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것으로서, 상기 화학식에서,

A는 C1-6 알킬렌; R, R1 및 R2는 독립적으로 수소, 할로, 할로알킬, 아릴, 헤테로시클릭 기, 헤테로아릴 기, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴알킬, 아릴알케닐, 아릴알키닐, 히드록시알킬, 니트로, 아미노, 시아노, 시안아미도, 구아니딘, 아미디노, 아실아미도, 히드록시, 티올, 아실옥시, 아지도, 알콕시, 카르복시, 카르보닐아미도, S-알킬 또는 알킬리올(alkylyhiol)이고;

X는 >C1-6 알켄, >C=O 또는 >C=S 또는 단일 결합이고;

Y는 수소, 할로, 할로알킬, 아릴, 헤테로시클릭 기, 헤테로아릴 기, 알킬, 알케닐, 일키닐, 아릴알킬, 아릴알케닐, 아릴알키닐, 히드록시알킬, 니트로, 아미노, 시아노, 시안아미도, 구아니딘, 아미디노, 아실아미도, 히드록시, 티올, 아실옥시, 아지도, 알콕시, 카르복시, 카르보닐아미도, 또는 수소, 할로, 할로알킬, 아릴, 헤테로시클릭 기, 헤테로아릴 기, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴알킬, 아릴알케닐, 아릴알키닐, 히드록시알킬, 니트로, 아미노, 시아노, 시안아미도, 구아니딘, 아미디노, 아실아미도, 히드록시, 티올, 아실옥시, 아지도, 알콕시, S-알킬, 알킬리올 또는 -COQ 로부터 독립적으로 선택되는 4 개 이하의 치환체에 의해 고리-치환될 수 있는 스티릴이며, 이때 상기 Q는 히드록시, C1-6 알콕시, 아미노, 모노-C1-6 알킬아미노, 디-C1-6 알킬아미노, 히드록실아미노, C1-4 알콕시아미노 또는 아릴-C1-4-알콕시아미노이되,

(a) X가 >C=O, Y가 메틸, A가 CH₂CH₂, R이 5-메톡시, R1이 H 또는 포르밀, 및 R2가 H인 화합물, (b) -A(R2)-NH-X-Y 잔기가 -CH₂CH(COQ)-NH₂ 또는 -CH(할로알킬)-CH(COQ)-NH₂인 화합물, 및 (c) X가 단일 결합이고 Y는 아릴알킬이며 A가 CH₂CH₂CH₂ 이고 R1 및 R2가 모두 H이며 R은 4-할로이고 이때 -CO-A(R2)-NH-X-Y 잔기는 표현된 벤젠 고리의 1-위치에 있는 것으로 간주되는 화합물은 제외한다.

본 발명 화합물들의 일반성에 대한 편견 없이, 현재 바람직한 화합물들의 서브-그룹(화학식 II)은 R이 수소, 메틸 또는 메톡시, R1은 수소 또는 포르밀, R2는 수소 또는 카르복실, 그리고 R3은 수소, 할로, 할로알킬, 아릴, 헤테로시클릭 기, 헤테로아릴 기, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴알킬, 아릴알케닐, 아릴알키닐, 히드록시알킬, 니트로, 아미노, 시아노, 시안아미도, 구아니딘, 아미디노, 아실아미도, 히드록시, 티올, 아실옥시, 아지도, 알콕시, 카르복시, 카르보닐아미도, S-알킬 또는 알킬리올, 및 이들의 입체 이성질체 및 약학적으로 허용가능한 염들이라는 점에 의해 정의된다.

(II)

본 발명 화합물의 또 다른 서브-그룹은 화학식 (I)에서 X가 2-푸릴, 2-디히드로푸릴, 2-테트라히드로푸릴 또는 (2-R⁰-COO-)페닐이며, 이들 중 어떤 것도 C1-4 알킬, C1-4 알콕시, OH, 니트로로부터 선택되는 1-2 개 치환체에 의해 치환될 수 있고, 또한 Y는 수소, 또는 할로겐, C1-4 알킬, C1-4 알콕시, OH, 니트로, 아릴, 아릴-C1-4 알킬, 또는 아릴-C1-4 알콕시로부터 독립적으로 선택되는 2개 이하의 치환체에 의해 고리-치환되는 스티릴이라는 점으로 정의되며, 이들의 입체 이성질체들 및 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
본원 명세서 및 청구범위에서 "아릴"은 방향족 핵으로부터 수소 원자를 제거함으로써 방향족 화합물로부터 유도되는 일가 라디칼을 의미한다.

