KR101068160B1 - Ｃ형 간염 바이러스 ｒｎａ핵산 중합효소의 활성을 저해하는 신규 플라보놀 유도체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 신규한 플라보놀 유도체 및 이를 이용한 C형 간염 바이러스 RNA 핵산 중합효소 (Hepatitis C virus RNA-dependent RNA polymerase, HCV RdRp)의 저해제 및 그 화합물의 C형 간염 치료제의 용도에 관한 것이다.

플라보놀 유도체 (Flavonol derivatives),C형 간염 바이러스 (Hepatitis C Virus),RNA 핵산 중합효소 저해제

Description

Ｃ형 간염 바이러스 ＲＮＡ핵산 중합효소의 활성을 저해하는 신규 플라보놀 유도체{A novel flavonol derivative for inhibiting the activit of HCV RNA-dependent RNA polymerase}

본 발명은 신규 플라보놀 유도체 및 그것의 C형 간염 바이러스 RNA 핵산 중합효소의 활성을 저해하는 특성 및 C형 간염 치료 및/또는 예방용 조성물에 대한 용도이다.

수혈 후 간염의 주원인이 되는 바이러스가 1989년도에 발견되었으며, 이를 C형 간염 바이러스(HCV)로 명명하였다. 그 후로도, A형, B형 및 C형 간염 이외에 여러 유형의 간염 바이러스가 발견되었으며, 이 중에서 HCV에 의해 유발된 간염을 C형 간염으로 지칭하였다. HCV에 감염된 대상체는 전세계 인구의 수 퍼센트를 차치하는 것으로 여겨지고 있으며, HCV 감염은 특징적으로 만성으로 분류된다.

HCV는 게놈이 단일 가닥 (+)-가닥 RNA인 외피 보유 RNA 바이러스로, 플라비바이러스(Flavivirus)의 헤파시바이러스(Hepacivirus) 속에 속한다 (바이러스 분류 에 대한 국제 위원회, 미생물 학회의 국제 연합회로부터의 분류법 참조). 동일한 간염 바이러스 중에서, 예를 들어 DNA 바이러스인 B형 간염 바이러스(HBV)는 면역계에 의해 제거되며, 아직 면역 능력이 성숙하지 못한 신생아 및 유아를 제외하고는 이러한 바이러스로 감염되었을 때 급성 감염이 유발된다. 이와 달리, HCV는 알려지지 않은 메카니즘에 의해 숙주의 면역계를 어떻게든 피해간다.

HCV에 감염되면, 성숙한 면역계를 갖고 있는 성인에서조차 지속적인 감염이 빈번하게 발생한다.

전세계적으로 약 1억7천만명의 C형 간염 환자가 분포되어 있으며, 매년 3-4백만명의 신규 감염 환자가 발생하고 있다. 감염된 환자들 중 약 80% 가량이 만성간염으로 발전하며 궁극적으로는 이들 중 상당수가 간경변(20%) 및 간암(5%)으로 발전할 가능성을 가지고 있다. C형 간염에 대한 백신은 아직까지 개발되지 않았으며, 또한 현재 사용되고 있는 유일한 치료법인 인터페론 α-2a와 리바비린(ribavirin)의 복합처방은 여러 가지 부작용(감기증세, 발열, 피로, 간질환, 빈혈, 백혈구감소증, 탈모, 혈소판감소증 및 우울증)과 제한된 효능(전체 C형 간염의 60%를 차지하는 genotype 1에 대한 효능이 genotype 2 및 3에 대한 효능보다 현저히 떨어짐)으로 인해 그다지 큰 치료효과를 기대하기 어렵다Fried, M. W.; Shiffman, M. L.; Reddy, K. R.; Smith, C.; Marinos, G.; Goncales, F. L., Jr.; Haussinger, D.; Diagom M.; Carosi, G.; Dhumeaux, D.; Craxi, A.; Lin, A.; Hoffman, J.; Yu, J. N. Engl. J. Med. 2002, 347, 975-982).. 따라서, 새로운 C형 간염 치료제 개발에 대한 연구가 전세계적으로 매우 활발하게 진행중이다.

C형 바이러스성 간염은 만성화율이 대단히 높으며(70-80%), 일단 만성화되면 간경화, 간기능 상실, 간암으로 발전하여 높은 사망률을 보이는 특징을 가지고 있다(Ago, H.; Adachi, T.; Yoshida, A.; Yamamoto, M.; Habuka, N.; Yatsunami, K.; Miyano, M. Structure 1999, 7, 1417-1426). B형 간염은 백신과 치료제의 보급으로 그 비중이 점차 줄어들고 있지만 C형 간염의 경우 백신이나 적당한 치료제가 없으므로 상대적 비중이 커지고 있는 실정이다. C형 간염바이러스 감염자 수는 전 세계 인구의 2-3% 정도로(2억 7천만 ~ 3억) 추산되고 있으며, 우리나라에서는 인구의 1% 정도가 감염되어 있는 것으로 추산되어진다. 또한, 매년 100,000명중 13명의 비율로 신규 감염환자가 발생하고 매년 8,000-10,000명 정도가 C형 간염으로 사망하는 것으로 보고되고 있으며, 현재 만성화된 C형 간염보균자들이 긴 잠복기를 거친 후 증상이 악화되어 생명을 위협받게 되는 말기 간질환 혹은 간경화로 발전하게 되는 10-20년 후쯤에는 심각한 사회적 문제로 대두될 것으로 예상된다. 현재 이용되고 있는 유일한 항-HCV 치료법은 Pegylated interferon과 리바비린(ribavirin)의 combination therapy이나 낮은 반응률(HCV genotype 1 환자의 50% 에서만 효과가 입증됨), 장기간 인터페론 치료시 심각한 독성, 내성의 발현, 투약 중단 후 빠른 재발 등의 심각한 문제(Manns, M. P.; Foster, G. R.; Rockstroh, J. K.; Zeuzem, S.; Zoulim, F.; Houghton, M. Nature Reviews Drug Discovery 2007, 6, 991-1000)가 있어 근원적인 치료법의 개발이 절실히 요구되어지고 있다.

HCV RNA 핵산중합효소(이하, 'HCV RdRp'라고 함)는 바이러스 생존에 결정적인 영향을 미치는 바이러스 특이적 효소이므로 인체에 독성이 없는 항바이러스제 개발을 위한 좋은 타겟효소이며, 특히 X-선 결정구조가 알려진 후부터 활발한 연구가 이루어지고 있다. 현재 임상실험중인 항-HCV 효소저해제는 모두 23종이며 그 중 HCV 핵산 중합효소 저해제는 14종으로서 HCV 핵산 중합효소 저해제 개발이 C형 간염 치료제 개발의 주종을 이루고 있음을 보여주고 있는데, 14종의 HCV 핵산 중합효소 저해제 대부분은 기질 유사체인 뉴클레오시드 유도체로서 기질과 경쟁적인 저해제로 작용하는 기작을 가지고 있다. 뉴클레오시드 유도체는 일종의 prodrug으로서 키나아제에 의해 세 번의 인산화 과정을 거쳐 뉴클레오시드 삼중인산의 형태로 변환되어야만 활성을 나타낼 수 있는데, 첫 번째 키나아제의 높은 기질 특이성으로 인해서 구조적으로 변형된 뉴클레오시드 항바이러스제들의 첫 번째 인산화에 상당한 어려움이 있으며 또한, 뉴클레오시드 유도체는 당과 염기의 결합에 의해 구성되고 당과 염기의 조합에 따라 활성이 다양하게 변화하기 때문에 가능한 모든 당과 염기의 조합을 합성해야만 하는데 화학적 합성이 용이하지 않아서 구조-활성 상관관계 연구는 물론 개발 및 상업화에 큰 비용이 따르는 문제점을 가지고 있다. 따라서, 최근에는 비뉴클레오시드계 C형 간염 치료제 개발에 관심이 집중되고 있는데, 이러한 화합물들은 뉴클레오시드계 화합물과는 달리 인산화가 필요치 않으며 합성이 용이하여 광범위한 구조-활성 상관관계의 연구가 가능하다는 장점을 가지고 있다. 그러나, 현재 개발 중인 대부분의 비뉴클레오시드계 C형 간염 치료제는 HCV RNA 중합효소의 활성화자리가 아닌 활성 조절부위(allosteric site)에 결합하는 저해제들인데, 일반적으로 타겟효소의 활성화자리가 아닌 활성 조절부위에 결합하는 화합물들은 변종 바이러스에 의한 내성의 영향을 강하게 받으므로 효소의 활성화자 리에 결합하는 비뉴클레오시드계 화합물의 개발이 절실히 요구되어지고 있다.

본 발명은 상기의 문제점을 해결하고, 상기의 필요성에 의하여 안출된 것으로서 본 발명의 목적은 천연화합물인 플라보놀의 유도체를 이용하여 C형 간염 바이러스의 생환주기에서 핵심적인 역할을 담당하는 HCV RdRp를 저해함으로써 궁극적으로는 C형 간염 치료제로 개발하는데 그 목적을 두고 있다.

상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은

하기 화학식의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

상기 화학식에서 R은 할로겐, CN, (C₁-C₄) 알킬, (C₁-C₄) 알콕시, 및 NO₂로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이고 오르소(ortho)-, 메타-, 또는 파라- 위치에 존재하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도인 것이 바람직하고, 클로로, 또는 브로모인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 "(C₁-C₄) 알킬"은 구체적으로는 약 4개 이하의 탄소 원자를 갖는 1가의 포화 지방족 히드로카르빌기를 나타낸다. 탄화수소 쇄는 직쇄 또는 분지쇄일 수 있다. 상기 알킬기의 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소-부틸, tert-부틸 등이 있고 본 발명에서 알킬은 메틸인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 "(C₁-C₄) 알콕시"는 -OR 기 (식 중, R은 알킬임)를 나타낸다. 특정 알콕시기의 예로는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, tert-부톡시, sec-부톡시 등이 있고, 본 발명에서는 메톡시인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

본 발명의 바람직한 실시예에 있어서, 상기 R은 클로로, 브로모, CN, 메틸, 메톡시, 및 NO₂로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이고 오르소(ortho)-, 메타-, 또는 파라- 위치에 존재하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

본 발명의 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 C형 간염 감염의 예방 또는 치료효과를 가지는 것을 특징으로 한다.

