KR100996463B1 - Microorganism with physiological activity that can control rising of blood glucose and can improve liver function and Food containing thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 혈당상승 억제효과와 간기능 개선 효과를 갖는 미생물 및 상기 미생물을 포함하는 식품에 관한 것으로 보다 상세하게는 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나의 혈당상승 억제효과와 간기능 개선 효과를 갖는 미생물, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제의 제조방법, 상기 미생물을 포함하는 식품, 상기 미생물을 포함하는 식품의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a microorganism having an inhibitory effect on blood glucose and an effect of improving liver function, and a food containing the microorganism, and more specifically, Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis ( Bacillus subtilis) KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP), Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus squarant (Bacillus circulans) A microorganism having a blood glucose raising inhibitory effect and liver function improving effect selected from the group of KS-80 strain (KCTC 11355BP), microbial preparations including the microorganisms, preparation of microbial preparations containing the microorganisms It relates to a method, a food comprising the microorganism, a method for producing a food comprising the microorganism.

당뇨, 혈당, 당화혈색소, 간 기능, 발효식품 Diabetes, blood sugar, glycated hemoglobin, liver function, fermented food

Description

혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물 및 상기 미생물을 포함하는 식품{Microorganism with physiological activity that can control rising of blood glucose and can improve liver function and Food containing thereof}Microorganisms with physiological activity that can control rising of blood glucose and can improve liver function and food containing

본 발명은 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물 및 상기 미생물을 포함하는 식품에 관한 것으로 보다 상세하게는 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나의 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제의 제조방법, 상기 미생물을 포함하는 식품, 상기 미생물을 포함하는 식품의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a microorganism having an inhibitory effect on blood glucose and an effect of improving liver function, and a food including the microorganism. More specifically, Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis ( Bacillus subtilis) KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP), Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus squarant (Bacillus circulans) A microorganism having a blood glucose raising inhibitory effect and liver function improving effect selected from the group of KS-80 strain (KCTC 11355BP), a microbial preparation including the microorganism, preparation of a microbial preparation comprising the microorganism It relates to a method, a food comprising the microorganism, a method for producing a food comprising the microorganism.

최근 보고 된 대한당뇨병학회 역학소위원회와 건강보험심사평가원의 공동조사 결과에 따르면 2003년 현재 우리나라 당뇨병 환자 수는 전인구의 8.29%인 401만 여명이며, 현재의 발생률을 감안하면 2010년에는 490만 명, 2020년 620만 명, 2030년 720만 명으로 추산하고 있어 그때는 우리나라 전체 인구 7명당 1명이 당뇨병 환자가 되는 심각한 현상이 초래될 것으로 우려된다. According to a recent survey by the Epidemiological Subcommittee of the Korean Diabetes Association and the Health Insurance Review and Assessment Service, as of 2003, the number of diabetic patients in Korea was 4.29 million, 8.29% of the total population. It is estimated that 6.2 million people will be diagnosed by 2020 and 7.2 million by 2030. At that time, it is feared that one person for every seven people in Korea will have diabetes.

당뇨병은 우리나라에서도 급격히 증가하고 있는 중요한 사망 원인 중 하나인 만성 질환이며 당뇨병에 의한 사망률도 1983년 인구 10만명당 4.3명에서 1995년 13.1명으로 빠른 속도로 증가하고 있으며, 2005년에는 15.9명으로 추정되고 있어 당뇨병의 예방과 관리 및 합병증 예방이 매우 중요한 실정이다.Diabetes is a chronic disease that is one of the leading causes of death in Korea, and the mortality rate from diabetes is increasing rapidly from 4.3 in 100,000 in 1983 to 13.1 in 1995, and is estimated to be 15.9 in 2005. Therefore, prevention and management of diabetes and prevention of complications are very important.

당뇨병은 그 자체로서의 병 뿐만 아니라 다른 병을 야기시키는 합병증을 유발하기 때문에 더욱 두려우며, 일단 발병이 되면 그 완치가 어려워 예방이 최선이며, 일단 당뇨병으로 확인이 되면, 발병이 된 이후에는 지속적으로 치료를 받아야하는 어려움이 있다. Diabetes is more fearful because it causes complications that cause other illnesses as well as itself, and prevention is best because it is difficult to cure once it develops. Once confirmed, diabetes is continuously treated. There is a difficulty to receive.

이에 당뇨병의 예방 및/또는 치료를 위한 부작용이 전혀 없는 약(drug) 또는 식품(Food)의 개발이 절실히 요구되고 있다. Therefore, there is an urgent need for the development of drugs or foods having no side effects for the prevention and / or treatment of diabetes.

지금까지는 혈당의 상승을 억제시키는 천연소재부터 항당뇨 효능이 있는 단일물질의 개발을 위해 많은 연구들이 집중되어 오고 있다. Until now, much research has been focused on the development of a single substance having antidiabetic effect from a natural material that suppresses the rise of blood sugar.

하지만 아직도 많은 연구 및 시판식품에서 당뇨억제 효능에 대한 만족할 만한 성과를 가져오지는 못하고 있는 실정이다.However, many studies and commercial foods still do not produce satisfactory results on the effects of diabetes suppression.

한편, 간 질환은 통계청에 따르면 간 질환은 한국인 전체 사망 원인의 약 10%를 차지하고 있다. Meanwhile, according to the National Statistical Office, liver disease accounts for about 10% of all Korean deaths.

지난 2004년의 경우 간 질환은 국민 전체 사망원인 중 6위, 40대 연령에서는 2위를 기록했다. In 2004, liver disease was the 6th leading cause of death for all people and 2nd for 40s.

한국인 간 질환자의 대부분은 B형 간염 바이러스가 원인이며 B형 간염 감염자는 300만명에 이르는 것으로 추산되고 있다. C형 간염 감염자의 수도 20만명에 달한다. Most Korean liver disease is caused by the hepatitis B virus, and an estimated 3 million people are infected with hepatitis B. The number of people infected with hepatitis C reaches 200,000.

간염이 6개월 이상 지속되면 만성으로 분류되는데,이런 증세가 5년을 넘기면 환자의 12∼20%는 간경변으로 발전하고 이 가운데 20∼23%는 간부전, 6∼15%는 간암이 된다. Hepatitis lasts more than six months and is classified as chronic. After more than five years, 12 to 20 percent of patients develop cirrhosis, 20 to 23 percent of liver failure, and 6 to 15 percent of liver cancer.

간 질환 치료를 위해 새로운 약제들이 빠르게 개발되면서 약제에 의한 간장애도 많이 발생하는 경향이 있는데, 약물 유발성 간 장애는 단순한 간 효소치의 상승에서부터 치명적인 간세포 괴사, 간경변증까지 다양한 종류의 간담도계 질환을 초래할 수 있다. The rapid development of new drugs for the treatment of liver disease tends to lead to many liver disorders caused by drugs. Drug-induced liver disorders can lead to various types of hepatobiliary diseases, ranging from simple liver enzyme levels to fatal liver cell necrosis and cirrhosis. have.

따라서 간 기능 개선을 위한 부작용이 전혀 없는 약(drug) 또는 식품(Food)의 개발이 절실히 요구되고 있다. Therefore, there is an urgent need for the development of drugs or foods having no side effects for improving liver function.

지금까지는 간 질환의 치료를 위한 의약품 개발에 많은 연구들이 집중되어 오고 있다. Until now, much research has been focused on the development of medicines for the treatment of liver disease.

그러나 아직도 부작용이 전혀 없는, 간 질환을 개선 효능이 있는 식품의 개발에 대해 만족할 만한 성과를 가져오지는 못하고 있는 실정이다.However, there is still no satisfactory results for the development of foods that have no side effects and are effective in improving liver disease.

본 발명은 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제의 제조방법, 상기 미생물을 포함하는 식품, 상기 미생물을 포함하는 식품의 제조방법을 제공하고자 한다.The present invention is a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improving effect, a microbial agent containing the microorganism, a method for producing a microbial agent containing the microorganism, a food containing the microorganism, the production of a food containing the microorganism To provide a method.

본 발명은 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나의 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제의 제조방법, 상기 미생물을 포함하는 식품, 상기 미생물을 포함하는 식품의 제조방법에 관한 것이다.The present invention is Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis (Bacillus licheniformis) KS-30 strain ( KCTC 11353BP), Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) selected from the group of blood glucose inhibitory effect and liver A microorganism having a function of improving the function, a microbial agent containing the microorganism, a method for producing a microbial agent containing the microorganism, a food containing the microorganism, a method for producing a food containing the microorganism.

본 발명은 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제의 제조방법, 상기 미생물을 포함하는 식품, 상기 미생물을 포함하는 식품의 제조방법을 제공할 수 있다.The present invention is a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improving effect, a microbial agent containing the microorganism, a method for producing a microbial agent containing the microorganism, a food containing the microorganism, the production of a food containing the microorganism It may provide a method.

한편, 본 발명의 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물은 혈당상승 억제 및 간 기능 개선(GST activity) 효과 이외에도 항산화활성(Antioxidant activity), 고혈압저해활성(ACE inhibitory activity) 등에도 높은 활성을 지닌바, 본 발명의 미생물을 이용하여 항산화활성 및/또는 고혈압저해활성의 활성을 지니는 미생물 제제, 항산화활성 및/또는 고혈압저해활성의 활성을 지니는 식품을 제공할 수 있다. On the other hand, the microorganisms having the effect of inhibiting blood glucose increase and improving liver function have a high activity in addition to the effect of inhibiting blood glucose increase and improving liver function (GST activity), but also antioxidant activity (Antioxidant activity), hypertension inhibitory activity (ACE inhibitory activity), etc. With the use of the microorganism of the present invention, it is possible to provide a microbial agent having an antioxidant activity and / or an antihypertensive activity, a food having an antioxidant activity and / or an antihypertensive activity.

본 발명은 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제의 제조방법, 상기 미생물을 포함하는 식품, 상기 미생물을 포함하는 식품의 제조방법을 나타낸다.The present invention is a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improving effect, a microbial agent containing the microorganism, a method for producing a microbial agent containing the microorganism, a food containing the microorganism, the production of a food containing the microorganism The method is shown.

본 발명은 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나의 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 나타낸다.The present invention is Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis (Bacillus licheniformis) KS-30 strain ( KCTC 11353BP), Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) selected from the group of blood glucose inhibitory effect and liver Microorganisms having a function improving effect are shown.

본 발명의 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나의 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물들의 분리과정은 다음과 같다.Bacillus sp. KS-25 strain of the present invention (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis (Bacillus licheniformis) KS-30 strain ( KCTC 11353BP), Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) selected from the group of blood glucose inhibitory effect and liver Separation process of the microorganisms having the effect of improving the function is as follows.

전통발효식품인 청국장과 된장을 1대 1의 비율로 혼합하여 60℃에서 30분 동안 열처리한 후, 1g을 취하여 0.85% NaCl 9㎖에 현탁한 후, 100 내지 10-7로 희석한다. 각각의 희석 현탁액 100㎕를 PCA 배지(DIFCO 사)에 도말하여 28℃에서 배양하고, 배양된 균주는 콜로니 형태가 다른 것들을 선발하여 TSA 배지에서 적어도 3회 이상 계대배양하여 단일콜로니로 분리한 후, 분리된 균주는 액체 배양하고 게노믹 DNA(genomic DNA)를 순화하여 16S RNA의 프라이머를 이용하여 증폭한 뒤, 증폭된 부분을 주형(template)으로 하고 ITS1 프라이머(CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA)와 ITS4 프라이머(TCCTCCGCTTATTGATATGC)를 사용하여 서열을 시퀀싱(sequencing)하는 과정을 거쳐 분리하였다.Cheonggukjang and doenjang, a traditional fermented food, are mixed at a ratio of 1 to 1, heat-treated at 60 ° C. for 30 minutes, 1 g of the solution is suspended in 9 ml of 0.85% NaCl, and diluted to 10 0 to 10 −7 . 100 μl of each dilution suspension was plated in PCA medium (DIFCO) and incubated at 28 ° C., and the cultured strains were screened at least three times in TSA medium and separated into single colonies by selecting different colonies. The isolated strain was liquid cultured, purified genomic DNA and amplified using a primer of 16S RNA, the amplified portion as a template (template) and the ITS1 primer (CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA) and ITS4 primer (TCCTCCGCTTATTGATATGC) The sequence was separated by sequencing.

