KR100825450B1 - Skin anti-wrinkle cosmetics composition containing Forsythiae Fruit extract - Google Patents

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Abstract

본 발명은 피부 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 연교추출물, 보다 바람직하게는, 마타이레시놀, 악티게닌 또는 이들의 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따른 피부 주름개선용 화장료 조성물은 피부 주름개선과 관련된 항산화, 피부세포증식, 콜라겐합성 및 콜라게나아제 발현저해에서 우수한 효과를 발휘함으로써 피부 주름개선에 매우 효과적일 뿐만 아니라, 피부에 적용시 부작용이 없어 매우 안전하다.The present invention relates to a cosmetic composition for improving skin wrinkles, characterized in that it comprises a soft extract, more preferably, matyrethinol, actinigen or a mixture thereof. The cosmetic composition for skin wrinkle improvement according to the present invention exhibits excellent effects in antioxidant, skin cell proliferation, collagen synthesis and collagenase expression related to skin wrinkle improvement and is very effective for skin wrinkle improvement, when applied to skin. It is very safe with no side effects.

연교추출물, 마타이레시놀, 악티게닌, 주름개선 Duct Extract, Matyr Resinol, Actigenin, Wrinkle Improvement

Description

연교추출물을 함유하는 피부 주름개선용 화장료 조성물{Skin anti-wrinkle cosmetics composition containing Forsythiae Fruit extract}Skin anti-wrinkle cosmetics composition containing Forsythiae Fruit extract}

본 발명은 피부 적용시 안전하고, 피부 주름개선 효과가 뛰어난 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition that is safe in skin application and has an excellent skin wrinkle improvement effect.

피부는 다양한 외부자극과 접하는 기회가 많기 때문에 다른 기관들에 비해 주름이 발생하기 쉽다. 그 중에서도 얼굴 피부는 태양광선, 건조 외기 및 공해 물질 등에 직접적으로 노출되어 있어 그렇지 않은 피부보다 주름 등의 노화현상이 조기에 발생한다. The skin has many opportunities for contact with a variety of external stimuli, making wrinkles more prone than other organs. Among them, facial skin is directly exposed to sunlight, dry air, and pollutants, so that aging such as wrinkles occurs earlier than skin that is not.

피부조직의 노화에 따른 가장 특징적인 변화는 피부기질(matrix)의 변화로서, 진피층에 있는 섬유아세포(human skin fibroblast)가 노화되어 섬유질과 기질의 생성능력이 줄어들게 된다. 기질의 양이 전반적으로 감소하여 피부의 두께가 얇아지며 피부의 탄력을 저하시켜 주름이 형성된다. 즉, 노화가 진행됨에 따라 피부는 탄력성의 저하, 혈액순환의 장애, 피부 장벽의 약화 등이 심해지게 된다.The most characteristic change due to the aging of the skin tissue is a change in the matrix (matrix), the aging of the human skin fibroblast (human skin fibroblast) is reduced the ability to produce fibers and substrates. The overall amount of substrate decreases, making the skin thinner and reducing the elasticity of the skin, forming wrinkles. In other words, as aging progresses, the skin becomes less elastic, impaired blood circulation, and weakened skin barriers.

이와 함께, 피부가 자외선에 노출되면 피부세포 손상의 주원인인 자유라디칼(free radical)과 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)이 생성된다. 이들 은 DNA의 손상을 유발하고, 세포막구조를 공격하여 노화반점을 발생시키며 피부를 촉촉하고 부드러우며 유연하게 탄력을 유지시키는 교원질과 섬유질을 공격하여 주름생성을 가속화할 수도 있다.In addition, when the skin is exposed to ultraviolet rays, free radicals and reactive oxygen species (ROS), which are the main causes of skin cell damage, are produced. They can also damage wrinkles by attacking collagen and fibers that cause DNA damage, attack cell membranes, create aging spots, and moisturize, soften, and flexibly maintain skin.

이러한 외부환경 또는 내부기작에 의하여 발생하는 피부 주름을 줄이기 위하여 많은 화장품이 연구되고 있다. 최근 화장품 개발에 있어 천연물을 이용하여 피부에 영양을 공급하고, 화학적 합성에 의한 화장품이 피부에 미치는 독성 작용을 최소화하면서 부작용을 줄이고, 피부의 각종 증상을 치료하는 효과까지 갖춘 순수 한방 처방을 이용한 한방 화장품 개발에 대한 관심이 높아지고 있다.Many cosmetics have been studied to reduce skin wrinkles caused by such external environment or internal mechanism. In the recent development of cosmetics, natural herbal products are used to provide nutrition to the skin, minimize the toxic effects of cosmetics by chemical synthesis, reduce side effects, and treat the various symptoms of the skin. There is a growing interest in cosmetic development.

따라서 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 피부 부작용을 초래하지 않으면서, 피부 주름개선을 검정하는 항산화, 세포증식, 콜라겐합성 및 콜라게나아제 발현저해의 효과가 있어 피부 주름개선에 유용한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Therefore, the technical problem to be achieved by the present invention is to provide a cosmetic composition that is useful for skin wrinkle improvement due to the effects of antioxidant, cell proliferation, collagen synthesis, and collagenase expression inhibiting skin wrinkle improvement without causing skin side effects will be.

상기 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 연교(Forsythia Fruit)추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.In order to achieve the above technical problem, the present invention provides a cosmetic composition for improving skin wrinkles, comprising a Forsythia Fruit extract.

바람직하게, 본 발명은 마타이레시놀(matairesinol), 악티게닌(arctigenin) 또는 이들의 혼합물을, 보다 바람직하게는, 마타이레시놀을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.Preferably, the present invention provides a cosmetic composition for improving skin wrinkles, which comprises matairesinol, actigenin, or a mixture thereof, more preferably matairesinol.

보다 바람직하게, 본 발명은 상기 화장료 조성물에 있어 마타이레시놀, 악티 게닌 또는 이들의 혼합물의 총 함량이 화장료 조성물 총 중량 대비 0.001 내지 10중량%인 것을 특징으로 하는 피부 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.More preferably, the present invention provides a cosmetic composition for improving skin wrinkles, characterized in that the total content of matyresinol, actigenin or a mixture thereof in the cosmetic composition is 0.001 to 10% by weight relative to the total weight of the cosmetic composition. .

본 발명은 또한 연교추출물을 산 또는 효소로 처리하여 피부 주름개선 활성성분의 함량이 증가한 연교추출물을 제조하는 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for producing a soft duct extract having an increased content of the active ingredient for skin wrinkle improvement by treating the soft duct extract with an acid or an enzyme.

이하, 본 발명의 피부 주름개선용 화장료 조성물에 대하여 보다 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the cosmetic composition for improving skin wrinkles of the present invention will be described in more detail.

본 발명은 연교추출물, 특히 연교에 함유되어 있는 마타이레시놀 및/또는 악티게닌이 안전하면서도 피부 주름개선에 유용하다는 놀라운 발견에 기초한다.The present invention is based on the surprising finding that duct extracts, in particular matyrethinol and / or actinigen contained in ducts, are safe and useful for skin wrinkle improvement.

본 발명의 연교(連翹, Forsythia Fruit)는 물푸레나무과(Oleaceae)에 속하는 의성개나리(Forsythia viridissima L.)의 열매이다. 열매는 좁은 계란형이고 끝에는 짧은 부리가 있으며 완전히 익었을 때는 2조각으로 갈라진다. 통상적으로 열매가 익었을 때 채취하여 햇볕에 말려 사용한다. Forsythia fruit of the present invention is a fruit of Forsythia viridissima L. belonging to the family Oleaceae ( Oleaceae ). Fruits are narrow egg-shaped, with short beak at the end, and split into 2 pieces when fully cooked. Usually, when the fruit is ripe, pick it up and dry it in the sun.

이러한 연교는 한방에서 소염, 배농 피부질환제로 사용되어 왔으며, 티로시나아제(tyrosinase) 저해제로서 멜라닌합성을 저해하는 효과 및 α-멜라노사이트 자극호르몬(α-MSH)에 의해 유발되는 멜라닌 대사 경로에 작용하여 멜라닌생성을 제어하는 효과가 있어 미백화장품 소재로 주목을 받고 있다. 또한 암 치료용 의약품으로 이용될 수 있음이 알려져 있다.These associations have been used as anti-inflammatory and drainage skin diseases in oriental medicine, and as a tyrosinase inhibitor, inhibit the melanin synthesis and act on melanin metabolic pathways induced by α-melanosite stimulating hormone (α-MSH). It has the effect of controlling melanogenesis and is attracting attention as a material for whitening cosmetics. It is also known that it can be used as a medicine for treating cancer.