또한 본 발명은 하기 화학식의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다:

상기 화학식에서 R은 할로겐, CN, (C₁-C₄) 알킬, (C₁-C₄) 알콕시, 및 NO₂로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이고 오르소(ortho)-, 메타-, 또는 파라- 위치에 존재한다.

본 발명의 상기 조성물은 C형 간염 감염의 예방 또는 치료효과를 가지는 것을 특징으로 한다.

본 발명에서 "약학적으로 허용가능한 염"은 본 발명 화합물의 생물학적 특성은 유지하면서도 독성을 나타내지 않거나 제약 용도로 부적절하지 않은 임의의 본 발명 화합물의 염을 나타낸다. 이러한 염은 당업계에 공지된 다양한 유기 및 무기 반대이온으로부터 유래될 수 있으며, 이들을 포함한다. 이러한 염으로는 (1) 유기 또는 무기산, 예컨대 염산,브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 술팜산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 트리클로로아세트산, 프로피온산,헥산산, 시클로펜틸프로피온산, 글리콜산, 글루타르산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 소르브산, 아스코르브산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일)벤조산, 피크르산,신남산, 만델산, 프탈산, 라우르산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 1,2-에탄-디술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 벤젠 술폰산, 4-클로로벤젠술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 4-톨루엔술폰산, 캄포르산, 캄포르술폰산, 4메틸비시클로 [2.2.2]-옥트-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로피온산, 트리메틸아세트산, tert-부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 벤조산, 글루탐산, 히드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 시클로헥실술팜산, 퀸산,뮤콘산 등과 형성된 산 부 가염; 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 양성자가 (a) 금속 이온 (예를 들면, 알칼리 금속 이온, 알칼리 토금속 이온 또는 알루미늄 이온), 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물 (예컨대,나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 알루미늄, 리튬, 아연 및 바륨 수산화물), 암모니아로 치환되거나, 또는 (b) 유기 염기, 예컨대 지방족, 지환족 또는 방향족 유기 아민, 예를 들면 암모니아, 메틸아민, 디메틸아민, 디에틸아민, 피콜린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 에틸렌디아민, 리신, 아르기닌, 오르니틴, 콜린,N,N'-디벤질에틸렌-디아민, 클로로프로카인, 디에탄올아민, 프로카인, N-벤질페네틸아민, N-메틸글루카민 피페라진, 트리스(히드록시메틸)-아미노메탄, 테트라메틸암모늄 히드록시드와 배위결합한 경우에 형성된 염 등이 있다.

또한, 염의 예로는 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 테트라알킬암모늄 염 등이 있으며, 화합물이 염기성 관능기를 함유하는 경우에는 비독성 유기산 또는 무기산과의 염, 예컨대 히드로할라이드 (예를 들면, 히드로클로라이드 또는 히드로브로마이드), 술페이트, 포스페이트, 술파메이트, 니트레이트, 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 트리클로로아세테이트, 프로피오네이트, 헥사노에이트, 시클로펜틸프로피오네이트, 글리콜레이트,글루타레이트, 피루베이트, 락테이트,말로네이트, 숙시네이트, 소르베이트, 아스코르베이트, 말레이트, 말레에이트, 푸마레이트, 타르타레이트, 시트레이트, 벤조에이트, 3-(4-히드록시벤조일)벤조에이트, 피크레이트, 신나메이트, 만델레이트, 프탈레이트, 라우레이트,메탄술포네이트 메실레이트), 에탄술포네이트, 1,2-에탄-디술포네이트, 2-히드록시에탄술포네이트, 벤젠술포네이트(베실레이트), 4-클로로벤젠술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 4-톨루엔술포네이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 4-메틸비시클로[2.2.2]-옥트-2-엔-1-카르복실레이트,글루코헵토네이트, 3-페닐프로피오네이트, 트리메틸아세테이트, tert-부틸아세테이트, 라우릴 술페이트, 글루코네이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 히드록시나프토에이트, 살리실레이트, 스테아레이트,시클로헥실술파메이트, 퀴네이트, 뮤코네이트 염 등이 있다.

특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심을 가질 수 있으며, 따라서 이러한 화합물은 개별 (R)-거울상이성질체 또는 (S)-거울상이성질체, 또는 이들의 혼합물로 제조될 수 있다. 달리 지시되지 않는 한, 예를 들면 화학식 중 임의의 위치에서의 입체화학 명명법에 의한 본 명세서 및 특허청구범위의 특정 화합물에 대한 설명 또는 명칭은 개별 거울상이성질체 및 이들의 라세미체 혼합물 또는 기타 혼합물을 모두 포함하는 것으로 한다. 입체화학 결정 방법 및 입체이성질체 분리 방법은 당업계에 익히 공지되어 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 염기로의 처리시 본원에 도시된 화합물의 입체이성질체를 제공한다.

사용된 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 혼용가능하게 사용된다. 용어 "대상체(들)"은 동물, 예를 들어 비-영장류 (예를 들면, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 및 마우스) 및 영장류 (예를 들면, 원숭이, 예를 들어 사이노몰구스 (cynomolgous) 원숭이, 침팬지 및 인간)를 비롯한 포유동물, 및 예를 들어, 인간을 나타낸다. 한 실시양태에서, 대상체는 C형 간염 감염에 대한 현행 처치법에 저항성이거나 반응하지 않는다. 또다른 실시양태에서, 대상체는 축산용 동물 (예를 들면, 말, 소, 돼지 등) 또는 애완용 동물 (예를 들면, 개 또는고양이)이다. 바람직한 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

본원에 사용된 용어 "치료제(들) 또는 치료용 조성물"은 장애 또는 그의 1종 이상의 징후를 치료 또는 예방하는 데 사용될 수 있는 임의의 작용제(들)을 나타낸다. 특정 실시양태에서, 용어 "치료제"는 본 발명의 화합물을 나타낸다. 다른 특정 실시양태에서, 용어 "치료제"는 본 발명의 화합물을 나타내지 않는다. 한 실시양태에서, 치료제는 장애 또는 그의 1종 이상의 징후를 치료 또는 예방하는 데 유용한 것으로 공지되어있거나, 상기 목적을 위해 사용되어 왔거나, 현재 사용되고 있는 작용제이다.

"치료 유효량"은 질환 치료를 위해 대상체에게 투여되었을 때 상기 질환 치료에 효과를 나타내기에 충분한 화합물, 복합체 또는 조성물의 양을 의미한다. "치료 유효량"은 특히 화합물, 질환 및 그의 중증도, 및 치료 대상의 연령, 체중 등에 따라 달라질 수 있다.

한 실시양태에서, 임의의 질환 또는 장애를 "치료하는" 것 또는 이들의 "치료"는 대상체에 존재하는 질환 또는 장애를 개선시키는 것을 나타낸다. 또다른 실시양태에서, "치료하는" 또는 "치료"는 하나 이상의 신체 파라미터를 개선시키는 것을 나타내며, 대상체는 이를 인식하지 못할 수도 있다. 또다른 실시양태에서, "치료하는"또는 "치료"는 질환 또는 장애를 신체적으로 조절하는 것 (예를 들면, 인식가능한 징후의 안정화) 또는 생리학적으로 조절하는 것 (예를 들면, 신체 파라미터의 안정화), 또는 이 둘 모두를 나타낸다. 또다른 실시양태에서, "치료하는" 또 는 "치료"는 질환 또는 장애의 발병을 지연시키는 것을 나타낸다.

본원에 사용된 용어 "예방제(들)"은 장애 또는 그의 1종 이상의 징후를 예방하는 데 사용될 수 있는 임의의 작용제(들)을 나타낸다. 특정 실시양태에서, 용어 "예방제"는 본 발명의 화합물을 나타낸다. 다른 특정 실시양태에서, 용어 "예방제"는 본 발명의 화합물은 나타내지 않는다. 예를 들어, 예방제는 장애의 발병, 발전, 진행 및/또는 심화를 예방 또는 지연시키는데 유용한 것으로 공지되어 있거나, 또는 상기 목적을 위해 사용되어 왔거나 현재 사용되고 있는 작용제이다.

본원에 사용된 용어 "예방하다", "예방하는" 및 "예방"은 요법제 (예를 들면, 예방제 또는 치료제) 또는 요법제의 조합물 (예를 들면, 예방제 또는 치료제의 조합물)을 투여하여 대상체에서 장애의 1종 이상의 징후가 재발,발병 또는 발전되는 것을 예방하는 것을 나타낸다.

본원에 사용된 어구 "예방 유효량"은 장애와 관련된 1종 이상의 징후의 발전, 재발 또는 발병을 예방하거나, 또는 또다른 요법제 (예를 들면, 또다른 예방제)의 예방 효과(들)을 증대 또는 개선시키기에 충분한 요법제 (예를들면, 예방제)의 양을 나타낸다.

본 발명의 방법에 사용되는 플라보놀 유도체는 바람직하게는 1종 이상의 화학식 I의 화합물, 적절한 경우에는 염 형태의 화합물을 단독으로 사용하거나, 또는 1종 이상의 적합한 제약상 허용되는 담체, 예컨대 희석제 또는 아주반트와, 또는 또다른 항-HCV 제제와 조합된 형태로 함유하는 제약 조성물을 사용함으로써 제공된다.

임상 실무에서, 본 발명의 유도체는 임의의 통상적인 경로, 특히 경구, 비경구, 직장 경로로 투여되거나, 또는 흡입 (예를 들면, 에어로졸 형태로)에 의해 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 플라보놀 유도체는 바람직하게는 경구 투여된다.

