KR100910307B1 - 리버스-턴 유사체 및 이와 관련된 방법 - Google Patents

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Abstract

생물학적으로 활성이 있는 펩티드와 단백질의 리버스-턴 영역의 2차 구조를 모방한 구조적으로 제한된 화합물이 밝혀져 있다. 이러한 리버스-턴 유사체는 진단제, 치료제로의 사용을 포함하는 넓은 범위의 분야에서 유용성이 있다. 본 발명의 리버스-턴 유사체를 포함하는 라이브러리 뿐만 아니라 생물학적으로 활성이 있는 구성원들(biologically active members)을 동정하기 위한 스크리닝 방법 또한 밝혀져 있다. 본 발명은 Wnt-신호 경로 변형에 의한 질병, 즉 암 특히 결장 직장암, 혈관 확장술과 관련된 재협착, 다낭신 질병, 혈관생성 변형 질병, 류머티스성 관절염, 또는 궤양성의 대장염의 억제 또는 치료를 위해 이러한 화합물을 사용하는 것과 관련이 있다.
리버스-턴 유사체, 결장 직장암, 재협착, 다낭신 질병, 혈관생성 변형 질병, 류머티스성 관절염, 궤양성의 대장염

Description

리버스-턴 유사체 및 이와 관련된 방법{REVERSE-TURN MIMETICS AND METHOD RELATING THERETO}
본 발명은 리버스-턴 유사체와 이와 관련된 화학 라이브러리(chmical library)에 관한 것이다. 본 발명은 또한 암의 치료에서의 이용과 그들을 포함하는 약학 조성물과 관련이 있다.
치료제로서 가능한 활성을 위한 분자의 무작위 스크리닝은 다 년간 수행되어져 왔고 그 결과로 수많은 중요한 약들이 발견되었다. 분자 생물학과 전산 화학의 발전으로 인해 “합리적인 약의 개발(rational drug design)" 이라 명명되었던 분야에 대한 관심이 증가되었지만, 이러한 기술은 처음에 예상했던 것만큼 빠르거나 신뢰할 수 있다고 입증되지 못했다. 따라서, 최근에는 무작위 약물 스크리닝에 관심이 재개되었고 무작위 약물 스크리닝으로 복귀하고 있다. 이를 위하여, 조합화학(combinatorial)의 라이브러리들의 개발을 기초로 하는 새로운 기술 분야와 생물학적 활성 구성원(member)을 조사하기 위한 상기 라이브러리 스크리닝 (screening)분야에서 특별한 진전이 이루어져 왔다.
일반적으로, 조합화학의 라이브러리들은 단순한 분자의 집합체이다. 이러한 라이브러리들은 라이브러리에 있는 화학적 종류뿐만 아니라 라이브러리의 구성원(members)들을 발생시키거나 관심 있는 생물학적 표적과 반응하여 구성원들을 동정(identify)하기 위해 사용하는 방법에 의해 다양해진다. 이 분야는 매우 초기의 단계이지만, 라이브러리를 발생시키고 이를 스크리닝(screening)하는 방법은 이미 상당히 다양하고 복잡하다. 예를 들면, 다양한 조합화학의 라이브러리의 최근의 논문들에서는 표지되거나 표지되지 않은 라이브러리의 구성원 모두의 사용을 포함하여, 수많은 기술이 밝혀지고 있다.[참조: Dolle, J.Com. Chem.,2(3) : 383-433, 2000 : Janda, Proc., Natl. Acad. Sco. USA 91:10779-10785,1994]
처음에는, 조합화학의 라이브러리들은 일반적으로 펩티드나 뉴클레오티드 기원 물질들로만 한정되었다. 이를 위하여, 휴텐(Houghten) 등의 기술은 스플리트 합성 기술을 통하여 가용성 결합적 펩티드 라이브러리를 어셈블리 하는 소위 “이원적으로 규정된 반복적”방법의 한 예를 예시하고 있다. [참조 : Nature(London) 354:84-86, 1991; Biotechniques13: 412-421, 1992; Bioorg. Med. Chem. Lett.3 : 405-412, 1993]. 이러한 기술에 의해, 수천 개의 구성을 함유하는 가용성 펩티드 라이브러리가 수득되었다. 이러한 라이브러리들은 메티오닌- 및 류신-엔케팔린과 같은 오피오이드(opioid) 펩티드의 동정에 효과적인 것으로 밝혀졌고, [참조 : Dooley and Houghten, Life sci. 52, 1509-1517, 1993] N-아실화된 펩티드 라이브러리는 강력한 오피오이드 길항제인 아세탈린을 동정하는데 사용된다 [참조 : Dooley et al.,Proc. Natl. Acad. Sci.USA 90: 10811-10815, 1993.]. 더욱 최근에 는, 모든 D-아미노산 오피오이드 펩티드 라이브러리가 만들어졌고 뮤("μ")오피오이드 수용체에 대한 진통 활성에 대해 스크리닝 하였다[참조 : Dooley et al., Science 266: 2019-2022, 1994].