상기 과정에 의한 결과물을 NCBI DB에서 조사하여 종을 동정하였는 바, 16S RNA로 균을 동정하는데 사용된 프라이머 세트는 "Nucleic acid techniques in bacterial systematics (John Wiley and Sons, England)"와 "nucleic acid research (2000) 28(1):173-174를 참고하였다.As a result of the above procedure, the species was identified by examining the NCBI DB. The primer sets used to identify the bacteria with 16S RNA were "Nucleic acid techniques in bacterial systematics (John Wiley and Sons, England)" and "nucleic acid research." (2000) 28 (1): 173-174.

상기에서 언급한 방법으로 분리한 5종의 미생물을 각각 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주, 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주, 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주, 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주로 명명하였다.The five microorganisms isolated by the above-mentioned method were respectively Bacillus sp. KS-25 strain, Bacillus subtilis KS-29 strain, Bacillus licheniformis KS- Thirty strains, Bacillus sonorensis KS-33 strain, Bacillus circulans KS-80 strain were named.

상기 균주들의 생리적 및 생화학적 특성은 하기의 표 1과 같다.Physiological and biochemical properties of the strains are shown in Table 1 below.

표 1. 5종 균주의 생리적 및 생화학적 특성 Table 1. Physiological and Biochemical Characteristics of Five Strains

항목Item KS-25KS-25 KS-29KS-29 KS-30KS-30 KS-33KS-33 KS-80KS-80 카탈라제 반응Catalase reaction + + + + + 그램 반응Gram reaction + + + + + 세포 형태Cell morphology rodrod rodrod rodrod rodrod rodrod 포자 형성Spore formation + + + + + 성장 15℃Growth 15 ℃ + + + + + 45℃     45 ℃ + + + + + 당이용 능력 Party use ability L-아라비노스
D-사이로스
D-갈락토스
D-글루코스
D-프락토스
D-만노스
D-만니톨
D-솔비톨
메칠-αD-글루코피라노사이드
N-아세칠 글루코스아민
아미그달린
아르부틴
에스쿨린 훼릭시트레이트
살리신
D-셀로비오스
D-말토스
D-락토스
D-멜리비오스
D-수크로스
D-트레할로스
이눌린
D-멜레지토스
D-라피노스
스타치
글리코겐
실리톨
겐티오비오스
D-투라노스
포타슘 글루코네이트 포타슘 2-케토글루코네이트
L-Arabinose
D-cyros
D-galactose
D-glucose
D-fractose
D-Mannose
D-mannitol
D-sorbitol
Methyl-αD-Glucopyranoside
N-acetyl glucoseamine
Amigdalin
Arbutin
Esculin Ferric Citrate
Salinity
D-cellobiose
D-Maltose
D-lactose
D-Melibiose
D-Sucrose
D-trehalose
Inulin
D-Melezitose
D-Raffinose
Starch
Glycogen
Silitol
Genthiobiose
D-Turanos
Potassium Gluconate Potassium 2-ketogluconate
































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균주명     Strain name Bacillus sp Bacillus sp Bacillus subtilisBacillus subtilis Bacillus licheniformisBacillus licheniformis Bacillus sonorensisBacillus sonorensis Bacillus circulansBacillus circulans

한편, 상기의 미생물들을 한국유전자은행(대전광역시 유성구 어은동 52번지 소재)을 기탁기관으로 하여, 바실러스 속 (Bacillus sp.) KS-25는 KCTC 11351BP, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29는 KCTC 11352BP, 바실러스 리케니 포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30는 KCTC 11353BP, 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33는 KCTC 11354BP, 바실러스 스큐란스 (Bacillus circulans) KS-80는 KCTC 11355BP로서 2008년 6월 25일자로 각각 기탁하였다.On the other hand, the microorganisms of the Korea Gene Bank (located at 52, Eeun-dong, Yuseong-gu, Daejeon) as a depositary institution, Bacillus sp. KS-25 is KCTC 11351BP, Bacillus subtilis KS-29 KCTC 11352BP, Bacillus licheniformis KS-30 is KCTC 11353BP, Bacillus sonorensis KS-33 is KCTC 11354BP, Bacillus circulans KS-80 is KCTC 11355BP Deposited on 25 June.

본 발명은 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물과, 쌀겨, 당류 및 정제수를 포함하는 혈당상승 억제효과를 갖는 미생물을 포함하는 미생물 제제를 나타낸다The present invention is Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis (Bacillus licheniformis) KS-30 strain ( KCTC 11353BP), Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) selected from the group of blood glucose suppression effect and liver Represents a microbial preparation comprising a microorganism having an effect of improving the function and a microorganism having an inhibitory effect on blood sugar including rice bran, sugars and purified water.

본 발명은 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 미생물 0.001∼0.02중량%, 쌀겨 2∼5중량%, 당류 4∼8중량% 및 잔부의 정제수를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 미생물 제제를 나타낸다The present invention is Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis (Bacillus licheniformis) KS-30 strain ( KCTC 11353BP), Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) at least one microorganism selected from the group 0.001 to 0.02% by weight Represents a microbial preparation comprising a microorganism having a blood glucose elevation inhibitory effect and a liver function improving effect including 2 to 5% by weight of rice bran, 4 to 8% by weight of sugar and the remainder of purified water

상기 미생물 제제에서의 미생물의 총균수는 1×105∼1×1012cfu/g가 되도록 포함할 수 있다.The total microbial count of the microorganisms in the microbial preparation may include 1 × 10 5 to 1 × 10 12 cfu / g.

상기 미생물 제제의 제형은 분말(powder), 펠렛(pellet), 타블렛(tablet), 환(丸), 캡슐(capsule)의 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형으로 제형화할 수 있다.The formulation of the microbial agent may be formulated in any one formulation selected from the group of powders, pellets, tablets, pills, capsules.

상기 미생물 제제의 제형은 분말(powder) 또는 펠렛(pellet)의 제형으로 제형화할 수 있다.The formulation of the microbial agent can be formulated in the form of powder or pellets.

본 발명은 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 미생물, 쌀겨, 당류 및 정제수를 혼합한 미생물이 혼합된 혼합물을 폭기(aeration)시키는 단계를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 미생물 제제의 제조방법을 나타낸다.The present invention is Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis (Bacillus licheniformis) KS-30 strain ( KCTC 11353BP), Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) any one or more microorganisms selected from the group, rice bran, sugars and A method for producing a microbial preparation including a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and a liver function improving effect, comprising aeration of a mixture of microorganisms mixed with purified water.

본 발명은 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 미 생물 0.001∼0.02중량%, 쌀겨 2∼5중량%, 당류 4∼8중량% 및 잔부의 정제수를 혼합하는 단계,The present invention is Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis (Bacillus licheniformis) KS-30 strain ( KCTC 11353BP), Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) any one or more microorganisms selected from the group 0.001-0.02 weight %, Rice bran 2-5% by weight, sugars 4-8% by weight and the remaining purified water,

상기 미생물이 혼합된 혼합물을 20∼25℃에서 2∼6시간 간격으로 5∼10m3/hr의 공기를 1∼3시간 동안 폭기하는 과정을 하루 2∼6회 반복적으로 수행하는 것을 15∼21일 동안 실시하는 단계를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 미생물 제제의 제조방법을 나타낸다.The process of aeration of the mixture containing the microorganisms at 5 to 10 m 3 / hr for 1 to 3 hours at 2 to 6 hours at 20 to 25 ° C. was repeated 2 to 6 times a day for 15 to 21 days. It shows a method for producing a microbial preparation comprising a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improving effect comprising the step carried out during.

본 발명은 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품을 나타낸다.The present invention represents a food comprising a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improving effect.

본 발명은 미강, 상황버섯, 노니, 녹차, 울금, 브로컬리, 아가리쿠스, 클로렐라, 보이차, 청국장의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 성분과; 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 미생물과, 쌀겨, 당류 및 정제수를 포함하는 미생물 제제;를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품을 나타낸다.The present invention is any one or more components selected from the group of rice bran, situation mushroom, noni, green tea, turmeric, broccoli, agaricus, chlorella, ivory tea, Cheonggukjang; Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP) , Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans (Bacillus circulans) KS-80 strain (KCTC 11355BP) any one or more selected from the group, rice bran, sugar and purified water Microbial agent comprising; represents a food comprising a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improving effect.

본 발명은 미강, 상황버섯, 노니(noni), 녹차, 울금, 브로컬리, 아가리쿠스, 클로렐라, 보이차, 청국장의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 성분 60∼99중량%와; 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 미생물과, 쌀겨, 당류 및 정제수를 포함하는 미생물 제제를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품을 나타낸다.The present invention is 60 to 99% by weight of any one or more components selected from the group of rice bran, green mushroom, noni, green tea, turmeric, broccoli, agaricus, chlorella, bodhi, and cheonggukjang; Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP) , Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans (Bacillus circulans) KS-80 strain (KCTC 11355BP) any one or more selected from the group, rice bran, sugar and purified water It represents a food containing a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and a liver function-improving effect including a microbial agent comprising.

본 발명은 미강, 상황버섯, 노니(noni), 녹차, 울금, 브로컬리, 아가리쿠스, 클로렐라, 보이차, 청국장의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 성분 60∼99중량%와; 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 미생물과, 쌀겨, 당류 및 정제수를 포함하는 미생물 제제 1∼40중량%;를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품을 나타낸다.The present invention is 60 to 99% by weight of any one or more components selected from the group of rice bran, green mushroom, noni, green tea, turmeric, broccoli, agaricus, chlorella, bodhi, and cheonggukjang; Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP) , Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans (Bacillus circulans) KS-80 strain (KCTC 11355BP) any one or more selected from the group, rice bran, sugar and purified water 1 to 40% by weight of the microbial agent comprising; foods containing a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improvement effect.

상기의 미강, 상황버섯, 노니, 녹차, 울금, 브로컬리, 아가리쿠스, 클로렐라, 보이차, 청국장의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 성분은 바람직하게는 분말의 형태로 사용하는 것이 좋다.Any one or more components selected from the group of rice bran, situation mushroom, noni, green tea, turmeric, broccoli, agaricus, chlorella, ivory tea, and cheonggukjang are preferably used in the form of powder.

상기 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품의 구성성분의 하나인 미생물 제제는 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 미생물 0.001∼0.02중량%, 쌀겨 2∼5중량%, 당류 4∼8중량% 및 잔부의 정제수로 이루어진 것을 사용할 수 있다.The microbial agent which is one of the constituents of the food containing microorganisms having the effect of inhibiting blood glucose increase and improving liver function is Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP), Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans ) Any one or more microorganisms selected from the group of KS-80 strain (KCTC 11355BP) consisting of 0.001 to 0.02% by weight, rice bran 2-5% by weight, sugars 4-8% by weight and the balance of purified water can be used.

상기 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품은 분말(powder), 펠렛(pellet), 타블렛(tablet), 환(丸), 캡슐(capsule)의 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형으로 제형화할 수 있다.Food containing a microorganism having the effect of inhibiting blood glucose increase and improving liver function is any one formulation selected from the group of powders, pellets, tablets, pills, and capsules. It can be formulated as.

상기 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품은 분말(powder) 또는 펠렛(pellet)제형으로 제형화할 수 있다.Food containing a microorganism having the effect of inhibiting blood glucose increase and improving liver function may be formulated into a powder or pellet formulation.

본 발명은 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품의 제조방법을 나타낸다.The present invention shows a method for producing a food comprising a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improving effect.