경구 투여용 고체 조성물로서, 정제, 환제, 경질 젤라틴 캡슐제, 분제 또는 과립제를 사용할 수 있다. 이들 조성물에서, 본 발명에 따른 화합물은 1종 이상의 불활성 희석제 또는 아주반트, 예컨대 수크로스, 락토스 또는 전분과 혼합된다.이들 조성물은 희석제 이외에도, 예를 들면 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 또는 제어 방출을 위한 코팅제와 같은 물질을 포함할 수 있다.

경구 투여용 액체 조성물로서, 불활성 희석제, 예컨대 물 또는 액체 파라핀을 함유하는 제약상 허용되는 용액제, 현탁액제, 에멀젼, 시럽 및 엘릭시르를 사용할 수 있다. 이들 조성물은 또한, 희석제 이외에도, 예를들면 습윤제, 감미제 또는 향미제와 같은 물질을 포함할 수 있다.

비경구 투여용 조성물은 에멀젼 또는 멸균 용액제일 수 있다. 용매 또는 비히클로서, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 특히, 올리브유 또는 주사용 유기 에스테르, 예를 들면 에틸 올레에이트를 사용할수 있다. 이들 조성물은 또한 아주반트, 특히 습윤제, 등장화제, 유화제, 분산제 및 안정화제를 함유할 수 있다. 멸균은 여러 방식으로 수행할 수 있는데, 예를 들면 박테리아용 필터를 사용하거나, 방사선을 조사하거나, 또는 가열함으로써 수행할 수 있다. 이들은 또한 사용할 때 멸균수 또는 임의의 다른 주사용 멸균 매질에 용해될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 제조될 수 있다.

직장 투여용 조성물은 좌제 또는 직장 투여용 캡슐제이며, 이들은 활성 성분 이외에 부형제, 예컨대 코코아 버터, 반합성 글리세리드 또는 폴리에틸렌 글리콜을 함유한다.

조성물은 또한 에어로졸일 수 있다. 액체 에어로졸 형태로 사용하는 경우,조성물은 안정한 멸균용액제이거나, 또는 사용할 때 비발열성 멸균수, 염수 또는 임의의 다른 제약상 허용되는 비히클에 용해되는 고체 조성물일 수 있다. 직접 흡입하기 위한 무수 에어로졸 형태로 사용하는 경우, 활성 성분은 미분되어 수용성 고체 희석제 또는 비히클, 예를 들면 덱스트란, 만니톨 또는 락토스와 함께혼합된다.

한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 제약 조성물 또는 단일 단위 투여 형태이다. 본 발명의 제약 조성물 및 단일 단위 투여 형태는 예방상 또는 치료 유효량의 1종 이상의 예방제 또는 치료제 (예를 들면, 본 발명의 화합물, 또는 다른 예방제 또는 치료제), 및 통상적으로 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함한다.

특정 실시양태 및 문맥에서, 용어 "약학적으로 허용되는"은 동물, 보다 구체적으로는 인간에 사용될 수 있는 것으로 정부 또는 정부의 규제 기관에 의해 승인되었거나 또는 일반적으로 공인된 약전에 열거되어 있는 것을 의미한다. 용어 "담체"는 치료제와 함께 투여되는 희석제, 아주반트 (예를 들면, 프로인트(Freund) 아주반트 (완전 및 불완전 아주반트)), 부형제 또는 비히클을 나타낸다. 이러한 제약 담체는 멸균 액체, 예컨대 물, 및 석유, 동물 또는 식물 기원의 오일 또는 합성 오 일을 비롯한 오일, 예를 들면 낙화생유, 대두유, 미네랄 오일, 참깨유 등일 수 있다. 물은 제약 조성물이 정맥내 투여되는 경우에 바람직한 담체이다.

염수 용액, 및 덱스트로스 및 글리세롤 수용액은 또한 액체 담체, 특히 주사용 용액으로 사용될 수 있다. 적합한 제약 담체의 예는 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences" by E. W. Martin]에 기재되어 있다.

통상적인 제약 조성물 및 투여 형태는 1종 이상의 부형제를 포함한다. 적합한 부형제는 제약 분야의 당업자에게 공지되어 있으며, 적합한 부형제의 비제한적 예로는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀,밀가루, 호분, 실리카 겔, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 탈지 분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등이 있다. 특정 부형제가 제약 조성물 또는 투여 형태에 혼입되는 것이 적합한지 여부는 투여 형태가 대상체에게 투여되는 방식 및 투여 형태에 포함된 특정 활성 성분 등을 비롯한 당업계에 공지된 다양한 요소에 좌우된다. 경우에 따라, 조성물 또는 단일 단위 투여 형태는 또한 소량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다.

본 발명은 또한 활성 성분을 포함하는 무수 제약 조성물 및 투여 형태를 포함한다. 예를 들면, 물 (예를 들면, 5％)을 첨가하는 것은 시간에 경과함에 따라 제제의 특성 (예컨대,저장 수명 또는 안정성)을 결정하기 위한 모의 장기 보관 수단으로서 제약 업계에 널리 허용되어 있다. 예를들면, 문헌 [Jens T. Carstensen, Drug Stability: Principles ＆ Practice, 2d. Ed., Marcel Dekker, NY,NY, 1995, pp. 379 80]을 참조한다. 실제로, 물 및 열이 몇몇 화합물의 분해를 가속화시킨다. 따라서, 통상적으로 제제를 제조, 취급, 포장, 보관, 운송 및 사용하는 동안에는 수분 및/또는 습기가 발생하므로 물이 제제에 미치는 영향이 매우 중요할 수 있다.

본 발명의 무수 제약 조성물 및 투여 형태는 무수 또는 저수분 성분 및 낮은 수분 또는 낮은 습도 조건을 이용하여 제조할 수 있다. 제조, 포장 및/또는 보관 중에 수분 및/또는 습기와 실질적으로 접촉할 것이 예상된다면, 락토스, 및 1급 또는 2급 아민을 포함하는 1종 이상의 활성 성분을 포함하는 제약 조성물 및 투여형태는 무수물 형태인 것이 바람직하다.무수 제약 조성물은 그의 무수 특성이 유지되도록 제조하여 보관해야 한다. 따라서, 무수 조성물이 물에 노출되는 것을 방지하고 적합한 규격 키트에 포함될 수 있도록 공지된 물질을 사용하여 포장하는 것이 바람직하다. 적합한 포장의 예로는, 밀봉형 호일, 플라스틱, 단위 투여 용기 (예를 들면, 바이알), 블리스터 팩 및 스트립 팩이 있으나 이에 한정되지는 않는다.

본 발명은 또한 활성 성분의 분해 속도를 감소시키는 1종 이상의 화합물을 포함하는 제약 조성물 및 투여 형태를 포함한다. 이러한 화합물 (본원에서는 "안정화제"로 지칭함)로는 항산화제 (예컨대, 아스코르브산), pH 완충제 또는 염 완충제가 있으나 이에 한정되지는 않는다.

제약 조성물 및 단일 단위 투여 형태는 용액제, 현탁액제, 에멀젼, 정제, 환제, 캡슐제, 분제, 서방형 제제 등의 형태를 취할 수 있다. 경구 투여용 제제는 표준 담체, 예컨대 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등을 포함할 수 있다. 이러한 조성물 및 투여 형태는 예방상 또는 치료 유효량의 예방제 또는 치료제를 바람직하게는 정제된 형 태로 적합한 양의 담체와 함께 함유하며, 대상체에 투여하기 적절한 형태로 제공될 것이다. 제제는 투여 방식에 적합해야 한다. 바람직한 실시양태에서, 제약 조성물 또는 단일 단위 투여 형태는 멸균 상태이며, 대상체, 바람직하게는 동물 대상체, 보다 바람직하게는 포유동물 대상체, 가장 바람직하게는 인간 대상체에게 투여하기 적합한 형태이다.

본 발명의 제약 조성물은 그의 의도된 투여 경로에 적합하도록 제제화된다. 투여 경로의 예로는 비경구 투여 경로, 예를 들면, 정맥내, 피내, 피하, 근육내, 피하, 경구, 구강, 설하, 흡입, 비강내, 경피, 국소, 경점막, 종양내, 활액내 및 직장 투여 경로가 있으나 이에 한정되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 조성물은 통상적인 절차에 따라 인간에게 정맥내, 피하, 근육내, 경구, 비강내 또는 국소 투여되도록 변형된 제약 조성물로 제제화된다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 통상적인 절차에 따라 인간에게 피하 투여되는 조성물로 제제화된다.

통상적으로, 정맥내 투여용 조성물은 멸균 등장성 수성 완충액 중의 용액이다. 필요한 경우에, 조성물은 또한 가용화제 및 국부 마취제 (예컨대, 리그노카인)를 포함하여 주사 부위의 통증을 진정시킬 수 있다.

투여 형태의 예로는 정제; 캐플릿; 캡슐제, 예컨대 연질 탄성 젤라틴 캡슐제; 카세; 트로키; 로젠지; 분산액제; 좌제; 연고; 습포제 (찜질약);페이스트; 분제; 드레싱; 크림; 고약; 용액제; 패치; 에어로졸 (예를 들면, 비강 스프레이 또는 흡입기); 겔; 현탁액제 (예를 들면, 수성 또는 비수성 액체 현탁액제, 수중유 에멀젼, 또는 유중 수 액체 에멀젼), 용액제 및 엘릭시르를 포함하는 대상체에게 경구 또는 점막 투여하기 적합한 액체 투여 형태; 대상체에게 비경구 투여하기에 적합한 액체 투여 형태; 및 복원되었을 때 대상체에게 비경구 투여하기에 적합한

액체 투여 형태를 제공할 수 있는 멸균 고체 (예를 들면, 결정형 또는 무정형고체)가 있으나 이에 한정되지는 않는다.