이와 같이 연교는 식품, 화장품 및 의약품의 신소재로 다양하게 활용되고 있으나, 이러한 연교추출물의 주름개선 효과 및 연교추출물을 함유하는 피부 주름개선용 화장료 조성물에 대해서는 아직까지 알려지지 않았다. 이에 본 발명자들은 연 교추출물이 가지는 피부 주름개선과 관련된 항산화, 피부세포증식, 콜라겐합성 및 콜라게나아제 발현저해 효과를 평가하여 본 발명을 완성하였다.As described above, yeonkyo is widely used as a new material for food, cosmetics, and medicines, but it is not known about the cosmetic composition for improving wrinkles and skin wrinkles containing such yeonkyo extract. Accordingly, the present inventors completed the present invention by evaluating antioxidant, skin cell proliferation, collagen synthesis, and collagenase expression inhibitory effects associated with skin wrinkle improvement.

상기 여러 가지 평가 실험결과 연교에서 추출 및 분리된 물질들 중에서 마타이레시놀, 악티게닌 또는 이들의 혼합물이 피부 주름개선에 더욱 효과적이었으며, 특히 마타이레시놀의 효과가 콜라겐합성 등에 있어 가장 바람직하였다.As a result of the various evaluation experiments, among the substances extracted and separated from the ducts, matyr Resinol, Actigenin or mixtures thereof were more effective in improving skin wrinkles, and in particular, the effect of Matyr Resinol was the most preferable for collagen synthesis.

이러한 마타이레시놀 및/또는 악티게닌은 본 발명이 속한 분야에서 통상적으로 사용되는 추출, 분리 및 정제방법을 통하여 연교로부터 얻을 수 있으나, 본 발명이 속한 분야에서 통상적으로 알려진 화학적 합성법을 통해서도 제조될 수 있다.Such matairesinol and / or actinigen can be obtained from the duct via the extraction, separation and purification methods commonly used in the field of the present invention, but may also be prepared through chemical synthesis methods commonly known in the art. have.

본 발명은 또한 연교추출물을 산 또는 효소 글리코시다제로 처리하여 피부 주름개선 활성성분이 다량 함유된 연교추출물을 제조하는 방법을 제공한다. 즉, 연교추출물에 포함된 배당체들을 산 또는 효소로 처리하여 피부 주름개선 효과가 탁월한 비배당체인 마타이레시놀 및/또는 악티게닌의 함량을 증가시킬 수 있다.The present invention also provides a method for preparing a soft extract extract containing a large amount of the active ingredient for skin wrinkle improvement by treating the soft extract with acid or enzyme glycosidase. That is, by treating the glycosides contained in the soft-core extract with an acid or an enzyme, it is possible to increase the content of matairesinol and / or actinigen, which are non-glycosides excellent in skin wrinkle improvement.

상기 화장료 조성물에 함유되는 마타이레시놀 및/또는 악티게닌의 총 함량은 화장료 조성물 총 중량 대비 0.001 내지 10중량%인 것이 바람직하다. 상기 활성성분의 함량이 0.001중량% 미만인 경우에는 본래 목적하는 피부의 주름개선효과를 충분하게 달성할 수 없어 바람직하지 못하며, 함량이 10중량%를 초과하는 경우에는 화장료의 안정성에 문제를 발생시킬 수 있고, 이로 인하여 화장료의 외관이나 사용시 충분한 화장효과를 발현시킬 수 없는 단점이 있다.It is preferable that the total content of matyrethinol and / or actinigen contained in the cosmetic composition is 0.001 to 10% by weight based on the total weight of the cosmetic composition. If the content of the active ingredient is less than 0.001% by weight, it is not preferable to achieve a sufficient wrinkle improvement effect of the original desired skin, if the content exceeds 10% by weight may cause problems in the stability of the cosmetic And, due to this there is a disadvantage that can not express a sufficient cosmetic effect when using or cosmetics.

본 발명은 상기 화장료 조성물이 화장수류, 에센스류, 스킨류, 로션류, 크림류, 팩류, 파운데이션류 및 메이크업베이스류로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 피부 주름개선용 화장료 조성물을 제공하며, 또한 상기 연교추출물 함유 화장료 조성물이 기초제품 화장료 또는 색조제품 화장료의 제조에 이용되는 것을 특징으로 하는 피부 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다. 또한 본 발명의 화장료 조성물은 액상, 크림상, 페이스트상 및 고체상 등 다양한 성상으로 적용이 가능하며, 통상적인 화장료 제조법을 이용하여 제조될 수 있다.The present invention is a cosmetic composition for improving skin wrinkles, characterized in that any one selected from the group consisting of cosmetics, essences, skins, lotions, creams, packs, foundations and makeup bases In addition, it provides a cosmetic composition for improving skin wrinkles, characterized in that the soft extract extract-containing cosmetic composition is used in the manufacture of a basic product cosmetics or color cosmetics. In addition, the cosmetic composition of the present invention can be applied in various forms such as liquid, cream, paste and solid, and can be prepared using a conventional cosmetic preparation method.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위하여 하기 실시예 등을 들어 설명한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며 본 발명의 범위가 아래에서 상술하는 실시예들에 한정되는 것으로 해석돼서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 본 발명의 구체적 이해를 돕기 위해 예시적으로 제공되는 것이다.Hereinafter, the following examples and the like will be described in order to describe the present invention in more detail. However, embodiments according to the present invention can be modified in many different forms and the scope of the present invention should not be construed as being limited to the embodiments described below. Embodiments of the present invention are provided by way of example in order to facilitate a specific understanding of the present invention.

<추출 실시예 1 내지 4><Extraction Examples 1 to 4>

경북 의성에서 재배되고 있는 의성개나리(Forsythia viridissima Lindley)를 영천 약재시장에서 직접 구입하여 사용하였다.It surname is grown in North Gyeongsang castle forsythia (Forsythia viridissima Lindley was purchased directly from the Yeongcheon Herb Market.

연교로부터 4가지 리그난 화합물의 추출, 분리 및 정제는 다음과 같이 실시하였다. 조분쇄한 건조 연교(300 g)에 80% 에탄올수용액(2 L)을 가한 후 열수추출하여 에탄올 조추출물(31.2 g)을 얻었다. 이것을 80% 에탄올수용액(1 L)로 다시 재용해한 후 동량의 n-헥산, 에테르 및 n-부탄올의 혼합물을 사용하여 분획 농축하여 에테르추출물(1.4 g)과 n-부탄올추출물(6.2 g)을 각각 얻었다.Extraction, separation and purification of the four lignan compounds from Yeongyo were carried out as follows. 80% ethanol aqueous solution (2 L) was added to the coarsely pulverized dry bridge (300 g), followed by hot water extraction to obtain an ethanol crude extract (31.2 g). The solution was redissolved again with 80% ethanol aqueous solution (1 L), and then concentrated using an equal amount of a mixture of n-hexane, ether, and n-butanol to obtain an ether extract (1.4 g) and n-butanol extract (6.2 g). Respectively obtained.

다음, 에테르 분획물은 silica gel 60 (70~230 mesh, Merck, 독일)을 이용하 여 클로르포름-에탄올(5:1, v/v) 혼합용매로 칼럼크로마토그래피를 실시하여 4개의 분획(Fr.1, Fr.2, Fr.3, Fr.4)으로 나누었다. 다음, Fr.2를 에탄올에 녹인 후 100% 에탄올을 이동상으로 하여 Sephadex LH-20 (Pharmacia, 스웨덴) 칼럼크로마토그래피를 실시하여 200개 분획으로 나누어 용출하였다. 다음, 분리된 모든 분획을 photo-diode array UV-VIS spectrophotometer (S1100, Scinco, Co., 한국)를 사용하여 자외선흡수스펙트럼을 측정한 후 흡수스펙트럼이 동일한 분획 중 유용성분이 검출된 분획(분획 51~65, 분획 80~95)에서 미황색의 무정형 악티게닌(17 mg; 추출 실시예 1))과 마타이레시놀(14 mg; 추출 실시예 2)을 각각 얻었다.Next, ether fractions were subjected to column chromatography with chloroform-ethanol (5: 1, v / v) mixed solvent using silica gel 60 (70-230 mesh, Merck, Germany) to obtain four fractions (Fr.1). , Fr.2, Fr.3, and Fr.4). Next, Fr. 2 was dissolved in ethanol, and 100% ethanol was used as a mobile phase to conduct a Sephadex LH-20 (Pharmacia, Sweden) column chromatography. Next, all separated fractions were measured for UV absorption spectra using a photo-diode array UV-VIS spectrophotometer (S1100, Scinco, Co., Korea), and then fractions where useful components were detected among the fractions having the same absorption spectrum (fraction 51 ~ 65, fractions 80-95) were pale yellow amorphous actigenin (17 mg; extraction example 1)) and matairesinol (14 mg; extraction example 2), respectively.