본 발명은 미강, 상황버섯, 노니(noni), 녹차, 울금, 브로컬리, 아가리쿠스, 클로렐라, 보이차, 대두의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 성분 60∼99중량%과; 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리 스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 미생물과, 쌀겨, 당류 및 정제수를 포함하는 미생물 제제 1∼40중량%를 혼합하되, 상기 미생물 제제가 혼합된 혼합물의 수분함량이 20∼60중량%가 되도록 하는 혼합하는 단계,The present invention is 60 to 99% by weight of any one or more components selected from the group of rice bran, green mushroom, noni, green tea, turmeric, broccoli, agaricus, chlorella, ivory tea, soybean; Bacillus sp.KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP) , Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans (Bacillus circulans) KS-80 strain (KCTC 11355BP) any one or more selected from the group, rice bran, sugar and purified water Mixing 1 to 40% by weight of a microbial agent comprising a mixing step such that the water content of the mixture in which the microbial agent is mixed is 20 to 60% by weight,

상기 미생물 제제가 혼합된 혼합물을 80∼85℃에서 2∼6시간(hr) 동안 1차 발효를 시키는 단계,First fermentation of the mixture of the microbial agent is mixed at 80 ~ 85 ℃ for 2-6 hours (hr),

상기 1차 발효 후 25∼30℃에서 20∼40일(day) 동안 2차 발효를 시키는 단계,After the first fermentation, the second fermentation for 20 to 40 days (day) at 25 to 30 ℃,

상기 2차 발효 후 80∼85℃에서 1∼3시간 동안 3차 발효를 시키는 단계, 및Tertiary fermentation for 1 to 3 hours at 80 to 85 ° C. after the secondary fermentation, and

상기 3차 발효물을 건조하는 단계를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품의 제조방법을 나타낸다.It shows a method for producing a food comprising a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improving effect comprising the step of drying the third fermented product.

상기의 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품은 대장균군 및 황색포도상구균과 같은 유해성 미생물이 검출되지 않았고 베타-글루칸(β-glucan)이 4.4g/100g, 글루탐산(glutamic acid)이 2.83g/100g, 아스파르트산(aspartic acid)이 2.00g/100g으로 높게 검출되었으며 항산화활성(Antioxidant activity), 고혈압저해활성(ACE inhibitory activity), 간 기능개 선능(GST activity)에서 높은 활성이 검출되었다. 또한 제2형 당뇨 마우스(KKAy 마우스)를 대상으로 한 실험에서 혈중 글루코오스(glucose) 및 당화혈색소 농도를 저하시키는데 효과가 있는 것으로 나타났으며 사염화탄소(CCl4)를 복강주사 한 SD 래트을 대상으로 한 동물실험에서 AST(SGOT), ALT(SGTP), ALP(alkaline phosphatase), LDH(lactate dehydrogenase)의 수치가 낮아지는 효과가 있는 것으로 나타났다. The food containing microorganisms having the effect of inhibiting blood sugar rise and improving liver function was not detected harmful microorganisms such as Escherichia coli and Staphylococcus aureus, and beta-glucan (β-glucan) was 4.4 g / 100 g and glutamic acid (glutamic acid). acid) was 2.83g / 100g and aspartic acid was 2.00g / 100g, and high activity was found in Antioxidant activity, ACE inhibitory activity, and GST activity. Was detected. In addition, experiments in type 2 diabetic mice (KKAy mice) have been shown to be effective in lowering blood glucose and glycated hemoglobin levels. Animals in SD rats intraperitoneally injected with carbon tetrachloride (CCl 4 ) In experiments, AST (SGOT), ALT (SGTP), alkaline phosphatase (ALP), and lactate dehydrogenase (LDH) levels were found to be effective.

본 발명의 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제의 제조방법, 상기 미생물을 포함하는 식품, 상기 미생물을 포함하는 식품의 제조방법에 대해 다양한 조건에 의해 실시해 본바, 본 발명의 목적을 달성하기 위해서는 상기에서 언급한 조건에 의해 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선 효과를 갖는 미생물, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제, 상기 미생물을 포함하는 미생물 제제의 제조방법, 상기 미생물을 포함하는 식품, 상기 미생물을 포함하는 식품의 제조방법을 제공하는 것이 바람직하다.Microorganisms having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improving effect of the present invention, microbial preparations containing the microorganisms, a method for producing a microbial preparation containing the microorganisms, foods containing the microorganisms, the production of foods containing the microorganisms According to various methods of the method, in order to achieve the object of the present invention, a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improvement effect under the above-mentioned conditions, a microbial preparation including the microorganism, including the microorganism It is desirable to provide a method for producing a microbial agent, a food containing the microorganism, and a method for producing a food containing the microorganism.

상기에서 언급한 본 발명의 내용에 있어서, 당류는 당밀, 설탕(백설탕, 황설탕, 흑설탕 포함), 포도당, 과당, 엿류, 당시럽류, 덱스트린, 올리고당, 꿀, 아스파탐, 당알코의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있으며, 이때 상기 당알코올은 솔비톨, 자일리톨, 에리스리톨, 파라티노스, 만니톨, 말티톨, 이노시톨, 쿠에르시톨의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 의미한다. In the context of the present invention mentioned above, the sugar is any one selected from the group of molasses, sugar (including white sugar, brown sugar, brown sugar), glucose, fructose, malt, syrup, dextrin, oligosaccharide, honey, aspartame, sugar alcohol One or more may be used, wherein the sugar alcohol means any one or more selected from the group consisting of sorbitol, xylitol, erythritol, paratinose, mannitol, maltitol, inositol, and quercitol.

이하 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 본 발명의 권리범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples and Test Examples. However, these are intended to explain the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not limited thereto.

<실시예 1-1> 미생물 제제의 제조Example 1-1 Preparation of Microbial Formulations

바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)가 각각 동일한 중량비로 혼합된 종균 0.01kg, 쌀겨 4kg, 당밀 2kg 및 황설탕 4kg을 음용수에 혼합하여 이들 총 무게가 100kg이 되도록 혼합한 후 22.5±2.5℃를 유지하며 4시간 간격으로 10m3/hr의 공기를 2시간 동안 폭기하는 과정을 하루에 4회 반복적으로 수행하며 21일간 배양하여 미생물 제제를 제조하였다. Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP) , Bacillus sonorensis (Bacillus sonorensis) KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) are mixed with the same weight ratio, respectively, 0.01kg, rice bran 4kg, molasses 2kg and 4kg of brown sugar is mixed with drinking water so that the total weight is 100kg, and 22.5 ± 2.5 ℃ is maintained and aeration of 10m 3 / hr of air for 4 hours is performed 4 times a day. And cultured for 21 days to prepare a microbial preparation.

상기에서 제조한 미생물 제제는 총균수 1.1×1010cfu/g였다.The microbial preparation prepared above was 1.1 × 10 10 cfu / g.

<실시예 1-2> 미생물 제제의 제조Example 1-2 Preparation of Microbial Formulations

종균으로 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP)를 단독으로 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 1-1과 동일한 방법으로 미생물 제제를 제조하였다.A microbial preparation was prepared in the same manner as in Example 1-1 except for using Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP) alone as a seed.

<실시예 1-3> 미생물 제제의 제조Example 1-3 Preparation of Microbial Formulations

종균으로 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP)를 단독으로 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 1-1과 동일한 방법으로 미생물 제제를 제조하였다.A microbial preparation was prepared in the same manner as in Example 1-1, except that Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP) was used as a seed.

<실시예 1-4> 미생물 제제의 제조Example 1-4 Preparation of Microbial Formulations

종균으로 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP)를 단독으로 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 1-1과 동일한 방법으로 미생물 제제를 제조하였다.A microbial preparation was prepared in the same manner as in Example 1-1 except for using Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP) alone as a seed.

<실시예 1-5> 미생물 제제의 제조Example 1-5 Preparation of Microbial Formulations

종균으로 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP)를 단독으로 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 1-1과 동일한 방법으로 미생물 제제를 제조하였다.A microbial preparation was prepared in the same manner as in Example 1-1, except that Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP) alone was used as a seed.

<실시예 1-6> 미생물 제제의 제조Example 1-6 Preparation of Microbial Formulations

종균으로 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)를 단독으로 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 1-1과 동일한 방법으로 미생물 제제를 제조하였다.A microbial preparation was prepared in the same manner as in Example 1-1 except for using Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) alone as a seed.

<실시예 2-1> 발효식품의 제조Example 2-1 Preparation of Fermented Foods

미강, 상황버섯, 노니, 녹차, 울금, 브로컬리, 아가리쿠스, 클로렐라, 보이차, 청국장으로 구성된 기능성 성분 60중량% 및 상기 실시예 1-1에서 제조한 미생물 제제 40중량%를 혼합하였다. 60% by weight of the functional ingredient consisting of rice bran, green mushroom, noni, green tea, turmeric, broccoli, agaricus, chlorella, ivory tea, and cheonggukjang and 40% by weight of the microbial preparation prepared in Example 1-1 were mixed.

상기 기능성 성분과 미생물 제제 혼합물을 82.5±2.5℃에서 4시간 동안 1차 발효시킨 후, 27.5±2.5℃에서 30일 동안 2차 발효를 거쳐, 82.5±2.5℃에서 2시간 동안 3차 발효시킨 다음 최종적으로 87.5±2.5℃에서 2시간 열풍 건조하여 발효식품을 제조하였으며, 이때 발효식품은 총균수 3.3×105cfu/g였다.The functional ingredient and the microbial agent mixture were first fermented at 82.5 ± 2.5 ° C. for 4 hours, followed by secondary fermentation at 27.5 ± 2.5 ° C. for 30 days, followed by tertiary fermentation at 82.5 ± 2.5 ° C. for 2 hours, and finally Fermented food was prepared by hot air drying at 87.5 ± 2.5 ° C. for 2 hours, wherein the total fermented food was 3.3 × 10 5 cfu / g.

상기에서 기능성 성분은 미강 10중량%, 상황버섯 2중량%, 노니 5중량%, 녹차 5중량%, 울금 5중량%, 브로컬리 5중량%, 아가리쿠스 5중량%, 클로렐라 5중량%, 보이차 5중량%, 청국장 13중량%의 조성비로 이루어졌으며, 이때 상기 기능성 성분은 100메쉬로 분쇄한 분말을 사용하였다. The functional component in the above is 10% by weight of rice bran, 2% by weight of mushrooms, 5% by weight of noni, 5% by weight of green tea, 5% by weight of turmeric, 5% by weight of broccoli, 5% by weight of agaricus, 5% by weight of chlorella, 5% of tea %, Cheonggukjang made of 13% by weight of the composition, wherein the functional ingredient was used as a powder ground to 100 mesh.

<실시예 2-2> 발효식품의 제조Example 2-2 Preparation of Fermented Foods

미생물 제제를 상기 실시예 1-2에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 2-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-2.

<실시예 2-3> 발효식품의 제조Example 2-3 Preparation of Fermented Food

미생물 제제를 상기 실시예 1-3에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 2-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-3.

<실시예 2-4> 발효식품의 제조Example 2-4 Preparation of Fermented Foods

미생물 제제를 상기 실시예 1-4에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 2-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-4.

<실시예 2-5> 발효식품의 제조Example 2-5 Preparation of Fermented Foods

미생물 제제를 상기 실시예 1-5에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 2-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-5.

<실시예 2-6> 발효식품의 제조Example 2-6 Preparation of Fermented Foods

미생물 제제를 상기 실시예 1-6에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 2-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-6.

<실시예 3-1> 발효식품의 제조Example 3-1 Preparation of Fermented Foods

미강, 상황버섯, 노니, 녹차, 울금, 브로컬리, 아가리쿠스, 클로렐라, 보이차, 청국장으로 구성된 기능성 성분 80중량% 및 상기 실시예 1-1에서 제조한 미생물 제제 20중량%을 혼합하였다. 80% by weight of the functional ingredient consisting of rice bran, green mushroom, noni, green tea, turmeric, broccoli, agaricus, chlorella, ivory tea, and cheonggukjang and 20% by weight of the microbial preparation prepared in Example 1-1 were mixed.

상기 접종단계를 수행한 기능성 성분과 미생물 제제 혼합물을 82.5±2.5℃에서 4시간 동안 1차 발효시킨 후, 27.5±2.5℃에서 30일 동안 2차 발효를 거쳐, 82.5±2.5℃에서 2시간 동안 3차 발효시킨 다음 최종적으로 87.5±2.5℃에서 2시간 열풍 건조하여 발효식품을 제조하였으며, 이때 발효식품은 총균수 3.3×105cfu/g였다.The functional ingredient and the microbial agent mixture subjected to the inoculation step were first fermented at 82.5 ± 2.5 ° C. for 4 hours, followed by secondary fermentation at 27.5 ± 2.5 ° C. for 30 days, and 3 hours at 82.5 ± 2.5 ° C. for 3 hours. After fermentation, finally fermented food was prepared by hot-air drying at 87.5 ± 2.5 ° C. for 2 hours, wherein the fermented foods were 3.3 × 10 5 cfu / g.

