KR100959393B1 - Skin whitening cosmetics composition containing an effective ingredient extracted from Acanthopanax sessiliflorum Seeman and manufacturing method thereof - Google Patents

Skin whitening cosmetics composition containing an effective ingredient extracted from Acanthopanax sessiliflorum Seeman and manufacturing method thereof Download PDF

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Abstract

본 발명은 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 오가피로부터 추출된 클로로겐산 분획을 포함하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 부작용이 없으면서도 피부의 멜라닌 색소 생성을 억제하고 색소 침착을 저해함으로써 우수한 미백 효과를 제공한다. 본 발명은 또한 오가피 추출물의 피부 미백 효과를 높이는 제조방법을 제공한다.The present invention relates to a cosmetic composition for skin whitening, characterized in that it comprises a chlorogenic acid fraction extracted from agar. The cosmetic composition according to the present invention provides excellent whitening effect by inhibiting melanin pigment production and inhibiting pigmentation of the skin without side effects. The present invention also provides a method for increasing the skin whitening effect of the extract of Ogapi.

오가피, 클로로겐산, 피부 미백 Ogapi, Chloroic Acid, Skin Whitening

Description

오가피로부터 추출된 유효성분을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 및 그 제조방법{Skin whitening cosmetics composition containing an effective ingredient extracted from Acanthopanax sessiliflorum Seeman and manufacturing method thereof}Skin whitening cosmetics composition containing an effective ingredient extracted from Acanthopanax sessiliflorum Seeman and manufacturing method

본 발명은 식물 추출물 또는 식물로부터 추출된 유효성분을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 및 그러한 화장료 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for skin whitening containing a plant extract or an active ingredient extracted from a plant and a method for producing such a cosmetic composition.

오가피(五加皮, Acanthopanacis Cortex, Acanthopanax sessiliflorum Seeman)는 두릅나무과(Araliaceae)에 속하는 오가피속(Acanthopanax) 식물로 낙엽 활엽 관목이다. 오가피는 대한약전에 수재된 생약으로 '오가피나무 Acanthopanax sessiliflorum Seeman 또는 동속식물의 뿌리, 줄기 및 가지의 껍질이다'라고 정의되어 있다.Ogapi, Acanthopanacis Cortex, Acanthopanax sessiliflorum Seeman is a deciduous broad-leaved shrub belonging to the genus Acanthopanax belonging to the family Araliaceae. Ogapi is a herbal medicine that was collected from the Korean Pharmacopoeia and defined as 'the bark of the roots, stems and branches of Acanthopanax sessiliflorum Seeman or related plants'.

이러한 오가피는 약용으로서 가치가 높이 평가되어 여러 나라에서 오가피의 성분분석에 대한 연구가 많이 진행되었다. 오가피에는 아칸토산(acanthoic acid)과 아칸토사이드(acanthoside) A-G, 시그마스테롤(sigmasterol), 클로로겐산(chlorogenic acid), 카페익산(caffeic acid), 세사민(sesamin), 치사노사이 드(chiisanoside) 등의 유용성분이 함유되어 생체기관의 전반적인 기능 증대, 중추신경 흥분 작용, 근육운동, 항암작용, 항당뇨작용, 수면연장, 해독작용, 환경변화에 대한 적응 등의 다양한 생리적 작용이 보고되어 있다. 이러한 효능 때문에 식품, 의약품, 화장품 등의 첨가제로 사용되고 있고, 오가피의 성분 분석과 효능에 관한 연구는 계속해서 진행되어 오고 있다.These scabies are highly valued as medicinal and many studies have been conducted on the component analysis of scabies. The usefulness of acanthoic acid and acanthoside AG, sigmasterol, chlorogenic acid, caffeic acid, sesamin, chisanoside, etc. It has been reported that various physiological effects such as increased body function, central nervous system excitability, muscle exercise, anticancer action, antidiabetic action, sleep extension, detoxification action and adaptation to environmental changes are included. Because of this efficacy, it is used as an additive in food, medicine, cosmetics, etc., and research on the component analysis and efficacy of the organ has been ongoing.

지금까지 국내외적으로 오가피속(Acanthopanax)에 속하는 식물의 약리적, 생리적 작용 및 그 주된 생리활성 물질의 분리 및 정제에 관한 연구가 수행돼 왔다. 가시오가피(Acanthopanax Senticosus) 및 무취 마늘 혼합추출물이 피부노화 억제 활성을 보였으며(대한민국 공개특허 10-2000-0052725), 가시오가피 추출물(Acanthopanax Senticosus)의 여드름 및 뾰루지 치료효과(대한민국 공개특허 10-2000-0009820) 및 오가피 추출물(Acanthopanax sessiliflorum Seeman)의 피부 보호효과(대한민국 공개특허 10-1999-0053765)가 우수한 것으로 보고된 바 있다.Until now, researches have been conducted on the pharmacological and physiological effects of Acanthopanax plants and their separation and purification from the main bioactive substances. Acanthopanax Senticosus) and mixed odorless garlic extract showed inhibition of skin aging (Republic of Korea Patent Publication 10-2000-0052725), gasiohgapi extract (Acanthopanax Senticosus ) treatment effect of acne and rashes (Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2000-0009820) and Ogapi extract ( Acanthopanax) sessiliflorum Seeman) has been reported to be excellent skin protection effect (Korean Patent Publication No. 10-1999-0053765).

한편 멜라닌은 동식물계에 널리 존재하는 고분자의 천연색소로서 사람의 피부에서는 자외선 조사 등에 의한 피부손상에 대항하는 기작으로 생합성이 촉진된다. 멜라닌 색소는 피부를 보호하는 긍정적인 면이 있으나, 이의 과잉생성은 기미, 주근깨, 피부반점 등을 유발하며 멜라닌 전구물질의 독성으로 인한 세포의 사멸 및 피부암 생성이 촉진되기도 한다.On the other hand, melanin is a natural pigment of a polymer widely present in animal and plant systems, and in human skin, biosynthesis is promoted by a mechanism against skin damage caused by ultraviolet irradiation. Melanin pigments have a positive aspect of protecting the skin, but their overproduction causes blemishes, freckles and skin spots, and also promotes cell death and skin cancer production due to the toxicity of melanin precursors.

멜라닌의 생합성은 표피 기저층에 존재하는 멜라노싸이트(melanocyte)의 멜라노좀(melanosome)에서 타이로시네이즈(tyrosinase), TRP-1(tyrosinase related protein-1), DCT(dopachrome tautomerase) 등 특이적인 효소의 연속적 산화반응에 의해서 일어나는데, 그 중 멜라닌 합성의 주요 효소인 타이로시네이즈 활성 저해실험이 멜라닌 중합체 억제제 개발의 초기단계에서 채택되고 있다.The biosynthesis of melanin is characterized by specific enzymes such as tyrosinase, tyrosinase related protein-1 (TRP-1), and dopachrome tautomerase (DCT) in the melanosomes of melanocytes in the epidermal basal layer. It is caused by a continuous oxidation reaction, of which the tyrosinase activity inhibition test, a major enzyme of melanin synthesis, is being adopted in the early stage of the development of melanin inhibitor.

그러나 타이로시네이즈에 의한 산화반응 이외에, MSH(melanocyte stimulating hormone), 염증반응에 관여하는 각종 사이토카인류, 유전자 발현에 관여하는 인자 등 여러 가지 복잡한 요인들이 멜라닌 생성에 영향을 미친다는 것이 밝혀졌고, 또한 in vitro에서의 타이로시네이즈 활성 억제 물질이 멜라노마(melanoma) 세포주에서는 활성이 전혀 나타나지 않는 등의 문제로 멜라닌 생성을 종합적으로 억제하는 물질의 개발에 초점이 맞추어지고 있다.However, in addition to oxidative reactions caused by tyrosinase, various complex factors, including melanocyte stimulating hormone (MSH), various cytokines involved in inflammatory reactions, and gene expression factors, have been found to affect melanogenesis. In addition, it has been focused on the development of a substance that inhibits the production of melanin comprehensively due to the problem that tyrosinase activity inhibitor in vitro does not show any activity in melanoma cell line.

현재까지 자외선 흡수제나 산란제, 알부틴(arbutin), 코지산(kojic acid), 하이드로퀴논(hydroquinone) 등과 같은 타이로시네이즈 활성 저해제, 활성 산소종을 소거하는 아스코르브산(ascorbic acid) 및 유도체, 코엔자임 Q10 (coenzyme Q10) 등이 미백효과가 있다고 알려졌으나, 피부 안전성, 제형 안정성 등의 문제로 사용되지 않거나 제한된 양만이 사용되고 있다.To date, tyrosinase activity inhibitors such as ultraviolet absorbers, scattering agents, arbutin, kojic acid, hydroquinone, ascorbic acid and derivatives that eliminate reactive oxygen species, and coenzyme Although Q10 (coenzyme Q10) is known to have a whitening effect, it is not used due to problems such as skin safety and formulation stability or only a limited amount is used.

