본 발명은 양마추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 외용제 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명에 따른 피부 미백용 외용제 조성물을 보다 상세히 설명한다.
본 발명에서 사용하는 양마(Hibiscus cannabinus)는 아욱과의 한해살이풀로 케나프라고도 한다. 아프리카와 인도가 원산지이다.
본 발명에서 사용하는 양마추출물은, 양마로부터 침출, 전출하여 얻은 침출액 뿐만 아니라 침출액을 다시 일부 또는 전부 농축하여 얻은 농축물 또는 상기의 농축물을 다시 건조시켜 제조한 침체, 전제, 정기, 유동 엑기스 및 양마 중에 함유되어 주 효과를 발휘하는 화학 물질은 물론 식물 그 자체를 모두 포함한다.
본 발명에서 사용하는 양마를 제조하기 위한 추출 유기 용매로는 극성 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올 등의 저급 알코올, 아세톤 또는 에틸메틸케톤을 이용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 이러한 유기 용매를 단독으로 또는 물과 혼합하여 사용할 수 있다. 추출방법은 본 발명 기술분야에 통상적으로 알려져 있는 방법을 적의 선정 및 응용하여 사용할 수 있다.
한편, 본 발명에 따른 양마를 피부 미백용 화장료에 사용할 경우 조성물 총 중량에 대하여 0.001~20.0중량%인 것이 바람직하며, 0.01~10.0중량%로 함유하는 것이 보다 바람직하다. 이는 0.001중량% 미만에서는 그 효과를 기대할 수 없고, 20.0중량% 초과에서는 안전성 또는 제형상의 제조에 어려움이 있기 때문이다. 그러나, 상기의 양마의 양은 특별히 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 피부 미백용 외용제 조성물은 멜라닌 생성을 억제하고, 자외선 등에 의하여 생성된 색소 침착을 개선하여 우수한 미백 효과를 제공한다.
본 발명의 피부 미백용 외용제 조성물은 양마추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 미백 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 상기 미백 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 미백 성분 등을 함유하는 것도 무방하다. 이와 같은 미백 성분으로는 알부틴, 아스코르브산 유도체 등을 들 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 외용제 조성물은 가용화 기술을 이용한 수용성 화장품 제형에서부터 유화 기술을 응용한 유화 화장품 제형으로 제공될 수 있고, 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없다. 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스 등의 화장료로 제형화될 수 있다.
이하 실시예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명한 것이다.
[실시예 1] 양마의 에탄올 수용액 추출물의 제조
실온 음지에서 건조시킨 양마(100g)를 호모기나이저(Homogenizer;PH-91, AMT)로 마쇄한 다음 50% 에탄올 수용액 1리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고, 상기 여과액을 4-15℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 2번 여과지로 여과한다. 상기 추출물을 3리터들이 분액 깔대기에 넣고 여기에 에틸 아세테이트 1리터를 가한뒤 흔들어서 잘 섞어준 다음 두층으로 완전히 분리된 후 상층(에틸아세테이트층)을 취한다. 하층(물층)을 다시 분액 깔대기에 넣고 에칠 아세테이트로 두 번 더 추출한다. 분리된 상층을 모두 합한 뒤 냉각 콘덴서가 달린 증류장치를 이용하여 50℃로 감압 농축하고 건조하여 건조중량 19.3g을 얻었다.
[실시예 2] 양마의 에탄올 추출물의 제조
실온 음지에서 건조시킨 양마(100g)를 호모기나이저(Homogenizer;PH-91, AMT)로 마쇄한 다음 에탄올 1리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 300메쉬 여과하고, 상기 여과액을 4-15℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한다. 상기 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치를 이용하여 60℃로 감압 농축한다. 이를 물 50ml에 분산한 후 에틸아세테이트 300ml로 다시 추출한 후 유기층을 농축하고 동결건조하여 건조중량 18.5g을 얻는다.
[실시예 3] 양마의 노말 부탄올 추출물의 제조.
실온 음지에서 건조시킨 양마(100g)를 호모기나이저(Homogenizer;PH-91, AMT)로 마쇄한 다음 노말 부탄올 1리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 300메쉬 여과하고, 상기 여과액을 4-15℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한다. 상기 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치를 이용하여 80℃로 감압 농축한다. 이를 물 50ml에 분산한 후 에틸아세테이트 300ml로 다시 추출한 후 유기층을 농축하고 동결건조하여 건조중량 16.3g을 얻는다.