본 발명은 그 범위 내에서 또한 활성 물질로서 치료적으로 효과량의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 가능한 임의의 이성체, 또는 화학식 (I)로써 표현될 수 있는 이성체들의 혼합물 및 하나 또는 그 이상의 약학적으로 허용 가능한 희석제, 보존제, 가용화제, 에멀션화제, 아쥬번트, 부형제 및 담체, 특히, 약학적 및 수의학적 제제에서 통상적으로 사용될 수 있는 것들을 함유하는 약학적 제제 또한 포함한다. 본 발명의 약학 제제는 인간 및/또는 동물에게 투여하기 위해 적용될 수 있다.

화학식(I)의 화합물은 뇌졸증, 허혈증(ischemia), CNS 외상(trauma), 저혈당증(hypoglycemia) 및 외과수술과 관련되는 신경 손상을 최소화하거나, 및/또는 치료 및/또는 예방에 유용한데, CNS 질환으로는 알쯔하이머병, 근위축성 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis), 헌팅턴 병(Huntington's disease), 파킨슨씨 병, 다운 증후군과 같은 신경퇴행성 질병을 포함하며, 흥분성 아미노산의 과도 자극의 부작용, 정신성 질환, 예컨대, 수면성 질환, 간질 및 다른 경련성 질환, 불안(anxiety), 정신질환, 정신병(psychosis), 노인성 치매, 멀티-인프랙트(multi-infract) 치매, 만성 통증(analgesia: 통각상실증), 녹내장, CMV 망막염, 요실금, 및 무감각증의 유도를 치료 또는 예방할 뿐만 아니라, 인지를 향상시키고, 투여 내성 및 금단 증상을 예방할 수 있다.

현재 고려되고 있는 증상들에 대해 좀 더 연구하거나 설명함으로써, 본 발명 화합물을 투여하는 것에 의한 치료에 대해 수정할 수도 있을 것인데, 그러한 증상들은 발기부전; 고혈압을 비롯한 심장혈관성 질환, 혈액 응집 예방, 항-염증, 신경장해(neuropathy), 시간생물학에 기초한 질환(chronobiological-based disorders), 예컨대, 시차적응(jet lag), 지연성 수면 증후군, 노동시간 이동에 따른 문제(work-shift problems), 및 계절-관련 질환들, 예를 들어 계절성 질환(seasonal affected disorders: SAD); 내분비성 지시, 예컨대, 피임 및 불임, 사춘기조숙증, 월경전증후군, 고프로락틴혈증, 및 성장호르몬 결핍증; 암 및 다른 증식성 질환(양성 및 종양성 전립선 성장)과 같은 신생물질 질환, AIDS와 같은 면역체계 질환, 노쇠화와 관련된 증상들, 안과관련 질환, 군발성두통(cluster headache), 편두통, 피부-보호, 당뇨 안정화 및 체중 증가 질환(렙틴(leptin) 및 비만) 등을 포함하며, 동물 사육에서도 수태, 성숙, 털가죽 색상 등을 조절하는 데에도 도움이 될 수 있다.

본 발명 화합물의 일반성에 대한 편견 없이, 앞서 이미 언급한 서브-그룹들에 더하여, 바람직한 또 다른 서브-그룹은 화학식(I)에서 X가 2,4-디니트로페닐기이고 A가 CH₂CH₂ 또는 CH₂CHCOOH 이며 Y가 각각 수소인 것으로 정의된다.

