KR100969847B1

KR100969847B1 - 5-히드록시카르밤이미도일-2-히드록시벤젠술폰아미드유도체의 신규한 결정

Info

Publication number: KR100969847B1
Application number: KR1020047013983A
Authority: KR
Inventors: 하루노부 무카이야마; 유이치로 가이; 히데키 다케우치; 겐지 요코야마; 요시히로 데라오; 사토시 아카하네
Original assignee: 깃세이 야쿠힌 고교 가부시키가이샤
Priority date: 2002-03-15
Filing date: 2003-03-04
Publication date: 2010-07-13
Also published as: AU2003211537B2; US7256215B2; BR0308426A; WO2003078389A1; KR20040091696A; NO20044364L; CN1642908A; NO329104B1; JPWO2003078389A1; MXPA04009007A; AU2003211537A1; CA2479062A1; EP1486485A4; CN1267416C; AU2003211537A2; JP4373223B2; US20050143457A1; EP1486485A1

Abstract

본 발명은, 우수한 활성화 혈액응고 제 X 인자 저해활성을 나타내고, 혈전·색전성 질환의 예방 또는 치료제로서 유용한 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 결정, 그것을 함유하는 의약조성물 및 그것들의 용도를 제공한다.

혈액응고, X 인자, 저해활성, 혈전, 색전성 질환

Description

5-히드록시카르밤이미도일-2-히드록시벤젠술폰아미드 유도체의 신규한 결정{NOVEL CRYSTALS OF 5-HYDROXYCARBAMIMIDOYL-2-HYDROXYBENZENESULFONAMIDE DERIVATIVE}

본 발명은, [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 신규한 결정 및 그 용도에 관한 것이다.

하기 화학식 I

로 나타내어지는 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염은 당해 출원인이 발견한 문헌 미기재의 신규한 화합물이다. 당해 화합물은, 우수한 활성화 혈액응고 제 X 인자 저해 활성을 나타내고, 혈전·색전성 질환의 예방 또는 치료제로서 유용한 화합물이다. 지금까지 당해 화합물의 결정다형에 대해서는 알려져 있지 않다.

일본 특원 2000-305569에 기재된 실시예에 의해 얻어지는 결정(이하, A형 결정이라 칭함)은 보존 안정성이 나빠 장기보존중에 유효성분의 함량이 저하되는 문제점을 갖고 있었다. 또한 이 A형 결정은, 여과속도가 작기 때문에 대량으로 생산을 행하는 점에서 취급하기 어려워 공업적 생산에 부적합했다. 그래서 본 발명자들은 안정성이 양호하고 공업적 생산에 적합한 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 결정에 대해서 예의 연구를 거듭한 바, 당해 화합물에는 A형 결정 이외에, B형 결정 및 1수화물로서 얻어지는 결정의 2종류의 결정다형이 존재하는 것을 발견했다. 이중 1수화물의 형태로 얻어진 결정은 수용해도가 나쁘기 때문에 제제화가 곤란했지만, 예상밖으로 B형 결정이 높은 수용해성을 보여 경구 흡수성이 양호하고 보존 안정성이 우수하다는 것, 게다가 여과속도가 커서 공업적 생산에 적합한 결정인 것을 발견하고, 이것들의 지견에 기초하여 본 발명을 완성했다.

즉 본 발명은,

(1) 분말 X선 회절에 의한 회절 패턴이 회절각(2θ±0.1) 5.4, 8.6, 9.1, 12.1, 16.7, 17.3 및 21.0도에 특징적인 피크를 갖는, [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 결정(이하, B형 결정이라 칭함);

(2) 상기 (1)에 기재된 결정을 유효성분으로서 함유하는 의약조성물;

(3) 혈전, 색전성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 상기 (2)에 기재된 의약조성물;

(4) 혈전, 색전성 질환의 예방 또는 치료제를 제조하기 위한 상기 (1)에 기재된 결정의 사용; 및

(5) 상기 (1)에 기재된 결정의 치료적 유효량을 투여하는 것을 특징으로 하는 혈전, 색전성 질환의 치료 방법에 관한 것이다.

