본 발명에 따라서 UCOE를 포함하는 폴리뉴클레오티드가 제공되고, 이것은 염색질(chromatin)을 개방하거나, 또는 개방 상태로 염색질을 유지하고, 적어도 두 개의 다른 조직 유형에서의 세포는 작동가능하게-연결된 유전자의 재현성있는(reproducible) 발현을 촉진하고, 여기서 UCOE의 뉴클레오티드 서열은 자연적으로는 나타나지 않는다.
적어도 두 개 이상의 유전자에서 유래된 조절 서열을 포함하는 게놈 영역은 연장된 배양 기간을 거쳐 유전자 발현을 현저하게 증가시키는 키메라 UCOE를 형성하도록 결합되었다. 이러한 키메라 UCOE는 자연적으로는 발생하지 않는 뉴클레오티드 서열을 구성한다. 따라서 "자연적으로는 발생하지 않는"이라는 구절은 UCOE를 구성하는 성분의 뉴클레오티드 서열이 그것으로서 자연적으로는 존재하지 않고, 인간이 만들거나 또는 자연적으로-발생한 및/또는 인공적으로 생성된 서열의 조합인, 인공적으로 구성된 것인 상태를 나타낸다.
여기서 사용된 바와 같이, UCOE에 관하여, "인공적인", "인공적으로 구성된", "키메라의" 등과 같은 용어는 UCOE 또는 UCOE를 구성하는 성분이 자연적으로는 존재하지 않는다; 즉, "자연적으로는 발생하지 않는다"는 것을 의미하는 것이 면 대체되어 사용할 수 있다. UCOE가 자연적으로 발생하는 서열의 조합이 있는 경우에, UCOE으로의 그들의 배열 또는 편성하는 것이 비자연적이다. 비제한적인 예로서, 인공적인 UCOE는 일반적으로 이종이고, 키메라의 또는 인공적인 UCOE를 창조하기 위한, 비자연적인 조직에서 함께 가져 온, 두 개의 자연적으로 발생하는 서열로 이루어질 수 있다.
여기서 사용된 바와 같이, UCOE에서의 서열에 관하여 "인공적으로 합성된" 및 "인공적으로 생산된"이라는 용어는 비자연적인 서열; 즉, 자연적으로는 발생하지 않고 전체가 합성적인 서열을 나타낸다. 이러한 "인공적으로 합성된" 및 "인공적으로 생산된" 서열은 또한 인공적인 UCOE을 창조하거나 구성하기 위한 자연적으로 발생하는 서열과 결합될 수 있다.
본 발명의 대체 가능한 관점에 따라서, 하기에서 선택된 DNA 서열을 포함하는 핵산 분자를 제공한다:
ⅰ) 도 2a-d 또는 도 7a-e에서 나타내는 바와 같은 DNA 서열;
ⅱ) 본 발명에 따른 폴리펩티드를 코드화하는, 도 2a-d 또는 도 7a-e에서 존재하는 서열에 하이브리드화하는 DNA 서열.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 도 2a-d 또는 도 7a-e에서 나타내는 서열에 대한 스트린전트 하이브리드화 조건하에서 어닐링(annealing)하는, 분리된 핵산 분자를 제공한다.
스트린전트 하이브리드화/세척 조건은 당 기술 분야에서 잘 알려져 있다. 예를 들어, 핵산 잡종은 60℃에서 0.1x SSC, 0.1% SDS에서 세척한 경우에 안정적이 다. 최적의 하이브리드화 조건은 핵산의 서열이 알려진 경우에는 계산될 수 있다는 것이 당 기술 분야에서 잘 알려져 있다. 예를 들어, 하이브리드화 조건은 하이브리드화에 직면한 핵산의 GC 함량에 의해 결정될 수 있다. Sambrook et al (1989), Molecular Cloning; A Laboratory Approach를 참조하시오. 특정한 상동관계의 핵산 분자 사이에서 하이브리드화를 성취하기 위해 필요로 하는 스트린전트 조건을 계산하기 위한 일반식은 하기와 같다:
Tm=81.5℃+16.6Log[Na+]+0.41[%G+C]-0.63(%포름아미드).