본 발명 화합물의 또 다른 서브-그룹은 화학식 (I)에서 R2가 수소이고 하기 조건들 중 적어도 하나가 적용되는 것인데, 이는: R이 5-메톡시; 및/또는 A가 CH₂CH₂ 또는 CH₂CHCOOH, 그리고 이들 서브-그룹 내에서, R1이 바람직하게 또한 수소이다. 본 발명 화합물들에 있어 X와 Y의 예시적인 조합으로는, 특히 R1이 H인 경우, 하기와 같다:

X가 -CO- 이고 Y가 2-푸릴이거나; 또는

X가 -CO- 이고 Y가 2-테트라히드로푸릴이거나; 또는

X가 -CH₂- 이고 Y가 2-테트라히드로푸릴이거나; 또는

X가 -CO- 이고 Y가 2-아세톡시페닐이거나; 또는

X가 -CO- 이고 Y가 3,4-디히드록시스티릴 또는 3,4-디히드록시시남오일옥시.

본 발명은 또한 그 범위 내에서 활성 물질로서 치료적 유효량의 화학식(I)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 임의의 가능한 이성체, 또는 화학식 (I)로써 표현될 수 있는 이성체들의 혼합물을, 하나 또는 그 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제, 보존제, 가용화제, 에멀션화제, 아쥬번트, 부형제 및 담체, 특히 약학적 및 수의학적 제제에서 통상적으로 사용되는 것들을 함유하는 약학제제를 포함한다. 본 발명에 따른 약학적 제제들은 인간 및/또는 동물에게 투여하기 위해 적용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 제제는 바람직하게 하기 특징들 중 적어도 하나에 의해 특징지워진다:

(i) 경구, 직장내, 장관외(parenteral), 하악골내(transbuccal), 폐내(intrapulmonary)(예컨대 흡입에 의해) 또는 경피 투여에 적합하다;

(ii) 단위 투여량 형태일 수 있으며, 각 단위 투여량은 0.0025-1000 mg의 범위 내에 있는 상기 적어도 하나의 화합물의 일정량을 포함한다;

(iii) 조절된 방출 제제일 수 있으며, 상기 적어도 하나의 화합물은 소정의 조절 속도로 방출될 수 있다.

경구 투여를 위하여, 상기 약학 제제는 정제, 캡슐, 에멀션, 용액, 시럽 또는 현탁액과 같은 형태로 사용될 수 있다. 비경구 투여를 위하여, 상기 제제는 앰퓰 또는 현탁액, 용액 또는 에멀션 등이 수성 또는 유성 담체 내에 포함된 것과 같은 형태로 사용될 수 있다. 현탁, 안정화 및/또는 분산제에 대한 필요성은 물론, 특정 실시예에서 사용되는 담체 내에서의 용해도 또는 활성 화합물의 다른 성질을 위하여 고려될 수 있을 것이다. 상기 제제는 또한 생리학적으로 적합한 보존제 및 항산화제를 포함할 수 있다. 예컨대 크림, 로션 또는 페이스트와 같은 국소 투여를 위한 제제에 있어서는, 활성 성분은 통상의 유성 또는 에멀션화 부형제와 함께 혼합될 수 있다.

상기 약학 제제는 또한 코코아 버터 또는 다른 글리세라이드와 같은 통상의 좌약 기제들과 함께 좌약으로서 사용될 수도 있다. 또는, 상기 제제는 활성 제제를 체내에서 천천히, 미리 정해진 시간 동안 방출하는 데포(depot) 형태로 제조될 수도 있다. 또한, 본 발명의 화합물들은 하악골내, 폐내 또는 경피 전달 시스템을 사용하여 투여될 수도 있다.

화학식(I)의 화합물들 및 그들의 염의 다른 활성 성분들, 특히 다른 신경억제약, 감정억제약(thymoleptics), 불안억제약(anxiolitics), 신경안정제(trnaquilizer), 진통제, 항파킨슨씨 약물(도파민성 및 비-도파민성 약물) 등과의 조합 또한 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 화합물은 뇌졸증, 허혈, CNS 외상, 저혈당증 및 외과적 수술, 알쯔하이머병, 근위축성 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis), 헌팅턴 병(Huntington's disease), 파킨슨씨 병, 다운 증후군과 같은 신경퇴행성 질병을 비롯한 CNS 질환과 관련된 신경 손상을 최소화 및/또는 예방 및/또는 치료하는데 유용하며, 흥분성 아미노산의 과도 자극의 부작용, 정신성 질환, 예컨대, 수면 질환, 간질 및 다른 경련성 질환, 불안(anxiety), 정신 질환, 정신이상(psychosis), 노인성 치매, 멀티-인프랙트(multi-infract) 치매, 만성 통증(analgesia: 통각상실증), 녹내장, CMV 망막염, 요실금, 및 무감각증의 유도를 치료 또는 예방할 뿐만 아니라, 인식을 향상시키고, 투여 내성 및 금단 증상을 예방할 수 있다.