다음, n-부탄올 분획물을 클로르포름-에탄올(3:1, v/v) 혼합용매에 녹이고 같은 용매를 사용하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 실시하여 7개의 분획으로 나누었다(Fr.1, Fr.2, Fr.3, Fr.4, Fr.5, Fr.6, Fr.7). 다음, Fr.2 및 Fr.4를 에탄올로 녹이고 100% 에탄올을 이동상으로 하여 Sephadex LH-20 칼럼크로마토그래피를 실시하여 Fr.2 및 Fr.4로부터 악틴(actiin, 450 mg; 추출 실시예 3) 및 마타이레시노사이드(matairesinoside, 150 mg; 추출 실시예 4)를 각각 순수하게 분리하였다. 각 실시예에 따른 연교추출물의 수득량을 하기 표 1에 나타내었다. Next, the n-butanol fraction was dissolved in chloroform-ethanol (3: 1, v / v) mixed solvent and subjected to silica gel column chromatography using the same solvent, and divided into seven fractions (Fr. 1, Fr. 2, Fr. 3, Fr. 4, Fr. 5, Fr. 6, Fr. 7). Next, Fr.2 and Fr.4 were dissolved in ethanol and Sephadex LH-20 column chromatography was performed with 100% ethanol as a mobile phase to actin (actiin, 450 mg; extraction Example 3) from Fr.2 and Fr.4. And matairesinoside (150 mg; extraction example 4) were each isolated purely. The yield of the soft-core extract according to each example is shown in Table 1 below.

추출 실시예Extraction Example 리그난화합물Lignan Compound 수득량Yield 1One 악티게닌Actigenin 17 mg17 mg 22 마타이레시놀Matai Resinol 14 mg14 mg 33 악틴Actin 450 mg450 mg 44 마타이레시노사이드Mata Leishinoside 150 mg150 mg

<추출 실시예 5 내지 6><Extraction Examples 5 to 6>

연교로부터 리그난화합물(악티게닌, 마타이레시놀)의 효소처리에 의한 분리 및 정제는 다음과 같이 실시하였다. Separation and purification of the lignan compound (actininine, matyrethinol) by enzymatic treatment from Yeongyo was carried out as follows.

건조한 연교 100 g에 80% 에탄올수용액 1 L을 가하여 70~80℃에서 12시간 가열추출한 후 여과하였다. 상기 추출과정을 2회 반복 실시하여 연교 에탄올추출액(300 g)을 얻었다. 이것을 80% 에탄올수용액으로 다시 용해한 후 n-헥산 300 mL을 가하고 분획하여 상층액의 지방과 색소를 제거하고 하층을 농축하여 연교 탈지 에탄올추출액(18 g)을 얻었다. 이것을 다시 90% 에탄올수용액 100 mL로 용해하고 여과 및 농축하여 연교추출물(15 g)을 얻고, 이 중 5 g을 10% 에탄올수용액 100 mL로 용해시켰다. 여기에 효소로서 펙티넥스(Pectinex, Novozymes, 덴마크)를 가하여 50~60℃에서 1시간 교반하면서 가수분해처리 후, 방냉하고 미리 40% 에탄올수용액으로 평형화시켜 놓은 Diaion HP-20 이온수지(Mistubishi Chem. Co., Japan) 칼럼에 충진시킨 후 순차적으로 40%, 60%, 80% 에탄올수용액 및 100% 에탄올로 각각 용출하였다. 이때, 80% 에탄올수용액으로 용출되는 부분을 두 분획으로 나누어 감압농축시켜 정제분말I(0.13 g)과 정제분말II(0.12 g)을 각각 얻었다. 다음 이들 분말을 100% 에탄올을 사용하여 Sephadex LH-20로 분리하여 마타이레시놀 106.83 mg과 악티게닌 120.2 mg을 각각 얻었다. 다음, 나머지 탈지 연교에탄올추출물 10 g을 위의 과정과 동일하게 2회 반복하여 최종 마타이레시놀(320.5 mg; 추출 실시예 5)과 악티게닌(360.6 mg; 추출 실시예 6)을 각각 얻었다. 각 실시예에 따른 연교추출물의 수득량을 하기 표 2에 나타내었다.1 L of 80% ethanol aqueous solution was added to 100 g of dry soft bridge, followed by heating and extraction at 70-80 ° C. for 12 hours, followed by filtration. The extraction process was repeated twice to obtain ductile ethanol extract (300 g). The resultant was dissolved again in an aqueous 80% ethanol solution, n-hexane 300 mL was added and fractionated to remove fat and pigment from the supernatant, and the lower layer was concentrated to obtain a duct degreasing ethanol extract (18 g). This was again dissolved in 100 mL of 90% ethanol aqueous solution, filtered and concentrated to obtain a soft extract (15 g), of which 5 g was dissolved in 100 mL of 10% ethanol aqueous solution. Pectinex (Pectinex, Novozymes, Denmark) was added thereto as an enzyme, followed by hydrolysis while stirring at 50-60 ° C. for 1 hour, followed by cooling and equilibrating with 40% ethanol aqueous solution (Mistubishi Chem. Co., Japan) column was eluted sequentially with 40%, 60%, 80% ethanol aqueous solution and 100% ethanol, respectively. At this time, the part eluted with 80% ethanol aqueous solution was divided into two fractions and concentrated under reduced pressure to obtain purified powder I (0.13 g) and purified powder II (0.12 g), respectively. These powders were then separated with Sephadex LH-20 using 100% ethanol to give 106.83 mg of matyrethinol and 120.2 mg of actinigen, respectively. Next, 10 g of the remaining skim-bridged ethanol extract was repeated twice in the same manner as in the above procedure to obtain final matyrethinol (320.5 mg; extraction example 5) and actigenin (360.6 mg; extraction example 6), respectively. The yield of soft-bridge extracts according to each example is shown in Table 2 below.

추출 실시예Extraction Example 리그난화합물Lignan Compound 수득량Yield 55 악티게닌Actigenin 320.5 mg320.5 mg 66 마타이레시놀Matai Resinol 360.6 mg360.6 mg

상기 표 1 및 2의 결과로부터, 리그난화합물의 추출과정에 있어 효소 처리를 함으로써 활성형 피토에스트로겐인 비배당체가 매우 높은 농도로 얻어짐을 알 수 있었다.From the results of Tables 1 and 2, it can be seen that the nonglycoside that is an active phytoestrogen is obtained at a very high concentration by enzymatic treatment in the extraction process of the lignan compound.

<실험예 1. 항산화효과시험>Experimental Example 1. Antioxidant Effect Test

본 발명의 상기 각 추출 실시예 3 내지 6에서 제조한 연교 추출물 시료들에 대하여 주름개선효과 검정시험으로 항산화효과를 알아보기 위하여 자유라디칼소거시험과 활성산소소거시험을 실시하였다. The free radical elimination test and the active oxygen elimination test were performed to examine the antioxidant effects of the anti-wrinkle effect assay test on the extracts prepared in each of the extraction examples 3 to 6 of the present invention.

자유라디칼소거시험은 Kim 등(Kor. J. Pharmacogn., 24(4), 299~303, 1993)의 방법을 변형한 것으로, 안정한 자유라디칼인 DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical)을 이용하였다. 0.2 mM DPPH 용액 1 mL에 상기 추출 실시예 3 내지 6에 따라 수득된 각각의 추출 시료를 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 2 mL 혼합하고, 실온에서 10분간 방치한 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료용액 대신 메탄올을 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, DPPH 용액 대신 메탄올을 이용하여 추출 시료 및 대조군 각각에 대한 색 보정값을 얻었다.Free radical scavenging test is a modification of the method of Kim et al. (Kor. J. Pharmacogn., 24 (4), 299 ~ 303, 1993), which is a stable free radical DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical) Was used. Each extract sample obtained according to the extraction examples 3 to 6 in 1 mL of 0.2 mM DPPH solution was diluted with methanol in an appropriate concentration, mixed in 2 mL, and allowed to stand at room temperature for 10 minutes, and then absorbance was measured at 517 nm. The control group was measured in the same manner by adding methanol instead of the sample solution, and using the methanol instead of DPPH solution to obtain a color correction value for each of the extracted sample and the control.

하기 수학식 1을 이용하여 자유라디칼소거율을 수치로 계산하여 하기 표 3에 나타내었다. 하기 표 3에서, IC50은 자유라디칼소거율 50%를 달성하기 위해 소요되는 시료의 농도로서 다른 성분물질과 상대적으로 비교할 때 사용하는 수치로서 값이 작을수록 소거율이 높음을 나타낸다. By using the following equation 1 to calculate the free radical removal rate as a numerical value is shown in Table 3 below. In Table 3, IC 50 is the concentration of the sample required to achieve 50% free radical scavenging ratio, which is a numerical value used in comparison with other component substances.

활성산소소거실험은 Noro 등(Chen. Pharm. Bull., 31, 3984~3987, 1983)의 방법을 변형한 것으로, 잔틴/잔틴옥시다제(xanthine/xanthine oxidase) 효소반응에 의한 활성산소 발생계를 이용하여 활성산소에 의한 니트로 블루 테트라졸리움(NBT, nitroblue tetrazolim)의 산화에 의한 흡광도의 변화를 측정하였다. The active oxygen scavenging experiment is a modification of the method of Noro et al. (Chen. Pharm. Bull., 31, 3984 ~ 3987, 1983), and the active oxygen generation system by xanthine / xanthine oxidase enzyme reaction The change of absorbance due to oxidation of nitroblue tetrazolim (NBT) by active oxygen was measured.