본 발명의 조성물, 형태 및 투여 형태의 유형은 통상적으로 이들의 용도에 따라 달라질 것이다. 예를 들면, 바이러스 감염의 초기 치료에 사용되는 투여 형태는 1종 이상의 활성 성분을 바이러스 감염의 유지 요법에 사용되는 투여 형태에 포함된 양보다 더 많은 양으로 함유할 수 있다. 이와 유사하게, 비경구 투여 형태는 1종 이상의 활성 성분을 동일한 질환 또는 장애 치료에 사용되는 경구 투여 형태에 포함된 양보다 더 적은 양으로 함유할 수 있다. 상기 방식 및 본 발명에 포함되는 특정 투여 형태를 변형시키는 또 다른 방식은 당업자에게 이미 명백할 것이다. 예를 들면, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing, Easton PA (1990)]을 참조한다.

본 발명 조성물의 성분은 일반적으로, 예를 들면 활성제의 양을 표기한 앰풀 또는 샤세와 같은 밀봉된 용기 중 무수 동결건조된 분말 또는 수분 무함유 농축물로서, 단위 투여 형태 중에 별개로 또는 함께 혼합된 형태로 제공된다. 조성물을 주입에 의해 투여하는 경우, 이 조성물은 멸균된 제약 등급의 물 또는 염수를 함유하는 주입 용기에 분배될 수 있다. 조성물을 주사에 의해 투여하는 경우, 투여하기 전에 성분을 혼합할 수 있도록 주사용 멸균수 또는 염수 앰풀을 제공할 수 있다.

본 발명의 통상적인 투여 형태는 본 발명의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 용매화물 또는 수화물을 약 0.1 mg 내지 약 1000 mg/일 범위의 양으로 포함하며, 이는 오전에 1일 1회 단일 투여하거나, 바람직하게는 하루동안 식사와 함께 분할 투여한다. 본 발명의 특정 투여 형태는 플라보놀 유도체 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4,0.5, 1.0, 2.0, 2.5, 5.0, 10.0, 15.0, 20.0, 25.0, 50.0, 100, 200, 250, 500 또는 1000 mg을 갖는다.

경구 투여하기 적합한 본 발명의 제약 조성물은 별개의 투여 형태, 예컨대 정제 (예를 들면, 츄잉 정제), 캐플릿, 캡슐제 및 액체 (예를 들면, 향미 시럽) 등의 형태로 존재할 수 있다. 이러한 투여 형태는 미리 결정된 양의 활성 성분을 함유하며, 당업자에게 공지된 조제 방법에 의해 제조할 수 있다. 일반적으로, 문헌

[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing, Easton PA (1990)]을 참조한다. 특정 실시양태에서, 경구 투여 형태는 고체이며, 상기 단락에 상세하게 기재된 바와 같이 무수 성분을 사용하여 무수 조건하에 제조한다.

그러나, 본 발명의 범위는 무수 고체 경구 투여 형태 이외의 것까지 확장된다. 본 발명의 통상적인 경구 투여 형태는 활성 성분(들)을 통상적인 제약 합성 기술에 따라 1종 이상의 부형제와 친밀 혼합물로서 합하여 제조한다. 부형제는 투여하기 바람직한 제제의 형태에 따라 매우 다양한 형태를 취할 수 있다. 예를 들면, 경구 투여용 액체 또는 에어로졸 투여 형태에 사용하기 적합한 부형제로는 물, 글리콜,오일, 알코올, 향미제, 보존제 및 착색제가 있으나 이에 한정되지는 않는다. 고체 경구 투여 형태 (예를 들면,분제, 정제, 캡슐제 및 캐플릿)에 사용하기 적합한 부형제로는 전분, 당, 미정질 셀룰로스, 희석제, 과립화제,윤활제, 결합제 및 붕해제가 있으나 이에 한정되지는 않는다. 고체 부형제가 사용되는 경우에는 정제 및 캡슐제가 투여하기 쉽기 때문에 가장 유리한 경구 투여 단위 형태로 나타난다. 바람직한 경우, 정제는 표준 수성 또는 비수성 기술에 의해 코팅될 수 있다. 이러한 투여 형태는 임의의 조제 방법에 의해 제조될 수 있다.

일반적으로, 제약 조성물 및 투여 형태는 활성 성분을 액체 담체,미분된 고체 담체, 또는 이들 둘 모두와 균일하고 친밀하게 혼합한 후에, 필요한 경우에는 생성물을 원하는 형상으로 성형시켜 제조한다.예를 들면, 정제는 압축 또는 성형에 의해 제조할 수 있다. 압축된 정제는 임의로는 부형제와 혼합된 자유 유동 형태 (예컨대, 분말 또는 과립)의 활성 성분을 적합한 기계에서 압축시켜 제조할 수 있다. 성형된 정제는 불활성 액체 희석제로 적신 분말 화합물의 혼합물을 적합한 기계에서 성형하여 제조할 수 있다.

본 발명의 경구 투여 형태에 사용될 수 있는 부형제의 예로는 결합제, 충전제, 붕해제 및 윤활제가 있으나 이에 한정되지는 않는다. 제약 조성물 및 투여 형태에 사용하기 적합한 결합제로는 옥수수 전분, 감자 전분 또는 다른 전분,젤라틴, 천연 및 합성 검, 예컨대 아카시아 검, 나트륨 알기네이트, 알긴산, 다른 알기네이트, 분말 트래거캔스, 구아 검, 셀룰로스 및 그의 유도체 (예를 들면, 에틸 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 카르복시메틸 셀룰로스 칼슘, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스), 폴리비닐 피롤리돈, 메틸 셀룰로스, 전호화된 전분, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스, (예를 들면, 번호 2208, 2906, 2910), 미정질 셀룰로스, 및 이들의 혼합물이 있으나 이에 한정되지는 않는다.

본원에 개시된 제약 조성물 및 투여 형태에 사용하기 적합한 충전제의 예로는 활석, 탄산칼슘 (예를 들면, 과립 또는 분말), 미정질 셀룰로스, 분말셀룰로스, 덱스트레이트, 카올린, 만니톨, 규산, 소르비톨, 전분, 전호화된 전분, 및 이들의 혼합물이 있으나, 이에 한정되지는 않는다. 본 발명의 제약 조성물에 포함된 결합제 또는 충전재는 통상적으로 제약 조성물 또는 투여 형태의 약 50 내지 약 99 중량％의 양으로 존재한다. 미정질 셀룰로스의 적합한 형태로는 아비셀(AVICEL) PH 101, 아비셀 PH 103, 아비셀 RC 581, 아비셀 PH 105로 시판되는 물질 (에프엠씨 코포레이션, 아메리칸 비스코스 디비젼, 아비셀 세일즈 (FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales; 미국 펜실베니아주 마쿠스 훅 소재)로부터 시판됨), 및 이들의 혼합물이 있으나, 이에 한정되지는 않는다. 구체적인 결합제는 아비셀 RC 581로 시판되는 미정질 셀룰로스와 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스의 혼합물이다. 적합한 무수 또는 저수분 부형제 또는 첨가제로는 아비셀 PH 103(상표명) 및 전분 1500 LM이 있다.

본 발명의 조성물에 붕해제를 사용함으로써 수성 환경에 노출되었을 때 붕해되는 정제를 제공한다. 너무 많은 붕해제를 함유하는 정제는 보관시 붕해될 수 있으며, 너무 적은 붕해제를 함유하는 정제는 원하는 속도로 붕해되지 않거나 원하는 조건하에서 붕해되지 않을 수 있다. 따라서, 너무 많지도 너무 적지도 않아 활성 성분의 방출을 유해하게 변경시키지 않는 충분한 양의 붕해제를 사용하여 본 발명의 고체 경구 투여 형태를 형성해야 한다. 사용되는 붕해제의 양은 제제의 유형에 따라 달라지며, 당업자가 용이하게 결정할 수 있다. 통상적인 제약 조성물은 약 0.5 내지 약 15 중량％, 구체적으로는 약 1 내지 약 5 중량％의 붕해제를 포함한다. 본 발명의 제약 조성물 및 투여 형태에 사용될 수 있는 붕해제로는 한천, 알긴산, 탄산칼슘, 미정질 셀룰로스, 크로스카르멜로스 나트륨, 크로스포비돈, 폴라크릴린 칼륨, 나트륨 전분 글리콜레이트, 감자 또는 타피오카 전분, 전호화된 전분, 다른 전분, 점토, 다른 알긴, 다른 셀룰로스, 검, 및 이들의 혼합물이 있으나 이에 한정되지는 않는다.

본 발명의 제약 조성물 및 투여 형태에 사용될 수 있는 윤활제로는 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 미네랄 오일, 미네랄 경유, 글리세린, 소르비톨, 만니톨, 폴리에틸렌 글리콜, 다른 글리콜, 스테아르산, 나트륨 라우릴 술페이트, 활석, 수소화된 식물성 오일 (예를 들면, 낙화생유, 면실유, 해바라기씨유, 참깨유,올리브유, 옥수수 오일 및 대두유), 아연 스테아레이트, 에틸 올레에이트, 에틸 라우레에이트, 한천, 및 이들의 혼합물이 있으나 이에 한정되지는 않는다. 추가의 윤활제로는, 예를 들면 실로이드 실리카 겔 (AEROSIL 200, 더블유.알. 그레이스 코포레이션 (W.R. Grace Co.; 미국 매릴랜드주 발티모어 소재)에서 제조됨), 합성 실리카의 응고된 에어로졸 (데구사 코포레이션 (Degussa Co.; 미국 텍사스주 피아노 소재)에서 시판됨), CAB O SIL(발열성 이산화규소 제품, 캐봇 코포레이션 (Cabot Co.; 미국 메사추세츠주 보스톤 소재)에서 시판됨), 및 이들의 혼합물이 있다. 사용되는 경우, 윤활제는 통상적으로 이들이 혼입되는 제약 조성물 또는 투여 형태의 약 1 중량％ 미만의 양으로 사용된다.