현재 고려되고 있는 증상들에 대해 좀 더 연구하거나 설명함으로써, 본 발명 화합물을 투여하는 것에 의한 치료에 대해 수정할 수도 있을 것인데, 그러한 증상들은 발기부전; 고혈압을 비롯한 심장혈관성 질환, 혈액 응집의 예방, 항-염증, 신경장해(neuropathy), 시간생물학에 기초한 질환(chronobiological-based disorders), 예컨대, 시차적응(jet lag), 지연성 수면 증후군, 노동시간 이동에 따른 문제(work-shift problems), 및 계절-관련 질환들, 예를 들어 계절성 질환(seasonal affected disorders: SAD); 내분비성 지시, 예컨대, 피임법 및 불임, 사춘기조숙증, 월경전증후군, 고프로락틴혈증, 및 성장호르몬 결핍증; 암 및 다른 증식성 질환(양성 및 종양성 전립선 성장)과 같은 신생물질 질환, AIDS와 같은 면역체계 질환, 노쇠화와 관련된 증상들, 안과관련 질환, 군발성두통(cluster headache), 편두통, 피부-보호, 당뇨 안정화 및 체중 증가 질환(렙틴(leptin) 및 비만) 등을 포함하며, 동물 사육에도 수태, 성숙, 털가죽 색상 등을 조절하는 데에도 도움이 될 수 있다.

본 발명은 하기 실시예에 의해 설명될 것이다. 하기 실시예는 오직 예시적인 것으로 이해되어야 하며 어떤 의미에서도 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

실시예 1: 2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민.

키누라민.2HBr(125mg)을 50cc 플라스크 내 5cc의 완전 에탄올에 녹인다. 그 후 5cc 에탄올 내 71 mg으로 녹아있는 2,4-디니트로플루오로벤젠 용액을 첨가한다(맑은 황색 용액이 형성된다). 5분 후, 2cc의 10% NaHCO₃ 용액을 상기 플라스크 내로 적가한다. 밤새 상온에서 반응이 일어나도록 둔다. 이튿날 아침 생성된 엷은 황색 침전을 여과하고, 물과 에탄올로 세정한 후, UHV 에서 건조시켜 80mg의 생성물을 얻었다(약 63% 수율).

실시예 2: 3-(2-아미노벤조일)-2-(2,4-디니트로아닐리노)프로파논산.

L-키누레닌(125mg)을 50cc 플라스크 내 5cc의 완전 에탄올에 녹인다. 그 후 5cc 에탄올 내 71 mg으로 녹아있는 2,4-디니트로플루오로벤젠 용액을 첨가한다(맑은 황색 용액이 형성된다). 5분 후, 2cc의 10% NaHCO₃ 용액을 상기 플라스크 내로 적가한다. 밤새 상온에서 반응이 일어나도록 둔다. 이튿날 아침 생성된 엷은 황색 침전을 여과하고, 물과 에탄올로 세정한 후, UHV 에서 건조시켜 80mg의 생성물을 얻었다(약 71% 수율).

본 발명은 또한 화학식(I)의 약학적으로 허용가능한 염, 및 화학식(I)에 의해 표현되는, 각각의 그리고 혼합물 형태의 가능한 이성체들도 포함한다.