도 1은, 실시예 1에서 얻어진 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 B형 결정의 분말 X선 회절도이다. 세로축은 X선의 강도(cps)를 나타내고, 가로축은 회절각(2θ)을 나타낸다.

도 2는, 참고예 2에서 얻어진 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염 1수화물의 결정의 분말 X선회절도이다. 세로축은 X선의 강도(cps)를 나타내고, 가로축은 회절각(2θ)을 나타낸다.

도 3은, 참고예 1에서 얻어진 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 A형 결정의 분말 X선 회절도이다. 세로축은 X선의 강도(cps)을 나타내고, 가로축은 회절각(2θ)을 나타낸다.

발명을 실시하기 위한 최량의 형태

본 발명의 B형 결정은 이하와 같이 제조할 수 있다. 즉, 임의의 결정형태의 상기 화학식 I로 나타내어지는 화합물을, 당해 화합물 1 중량부에 대해 약 4 ∼ 약 10 중량부, 바람직하게는 약 4 ∼ 약 7 중량부의 n-부탄올에 가열 용해하고, 계속하여 필요에 따라 약 20℃ ∼ 약 50℃의 온도에서 당해 용액에 당해 화합물에 대해 용해력이 낮은 제 2 용매를 가하고, 약 0℃ ∼ 약 30℃의 온도에서 약 3시간∼ 약 24시간 정치하든지 또는 교반함으로써 본 발명의 B형 결정을 얻을 수 있다.

제 2 용매로서는, 예를 들면 아세트산에틸, 아세톤, 메틸에틸케톤, 디에틸 에테르, tert-부틸메틸에테르, 1,2-디메톡시에탄, 테트라히드로푸란, 톨루엔, 크실렌, 클로로 벤젠, 아세토니트릴 등이 사용되고, 필요에 따라서 이들 용매를 2종 이상 조합하여 사용해도 된다. 제 2 용매의 양은 사용되는 용매의 종류에 따라 다르지만, 통상, n-부탄올 1 중량부에 대해 약 0.5 ∼ 약 2 중량부가 사용된다.

이렇게 하여 얻어진 결정은 도 1의 분말 X선 회절도에 나타나 있는 바와 같이 회절각(2θ±0.1) 5.4, 8.6, 9.1, 12.1, 16.7, 17.3 및 21.0도에 출현하는 특징적인 피크에 의해 다른 결정과 식별된다.

본 발명의 B형 결정은 일반적인 보존 조건(예를 들면, 25℃/60% 상대습도 등)에서는 결정형이 변화되지 않고 장기 보존할 수 있고, 상법에 의해 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 주사제 등으로 제제화 할 수 있다.

본 발명의 결정을 유효성분으로서 함유하는 의약조성물을 실제의 치료에 사용하는 경우 용법에 따라 여러 제형의 것이 사용된다. 이러한 제형으로서는, 예를 들면 산제, 과립제, 세립제, 드라이시럽제, 정제, 캡슐제, 주사제, 액제, 연고제, 좌제, 첩부제 등을 들 수 있고, 경구 또는 비경구적으로 투여된다.

이들 의약조성물은 그 제형에 따라 제제학적으로 공지의 수법에 의해 적절한 부형제, 붕괴제, 결합제, 활택제, 희석제, 완충제, 등장화제, 방부제, 습윤제, 유화제, 분산제, 안정화제, 용해보조제 등의 의약품 첨가물과 적당하게 혼합 또는 희석·용해함으로써 조제할 수 있다.

본 발명의 의약조성물을 실제의 치료에 사용할 경우, 그 유효성분인 본 발명의 결정의 투여량은 환자의 연령, 성별, 체중, 질환 및 치료의 정도 등에 따라 적당하게 결정되지만, 경구투여의 경우 성인 1일당 약 1mg ∼ 약 5000mg의 범위로, 비경구투여의 경우에는 성인 1일당 약 0.01mg ∼ 약 500mg의 범위에서 1회 또는 수회로 나누어서 적당하게 투여할 수 있다.

본 발명의 내용을 이하의 참고예, 실시예 및 시험예에서 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 그 내용에 한정되는 것은 아니다.