상기에서 기능성 성분은 미강 15중량%, 상황버섯 5중량%, 노니 6중량%, 녹차 6중량%, 울금 6중량%, 브로컬리 6중량%, 아가리쿠스 6중량%, 클로렐라 6중량%, 보이차 6중량%, 청국장 18중량%의 조성비로 이루어졌으며, 이때 상기 기능성 성분은 100메쉬로 분쇄한 분말을 사용하였다. The functional ingredient in the above is 15% by weight of rice bran, 5% by weight of mushrooms, 6% by weight of noni, 6% by weight of green tea, 6% by weight of turmeric, 6% by weight of broccoli, 6% by weight of agaricus, 6% by weight of chlorella, 6% by weight of tea % And Cheonggukjang made of 18% by weight, wherein the functional ingredient was used as a powder ground to 100 mesh.

<실시예 3-2> 발효식품의 제조Example 3-2 Preparation of Fermented Foods

미생물 제제를 상기 실시예 1-2에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 3-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 3-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-2.

<실시예 3-3> 발효식품의 제조Example 3-3 Preparation of Fermented Foods

미생물 제제를 상기 실시예 1-3에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 3-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 3-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-3.

<실시예 3-4> 발효식품의 제조Example 3-4 Preparation of Fermented Food

미생물 제제를 상기 실시예 1-4에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 3-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 3-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-4.

<실시예 3-5> 발효식품의 제조Example 3-5 Preparation of Fermented Food

미생물 제제를 상기 실시예 1-5에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 3-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 3-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-5.

<실시예 3-6> 발효식품의 제조Example 3-6 Preparation of Fermented Foods

미생물 제제를 상기 실시예 1-6에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 3-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 3-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-6.

<실시예 4-1> 발효식품의 제조Example 4-1 Preparation of Fermented Foods

미강, 상황버섯, 노니, 녹차, 울금, 브로컬리, 아가리쿠스, 클로렐라, 보이차, 청국장으로 구성된 기능성 성분 99중량% 및 상기 실시예 1-1에서 제조한 미생물 제제 1중량%을 혼합하였다. 99% by weight of the functional ingredient consisting of rice bran, green mushroom, noni, green tea, turmeric, broccoli, agaricus, chlorella, ivory tea, and cheonggukjang and 1% by weight of the microbial preparation prepared in Example 1-1 were mixed.

상기 접종단계를 수행한 기능성 성분과 미생물 제제 혼합물을 82.5±2.5℃에서 4시간 동안 1차 발효시킨 후, 27.5±2.5℃에서 30일 동안 2차 발효를 거쳐, 82.5±2.5℃에서 2시간 동안 3차 발효시킨 다음 최종적으로 87.5±2.5℃에서 2시간 열풍 건조하여 발효식품을 제조하였으며, 이때 발효식품은 총균수 3.3×105cfu/g였다.The functional ingredient and the microbial agent mixture subjected to the inoculation step were first fermented at 82.5 ± 2.5 ° C. for 4 hours, followed by secondary fermentation at 27.5 ± 2.5 ° C. for 30 days, and 3 hours at 82.5 ± 2.5 ° C. for 3 hours. After fermentation, finally fermented food was prepared by hot-air drying at 87.5 ± 2.5 ° C. for 2 hours, wherein the fermented foods were 3.3 × 10 5 cfu / g.

상기에서 기능성 성분은 미강 21중량%, 상황버섯 5중량%, 노니 7중량%, 녹차 7중량%, 울금 7중량%, 브로컬리 7중량%, 아가리쿠스 7중량%, 클로렐라 7중량%, 보이차 7중량%, 청국장 24중량%의 조성비로 이루어졌으며, 이때 상기 기능성 성분은 100메쉬로 분쇄한 분말을 사용하였다. The functional component in the above is 21% by weight of rice bran, 5% by weight of mushrooms, 7% by weight of noni, 7% by weight of green tea, 7% by weight of turmeric, 7% by weight of broccoli, 7% by weight of agaricus, 7% by weight of chlorella, 7% by weight of tea % And Chonggukjang made up by a composition ratio of 24% by weight, wherein the functional ingredient was a powder ground to 100 mesh.

<실시예 4-2> 발효식품의 제조Example 4-2 Preparation of Fermented Foods

미생물 제제를 상기 실시예 1-2에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 4-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 4-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-2.

<실시예 4-3> 발효식품의 제조Example 4-3 Preparation of Fermented Foods

미생물 제제를 상기 실시예 1-3에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 4-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 4-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-3.

<실시예 4-4> 발효식품의 제조Example 4-4 Preparation of Fermented Food

미생물 제제를 상기 실시예 1-4에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 3-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 3-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-4.

<실시예 4-5> 발효식품의 제조Example 4-5 Preparation of Fermented Foods

미생물 제제를 상기 실시예 1-5에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 4-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 4-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-5.

<실시예 4-6> 발효식품의 제조Example 4-6 Preparation of Fermented Foods

미생물 제제를 상기 실시예 1-6에서 제조한 것을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 4-1과 동일한 방법으로 발효식품을 제조하였다.Fermented food was prepared in the same manner as in Example 4-1, except that the microbial preparation was prepared in Example 1-6.

<실시예 5> 발효식품의 미생물 분석 및 특성Example 5 Microbial Analysis and Characteristics of Fermented Foods

상기 실시예 2-1에서 제조한 발효식품의 일반세균, 대장균, 효모, 황색포도상구균 수를 조사하고 그 결과를 아래의 표 2에 나타내었다. The number of general bacteria, E. coli, yeast, and Staphylococcus aureus of the fermented food prepared in Example 2-1 was examined and the results are shown in Table 2 below.

표 2에서와 같이 일반세균수는 3.3×105/g이었으며 병원성균인 대장균, 황색포도상구균과 효모는 검출되지 않았다.As shown in Table 2, the general bacterial count was 3.3 × 10 5 / g. Escherichia coli, Staphylococcus aureus and yeast were not detected.

표 2. 발효식품의 균수 측정Table 2. Measurement of bacterial counts of fermented foods

분석시험항목Analysis test item 결과result 방법Way 일반세균수General bacterial count 3.3×105/g3.3 × 10 5 / g 표준한천평판배양법Standard Agar Plate Culture 대장균군Coliform group 음성/2.22gVoice / 2.22 g BGLB법BGLB method 효모수Yeast 음성/0.1gVoice / 0.1 g 포테이토덱스트로스(10%)
한천평판배양법
Potato dextrose (10%)
Agar Plate Culture
황색포도상구균Staphylococcus aureus 음성/0.01gVoice / 0.01 g 평판도말배양법Reputation smear culture

<실시예 6> 발효식품에 존재하는 미생물의 특성Example 6 Characteristics of Microorganisms in Fermented Foods

상기 실시예 2-1에서 제조한 발효식품에 존재하는 미생물의 특성을 조사하기 위해 인공위액, 인공장액 및 열 처리에 따른 균수를 측정하고 그 결과를 아래의 표 3에 정리하여 나타내었다. In order to investigate the characteristics of the microorganisms present in the fermented food prepared in Example 2-1, the number of bacteria according to artificial gastric juice, artificial intestinal fluid and heat treatment was measured and the results are summarized in Table 3 below.

표 3에서와 같이 인공위액(pH 1.4)과 인공장액(pH 6.8)에 의한 발효균주의 생육저해 현상은 없는 것으로 나타났다. As shown in Table 3, there was no growth inhibition of fermented strains by artificial gastric juice (pH 1.4) and artificial intestinal fluid (pH 6.8).

한편, 95℃에서 10분간 열처리한 결과에서도 열처리 후 24시간 경과한 경우에도 균수가 무처리군과 비슷하며 또한 저장 시간이 72시간 경과한 시점에서 5.45×1010의 균이 검출되어 본 발명의 발효식품의 발효미생물들은 열안정성이 매우 뛰어난 것으로 사료된다.On the other hand, even after 10 hours of heat treatment at 95 ℃, even after 24 hours after the heat treatment, the number of bacteria is similar to the untreated group, and 5.45 × 10 10 bacteria were detected when the storage time passed 72 hours, the fermentation of the present invention Fermented microorganisms of food are considered to have excellent thermal stability.

이러한 결과는 본 발효식품에 존재하는 미생물들이 식도, 위, 소장, 대장까지 살아서 도달할 수 있는 프로바이오틱스(probiotics)의 기능을 할 수 있을 것으로 사료된다. These results suggest that the microorganisms in the fermented foods can function as probiotics that can reach the esophagus, stomach, small intestine and large intestine.

표 3. 처리조건별 생균수의 변화 Table 3. Changes in the Number of Viable Cells by Treatment Conditions

시험항목Test Items 결과result week 시험방법Test Methods 일반
생균수
Normal
Viable count
무처리No treatment 2.91×105/g2.91 × 10 5 / g 1One 표준한천평판배양법Standard Agar Plate Culture
인공위액처리Artificial gastric fluid treatment 2.71×105/g2.71 × 10 5 / g 22 표준한천평판배양법Standard Agar Plate Culture 인공장액처리Artificial serous treatment 3.35×105/g3.35 × 10 5 / g 33 표준한천평판배양법Standard Agar Plate Culture 가열처리후; 0시간After heat treatment; 0 hours 1.32×105/g1.32 × 10 5 / g 44 표준한천평판배양법Standard Agar Plate Culture 가열처리후; 24시간After heat treatment; 24 hours 1.20×105/g1.20 × 10 5 / g 44 표준한천평판배양법Standard Agar Plate Culture 가열처리후; 48시간After heat treatment; 48 hours 2.31×108g2.31 x 10 8 g 44 표준한천평판배양법Standard Agar Plate Culture 가열처리후; 72시간After heat treatment; 72 hours 5.45×1010 5.45 × 10 10 44 표준한천평판배양법Standard Agar Plate Culture

주1. 식품위생검사지침에 준하여 표준한천평판배양법에 따라 일반생균수를 측정함Note 1. According to the food hygiene test guideline, the number of common bacteria is measured according to the standard agar plate culture method.

주2. 검체를 10배량의 인공위액(pH 1.4)에 현탁하고 37℃에서 2.5시간 처리한 후, 균수측정Note 2. The sample was suspended in 10 times of artificial gastric juice (pH 1.4) and treated at 37 ° C for 2.5 hours, followed by bacterial count measurement.

주3. 검체를 10배량의 인공장액(pH 6.8)에 현탁하고 37℃에서 2.5시간 처리한 후, 균수측정Note 3. Samples were suspended in 10 times the amount of artificial intestine (pH 6.8) and treated at 37 ° C for 2.5 hours, followed by bacterial count measurement.

주4. 검체를 10배량의 생리식염수에 현탁하고 95℃에서 10분간 가열한 후, 35℃에서 0, 24, 48, 72시간 보온한 후, 균수 측정Note 4. The sample was suspended in 10 times the amount of physiological saline and heated at 95 ° C. for 10 minutes, and then kept at 35 ° C. for 0, 24, 48 and 72 hours, followed by bacterial counting.

* 인공위액 : 염화나트륨 0.1g에 1M 염산 1.2mL을 가하고, 이온교환수로 50mL로 맞추고 37℃에서 pH가 1.4가 되도록 조제하였다.* Artificial gastric juice: 1.2 mL of 1M hydrochloric acid was added to 0.1 g of sodium chloride, adjusted to 50 mL with ion-exchanged water, and prepared to have a pH of 1.4 at 37 ° C.

* 인공장액 : 인산이수소칼륨 0.544g을 이온교환수로 용해시킨 후, 0.2M 수산화나트륨 수용액 5.9mL를 가하고 이온교환수로 전량을 50mL로 하고, 37℃에서 pH가 6.8이 되도록 조제하였다.* Artificial intestinal fluid: 0.544 g of potassium dihydrogen phosphate was dissolved in ion-exchanged water, and then 5.9 mL of 0.2 M aqueous sodium hydroxide solution was added, and the total amount was made 50 mL with ion-exchanged water, and the pH was adjusted to 6.8 at 37 ° C.