따라서 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 피부 부작용이 적으면서도 멜라닌 생성을 억제함으로써 우수한 피부 미백효과를 갖는 화장료 조성물 및 그 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.Therefore, the technical problem to be achieved by the present invention is to provide a cosmetic composition and a method for producing the composition having excellent skin whitening effect by inhibiting the production of melanin while having less skin side effects.

상기 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 오가피로부터 추출된 클로로겐산(chlorogenic acid)이 풍부한 추출물 분획을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명에 있어, 오가피는 '오가피나무 Acanthopanax sessiliflorum Seeman 또는 동속식물의 뿌리, 줄기 및 가지의 껍질'을 의미한다.In order to achieve the above technical problem, the present invention provides a cosmetic composition for skin whitening, characterized in that it contains an extract fraction rich in chlorogenic acid extracted from the organ. In the present invention, Ogapi is called 'Ogapi Acanthopanax sessiliflorum Seeman or bark of roots, stems and branches of the same plant.

본 발명은 또한 (S1) 오가피를 분쇄하는 단계; (S2) 오가피를 70 내지 85% 에탄올 수용액으로 상온 또는 냉침 추출하는 단계; (S3) 추출여액을 20 내지 50℃에서 감압농축하여 조추출물을 얻는 단계; (S4) 조추출물을 이온수지컬럼크로마토그래피에 충진시킨 후 순차적으로 에탄올의 함량을 높여가며 에탄올 수용액으로 용출하는 단계; 및 (S5) 10 내지 40% 에탄올 수용액 분획을 회수하여 클로로겐산의 함량을 조절하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 미백 효과가 향상된 오가피 추출물을 제조하는 방법을 제공한다.The present invention also comprises the steps of (S1) crushing Ogapi; (S2) a step of extracting room temperature or cold extraction with 70-85% ethanol aqueous solution; (S3) extracting the filtrate under reduced pressure at 20 to 50 ° C. to obtain a crude extract; (S4) filling the crude extract with ion resin column chromatography and sequentially eluting with an ethanol aqueous solution while increasing the content of ethanol; And (S5) recovering a 10 to 40% ethanol aqueous solution fraction to adjust the content of chlorogenic acid, thereby providing a method for producing an ogapi extract with improved whitening effect.

이하 본 발명에 따른 오가피 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물 및 그 조성물의 제조방법에 대해 보다 구체적으로 설명한다.Hereinafter, a cosmetic composition for skin whitening comprising the extract of Ogapi according to the present invention and a method for preparing the composition will be described in more detail.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 피부 미백 유효성분으로 오가피로부터 추출된 클로로겐산이 풍부한 분획을 포함한다.The cosmetic composition for skin whitening of the present invention comprises a chlorogenic acid-rich fraction extracted from agar skin as the skin whitening active ingredient.

본 발명은 오가피 추출물 중 하기 화학식 1로 표시되는 클로로겐산(chlorogenic acid)이 증가할수록 피부 미백 효과가 증가한다는 놀라운 사실과 이러한 클로로겐산의 함량은 특정 제조방법을 통하여 증대될 수 있다는 놀라운 사실에 기초한다.The present invention is based on the surprising fact that the skin whitening effect increases as the chlorogenic acid represented by the following formula (1) in the extract of Ogapi and the content of such chlorogenic acid can be increased through a specific manufacturing method.

Figure 112008006517315-pat00001
Figure 112008006517315-pat00001

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어 상기 클로로겐산의 함량은 화장료 조성물 총 중량 대비 0.001 내지 10 중량%인 것이 바람직하다. 상기 활성성분의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우에는 본래 목적하는 피부의 피부 미백효과를 충분하게 달성할 수 없어 바람직하지 못하며, 함량이 10 중량%를 초과하는 경우에는 화장료의 안정성에 문제를 발생시킬 수 있고, 이로 인하여 화장료의 외관이나 사용 시 충분한 화장효과를 발현시킬 수 없는 단점이 있다.In the cosmetic composition for skin whitening of the present invention, the content of the chlorogenic acid is preferably 0.001 to 10% by weight based on the total weight of the cosmetic composition. If the content of the active ingredient is less than 0.001% by weight can not achieve a sufficient skin whitening effect of the original desired skin is not preferable, if the content exceeds 10% by weight may cause problems in the stability of the cosmetic And, due to this there is a disadvantage that can not express a sufficient cosmetic effect when using the cosmetics or appearance.

본 발명에 따른 오가피 추출물은 오가피의 다양한 기관, 조직(예를 들어, 뿌리, 줄기, 열매, 꽃, 잎) 등을 이용하여 수득할 수 있으며, 바람직하게는 오가피의 줄기 및 뿌리로부터 얻은 추출물이다.Ogapi extract according to the present invention can be obtained using a variety of organs, tissues (eg, roots, stems, fruits, flowers, leaves) and the like of the agapi, preferably an extract obtained from the stems and roots of the agapi.

통상적인 오가피 추출물은 다양한 추출용매, 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), 상기 저급 알코올과 물과의 혼합 용매, 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름, 1,3-부틸렌글리콜, 부틸아세테이트 등을 추출용매로 이용하여 얻을 수 있으나, 피부 미백 효과가 뛰어난 추출물을 얻기 위해서는 70 내지 85% 알코올 수용액을 사용하여 10 내지 100℃, 바람직하게는 15 내지 40℃에서 약 2시간 내지 5일 동안 추출하는 것이 바람직하며, 75% 에탄올 수용액을 이용하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다.Typical extracts of Ogapi include various extracting solvents such as water, anhydrous or hydrous lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms (methanol, ethanol, propanol, butanol, etc.), mixed solvents of the lower alcohols with water, acetone, ethyl acetate , Chloroform, 1,3-butylene glycol, butyl acetate and the like can be obtained as an extraction solvent, but in order to obtain an excellent skin whitening effect, using an aqueous solution of 70 to 85% alcohol 10 to 100 ℃, preferably The extraction is preferably performed at 15 to 40 ° C. for about 2 hours to 5 days, and more preferably using 75% aqueous ethanol solution.

추출은 상온 추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 등의 추출방법으로 얻을 수 있으나, 피부 미백 효과가 뛰어난 오가피 추출물을 얻기 위해서는 상온 추출방법으로 수회 반복 추출한 후 추출액을 여과하고 40℃에서 감압 농축하여 오가피 조추출물을 얻는 절차가 바람직하다. 오가피 조추출물의 제조시 추출온도가 50℃를 초과하면 전체 추출물의 양은 증가하나, 클로로겐산의 함량은 늘어나지 않으며 조추출물의 색상이 어두워지므로 10 내지 50℃에서 제조하는 것이 바람직하다. Extraction can be obtained by extraction methods such as room temperature extraction, ultrasonic extraction, reflux cooling extraction, etc.However, in order to obtain the extract of Ogapi with excellent skin whitening effect, the extract is filtered several times with a room temperature extraction method, and the extract is filtered and concentrated under reduced pressure at 40 ° C. The procedure for obtaining the extract is preferred. When the extraction temperature exceeds 50 ° C. in the preparation of Ogapi crude extract, the amount of the total extract is increased, but the content of chlorogenic acid does not increase, and the color of the crude extract is darkened, so it is preferable to prepare at 10 to 50 ° C.

본 발명은 또한 (S1) 오가피를 분쇄하는 단계; (S2) 오가피를 70 내지 85% 에탄올 수용액으로 상온 또는 냉침 추출하는 단계; (S3) 추출여액을 20 내지 50℃에서 감압농축하여 조추출물을 얻는 단계; (S4) 조추출물을 이온수지컬럼크로마토그래피에 충진시킨 후 순차적으로 에탄올의 함량을 높여가며 에탄올 수용액으로 용출하는 단계; 및 (S5) 10 내지 40% 에탄올 수용액 분획을 회수하여 클로로겐산의 함량을 조절하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 미백 효과가 향상된 오가피 추출물을 제조하는 방법을 제공한다.The present invention also comprises the steps of (S1) crushing Ogapi; (S2) a step of extracting room temperature or cold extraction with 70-85% ethanol aqueous solution; (S3) extracting the filtrate under reduced pressure at 20 to 50 ° C. to obtain a crude extract; (S4) filling the crude extract with ion resin column chromatography and sequentially eluting with an ethanol aqueous solution while increasing the content of ethanol; And (S5) recovering a 10 to 40% ethanol aqueous solution fraction to adjust the content of chlorogenic acid, thereby providing a method for producing an ogapi extract with improved whitening effect.