또한, 각 결정의 분말 X선 회절 데이터는 주식회사 리가쿠의 X선 회절 장치 RINT2100을 사용하여 측정했다(측정 조건; Cu선, 관전압 40kV, 관전류 40mA). 각종 결정의 융점은 주식회사 리가쿠의 시차열중량 동시 측정 장치(TG/DTA) Thermo plus TG8120을 사용하여 온도상승 속도 10℃/분으로 측정하고 외삽개시점으로 나타냈다.

참고예 1

[4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]- 2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 A형 결정

공정 1

7-히드록시크로만-2-온

수소분위기하, 7-히드록시크로멘-2-온(100g), 10% 바나듐-탄소(10g), 테트라히드로푸란(50OmL) 및 에탄올(800mL)의 혼합물을 65℃에서 15시간 교반했다. 반응 혼합물을 빙냉하고, 10% 바나듐-탄소(10g)의 에탄올(200mL) 현탁액을 가했다. 그 혼합물을 수소분위기하에 65℃에서 15시간 교반했다. 반응 혼합물을 규조토로 여과하고, 여과액을 감압하에 농축하여 무색의 7-히드록시크로만-2-온(106.5g)을 얻었다.

공정 2

7-벤질옥시크로만-2-온

실온 교반하에, 7-히드록시크로만-2-온(202.4g)과 탄산칼륨(341.0g)의 N,N-디메틸 포름아미드 현탁액에 염화벤질(153.2mL)을 더하고, 혼합물을 실온에서 15시간 교반했다. 감압하에서 반응 혼합물을 농축하여 용매를 제거하고, 잔사를 아세트산에틸-물의 혼합 용액에 가했다. 유기층을 분리하고, 물로 세정하고, 무수황산나트륨으로 건조, 여과했다. 여과액을 감압하에 농축하고, 잔사를 디이소프로필에테르-헥산중에서 문질러 부수고, 엷은 갈색 고체의 7-벤질옥시크로만-2-온(266.1g) 을 여과하여 얻었다.

공정 3

3-(4-벤질옥시-2-히드록시페닐)프로피온 아미드

실온하에, 7-벤질옥시-크로만-2-온(33.26g)의 테트라히드로푸란(264mL) 용액에 28% 암모니아수(82mL)를 가했다. 실온하에 20분간 교반한 후, 빙욕중에서 반응 혼합물에 1mol/L 염산(654mL)을 가했다. 이렇게 생긴 현탁액을 물(약 1L)로 희석하고, 석출물을 여과하여 무색분말의 3-(4-벤질옥시-2-히드록시페닐)프로피온 아미드(34.8g)를 얻었다.

공정 4

3-(4-벤질옥시-2-메톡시메톡시페닐) 프로피온 아미드

빙냉 교반하에, 60% 유성수소화 나트륨(5.64g)의 N,N-디메틸포름아미드 현탁액(628mL)에 3-(4-벤질옥시-2-히드록시페닐)프로피온 아미드(34.8g)를 가하고 50℃에서 40분간 교반했다. 빙냉하에 반응 혼합물에 클로로 메틸=메틸=에테르(12.39g)를 가하고 실온하에 15시간 교반했다. 감압하에 반응 혼합물을 농축하여 용매를 제거하고, 잔사를 아세트산에틸(500mL)-톨루엔(100mL)-물(200mL)의 혼합물에 부었 다. 유기층을 분리하고, 물로 세정하고, 무수황산 마그네슘으로 건조, 여과했다. 여과액을 감압하에 농축하여 무색의 고체를 얻었다. 그 고체를 아세트산에틸-디이소프로필에테르중에서 문질러 부수고, 무색고체인 3-(4-벤질옥시-2-메톡시메톡시페닐)프로피온 아미드(35.3g)를 여과하여 얻었다.