Na2CO3 2.4 mL, 잔틴 0.1 mL, EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) 0.1 mL, BSA (bovine serum albumin) 0.1 mL, NBT 0.1 mL 및 시료 0.1 mL을 넣고 잘 혼합하여 25℃에서 10분간 정치하였다. 잔틴옥시다제 0.1 mL을 넣고 25℃에서 20분간 반응시킨 후, 6 mM CuCl2를 넣어 반응을 정지시켰다. 그 후, 광파장 560 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료용액 대신 정제수를 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, 잔틴옥시다제 용액 대신 정제수를 이용하여 추출 시료 및 대조군 각각에 대한 색 보정값을 얻었다.2.4 mL of Na 2 CO 3 , 0.1 mL of xanthine, 0.1 mL of EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), 0.1 mL of BSA (bovine serum albumin), 0.1 mL of NBT, and 0.1 mL of sample were mixed well and allowed to stand at 25 ° C. for 10 minutes. After adding 0.1 mL of xanthine oxidase and reacting at 25 ° C. for 20 minutes, 6 mM CuCl 2 was added to stop the reaction. Thereafter, the absorbance was measured at an optical wavelength of 560 nm. For the control group, purified water was added instead of the sample solution, and the same method was used. Purified water was used instead of the xanthine oxidase solution to obtain color correction values for each of the extracted sample and the control.

하기 수학식 2를 이용하여 활성산소소거율을 수치로 계산하여 나타내었다. 하기 표 3에서, IC50은 활성산소소거율 50%를 달성하기 위해 소요되는 시료의 농도로서 다른 성분물질과 상대적으로 비교할 때 사용하는 수치로서 값이 작을수록 소거율이 높음을 나타낸다. Using the following equation 2, the oxygen scavenging rate is calculated and shown as a numerical value. In Table 3 below, IC 50 is a concentration of the sample required to achieve 50% of the active oxygen scavenging rate, which is a value used in comparison with other component substances, and the smaller the value, the higher the scavenging ratio.

하기 표 3은 상기 실시예 3 내지 6의 연교 추출 시료와 기존의 합성 항산화제인 디부틸히드록실톨루엔(BHT)과 비타민인 아스코빅산(L-ascorbic acid)과 토코페롤(dl-α-tocopherol)의 항산화효과를 비교하였다.Table 3 shows antioxidants of the duct extracts of Examples 3 to 6 and dibutylhydroxytoluene (BHT), a conventional synthetic antioxidant, and ascorbic acid (L-ascorbic acid) and tocopherol (dl-α-tocopherol), which are vitamins. The effects were compared.

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시료sample 자유라디칼소거능, IC50 (ug/ml)Free radical scavenging, IC 50 (ug / ml) 활성산소소거능, IC50 (mg/ml)Free radical activator, IC 50 (mg / ml) 악틴Actin 60.0660.06 43624362 마타이레시노사이드Mata Leishinoside 40.2540.25 29562956 악티게닌Actigenin 5.755.75 16341634 마타이레시놀Matai Resinol 4.504.50 542542 디부틸히드록실톨루엔Dibutylhydroxytoluene 134.15134.15 > 5000> 5000 아스코빅애씨드Ascorbic Acid 2.902.90 -- 토코페롤Tocopherol 18.30 (0.018 IU)18.30 (0.018 IU) 223 (0.22 IU)223 (0.22 IU)

상기 표 3에서 보는 바와 같이, 상기 추출 실시예 3 내지 6은 합성 항산화제로 알려진 디부틸히드록실톨루엔에 비해 2-200배 정도의 월등한 항산화효과를 나타내었다. 또한 활성형 피토에스트로겐 비배당체인 마타이레시놀과 악티게닌은 배당체인 악틴과 마타이레시노사이드에 비하여 우수한 항산화효과를 보였다.As shown in Table 3, the extraction examples 3 to 6 showed a superior antioxidant effect of about 2-200 times compared to dibutyl hydroxyl toluene, known as a synthetic antioxidant. In addition, the active phytoestrogens nonglycosides, matyrethinol and actigenin, showed superior antioxidant effects compared to the glycosides actin and matyrethinoside.

전술한 바와 같이, 피부 주름생성을 가속화할 수 있는 자유라디칼과 활성산소종에 대한 소거능을 가졌으므로 연교추출물들은 피부의 주름증가를 지연시키는데 도움이 될 수 있다. 그러나, 항산화 효과만으로 피부의 주름을 개선하는 효과가 있다고 볼 수 없기 때문에 후술하는 평가실험을 하였다.As mentioned above, soft-leaved extracts can help delay the increase of skin wrinkles because they have free radicals and scavenging activity against free radical species that can accelerate skin wrinkle formation. However, since the antioxidant effect alone can not be seen to improve the wrinkles of the skin, the following evaluation experiments were conducted.

<실험예 2. 섬유아세포 증식효과시험>Experimental Example 2. Fibroblast Proliferation Effect Test

본 발명의 상기 각 추출 실시예 3 내지 6에서 제조한 연교 추출 시료들에 대하여 섬유아세포의 증식효과를 확인하기 위해 정상 사람 섬유아세포(normal human fibroblast)에 대한 증식 정도를 시험하였다.In order to confirm the proliferative effect of fibroblasts, the degree of proliferation of normal human fibroblasts was tested on the duct extracts prepared in each of the extraction examples 3 to 6 of the present invention.

본 실험예에 사용된 정상 사람 섬유아세포(Detroit 551, KCLB 10110)는 한국세포주은행으로부터 분양받아 사용하였다. 세포를 10% 소혈청을 첨가한 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium)에 1×104 세포의 밀도로 접종하고 하루 동안 5% CO2, 37℃에서 배양시켰다. 시료를 농도별로 혈청을 함유하지 않은 배지에 희석하여 처리하였다. 1일간 배양 후 세포용 염료(MTT, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)를 첨가한 후, 4시간 동안 더 배양하였다. 염색결정체를 DMSO(dimethy sulfoxide)로 녹여내어 540 nm에서 흡광도를 측정하여 상대 비교하였다. 대조군으로는 시료를 처리하지 않은 배양액을 사용하였다. 하기 수학식 3을 이용하여 세포의 생존능력을 수치로 계산하여 하기 표 4에 나타내었다.Normal human fibroblasts (Detroit 551, KCLB 10110) used in this experimental example were used by the Korea Cell Line Bank. Cells were inoculated at a density of 1 × 10 4 cells in DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) with 10% bovine serum and incubated at 37% for 5% CO 2 for one day. Samples were treated by diluting them in media containing no serum by concentration. After 1 day of incubation, the cell dye (MTT, 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) was added, followed by further incubation for 4 hours. The chromosome crystals were dissolved in dimethy sulfoxide (DMSO) and measured for absorbance at 540 nm for relative comparison. As a control, a culture medium without a sample was used. Using the following equation (3) to calculate the viability of the cell numerical value is shown in Table 4 below.

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추출실시예Extraction Example 세포증식효과Cell proliferation effect 1 ug/mL1 ug / mL 10 ug/mL10 ug / mL 100 ug/mL100 ug / mL 악틴Actin 100.1~102.9100.1-102.9 102.1~102.9102.1-102.9 102.8~105.4102.8-105.4 마타이레시노사이드Mata Leishinoside 100.1~103.1100.1 ~ 103.1 101.5~103.4101.5-103.4 103.2~104.7103.2 ~ 104.7 악티게닌Actigenin 101.1~103.6101.1-103.6 101.6~104.3101.6-104.3 122.1~132.0122.1-132.0 마타이레시놀Matai Resinol 102.0~107.1102.0-107.1 98.9~101.998.9-101.9 114.3~131.1114.3 ~ 131.1 올레아놀릭애씨드Oleanolic acid 97.5~114.497.5-114.4 100.4~120.1100.4 ~ 120.1 93.7~101.793.7-101.7 레티닐팔미테이트Retinyl palmitate 99.1~105.199.1 ~ 105.1 97.3~101.497.3 ~ 101.4 100.2~107.6100.2-107.6

상기 표 4에 나타낸 결과에서와 같이, 본 발명에 따른 연교 추출 시료들은 화장품에서 주름개선에 효능이 있는 것으로 알려진 올레아놀릭애씨드(oleanolic acid) 또는 레티닐팔미테이트(retinyl palmitate)와 비교하여 동등 이상의 섬유아세포 증식효과를 나타내었으며, 비배당체인 추출 실시예 5 및 6의 악티게닌과 마타이레시놀이 가진 섬유아세포에 대한 세포 증식효과가 배당체인 실시예 3 및 4의 악틴과 마타이레시노사이드에 비해 양호하였다. 또한 악티게닌과 마타이레시놀의 세포증식능은 농도 의존적으로 높게 나타남으로써, 섬유아세포의 우수한 세포 증식효과를 확인할 수 있었으며 최종 화장료에 적용시 연교추출에서의 비배당체 농도가 어느 정도 기준 이상이 되어야 함을 시사하였다.As in the results shown in Table 4, the duct extracts according to the present invention is equivalent to or higher than the oleanolic acid (oleanolic acid) or retinyl palmitate known to be effective in wrinkle improvement in cosmetics It showed a blast proliferation effect, and the cell proliferation effect on the fibroblasts having actinogen and matyrethinol extract of the non-glycosides of Example 5 and 6 was better than that of the actin and matairecinoside of the glycosides of Examples 3 and 4 . In addition, the cell proliferation ability of actigenin and matareresinol was high depending on the concentration, indicating that the cell proliferation effect of fibroblasts was excellent and that the non-glycoside concentration in the duct extract should be above a certain level when applied to the final cosmetic. Suggested.