* 생리식염수 : 염화나트륨 0.85g을 이온교환수에 용해하고 전량을 100mL로 하였다.Physiological saline: 0.85 g of sodium chloride was dissolved in ion-exchanged water, and the total amount was 100 mL.

<실시예 7> 발효식품의 성분분석Example 7 Analysis of Ingredients of Fermented Foods

상기 실시예 2-1에서 제조한 발효식품의 성분을 분석한 결과 표 4에서와 같이 버섯류에 다량 함유되어 있는 베타-글루칸(β-glucan)의 함량이 4.4g/100g으로 비교적 높게 나타났고 특이하게도 아미노산 중에서도 글루탐산(glutamic acid)이 2.83g/100g, 아스파르트산(aspartic acid)이 2.00g/100g으로 높게 나타났다.As a result of analyzing the components of the fermented food prepared in Example 2-1, as shown in Table 4, the content of beta-glucan (β-glucan) contained in a large amount of mushrooms appeared to be relatively high as 4.4g / 100g and specifically, Among amino acids, glutamic acid was 2.83g / 100g and aspartic acid was 2.00g / 100g.

표 4. 발효식품의 이화학적 분석결과Table 4. Physicochemical Analysis of Fermented Foods

분석시험항목Analysis test item 결과result 검출한계Detection limit week 방법Way ergosterolergosterol 1.26mg/100g1.26mg / 100g HPLC법HPLC method β-glucanβ-glucan 4.4g/100g4.4g / 100g 효소법Enzyme method 아미노산amino acid 1One 아미노산 자동분석기Amino acid autoanalyzer argininearginine 1.13g/100g1.13g / 100g lysinelysine 0.66g/100g0.66g / 100g histidinehistidine 0.58g/100g0.58g / 100g phenylalaninephenylalanine 0.89g/100g0.89g / 100g tyrosinetyrosine 0.54g/100g0.54g / 100g leucineleucine 1.37g/100g1.37g / 100g isoleucineisoleucine 0.74g/100g0.74g / 100g methioninemethionine 0.30g/100g0.30g / 100g valinevaline 0.98g/100g0.98g / 100g alaninealanine 1.07g/100g1.07g / 100g glycine glycine 0.99g/100g0.99g / 100g prolineproline 0.92g/100g0.92g / 100g glutamic acidglutamic acid 2.83g/100g2.83g / 100g serineserine 0.89g/100g0.89g / 100g threoninethreonine 0.76g/100g0.76g / 100g aspartic acidaspartic acid 2.00g/100g2.00g / 100g tryptophantryptophan 0.25g/100g0.25g / 100g cystinecystine 0.37g/100g0.37g / 100g

주1. 과formic acid 처리 후, 염산 가수분해하여 측정Note 1. After formic acid treatment, hydrochloric acid hydrolysis

<실시예 8> 발효식품의 효소활성Example 8 Enzyme Activity of Fermented Foods

상기 실시예 2-1에서 제조한 발효식품을 물추출하고 동결건조한 시료를 대상으로 활성 및 활성저해효과를 조사하고 그 결과를 아래의 표 5에 나타내었다.The fermented food prepared in Example 2-1 was water-extracted and lyophilized to investigate the activity and inhibitory effect on the sample and the results are shown in Table 5 below.

표 5에서와 같이 실시예 2-1에서 제조한 발효식품은 항산화활성(Antioxidant activity), 고혈압저해활성(ACE inhibitory activity), 간 기능개선능(GST activity)에서 높은 활성이 검출되었다. 따라서 본 발명의 발효식품은 항산화활성, 고혈압저해활성, 간 기능개선능의 효과가 있음을 알 수 있었다.As shown in Table 5, the fermented food prepared in Example 2-1 had high activity in antioxidant activity, antihypertensive activity (ACE inhibitory activity), and liver function improvement (GST activity). Therefore, the fermented food of the present invention was found to have the effect of antioxidant activity, hypertension inhibitory activity, liver function improving ability.

표 5. 각종 효소활성Table 5. Various Enzyme Activities

항목Item Antioxidant activity
(%)
Antioxidant activity
(%)
ACE inhibitory activity
(%)
ACE inhibitory activity
(%)
GST activity
(%)
GST activity
(%)
측정값Measures 55.4±1.955.4 ± 1.9 72.1±0.572.1 ± 0.5 92.4±2.492.4 ± 2.4 농도density 1mg1mg 1mg1mg 100㎍100 µg

*항산화활성(Antioxidant activity) : 항산화활성은 1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)의 환원력을 이용하는 Blois와 이 등의 방법(Blois, M. S. Antioxidant determination by the use of stable free radical. Nature, 191: 1199 (1958))으로 측정하였다. 시료 200㎕에 DPPH 용액(DPPH 12.5mg을 EtOH 100mL에 용해) 800㎕를 가한 후 10분간 반응시키고 525nm에서 흡광도를 측정하여 시료 무첨가 대조구와 활성을 비교하였다. Antioxidant activity: Antioxidant activity was determined using Blois and MS (eg. MS Antioxidant determination by the use of stable free radicals. Nature, 191), using the reducing power of 1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). : 1199 (1958)). 800 μl of DPPH solution (12.5 mg of DPPH dissolved in 100 mL of EtOH) was added to 200 μl of the sample, followed by reaction for 10 minutes, and the absorbance was measured at 525 nm to compare the activity with the sample-free control.

*고혈압저해활성(ACE inhibitory activity) : 고혈압억제 활성은 Cushman 등의 방법(Cushman D. W. and Cheung. H. S. Spectrophotometic assay and properties of the angiotensin-converting enzyme of rabbit lung. Biochemical Pharmacology, 20: 1637-1648 (1971))에 따라 시료액에 동일 용량의 에틸아세테이트(ethyl acetate)를 처리하여 얻은 추출액 50㎕를 토끼 폐(rabbit lung powder)에서 추출한 ACE용액 150μL(약 2.8∼3 Unit)와 기질 용액(pH 8.3의 100mM sodium borate 완충용액 2.5mL에 300mM NaCl과 25mg Hip-His-Leu을 용해) 50㎕와 섞은 후 37℃에서 30분간 반응시킨 다음 1N HCl로 반응을 정지시켰다. 이 반응액에 유리되어 나오는 hippuric acid의 양을 228nm에서 흡광도를 측정하여 산출하였고 시료 무첨가구를 대조구로 하여 저해율을 구하였다.ACE inhibitory activity: Cushman et al. (Cushman DW and Cheung. HS Spectrophotometic assay and properties of the angiotensin-converting enzyme of rabbit lung.Biochemical Pharmacology, 20: 1637-1648 (1971) 50 μl of the ACE solution extracted from the rabbit lung powder from 50 μl of the extract obtained by treating the same amount of ethyl acetate with the same volume of the sample solution, and the substrate solution (100 mM of pH 8.3). 2.5 ml of sodium borate buffer solution was mixed with 50 μl of 300 mM NaCl and 25 mg Hip-His-Leu), and then reacted at 37 ° C. for 30 minutes, and then stopped with 1N HCl. The amount of hippuric acid liberated in the reaction solution was calculated by measuring the absorbance at 228 nm, and the inhibition rate was determined using no sample as a control.

*간 기능개선능(GST activity) : 간 기능 개선 활성은 William H의 방법(Habig William H, Pabst MJ, Fleischner G, Gatmaitan Z, Arias IM, Jakoby WB. The identity of glutathione S-transferase B with ligandin, a major binding protein of liver. Proc Natl Acad Sci USA 71: 3879-3882 (1974))을 일부 변형하 여 다음과 같이 측정하였다. 0.1mM potassium phosphate buffer(pH 6.5) 100㎕에 시료 10㎕과 GST 효소액 15㎕(1.5 unit) 그리고 글루타치온(Glutathione, GSH) 10㎕의 조효소액을 가한 후, 25℃에서 5분간 전 배양(pre-incubation) 시켰다. 여기에 기질 1-클로로 2,4-디니트로벤젠(1-chloro 2,4-dinitrobenzene) 10㎕을 가하여 25℃에서 5분간 반응시킨 후 20% TCA 350㎕를 가하여 반응을 정지시켰다. 반응물을 혼합(vortexing)한 다음 8000rpm으로 5분간 원심분리 후 상등액을 취하여 314nm에서 흡광도를 측정하여 GST activation activity를 아래와 같이 계산하였다.GST activity: Hepatic function improvement activity is William H's method (Habig William H, Pabst MJ, Fleischner G, Gatmaitan Z, Arias IM, Jakoby WB.The identity of glutathione S-transferase B with ligandin, a major binding protein of liver.Proc Natl Acad Sci USA 71: 3879-3882 (1974)) was partially modified and measured as follows. To 100 µl of 0.1mM potassium phosphate buffer (pH 6.5), 10 µl of sample, 15 µl of GST enzyme solution (1.5 unit) and 10 µl of glutathione (Glutathione, GSH) were added, followed by pre-incubation at 25 ° C for 5 minutes. incubation). 10 μl of substrate 1-chloro 2,4-dinitrobenzene was added thereto and reacted at 25 ° C. for 5 minutes, and then 350 μl of 20% TCA was added to stop the reaction. After the reaction was mixed (vortexing), centrifugation at 8000 rpm for 5 minutes, the supernatant was taken, and the absorbance was measured at 314 nm. The GST activation activity was calculated as follows.

GST activation activity(%) = ( B-S / C ) × 100 GST activation activity (%) = (B-S / C) × 100

C: A314 of Control (without sample)C: A 314 of Control (without sample)

S: A314 of Sample S: A 314 of Sample

B: A314 of reactants (products)B: A 314 of reactants (products)

<실시예 9> 발효식품의 마우스를 이용한 급성경구독성 시험Example 9 Acute Oral Toxicity Test Using Mice of Fermented Foods

상기 실시예 2-1에서 제조한 발효식품에 대해 마우스(mouse)를 이용한 급성경구독성 시험을 통해 안전성을 평가하였다. 먼저 실시예 2-1에서 제조한 발효식품을 음용수로 현탁하여 250mg/mL의 시험액을 조제한 후, 5주령의 ICR계인 암수 마우스를 대상으로 탐침을 이용하여 5,000mg/kg을 강제 투여하였다(시험군). 대조군은 20mL/kg의 음용수를 투여하여 체중변화를 조사하였다. 그 결과 하기 표 6과 표 7에서와 같이 투여 후 7일 및 14일이 지난 후 암수 모두의 시험군은 대조군과 비교하 여 체중에 차이가 없었다.The fermented food prepared in Example 2-1 was evaluated for safety through an acute oral toxicity test using a mouse. First, the fermented food prepared in Example 2-1 was suspended in drinking water to prepare a test solution of 250 mg / mL, and then, 5,000 mg / kg of the male and female mice, 5 weeks old, were forcibly administered by using a probe (test group). ). The control group was administered to 20mL / kg drinking water to investigate the weight change. As a result, as shown in Table 6 and Table 7, 7 days and 14 days after administration, the test group of both sexes showed no difference in body weight compared to the control group.

표 6. 체중변화(암)Table 6. Weight change (cancer)

투여군
Administration group
투여전
Before administration
투여 후(일)After dosing (days)
77 1414 시험군Test group 32.1±0.7 (5)32.1 ± 0.7 (5) 35.8±1.8 (5)35.8 ± 1.8 (5) 35.8±1.7 (5)35.8 ± 1.7 (5) 대조군Control 31.7±0.6 (5)31.7 ± 0.6 (5) 35.3±1.8 (5)35.3 ± 1.8 (5) 37.9±1.2 (5)37.9 ± 1.2 (5)

*체중은 평균치 표준 ± 편차로 나타냄 (단위: g)* Weight is expressed as mean ± standard deviation (unit: g)

*괄호 내에 마우스 수를 표시* Display mouse count in parentheses

표 7. 체중변화(수)Table 7. Weight change (number)

투여군
Administration group
투여전
Before administration
투여 후(일)After dosing (days)
77 1414 시험군Test group 26.0±0.9 (5)26.0 ± 0.9 (5) 28.8±1.0 (5)28.8 ± 1.0 (5) 31.2±0.9 (5)31.2 ± 0.9 (5) 대조군Control 26.3±0.8 (5)26.3 ± 0.8 (5) 30.1±1.2 (5)30.1 ± 1.2 (5) 32.0±1.2 (5)32.0 ± 1.2 (5)

*체중은 평균치 표준 ± 편차로 나타냄 (단위: g)* Weight is expressed as mean ± standard deviation (unit: g)

*괄호 내에 마우스 수를 표시* Display mouse count in parentheses

<실시예 10> 제2형 당뇨모델인 KK-Ay/Ta Jcl(유전적 비만 2형 당뇨모델) 마우스를 이용한 동물 실험Example 10 Animal Experiments Using KK-A y / Ta Jcl (Genetic Obesity Type 2 Diabetes Model) Mice

상기 실시예 2-1에서 제조한 발효식품의 당뇨에 대한 효능을 검증하기 위해 KK-Ay/Ta Jcl 마우스에 미치는 영향을 조사하였다. In order to verify the efficacy of the fermented food prepared in Example 2-1 for diabetes was examined the effect on KK-A y / Ta Jcl mice.