공정 5

2-(4-벤질옥시-2-메톡시메톡시페닐)에틸 아민

3-(4-벤질옥시-2-메톡시메톡시페닐)프로피온 아미드(28.42g)와 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센(40.4mL)의 메탄올(895mL) 용액에 65℃에서 N-브로모 숙신산 이미드(16.04g)를 가했다. 65℃에서 15분간 교반한 후, N-브로모 숙신산 이미드(16.04g)를 반응 혼합물에 65℃에서 더 가했다. 얻어진 혼합물을 65℃에서 15분간 교반한 후, 감압하에 농축하여 용매를 제거했다. 잔사에 물과 아세트산에틸을 가하고 유기층을 분리했다. 유기층을 물로 세정하고, 무수황산 마그네슘으로 건조, 여과했다. 여과액을 감압하에 농축하고 오일상 물질을 얻었다. 이 잔사의 에탄올(242mL) 용액에 8mol/L 수산화칼륨(67.6mL)을 가하고, 이 혼합물을 15시간 가열 환류했다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하고 용매를 제거했다. 잔사에 아세트산에틸(500mL)-톨루엔(50mL)-물(30OmL)을 가하고 유기층을 분리했다. 유기층을 물로 세정하고, 무수황산 마그네슘으로 건조, 여과했다. 여과액을 감압하에 농축하 고, 잔사를 중압 액체 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 헥산-아세트산에틸)로 정제하여 무색오일상 2-(4-벤질옥시-2-메톡시메톡시페닐)에틸 아민(80.0g)을 얻었다.

공정 6

4-(2-아미노 에틸)-3-메톡시메톡시페놀

수소분위기하에, 2-(4-벤질옥시-2-메톡시메톡시페닐)에틸 아민(18.00g), 10% 팔라듐-탄소(데구사사제: E101 NE/W, 3.6g) 및 에탄올(230mL)의 혼합물을 실온하에 1시간 교반했다. 촉매를 규조토로 여과하고, 여과액을 감압하에 농축하여 무색고체인 4-(2-아미노 에틸)-3-메톡시메톡시페놀(l2.65g)을 얻었다.

공정 7

5-카르바모일-2-메톡시벤젠술포닐 클로라이드

빙냉 교반하에, 클로로 술폰산(1733g)에 4-메톡시벤즈아미드(150g)를 15분에 걸쳐서 조금씩 가했다. 그 혼합물을 실온에서 14시간 교반한 후, 50℃에서 1.5시간 더 교반했다. 반응 혼합물을 얼음(7kg)에 적하하고 석출물을 여과하여 얻은 후, 물, 헥산으로 세정하여 5-카르바모일-2-메톡시벤젠술포닐 클로라이드(230g)를 얻 었다.

공정 8

5-시아노-2-메톡시벤젠술포닐 클로라이드

5-카르바모일-2-메톡시벤젠술포닐 클로라이드(150g)를 아세트산에틸(1800mL)에 현탁하고, 빙냉 교반하에 염화티오닐(219mL)을 적하한 후, N,N-디메틸 포름아미드(2.3mL)를 가하고 55℃에서 3시간 교반했다. 반응 혼합물을 감압하에 농축한 후 잔사에 아세트산에틸과 물을 가했다. 분리한 유기층을 물, 포화 탄산수소나트륨 수용액 및 포화 식염수로 세정하고, 무수황산 마그네슘으로 건조한 후 감압하에 용매를 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 아세트산에틸-헥산에 의해 재결정하고, 5-시아노-2-메톡시벤젠술포닐 클로라이드(86.8g)를 얻었다.

공정 9

5-시아노-N-[2-(4-히드록시-2-메톡시메톡시페닐)에틸]-2-메톡시벤젠술폰아미드

4-(2-아미노에틸)-3-메톡시메톡시페놀(12.3g) 및 탄산수소나트륨(7.9g)을 테트라히드로푸란(133mL)-물(14.4mL)에 현탁시키고, 5-시아노-2-메톡시벤젠술포닐 클로라이드(14.50g)의 테트라히드로푸란(180mL) 용액을 내부 온도 10∼20℃로 유지하 면서 10분 간격으로 18mL씩 가한 후, 실온하에 이 혼합물을 8시간 교반했다. 반응 혼합물을 아미노 프로필화 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 아세트산에틸)로 정제한 후 아세트산에틸-디이소프로필에테르로부터 재결정하여, 무색결정의 5-시아노-N-[2-(4-히드록시-2-메톡시메톡시페닐)에틸]-2-메톡시벤젠술폰아미드(21.87g)를 얻었다.