<실험예 3. 콜라겐합성효과 시험>Experimental Example 3. Collagen Synthesis Effect Test

본 발명의 상기 각 추출 실시예 3 내지 6에서 제조한 연교 추출 시료들에 대하여 피부 주름개선의 효과를 검정하는 콜라겐합성능을 섬유아세포의 배양에 의해 측정하였다. 실험예 2와 동일한 사람의 정상 섬유아세포(human normal fibroblast)를 24-웰 마이크로플레이트(24-well micro plate)에 1×105세포/웰의 농도로 접종시키고 37℃, 5% 농도의 CO2 배양기에서 24시간 배양하였다. 상기 추출 실시예 3 내지 6에서 수득한 연교추출물을 농도별로 첨가한 혈청이 함유되지 않은 디엠이엠(DMEM, Jeil Biotechservices) 배지에서 24시간 동안 배양하였다. The collagen synthesis performance of assaying the effect of skin wrinkle improvement on the duct extracts prepared in each of the extraction examples 3 to 6 of the present invention was measured by culturing fibroblasts. Human normal fibroblasts as in Experimental Example 2 were inoculated in a 24-well microplate at a concentration of 1 × 10 5 cells / well, followed by CO 2 at 37 ° C. and 5% concentration. The incubator was incubated for 24 hours. The soft-core extracts obtained in the extraction examples 3 to 6 were incubated for 24 hours in a serum-free DM medium (DMEM, Jeil Biotechservices) medium.

콜라겐합성량은 효소면역측정법(ELISA; enzyme linked immunosorbent assay)을 이용하여 다음과 같이 수행하였다. 24시간 배양한 배리를 96-웰 마이크로플레이트에 분주하여 4℃에서 하룻밤 동안 코팅하였다. 세척 버퍼(PBS; phosphate buffered saline)로 3회 세척하고 블로킹용액(5% skin milk)을 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 블로킹하였다. 블로킹용액을 버리고 세척 버퍼로 3회 세척하고, 일차 항체(rabbit anti-collagen type I)를 PBS에 희석하여 100 ul씩 가하여 37℃에서 90분 동안 반응시켰다. 세척 버퍼로 3회 세척한 다음, 이차 항체(anti-rabbit IgG alkaline phosphatase conjugate)를 PBS에 희석하여 100 ul씩 첨가하여 37℃에서 90분 반응시켰다. 세척 버퍼로 3회 세척 후, 기질용액(alkaline phosphatase substrate solution)을 100 ul씩 넣고 실온에서 발색시킨 후, ELISA reader (EL800, Bio-Tek Instruments, Inc.)를 사용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정값은 아래 수학식 4에 의해 콜라겐합성효과로 나타내었다. 이때 시료를 처리하지 않은 세포 배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다. Collagen synthesis amount was performed using the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) as follows. Barries incubated for 24 hours were dispensed into 96-well microplates and coated overnight at 4 ° C. Washed three times with washing buffer (PBS; phosphate buffered saline) and blocking solution (5% skin milk) was added and blocked for 1 hour at 37 ℃. The blocking solution was discarded and washed three times with a washing buffer, and the primary antibody (rabbit anti-collagen type I) was diluted in PBS, added 100 ul, and reacted at 37 ° C. for 90 minutes. After washing three times with washing buffer, the secondary antibody (anti-rabbit IgG alkaline phosphatase conjugate) was diluted in PBS and added 100 ul each reaction was reacted for 90 minutes at 37 ℃. After washing three times with washing buffer, 100 ul of alkaline phosphatase substrate solution was added and developed at room temperature, and then the absorbance was measured at 405 nm using an ELISA reader (EL800, Bio-Tek Instruments, Inc.). . The measured value was expressed as collagen synthesis effect by Equation 4 below. At this time, the reaction absorbance of the cell culture without the sample was used as a control.

이때 연교추출물의 콜라겐합성효과를 판단하기 위하여 아스코빅애씨드를 비교군으로 설정하여, 각각 3회씩 실시하여 평균값을 구하였다.At this time, in order to determine the collagen synthesis effect of the duct extract, ascorbic acid was set as a comparison group, and the average value was obtained by performing three times each.

하기 표 5에 상기 추출 실시예 3 내지 6으로 수득된 연교추출물의 농도를 달리하여 사용한 실험 결과 및 상기 비교군에 대해 실시한 실험 결과를 나타내었다.Table 5 shows the experimental results and the experimental results performed for the comparative group using different concentrations of the soft bridge extracts obtained in the extraction examples 3 to 6.

Figure 112006046970983-pat00004
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실험물질(ug/ml)Test substance (ug / ml) 콜라겐 합성효과(%)Collagen Synthesis Effect (%) 악틴Actin 0 1 10 50 1000 1 10 50 100 100.0 102.1 102.6 104.7 104.9100.0 102.1 102.6 104.7 104.9 마타이레시노사이드Mata Leishinoside 0 1 10 50 1000 1 10 50 100 100.0 102.3 104.1 105.6 106.4100.0 102.3 104.1 105.6 106.4 악티게닌Actigenin 0 1 10 50 1000 1 10 50 100 100.0 109.0 106.6 114.4 113.6100.0 109.0 106.6 114.4 113.6 마타이레시놀Matai Resinol 0 1 10 50 1000 1 10 50 100 100.0 98.5 103.6 115.1 133.8100.0 98.5 103.6 115.1 133.8 아스코빅애씨드Ascorbic Acid 0 1 10 50 1000 1 10 50 100 100.0 99.2 102.7 107.2 113.5100.0 99.2 102.7 107.2 113.5

상기 표 5에서 보는 바와 같이, 비배당체인 악티게닌은 콜라겐합성효과가 우수한 물질로 알려진 아스코빅애씨드와 비슷한 효과를 보였으며, 특히 마타이레시놀 다른 연교추출물에 비하여 우수하며, 비교군에 비해서도 매우 우수한 효과를 나타내었다.As shown in Table 5, the nonglycoside, actigenin, showed an effect similar to that of ascorbic acid, which is known to be an excellent collagen synthesizing effect. The effect was shown.

<실험예 4. 콜라게나아제(MMP-1) 발현 저해효과 시험>Experimental Example 4. Collagenase (MMP-1) Expression Inhibition Effect Test>

본 발명의 상기 추출 실시예 6에 따라 수득된 연교추출물의 UV-A 조사에 의해 발현이 증가되는 콜라게나아제(MMP-1)의 발현 저해효과를 실험예 3에서 사용한 ELISA 방법으로 실시하였다.The inhibition of expression of collagenase (MMP-1), the expression of which was increased by UV-A irradiation of the soft-leaved extract obtained according to the extraction example 6 of the present invention, was carried out by the ELISA method used in Experimental Example 3.

실험예 2와 동일한 사람의 정상 섬유아세포(human normal fibroblast)를 24-웰 마이크로플레이트에 접종시키고(1×105세포/웰) 37℃, 5% 농도의 CO2 배양기에서 24시간 배양하였다. 자외선 챔버를 이용하여 배양한 섬유아세포에 영향을 주지 않는 범위에서 UV-A를 조사한 후 시료가 첨가된 배지로 교환하여 48시간 배양한 다음 배지를 회수하여 96-웰 마이크로플레이트에 코팅하였다. 블로킹용액을 1시간 동안 처리하여 콜라게나아제가 결합되지 않은 부위를 블로킹하였다. 이차 항체를 다시 90분 정도 반응시킨 후, 일차 항체를 처리하여 37℃에서 90분 반응시킨 다음, 기질용액을 100 ul 첨가하여 발색시켰다. 추출 실시예 6에서 수득한 연교추출물을 농도별로 첨가한 혈청이 함유되지 않은 DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. ELISA reader를 사용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정값은 아래 수학식 5에 의해 콜라게나아제 발현 저해정도를 나타내었다. 이때 시료를 처리하지 않은 세포 배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다. Human normal fibroblasts as in Experimental Example 2 were inoculated into 24-well microplates (1 × 10 5 cells / well) and incubated in a CO 2 incubator at 37 ° C., 5% concentration for 24 hours. After irradiating UV-A in a range that does not affect the fibroblasts cultured using the UV chamber, the sample was incubated for 48 hours by replacing with the medium to which the sample was added, and then the medium was recovered and coated on a 96-well microplate. The blocking solution was treated for 1 hour to block sites where collagenase was not bound. After reacting the secondary antibody for about 90 minutes, the primary antibody was treated and reacted at 37 ° C. for 90 minutes, followed by color development by adding 100 ul of the substrate solution. The duct extract obtained in Extraction Example 6 was incubated in DMEM medium containing no serum added for each concentration for 24 hours. Absorbance was measured at 405 nm using an ELISA reader. The measured value represented the degree of inhibition of collagenase expression according to Equation 5 below. At this time, the reaction absorbance of the cell culture without the sample was used as a control.