실험동물 및 식이는 제2형 당뇨모델인 KK-Ay/Ta Jcl(유전적 비만 2형 당뇨모델) 마우스 30마리를 Clea사(Tokyo, Tapan)에서 분양 받아 1주간 AIN-93G 사료로 자유급식하면서 사육환경에 적응시킨 뒤 실험에 사용하였다. 1주 후 난괴법(randomized complete block design)으로 각 군당 10마리씩 대조군(A), 시험군 1(B), 시험군 2(C)의 3개의 실험군으로 나누어 실험을 실시하였다(표 8 참조). 사육실 온도는 23±2℃, 습도는 50±5%, 조명주기는 12시간 간격으로 조절하였으며, 식이와 음용수는 각 군의 개체들이 자유롭게 섭취하도록 하여 10주간 진행하였다.The experimental animals and diets were fed 30 KK-A y / Ta Jcl (genetic obesity type 2 diabetes models) mice from Clea (Tokyo, Tapan) and fed free with AIN-93G feed for 1 week. After adapting to the breeding environment, it was used for the experiment. After 1 week, the experiment was conducted by dividing into three experimental groups of control group (A), test group 1 (B), and test group 2 (C) by randomized complete block design (10) for each group (see Table 8). The room temperature was 23 ± 2 ℃, the humidity was 50 ± 5%, and the lighting cycle was adjusted every 12 hours. The diet and drinking water were allowed to be ingested freely by individuals in each group for 10 weeks.

표 8. 사료의 조성 (g/100g 식이)Table 8. Composition of Feed (g / 100g Diet)

A군(대조군)Group A (control) AIN-93G diet 100중량%AIN-93G diet 100% by weight B군(시험군 1)Group B (Test Group 1) AIN-93G diet 99.92중량% + 발효식품 0.08중량%AIN-93G diet 99.92% by weight + fermented food 0.08% by weight C군(시험군 2)Group C (Test Group 2) AIN-93G diet 99.6중량% + 발효식품 0.4%AIN-93G diet 99.6% by weight + fermented food 0.4%

(1)마우스의 체중, 식이 섭취량 및 물 섭취량을 조사(1) We examine mouse weight, dietary intake and water intake

실험기간 중 마우스의 체중, 식이 섭취량 및 물 섭취량을 조사하였다. 매주 일정한 시간에 체중을 측정하였고, 식이섭취량 및 수분 섭취량을 급여량과 잔여량의 차이로 측정하였다. 그 결과 표 9에서와 같이 체중은 발효식품 함량이 높을수록 체중이 적게 나타났으나 큰 차이는 없었다. 평균 섭취량은 A군, B군 및 C군이 각각 6.70g/day, 6.40g/day, 5.93g/day로 발효식품의 함량이 높을수록 식이 섭취량이 유의적으로 감소하였다(p<.0001). 음용수 섭취량에서도 실험기간 동안 A군은 28.42ml/day, B은 23.16ml/day, C은 18.70ml/day로 발효식품의 함량이 높을수록 유의적인 감소 효과를 나타내었다(p<.0001). 이 결과로부터 본 발명의 실시예 2-1에서 제조한 발효식품은 당뇨의 대표적인 증상인 다식과 다음 현상을 억제하는 효과가 있는 것으로 나타났으며 발효식품의 함량이 가장 높은 C군에서 효과가 높게 나 타났다. The body weight, dietary intake and water intake of the mice were examined during the experiment. Body weight was measured at a certain time every week, and dietary intake and water intake were measured as the difference between the intake and the remaining amount. As a result, as shown in Table 9, the higher the fermented food content, the lower the weight, but no significant difference. The average intake was 6.70g / day, 6.40g / day, 5.93g / day in group A, B and C, respectively, and the dietary intake decreased significantly as the content of fermented foods increased (p <.0001). In the drinking water intake, the A group was 28.42ml / day, B was 23.16ml / day, C was 18.70ml / day, and the higher the fermented food content was, the more significant decrease was observed (p <.0001). From the results, the fermented food prepared in Example 2-1 of the present invention was shown to have the effect of suppressing the following symptoms, polymorphism, which is a typical symptom of diabetes, and the effect is high in group C having the highest content of fermented food. Burned out.

표 9. KK-Ay 마우스의 체중 및 식이, 물 섭취량Table 9. Body weight, diet and water intake of KK-Ay mice

초기체중(g)Initial weight (g) 10주후의 체중(g)Weight after 10 weeks (g) 일일체중 변화(g/day)Daily weight change (g / day) 식이량
(g/day)
Food
(g / day)
물 섭취량
(ml/day)
Water intake
(ml / day)
A군Group A 32.09±0.5432.09 ± 0.54 43.53±2.9743.53 ± 2.97 5.71±0.495.71 ± 0.49 6.70±0.30a 6.70 ± 0.30 a 28.42±2.48a 28.42 ± 2.48 a B군B group 32.12±1.1532.12 ± 1.15 41.57±3.5041.57 ± 3.50 5.69±0.425.69 ± 0.42 6.54±0.41a 6.54 ± 0.41 a 23.16±2.20b 23.16 ± 2.20 b C군Group C 32.86±1.1032.86 ± 1.10 42.21±2.2142.21 ± 2.21 5.57±0.505.57 ± 0.50 5.93±0.29b 5.93 ± 0.29 b 18.70±1.64c 18.70 ± 1.64 c

*Significance of the difference among the group (p<.0001)* Significance of the difference among the group (p <.0001)

(2)마우스의 혈당 측정(2) Measurement of blood sugar of mouse

실험기간인 10주간 매주 마우스의 혈당을 측정하였다. 공복시간 없이 매주 일정한 시간에 꼬리정맥으로부터 전혈을 채취하여 글루코오스-옥시다아제(Glucose-oxidase)법을 이용한 혈당스트립(ACCU-CHEK Sensor, Roche, Basel, Switzerland)을 이용하여 측정하고 그 결과를 도 1에 나타내었다. Blood glucose was measured every week for 10 weeks during the experiment. Whole blood was collected from the tail vein at a fixed time every week without fasting time, and measured using a glucose strip (ACCU-CHEK Sensor, Roche, Basel, Switzerland) using Glucose-oxidase method. Indicated.

도 1에서처럼 실험 식이를 시작 전 A군, B군 및 C군의 각각의 혈당은 313mg/dL, 301mg/dL, 311mg/dL 에서 실험 식이를 시작한 후 둘째 주 까지는 혈당의 상승이 보이다가 셋째 주부터 감소하기 시작하여 넷째 주부터는 유의적인(p<.05, p<.01, p<.001, p<.0001)감소가 나타났다. 실험 식이를 시작한 첫째 주 A군, B군 및 C군의 혈당은 각각 440mg/dL, 394mg/dL, 392mg/dL 이었고, 실험 종료시점인 10주 후에는 A군의 혈당이 353 mg/dL, B군의 혈당이 235mg/dL, C군의 혈당이 186mg/dL로 나타나, A군에 비해 C군에서 혈당 값이 167mg/dL 낮아졌다. 그리고 초기 혈당 값과 비교하여 사료에 발효식품의 첨가량이 높을수록 혈당의 감소가 크게 나타남으로써, 발효식품이 혈당 수준을 유의적으로 낮추는데 효과가 있는 것으로 확인되었다.As shown in FIG. 1, the blood sugar levels of group A, B and C before the experimental diet were increased at 313 mg / dL, 301 mg / dL, and 311 mg / dL until the second week after the experimental diet. Significant (p <.05, p <.01, p <.001, p <.0001) decreases from week 4, beginning to decrease. The blood sugar levels of group A, group B and group C at the beginning of the experimental diet were 440 mg / dL, 394 mg / dL, and 392 mg / dL, respectively, and at 10 weeks after the end of the experiment, the blood glucose of group A was 353 mg / dL and B. The blood sugar of the group was 235 mg / dL, and the blood sugar of the C group was 186 mg / dL, and the blood sugar value of the C group was 167 mg / dL lower than that of the A group. As the amount of fermented food added to the feed increased as compared with the initial blood sugar value, the decrease in blood sugar was increased, and the fermented food was found to be effective in significantly lowering the blood sugar level.

(3)마우스의 혈장 글루코오스 농도 측정(3) Measurement of plasma glucose concentration of mouse

마우스의 혈장 글루코오스(glucose) 농도를 측정하고 이를 도 2에 나타내었다.Plasma glucose concentration of the mice was measured and shown in FIG. 2.

도 2에서처럼 실험식이 10주 후 A군, B군 및 C군의 마우스를 채혈하여 혈장 글루코오스 농도를 측정한 결과, A군이 494.60±125.61mg/dL, B군이 313.20±88.58mg/dL, C군이 260.60±65.65mg/dL로, A군에 비해 B군과 C군의 식이군에서 유의적인(p<.01) 감소하여 200mg/dL의 글루코오스가 감소하는 효과가 있는 것으로 확인되었다.As shown in FIG. 2, after 10 weeks of experiment, blood samples of group A, B, and C mice were collected to measure plasma glucose concentration. Group A was 494.60 ± 125.61mg / dL, and Group B was 313.20 ± 88.58mg / dL, C. Group 260.60 ± 65.65mg / dL, a significant decrease (p <.01) in the diet group of group B and C compared to group A, it was confirmed that the effect of reducing the glucose of 200mg / dL.

(4)마우스의 혈장 인슐린 농도 측정(4) Measurement of plasma insulin concentration of mouse

마우스의 혈장 인슐린 농도를 측정하고 이를 도 3에 나타내었다.Plasma insulin concentrations of mice were measured and shown in FIG. 3.

도 3에서처럼 실험식이 10주 후 채혈하여 분석한 결과, A군의 혈장 인슐린 농도는 896.72±66.35ng/mL 이었으며, B군은 766.64±263.88ng/mL, C군은 837.86±84.62ng/mL로 A군과 비교하여 B군과 C군의 식이군에서 혈청 인슐린이 약간은 감소하였으나 유의적이지는 않았다.As shown in FIG. 3, after 10 weeks, the blood sample was analyzed by blood samples. The plasma insulin concentration of group A was 896.72 ± 66.35ng / mL, the group B was 766.64 ± 263.88ng / mL, and the group C was 837.86 ± 84.62ng / mL. Compared with the group, serum insulin was slightly decreased in the diet group of group B and C, but it was not significant.

(5)마우스의 당화혈색소의 농도 측정(5) Measurement of concentration of glycated hemoglobin of mouse

마우스의 당화혈색소의 농도를 측정하고 이를 도 4에 나타내었다.The concentration of glycated hemoglobin in mice was measured and shown in FIG. 4.

적혈구에 있는 헤모글로빈(hemoglobin)의 일부인 HbA1c는 혈구의 생존 기간 동안 서서히 포도당과 비효소적으로 결합하여 당화된다. 그러므로 HbA1c의 당화정도는 혈구의 생존기간인 혈중 포도당 농도를 가늠하게 한다. 그러므로 당화혈색소는 혈당조절을 표현하는 가장 기본적인 지표로 널리 이용되고 있으며, 당화혈색소의 값(glycated homoglobin value)으로 지난 수주일 동안의 혈당농도를 추정할 수 있다. 당화혈색소의 측정은 장기간에 걸친 혈당의 변화를 통합하여 내는 좋은 지침이 되며 1회의 채혈로 측정이 가능하다.HbA1c, part of hemoglobin in erythrocytes, is glycosylated by non-enzymatic binding to glucose slowly during the survival of blood cells. Therefore, the degree of glycation of HbA1c can be used to measure the blood glucose concentration, the survival time of blood cells. Therefore, glycated hemoglobin is widely used as the most basic indicator of glycemic control, and the glycated hemoglobin value (glycated homoglobin value) can be used to estimate the blood glucose concentration over the past several weeks. The measurement of glycated hemoglobin is a good guide to integrating changes in blood glucose over a long period of time and can be measured with a single blood sample.