펩티드와 뉴클레오티드 기원의 구성원을 포함하는 조합 라이브러리들이 매우 중요한 의미를 갖지만, 여전히 다른 기원의 구성원을 포함하는 라이브러리의 필요성이 존재한다. 예를 들면, 거대하게 확장된 전통적인 펩티드 라이브러리는 단지 라이브러리 구성원을 발생시키기 위해 아미노산 서열을 다양하게 한 것이다. 펩티드의 2차 구조가 생물학적 활성에 중요하다는 것은 인지되고 있지만, 이러한 펩티드 라이브러리는 라이브러리 구성원들에게 제한된 2차 구조를 부여하지 못한다.
이를 위하여, 어떤 연구자들은 더 제한된 이차 구조를 제공하기 위하여 다이설파이드 브릿지를 갖는 펩티드를 폐환 시켰다(cyclized). 그러나 이러한 폐환된 펩티드(cyclized peptide)는 일반적으로 매우 가변적이고 생체 이용률이 매우 낮다. 따라서 제한적으로만 성공하였다.
보다 최근에는, 생물학적으로 활성이 있는 단백질이나 펩티드에서 발견되는 리버스-턴 2차 구조와 매우 유사한 비-펩티드 화합물이 개발되었다. 예를 들면, 칸(Kahn)의 미국 특허 제5,440,013호와 PCT 국제공개공보 WO 94/03494, PCT국제공개공보 WO 01/00210A1, 및 PCT국제공개공보 WO 01/16135A2에는 리버스-턴의 3차 구조를 모방한 구조적으로 제한된, 비-펩티드 화합물이 기술되어 있다.
구조적으로 제한된 리버스-턴 유사체의 합성 및 동정 기술이 상당히 진보되었지만, 펩티드의 2차 구조를 모방한 작은 분자에 대한 개발의 필요성은 여전히 존 재하고 있다. 또한 당해 분야에서 이러한 구성원을 포함하는 라이브러리뿐만 아니라 관심 있는 표적, 특히 생물학적 표적에 대한 라이브러리 구성원을 합성하고 스크리닝하여 생활성 라이브러리 구성원을 동정하는 기술이 요구되고 있다. 예를 들면, 칸(Kahn)의 미국 특허 제5,929,237호와 그것의 CIP 미국 특허 제6,013,458호에서는 생물학적으로 활성이 있는 펩티드와 단백질의 리버스-턴 영역의 2차 구조를 모방한 구조적으로 제한된 화합물을 밝혔다. 구조적으로 제한된 리버스-턴 유사체의 합성과 동정 및 그들의 질병에의 이용은 오브레흐트(Obrecht)에 의해서도 잘 조사되었다(Advances in Med. Chem., 4, 1-68, 1999).
본 발명은 또한 이러한 필요성을 충족하고, 생물학적으로 활성이 있는 펩티드와 단백질의 리버스-턴 영역의 2차 구조를 모방한 구조적으로 제한된 화합물을 제공함으로써 이와 관련된 추가의 장점을 제공한다.
Wnt-신호 경로(Wnt signaling pathway)는 세포의 생장, 종양 발생, 그리고 발달을 포함한 다양한 과정을 통제한다(Moon et al., 1997, Trends Genet.13, 157-162 : Miller et al., 1999, Oncogene 18, 7860-7872 : Nusse and Varmus, 1992, Cell 69, 1073-1087 : Cardigan and Nusse, 1997, Genes Dev.11, 3286-3305:Peifer and Polakis, 2000 Science 287, 1606-1609 : Polakis 2000, Genes Dev.14, 1837-1851). Wnt-신호 경로는 다양한 생물체에 대하여 집중적으로 연구되고 있다. Wnt 신호 전달에 의한 전사에 의해서 중재되는 TCF4/β-카테닌의 활성은 그것의 생물학적 기능에 중요한 역할을 하는 것이 밝혀졌다(Molenaar et al., 1996, Cell 86, 391-399 : Gat et al., 1998 Cell 95, 605-614 : Orford et al., 1999 J.Cell.Biol. 146, 855-868).