공정 10

트리플루오로 메탄술폰산 = 4-[2-(5-시아노-2-메톡시벤젠술포닐아미노)에틸]-3-메톡시메톡시페닐

5-시아노-N-[2-(4-히드록시-2-메톡시메톡시페닐)에틸]-2-메톡시벤젠술폰아미드(21.87g)와 N,N-디메틸아미노피리딘(10.21g)의 염화 메틸렌(230mL) 용액에 빙냉 교반하에 트리플루오로술폰산 무수물(9.38mL)을 가하고 1시간 교반했다. 반응 혼합물에 파쇄한 얼음(약 50g)을 가하고, 감압하에 농축하고, 염화 메틸렌을 제거했다. 잔사를 아세트산에틸(500mL)-물(200mL)에 붓고 유기층을 분리했다. 유기층을 물로 세정하고, 무수황산 마그네슘으로 건조, 여과했다. 여과액을 감압하에 농축하고 잔사를 아세트산에틸 디이소프로필에테르로부터 재결정하여, 무색분말의 트리플루오로 메탄술폰산 = 4-[2-(5-시아노-2-메톡시 벤젠술포닐아미노)에틸]-3-메톡시 메톡시페닐(24.75g)을 얻었다.

공정 11

5-시아노-2-메톡시-N-[2-(3-메톡시메톡시-2'-메틸티오페닐-4-일)에틸]벤젠술폰아미드

트리플루오로 메탄술폰산 = 4-[2-(5-시아노-2-메톡시벤젠술포닐아미노)에틸]-3-메톡시메톡시페닐(24.75g), 2-(메틸티오)페닐 붕산(8.32g), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(2.73g), 테트라-n-부틸암모늄 브로마이드(728mg), 탄산나트륨(10.00g), 물(48mL) 그리고 톨루엔(285mL)의 혼합물을 아르곤 분위기하에 85℃에서 15시간 가열했다. 침전물을 여과하고 아세트산에틸 및 물로 순차적으로 세정하여, 황색분말의 5-시아노-2-메톡시-N-[2-(3-메톡시메톡시-2'-메틸티오비페닐-4-일)에틸]벤젠술폰아미드(19.74g)를 얻었다.

공정 12

5-시아노-N-[2-(2'-메탄술포닐-3-메톡시메톡시비페닐-4-일)에틸]-2-메톡시 벤젠술폰아미드

수냉 교반하에, 5-시아노-2-메톡시-N-[2-(3-메톡시메톡시-2'-메틸티오비페닐-4-일)에틸]벤젠술폰아미드(26.44g) 및 탄산수소나트륨(35.6g)의 아세톤(530mL)-물(106mL) 현탁액에 옥손(등록상표, 81.5g)을 15분 간격으로 2회로 나누어서 가하고, 동일한 조건하에서 3시간 교반했다. 빙냉 교반하에, 반응 혼합물에 디에틸 에테르(l00mL), 물(100mL) 및 포화 아황산 나트륨 수용액을 가했다. 얻어진 혼합물을 감압하에 농축하고 아세톤을 증류 제거했다. 빙냉 교반하에, 이 농축물에 물(300mL) 및 디에틸에테르헥산을 가하고 30분간 교반했다. 석출물을 여과하여 얻고, 물 및 디에틸헥산으로 세정하여, 백색분말의 5-시아노-N-[2-(2'-메탄술포닐-3-메톡시메톡시비페닐-4-일)에틸]-2-메톡시벤젠술폰아미드(27.1g)을 얻었다.

공정 13

5-시아노-N-[2-(3-히드록시-2'-메탄술포닐비페닐-4-일)에틸]-2-메톡시벤젠술폰아미드

5-시아노-N-[2-(2'-메탄술포닐-3-메톡시메톡시비페닐-4-일)에틸]-2-메톡시 벤젠술폰아미드(14.89g)의 이소프로필알콜(30mL)-테트라히드로푸란(90mL) 현탁액에 농염산(11.7mL)을 가하고 50℃에서 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 물(50mL)로 희 석하고 아세트산에틸(150mL)로 추출했다. 유기층을 포화 탄산수소 나트륨 수용액 및 포화 식염수로 세정하고, 무수황산 마그네슘으로 건조, 여과했다. 여과액을 감압하에 농축하고, 잔사를 아미노 프로필화 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 아세트산에틸-메탄올)로 정제하여, 무색 아몰포스의 5-시아노-N-[2-(3-히드록시-2'-메탄술포닐비페닐-4-일)에틸]-2-메톡시벤젠술폰아미드(10.22g)을 얻었다.