이때 연교추출물의 콜라게나아제 발현 저해효과를 판단하기 위하여 올레아놀릭애씨드를 비교군으로 설정하여, 각각 3회씩 실시하여 평균값을 구하였다At this time, in order to determine the inhibitory effect of collagenase expression of duct extract, oleanolic acid was set as a comparison group, and the average value was determined by performing three times each.

Figure 112006046970983-pat00005
Figure 112006046970983-pat00005

실험물질(ug/mL)Test substance (ug / mL) 콜라게나아제 발현 저해효과(%)Collagenase expression inhibitory effect (%) 마타이레시놀Matai Resinol 0 1 100 1 10 100 83.8 64.2100 83.8 64.2 올레아놀릭애씨드Oleanolic acid 0 1 100 1 10 100 76.1 69.3100 76.1 69.3

상기 표 6에서 보는 바와 같이 추출 실시예 6은 콜라게나아제 합성 저해물질로 잘 알려진 올레아놀릭애씨드와 유사한 정도로 콜라게나아제 합성 저해효과를 나타내었다.As shown in Table 6, the extraction example 6 showed an inhibitory effect of collagenase synthesis to a degree similar to oleanolic acid, which is well known as a collagenase synthesis inhibitor.

<제형 실시예 1 및 그 비교예 1><Formulation Example 1 and Comparative Example 1>

상기 추출 실시예 6에 따른 연교추출물을 포함한 영양스킨의 성분구성을 하기 표 7과 같이 구성하여 제조하였다. 이때, 성분함량의 단위는 중량%이다. Component composition of the nutrient skin including the yeonchu extract according to the extraction example 6 was prepared as shown in Table 7. At this time, the unit of component content is weight%.

번호number 성 분ingredient 제형 실시예 1Formulation Example 1 제형 비교예 1Formulation Comparative Example 1 1One 정제수Purified water 잔량Remaining amount 잔량Remaining amount 22 카보머Carbomer 0.050.05 0.050.05 33 하이드록시에칠셀루로오스Hydroxyethyl cellulose 0.050.05 0.050.05 44 부틸렌글라이콜Butylene Glycol 3.03.0 3.03.0 55 글리세린glycerin 2.02.0 2.02.0 66 피이지-1500Fiji-1500 0.50.5 0.50.5 77 에탄올ethanol 4.04.0 4.04.0 88 폴리소르베이트 80Polysorbate 80 0.20.2 0.20.2 99 트리에탄올아민Triethanolamine 0.050.05 0.050.05 1010 방부제antiseptic 미량a very small amount 미량a very small amount 1111 추출 실시예 6에 따른 연교추출물Ducted Extract According to Extraction Example 6 0.20.2

상기 표 7의 성분번호로 구별된 성분 중에서, 먼저 성분 1(정제수)에 성분 2와 3을 교반 분산시킨 후, 성분 4 내지 6을 가하고, 성분 8 내지 10을 성분 7에 용해시킨 물질과 분취된 성분 4에 용해시킨 성분 11을 차례로 가하여 혼합하는 방식으로 제조하였다.Among the components identified by component number in Table 7, components 2 and 3 were first dispersed and dispersed in component 1 (purified water), and then components 4 to 6 were added, and components 8 to 10 dissolved in component 7 and fractionated. Component 11 dissolved in component 4 was added sequentially to prepare a mixture.

상기 제형 실시예 1에 대한 그 비교예 1은 성분 11을 제외한 나머지 성분구성이나 제조방법은 동일하게 진행하여 제조한 것을 설정하였다.Comparative Example 1 for Formulation Example 1, except for component 11, the other components of the composition or manufacturing method was set up to proceed in the same manner.

<제형 실시예 2 및 그 비교예 2><Formulation Example 2 and Comparative Example 2>

상기 추출 실시예 6에 따른 연교추출물을 함유한 영양로션의 성분구성을 하기 표 8과 같이 구성하여 제조하였다. 이때, 성분함량의 단위는 중량%이다. The ingredient composition of the nutrient lotion containing the duct extract according to the extraction example 6 was prepared as shown in Table 8. At this time, the unit of component content is weight%.

번호number 성 분ingredient 제형 실시예 2Formulation Example 2 제형 비교예 2Formulation Comparative Example 2 1One 세테아릴알코올Cetearyl Alcohol 1.01.0 1.01.0 22 글리세릴스테아레이트Glyceryl Stearate 0.70.7 0.70.7 33 폴리소르베이트 60Polysorbate 60 1.21.2 1.21.2 44 소르비탄세스퀴올리에이트Sorbitan sesquioleate 0.30.3 0.30.3 55 세틸옥타노에이트Cetyloctanoate 6.06.0 6.06.0 66 스쿠알란Squalane 4.04.0 4.04.0 77 마카데이나넛오일Macadamia Nut Oil 3.03.0 3.03.0 88 부틸렌글라이콜Butylene Glycol 4.04.0 4.04.0 99 글리세린glycerin 4.04.0 4.04.0 1010 카보머Carbomer 0.150.15 0.150.15 1111 산탄검Xanthan Gum 0.030.03 0.030.03 1212 방부제antiseptic 미량a very small amount 미량a very small amount 1313 정제수Purified water 잔량Remaining amount 잔량Remaining amount 1414 아르기닌Arginine 0.150.15 0.150.15 1515 추출 실시예 6에 따른 연교추출물Ducted Extract According to Extraction Example 6 0.50.5

상기 표 8의 각 성분번호로 구별된 성분 중에서, 먼저 성분 1 내지 7을 70℃의 온도에서 가열 용해시킨 다음, 성분 8 내지 12를 성분 13에 용해 분산시켜 70℃로 가열한 것에 유화한다. 이후, 상기 유화한 것을 성분 14로 중화하고, 56℃의 온도로 냉각한 후, 분취된 성분 8에 용해시킨 성분 15를 가하여 교반하고 실온에서 냉각하여 제조하였다.Among the components identified by each component number in Table 8 above, components 1 to 7 are first dissolved by heating at a temperature of 70 ° C., and then components 8 to 12 are dissolved and dispersed in component 13, and emulsified by heating to 70 ° C. Thereafter, the emulsified product was neutralized with component 14, cooled to a temperature of 56 ° C, and then, component 15 dissolved in the fractionated component 8 was added, stirred, and cooled at room temperature to prepare.

상기 제형 실시예 2에 대한 그 비교예 2는 성분 15인 추출 실시예 5에 따른 연교추출물을 제외한 나머지 성분구성이나 제조방법은 동일하게 진행하여 제조한 것을 설정하였다.Comparative Example 2 with respect to Formulation Example 2, except for the ductile extract according to the extraction example 5 which is component 15, the other components of the composition or manufacturing method was set to proceed in the same manner.

<제형 실시예 3 및 그 비교예 3><Formulation Example 3 and Comparative Example 3>

상기 추출 실시예 6에 따른 연교추출물을 함유한 영양에센스의 성분구성을 하기 표 9와 같이 구성하여 제조하였다. 이때, 성분함량의 단위는 중량%이다. The composition of the nutrient essence containing the duct extract according to the extraction example 6 was prepared as shown in Table 9. At this time, the unit of component content is weight%.