본 발명 화합물의 생물학적 테스트

실험예 1:

L-Dopa의 서브극치 투여량을 받거나 받지 않은 MPTP-처리된 마우스를 사용한 항-파킨슨성 활성의 측정

동물: 체중 22-25g의 6개월된 수컷 C57 BL/6 마우스를 사용하였다. 실험실에 도착한 후, 마우스들은 조절된 온도(21±1℃) 및 일정한 빛-어둠 스케쥴(12 시 간 온(on)/12 시간 오프(off), 오전 6시부터 오후 6시 사이에 빛을 켜놓음)로 조절된 방에서 2주 동안 적응시켰다. 사료 및 물에 대해서는 지속적으로 자유롭게 접근할 수 있도록 하였다. 12 마리씩 함께 있도록 하였으며, 빛이 있는 시간 동안에만 테스트하였다(오전 8시에서 오후 3시 사이). 모든 테스트는 정상적으로 채광된 방에서 수행하였다. 각 테스트 챔버(예를 들어 활성 테스트 케이지)는 12cm 두께의 벽과 앞쪽 패널을 가지는 방음 처리된 나무 상자 내에서 놓였으며 흐리게 조명되었다.

행동 측정 및 장치: 두 개의 일련의 적외선 빔(두 상이한 높이, 즉 1cm 두께로 쌓여있는 톱밥 표면으로부터 각각 2cm 및 8cm 높이에 위치하는) 내에 각각 놓인 마크롤론(macrolon) 설치류 테스트 케이지들(40 X 25 X 15 cm)을 사용하여 MPTP 및 대조군 마우스의 자발적인 및/또는 약물-유도된 운동 활성을 측정하였다. 하기 변수들을 측정하였다: 이동(LOCOMOTION)은 낮은 위치의 적외선 빔으로 측정하였다. 마우스가 수평면 상에서 테스트-케이지 주위를 돌아다닐 때에만 계수를 기록하였다. 뛰어오름(REARING)은 전체 시간을 통해 적어도 한번 높은 위치의 빔을 건드릴 때 기록하였는데, 즉, 기록된 계수의 수치는 뛰어오름에 걸린 시간의 양에 비례하였다. 총 운동성(TOTAL ACTIVITY)은 테스트 케이지와 지속적으로 접촉하고 있는 센서(카운터웨이트(counterweight)가 있는 지렛대 상에 장착된 축음기의 바늘과 유사한 픽업(pick-up))에 의해 측정하였다. 상기 센서는 이동 및 뛰어오름 뿐 아니라 흔듦(shaking), 떨림(tremors), 긁음(scratching) 및 털고르기(grooming) 등에 의해 발생하는 것과 같은, 테스트 케이지로부터 수용되는 모든 타입의 진동을 기록 하였다.

행동 측정(이동, 뛰어오름 및 총 운동성): MPTP 주사(2 X 40 mg/kg, s.c., 24 시간 간격) 12 일 후에, 마우스들에게 2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민 (0.3, 1, 2, 10 mg/kg) 또는 담체(10% DMSO, 1% CMC)를 주사하고, 그 후 바로 활동 테스트 챔버로 옮겨 그들의 운동 행동을 60 분간 모니터하였다. 60 분 후, 마우스에게 5mg/kg의 L-Dopa(s.c)를 주사하고, 그 후 테스트 챔버에 넣어 240 분간 더 활동 측정을 계속하였다. 각각의 투여는 최소 투여로부터 시작하여 이틀씩 간격을 두어 시행하였다.

표 1은 서브극치 투여량의 L-Dopa로 투여된 담체 또는 2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민으로 투여된 MPTP-처리된 것 및 대조군 마우스의 평균(±표준편차) 이동, 뛰어오름 및 총 운동성을 나타낸다. 1% 수준의 중요도를 별표(*)로써 표시하였다.

처치	이동(Locomotion)	뛰어오름(Rearing)		총 운동성 (Total Activity)
담체	1000±145	920±181		10937±2812
MPTP + 담체	200±90	225±72		4530±937
MPTP + 0.3mg/kg 2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민	273±64	290±73		5160±1093
MPTP + 1mg/kg 2-(2아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민	473±108*	582±145*		6250±625*
MPTP + 3mg/kg 2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민	510±107*	73±110*		6563±781*
MPTP + 10mg/kg 2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민	470±110*	619±102*		6250±625*

2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민은, MPTP-처리된 담체 마우스와 비교하여, L-Dopa 처리 전 처음 60 분의 기간 동안 어떤 투여량에서도 아무런 효과도 일으키지 않았다. 그러나, 2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민은 서브극치 투여량의 L-Dopa와 함께 투여했을 때 세 가지 행동 변수 모두를 개선하였다. 2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민(1, 3 또는 10 mg/kg)은 MPTP 담체 군에 비하여 MPTP-처리된 마우스의 이동, 뛰어오름 및 총 운동성을 현저히 개선하였다.