본 발명의 화합물은 예컨대 당업자에게 공지된 제어 방출 수단 또는 전달 장 치로 투여할 수 있다. 이들의 예로는 미국 특허 제3,845,770호, 동 제3,916,899호, 동 제3,536,809호, 동 제3,598,123호, 동 제4,008,719호, 동 제5,674,533호, 동 제5,059,595호,동 제5,591,767호, 동 제5,120,548호, 동 제5,073,543호,동 제5,639,476호, 동 제5,354,556호 및 동 제5,733,566호 (이들 문헌은 각각 그 거명을 통해 본원에 참고로 포함됨)에 기재된 것들이 있으나 이에 한정되지는 않는다. 이러한 투여 형태는, 예를 들면 다양한 비율에서 원하는 방출 프로파일을 제공하기 위해 히드로프로필메틸 셀룰로스, 다른 중합체 매트릭스, 겔, 투과가능한 막, 삼투 시스템, 다층 코팅, 미립자, 리포좀, 미소구, 또는 이들의 조합물을 이용하여, 1종 이상의 활성 성분을 지연 방출 또는 제어 방출시킬 때 사용할 수 있다. 본원에 기재된 것들을 비롯하여 당업자에게 공지된 적합한 제어 방출형 제제는 본 발명의 활성 성분과 함께 사용하기 위해 용이하게 선택할 수 있다. 따라서, 본 발명은 경구 투여에 적합한 단일 단위 투여 형태, 예컨대 제어 방출형으로 변형된 정제,캡슐제, 겔캡 및 캐플릿 등을 포함한다.

모든 제어 방출형 약품은 이들에 상응하는 비-제어 방출형 약품에 의해 달성되는 것보다 개선된 약물 요법을 제공하고자 하는 공통적인 목적을 갖는다. 이상적으로, 의학적 처치에 가장 알맞게 고안된 제어 방출형 제제의 사용은 최소량의 약물 물질을 사용하여 최소 시간 내에 증상을 치유 또는 제어함을 특징으로 한다. 제어 방출형 제제의 이점은 약물의 확장된 활성, 투여 횟수의 감소 및 대상체의 순응성 증가를 포함한다. 또한, 제어 방출형 제제를 사용하여 약물의 작용 개시 시간 또는 다른 특성, 예컨대 약물의 혈중 농도에 영향을 끼칠 수 있으며, 이에 따라 부 작용 (역효과) 발생에도 영향을 끼칠 수 있다.

대부분의 제어 방출형 제제는 처음에는 원하는 치료 효과를 즉각적으로 나타내는 양의 약물 (활성 성분)을 방출하고, 연장된 기간에 걸쳐 상기 치료 또는 예방 효과 수준을 지속시키는 양의 약물을 단계적 및 지속적으로 방출하도록 고안되어 있다. 이와 같이 체내에서 일정한 약물 수준을 유지하기 위해, 약물은 대사되어 인체에서 분비되는 약물의 양을 대체하는 속도로 투여 형태로부터 방출되어야 한다. 활성 성분의 제어 방출은 pH, 온도,효소, 물, 또는 다른 생리학적 조건 또는 화합물 등을 비롯한 다양한 조건에 의해 자극될 수 있다.

특정 실시양태에서, 약물은 정맥내 주입, 이식가능한 삼투압 펌프, 경피 팻치, 리포좀, 또는 기타 투여 방식을 사용하여 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 펌프가 사용될 수 있다 (문헌 [Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987)]; [Buchwald et al., Surgery 88:507 (1980)]; [Saudek et al., N. Engl. J. Med.321:574 (1989)] 참조). 다른 실시양태에서, 중합 물질이 사용될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 제어 방출시스템이 대상체에서 당업자에 의해 결정된 적합한 부위에서 위치할 수 있으며, 즉, 이로써 전신 투여량의 일부 만이 필요하다 (예를 들어, 문헌 [Goodson, Medical Applications of Controlled Release, vol.2, pp. 115-138(1984)] 참조). 기타 제어 방출 시스템은 랑거 (Langer [Science 249:1527-1533 (1990)])에 의해 재검토되어 논의되었다. 활성 성분은 고체 내부 매트릭스, 예를 들어 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리부틸메타크릴레이트,가소화된 또는 비가소화된 폴리비닐클로라이드, 가소화된 나일론, 가소화된 폴리에틸렌테레프 탈레이트, 천연 고무, 폴리이소프렌, 폴리이소부틸렌, 폴리부타디엔, 폴리에틸렌, 에틸렌-비닐아세테이트, 공중합체, 실리콘고무, 폴리디메틸실록산, 실리콘 카르보네이트 공중합체, 친수성 중합체, 예컨대 아크릴산 및 메타크릴산의 에스테르의 히드로겔, 콜라겐, 가교 폴리비닐알코올 및 부분적으로 가수분해된 가교 폴리비닐 아세테이트 중에 분산될 수 있으며, 이는 외부 중합체막, 예를 들어 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 에틸렌/프로필렌 공중합체, 에틸렌/에틸 아크릴레이트 공중합체, 에틸렌/비닐아세테이트 공중합체, 실리콘 고무, 폴리디메틸 실록산, 네오프렌 고무, 염화 폴리에틸렌, 폴리비닐클로라이드; 비닐 아세테이트, 비닐리덴 클로라이드, 에틸렌 및 프로필렌과의 비닐클로라이드 공중합체, 이오노머 폴리에틸렌 테레프탈레이트, 부틸 고무 에피클로로히드린 고무, 에틸렌/비닐 알코올 공중합체, 에틸렌/비닐 아세테이트/비닐 알코올 삼중중합체, 및 에틸렌/비닐옥시에탄올 공중합체에 의해 둘러싸여 있고, 이는 체액에 불용성이다. 이어서, 활성 성분은 방출 속도 제어 단계에서 외부 중합체막을 통해 확산된다. 그러한 비경구 조성물에서 활성 성분의 비율은 그의 특정 성질 뿐만 아니라 대상체의 필요에 따라 매우 달라진다.

본 발명은 또한 비경구 투여 형태도 제공한다. 비경구 투여 형태는 피하, 정맥내 (볼루스 주사 포함), 근육내 및 동맥내 투여 경로 등을 비롯한 다양한 경로로 대상체에게 투여될수 있다. 이들 비경구 투여 경로는 통상적으로 오염 물질에 대한 대상체의 자연적 방어 경로를 피해가기 때문에, 비경구 투여 형태는 멸균 상태이거나 대상체에 투여하기 전에 멸균시킬 수 있는 것이 바람직하다. 비경구 투여 형태의 예로는 주사용 용액, 제약상 허용되는 주사용 비히클에 용해되거나 현탁시킬 수 있는 무수 제품, 주사용 현탁액, 및 에멀젼이 있으나 이에 한정되지는 않는다.

본 발명의 비경구 투여 형태를 제공하는 데 사용될 수 있는 적합한 비히클이 당업자에게 공지되어 있다. 이들 의 예로는 주사용수 (USP); 수성 비히클, 예컨대 나트륨 클로라이드 주사액, 링거 주사액, 덱스트로스 주사액,덱스트로스 및 나트륨 클로라이드 주사액 및 락테이트화된 링거 주사액 등; 수혼화성 비히클, 예컨대 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜 등; 및 비수성 비히클, 예컨대 옥수수유, 면실유, 낙화생유, 참깨유, 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트 및 벤질 벤조에이트 등이 있으나 이에 한정되지는 않는다.또한, 본원에 개시된 1종 이상의 활성 성분의 용해도를 증가시키는 화합물도 본 발명의 비경구 투여 형태에 혼입될 수 있다.

본 발명은 또한 경피, 국소 및 점막 투여 형태를 제공한다. 본 발명의 경피, 국소 및 점막 투여 형태로는 안구용 용액, 스프레이, 에어로졸, 크림, 로션, 연고, 겔, 용액, 에멀젼, 현탁액 또는 당업자에 공지된 다른 형태가 있으나 이에 한정되지는 않는다. 예를 들면, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th, 18th and 20th eds., Mack Publishing, Easton PA (1980, 1990 ＆ 2000)] 및 [Introduction to Pharmaceutical dose form, 4th ed., Lea ＆ Febiger, Philadelphia (1985)]을 참조한다.

구강내 점막 조직을 처치하기 적합한 투여 형태는 구강세정용 용액 또는 경구용 겔 제제로 제제화될 수 있다.또한, 경피 투여 형태는 "저장소형" 또는 "매트릭스형" 패치를 포함하며, 이들은 피부 또는 상처 부위에 특정 기간 동안 적용되어 원하는 양의 활성 성분을 침투시킬 수 있다.

본 발명에 포함되는 적합한 부형제 (예를 들면, 담체 및 희석제), 및 경피, 국소 및 점막 투여 형태를 제공하는데 사용될 수 있는 다른 물질은 제약 분야의 당업자에게 공지되어 있으며, 이들은 주어진 제약 조성물 또는 투여 형태가 적용되는 특정 조직에 따라 달라진다. 이러한 사실을 고려하여, 통상적인 부형제로는 로션, 팅크,크림, 에멀젼, 겔 또는 연고를 형성하는 물, 아세톤, 에탄올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 부탄 1,3 디올,이소프로필 미리스테이트, 이소프로필팔미테이트, 미네랄 오일, 및 이들의 혼합물 등이 있으며, 이들은 비독성이고 제약상 허용되는 것이다. 바람직한 경우, 보습제 또는 습윤제를 제약 조성물 및 투여 형태에 첨가할 수도 있다. 이러한 부가 성분의 예는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th, 18th and 20th eds.,Mack Publishing, Easton PA (1980, 1990 ＆ 2000)]를 참조한다.

치료될 특정 조직에 따라, 추가의 성분을 본 발명의 활성 성분으로 처치하기 전에 사용하거나, 본 발명의 활성 성분과 함께 사용하거나, 또는 본 발명의 활성 성분으로 처치한 후에 사용할 수 있다. 예를 들면, 침투 증진제를 사용하여 조직에 활성 성분을 전달시키는 것을 보조할 수 있다. 적합한 침투 증진제로는 아세톤; 다양한 알코올, 예컨대 에탄올, 올레일 및 테트라히드로푸릴; 알킬 술폭시드, 예컨대 디메틸 술폭시드; 디메틸 아세트아미드; 디메틸 포름아미드; 폴리에틸렌 글리콜; 피롤리돈, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 콜리돈 (Kollidon) 등급(포비돈, 폴리비돈); 우레아; 및 다양한 수용성 또는 수불용성 당 에스테르, 예컨대 Tween 80 (폴리소르 베이트80) 및 Span 60 (소르비탄 모노스테아레이트)이 있으나 이에 한정되지는 않는다.