도 4에서처럼 실험식이 10주 후 A군, B군 및 C군의 마우스를 채혈하여 당화혈색소 농도를 측정한 결과, A군은 7.0%, B군은 5.9%, C 군은 5.4%로 A군과 비교하여 발효식품의 함량이 높아질수록 당화혈색소의 농도는 크게 감소하였다. As shown in FIG. 4, after 10 weeks, the mice of group A, B, and C were collected to measure glycated hemoglobin concentration. As a result, group A was 7.0%, group B was 5.9% and group C was 5.4%. In comparison, the concentration of glycated hemoglobin decreased significantly as the content of fermented food increased.

미국당뇨병협회(American Diabetes Association)에서 권고하는 당뇨병의 혈당조절목표를 보면, 공복혈당 80∼120mg/dL, 취침 전 혈당 100∼140mg/dL 그리고 HbA1c < 7%로 되어 있어 A 식이군의 당화혈색소가 약 7.0%인데 비해 B군의 당화혈색소 농도는 약 5.9%, C군의 당화혈색소 농도는 약 5.4%인 것으로 나타나, 본 발명의 실시예 2-1에서 제조한 발효식품은 혈당을 낮추는 효과가 있음을 알 수 있었다(도 4 참조). The glycemic control targets of diabetes recommended by the American Diabetes Association include fasting blood glucose 80-120 mg / dL, pre-bed blood sugar 100-140 mg / dL, and HbA1c <7%. Although the concentration of glycated hemoglobin in group B was about 5.9% and that of glycated hemoglobin in group C was about 5.4%, the fermented food prepared in Example 2-1 of the present invention had an effect of lowering blood glucose. It could be seen (see Fig. 4).

본 발명의 혈당상승 억제효과를 갖는 미생물을 포함하는 발효식품은 혈당을 낮추는데 효과적인 치료효과가 있을 것으로 기대되며 심혈관질환이나 뇌졸중과 같 은 장기간의 합병증을 예방하기 위하여 제2형 당뇨환자에게 유용하게 사용할 수 있을 것이며 구체적으로는 혈장 당수치를 170mg/dL에서 135mg/dL 이하로 낮출 수 있을 것으로 사료된다(표 10 참조).Fermented foods containing microorganisms having a blood sugar suppression effect of the present invention is expected to have an effective therapeutic effect to lower blood sugar and be useful for type 2 diabetes patients to prevent long-term complications such as cardiovascular disease and stroke. In particular, it is thought that plasma glucose can be lowered from 170 mg / dL to 135 mg / dL or less (see Table 10).

표 10. 당화혈색소와 혈장 혈당값 비교치* Table 10. Comparison of glycated hemoglobin and plasma glucose levels *

당화 혈색소Glycated hemoglobin 평균 혈장 당수치Average Plasma Sugars 6%6% 135mg/dL135mg / dL 7%7% 170mg/dL170mg / dL 8%8% 205mg/dL205 mg / dL 9%9% 240mg/dL240mg / dL 10%10% 275mg/dL275mg / dL 11%11% 310mg/dL310mg / dL 12%12% 345mg/dL345 mg / dL

상술한 바와 같이, 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만 해당 기술 분야의 숙련된 당업자라면 하기의 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. As described above, although described with reference to a preferred embodiment of the present invention, those skilled in the art will be variously modified and modified within the scope of the present invention without departing from the spirit and scope of the invention described in the claims below. It will be appreciated that it can be changed.

<실시예 11> 발효식품이 사염화탄소로 유발된 흰쥐의 간 손상에 미치는 영향Example 11 Effect of Fermented Food on Liver Damage in Rats Induced by Carbon Tetrachloride

상기 실시예 2-1에서 제조한 발효식품의 간 기능 개선 효능을 검증하기 위해 흰쥐(Sprague Dawley계 수컷 흰쥐)에 사염화탄소(CCl4)를 복강 주사하여 간 질환을 유발시킨 후 발효식품을 섭취시켜 간 기능에 미치는 영향을 조사하였다. In order to verify the effect of improving the liver function of the fermented food prepared in Example 2-1, carbon tetrachloride (CCl 4 ) is intraperitoneally injected into rats (Sprague Dawley male rats) to induce liver disease and then ingested liver The effect on function was investigated.

사염화탄소(CCl4)는 간에서 단백질 합성과 그리코겐 양을 저하시키고 마이크로소말 효소(microsomal enzyme)을 억제하며 간세포를 괴사시키므로 간세포에 독성 을 나타내는 대표적인 물질로서 투여방법, 경로 및 횟수에 따라 급성간염, 지방간, 간 경변 등의 간질환의 유발이 가능하기 때문에 투여물질의 효과를 밝히는데 있어 실험적으로 많이 이용되고 있다.Carbon tetrachloride (CCl 4 ) is a representative substance that is toxic to liver cells because it decreases protein synthesis and glycogen levels in the liver, inhibits microsomal enzymes and necroses liver cells. Since it is possible to induce liver diseases such as fatty liver and cirrhosis, it has been widely used experimentally to clarify the effects of the administered substances.

흰쥐의 사육은 사염화탄소와 올리브유를 1:1 비율로 섞어 체중 100g 당 0.1mL를 3일에 한번씩 2회 복강 주사하여 쥐의 급성 간 장애를 유발하여 해당 식이로 5주간 사육하였다.Rats were bred for 5 weeks in a diet of carbon tetrachloride and olive oil at a ratio of 1: 1 and intraperitoneally injected with 0.1mL per 100g body weight twice a day for 3 days.

실험동물 및 식이는 평균 체중이 110± 10g인 흰쥐를 중앙실험동물에서 분양 받아 1주간 AIN-93G 사료로 자유급식하면서 사육환경에 적응시킨 뒤 실험에 사용하였다. 1주 후 난괴법(randomized complete block design)으로 각 군당 6마리씩 정상군(A), 사염화탄소 투여군(B), 사염화탄소 투여 후 발효식품 섭취군 1(C)의 3개의 실험군으로 나누어 실험을 실시하였다(표 11). 사육실 온도는 23±2℃, 습도는 50± 5%, 조명주기는 12시간 간격으로 조절하였으며, 식이와 음용수는 각 군의 개체들이 자유롭게 섭취하도록 하여 5주(week)간 진행하였다.Experimental animals and diets were fed from rats with an average body weight of 110 ± 10g from the central laboratory animals and fed to AIN-93G feed for one week while being adapted to the breeding environment. After 1 week, the experiment was divided into three experimental groups of normal group (A), carbon tetrachloride group (B), and fermented food intake group 1 (C) after administration of carbon tetrachloride (6 animals per group) by randomized complete block design. Table 11). The room temperature was 23 ± 2 ℃, the humidity was 50 ± 5%, the lighting cycle was adjusted every 12 hours, and diet and drinking water were allowed to be ingested freely by individuals in each group for 5 weeks.

표 11. 사료의 조성 (g/100g 식이) 및 Table 11.The composition of the feed (g / 100g diet) and

A군Group A AIN-93G diet 99.6중량% + 발효식품 0.4%AIN-93G diet 99.6% by weight + fermented food 0.4% B군B group AIN-93G diet 100중량%AIN-93G diet 100% by weight C군Group C AIN-93G diet 99.6중량% + 발효식품 0.4%AIN-93G diet 99.6% by weight + fermented food 0.4%

(1)흰쥐의 체중 및 간 중량(1) weight and liver weight of rats

실험기간 동안 흰쥐의 체중 및 간 무게를 측정한 결과는 표 12와 같다. 체중증가량은 사염화탄소를 단독으로 투여한 B군에서 4.80g/day로 가장 적었지만, Group 간의 유의적인 차이는 없었다. 사염화탄소 와 사염화탄소 투여에 대한 발효물의 섭취가 간의 무게에 미치는 효과를 알아보기 위하여 체중 100g 당 간의 무게를 측정한 결과, 체중 100g 당 간의 무게는 사염화탄소를 단독으로 투여한 B군에서 높았으며, 사염화탄소 투여 후 발효물을 섭취한 C에서는 감소되었다. 그러나 유의적인 차이를 보이지는 않았다. Jeon과 Park(Jeon JR. Park JR. 2002. Effect of Eucommia ulmoides leaf water extract on hepatotoxicity of carbon tetrachloride-induced rats. J korean Soc Food Sci Nutr 31: 124-130), Lee 등(Lee SB, Cho TS, Yoon KW, Lee JC, Lee SM, Shim SB. 1998. A study on hepatoprotective effect of PS-1 from Artemisia iwayomogi. J Appl Pharmacol 6: 119-129) 및 김 등(김영섭, 유윤숙, 한은경, 강일준, 정차권. 2008, 사염화탄소를 투여한 흰쥐에서 인진쑥 및 동충하초의 지질대사촉진 및 간독성저하효과 J. Korean Soc. Food Sci. Nutr. Vol 37., No. 5, pp.548-554)의 연구에서 사염화탄소에 의해 간독성이 유발한 흰쥐군은 정상군에 비해 간 중량 백분율이 유의적으로 증가한다고 보고하였는데, 이는 본 실험 결과와도 일치하며 이러한 결과는 발효물이 간 손상을 회복시키는데 영향을 미치는 것으로 사료된다. The weight and liver weights of the rats measured during the experiment are shown in Table 12. Body weight gain was the smallest in the group B administered with carbon tetrachloride alone (4.80g / day), but there was no significant difference between groups. To determine the effect of fermentation of carbon tetrachloride and carbon tetrachloride on liver weight, liver weight per 100 grams of body weight was higher in group B administered with carbon tetrachloride alone. It was decreased in C after fermentation. However, there was no significant difference. Jeon and Park (Jeon JR. Park JR. 2002. Effect of Eucommia ulmoides leaf water extract on hepatotoxicity of carbon tetrachloride-induced rats.J korean Soc Food Sci Nutr 31: 124-130), Lee et al. (Lee SB, Cho TS, Yoon KW, Lee JC, Lee SM, Shim SB. 1998. A study on hepatoprotective effect of PS-1 from Artemisia iwayomogi.J Appl Pharmacol 6: 119-129) and Kim et al. Hepatotoxicity by carbon tetrachloride in the study of J. Korean Soc. Food Sci. Nutr. Vol 37., No. 5, pp.548-554) The induced rat group reported a significant increase in liver weight percentage compared to the normal group, which is in agreement with the results of this experiment, and these results suggest that fermented products can restore liver damage.

표 12. 흰쥐의 체중 및 간 무게 Table 12. Body weight and liver weight of rats

Groups1) Groups 1) Initial body weight(g)Initial body weight (g) Final body weight(g)Final body weight (g) Change of
body weight
(g/day)
Change of
body weight
(g / day)
Liver
(g/100g body weight)
Liver
(g / 100g body weight)
AA 132.03± 2.59132.03 ± 2.59 348.29± 15.14348.29 ± 15.14 5.15± 0.345.15 ± 0.34 2.87± 0.062.87 ± 0.06 BB 132.22± 5.46132.22 ± 5.46 333.88± 14.67333.88 ± 14.67 4.80± 0.424.80 ± 0.42 3.04± 0.143.04 ± 0.14 CC 132.09± 6.54132.09 ± 6.54 340.56± 32.42340.56 ± 32.42 4.97± 0.884.97 ± 0.88 2.97± 0.292.97 ± 0.29

(2)흰쥐의 간 기능 효소활성 측정(2) Measurement of liver function enzyme activity of rat

실험기간인 5주간 사육 후 채혈하여 간 기능관련 효소인 AST(SGOT), ALT(SGPT), ALP(alkaline phosphatase) 및 LDH(lactate dehydrogenase) 활성을 측정하였다. 그 결과 표 13에서와 같이 정상군(A)에 비해 사염화탄소 투여군(B)인는 혈청 AST, ALT, ALP 및 LDH 활성이 유의하게 증가되었다. 사염화탄소와 같은 간 독성물질은 간세포의 괴사와 간 조직의 파괴를 유도하여 AST, ALT, ALP 및 LDH 의 혈액 내 유출이 증가되는데 본 실시예에서 사염화탄소로 인해 간 기능이 손상됨을 알 수 있었다.After 5 weeks of breeding, the blood was collected and measured for AST (SGOT), ALT (SGPT), alkaline phosphatase (ALP) and lactate dehydrogenase (LDH). As a result, serum AST, ALT, ALP and LDH activities were significantly increased in the carbon tetrachloride administered group (B) compared to the normal group (A) as shown in Table 13. Hepatic toxic substances such as carbon tetrachloride induce necrosis of liver cells and destruction of liver tissue, thereby increasing the outflow of AST, ALT, ALP and LDH into the blood. In this embodiment, carbon tetrachloride impaired liver function.

