KR100959145B1 - 인유두종바이러스 바이러스 유사 입자의 생산 및 정제 방법 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (7)
- 다음의 단계를 포함하는 인유두종바이러스(human papillomavirus, HPV) 바이러스 유사 입자(virus-like particles, VLPs)의 생산 및 정제 방법:(a) HPV L1 단백질을 발현하는 형질전환 효모(yeast)를 배양하는 단계;(b) 상기 배양된 효모를 용해(lysis)시키는 단계;(c) 상기 효모 용해물(lysate)에 암모늄 설페이트(ammonium sulfate)를 첨가하여 단백질을 침전시키는 단계;(d) 상기 단백질 침전물에 대해 크기-배제 크로마토그래피(size-exclusion chromatography)를 행하여 HPV L1 단백질을 정제하는 단계; 및(e) 상기 크기-배제 크로마토그래피 분획물에 대해 양이온 교환 크로마토그래피(cation-exchange chromatography)를 행하여 HPV L1 단백질을 정제하는 단계.
- 제 1 항에 있어서, 상기 단계 (a)의 효모의 배양은 탄소원이 배지 100㎖에 대해 2g 초과 5g 이하의 함량으로 포함된 배지에서 행하는 것을 특징으로 하는 HPV VLPs의 생산 및 정제 방법.
- 제 2 항에 있어서, 상기 탄소원은 글루코오스(glucose) 및 갈락토오 스(galactose) 중 하나 이상인 것을 특징으로 하는 HPV VLPs의 생산 및 정제 방법.
- 제 3 항에 있어서, 상기 글루코오스와 갈락토오스의 비율은 중량 기준으로 글루코오스 : 갈락토오스 = 0-1 : 3-4 인 것을 특징으로 하는 HPV VLPs의 생산 및 정제 방법.
- 제 1 항에 있어서, 상기 단계 (c)에서 첨가되는 암모늄 설페이트의 농도는 40-50 중량% 인 것을 특징으로 하는 HPV VLPs의 생산 및 정제 방법.
- 제 1 항에 있어서, 상기 단계 (e) 양이온 교환 크로마토그래피 수행시에 0.4-0.8 M NaCl을 포함하는 세정 버퍼(wash buffer)로 세정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 HPV VLPs의 생산 및 정제 방법.
- 제 1 항에 있어서, 상기 HPV VLP는 HPV 타입 6a, HPV 타입 6b, HPV 타입 11, HPV 타입 16, HPV 타입 18, HPV 타입 31, HPV 타입 33, HPV 타입 35, HPV 타입 39, HPV 타입 45, HPV 타입 51, HPV 타입 52, HPV 타입 56, HPV 타입 58 및 HPV 타입 68로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 HPV VLP의 생산 및 정제 방법.
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