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 작동가능하게 연결되고 비-조직 특이적으로 유전자의 재현성있는 발현을 촉진한다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 활성 유전자 발현이 발생하는 모든 조직 유형에서 작동가능하게 연결된 유전자의 재현성의 발현을 촉진한다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 생리학적인 수준에서 작동가능하게 연결된 유전자의 재현성의 발현을 촉진한다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 연장된 메틸화가 결여된, CpG-아일랜드를 포함한다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 유전자 발현의 조절과 연결된 하나 이상의 자연적으로 발생하는 서열을 포함한다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 자연적으로 발생하는 프로모터를 포함한다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 분기적으로 전사되는 이중 또는 이-방향의 프로모터를 포함한다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 인간 β-액틴 CpG 아일랜드/프로모터 영역, 또는 그것의 단편을 포함한다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 인간 β-액틴 CpG 아일랜드/프로모터 영역, 또는 그것의 단편에 놓여진 100bp 내지 3.0kb의 범위 안에서의 DNA 단편을 포함한다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 인간 프로그램화 세포 사멸-2(programmed cell death-2: PDCD2) CpG 아일랜드/프로모터 영역, 또는 그것의 단편을 포함한다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 인간 PDCD2 CpG 아일랜드/프로모터 영역, 또는 그것의 단편에 놓여진 100bp 내지 3.0kb의 범위 안에서의 DNA 단편을 포함한다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 인간 β-액틴 CpG 아일랜드/프로모터 영역에 놓여진 100bp 내지 3.0kb의 범위 안에서의 DNA 단편 및 인간 PDCD2 CpG 아일랜드/프로모터 영역에 놓여진 100bp 내지 3.0kb의 범위 안에서의 DNA 단편을 포함한다. 바람직하게는 상기 단편은 분기적으로 배향된 그들의 프로모터와 바로 인접한다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 인간 β-액틴 CpG 아일랜드/프로모터 영역에 놓여진 2kb의 DNA 단편 및 인간 PDCD2 CpG 아일랜드/프로모터 영역 에 놓여진 1.8kb의 DNA 단편을 포함한다. 바람직하게는 상기 단편은 분기적으로 배향된 그들의 프로모터와 바로 인접한다.
상기 폴리뉴클레오티드의 더욱 바람직한 구현예는 어느 배향에서, 도 2a-d의 서열 또는 그것의 단편을 포함한다.
바람직하게는 폴리뉴클레오티드는 인간 RNP(Ribonucleoprotein) CpG 아일랜드/프로모터 영역 또는 그것의 단편을 포함한다.
바람직하게는 폴리뉴클레오티드는 인간 RNP CpG 아일랜드/프로모터 영역에 놓여진 4kb DNA 단편을 포함한다.
바람직하게는 폴리뉴클레오티드는 메틸화되지 않은 CpG 아일랜드를 포함하는 하나 이상의 추가 서열에 인접한, 연장된 메틸화 결여된 CpG 아일랜드 함유 두 갈래의 프로모터를 포함한다.
바람직하게는 폴리뉴클레오티드는 인간 PDCD2 CpG 아일랜드/프로모터 영역 및 인간 β-액틴 CpG 아일랜드/프로모터 영역에 놓여진 100bp 내지 3kb의 범위에서의 DNA 단편을 포함한다.
더욱 바람직한 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 어느 배향에서, 도 7a-7e의 서열 또는 그것의 단편을 포함한다. 바람직하게는 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 프로모터 서열을 포함한다.