또한, 제약 조성물 또는 투여 형태의 pH, 또는 제약 조성물 또는 투여 형태가 적용되는 조직의 pH를 조정하여 1 종 이상의 활성 성분의 전달을 개선시킬 수 있다. 이와 유사하게, 용매 담체의 극성, 그의 이온 강도 또는 긴장성을 조정하여 상기 전달을 개선시킬 수 있다. 화합물, 예컨대 스테아레이트를 제약 조성물 또는 투여 형태에 첨가하여 1종 이상의 활성 성분의 친수성 또는 친유성을 유리하게 변경시킴으로써 상기 전달을 개선시킬 수도 있다. 이와 관련하여, 스테아레이트는 제제화용 액체 비히클, 유화제 또는 계면활성제, 및 전달 증진제 또는 침투 증진제로서 작용할 수 있다. 활성 성분의 다른 염, 수화물 또는 용매화물을 사용하여 생성된 조성물의 특성을 더 조정할 수 있다.

인간을 치료하는 경우, 의사는 예방 또는 치유적 치료, 및 치료할 대상체의 연령, 체중, 감염 단계 및 이들에게 특이적인 다른 요소에 따라 가장 적절한 것으로 여겨지는 투여 용량을 결정할 것이다. 일반적으로, 성인의 경우, 투여량은 약 1 내지 약 1000 mg/일, 약 5 내지 약 250 mg/일, 또는 약 10 내지 50 mg/일이다. 특정 실시양태에서, 투여량은 성인 1인 당 약 5 내지 약 400 mg/일, 보다 바람직하게는 25 내지 200 mg/일이다. 약 50 내지 약 500 mg/일의 투여 속도도 또한 바람직하다.

추가 측면에서, 본 발명은 C형 간염 바이러스 감염의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 C형 간염 바이러스에 대해 높은 치료 지수를 갖는 본 발명의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 유효량으로 투여하여 상기 대상체에서 C형 간염 바이러스 감염을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 치료 지수는 당업자에게 공지된 임의의 방법, 예컨대 하기 실시예에 기재한 방법에 따라 측정할 수 있다. 특정 실시양태에서, 치료 지수는 C형 간염 바이러스에 유효한 화합물의 농도에 대한, 독성을 나타내는 화합물의 농도의 비율이다. 독성은 세포독성(예를 들면, IC50 또는 IC90) 및 치사량 (예를 들면, LD50 또는 LD90)을 비롯한 당업자에게 공지된 임의의 기술로측정할 수 있다. 이와 마찬가지로, 유효 농도 (예를 들면, EC50 또는 EC90) 및 유효 투여량 (예를 들면, ED50 또는 ED90)을 비롯한 당업자에게 공지된 임의의 기술을 이용하여 유효 농도를 측정할 수 있다. 바람직하게는, 유사한 측정값을 비율로 비교한다 (예를 들면, IC50/EC50, IC90/EC90, LD50/ED50 또는 LD90/ED90). 특정 실시양태에서, 치료 지수는 2.0, 5.0, 10.0, 15.0, 20.0, 25.0, 50.0, 75.0, 100.0, 125.0, 150.0 또는 그 이상만큼 높을 수 있다.

장애 또는 그의 1종 이상의 징후를 예방, 치료, 관리 또는 개선시키는데 유효한 본 발명 화합물 또는 조성물의 양은 질환 또는 증상의 특성 및 중증도, 및 활성 성분이 투여되는 경로에 따라 달라질 것이다. 투여 횟수 및 투여량 또한 투여된 특정 요법제 (예를 들면, 치료제 또는 예방제), 장애, 질환 또는 증상의 중증도, 투여 경로뿐만 아니라 대상체의 연령, 체중, 반응 및 과거 병력에 의존하는 각 대상체에 대한 특이적 요소에 따라 달라질것이다. 유효 투여량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유래된 투여량-반응 곡선으로부터 외삽법에 의해 추정할 수 있다.

조성물 투여량의 예는, 대상체 또는 샘플 중량 1 kg 당 활성 화합물의 양 (mg 또는 ㎍)으로서, 예를 들면 약 10 ㎍/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 100 ㎍/kg 내지 약 25 mg/kg, 또는 약 100 ㎍/kg 내지 약 10 mg/kg을 포함한다.

본 발명의 조성물의 경우, 대상체에 투여된 투여량은 통상적으로 활성 화합물의 중량에 기초하여 대상체 체중 1kg 당 0.140 mg 내지 3 mg이다. 바람직하게는, 대상체에 투여된 투여량은 대상체 체중 1 kg 당 0.20 mg 내지 2.00 mg 또는 0.30 mg 내지 1.50 mg이다.

일반적으로, 본원에 기재된 증상에 대해 제안된 본 발명 조성물의 일일 투여량 범위는 약 0.1 내지 약 1000 mg/일이며, 이는 1일 1회 단일 투여되거나 또는 하루 동안 분할 투여된다. 한 실시양태에서, 상기 일일 투여량은 동등한 양으로 분할되어 매일 2회 투여된다. 일일 투여량 범위는, 구체적으로는 약 10 내지 약 200 mg/일, 보다 구체적으로는 약 10 내지 약 150 mg/일, 보다 더 구체적으로는 약 25 내지 약 100 mg/일이어야 한다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 몇몇 경우에는 활성 성분을 본원에 개시된 투여량 범위를 벗어난 투여량으로 사용할 필요가 있을 수 있다. 또한, 임상의 또는 치료 담당의는 대상체의 반응과 관련하여 요법을 언제 어떻게 중단,조정 또는 종결해야 할지 알고 있을 것임에 주목한다.

당업자에게 이미 공지된 바와 같이, 상이한 질환 및 증상에 대해 상이한 치료 유효량을 적용할 수 있다. 이와 유사하게, 상기 장애를 예방, 관리, 치료 또는 개선시키기에는 충분하지만 본 발명의 조성물과 관련된 부작용을 유발하기에는 불충분하거나 상기 부작용을 감소시키기에 충분한 양이 또한 상기 기재된 투여량 및 투여 횟수 계획에 포함된다. 또한, 대상체에게 본 발명의 조성물을 다중 투여량으로 투여하는 경우, 모든 투여량이 동일할 필요는 없다. 예를 들면, 대상체에 투여되는 투여량을 증가시켜 조성물의 예방 또는 치료 효과를 개선시킬 수 있으며, 이를 감소시켜 특정 대상체가 경험하는 1종 이상의 부작용을 감소시킬 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에서는 C형 간염 바이러스 RNA 핵산 중합효소의 활성화자리에 결합하는 비뉴클레오시드계 화합물을 개발하고자 하였다.

우선, HCV RNA 중합효소의 활성을 저해하는 것으로 알려져 있으나 정확한 작용 기작에 대한 연구가 이루어지지 않아 항-HCV 활성의 개선이 어려운 ADK (aryl diketoacid, 아릴디케토산) 유도체 ([화학식 1])의 구조-활성 상관관계 연구로부터 활성화자리의 금속이온 결합부위, 수소결합 주게 및 받게로 이용되는 아릴링커, 그리고 말단 아릴기 등으로 구성된 ADK의 pharmacophore 모델을 구축하였다 ([도 1]).

구축된 pharmacophore 모델을 이용한 pharmacophore-guided docking study를 통해 HCV RNA 중합효소의 활성화자리에 ADK 유도체들을 docking한 결과, ADK의 말단 아릴기가 활성화자리에 위치한 두 개의 혐수성 포켓에 가까이 위치하고 있음을 확인하였으며 (도 2), 따라서, 이 혐수성 포켓과 선택적으로 결합할 수 있는 새로운 말단 아릴기 치환기 도입을 통해 보다 더 강력한 타겟효소 저해능을 갖는 신규 유도체를 고안할 수 있는 가능성을 확인하였다. 본 발명에서는 ADK가 가지고 있는 극성이 크고 불안정한 디케토산 구조를 대체할 수 있는 새로운 모핵으로 플라보놀 구조를 도입하였는데 플라보놀은 ADK의 디케토산과 비슷한 금속 이온 결합능력을 가질 것으로 예상되며 도 3에서 보이는 바와 같이 금속이온과의 chelation에 참여하는 세 개의 산소 원자의 상대적인 배치가 디케토산과 완전히 일치함을 알 수 있다. 특히, 플라보놀의 3번 수산화기에 아릴 링커와 혐수성 작용기를 도입함으로써 얻어지는 [화학식 2]로 대표될 수 있는 ADK의 유사체는 ADK와 정확하게 일치되는 구조를 가짐을 도 4에서 확인할 수 있다.

따라서 본 발명에서는, 플라보놀의 3번 수산화기에 아릴 링커와 거기에 연결된 혐수성 작용기를 적절히 도입함으로써 화학식 2로 대표될 수 있는 ADK의 유사체를 합성하였으며 (도 5), 이 화합물들의 높은 HCV RNA 중합효소 저해능을 검증함으로써 (도 6) 발명을 완결하였다.