본 발명에 따른 상기 화장료 조성물은 화장수류, 에센스류, 스킨류, 로션류, 크림류, 팩류, 파운데이션류 및 메이크업베이스류로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형일 수 있으며, 또한 상기 오가피 추출물 함유 화장료 조성물은 기초제품 화장료 또는 색조제품 화장료의 제조에 이용될 수도 있다. 또한 본 발명의 화장료 조성물은 액상, 크림상, 페이스트상, 고체상 등 다양한 성상으로 적용이 가능하며, 통상적인 화장료 제조법을 이용하여 제조될 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention may be any one formulation selected from the group consisting of cosmetics, essences, skins, lotions, creams, packs, foundations, and makeup bases, and also contains the Ogapi extract-containing cosmetic composition Silver may be used for the production of basic cosmetics or color cosmetics. In addition, the cosmetic composition of the present invention can be applied in various forms such as liquid, cream, paste, solid, and can be prepared using a conventional cosmetic preparation method.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 오가피로부터 추출된 클로로겐산 풍부 분획을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하며, 또한 이러한 피부 미백 효과가 뛰어난 화장료 조성물을 제조하는 방법, 즉, 오가피 추출물의 피부 미백 효과를 높이는 방법을 제공한다. 본 발명에 따른 오가피 추출물은 천연물로서 피부 부작용이 없어 안전할 뿐만 아니라, 항산화효과와 B16F1 멜라노싸이트를 이용한 세포 내의 멜라닌생성저해효과에서 우수한 활성을 나타내므로 피부 미백용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.As described above, the present invention provides a cosmetic composition for skin whitening comprising a chlorogenic acid-rich fraction extracted from agar skin as an active ingredient, and also a method for producing a cosmetic composition excellent in such a skin whitening effect, that is, the It provides a way to increase the skin whitening effect. Ogapi extract according to the present invention as a natural product has no skin side effects, as well as safe, it can be useful as a cosmetic composition for skin whitening because it exhibits excellent activity in the antioxidant effect and inhibiting melanogenesis in cells using B16F1 melanocytes.

이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 아래에서 상술하는 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples. However, embodiments according to the present invention can be modified in many different forms, the scope of the present invention should not be construed as limited to the embodiments described below. The embodiments of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those skilled in the art.

<추출 실시예 1 내지 5><Extraction Examples 1 to 5>

오가피 줄기 50 g를 정량하여 추출기에 넣은 후, 하기 표 1과 같은 각각의 추출 용매 1 L을 넣고 환류 냉각 추출한 후, 와트만 2번 여과지로 여과하였다. 추출여액을 회전식 증발 건조기(rotary evaporator)로 60℃로 감압 농축하여 표 1과 같이 오가피 추출물의 수득량 및 활성성분인 클로로겐산의 함량(%)을 나타내었다. 이때 고속액체크로마토그래피로 함량을 측정하였으며, 분석조건은 다음과 같다.50 g of stems of stems were quantified and placed in an extractor. Then, 1 L of each extraction solvent as shown in Table 1 was added and reflux-cooled, followed by filtering with a filter sheet of No. 2 twice. The extract filtrate was concentrated under reduced pressure at 60 ° C. with a rotary evaporator to show the yield of the extract of Ogapi and the content (%) of chlorogenic acid as an active ingredient, as shown in Table 1. At this time, the content was measured by high performance liquid chromatography, and the analysis conditions are as follows.

크로마마토그래피 : Agilent Technologies 1200 SeriesChromatography: Agilent Technologies 1200 Series

칼럼 : Luna C18 (5 um, 250 × 4.6 mm)Column: Luna C18 (5 um, 250 × 4.6 mm)

검출기 : 자외부흡광광도계 (측정파장 330 nm)Detector: Ultraviolet absorption spectrophotometer (wavelength 330 nm)

유속 : 1.0 ml/minFlow rate: 1.0 ml / min

이동상 : 용매 A(0.1% 아세트산, 아세토니트릴), 용매 B(0.1% 아세트산, 물)의 기울기 용매Mobile phase: gradient solvent of solvent A (0.1% acetic acid, acetonitrile), solvent B (0.1% acetic acid, water)

추출 실시예Extraction Example 추출용매Extraction solvent 수득량(g)Yield (g) 클로로겐산의 함량(%)Chlorogenic Acid Content (%) 1One 100% 에탄올 수용액100% ethanol aqueous solution 0.9500.950 0.9940.994 22 75% 에탄올 수용액75% ethanol aqueous solution 2.9202.920 2.2662.266 33 50% 에탄올 수용액50% ethanol aqueous solution 3.5003.500 2.1172.117 44 25% 에탄올 수용액25% ethanol aqueous solution 3.5603.560 2.1832.183 55 100% 정제수100% purified water 3.8703.870 1.1801.180

100% 정제수 및 100% 에탄올의 단일 용매로의 추출보다 에탄올 수용액을 사용하여 추출시 클로로겐산의 함량이 증가함을 알 수 있었다. 에탄올 수용액에서의 클로로겐산의 함량은 큰 차이가 없으므로 농축시의 시간을 고려하여 70 내지 85% 에탄올 수용액으로 추출하는 것이 바람직하였다.It was found that the content of chlorogenic acid increased when extracted using 100% purified water and 100% ethanol with a single solvent rather than with a single solvent. Since the content of chlorogenic acid in the ethanol aqueous solution does not have a big difference, it is preferable to extract with 70 to 85% aqueous ethanol solution in consideration of the time of concentration.

또한 환류추출시 정제수 함량이 증가할수록 높은 열을 가하게 되며, 높은 열을 가한 추출물의 색상이 어두워졌다. 그러므로 오가피 추출물의 제조시 상온 추출이나 냉온 추출하는 것이 바람직하였다.In addition, as the purified water content increased during reflux extraction, high heat was applied, and the color of the extract with high heat became dark. Therefore, it is preferable to extract at room temperature or cold at the time of preparation of the extract.

<추출 실시예 6 내지 8><Extraction Examples 6 to 8>

분쇄한 오가피 줄기 40 kg에 80% 에탄올수용액 400 L을 넣고 3일 동안 상온 교반 추출한 후 300 메시 여과포로 여과한 다음 추출여액을 회전식 증발 건조기로 40℃로 감압 농축하였다. 이를 다시 80% 에탄올수용액으로 재용해 후 상온에서 하룻밤동안 방치한 다음 상등액을 회전식 증발 건조기로 40℃로 감압 농축하여 오가피 조추출물(5.32 ㎏)을 얻었다. 다음, 추출물 전량을 미리 10% 에탄올수용액으로 평형화시켜 놓은 다이아이온 HP20으로 충진시킨 직경 40 cm, 길이 2 m의 칼럼에 충진 후 순차적으로 10% 에탄올수용액, 20% 에탄올수용액, 40% 에탄올수용액 및 60% 에탄올수용액으로 350 L을 각각 차례로 용출하여 20 L씩 분획하였다. 이때, 10%(추출실시예 6), 20%(추출실시예 7) 및 40%(추출실시예 8) 에탄올 수용액을 회전식 증발 건조기로 40℃로 감압 농축하여 오가피 분말을 얻었고, 고속액체크로마토그래피로 오가피의 주요구성 성분인 클로로겐산, 카페익산 및 아칸토사이드 D의 함량을 측정하여 표 2에 나타내었다.400 kg of crushed organza stems were put into 400 L of 80% ethanol aqueous solution, and extracted by stirring at room temperature for 3 days, filtered through 300 mesh filter cloth, and the filtrate was concentrated under reduced pressure at 40 ° C. using a rotary evaporator. This was again redissolved in an aqueous 80% ethanol solution and allowed to stand at room temperature overnight, and then the supernatant was concentrated under reduced pressure at 40 ° C. using a rotary evaporator to obtain crude extract (5.32 kg). Next, the total amount of the extract was filled with a column of 40 cm in diameter and 2 m in length, filled with 10% ethanol aqueous solution, equilibrated with 10% ethanol aqueous solution, and then 10% ethanol aqueous solution, 20% ethanol aqueous solution, 40% ethanol aqueous solution and 60 Elution of 350 L each of the aqueous solution of ethanol in sequence and fractionated 20 L. At this time, 10% (Extraction Example 6), 20% (Extraction Example 7) and 40% (Extraction Example 8) Aqueous ethanol aqueous solution was concentrated under reduced pressure at 40 ℃ in a rotary evaporator to obtain the Ogapi powder, high-performance liquid chromatography The contents of chlorogenic acid, caffeic acid and acantoside D, which are the main constituents of organopi, were measured and shown in Table 2.