[실시예 4] 양마의 디에틸 에테르추출물의 제조.
실온 음지에서 건조시킨 양마(100g)를 호모기나이저(Homogenizer;PH-91, AMT)로 마쇄한 다음 디에틸 에테르 1리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 300메쉬 여과하고, 상기 여과액을 4-15℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 2번 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한다. 상기 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치를 이용하여 50℃로 감압 농축한다. 이를 물 50ml에 분산한 후 에틸아세테이트 300ml로 다시 추출한 후 유기층을 농축하고 동결건조하여 건조중량 20.1g을 얻는다.
[시험예 1] 멜라노마 세포내의 티로시나제 활성에 대한 영향
상기 실시예 1~4로 부터 얻은 양마추출물의 티로시나제 활성억제에 대한 효
과를 종래의 미백제로 알려진 알부틴과 비교하여 측정하였다.
티로시나제의 활성측정은 Pomerantz (Pomerantz, S. (1969) Science 164, 838-839)와 Oikawa et al. (Oikawa, A. M., Nakayasu, M., Nohara, M., and Tchen, T. T. (1972) Biochim. Biophys. Acta 148, 548-557)의 방법을 따라 시행하였다.
먼저, Mel-ab 세포 2 x 104 세포를 6웰 배양접시에 시주하고, 실시예 1- 4의 양마추출물, 및 알부틴을 각각 표 1의 농도로 처리하고 24시간 배양하였다.
24시간 후, 2 Ci[3H]티로신/㎖의 [3H]L-티로신을 처리하고 24시간 더 배양하
였다. 이 후, 세포 배양액을 얻어 3H2O 의 양을 정량하여 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
물질 |
티로시나제 활성도 (%) |
비처리군 |
100 |
알부틴 50ppm |
85 |
실시예1 10ppm |
68 |
실시예2 10ppm |
60 |
실시예3 10ppm |
65 |
실시예4 10ppm |
62 |
알부틴 10ppm |
61 |
상기 표 1에서 알 수 있는 바와 같이, 상기 실시예 1~4 양마추출물은 티로시나제 활성억제 효과가 우수함을 확인하였다.
[시험예 2] 멜라노사이트에 대한 양마추출물의 멜라닌 생성 억제능 평가
상기 실시예1-4로부터 얻은 양마추출물의 멜라닌 생성 억제 효과를 코지산과 비교하여 측정하였다.
세포는 C57BL/6 마우스에서 유래한 멜란-a(Melan-a) 세포를 사용하였다. 이 세포는 암화된 것은 아니지만 여러 계대 동안 죽지 않는 성질을 가지고 있어서 실험에 적합하다. 멜란-a(Melan-a) 세포는 우태아혈청 10%, 테트라데카노일폴볼-아세테이트(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate) 200nM, 스트렙토마이신(streptomycin) 100mg/L, 페니실린(penicillin) 100,000U/L가 들어 있는 RPMI-1640(pH 7.0-7.1) 배지에서 키웠다. 멜란-a(Melan-a) 세포를 24개의 구멍을 가진 플레이트에, 구멍 하나당 세포수가 105이 되도록 깔았다. 24시간 동안 세포가 기벽에 붙도록 한 후, 새로운 배지에 실험 시료로 상기 실시예 1-4 또는 코지산을 사용하고 원하는 농도로 시료를 넣어서 세포에 처리하였으며, 실시예 1-4의 경우는 1ppm, 5ppm, 10ppm, 20ppm, 알부틴의 경우는 5ppm, 10ppm, 25ppm, 50ppm의 농도로 하여 처리하였다. 실험 시료는 DMSO(dimethylsulphoxide)에 녹여서 사용하였으며, 대조군은 DMSO만 배지에 넣어서 세포에 처리하였다. 위와 같은 방법으로 실험 시료를 하루에 한 번, 3일간 연속으로 처리하고 2일 후에 세포가 만든 멜라닌 양과 세포 생존율을 측정하였다. 멜라닌의 양은 1N NaOH로 세포를 완전히 녹인 후 400nm에서의 흡광도를 측정하여 결정하였다. 세포 생존율은 크리스탈 바이올릿(crystal violet)으로 얼마나 많은 세포가 염색되는지를 봐서 확인하였다. 대조군의 멜라닌 양과 세포 생존율을 100%로 하고 실험군의 멜라닌 양과 세포 생존율을 대조군 대비 %로 계산하였다. 또한 본 발명자들은 멜라노사이트의 멜라닌 생성을 반으로 줄이는데에 필요한 양마 추출물의 농도(IC 50)를 측정하였다. 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.