이상 상세히 기술한 바와 같이, 본 발명에서는 적절한 치환기를 도입한 플라보놀 유도체들에 의한 HCV RNA 중합효소 활성 저해능을 검증하였고 이를 통하여 C형 간염의 치료제로 사용될 수 있다는 것을 확인할 수 있었다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 아니하는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1:5,7-dimethoxy-2-phenyl-chromen-4-one (도 5의 화합물 2)의 제조:

시중에서 구입 가능한 물질인 도 5의 화합물 1인 chrysin(시그마-알드리치)(1 g, 3.93 mmol)을 아세톤 (20 mL)에 녹인 용액에 술폰산디메틸 (1.24 g, 9.83 mmol)과 탄산칼륨 (4.35 g, 31.47 mmol)을 가하고 12 시간 동안 가열환류교반하였다. 아세톤을 감압증류하여 얻어진 잔류물을 디클로로메탄으로 취하고 이 용액을 물로 세 번 씻은 후 황산마그네슘을 가하여 수분을 제거하였다. 유기용매를 감압증류하여 얻어진 잔류물을 소량의 아세톤에 녹인 후 재결정하여 도 5의 화합물 2 (1.055 g, 3.74 mmol, 95% yield)를 연한 노란색 고체로 얻었다:

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ7.87-7.85 (m, 2H), 7.49-7.46 (m, 3H), 6.67 (s, 1H), 6.56 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.37 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.84, (s, 3H).

실시예 2:3-hydroxy-5,7-dimethoxy-2-phenyl-4 H -chromen-4-one (도 5의 화합물 3)의 제조:

LDA (2.0 M 용액, 2 mL, 4 mmol)를 테트라히드로퓨란 (10 mL)에 녹인 후 -78 ^oC로 냉각한 용액에 위에서 얻은 도 5의 화합물 2 (282.3 mg, 1 mmol)를 테트라히드로퓨란 (10 mL)에 녹인 용액을 적가하고 6 시간 동안 교반하였다. 반응용액에 붕소산트리메틸 (0.5 mL)을 테트라히드로퓨란 (5 mL)에 녹인 용액을 가하고 -78 ^oC에서 1 시간 동안 교반한 후, 초산 (0.4 mL)을 가하고 30 분간 더 교반하고 마지막으로 30%-H₂O₂ (1 mL)를 가하였다. 반응용액의 온도를 서서히 상온으로 올린 후, 탄산수소나트륨 수용액을 가하여 중화하고 디클로로메탄으로 3회 추출하였다. 모아진 디클로로메탄층을 황산마그네슘으로 탈수하여 여과한 후 감압증류하여 얻어진 잔류물을 실리카겔 관크로마토그래피 (디클로로메탄:아세트산에틸 = 5:1)로 정제하여 도 5의 화합물 3 (179 mg, 0.6 mmol, 60% yield)을 탁한 노란색 오일형태로 얻었다:

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8.17 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 7.40 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.30 (d, J = 1 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.88 (s, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃): δ171.96, 164.47, 160.50, 158.94, 141.71, 138.14, 131.01, 129.55, 128.45, 127.10, 106.15, 95.68, 92.33, 56.30, 55.75.

실시예 3:3-( tert -butyldimethylsilyloxy)-5,7-dimethoxy-2-phenyl-4 H - chromen-4-one (도 5의 화합물 4)의 제조:

위에서 얻은 도 5의 화합물 3 (1.6 g, 5.36 mmol)과 DMAP (130 mg, 1.07 mmol)를 무수 피리딘 (30 mL)에 녹인 용액에 TBDMSCl (1.62 g, 10.73 mmol)을 가한 후, 60 ^oC에서 12 시간 동안 교반하였다. 반응용액을 감압증류하여 피리딘을 제거한 후 잔류물을 디클로로메탄으로 취하고 물로 씻어냈다. 디클로로메탄층을 황산마그네슘으로 탈수, 여과한 후 감압증류하여 얻어진 잔류물을 실리카겔 관크로마토그래피 (디클로로메탄:아세트산에틸 = 4:1)로 정제하여 도 5의 화합물 4 (1.38 g, 3.35 mmol, 63% yield)를 노란색 고체로 얻었다:

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 7.92 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 2H), 7.46-7.38 (m, 3H), 6.45 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 0.77 (s, 9H), 0.19 (s, 6H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃): δ 182.00, 163.60, 161.00, 158.72, 138.47, 131.56, 129.63, 128.63, 128.02, 108.20, 95.55, 92.15, 56.53, 55.66, 25.73, 18.75, -3.74; LC/MS (ESI) m/z 413.4 [M+H]⁺.

실시예 4:3-( tert -butyldimethylsilyloxy)-5,7-dihydroxy-2-phenyl-4 H - chromen-4-one (도 5의 화합물 5)의 제조:

위에서 얻은 도 5의 화합물 4 (100 mg, 0.24 mmol)를 무수 디클로로메탄 (1 mL)에 녹인 용액에 삼브롬화붕소 (1.0 M in CH₂Cl₂, 1.0 mL)를 상온에서 적가하고 6 시간 동안 교반하였다. 포화탄산칼륨 수용액을 반응용액에 가한 후 디클로로메탄으로 희석하였다. 유기층을 물로 씻어내고 황산마그네슘으로 탈수한 후 여과하여 얻어진 여과액을 감압증류하였다. 얻어진 잔류물을 실리카겔 관크로마토그래피 (디클로로메탄:아세트산에틸 = 3:1)로 정제하여 도 5의 화합물 5 (85 mg, 0.22 mmol, 92% yield)를 노란색 고체로 얻었다:

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 12.7 (s, 1H, -OH), 7.92-7.89 (m, 2H), 7.69-7.65 (m, 3H), 6.39 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.73 (s, 1H, -OH), 0.81 (s, 9H), 0.11 (s, 6H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 177.75, 165.72, 162.23, 157.89, 147.19, 138. 58, 132. 43, 131.06, 128.84, 104.69, 99.56, 94.96, 27.26, 26.91, -1.75; LC/MS (ESI) m/z 385.4 [M+H]⁺.

실시예 5:3-(substituted-benzyloxy)-5,7-dihydroxy-2-phenyl-4 H -chro- men-4-one (도 5의 화합물 6)의 제조:

위에서 얻은 도 5의 화합물 6 (1 당량)과 탄산칼륨 (1.1 당량)을 아세톤에 넣어 섞은 혼합물에 적절하게 치환된 브롬화벤질 (1.1 당량)을 적가한다. 반응 혼합물을 상온에서 48 시간 동안 교반한 후, 1N 염산용액을 가하고 디클로로메탄으로 추출한다. 모아진 디클로로메탄층을 황산마그네슘으로 탈수하고 여과하여 얻어진 여과액을 감압증류한 후 잔류물을 디클로로메탄에서 재결정하여 도 5의 화합물 6을 얻었다:

3-(2-chlorobenzyloxy)-5,7-dihydroxy-2- phenyl-4 H -chromen-4-one (6a): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.70 (s, 1H), 7.98 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.59-7.61 (m, 1H), 7.47-7.52 (m, 3H), 7.27-7.35 (m, 3H), 6.53 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.27 (s, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 178.41, 164.83, 161.72, 157.03, 156.53, 137.41, 134.29. 132.94, 131.23, 131.07, 130.25, 129.47, 128.78, 127.55, 104.85, 99.14, 94.19, 70.91.

3-(3-chlorobenzyloxy)-5,7-dihydroxy-2-phenyl-4 H -chromen -4-one (6b): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.7 (s, 1H, -OH), 8.01 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 7.32 (s, 3H), 7.41 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.31 (s, 1H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 179. 89, 166.36, 163.31, 158.48, 157.80, 140.73, 138.92, 134.76, 132.58, 131.82, 131.58, 131.44, 130.09, 129.63, 128.36, 106.16, 100.34, 95.42, 74.47; LC/MS (ESI) m/z 395.2 [M+H]⁺.

3-(4-chlorobenzyloxy)-5,7-dihydroxy-2-phenyl-4 H -chro- men-4-one (2c): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.7 (s, 1H, -OH), 9.94 (s, 1H), 8.01 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.58-7.51 (m, 3H), 7.39 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.52 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.13 (s, 2H;. ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 178.44, 164.81, 161.81, 157.02, 156.39, 137.47, 133.09, 131.31, 130.42, 129.70, 129.37, 128.01, 127.70, 104.78, 95.00, 93.30, 73.00; LC/MS (ESI) m/z 395.2 [M+H]⁺.

3-(2-bromobenzyloxy)-5,7-dihydroxy-2-phenyl-4 H -chromen-4-one (6d): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.7 (s, 1H, -OH), 7.98-8.01 (m, 2H), 7.62 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.47-7.53 (m, 4H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 5.25 (s, 2H); LC/MS (ESI) m/z 440.1 [M+H]⁺.

3-(3-bromobenzyloxy)-5,7-dihydroxy-2- phenyl-4 H -chromen-4-one (6e): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.7 (s, 1H, -OH), 8.00-8.02 (m, 2H), 7.52-7.59 (m, 4H), 7.46 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.15 (s, 2H); LC/MS (ESI) m/z 438.9 [M-H]⁺.

3-(4-bromobenzyloxy)-5,7- dihydroxy-2-phenyl-4 H -chromen-4-one (6f): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.7 (s, 1H, -OH), 7.99-8.01 (m, 2H), 7.53-7.61 (m, 3H), 7.46 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.52 (s, 1H), 6.30 (s, 1H), 5.12 (s, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 176.50, 162.91, 159.75, 154.92, 154.47, 135.54, 134.26, 129.48, 128.95, 128.77, 128.42, 126.84, 119.57, 102.87, 97.25, 92.08, 71.24; LC/MS (ESI) m/z 440.8 [M+H]⁺.

2-[(5,7-dihydroxy-4- oxo-2-phenyl-4 H -chromen-3-yloxy) methyl]benzonitrile (6g): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.66 (s, 1H, -OH), 7.94-7.96 (m, 2H), 7.61-7.71 (m, 3H), 7.46-7.54 (m, 4H), 6.52 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.35 (s, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 178.27, 164.94, 161.70, 157.05, 156.67, 141.80, 137.10, 133.06, 130.16, 129.45, 129.42, 128.87, 128.73, 120.79, 115.78, 104.84, 96.13, 94.24, 73.61.