추출 실시예Extraction Example 분획 추출 용매Fraction extraction solvent 함량 %content % 클로로겐산Chlorogenic acid 카페익산Cafe Iksan 아칸토사이드 DAcantoside D 66 10 % 에탄올 수용액10% ethanol aqueous solution 3.020±0.080  3.020 ± 0.080 -- -- 77 20 % 에탄올 수용액20% ethanol aqueous solution 7.811±0.059  7.811 ± 0.059 0.394±0.0080.394 ± 0.008 -- 88 40 % 에탄올 수용액40% ethanol aqueous solution -   - 12.270±0.36012.270 ± 0.360 1.670±0.1401.670 ± 0.140

10% 에탄올 후반부부터 클로로겐산이 용출되었고, 20% 후반부가 되면 클로로겐산이 더 이상 용출되지 않음을 알 수 있었다.Chloroic acid was eluted from the latter part of 10% ethanol, and chlorogenic acid was no longer eluted by the latter part of 20%.

<지표성분 함량조절 실시예 1 내지 4><Indicator component content control examples 1 to 4>

상기 추출실시예 6 내지 8의 과정에서 다이아이온 HP20으로의 용매 분획시 순차적으로 10% 에탄올수용액, 20% 에탄올수용액, 40% 에탄올수용액 및 60% 에탄올수용액으로 350 L을 각각 차례로 용출하여 20 L씩 소분획하였다. 즉, 10% 에탄올수용액 10개의 소분획층, 20%, 40%, 60% 에탄올수용액은 각각 20개의 소분획층으로 나눈 후 각각의 소분획층(총 70개)의 건조감량을 측정하고 오가피의 주요구성성분인 클로로겐산의 함량을 측정하였다. 20% 에탄올 수용액 중반부의 클로로겐산의 함량은 30 내지 40%로 높게 용출되어 클로로겐산의 함량이 높은 20% 에탄올 소분획층과 10% 및 40% 에탄올 각각의 소분획층을 조합하여 클로로겐산의 함량을 표 3과 같이 조절하여 회전식 증발 건조기로 40℃로 감압 농축하여 오가피 분말을 얻었다.When the solvent fractionation to the diion HP20 in the process of the extraction examples 6 to 8 sequentially eluted 350 L with 10% ethanol aqueous solution, 20% ethanol aqueous solution, 40% ethanol aqueous solution and 60% ethanol aqueous solution sequentially 20 L each Small fractions were made. That is, 10 small fractions of 10% ethanol solution, 20%, 40% and 60% ethanol solutions were divided into 20 small fractions, and each of the small fractions (total 70) was measured for drying. The content of chlorogenic acid, which is a major component, was measured. The content of chlorogenic acid in the middle portion of the 20% ethanol aqueous solution was eluted as high as 30 to 40%. The content of chlorogenic acid was determined by combining a small fraction of 20% ethanol with a high content of chlorogenic acid with a small fraction of 10% and 40% ethanol, respectively. The mixture was adjusted as described above and concentrated under reduced pressure at 40 ° C. with a rotary evaporator to obtain an organic powder.

지표성분 함량조절 실시예Indicator component content control example 클로로겐산의 함량(%)Chlorogenic Acid Content (%) 1One 5.208±0.0165.208 ± 0.016 22 9.971±0.061 9.971 ± 0.061 33 15.194±0.62215.194 ± 0.622 44 20.500±1.15020.500 ± 1.150

<실험예 1> 항산화효과시험Experimental Example 1 Antioxidant Effect Test

본 발명의 상기 각 지표성분 함량조절 실시예 1 내지 4에서 제조한 오가피 추출물 시료들에 대하여 항산화효과를 알아보기 위하여 자유라디칼소거시험과 활성산소소거시험을 실시하였다.In order to examine the antioxidant effects of the extracts of the extracts prepared in Examples 1 to 4 of the indicator component content control of the present invention, a free radical elimination test and an active oxygen elimination test were performed.

자유라디칼소거시험은 Kim 등(Kor. J. Pharmacogn., 24(4), 299~303, 1993)의 방법을 변형한 것으로 안정한 자유라디칼인 DPPH(1,1-Diphenyl-2- picrylhydrazyl radical)을 이용하였다. 0.2 mM DPPH 용액 1 mL에 상기 지표성분 함량조절 실시예 1 내지 4에 따라 수득된 각각의 추출 시료를 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 2 mL 혼합하고, 실온에서 10분간 방치한 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료용액 대신 메탄올을 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, DPPH 용액 대신 메탄올을 이용하여 추출 시료 및 대조군 각각에 대한 색 보정값을 얻었다.The free radical scavenging test is a modification of the method of Kim et al. (Kor. J. Pharmacogn., 24 (4), 299 ~ 303, 1993), and the stable free radical DPPH (1,1-Diphenyl-2- picrylhydrazyl radical) Was used. Each extract sample obtained according to the indicator component control examples 1 to 4 in 0.2 mM DPPH solution was diluted to an appropriate concentration in methanol and mixed in 2 mL, and allowed to stand at room temperature for 10 minutes before absorbance at 517 nm. Measured. The control group was measured in the same manner by adding methanol instead of the sample solution, and using the methanol instead of DPPH solution to obtain a color correction value for each of the extracted sample and the control.

하기 수학식 1을 이용하여 자유라디칼소거율을 수치로 계산하여 하기 표 4에 나타내었다. 하기 표 4에서 IC50은 자유라디칼소거율 50%를 달성하기 위해 소요되는 시료의 농도로서 다른 성분물질과 상대적으로 비교할 때 사용하는 수치로서 값이 작을수록 소거율이 높음을 나타낸다.By using the following equation 1 to calculate the free radical removal rate as a numerical value is shown in Table 4 below. In Table 4 below, IC 50 is a concentration of a sample required to achieve 50% free radical scavenging ratio, which is a value used when comparing with other component substances.

활성산소소거실험은 Noro 등(Chem. Pharm. Bull., 31, 3984~3987, 1983)의 방법을 변형한 것으로 잔틴/잔틴옥시다제(xanthine/xanthine oxidase) 효소반응에 의한 활성산소 발생계를 이용하여 활성산소에 의한 니트로 블루 테트라졸리움(NBT, nitroblue tetrazolim)의 산화에 의한 흡광도의 변화를 측정하였다.The active oxygen scavenging experiment was a modification of the method of Noro et al. (Chem. Pharm. Bull., 31, 3984 ~ 3987, 1983), using an active oxygen generating system by the xanthine / xanthine oxidase enzyme reaction. The change of absorbance due to oxidation of nitroblue tetrazolim (NBT) by active oxygen was measured.

Na2CO3 2.4 mL, 잔틴 0.1 mL, EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) 0.1 mL, BSA (bovine serum albumin) 0.1 mL, NBT 0.1 mL 및 시료 0.1 mL을 넣고 잘 혼합하여 25℃에서 10분간 정치하였다. 잔틴옥시다제 0.1 mL을 넣고 25℃에서 20분간 반응시킨 후, 6 mM CuCl2를 넣어 반응을 정지시켰다. 그 후, 광파장 560 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료용액 대신 정제수를 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, 잔틴옥시다제 용액 대신 정제수를 이용하여 추출 시료 및 대조군 각각에 대한 색 보정값을 얻었다.2.4 mL of Na 2 CO 3 , 0.1 mL of xanthine, 0.1 mL of EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), 0.1 mL of BSA (bovine serum albumin), 0.1 mL of NBT, and 0.1 mL of sample were mixed well and allowed to stand at 25 ° C. for 10 minutes. After adding 0.1 mL of xanthine oxidase and reacting at 25 ° C. for 20 minutes, 6 mM CuCl 2 was added to stop the reaction. Thereafter, the absorbance was measured at an optical wavelength of 560 nm. For the control group, purified water was added instead of the sample solution, and the same method was used. Purified water was used instead of the xanthine oxidase solution to obtain color correction values for each of the extracted sample and the control.

하기 수학식 2를 이용하여 활성산소소거율을 수치로 계산하여 나타내었다. 하기 표 4에서 IC50은 활성산소소거율 50%를 달성하기 위해 소요되는 시료의 농도로서 다른 성분물질과 상대적으로 비교할 때 사용하는 수치로서 값이 작을수록 소거율이 높음을 나타낸다.Using the following equation 2, the oxygen scavenging rate is calculated and shown as a numerical value. In Table 4 below, IC 50 is a concentration of a sample required to achieve 50% of an oxygen scavenging rate, and is a value used in comparison with other component substances. The smaller the value, the higher the scavenging ratio.

하기 표 4에서 상기 지표성분 함량조절 실시예 1 내지 4의 오가피 추출 시료와 비타민인 아스코르브산(L-ascorbic acid)과 토코페롤(dl-alpha-tocopherol)의 항산화효과를 비교하였다.In Table 4, the antioxidant effects of ascorbic acid (L-ascorbic acid) and tocopherol (dl-alpha-tocopherol) were compared with the extract samples of the indicator components content control Examples 1 to 4 of the vitamins.