멜라닌 생성 억제 효과
시료 |
IC50(ppm) |
대조군(무첨가) |
- |
실시예 1 |
10.07 |
실시예 2 |
6.47 |
실시예 3 |
9.10 |
실시예 4 |
8.10 |
알부틴 |
39.36 |
상기 표 1로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 의해서 제조된 4가지 종류의 양마 추출물 중에서 실시예 2의 에탄올로 추출한 양마추출물의 경우 가장 좋은 효과를 나타내었다.
본 발명에 의한 실시예 1-4 4가지 양마추출물 모두는 알부틴보다 멜라닌 생성 저해율이 훨씬 우수함을 확인할 수 있다.
본 발명의 양마 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료의 제형은 임의로 선택할 수 있으며, 종래의 화장료 제형인 영양크림, 영양로션, 마사지크림, 영양에센스, 유연화장수 등 여러 가지 형태로 제조할 수 있다.
[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)
하기에 기재된 조성으로 양마추출물을 함유하는 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합성분 |
함량(중량%) |
양마 추출물 |
2.0 |
글리세린 |
3.0 |
부틸렌글리콜 |
2.0 |
프로필렌글리콜 |
2.0 |
카르복시비닐폴리머 |
0.1 |
PEG 12 노닐페닐에테르 |
0.2 |
폴리솔베이트 80 |
0.4 |
에탄올 |
10.0 |
트리에탄올아민 |
0.1 |
방부제, 색소 및 향료 |
적량 |
정제수 |
잔량 |
[제형예 2] 영양크림
하기에 기재된 조성으로 양마추출물 함유하는 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합성분 |
함량(중량%) |
양마추출물 |
2.0 |
폴리솔베이트 60 |
1.5 |
솔비탄세스퀴올리에이트 |
0.5 |
PEG60 경화피마자유 |
2.0 |
유동파라핀 |
10.0 |
스쿠알란 |
5.0 |
카프릴릭/카프락트리글리세라이드 |
5.0 |
글리세린 |
5.0 |
부틸렌글리콜 |
3.0 |
프로필렌글리콜 |
3.0 |
트리에탄올아민 |
0.2 |
방부제, 색소 및 향료 |
적량 |
정제수 |
잔량 |
[제형예 3] 마사지크림
하기에 기재된 조성으로 양마추출물을 함유하는 마사지크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합성분 |
함량(중량%) |
양마 추출물 |
1.0 |
밀납 |
10.0 |
폴리솔베이트 60 |
1.5 |
PEG 60 경화피마자유 |
2.0 |
솔비탄세스퀴올레이트 |
0.8 |
유동파라핀 |
40.0 |
스쿠알란 |
5.0 |
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 |
4.0 |
글리세린 |
5.0 |
부틸렌글리콜 |
3.0 |
프로필렌글리콜 |
3.0 |
트리에탄올아민 |
0.2 |
방부제, 색소 및 향료 |
적량 |
정제수 |
잔량 |
[제형예 4] 팩
하기에 기재된 조성으로 양마 추출물을 함유하는 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합성분 |
함량(중량%) |
양마 추출물 |
1.0 |
폴리비닐알콜 |
13.0 |
소듐카르복시메틸셀룰로오스 |
0.2 |
글리세린 |
5.0 |
알란토인 |
0.1 |
에탄올 |
6.0 |
PEG 12 노닐페닐에테르 |
0.3 |
폴리솔베이트 60 |
0.3 |
방부제, 색소 및 향료 |
적량 |
정제수 |
잔량 |
[제형예 5] 젤
하기에 기재된 조성으로 양마 추출물을 함유하는 젤을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합성분 |
함량(중량%) |
양마 추출물 |
0.5 |
에틸렌디아민초산나트륨 |
0.05 |
글리세린 |
5.0 |
카르복시비닐폴리머 |
0.3 |
에탄올 |
5.0 |
PEG 60 경화피마자유 |
0.5 |
트리에탄올아민 |
0.3 |
방부제, 색소 및 향료 |
적량 |
정제수 |
잔량 |