어떤 환경 하에서, 전사의 개시는 상류 프로모터로부터 해석에 의한 전사체에 의해 억제된다(Youssoufian and Lodish (1993) Transcriptional inhibition of the murine erythopoietin receptor gene by an upstream repetitive element, Mol Cell Biol 13 (1) 98-104). 그러므로, 본 발명의 한 구현예는 하나 이상의 프로모터 서열이 그들이 전사를 개시할 수 있는 그러한 방법에서 돌연변이화되는, 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
바람직하게는 프로모터는 사이토메갈로바이러스(cytomegalovirus: CMV), 연장 인자-1α(elonggation factor-1α: EF-1α), 호흡기 신시티아 바이러스(respiratory syncytial virus: RSV) LTR, 및 인간 면역결핍 2(Human immunodeficiency 2: HIV 2) LTR, 또는 그들로부터 유도된 서열의 조합에서 선택된다. 더욱 바람직하게는 프로모터는 CMV 프로모터이다. 가장 바람직하게는 마우스 CMV 프로모터이다.
바람직하게는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 인공적으로 합성된 하나 이상의 서열을 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
바람직하게는 상기 벡터는 진핵생물 유전자 발현에 적응(adaptation)된 발현 벡터이다.
전형적으로 상기 적응은 예를 들어, 이에 한정되지는 않고, 세포/조직 특정 발현을 중재하는 전사 조절 서열(프로모터 서열)의 공급을 포함한다.
프로모터 및 증폭제(enhancer)는 당 기술분야에서 잘 알려진 용어이고, 예로서 제공되지만, 이에 한정되지는 않는 하기의 특징을 포함한다. 프로모터는 전사의 개시에 직접적으로 관련된 5', cis-활동 조절 서열이다. 프로모터 성분은 소위 TATA박스 및 전사 개시의 부위를 선택하는 기능이 있는 RNA 폴리머라제 개시 선 택(RIS) 서열을 포함한다. 이들 서열은 또한 특히, RNA 폴리머라제에 의한 전사 개시 선택을 촉진하는, 기능이 있는 폴리펩티드와 결합한다.
증폭제 성분은 유전자의 전사 개시 부위에서 5'에서 종종 발견되는 cis 활동 핵산 서열이다(증폭제는 또한 유전자 서열에서 3'에서 발견되거나 또는 인트론 서열에 위치되므로 위치 비의존적이다). 증폭제는 증폭제와 관련된 유전자의 전사 속도를 증가시키는 기능이 있다. 증폭제 활동성은 증폭제 성분에 특이적으로 결합하는 것으로 나타내는 trans 활동 전사 인자(폴리펩티드)에 반응성이 있다. 전사 인자의 결합/활동성은 이에 한정되지는 않지만, 예로서, 중간의 대사 산물(예를 들어, 글루코스), 환경적인 영향(예를 들어, 열)을 포함하는 많은 수의 환경적인 자극에 초래한다(David S. Latchman, Academic Press Ltd, San Diego의 Eukaryotic Transcription Factors를 참조).
적응은 또한 진핵생물 세포 또는 원핵생물 숙주 세포 중 하나에서 상기 벡터의 유지를 촉진할 수 있는, 선택가능한 마커 및 자율적인 복제 서열의 공급을 포함한다. 자율적으로 유지되는 벡터는 에피솜성 벡터로서 간주된다. 에피솜성 벡터는 그들이 자기복제하고 통합에 필요 없이 계속될 수 있으므로 바람직하다. 이러한 유형의 에피솜성 벡터는 WO98/07876에서 기재된다.
벡터를 코드화한 유전자의 발현을 촉진하는 적응은 전사 종결/폴리아데닐화 서열의 공급을 포함한다. 이것은 또한 비시스트론의 또는 다중-시스트론의 발현 카세트에 배열된 벡터를 코드화하는 유전자의 발현을 최대화하는 내부 리보솜 도입 부위(IRES)의 공급은 포함한다.
이들 적응은 당 기술 분야에서 잘 알려져 있다. 일반적인 발현 벡터 구성 및 재조합 DNA 기술에 관하여 상당히 많은 수의 발행된 문헌이 있다. Sambrook et al (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory, Cold Spring, NY 및 거기서의 참조문헌; Marstron, F (1987) DNA Cloning Techniques: A Practical Approach Vol Ⅲ IRL Press, Oxford UK; DNA Cloning: F M Ausubel et al, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994)를 참조하시오.
바람직하게는, 벡터는 프로모터 및 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 표현가능한 유전자를 포함한다.