Figure 112008006517315-pat00002
Figure 112008006517315-pat00002

Figure 112008006517315-pat00003
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시료sample 자유라디칼소거능, IC50 (ug/mL)Free radical scavenging, IC 50 (ug / mL) 활성산소소거능, IC50 (ug/mL)Free radical activator, IC 50 (ug / mL) 지표성분 함량조절 실시예 1Indicator component content control example 1 48.210 ± 0.55848.210 ± 0.558 422.333 ± 7.930422.333 ± 7.930 지표성분 함량조절 실시예 2Indicator component content control example 2 30.104 ± 0.38030.104 ± 0.380 257.778 ± 7.930257.778 ± 7.930 지표성분 함량조절 실시예 3Indicator component content control example 3 25.173 ± 0.37525.173 ± 0.375 188.362 ± 3.764188.362 ± 3.764 지표성분 함량조절 실시예 4Indicator component content control example 4 1.748 ± 0.098 1.748 ± 0.098 131.419 ± 2.235131.419 ± 2.235 클로로겐산Chlorogenic acid 6.692 ± 0.172 6.692 ± 0.172 38.919 ± 1.523 38.919 ± 1.523 아스코르브산Ascorbic acid 3.018 ± 0.167 3.018 ± 0.167 -  - 토코페롤Tocopherol 18.316 ± 0.03018.316 ± 0.030 225.327 ± 4.278225.327 ± 4.278

상기 표 4에서 보는 바와 같이, 오가피 추출물의 주요성분인 클로로겐산은 토코페롤에 비하여 월등하며, 아스코르브산 동등 정도의 항산화효과를 나타내었다. 또한 클로로겐산의 함량에 의존적으로 오가피 추출물의 항산화효과가 증가함을 알 수 있었다. 특히, 지표성분 함량조절 실시예 4는 주요성분인 클로로겐산 및 비교용 항산화제인 아스코르브산보다 자유라디컬소거능이 월등함을 알 수 있었다.As shown in Table 4, chlorogenic acid, which is the main component of the extract of Ogapi, is superior to tocopherol, and has an antioxidant effect equivalent to ascorbic acid. In addition, it was found that the antioxidant effect of Ogapi extract increased depending on the content of chlorogenic acid. In particular, the indicator component content control Example 4 was found to be superior in free radical scavenging ability than chlorogenic acid as a main component and ascorbic acid as a comparative antioxidant.

<실험예 2> 세포생존율 시험Experimental Example 2 Cell Viability Test

오가피 추출물(지표성분 함량조절 실시예 4) 및 클로로겐산의 화장품 원료로서의 1차 안전성을 검증하기 위하여 B16F1 (C57BL/6 유래 마우스 멜라닌 형성세포)을 이용한 세포생존율 평가 실험을 수행하였다. 본 실험예에 사용된 B16F1은 ATCC (American Type Culture Collection)으로부터 분양받아 사용하였다.In order to verify the primary safety as a raw material of cosmetic extract (marker content control Example 4) and chlorogenic acid as a cosmetic raw material, cell survival rate evaluation experiment was performed using B16F1 (C57BL / 6-derived mouse melanocytes). B16F1 used in this Experimental Example was used from the American Type Culture Collection (ATCC).

세포를 10% 소혈청을 첨가한 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium)에 1×104 세포의 밀도로 접종하고 하루 동안 5% CO2, 37℃에서 배양시켰다. 시료를 농도별로 세포 배양 배지에 희석하여 처리하고 2일간 배양 후 세포 염색용 염료(MTT, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)를 첨가한 후, 4시간 동안 더 배양하였다. 염색결정체를 디메틸설폭시드(dimethy sulfoxide)로 녹여내어 540 nm에서 흡광도를 측정하여 상대 비교하였다. 대조군으로는 시료를 처리하지 않은 배양액을 사용하였다. 하기 수학식 3을 이용하여 세포의 생존능력을 수치로 계산하여 하기 표 5에 나타내었다.Cells were inoculated at a density of 1 × 10 4 cells in DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) with 10% bovine serum and incubated at 37% for 5% CO 2 for one day. Samples were diluted and treated in cell culture medium for each concentration, followed by incubation for 2 days, followed by addition of dye for cell staining (MTT, 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide), 4 Incubate further for hours. The chromosome crystals were dissolved in dimethyl sulfoxide and measured for absorbance at 540 nm for relative comparison. As a control, a culture medium without a sample was used. Using the following equation (3) to calculate the viability of the cell numerical value is shown in Table 5 below.

Figure 112008006517315-pat00004
Figure 112008006517315-pat00004

시료sample 세포생존율(%)Cell survival rate (%) 0 ug/mL0 ug / mL 15 ug/mL15 ug / mL 50 ug/mL50 ug / mL 100 ug/mL100 ug / mL 500 ug/mL500 ug / mL 지표성분 함량조절 실시예 4Indicator component content control example 4 100100 80.14180.141 76.50076.500 82.49982.499 75.96275.962 클로로겐산Chlorogenic acid 100100 84.94084.940 82.70682.706 84.48584.485 81.17581.175

상기 표 5에 나타낸 결과에서와 같이, 지표성분 함량조절 실시예 4 및 클로로겐산은 500 ug/mL의 고농도에서도 75% 이상의 세포생존율 보여 안전성이 우수함을 알 수 있었다.As shown in the results shown in Table 5, the indicator component content control Example 4 and chlorogenic acid was found to be excellent in safety, showing a cell viability of 75% or more even at a high concentration of 500 ug / mL.

<실험예 3> B16F1 멜라노싸이트를 이용한 세포 내의 멜라닌생성저해시험Experimental Example 3 Inhibition of Melanogenesis in Cells Using B16F1 Melanosite

전술한 지표성분 함량조절 실시예 4 및 클로로겐산의 미백효과를 검정하는 방법으로써, B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌생성저해율을 측정하여 미백효과를 판단하였다. 본 실험예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포균주이며 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실험예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC (American Type Culture Collection)으로부터 분양받아 사용하였다.As a method for assaying the whitening effect of the above-described indicator component content control Example 4 and chlorogenic acid, the whitening effect was determined by measuring the melanogenesis inhibition rate for B16F1 melanocytes. B16F1 melanocytes used in the present experimental example is a cell strain derived from a mouse and secretes a black pigment called melanin. Samples were treated during the artificial culture of these cells to evaluate the degree of melanin black pigment reduction. The B16F1 melanocytes used in this Experimental Example were used after being sold from the American Type Culture Collection (ATCC).

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌생성저해효과 측정은 다음과 같이 수행하였다. B16F1 멜라노싸이트를 10% 소혈청(fetal bovine serum)과 1% 항생제를 첨가한 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium)에 1×105 세포의 밀도로 접종하고 하루 동안 5% CO2, 37℃에서 배양시켰다. 그 후 알파-MSH (melanocyte stimulating hormone, 0.2 uM)가 처리된 DMEM 10%에 10 mg/mL 농도로 시료를 처리하여 48시간 동안 배양하였다. 배양 후 멜라닌 함량을 측정할 세트는 세포를 트립신(trypsin)-EDTA로 떼어낸 후 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내의 멜라닌 정량은 Lotan (Cancer Res., 40:3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 세포 펠렛에 1N NaOH (10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로플레이트 리더기로 490 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정하였으며, 멜라닌 표준곡선을 이용하여 멜라닌을 정량하였다. 정량된 멜라닌은 총단백질로 보정하여 나타내었다. 대조군으로는 시료를 처리하지 않은 배양액을 사용하였다. 하기 수학식 4를 이용하여 멜라닌생성저해율을 수치로 계산하여 하기 표 6에 나타내었다. 하기 표 6에서는 상기 지표성분 함량조절 실시예 4 및 클로로겐산의 미백효과를 평가하기 위하여 미백제로 알려진 알부틴을 대조물질로 이용하였다.Melanogenesis inhibitory effect of B16F1 melanocytes was measured as follows. B16F1 melanocytes were inoculated in DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) with 10% fetal bovine serum and 1% antibiotic at a density of 1 × 10 5 cells and incubated at 5% CO 2 , 37 ° C. for 1 day. . Thereafter, the samples were treated with 10 mg / mL in DMEM 10% treated with alpha-MSH (melanocyte stimulating hormone, 0.2 uM) and incubated for 48 hours. The set to measure the melanin content after incubation, the cells were separated by trypsin-EDTA and centrifuged to recover the cells. Intracellular melanin quantification was performed with a slight modification of the method of Lotan (Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980). Melanin extracted by adding 1N NaOH (10% DMSO) to the cell pellet was dissolved, and the absorbance of melanin was measured at 490 nm using a microplate reader, and melanin was quantified using a melanin standard curve. Quantified melanin was expressed by correction with total protein. As a control, a culture medium without a sample was used. Using the following equation 4 to calculate the melanin inhibition rate is shown in Table 6 below. In Table 6 below, arbutin known as a whitening agent was used as a control to evaluate the whitening effect of the indicator component content control Example 4 and chlorogenic acid.