공정 14

[4-[2-(5-시아노-2-메톡시벤젠술포닐아미노)에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산에틸

5-시아노-N-[2-(3-히드록시-2'-메탄술포닐비페닐-4-일)에틸]-2-메톡시벤젠술폰아미드(5.72g)의 N,N-디메틸 포름아미드(57mL) 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민(2.46mL) 및 브로모 아세트산에틸(1.37mL)를 가하고 50℃에서 15시간 교반했다. 반응 혼합물을 물(100mL)에 붓고, 아세트산에틸(150mL)-톨루엔(20mL)으로 추출했다. 유기층을 물 및 포화 식염수로 세정하고, 무수황산 마그네슘으로 건조, 여과했다. 여과액을 감압하에 농축하고, 잔사를 아미노 프로필화 실리카겔 크로마토그래피(용출용매: 아세트산에틸-헥산)으로 정제하고, 아몰포스의 [4-[2-(5-시아노-2-메톡시벤젠술포닐아미노)에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산에틸(2.96g) 을 얻었다.

공정 15

[4-[2-(5-시아노-2-히드록시벤젠술포닐아미노)에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산에틸

[4-[2-(5-시아노-2-메톡시벤젠술포닐아미노)에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산에틸(4.62g)의 N,N-디메틸포름아미드(40mL) 용액에 염화리튬(1.03g)을 가하고 140℃에서 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 되돌린 후, 아세트산에틸(60mL)-톨루엔(6mL)-1mol/L 염산(32mL) 혼합물에 부었다. 유기층을 분리하고, 유기층을 1mol/L 염산 및 포화 식염수로 세정하고, 무수황산 마그네슘으로 건조, 여과했다. 여과액을 감압하에 농축하고, 잔류물을 아미노 프로필화 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 아세트산-아세트산에틸)로 정제하여, 무색 아몰포스의 [4-[2-(5-시아노-2-히드록시벤젠술포닐아미노)에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3- 일옥시]아세트산에틸(3.67g)을 얻었다.

공정 16

[4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산에틸

[4-[2-(5-시아노-2-히드록시벤젠술포닐아미노)에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산에틸(2.01g)의 포화 염화수소-에탄올(1.0mL) 현탁액을 실온하에 3시간 교반했다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하고, 잔사를 에탄올(20.0mL)에 녹였다. 이 용액에 아세트산 히드록시암모늄(3.34g)을 가하고 실온하에 13시간 교반했다. 반응 혼합물을 아세트산에틸-물에 붓고 유기층을 분리했다. 물층을 아세트산에틸로 추출했다. 유기층을 합치고, 포화 식염수로 세정하고, 무수황산 마그네슘으로 건조, 여과했다. 여과액을 감압하에 농축하고, 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 아세트산에틸)로 정제하여, 아몰포스의 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥 시]아세트산에틸(1.90g)을 얻었다.

공정 17

[4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)-벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 A형 결정

60℃에서 3시간 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)-벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산에틸(1.499g)의 34% 염화수소-n-부탄올(20mL) 용액을 교반했다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하고, 얻어진 조결정을 n-부탄올디이소프로필 에테르로부터 재결정하여, 백색결정의 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)-벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염(1.472g)을 얻었다. 이 결정의 분말 X선 회절도는 도 3에 도시하는 바 대로이며, A형 결정인 것이 확인되었다.

융점; 155℃

참고예 2

[4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염 1수화물의 결정

참고예 1에서 얻어진 4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)-벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 조결정(827mg) 및 1 노르말 염산(12.6mL)의 혼합물을 40℃로 가열하고 밤새 교반했다. 얻어진 결정을 여과한 후 감압하에 40℃에서 하룻밤 건조하여 823mg의 결정을 얻었다. 얻어진 결정은 칼 피셔 수분측정의 결과, 1수화물인 것이 판명되었다. 이 결정의 분말 X선 회절도는 도 2에 나타내는 바 대로이다.