바람직하게는, 벡터는 에피솜성 또는 통합성 벡터이다.
바람직한 구현예에서는, 본 발명의 벡터는 플라스미드이다.
대체 가능하게는, 벡터는 아데노바이러스, 아데노-연결된 바이러스, 헤르페스바이러스, 바시니아 바이러스, 렌티바이러스 또는 다른 레트로바이러스와 같은, 바이러스이다.
바람직하게는, 작동가능하게 연결된 유전자는 약제학적인 핵산 서열이다.
바람직하게는, 벡터는 발현될 개방 리딩 프레임의 두 삽입 부위를 포함하고, 각각은 독특한 프로모터로부터 전사된 것이고, 상기 프로모터는 분기적으로 전사하기 위해 배열되고, 두 프로모터는 그들 사이에 위치한 인공적으로 구성된 UCOE에 작동가능하게 연결되고, 여기서, 상기 UCOE는 양 배향에서 효과적이도록 구성된 것이다. 이것은, 이에 한정하지는 않지만, 면역글로블린을 포함하는 둘 이상의 폴리 펩티드 사슬을 포함하는 단백질의 생산에 특히 유용하다. 벡터에서 삽입 부위는, 이에 한정하지는 않지만, 면역글로블린 중쇄 및 면역글로블린 경쇄를 코드화하는 개방 리딩 프레임을 포함하는, 흥미로운 다른 폴리펩티드를 코드화하는 핵산으로 삽입될 수 있다.
바람직하게는, 벡터는 적당한 조절 성분 하에서 도 2a-2d의 서열, CMV 프로모터, 다중 클로닝 부위, 폴리아데닐화 서열 및 유전자를 코드화하는 선택가능한 마커를 포함한다. UCOE가 양 배향에서 삽입될 수 있다는 것은 당 기술분야의 당업자에게 분명할 것이다.
바람직하게는 인공적인 UCOE을 포함하는 벡터는 도 3a에서 도식적으로 나타낸 바와 같은 CET 500이다.
대체 가능한 구현예에서, 벡터는 도 3b에서 나타낸 바와 같은 CET 501이다.
대체 가능하게는, 청구항 중 어느 한 항의 벡터는 적당한 조절 성분 하에서 도 7a-7e의 서열, CMV 프로모터, 다중 클로닝 부위, 폴리아데닐화 서열 및 유전자를 코드화하는 선택가능한 마커를 포함한다. 유사하게는, 인공적인 UCOE가 양 배향에서 삽입될 수 있다는 것은 당 기술분야의 당업자에게 분명할 것이다.
대체 가능한 바람직한 구현예에서, 인공적인 UCOE를 포함하는 벡터는 도 8a에서 도식적으로 나타낸 바와 같은 CET 600으로 알려져 있다.
대체 가능한 추가의 구현예에서, 벡터는 도 8b에서 도식적으로 나타낸 바와 같은 CET 601로 알려져 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 벡터로 트랜스펙션(transfection)된 숙주 세포를 제공한다.
본 발명은 또한 치료에서 사용하기 위한 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 숙주 세포를 제공한다.
본 발명은 또한 유전자 치료요법에서 사용하기 위한 조성물의 제조에서 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 숙주 세포의 사용을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 숙주 세포의 약제학적으로 유효량을 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 치료 방법을 제공한다. 바람직하게는, 환자는 유전자 치료요법에 의해 치료될 수 있는 질병을 가진 환자이다.
본 발명은 또한 질병을 치료하기 위한 또는 특정 조직의 세포에 유익한 단백질 또는 기능을 제공하기 위한 치료요법에, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제와 혼합된 폴리뉴클레오티드 및/또는 벡터 및/또는 숙주 세포를 포함하는 약제학적인 조성물을 제공한다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 숙주 세포 또는 약제학적인 조성물은 전신 근육 내의, 정맥주사의, 에어로졸(aerosol), 경구(고체 또는 액체 형태), 국부적인, 눈의, 직장의, 피하층으로의 및/또는 포막층으로의(intrathecal) 및 국부적인 직접 주사를 포함하는 경로를 걸쳐서 투여될 수 있다.