Figure 112008006517315-pat00005
Figure 112008006517315-pat00005

시료sample 멜라닌 함량(%) Melanin content (%) 대조군Control 100100 지표성분 함량조절 실시예 4Indicator component content control example 4 80.719±10.64880.719 ± 10.648 클로로겐산Chlorogenic acid 72.700±16.88472.700 ± 16.884 알부틴Arbutin 77.846±19.55477.846 ± 19.554

상기 표 6에 나타낸 결과에서와 같이, 지표성분 함량조절 실시예 4 및 클로로겐산은 10 mg/mL의 농도에서도 미백제로 알려진 알부틴과 유사한 정도의 미백효과를 나타내었다.As shown in Table 6, the indicator component content control Example 4 and chlorogenic acid showed a similar whitening effect as Arbutin known as a whitening agent even at a concentration of 10 mg / mL.

<제형 실시예 1 및 그 비교예 1><Formulation Example 1 and Comparative Example 1>

상기 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물을 포함한 영양스킨의 성분구성을 하기 표 7과 같이 구성하여 제조하였다. 이때, 성분함량의 단위는 중량%이다.The ingredient composition of the nutrient skin including the extract of Ogapi according to the indicator component content control Example 4 was prepared as shown in Table 7. At this time, the unit of component content is weight%.

번호number 성 분ingredient 제형 실시예 1Formulation Example 1 제형 비교예 1Formulation Comparative Example 1 1One 정제수Purified water 잔량Balance 잔량Balance 22 카보머Carbomer 0.050.05 0.050.05 33 하이드록시에칠셀루로오스Hydroxyethyl cellulose 0.050.05 0.050.05 44 부틸렌글라이콜Butylene Glycol 3.03.0 3.03.0 55 글리세린glycerin 2.02.0 2.02.0 66 피이지-1500Fiji-1500 0.50.5 0.50.5 77 에탄올ethanol 4.04.0 4.04.0 88 폴리소르베이트 80Polysorbate 80 0.20.2 0.20.2 99 트리에탄올아민Triethanolamine 0.050.05 0.050.05 1010 방부제antiseptic 미량a very small amount 미량a very small amount 1111 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물Ogapi extract according to the indicator component content control Example 4 0.20.2

상기 표 7의 성분번호로 구별된 성분 중에서, 먼저 성분 1(정제수)에 성분 2와 3을 교반 분산시킨 후, 성분 4 내지 6을 가하고, 성분 8 내지 10을 성분 7에 용해시킨 물질과 분취된 성분 4에 용해시킨 성분 11을 차례로 가하여 혼합하는 방식으로 제조하였다.Among the components identified by component number in Table 7, components 2 and 3 were first dispersed and dispersed in component 1 (purified water), and then components 4 to 6 were added, and components 8 to 10 dissolved in component 7 and fractionated. Component 11 dissolved in component 4 was added sequentially to prepare a mixture.

상기 제형 실시예 1에 대한 그 비교예 1은 성분 11인 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물을 제외한 나머지 성분구성이나 제조방법은 동일하게 진행하여 제조한 것을 설정하였다.Comparative Example 1 for Formulation Example 1, except for the extract of Ogapi according to the indicator component content control Example 4 which is component 11, the same as the ingredient composition or the manufacturing method was set to proceed in the same manner.

<제형 실시예 2 및 그 비교예 2><Formulation Example 2 and Comparative Example 2>

상기 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물을 함유한 영양로션의 성분구성을 하기 표 8과 같이 구성하여 제조하였다. 이때, 성분함량의 단위는 중량%이다.The ingredient composition of the nutrient lotion containing the extract of Ogapi according to the indicator component content control Example 4 was prepared as shown in Table 8. At this time, the unit of component content is weight%.

번호number 성 분ingredient 제형 실시예 2Formulation Example 2 제형 비교예 2Formulation Comparative Example 2 1One 세테아릴알코올Cetearyl Alcohol 1.01.0 1.01.0 22 글리세릴스테아레이트Glyceryl Stearate 0.70.7 0.70.7 33 폴리소르베이트 60Polysorbate 60 1.21.2 1.21.2 44 소르비탄세스퀴올리에이트Sorbitan sesquioleate 0.30.3 0.30.3 55 세틸옥타노에이트Cetyloctanoate 6.06.0 6.06.0 66 스쿠알란Squalane 4.04.0 4.04.0 77 마카데이나넛오일Macadamia Nut Oil 3.03.0 3.03.0 88 부틸렌글라이콜Butylene Glycol 4.04.0 4.04.0 99 글리세린glycerin 4.04.0 4.04.0 1010 카보머Carbomer 0.150.15 0.150.15 1111 산탄검Xanthan Gum 0.030.03 0.030.03 1212 방부제antiseptic 미량a very small amount 미량a very small amount 1313 정제수Purified water 잔량Balance 잔량Balance 1414 아르기닌Arginine 0.150.15 0.150.15 1515 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물Ogapi extract according to the indicator component content control Example 4 0.50.5

상기 표 8의 각 성분번호로 구별된 성분 중에서, 먼저 성분 1 내지 7을 70℃의 온도에서 가열 용해시킨 다음, 성분 8 내지 12를 성분 13에 용해 분산시켜 70℃로 가열한 것에 유화하였다. 이후, 상기 유화한 것을 성분 14로 중화하고, 56℃의 온도로 냉각한 후, 분취된 성분 8에 용해시킨 성분 15를 가하여 교반하고 실온에서 냉각하여 제조하였다.Among the components identified by each component number in Table 8 above, components 1 to 7 were first dissolved by heating at a temperature of 70 ° C., and then components 8 to 12 were dissolved and dispersed in component 13, and emulsified by heating to 70 ° C. Thereafter, the emulsified product was neutralized with component 14, cooled to a temperature of 56 ° C, and then, component 15 dissolved in the fractionated component 8 was added, stirred, and cooled at room temperature to prepare.

상기 제형 실시예 2에 대한 그 비교예 2는 성분 15인 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물을 제외한 나머지 성분구성이나 제조방법은 동일하게 진행하여 제조한 것을 설정하였다.Comparative Example 2 with respect to Formulation Example 2, except for the extract of Ogapi according to the indicator component content control Example 4 which is component 15, the same as the ingredient composition or manufacturing method was set to proceed in the same manner.

<제형 실시예 3 및 그 비교예 3><Formulation Example 3 and Comparative Example 3>

상기 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물을 함유한 영양에센스의 성분구성을 하기 표 9와 같이 구성하여 제조하였다. 이때, 성분함량의 단위는 중량%이다.Component composition of the nutrient essence containing the extract Ogapi according to the indicator component content control Example 4 was prepared as shown in Table 9. At this time, the unit of component content is weight%.

번호number 성 분ingredient 제형 실시예 3Formulation Example 3 제형 비교예 3Formulation Comparative Example 3 1One 정제수Purified water 잔량Balance 잔량Balance 22 카보머Carbomer 0.20.2 0.20.2 33 하이드록시에칠셀루로오스Hydroxyethyl cellulose 0.10.1 0.10.1 44 부틸렌글라이콜Butylene Glycol 8.08.0 8.08.0 55 글리세린glycerin 6.06.0 6.06.0 66 소듐히아루로네이트Sodium hyaluronate 150150 15.015.0 77 에탄올ethanol 4.04.0 4.04.0 88 폴리옥시에칠렌경화피마자유Polyoxyethylene Cured Castor Oil 0.10.1 0.10.1 99 트리에탄올아민Triethanolamine 0.20.2 0.20.2 1010 방부제antiseptic 미량a very small amount 미량a very small amount 1111 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물Ogapi extract according to the indicator component content control Example 4 5.05.0 --

상기 표 9의 각 성분번호로 구별된 성분 중에서, 먼저 성분 1(정제수)에 성분 2와 3을 교반 분산시킨 후, 성분 4 내지 5 및 6을 가하고, 성분 8 내지 10을 성분 7에 용해시킨 물질과 분취된 성분 4에 용해시킨 성분 11을 차례로 가하여 혼합하는 방식으로 제조하였다.Of the components distinguished by each component number in Table 9, components 2 and 3 were first dispersed and dispersed in component 1 (purified water), and then components 4 to 5 and 6 were added, and components 8 to 10 were dissolved in component 7. And component 11 dissolved in aliquot component 4 were added sequentially to prepare a mixture.