번호number 성 분ingredient 제형 실시예 3Formulation Example 3 제형 비교예 3Formulation Comparative Example 3 1One 정제수Purified water 잔량Remaining amount 잔량Remaining amount 22 카보머Carbomer 0.20.2 0.20.2 33 하이드록시에칠셀루로오스Hydroxyethyl cellulose 0.10.1 0.10.1 44 부틸렌글라이콜Butylene Glycol 8.08.0 8.08.0 55 글리세린glycerin 6.06.0 6.06.0 66 소듐히아루로네이트Sodium hyaluronate 150150 15.015.0 77 에탄올ethanol 4.04.0 4.04.0 88 폴리옥시에칠렌경화피마자유Polyoxyethylene Cured Castor Oil 0.10.1 0.10.1 99 트리에탄올아민Triethanolamine 0.20.2 0.20.2 1010 방부제antiseptic 미량a very small amount 미량a very small amount 1111 추출 실시예 6에 따른 연교추출물Ducted Extract According to Extraction Example 6 5.05.0 --

상기 표 9의 각 성분번호로 구별된 성분 중에서, 먼저 성분 1(정제수)에 성분 2와 3을 교반 분산시킨 후, 성분 4 내지 5 및 6을 가하고, 성분 8 내지 10을 성분 7에 용해시킨 물질과 분취된 성분 4에 용해시킨 성분 11을 차례로 가하여 혼합하는 방식으로 제조하였다.Of the components distinguished by each component number in Table 9, components 2 and 3 were first dispersed and dispersed in component 1 (purified water), and then components 4 to 5 and 6 were added, and components 8 to 10 were dissolved in component 7. And component 11 dissolved in aliquot component 4 were added sequentially to prepare a mixture.

상기 제형 실시예 3에 대한 그 비교예 3은 성분 11인 추출 실시예5에 따른 연교추출물을 제외한 나머지 성분구성이나 제조방법은 동일하게 진행하여 제조한 것을 설정하였다.Comparative Example 3 with respect to Formulation Example 3, except for the soft-core extract according to the extraction example 5 of the component 11, the other components of the composition or manufacturing method was set to proceed in the same manner.

<제형 실시예 4 및 그 비교예 4><Formulation Example 4 and Comparative Example 4>

상기 추출 실시예 6에 따른 연교추출물을 함유한 영양크림의 성분구성을 하기 표 10과 같이 구성하여 제조하였다. 이때, 성분함량의 단위는 중량%이다. The ingredient composition of the nutrient cream containing the duct bridge extract according to the extraction example 6 was prepared as shown in Table 10. At this time, the unit of component content is weight%.

번호number 성 분ingredient 제형 실시예 4Formulation Example 4 제형 비교예 4Formulation Comparative Example 4 1One 세테아릴알코올Cetearyl Alcohol 1.51.5 1.51.5 22 글리세릴스테아레이트Glyceryl Stearate 1.01.0 1.01.0 33 폴리소르베이트 60Polysorbate 60 1.21.2 1.21.2 44 소르비탄세스퀴올리에이트Sorbitan sesquioleate 0.30.3 0.30.3 55 세틸옥타노에이트Cetyloctanoate 6.06.0 6.06.0 66 스쿠알란Squalane 8.08.0 8.08.0 77 아프리코드커넬오일Apricot Kernel Oil 4.04.0 4.04.0 88 디메치콘Dimethicone 1.01.0 1.01.0 99 부틸렌글라이콜Butylene Glycol 5.05.0 5.05.0 1010 그릴세린Grill serine 4.04.0 4.04.0 1111 마그네슘알루미늄실리케이트Magnesium Aluminum Silicate 0.20.2 0.20.2 1212 산탄검Xanthan Gum 0.050.05 0.050.05 1313 방부제antiseptic 미량a very small amount 미량a very small amount 1414 정제수Purified water 잔량Remaining amount 잔량Remaining amount 1515 추출 실시예 6에 따른 연교추출물Ducted Extract According to Extraction Example 6 1.01.0

한편, 상기 표10의 각 성분번호로 구별된 성분 중에서, 먼저 성분 1 내지 8을 70℃의 온도에서 가열 용해시킨 다음, 성분 9 내지 13을 성분 14에 용해 분산시켜 70℃로 가열한 것에 유화한다. 이후, 상기 유화한 것을 56℃의 온도로 냉각한 후, 분취된 성분 9에 용해시킨 성분 15를 가하여 교반하고 실온에서 냉각하여 제조하였다.On the other hand, among the components identified by each component number in Table 10 above, components 1 to 8 were first dissolved by heating at a temperature of 70 ° C, and then components 9 to 13 were dissolved and dispersed in component 14 and emulsified in heating to 70 ° C. . Thereafter, the emulsified product was cooled to a temperature of 56 ° C., and then component 15 dissolved in the fractionated component 9 was added thereto, stirred, and cooled to room temperature to prepare.

상기 제형 실시예 4에 대한 그 비교예 4는 성분 15인 추출 실시예 5에 따른 연교추출물을 제외한 나머지 성분구성이나 제조방법은 동일하게 진행하여 제조한 것을 설정하였다.Comparative Example 4 with respect to Formulation Example 4, except for the soft-core extract according to extraction Example 5 which is component 15, the other components of the composition or the manufacturing method was set to proceed in the same manner.

<제형 실시예 5 및 그 비교예 5><Formulation Example 5 and Comparative Example 5>

상기 추출 실시예 6에 따른 연교추출물을 함유한 영양팩의 성분구성을 하기 표 11과 같이 구성하여 제조하였다. 이때, 성분함량의 단위는 중량%이다.The composition of the nutritional pack containing the duct extract according to the extraction example 6 was prepared as shown in Table 11 below. At this time, the unit of component content is weight%.

번호number 성 분ingredient 제형 실시예 5Formulation Example 5 제형 비교예 5Formulation Comparative Example 5 1One 정제수Purified water 잔량Remaining amount 잔량Remaining amount 22 부틸렌글라이콜Butylene Glycol 3.03.0 3.03.0 33 글리세린glycerin 2.02.0 2.02.0 44 폴리비닐알코올Polyvinyl alcohol 2.02.0 2.02.0 55 폴리비닐피롤리돈Polyvinylpyrrolidone 10.010.0 10.010.0 66 셀룰로오스검Cellulose gum 0.30.3 0.30.3 77 마이카Mica 2.02.0 2.02.0 88 카올린kaoline 2.02.0 2.02.0 99 에탄올ethanol 5.05.0 5.05.0 1010 폴리옥시에칠렌경화피마자유Polyoxyethylene Cured Castor Oil 0.30.3 0.30.3 1111 방부제antiseptic 미량a very small amount 미량a very small amount 1212 추출 실시예 6에 따른 연교추출물Ducted Extract According to Extraction Example 6 2.02.0 --

상기 표 11의 각 성분번호로 구별된 성분 중에서, 먼저 성분 1(정제수)에 성분 2와 3을 첨가한 후, 성분 4 내지 6을 가하여 교반 분산시키면서 70℃로 가열한다. 다음 성분 7 내지 8을 가하여 충분히 분산시키고 56℃의 온도로 냉각한다. 성분 10 내지 11을 성분 9에 용해시킨 물질과 분취된 성분 2에 용해시킨 성분 12를 차례로 가하여 교반하고 실온으로 냉각하여 제조하였다.Of the components identified by each component number in Table 11 above, components 2 and 3 are first added to component 1 (purified water), and then components 4 to 6 are added and heated to 70 ° C. while stirring and dispersing. The following components 7 to 8 are then added to disperse sufficiently and cooled to a temperature of 56 ° C. A substance prepared by dissolving components 10 to 11 in component 9 and component 12 dissolved in aliquoted component 2 in turn was stirred and cooled to room temperature.

상기 제형 실시예 5에 대한 그 비교예 5는 성분 12인 추출 실시예5에 따른 연교추출물을 제외한 나머지 성분구성이나 제조방법은 동일하게 진행하여 제조한 것을 설정하였다.Comparative Example 5 with respect to Formulation Example 5, except for the ductile extract according to the extraction example 5 which is component 12, the other components of the composition or manufacturing method was set to proceed in the same manner.

<실험예 5. 피부의 주름개선효과 및 피부자극 관능시험>Experimental Example 5. Wrinkle improvement effect and skin irritation sensory test>

본 발명에 따른 피부 주름개선용 화장료 조성물의 피부 주름개선효과 및 피부자극을 평가하기 위하여, 상기 제형 실시예 4와 제형 비교예 4에서 제조된 영양크림을 이용하여 관능시험을 실시하였다.In order to evaluate the skin wrinkle improvement effect and skin irritation of the cosmetic composition for skin wrinkle improvement according to the present invention, a sensory test was conducted using the nutrition cream prepared in Formulation Example 4 and Comparative Example 4.

구체적으로, 제형 실시예 4와 제형 비교예 4의 영양크림을 피부에 각각 도포했을 때 피부의 주름개선효과를 측정하기 위하여 20세 이상의 여성 20명에게 안면 왼쪽 부분에는 제형 실시예 4의 영양크림(시험군)을, 안면 오른쪽 부분에는 제형 비교예 4의 영양크림(대조군)을 1일 1회 12주간 지속적으로 사용하게 하였다. Specifically, in order to measure the antiwrinkle effect of the skin when the nourishing creams of Formulation Example 4 and Formulation Comparative Example 4 were applied to the skin, the left side of the face of the nourishing cream of Formulation Example 4 Test group), the right side of the face was allowed to continuously use the nutrition cream (control) of the formulation Comparative Example 4 once a day for 12 weeks.