정확한 복용량 섭생은, 물론, 개별적인 환자에 대한 개별적인 임상 의사에 의해 결정되는 것이 당연할 것이고, 이것은, 교대로, 치료에서 표적이 되는 흥미로운 유전자 및 조직의 유형에 의해 발현되는 단백질의 정확한 성질에 의해 조절될 수 있다.
복용량은 질병의 징후 및 투약의 경로에 의존할 것이다. 투여량의 수는 질병, 임상 실험으로부터의 효율적이 데이터에 의존할 것이다.
본 발명에 따른 효과적인 유전자 치료요법을 위해 이동된 폴리뉴클레오티드 또는 벡터 DNA의 양은 바람직하게는 벡터 DNA/kg 체중에 50ng - 1000㎍의 범위이고 더욱 바람직하게는 약 1-100㎍ 벡터 DNA/㎏의 범위이다.
생체내 세포 상승을 위해 포유동물에 대하여 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 숙주 세포를 투여하도록 본 발명에 따르는 것이 바람직할지라도, 생체외 접근법은 세포가 동물로부터 제거되고, 폴리뉴클레오티드, 또는 벡터로 형질 도입된 다음 동물에 재이식되기 위하여 유용할 것이다. 예를 들어, 간은 동물로부터 간세포를 제거하고, 생체외에서 간세포를 형질 도입하고 동물로 형질 도입된 간세포를 재이식하는 것으로 생체외 접근법에 의해 제어될 수 있다(예를 들어, Chowdhury et al ., Science 254:1802-1805, 1991, 또는 in humans by Wilson, Hum. Gene Ther. 3: 179-222, 1992). 이러한 방법은 또한 적혈구, T 세포, B 세포 및 조혈의 줄기 세포와 같은, 순환계 또는 림프계에서 다양한 세포의 개체군에 이동을 효과적이게 할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 숙주 세포를 사용하는 유전자 치료요법의 효율성을 결정하기 위한 포유동물 모형을 제공한다. 포유동물 모형은 본 발명의 벡터를 함유하는 트랜스제닉 동물을 포함한다. 트랜스제닉 마우스를 만드는 방법(Gordon et al ., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 77:7380 (1980); Harbers et al ., Nature 293:540 (1981); Wagner et al ., Proc . Natl. Acad . Sci . USA 78:5016 (1981); 및 Wagner et al ., Proc . Acad . Sci . USA 78:6376 (1981), 트랜스제닉 양, 돼지, 닭을 만드는 방법(Hammer et al., Nature 315:680 (1985)을 참조), 등은 당 기술 분야에 잘 알려져 있고, 본 발명에 따른 사용에서 예상된다. 이러한 동물은 인간에게 임상 실험하기에 앞서 시험된다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드를 함유하는 트랜스제닉 동물은 또한 흥미있는 단백질의 장기간의 생산에 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 원하는 유전자 생성물을 얻기 위하여 세포 배양 시스템에서 폴리뉴클레오티드 및/또는 벡터 및/또는 숙주 세포의 용도를 제공한다. 적당한 세포 배양 시스템은 당 기술 분야에 잘 알려져 있고, 당 기술 분야의 당업자에게 알려진 문헌에서 완전히 개시되어 있다.
본 발명은 또한 내성적인 유전자와 작동가능하게 연결된 위치에서 세포의 게놈으로 폴리뉴클레오티드를 삽입하고 그것으로 인하여 유전자의 발현 수준을 증가시키는 것을 포함하는 내성적인 유전자의 발현을 증가시키기 위한 폴리뉴클레오티드의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 트랜스제닉 식물을 생산하는 데에 있어서 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 용도를 제공한다.
증가된 수득율, 내성 등을 갖는 트랜스제닉 식물의 생산은 당 기술 분야의 당업자들에게 잘 알려져 있다. 본 발명은 또한 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 함유하는 세포를 함유하는 트랜스제닉 식물을 제공한다. 인공적인 UCOE를 포함하는 세 포의 일부 또는 전부는 식물로부터 유래될 수 있다.