융점; 133℃

실시예 1

[4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 B형 결정

참고예 1에서 얻어진 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)-벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 조결정(476g) 및 n-부탄올(2.1Kg)의 혼합물을 86℃로 가열하고 완전하게 용해할 때까지 교반했다. 불용물을 여과한 후 45℃까지 냉각하고, 동온도로 아세트산에틸(2.5Kg)을 적하했다. B형 결정의 종결정을 투입한 후, 실온하에서 하룻밤 교반하여 결정을 석출시켰다. 또한 빙욕하에서 5.5시간 교반한 후 석출한 결정을 여과했다. 이 결정을 아세트산에틸-n-부탄올(150g-300g)로 세정하고, 또한 아세트산에틸(650g)로 세정했다. 감압하에 40℃에서 하룻밤 건조하여 360g의 결정을 얻었다. 이 결정의 분말 X선 회절도는 도 1에 나타내는 바 대로이며, B형 결정인 것이 확인되었다.

융점; 168℃

실시예 2

참고예 1에서 얻어진 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)-벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 조결정(200mg) 및 n-부탄올(1.2mL)의 혼합물을 100℃로 가열하고 완전하게 용해할 때까지 교반했다. 혼합액을 실온까지 냉각하고 메틸에틸케톤(1.2mL)을 가했다. 실온하에 하룻밤 교반하여 결정을 석출시켰다. 결정을 여과하여 얻은 다음, 얻어진 결정을 아세트산에틸(0.8mL)로 세정했다. 감압하에 40℃에서 하룻밤 건조하여 135mg의 결정을 얻었다. 얻어진 결정은 분말 X선 회절 측정의 결과 B형 결정인 것이 확인되었다.

융점; 168℃

실시예 3

참고예 1에서 얻어진 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)-벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 조결 정(100mg) 및 n-부탄올(1.0mL)의 혼합물을 90℃로 가열하고 완전하게 용해할 때까지 교반했다. 이 혼합물을 실온까지 냉각하고 1,2-디메톡시에탄(0.8mL)을 적하했다. 실온하에 하룻밤 교반하여 결정을 석출시켰다. 얻어진 결정을 여과하여 취한 후 아세트산 에틸(0.8mL)로 세정했다. 감압하에 40℃에서 하룻밤 건조하고 52mg의 결정을 얻었다. 얻어진 결정은 분말 X선 회절 측정의 결과 B형 결정인 것이 확인되었다.

융점; 168℃

시험예 1

보존 안정성 시험

피험시료를 40℃/90% 상대습도에 2개월간 저장하고, 이하의 조건의 HPLC에 의해 잔존율을 구했다.

HPLC 조건:

검출 파장; 225nm

칼럼; CAPCELL PAK C18, MG 5㎛, 3.0mm I.D.x250mm

칼럼 온도; 35℃

이동상; 0.02mol/L 인산완충액(pH6.0): 아세토니트릴 혼액

0→20분 42:58

20→40분 42:58→70:30

40→45분 70:30

유속; 0.5mL/분

결과를 표 1에 나타냈다.

피험시료	잔존률
참고예 1	96.8
실시예 1	99.0

시험예 2

포화 수용해도

피험시료 약 40mg을 용기에 취하고, 이것에 물 약 15mL를 가하여 현탁했다. 교반하에 37℃로 가온하고, 경시적으로 시료 약 1mL를 채취했다. 이 액을 0.45㎛의 필터로 여과하고, 여과액 500μL를 정확하게 취하고, 물/아세토니트릴 혼액(1/1) 500μL를 가하여, 시료용액으로 하고, 시료용액 5μL에 대해 이하의 분석 조건에 의해 고속 액체 크로마토그래프법에 의해 정량했다. 각 채취 포인트의 용해도중, 최고농도를 포화 수용해도로 했다.

HPLC 조건:

검출 파장; 225nm

칼럼; Inertsil ODS-3, 5㎛, 4.6mm I.D.x250mm

칼럼 온도; 30℃

이동상; 0.02mol/L 인산 완충액(pH3.0): 아세토니트릴 혼액 0→30분 42:58

유속; 1.0mL/분

측정 시간; 30분

결과를 표 2에 나타냈다.