실시예 2-1에서 제조한 발효식품을 섭취시킨 C군에서 모두 사염화탄소 투여로 높아진 AST, ALT, ALP 및 LDH 수치를 유의하게 감소되는 것으로 나타나 발효식품은 간 기능 개선효과가 있는 것으로 확인되었다. In the C group ingesting the fermented food prepared in Example 2-1, all the AST, ALT, ALP and LDH levels were significantly reduced by the administration of carbon tetrachloride, and it was confirmed that the fermented food had an effect on improving liver function.

표 13. 흰쥐의 간 기능 효소활성Table 13. Enzyme Activity of Liver in Rats

Group1) Group 1) AST* AST * ALT*** ALT *** ALP* ALP * LDH** LDH ** AA 93±12b 93 ± 12 b 51± 5b 51 ± 5 b 349±21b 349 ± 21 b 288±72b 288 ± 72 b BB 131±14a 131 ± 14 a 65±15a 65 ± 15 a 489±60a 489 ± 60 a 527±82a 527 ± 82 a CC 95± 5b 95 ± 5 b 51± 5b 51 ± 5 b 369±46b 369 ± 46 b 355±93b 355 ± 93 b

상술한 바와 같이, 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만 해당 기술 분야의 숙련된 당업자라면 하기의 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. As described above, although described with reference to a preferred embodiment of the present invention, those skilled in the art will be variously modified and modified within the scope of the present invention without departing from the spirit and scope of the invention described in the claims below. It will be appreciated that it can be changed.

본 발명은 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나의 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물을 제공할 수 있으며, 상기의 미생물을 포함하는 미생물 제제를 식품에 이용하여 혈당상승을 억제할 수 있는 식품을 제공할 수 있어, 당뇨병 및 간 질환의 예방 및/또는 치료 등에 기여함으로써 산업상 발전에 기여할 수 있다.The present invention is Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis (Bacillus licheniformis) KS-30 strain ( KCTC 11353BP), Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) selected from the group of blood glucose inhibitory effect and liver It is possible to provide a microorganism having an effect of improving the function, it is possible to provide a food that can suppress the rise in blood sugar by using the microbial agent containing the microorganism in the food, to prevent and / or treat diabetes and liver disease, etc. By contributing, you can contribute to industrial development.

도 1은 본 발명의 혈당상승 억제효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품을 섭취한 실험군(B,C)와 본 발명의 혈당상승 억제효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품을 섭취하지 않은 대조군(A)의 KKAy 마우스의 혈당 변화를 나타낸 그래프이다.1 is a test group (B, C) ingesting a food containing a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect of the present invention and a control group (A) not ingesting a food containing a microorganism having a blood sugar rise inhibitory effect of the present invention. It is a graph showing the change in blood glucose of KKAy mice.

도 2는 본 발명의 혈당상승 억제효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품을 섭취한 실험군(B,C)와 본 발명의 혈당상승 억제효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품을 섭취하지 않은 대조군(A)의 마우스 혈장 글루코오스 함량을 나타낸 그래프이다.Figure 2 of the experimental group (B, C) ingested food containing a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect of the present invention and a control group (A) not ingesting a food containing a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect of the present invention Graph showing mouse plasma glucose content.

도 3은 본 발명의 혈당상승 억제효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품을 섭취한 실험군(B,C)와 본 발명의 혈당상승 억제효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품을 섭취하지 않은 대조군(A)의 마우스 혈장 인슐린의 농도를 나타낸 그래프이다.Figure 3 of the experimental group (B, C) ingested food containing the microorganisms having a blood glucose increase inhibitory effect of the present invention and the control group (A) who did not take a food containing a microorganism having a blood sugar rise inhibitory effect of the present invention It is a graph showing the concentration of mouse plasma insulin.

도 4는 본 발명의 혈당상승 억제효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품을 섭취한 실험군(B,C)와 본 발명의 혈당상승 억제효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품을 섭취하지 않은 대조군(A)의 마우스 당화혈색소(HbA1c)의 농도를 나타낸 그래프이다.Figure 4 of the experimental group (B, C) ingested food containing the microorganisms having a blood glucose increase inhibitory effect of the present invention and the control group (A) who did not eat a food containing a microorganism having a blood sugar rise inhibitory effect of the present invention It is a graph showing the concentration of mouse glycated hemoglobin (HbA1c).

Claims (11)

바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나의 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물.Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP) Inhibition effect of any one of the blood sugar level selected from the group of Bacillus sonorensis (Bacillus sonorensis) KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) and improving liver function Microorganisms. 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 미생물과, 쌀겨, 당류 및 정제수를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물을 포함하는 미생물 제제.Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP) , Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans (Bacillus circulans) KS-80 strain (KCTC 11355BP) any one or more selected from the group, rice bran, sugar and purified water Microbial agent comprising a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improving effect. 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시 스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 미생물 0.001∼10중량%, 쌀겨 0.5∼10중량%, 당류 0.5∼10중량% 및 잔부의 정제수를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물을 포함하는 미생물 제제.Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP) Bacillus sonorensis (Bacillus sonorensis) KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) any one or more microorganisms selected from the group 0.001-10% by weight, rice bran A microbial agent comprising a microorganism having an inhibitory effect on blood sugar rise and improving liver function, including 0.5 to 10% by weight, 0.5 to 10% by weight of sugar, and the balance of purified water. 제2항 또는 제3항에 있어서, 미생물 제제에서의 미생물의 총균수는 1×103∼1×1013cfu/g인 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물을 포함하는 미생물 제제.The microorganism preparation according to claim 2 or 3, wherein the total number of microorganisms in the microbial preparation is 1 × 10 3 to 1 × 10 13 cfu / g. 제2항 또는 제3항에 있어서, 미생물 제제의 제형은 분말(powder) 또는 펠렛(pellet)인 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물을 포함하는 미생물 제제.The microbial preparation of claim 2 or 3, wherein the formulation of the microbial preparation comprises a microorganism having a blood glucose raising inhibitory effect and a liver improving effect, which are powders or pellets. 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 미 생물, 쌀겨, 당류 및 정제수를 혼합한 미생물이 혼합된 혼합물을 폭기(aeration)시키는 단계를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물을 포함하는 미생물 제제의 제조방법.Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP) One or more microorganisms, rice bran, sugars and purified water selected from the group of Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) A method for producing a microbial preparation comprising a microorganism having an effect of inhibiting blood sugar rise and improving liver function, including aeration of a mixture of the mixed microorganisms. 바실러스 속(Bacillus sp.) KS-25 균주(KCTC 11351BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KS-29 균주(KCTC 11352BP), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis) KS-30 균주(KCTC 11353BP), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis) KS-33 균주(KCTC 11354BP), 바실러스 스큐란스(Bacillus circulans) KS-80 균주(KCTC 11355BP)의 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 미생물 0.001∼10중량%, 쌀겨 0.5∼10중량%, 당류 0.5∼10중량% 및 잔부의 정제수를 혼합하는 단계, 상기 미생물이 혼합된 혼합물을 20∼25℃에서 2∼6시간 간격으로 5∼10m3/hr의 공기를 1∼3시간 동안 폭기하는 과정을 하루 2∼6회 반복적으로 수행하는 것을 3∼30일 동안 실시하는 단계를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물을 포함하는 미생물 제제의 제조방법.Bacillus sp. KS-25 strain (KCTC 11351BP), Bacillus subtilis KS-29 strain (KCTC 11352BP), Bacillus licheniformis KS-30 strain (KCTC 11353BP) , Bacillus sonorensis KS-33 strain (KCTC 11354BP), Bacillus circulans KS-80 strain (KCTC 11355BP) any one or more microorganisms selected from the group 0.001-10% by weight, rice bran 0.5 Mixing 10% by weight, 0.5-10% by weight of sugar and the remainder of purified water, and mixing the mixture of the microorganisms at a temperature of 5 to 10 m 3 / hr at an interval of 2 to 6 hours at 20 to 25 ° C. Method for producing a microbial preparation comprising a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improving effect comprising the step of performing aeration for 2 to 6 times a day repeatedly for a period of time for 3 to 30 days. 미강, 상황버섯, 노니, 녹차, 울금, 브로컬리, 아가리쿠스, 클로렐라, 보이차, 청국장의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 성분과 제2항 또는 제3항의 미생물 제제를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품.Improvement of liver function and improvement of hepatic glucose effect including any one or more ingredients selected from the group of rice bran, situation mushroom, noni, green tea, turmeric, broccoli, agaricus, chlorella, bocha, and cheonggukjang and the microbial preparation of claim 2 or 3 Food containing microorganisms having an effect. 미강, 상황버섯, 노니(noni), 녹차, 울금, 브로컬리, 아가리쿠스, 클로렐라, 보이차, 청국장의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 성분 60∼99중량%과 제2항 또는 제3항의 미생물 제제 1∼40중량%를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품.60 to 99% by weight of any one or more components selected from the group of rice bran, situation mushroom, noni, green tea, turmeric, broccoli, agaricus, chlorella, voila tea, and cheonggukjang and the microbial preparations 1 to 40 of claim 2 or 3. Food comprising a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and a liver function improving effect comprising a weight%. 제8항 또는 제9항에 있어서, 식품은 분말(powder), 펠렛(pellet), 타블렛(tablet), 환(丸), 캡슐(capsule)의 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형으로 형상화된 것인 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품.10. The blood sugar according to claim 8 or 9, wherein the food is shaped into any one formulation selected from the group of powders, pellets, tablets, pills, capsules. Food containing microorganisms having a synergistic inhibitory effect and an effect of improving liver function. 미강, 상황버섯, 노니(noni), 녹차, 울금, 브로컬리, 아가리쿠스, 클로렐라, 보이차, 청국장의 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 성분 60∼99중량%과 제2항 또는 제3항의 미생물 제제 1∼40중량%를 혼합하되, 상기 미생물 제제가 혼합된 혼합물의 수분함량이 20∼60중량%가 되도록 하는 혼합하는 단계,60 to 99% by weight of any one or more components selected from the group of rice bran, situation mushroom, noni, green tea, turmeric, broccoli, agaricus, chlorella, voila tea, and cheonggukjang and the microbial preparations 1 to 40 of claim 2 or 3. Mixing the weight%, but mixing the microbial agent so that the water content of the mixture is 20 to 60 weight%, 상기 미생물 제제가 혼합된 혼합물을 80∼85℃에서 2∼6시간(hr) 동안 1차 발효를 시키는 단계,First fermentation of the mixture of the microbial agent is mixed at 80 ~ 85 ℃ for 2-6 hours (hr), 상기 1차 발효 후 25∼30℃에서 20∼40일(day) 동안 2차 발효를 시키는 단계,After the first fermentation, the second fermentation for 20 to 40 days (day) at 25 to 30 ℃, 상기 2차 발효 후 80∼85℃에서 1∼3시간 동안 3차 발효를 시키는 단계, 및Tertiary fermentation for 1 to 3 hours at 80 to 85 ° C. after the secondary fermentation, and 상기 3차 발효물을 건조하는 단계를 포함하는 혈당상승 억제효과와 간 기능 개선효과를 갖는 미생물을 포함하는 식품의 제조방법.Method for producing a food comprising a microorganism having a blood glucose increase inhibitory effect and liver function improving effect comprising the step of drying the third fermentation.
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