본 발명은 또한 폴리뉴클레오티드를 함유하는 세포를 함유하는 트랜스제닉 동물(인간을 제외한)을 제공한다.
본 발명은 또한 기능 유전체학의 응용 분야에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 용도에 관한 것이다. 기능 유전체학은 주로 특히 세포 유형 또는 질병 상태를 구체적으로 발현하는 유전자의 서열화에 관한 것이고, 약 발견 또는 유전자 치료요법의 목적으로 가능성 있는 흥미로운 신규한 많은 유전자 서열을 제공한다. 신규한 치료요법의 개발을 위한 이 정보의 사용에서 주요한 문제는 이들 유전자의 기능을 결정하는 방법에 있다. UCOEs는 유전자 서열의 기능을 결정하기 위하여 기능 유전체학의 많은 응용 분야에서 사용될 수 있다. 본 발명의 기능 유전체학 응용 분야는 하기를 포함하지만, 이에 한정하지는 않는다:
(1) 유전자 서열의 안티센스 형 또는 리보자임 녹다운 라이브러리(ribozyme knockdown library)의 지속된 발현을 이루기 위한 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 사용하는 것으로 인하여 세포 표현형에서 유전자를 비활성화하는 효과를 결정하는 것.
(2) 세포로의 전달을 위한, 유전자 서열에 대한 발현 라이브러리를 준비하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 사용은 유전자 서열의 믿을 수 있고, 재현가능하고, 지속된 발현을 얻을 것이다. 유전자 서열을 발현하는, 생성된 세포는 기능 결정 및 약 발견에의 다양한 접근에 사용될 수 있다. 예를 들어, 유전자 생성물에 대한 중화 항체의 증가; 구조적인, 기능적인, 또는 약 선별 연구에서 또는 세포-기저한 약 성별에서 사용하기 위한 유전자 자체의 단백질 생성물의 빠른 정제화 등이 있다.
(3) 마우스 배아 줄기(ES)세포 및 트랜스제닉 마우스를 포함하는 접근에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 사용. 대부분의 강력한 기능 유전체학적인 접근 중 하나는 발현된 유전자로 삽입에 이어서 약 선택이 가능하게 하는 구성체의 마우스 ES 세포에서의 유전자로 무작위한 삽입을 포함하고, 서열에 대하여 쉽게 구조받게 할 수 있게 한다(G. Hicks et al., Nature Genetics, 16, 338-334). 그런 다음, 신규한 서열을 갖는 유전자에서 녹아웃(knockout) 돌연변이를 갖는 트랜스제닉 마우스는 그들의 기능을 쉽게 입증할 수 있다. 현재에 이 과학기술은 마우스 ES 세포에서 잘 발현하는 마우스 유전자 10%에 대하여 잘 실행한다. 흥미로운 구성체로의 UCOEs의 혼합은 마우스에서 발현된 모든 유전자를 동정화하도록 확장되는 것이 가능하게 할 것이다.
본 발명의 대체 가능한 구현예에서, 하기를 포함하는 발명에 따른 폴리펩티드의 생산 방법을 제공한다:
ⅰ) 본 발명에 따른 핵산 분자로 형질 전환된/트랜스펙션된 세포의 제공;
ⅱ) 상기 폴리펩티드의 제조에 공헌하는 조건에서 세포의 성장; 및
ⅲ) 상기 세포로는 상기 폴리펩티드의 정제, 또는 그것의 성장 환경.
본 발명의 바람직한 구현예에서 상기 핵산 분자는 본 발명에 따른 벡터이다.
본 발명의 바람직한 방법에서, 상기 벡터는 상기 폴리펩티드의 정제를 촉진하는 분비 신호를 코드화하여, 상기 폴리펩티드를 제공한다.
대체 가능하게는, 다른 바람직한 구현예는 친화도 태그 또는 항원결정 기(epitope) 또는 효소의 분열 부위와 같은 발현된 재조합 단백질의 정제화를 촉진하는 추가의 순화를 포함할 것이다.