담체 대조 동물에 투여된 2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민은 임의의 변화에 있어 어떤 영향도 나타내지 않았다.

실험예 2:

신선하게 분리된 래트의 해마신경세포(hippocampal neurons) 내 NMDA-활성화 전류의 전기생리학적 특성.

해마신경세포의 분리: 위스타 래트(Wistar rats)(12-14 일령)를 마취 없이 참수하여 해면세포를 꺼냈다. 그것을 150mM NaCl, 1.25mM NaH₂PO₄, 2mM CaCl₂, 2mM MgCl₂, 26mM NaHCO₃, 20 mM 글루코즈를 함유하는 용액 내에서 수동으로 작은 조각들(0.2-0.4mm)로 잘랐다. 조각들을 상기 용액 내 상온에서 30 분간 예비배양하였다. 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae)로부터 분리한 프로테아제 0.4mg/ml을 함유하는 보다 낮은 Ca²⁺ 농도(0.5mm)를 함유하는 동일한 용액 내에서 효소적 처리를 행하였다. 효소 용액 내 배양은 32℃에서 10분 내에 행하였다. 이어, 조각들을 정상 Ca²⁺ 농도를 함유하는 효소 없는 용액 내에 유지하고, 분리된 신경세포를 얻은 지로부터 6-8 시간 내에 사용하였다. 전체 공정을 통하여, 용액은 95% O₂ 및 5% CO₂ 가스 혼합물로 지속적으로 포화시켜 pH 7.4 를 유지하였다. 세포 분리(dissociation)를 위하여 조각들을 150 mM NaCl; 5mM KCl; 2mM CaCl₂; 10mM N-2-히드록시에틸피페라진-N'-2-에탄설폰산(Hepes)을 함유하며 NaOH로 조정된 pH 7.4를 유지하는 세포 외 용액 내로 옮겼다. 단세포들은 진동분리법(vibrodissociation method)에 의해 해마 조각의 CA 및 CA3 영역으로부터 분리되었다. 그 직경은 10-15μm 였으며, 수지상(dendritic tree)의 작은 부분을 보존하였다. 분리 후 그것들은 1-2 시간 동안 기록하기에 적절하였다.

생리식염수 및 화학물질: 세포외 용액의 성분은 다음과 같았다: 130 mM NaCl, 5mM KCl, 2 mM CaCl₂, 20 mM N-2-히드록시에틸피페라진-N'-2-에탄설폰산 (Hepes ), 0.1μm 글리신, 300μm l-아스파레이트; pH는 NaOH로 7.4로 조정하였다.

세포내 용액의 성분은 다음과 같았다: 110 mM CSF, 20 mM Tris-HCl (ph=7.2). L-아스파테이트 및 글리신 용액은 실험 당일 제조하였다.

테스트된 물질 2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민은 DMSO에 녹였다.

전류 기록 및 데이타 분석: 약물 함유 용액을 "점핑 테이블" 셋업(set-up)(Pharmaa Robot, Kiev)을 이용한 빠른 "농도 클램프"에 의해 적용하였다. 전체 세포 컨피규레이션(configuration) 내에서 패치 클램프 테크닉(patch clamp technique)으로 전류를 기록하였다. 전류의 기록은 EPC-7 L/M 패치클램프 증폭기를 사용하여 수행되었다.

NMDA -활성화된 전류: NMDA 활성화된 전류를 위하여 전류를 3 kHz에서 포인트 당 6000μs의 속도로 필터하여 디지탈적으로 샘플화하였다. NMDA-유도된 트랜스막 전류를 10μM 글리신 및 300μM L-아스파테이트의 존재 하에 대조군 및 테스트 용액 내에서 측정하였다. 홀딩(holding) 전위-70mV 에서 전류를 기록하였다.