상기 제형 실시예 3에 대한 그 비교예 3은 성분 11인 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물을 제외한 나머지 성분구성이나 제조방법은 동일하게 진행하여 제조한 것을 설정하였다.Comparative Example 3 for Formulation Example 3, except for the extract of Ogapi according to the indicator component content control Example 4, which is component 11, the same as the ingredient composition or manufacturing method was set to proceed in the same manner.

<제형 실시예 4 및 그 비교예 4><Formulation Example 4 and Comparative Example 4>

상기 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물을 함유한 영양크림의 성분구성을 하기 표 10과 같이 구성하여 제조하였다. 이때, 성분함량의 단위는 중량%이다.Component composition of the nutrient cream containing the extract Ogapi according to the indicator component content control Example 4 was prepared as shown in Table 10. At this time, the unit of component content is weight%.

번호number 성 분ingredient 제형 실시예 4Formulation Example 4 제형 비교예 4Formulation Comparative Example 4 1One 세테아릴알코올Cetearyl Alcohol 1.51.5 1.51.5 22 글리세릴스테아레이트Glyceryl Stearate 1.01.0 1.01.0 33 폴리소르베이트 60Polysorbate 60 1.21.2 1.21.2 44 소르비탄세스퀴올리에이트Sorbitan sesquioleate 0.30.3 0.30.3 55 세틸옥타노에이트Cetyloctanoate 6.06.0 6.06.0 66 스쿠알란Squalane 8.08.0 8.08.0 77 아프리코드커넬오일Apricot Kernel Oil 4.04.0 4.04.0 88 디메치콘Dimethicone 1.01.0 1.01.0 99 부틸렌글라이콜Butylene Glycol 5.05.0 5.05.0 1010 그릴세린Grill serine 4.04.0 4.04.0 1111 마그네슘알루미늄실리케이트Magnesium Aluminum Silicate 0.20.2 0.20.2 1212 산탄검Xanthan Gum 0.050.05 0.050.05 1313 방부제antiseptic 미량a very small amount 미량a very small amount 1414 정제수Purified water 잔량Balance 잔량Balance 1515 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물Ogapi extract according to the indicator component content control Example 4 1.01.0

한편, 상기 표 10의 각 성분번호로 구별된 성분 중에서, 먼저 성분 1 내지 8을 70℃의 온도에서 가열 용해시킨 다음, 성분 9 내지 13을 성분 14에 용해 분산시켜 70℃로 가열한 것에 유화하였다. 이후, 상기 유화한 것을 56℃의 온도로 냉각한 후, 분취된 성분 9에 용해시킨 성분 15를 가하여 교반하고 실온에서 냉각하여 제조하였다.On the other hand, among the components identified by each component number in Table 10 above, components 1 to 8 were first dissolved by heating at a temperature of 70 ° C, and then components 9 to 13 were dissolved and dispersed in component 14 and emulsified in heating to 70 ° C. . Thereafter, the emulsified product was cooled to a temperature of 56 ° C., and then component 15 dissolved in the fractionated component 9 was added thereto, stirred, and cooled to room temperature to prepare.

상기 제형 실시예 4에 대한 그 비교예 4는 성분 15인 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물을 제외한 나머지 성분구성이나 제조방법은 동일하게 진행하여 제조한 것을 설정하였다.Comparative Example 4 with respect to Formulation Example 4, except for the extract of Ogapi according to the indicator component content control Example 4 which is component 15, the same as the ingredient composition or the manufacturing method was set to proceed in the same manner.

<제형 실시예 5 및 그 비교예 5><Formulation Example 5 and Comparative Example 5>

상기 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물을 함유한 영양팩의 성분구성을 하기 표 11과 같이 구성하여 제조하였다. 이때, 성분함량의 단위는 중량%이다.The ingredient composition of the nutritional pack containing the extract Ogapi according to the indicator component content control Example 4 was prepared by configuring as shown in Table 11. At this time, the unit of component content is weight%.

번호number 성 분ingredient 제형 실시예 5Formulation Example 5 제형 비교예 5Formulation Comparative Example 5 1One 정제수Purified water 잔량Balance 잔량Balance 22 부틸렌글라이콜Butylene Glycol 3.03.0 3.03.0 33 글리세린glycerin 2.02.0 2.02.0 44 폴리비닐알코올Polyvinyl alcohol 2.02.0 2.02.0 55 폴리비닐피롤리돈Polyvinylpyrrolidone 10.010.0 10.010.0 66 셀룰로오스검Cellulose gum 0.30.3 0.30.3 77 마이카Mica 2.02.0 2.02.0 88 카올린kaoline 2.02.0 2.02.0 99 에탄올ethanol 5.05.0 5.05.0 1010 폴리옥시에칠렌경화피마자유Polyoxyethylene Cured Castor Oil 0.30.3 0.30.3 1111 방부제antiseptic 미량a very small amount 미량a very small amount 1212 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물Ogapi extract according to the indicator component content control Example 4 2.02.0 --

상기 표 11의 각 성분번호로 구별된 성분 중에서, 먼저 성분 1(정제수)에 성분 2와 3을 첨가한 후, 성분 4 내지 6을 가하여 교반 분산시키면서 70℃로 가열하였다. 다음 성분 7 내지 8을 가하여 충분히 분산시키고 56℃의 온도로 냉각하였다. 성분 10 내지 11을 성분 9에 용해시킨 물질과 분취된 성분 2에 용해시킨 성분 12를 차례로 가하여 교반하고 실온으로 냉각하여 제조하였다.Of the components identified by each component number in Table 11 above, components 2 and 3 were first added to component 1 (purified water), and then components 4 to 6 were added and heated to 70 ° C. while stirring and dispersing. The following components 7-8 were added, fully dispersed and cooled to a temperature of 56 ° C. A substance prepared by dissolving components 10 to 11 in component 9 and component 12 dissolved in aliquoted component 2 in turn was stirred and cooled to room temperature.

상기 제형 실시예 5에 대한 그 비교예 5는 성분 12인 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 오가피 추출물을 제외한 나머지 성분구성이나 제조방법은 동일하게 진행하여 제조한 것을 설정하였다.Comparative Example 5 with respect to Formulation Example 5, except for the extract of Ogapi according to the indicator component content control Example 4 which is component 12, the same as the ingredient composition or the manufacturing method was set to proceed in the same manner.

<실험예 5> 피부의 미백효과 및 피부자극 관능시험<Experiment 5> Skin whitening effect and skin irritation sensory test

본 발명에 따른 피부 미백용 화장료 조성물의 피부 미백효과 및 피부자극을 평가하기 위하여, 상기 제형 실시예 4와 제형 비교예 4에서 제조된 영양크림을 이용하여 관능시험을 실시하였다.In order to evaluate the skin whitening effect and skin irritation of the cosmetic composition for skin whitening according to the present invention, a sensory test was carried out using the nutrition cream prepared in Formulation Example 4 and Comparative Example 4.

구체적으로, 제형 실시예 4와 제형 비교예 4의 영양크림을 피부에 각각 도포했을 때 피부의 미백효과를 측정하기 위하여 20세 이상의 여성 20명에게 안면 왼쪽 부분에는 제형 실시예 4의 영양크림(시험군)을, 안면 오른쪽 부분에는 제형 비교예 4의 영양크림(대조군)을 1일 1회 12주간 지속적으로 사용하게 하였다. Specifically, in order to measure the whitening effect of the skin when the nourishing creams of Formulation Example 4 and Formulation Comparative Example 4 were applied to the skin, the nutritional cream of Formulation Example 4 was applied to 20 women over 20 years of age. Group), the right side of the face was allowed to continuously use the nutrition cream (control) of the formulation Comparative Example 4 once a day for 12 weeks.

관능시험에서 피부의 미백효과 항목에 대하여는 제형 비교예 4의 영양크림을 기준으로 제형 실시예 4의 영양크림이 나타내는 미백효과를 상대적으로 평가하게 하였고, 피부자극에 대한 관능평가는 피부의 가려움, 따가움 및 홍반 등의 현상을 평가하게 하였다. 평가는 매우 우수(5점), 우수(4점), 보통(3점), 나쁨(2점), 매우 나쁨(1점)의 오점법 기준에 의거하여 수행하였으며, 그 결과를 하기 표 12에 나타내었다. 표 12에서 피부자극은 피부자극이 없는 정도를 나타낸다.In the sensory test, the whitening effect of skin was evaluated based on the nutrition cream of Formulation Comparative Example 4, and the whitening effect of the nutrition cream of Formulation Example 4 was relatively evaluated. And phenomena such as erythema. Evaluation was performed based on the five-point standard of very good (5 points), excellent (4 points), moderate (3 points), bad (2 points), very bad (1 point), the results are shown in Table 12 Indicated. In Table 12, the skin irritation indicates the degree of no skin irritation.