피험시료	포화 수용해도(μg/mL)
참고예 2	270
실시예 1	1600

시험예 3

활성화 혈액응고 제 X 인자 저해 활성 및 프로트롬빈 시간(PT)의 측정

하룻밤 절식한 6∼9주령 위스터계 수컷 래트(SLC)에, 피험시료를 0.5% 메틸셀룰로오스 용액에 6.0mg/mL가 되도록 현탁하고, 5.0mL/kg를 경구 투여했다. 투여전 및 투여 30분후, 경정맥으로부터 1/10용량 3.13% 시트르산 나트륨 첨가 혈액을 채취하고, 원심에 의해 혈장 샘플을 얻었다. 이 혈장 샘플을 사용하여, 피험시료의 활성화 혈액응고 제 X 인자 및 프로트롬빈 시간(PT)에 대한 영향을 조사했다.

1) 활성화 혈액응고 제 X 인자 저해 활성

96웰 마이크로 플레이트에 혈장 샘플 2.5μL, pH8.4의 100mM 트리스·200mM 염화나트륨 완충액 200μL 및 인간 활성화 혈액응고 제 X 인자(카르바이오케미사제)를 젤라틴-글리신 완충 용액으로 0.06U/mL로 조제한 용액 10μL를 나누어 붓고, 1mM S-2222(다이이치 가가쿠야쿠힌 가부시키가이샤제) 수용액 50μL를 가하고, 실온에서 10분간 인큐베이팅 했다. 60% 아세트산 수용액 50μL를 가하고 반응을 정지하고, 흡광도(405nm)를 마이크로 플레이트 리더(스펙트라막스 250, 몰레큘라 디바이스사제)를 사용하여 측정했다. 혈장 샘플 대신에 컨트롤 혈장 2.5μL를 가한 것을 콘트롤로 하고, 인간 활성화 혈액응고 제 X 인자 용액 대신에 젤라틴-글리신 완충 용액 10μL를 가한 것을 블랭크로 했다. 콘트롤의 흡광도를 100%로 하여 혈장 샘플의 저해%를 산출하고, 활성화 혈액응고 제 X 인자 저해 활성의 지표로 했다.

결과를 표 3에 나타낸다.

2) 프로트롬빈 시간(PT)의 측정

혈장 50μL를 37℃로 가온한 전용큐벳에 가하고, 1분 후에 37℃로 보온한 PT시약(베링거·만하임 가부시키가이샤제) 100μL를 가하고, 자동 혈액응고 시간 측정장치(ST4, 베링거·만하임 가부시키가이샤 제품)를 사용하여 응고 시간을 측정하여 PT로 했다. 피험시료 투여전의 PT에 대한 투여후의 PT의 비를 구하고, 항응고 활성의 지표로 했다. 결과를 표 3에 나타냈다.

피험시료	활성화 혈액응고 제 X 인자 저해활성(%)	PT비
실시예 1	58.2	1.50

본 발명의 [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 B형 결정은, 여과속도가 충분히 크므로 취급이 용이하고, 간편한 정제 조작에 의해 용이하게 고순도로 하는 것이 가능하여, 공업적 생산에 적합한 결정이다. 또한 당해 결정은, 수용해도가 높아 경구흡수성이 양호하고, 우수한 보존 안정성을 가지므로 제제화에 적합한 결정이다. 그 때문에, 당해 결정은, 의약품 원체로서 극히 유용하다.

Claims

분말 X선 회절에 의한 회절 패턴이, 회절각(2θ±0.1) 5.4, 8.6, 9.1, 12.1, 16.7, 17.3 및 21.0도에서 특징적인 피크를 갖는, [4-[2-[2-히드록시-5-(N-히드록시카르밤이미도일)벤젠술포닐아미노]에틸]-2'-메탄술포닐비페닐-3-일옥시]아세트산 n-부틸 염산염의 결정.
제 1 항에 기재된 결정을 유효성분으로서 함유하는, 혈전, 색전성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 것을 특징으로 하는 의약조성물.
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