계산: 물질의 상이한 농도에서의 전류의 억제를 최소 4개 세포에 대하여 평균화하였다. 물질의 영향을 I/Io의 평균 비율로 측정하였는데, 여기서 I는 물질 작용 하의 전류이고 Io는 대조군 조건에서의 전류이다. S.D.는 표준편차를 나타낸다.

NMDA-활성화된 전류 상에서의 10μM 2-(2-아미노벤조일)-n-2,4-디니트로페닐에틸아민의 작용

2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민 10μM	개별 세포 : I/Io
	1	2	3	평균	± SD
	92, 77	77, 15	80, 17	83, 36	8, 28

이 실험은 2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민이 NMDA 수용체 상에 방어활성(blocking activity)을 가짐을 나타낸다.

2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민이 NMDA 수용체 상에 방어활성(blocking activity)을 가짐을 나타낸다.

Claims (11)

1. 하기 화학식(II)의 화합물 및 이들의 입체 이성질체 및 약학적으로 허용 가능한 염:

   

   (II)

   상기 식에서, R은 수소이고, R₁은 수소이며, R₂는 수소 또는 카르복실이고, 및 R₃은 수소이다.
2. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 3-(2-아미노벤조일)-2-(2,4-디니트로아닐리노)프로판산인 화합물, 및 이의 입체 이성질체 및 약학적으로 허용 가능한 염.
3. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 2-(2-아미노벤조일)-N-(2,4-디니트로페닐)에틸아민인 화합물, 및 이의 입체 이성질체 및 이의 약학적으로 허용가능한 염.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 하나 이상의 화합물을 포함하는 뇌졸증, 허혈, CNS 외상, 저혈당증 및 외과적 수술, 신경퇴행성 질환을 비롯한 CNS 질병, 흥분성 아미노산의 과도 자극, 정신질환, 간질 및 다른 경련성 질환, 불안(anxiety), 정신병(psychosis), 노인성 치매, 멀티-인프랙트(multi-infract) 치매, 만성 통증(무통각증), 녹내장, CMV 망막염, 요실금, 및 무감각증의 유도, 인지 향상, 투여 내성 및 금단 증상의 예방, 발기부전; 고혈압을 비롯한 심장혈관성 질환, 혈액 응집 예방, 신경장해(neuropathy), 항염증, 시간생물학에 기초한 질병(chronobiological-based disorders), 계절-관련 질병, 내분비성 지시, 피임 및 불임, 사춘기조숙증, 월경전증후군, 고프로락틴혈증, 및 성장호르몬 결핍증, 암, 다른 증식성 질환(양성 및 종양성 전립선 성장), 면역체계 질환, 노쇠화와 관련된 증상, 안과관련 질환, 군발성두통(cluster headache), 편두통, 피부-보호, 당뇨 안정화 및 체중 증가 질환으로부터 선택되는 생리학적 증상의 치료 또는 예방, 및 동물 사육에 사용하기 위한 약학적 조성물.
5. 제4항에 있어서, 희석제, 보존제, 가용화제, 에멀션화제, 아쥬번트, 부형제 및 담체로부터 선택되는 약학적으로 허용가능한 하나 이상의 성분을 추가로 포함하는 약학적 조성물.
6. 제5항에 있어서, 하기 특징들 중 하나 이상에 의해 더욱 특징되는 약학적 조성물:

   (i) 경구, 직장내, 장관외(parenteral), 하악골내(transbuccal), 폐내(intrapulmonary) 또는 경피 투여에 적합하다;

   (ii) 단위 투여량 형태일 수 있으며, 각 단위 투여량은 0.0025-1000 mg의 범위 내에 있는 상기 하나 이상 화합물의 일정량을 포함한다;

   (iii) 조절된 방출 제제로서, 상기 하나 이상의 화합물이 소정의 조절된 속도로 방출된다;

   (iv) 신경억제약(neuroleptics), 감정억제약(thymoleptics), 불안억제약(anxiolitics), 신경안정제(trnaquilizer), 진통제 및 항파킨슨씨 약물로부터 선택되는 하나 이상의 공지의 치료적으로 활성인 성분을 더 포함한다.
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