번호number 피부자극Skin irritation 미백효과Whitening effect 제형 실시예 4Formulation Example 4 제형 비교예 4Formulation Comparative Example 4 1One 44 55 55 22 55 55 55 33 55 44 55 44 33 44 44 55 44 44 55 66 55 55 55 77 44 44 44 88 44 44 44 99 55 55 55 1010 44 44 44 1111 55 55 55 1212 55 55 55 1313 33 44 44 1414 44 44 44 1515 55 44 44 1616 44 44 44 1717 55 55 55 1818 55 55 55 1919 55 55 55 2020 44 44 44 평균Average 4.404.40 4.454.45 4.554.55

상기 표 12에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 제형 실시예 4의 화장료 조성물에 대한 피부자극 평가점수는 4.40점으로 매우 양호하게 평가되어, 제형 비교예 4와 마찬가지로 피부자극 정도가 낮아 피부 안전성이 우수함을 확인할 수 있었다. 또한, 제형 비교예 4 대비 제형 실시예 4의 화장료 조성물이 가진 상대적인 피부의 미백효과는 평가점수 4.55점으로 개선 정도가 매우 우수함을 알 수 있었다.As shown in Table 12, the skin irritation evaluation score for the cosmetic composition of the formulation of Example 4 according to the present invention was evaluated very good as 4.40, the skin irritation degree is low as in Comparative Formulation Example 4 is excellent skin safety Could confirm. In addition, the relative skin whitening effect of the cosmetic composition of Formulation Example 4 compared to Formulation Comparative Example 4 was found to be very excellent in the degree of improvement to an evaluation score of 4.55.

<실험예 6> 피부의 안전성 실험Experimental Example 6 Skin Safety Experiment

상기 지표성분 함량조절 실시예 4에 따른 미백추출물과 제형 실시예 4에 대한 피부 안전성, 즉 피부반응의 관찰을 통해서 자극 혹은 알레르기성 반응의 발생 여부를 알아보기 위하여 한국식품의약품안전청 기준 피부안전성 검사법에 따라 인체첩포시험을 실시하였다.In order to determine the occurrence of irritation or allergic reactions by observing the skin safety, that is, the skin reaction for the whitening extract and the formulation example 4 according to the indicator component content control Example 4, the skin safety test method of the Korea Food and Drug Administration According to the human patch test.

피험자로 20세 이상 50세 이하의 건강한 성인 남, 여 30명을 선정하였고, 첩포시험은 대상자 상박 내측에 첩포를 부착하였으며 48시간이 지난 후 첩포를 제거하였다. 약 60분간 안정을 취하도록 한 후 첫 판독을 시행하였고, 첩포 부착 후 96시간이 경과한 후 2차 판독을 시행하였다. 판정기준은 하기 표 13에 나타낸 바와 같다.Thirty healthy men and women aged twenty to fifty were selected as subjects. The patch test was carried out on the inner side of the subject's upper arm and the patch was removed after 48 hours. The first reading was performed after about 60 minutes of stability, and the second reading was taken after 96 hours of patch application. Criteria are as shown in Table 13 below.

반응reaction 가중치weight 판정의 기준Criteria of Judgment -- 00 무반응No response ±± 0.50.5 희미한 홍반Faint erythema ++ 1One 경계가 뚜렷하나 약한 홍반, 부종 및 구진Boundary but weak erythema, edema and papules ++++ 22 뚜렷한 홍반, 구진 및 수포Pronounced erythema, papules and blisters

첩포 부착 후 48시간과 96시간에 판독한 결과를 하기 수학식 5를 이용하여 시료에 대한 피부 반응도로 산출하였다.The results read at 48 hours and 96 hours after patch application were calculated using the following equation (5).

Figure 112008006517315-pat00006
Figure 112008006517315-pat00006

첩포시험의 검사 결과에 근거하여 계산된 양성 반응을 보인 시료의 피부 자극도를 하기 표 14에 나타내었다.The skin irritation degree of the sample showing the positive response calculated based on the test result of the patch test is shown in Table 14 below.

시료sample 48시간48 hours 96시간96 hours 반응도(%)Responsiveness (%) ++ ++++ ++ ++++ 48시간48 hours 96시간96 hours 평균Average 지표성분 함량조절 실시예 4 (0.2% in 증류수)Indicator component content control Example 4 (0.2% in distilled water) -- -- -- -- 0.000.00 0.000.00 0.000.00 지표성분 함량조절 실시예 4 (1.0% in 증류수)Indicator component content control Example 4 (1.0% in distilled water) -- -- -- -- 0.000.00 0.000.00 0.000.00 제형 실시예 4Formulation Example 4 -- -- -- -- 0.000.00 0.000.00 0.000.00

상기 표 14에 제시된 바와 같이, 각각의 지표성분 함량조절 실시예 4와 제형 실시예 4는 인체첩포시험에서 하기 표 15에 따른 피부 반응도 판정 기준에 의하면 무자극으로 민감한 피부에 사용해도 좋은 결과로 나타났다. 따라서 상기 추출 실시예들에 따른 오가피 추출물은 천연물로서 피부부작용이 없는 안전한 성분으로 나타났다.As shown in Table 14, each of the indicator component content control Example 4 and Formulation Example 4 according to the skin reactivity test criteria according to Table 15 in the human patch test was found to be good results for use on sensitive skin without irritation . Therefore, the extract of Ogapi according to the extraction examples appeared as a safe ingredient with no skin side effects as a natural product.

피부의 평균 반응도Average responsiveness of the skin 판정 기준Criteria 0.0 ∼ 0.90.0 to 0.9 무자극Non-irritating 1.0 ∼ 2.91.0 to 2.9 경자극Light stimulation 3.0 ∼ 4.93.0 to 4.9 중자극Heavy stimulation 5.0 이상5.0 or more 강자극Strong stimulation

Claims (3)

오가피(Acanthopanacis Cortex)를 분쇄하는 단계; 오가피를 70 내지 85% 에탄올 수용액으로 상온 또는 냉침 추출하는 단계; 추출여액을 20 내지 50℃에서 감압농축하여 조추출물을 얻는 단계; 조추출물을 이온수지컬럼크로마토그래피에 충진시킨 후 순차적으로 에탄올의 함량을 10 내지 60%로 높여가며 에탄올 수용액으로 용출하여 각 분획을 수득하는 단계; 및 상기 수득된 분획 중 10 내지 40% 에탄올 수용액 분획을 조합하는 단계를 통하여 제조된 오가피(Acanthopanacis Cortex) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.Milling the Acanthopanacis Cortex; Extracting room temperature or cold extraction with 70-85% ethanol aqueous solution; Concentrating the extraction filtrate at 20 to 50 ℃ to obtain a crude extract; Filling the crude extract with ion resin column chromatography and sequentially increasing the content of ethanol to 10 to 60% and eluting with an aqueous ethanol solution to obtain each fraction; And a cosmetic composition for skin whitening containing the extract of Acanthopanacis Cortex prepared through the step of combining a 10 to 40% ethanol aqueous solution fraction of the obtained fraction as an active ingredient. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 화장수, 에센스, 스킨, 로션, 크림, 팩, 파운데이션 및 메이크업베이스로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.According to claim 1, wherein the composition is a cosmetic composition for skin whitening, characterized in that any one selected from the group consisting of lotion, essence, skin, lotion, cream, pack, foundation and makeup base. (S1) 오가피(Acanthopanacis Cortex)를 분쇄하는 단계;(S1) crushing the Acanthhopanacis Cortex; (S2) 오가피를 70 내지 85% 에탄올 수용액으로 상온 또는 냉침 추출하는 단계;(S2) a step of extracting room temperature or cold extraction with 70-85% ethanol aqueous solution; (S3) 추출여액을 20 내지 50℃에서 감압농축하여 조추출물을 얻는 단계;(S3) extracting the filtrate under reduced pressure at 20 to 50 ° C. to obtain a crude extract; (S4) 조추출물을 이온수지컬럼크로마토그래피에 충진시킨 후 순차적으로 에탄올의 함량을 10 내지 60%로 높여가며 에탄올 수용액으로 용출하여 각 분획을 수득하는 단계; 및(S4) filling the crude extract with ion resin column chromatography and sequentially increasing the content of ethanol to 10 to 60% and eluting with an aqueous ethanol solution to obtain each fraction; And (S5) 상기 수득된 분획 중 10 내지 40% 에탄올 수용액 분획을 조합하는 단계를 (S5) combining the 10 to 40% ethanol aqueous solution fraction of the obtained fractions 포함하는 것을 특징으로 하는 오가피(Acanthopanacis Cortex) 추출물의 미백 효과를 증진하는 방법.Method for enhancing the whitening effect of the extract (Acanthopanacis Cortex), characterized in that it comprises.
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