3-[(5,7-dihydroxy -4-oxo-2-phenyl-4 H -chromen-3-yloxy)methyl]benzonitrile (6h): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.6 (s, 1H, -OH), 8.01 (dd, J = 7.4, 1.4 Hz, 2H), 7.56-7.51 (m, 3H), 7.37 (s, 1H), 7.34-7.30 (m, 3H), 6.51 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.14(s, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 179.59, 165.22, 163.31, 163.04, 158.17, 157.64, 139.57, 138.45, 132.84, 132.66, 131.44, 130.23, 129.51, 129.39, 119.19, 113.10, 106.14, 99.68, 94.85, 73.68; LC/MS (ESI) m/z 386.2 [M+H]⁺.

4-[(5,7-dihydroxy-4-oxo- 2-phenyl-4 H -chromen-3-yloxy) methyl]benzonitrile (6i): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.6 (s, 1H, -OH), 7.99-8.02 (m, 2H), 7.75 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.71 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.51-7.62 (m, 3H), 6.53 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 5.24 (s, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 178.31, 164.88, 161.69, 157.03, 156.43, 142.52, 137.53, 132.49, 130.27, 128.93, 128.79, 119.06, 111.03, 104.83, 94.24, 93.03, 73.07; LC/MS (ESI) m/z 386.3 [M+H]⁺.

5,7-dihydroxy-3-(3-methylbenzyloxy)-2-phenyl-4 H -chromen- 4-one (6j): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.8 (s, 1H, -OH), 8.01-8.03 (m, 2H), 7.51-7.58 (m, 3H), 7.08-7.18 (m, 4H), 6.51 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.12 (s, 2H), 2.86 (s, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 179.78, 165.38, 163.29, 158.14, 157.40, 138.60, 137.64, 131.71, 130.32, 129.68, 129.30, 128.96, 126.64, 106.04, 99.66, 94.66, 74.93, 21.36; LC/MS (ESI) m/z 375.2 [M+H]⁺.

5,7-dihydroxy-3-(4- methylbenzyloxy)-2-phenyl-4 H -chromen-4-one (6k): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.8 (s, 1H, -OH), 8.02 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.52-7.54 (m, 3H), 7.24 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.09 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 6.51 (s, 1H), 6.30 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 2.29 (s, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 178.59, 164.79, 161.73, 156.98, 156.27, 137.78, 137.58, 133.71, 131.25, 130.46, 129.19, 129.12, 128.83, 128.78, 104.79, 99.14, 94.15, 73.86, 21.12.

5,7-dihydroxy-3-(2-methoxybenzyloxy)-2-phenyl-4 H -chromen-4-one (6l): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.80 (s, 1H, -OH), 7.98-8.00 (m, 2H), 7.39-7.52 (m, 3H), 7.34 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.82-6.86 (m, 2H), 6.51 (s, 1H), 6.30 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 3.64 (s, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 176.19, 162.27, 159.25, 154.85, 154.47, 153.65, 135.12, 128.57, 128.03, 127.94, 127.58, 126.25, 126.12, 121.96, 102.29, 96.61, 91.56, 66.43, 55.61.

5,7-dihydroxy-3-(3-methoxybenzyloxy)-2 -phenyl-4 H -chromen-4-one (6m): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.7 (s, 1H, -OH), 8.03-8.05 (m, 2H), 7.53-7.55 (m, 3H), 7.20 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.82-6.93 (m, 3H), 6.51 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 5.15 (s, 2H), 3.70 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/z 391.1 [M+H]⁺.

5,7-dihydroxy-3- (4-methoxybenzyloxy)-2-phenyl-4 H -chromen-4-one (6n): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.8 (s, 1H, -OH), 8.00-8.03 (m, 2H), 7.50-7.55 (m, 3H), 7.26 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.82 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.51 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 5.09 (s, 2H), 3.77 (s, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 178.64, 164.78, 161.71, 159.56, 156.98, 156.32, 137.49, 130.68, 130.54, 128.77, 128.63, 113.84, 104.82, 99.10, 94.15, 73.70, 55.35.

5,7-dihydroxy-3-(2-nitrobenzyloxy)-2-phenyl-4 H -chromen-4-one (6o): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.6 (s, 1H -OH), 7.99-8.09 (m, 4H), 7.75-7.79 (m, 1H), 7.58-7.61 (m, 1H), 7.49-7.54 (m, 3H), 6.54 (s, 1H), 6.32 (s, 1H), 5.53 (s, 2H).

5,7-dihydroxy-3-(3-nitrobenzyloxy)-2- phenyl-4 H -chromen-4-one (6p): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.7 (s, 1H, -OH), 8.26 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.98-8.00 (m, 2H), 7.83 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.51-7.53 (m, 3H), 6.52 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.29 (s, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 178.24, 164.86, 161.67, 156.93, 156.43, 147.82, 138.94, 137.20, 134.05, 131.05, 130.15, 129.76, 128.56, 122.96, 122.93, 104.63, 98.97, 93.99, 72.58; LC/MS (ESI) m/z 406.2 [M+H]⁺.

5,7-dihydroxy-3-(4-nitrobenzyloxy)-2- phenyl-4 H -chro- men-4-one (6q): ¹H NMR (400 MHz, Acetone-d ₆ ): δ 12.6 (s, 1H, -OH), 8.18 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 8.00-8.02 (m, 2H), 7.69 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.52-7.57 (m, 3H), 6.53 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.30 (s, 2H).

실시예 6. 플라보놀 유도체에 의한 HCV RNA 중합효소 활성 저해능력의 검증:

상기 실시예 5에서 제조된 화합물들의 HCV 표적효소인 RNA중합효소의 활성 억제 능력을 검증하기 위해, HCV의 RNA 중합효소를 암호화하고 있는 유전자 (HCV NS5B)의 소수성 잔기 21개가 제거된 유전자를 단백질발현 플라스미드에 끼워 넣은 후 대장균에서 재조합 단백질 (GST-NS5Bt21)을 과발현 하여 정제한다.

중합효소가 RNA 주형을 인식하여 중합반응을 일으킬 수 있도록 RNA homopolymer인 poly A 주형 1mg/ml과 프라이머인 oligo dT (18 mer) 2mg/ml을 섞어주고 95도에서 1분간 반응하고 실온에서 30분간 서서히 식히어 RNA와 primer의 annealing 중합체인 RNA주형을 형성한다. 생성된 주형을 포함하는 반응용액에 정제한 RNA 중합효소(9.8 mg)를 첨가하고, 10X reaction buffer (500mM Tris HCl, pH7.5/ 200mM MgCl₂) 3ml, DTT 용액 (10mM) 3ml, UTP (5mM) 3ml, 방사성 동위원소를 포함하는 알파-[³²P] UTP (25mCi) 3ml와 각 농도의 화합물을 첨가한 후 3차 증류수로 최종 부피 30ml로 맞춘다. 실온에서 2시간 반응 한 후 반응액 1ml를 Polyethyleneimine(PEI)-cellulose TLC plate에 점적하고, 전개용매(0.3M potassium phosphate, pH3.4)를 써서 전개한 후, 자가방사법을 이용하여 생성된 RNA의 존재여부와 정량을 수행하였다. 플라보놀 유도체 화합물이 포함되지 않은 RNA 중합효소 반응을 대조군으로 하여 플라보놀 유도체 화합물이 포함된 경우의 줄어든 RNA합성을 비교/정량하여 화합물의 효소활성 억제능을 산출하였다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구 항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

도 1은 아릴디케토산 (ADK)의 pharmacophore 구조를 설명한다.

도 2는 HCV RNA 중합효소에서 아릴디케토산의 결합자리를 설명한다.

도 3은 아릴디케토산 (ADK)과 플라보놀의 공통적인 금속이온 결합 구조를 설명한다.

도 4는 아릴디케토산 (ADK)과 플라보놀의 겹친 그림을 설명한다.

도 5는 화학식 2로 대표되는 화합물들의 합성과정을 설명한다.

도 6은 화학식 2로 대표되는 화합물들에 의한 HCV RNA 중합효소 저해능을 표로 나타내었다.

Claims (12)

1. 하기 화학식의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:

   

   상기 화학식에서 R은 할로겐, CN, (C₁-C₄) 알킬, (C₁-C₄) 알콕시 및 NO₂로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이고 오르소(ortho)-, 메타-, 또는 파라- 위치에 존재함.
2. 제 1항에 있어서, 상기 할로겐은 클로로 또는 브로모인 것을 특징으로 하는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
3. 제 1항에 있어서, 상기 (C₁-C₄) 알킬은 메틸인 것을 특징으로 하는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
4. 제 1항에 있어서, 상기 (C₁-C₄) 알콕시는 메톡시인 것을 특징으로 하는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
5. 제 1항에 있어서, 상기 R은 클로로, 브로모, CN, 메틸, 메톡시 및 NO₂로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이고 오르소(ortho)-, 메타-, 또는 파라- 위치에 존재하는 것을 특징으로 하는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 C형 간염 감염의 예방 또는 치료효과를 가지는 것을 특징으로 하는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
7. 하기 화학식의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 C형 간염 감염 예방 또는 치료용 제약 조성물:

   

   상기 화학식에서 R은 할로겐, CN, (C₁-C₄) 알킬, (C₁-C₄) 알콕시 및 NO₂로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이고 오르소(ortho)-, 메타-, 또는 파라- 위치에 존재함.
8. 제 7항에 있어서, 상기 할로겐은 클로로 또는 브로모인 것을 특징으로 하는 C형 간염 감염 예방 또는 치료용 제약 조성물.
9. 제 7항에 있어서, 상기 (C₁-C₄) 알킬은 메틸인 것을 특징으로 하는 C형 간염 감염 예방 또는 치료용 제약 조성물.
10. 제 7항에 있어서, 상기 (C₁-C₄) 알콕시는 메톡시인 것을 특징으로 하는 C형 간염 감염 예방 또는 치료용 제약 조성물.
11. 제 7항에 있어서, 상기 R은 클로로, 브로모, CN, 메틸, 메톡시 및 NO₂로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이고 오르소(ortho)-, 메타-, 또는 파라- 위치에 존재하는 것을 특징으로 하는 C형 간염 감염 예방 또는 치료용 제약 조성물.
12. 삭제

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