관능시험에서 피부의 주름개선효과 항목에 대하여는 제형 비교예 4의 영양크림을 기준으로 제형 실시예 4의 영양크림이 나타내는 주름개선효과를 상대적으로 평가하게 하였고, 피부자극에 대한 관능평가는 피부의 가려움, 따가움 및 홍반 등의 현상을 평가하게 하였다. 평가는 매우 우수(5점), 우수(4점), 보통(3점), 나쁨(2점), 매우 나쁨(1점)의 오점법 기준에 의거하여 수행하였으며, 그 결과를 하기 표 12에 나타내었다. 표 12에서 피부자극은 피부자극이 없는 정도를 나타낸다.For the anti-wrinkle effect item of the skin in the sensory test, the anti-wrinkle effect of the nutritional cream of the formulation example 4 was relatively evaluated based on the nutritional cream of the formulation of Comparative Example 4. Phenomena such as stinging, tingling and erythema were evaluated. Evaluation was performed based on the five-point standard of very good (5 points), excellent (4 points), moderate (3 points), bad (2 points), very bad (1 point), the results are shown in Table 12 Indicated. In Table 12, the skin irritation indicates the degree of no skin irritation.

번호number 피부자극Skin irritation 주름개선효과Wrinkle improvement effect 제형 실시예 4Formulation Example 4 제형 비교예 4Formulation Comparative Example 4 1One 44 55 55 22 55 55 55 33 55 44 55 44 33 44 44 55 44 44 55 66 55 55 55 77 44 44 44 88 44 44 44 99 55 55 55 1010 44 44 44 1111 55 55 55 1212 55 55 55 1313 33 44 44 1414 44 44 44 1515 55 44 44 1616 44 44 44 1717 55 55 55 1818 55 55 55 1919 55 55 55 2020 44 44 44 평균Average 4.404.40 4.454.45 4.554.55

하기 표 12에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 제형 실시예 4의 화장료 조성물에 대한 피부자극 평가점수는 4.40점으로 매우 양호하게 평가되어, 제형 비교예 4와 마찬가지로 피부자극 정도가 낮아 피부 안전성이 우수함을 확인할 수 있었다.As shown in Table 12 below, the skin irritation evaluation score for the cosmetic composition of Formulation Example 4 according to the present invention was very good as 4.40, and the skin irritation degree was low, as in Comparative Formulation Example 4. Could confirm.

또한, 제형 비교예 4 대비 제형 실시예 4의 화장료 조성물이 가진 상대적인 피부의 주름개선효과는 평가점수 4.55점으로 개선 정도가 매우 우수함을 알 수 있었다.In addition, it can be seen that the relative improvement of the wrinkles of the skin of the cosmetic composition of Formulation Example 4 compared to Formulation Comparative Example 4 was 4.55, an excellent degree of improvement.

<실험예 6. 피부의 안전성 실험>Experimental Example 6. Skin Safety Experiment

상기 추출 실시예 6에 따른 연교추출물과 제형 실시예 4에 대한 피부 안전성, 즉 피부반응의 관찰을 통해서 자극 혹은 알레르기성 반응의 발생 여부를 알아보기 위하여 한국식품의약품안전청 기준 피부안전성 검사법에 따라 인체첩포시험을 실시하였다.In order to determine the occurrence of irritation or allergic reaction through the skin safety, that is, the skin reaction for the extract Example 4 and the formulation of Example 4 according to the extraction Example 6 in accordance with the Korea Food and Drug Administration standard skin safety test method The test was conducted.

피험자로 20세 이상 50세 이하의 건강한 성인 남,녀 30명을 선정하였고, 첩포시험은 대상자 상박 내측에 첩포를 부착하였으며 48시간이 지난 후 첩포를 제거하였다. 약 60분간 안정을 취하도록 한 후 첫 판독을 시행하였고, 첩포 부착 후 96시간이 경과한 후 2차 판독을 시행하였다. 판정기준은 하기 표 13에 나타낸 바와 같다.Thirty healthy men and women aged twenty to fifty years were selected as subjects. The patch test was carried out on the inner side of the subject's upper arm and the patch was removed after 48 hours. The first reading was performed after about 60 minutes of stability, and the second reading was taken after 96 hours of patch application. Criteria are as shown in Table 13 below.

반응reaction 가중치weight 판정의 기준Criteria of Judgment -- 00 무반응No response ±± 0.50.5 희미한 홍반Faint erythema ++ 1One 경계가 뚜렷하나 약한 홍반, 부종 및 구진Boundary but weak erythema, edema and papules ++++ 22 뚜렷한 홍반, 구진 및 수포Pronounced erythema, papules and blisters

첩포 부착 후 48시간과 96시간에 판독한 결과를 하기 수학식 6을 이용하여 시료에 대한 피부 반응도를 산출하였다.The skin readiness of the sample was calculated using Equation 6 below for 48 hours and 96 hours after patch application.

Figure 112006046970983-pat00006
Figure 112006046970983-pat00006

첩포시험의 검사 결과에 근거하여 계산된 양성 반응을 보인 시료의 피부 자극도를 하기 표 14에 나타내었다.The skin irritation degree of the sample showing the positive response calculated based on the test result of the patch test is shown in Table 14 below.

시료sample 48시간48 hours 96시간96 hours 반응도(%)Responsiveness (%) ++ ++++ ++ ++++ 48시간48 hours 96시간96 hours 평균Average 추출 실시예 6 (2% in 1,3-부틸렌글리콜)Extraction Example 6 (2% in 1,3-butylene glycol) -- -- 1One -- 0.000.00 0.560.56 0.280.28 제형 실시예 4Formulation Example 4 -- -- 22 -- 0.000.00 1.111.11 0.560.56

상기 표 14에 제시된 바와 같이, 각각의 추출 실시예 6과 제형 실시예 4는 인체첩포시험에서 하기 표 15에 따른 피부 반응도 판정 기준에 의하면 무자극으로 민감한 피부에 사용해도 좋은 결과로 나타났다. 따라서 상기 추출 실시예들에 따른 연교추출물은 천연물로서 피부부작용이 없는 안전한 성분으로 나타났다.As shown in Table 14, each of Extraction Example 6 and Formulation Example 4 according to the skin reactivity determination criteria according to Table 15 in the human scaffold test was found to be good results for use on sensitive skin without irritation. Therefore, the soft-leaved extract according to the extraction examples appeared to be a safe ingredient with no natural side effects as a natural product.

피부의 평균 반응도Average responsiveness of the skin 판정 기준Criteria 0.0 ~ 0.90.0 to 0.9 무자극Non-irritating 1.0 ~ 2.91.0 to 2.9 경자극Light stimulation 3.0 ~ 4.93.0 to 4.9 중자극Heavy stimulation 5.0 이상5.0 or more 강자극Strong stimulation

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 마타이레시놀 및/또는 악티게닌을 활성성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 천연물로서 피부 부작용이 없으며, 피부의 주름개선과 관련한 항산화효과, 세포증식효과, 콜라겐합성효과 및 콜라겐을 분해하는 효소인 콜라게나아제의 발현 저해효과가 우수하여 피부의 주름을 개선하는데 매우 유용하다.As described above, the present invention provides a cosmetic composition containing matyresinol and / or actinigen as an active ingredient. The cosmetic composition according to the present invention has no skin side effects as a natural product, and has excellent anti-oxidation effect, cell proliferation effect, collagen synthesis effect, and expression inhibitory effect of collagenase, an enzyme that decomposes collagen, and wrinkles of skin. Very useful for improving

Claims (5)

연교(Forsythia Fruit)추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 주름개선용 화장료 조성물.A cosmetic composition for improving skin wrinkles, which comprises Forsythia Fruit extract. 마타이레시놀(matairesinol), 악티게닌(arctigenin) 또는 이들의 혼합물을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 주름개선용 화장료 조성물.A cosmetic composition for improving skin wrinkles, comprising matairesinol, actinigen, or a mixture thereof. 제2항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 마타이레시놀을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 주름개선용 화장료 조성물.The cosmetic composition for improving skin wrinkles according to claim 2, wherein the cosmetic composition contains matyrethinol. 제2항에 있어서, 상기 마타이레시놀, 악티게닌 또는 이들의 혼합물의 총 함량은 화장료 조성물 총 중량 대비 0.001 내지 10중량%인 것을 특징으로 하는 피부 주름개선용 화장료 조성물.The cosmetic composition for improving skin wrinkles according to claim 2, wherein the total content of the matyrethinol, actinigen or a mixture thereof is 0.001 to 10% by weight based on the total weight of the cosmetic composition. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수류, 에센스류, 스킨류, 로션류, 크림류, 팩류, 파운데이션류 및 메이크업베이스류로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 피부 주름개선용 화장료 조성물.According to claim 1 or 2, wherein the cosmetic composition is any one selected from the group consisting of cosmetics, essences, skins, lotions, creams, packs, foundations and makeup bases. Cosmetic composition for improving skin wrinkles.
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