Wnt 신호가 없는 경우, 선종성 결장 폴립증(adenomatous polyposis coli, APC )의 종양 억제 유전자는 동시에 세린 키나아제 글리코벤 합성 키나아제(serine kinase glycogen synthase kinase,GSK )-3β와 β-카테닌과 함께 작용한다(Su et al., 1993, Science 262, 1734-1737 : Yost et al., 1996 Genes Dev. 10, 1443-1454 : Hayashi et al., 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 242-247 : Sakanaka et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 3020-3023 : Sakanaka 및 William, 1999, J.Biol.Chem 274, 14090-14093). GSK-3β에 의한 APC의 인산화는 β-카테닌의 신호 기능(signaling funtcion)을 조절할 수 있는 β-카테닌과 APC의 상호작용에 의하여 조절된다(B. Rubinfeld et al., Science 272, 1023, 1996). Wnt 신호는 핵 전사 인자계인 림프의 엔헨서 인자(lymphoid enhancer factor,LEF1)/T-세포 인자(T-ell factor, TCF4)의 구성원들과 상호 작용하는 핵으로 전위를 가능하게 하는 β-카테닌을 안정화시킨다(Beheres et al., 1996, Nature 382, 638-642 : Hsu et al., 1998, Mol. Cell. Biol. 18, 4807-4818 : Roose et all., 1999, Science 285, 1923-1926).
최근에는 알려진 종양유전자인 시-믹(c-myc)이 β-카테닌/TCF4-중간체 전사에 대하여 표적 유전자가 됨이 밝혀졌다(He et al., 1998, Science 281, 1509-1512 : Kolligs et al., 1999 Mol. Cell. Biol.19, 5696-5706). 종양 발생과 관련된 사이클린 D1(cyclin D1), 금속 단백 분해 효소(metalloproteinase)를 포함한 많은 다른 중요한 유전자들이 TCF4/β-catenin 전사 경로에 의해서 조절되었고 동정되어왔 다(Crawford et al., 1999, Oncegene 18, 2883-2891 : Shtutman et al., 1999, Proc.Natl. Acad.Sci. USA., 11, 5522-5527 : Tetsu and McCormick, 1999, Nature, 398, 422-426).
더욱이, 몇몇의 하류 매개체의 Wnt 신호의 과다한 발현은 세포 소멸을 조절하는 것으로 밝혀졌다(Moris et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 7950-7954 : He et al., 1999 , Cell 99 , 335-345 : Orford et al., 1999, J. Cell. Biol., 146, 855-868 : Strovel and Sussman, 1999, Exp. Cell. Res., 253, 637-648). 사람의 결장 직장암 (colorectal cancer) 세포에서의 APC 의 과도한 발현은 세포소멸을 유도한다(Moris et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 93, 7950-7954). β-카테닌의 이소성 발현은 세포 밖의 기질에 부착된 손실과 관련된 세포 소멸을 억제한다(Orford et al, 1999, J. Cell Biol. 146, 855-868). TCF4의 음성 돌변변이의 발현에 의한 TCF4/β-카테닌 전사의 억제는 Wnt-1-중간체 세포의 생존을 막았고 세포를 항암제제와 같은 세포 소멸의 자극에 민감해 지게 했다 (Shaoqiong Chen et al., 2001, J. Cell. Biol., 152, 1, 87-96). 그리고 APC 돌연변이는 구성적 서바이빈 발현의 허가, 잘 알려진 항-세포소멸 단백질에 의해서 세포소멸을 억제한다(Tao Zhang et al.,2001, Cancer Research, 62, 8664-8667).
Wnt 유전자에서의 돌변변이는 인체의 암에서는 발견되지 않았지만, 결장 직장 종양의 대부분의 경우에서 APC 나 β-카테닌에서의 돌연변이는 부적절한 TCF4의 활성, 시-믹(c-myc)의 과다한 발현 및 신생 종양을 야기시킨다(Bubinfeld et al, 1997, Science, 275, 1790-1792: Morin et al, 1997, Science, 275,1787-1790 : Gasa et al, 1999,Cell. Growth. Differ.10, 369-376). 종양 억제 유전자(APC)는 85%의 결장 직장암과 대다수의 다른 암에서 또한 소실되거나 불활성화된다(Kinzler and Vogelstein, 1996, Cell 87, 159-170). APC의 주된 역할은 Wnt 신호의 연쇄적인 형질 도입의 음성 조절자라는 점이다. 본 경로의 중요한 특징은 안정성의 조절과 APC를 포함하는 커다란 악신-베이스드(Axin-based)복합체와 상호작용에 의한 β-카테닌의 세포질 풀의 국소화(locatalization)를 포함한다. 이러한 상호작용은 β-카테닌의 인산화 반응을 야기시키고 그것에 의해서 표적은 퇴화된다.
CREB 결합 단백질(CBP)/p300은 단백질 상호작용 조사에서 처음으로 확인되었다. 첫째로 그것의 전사 요소 CREB과의 조합에 의해, 그것의 아데노바이러스 변형(adenoviral-transforming)단백질 E1A과의 상호반응에 의해 확인되었다(Stein et al., 1990, J.Viol., 64, 4421-4427 : Eckner et al., 1994, Genes.Dev., 8, 869-884). CBP는 전사 강제 기능(transcriptional coactivator function)을 포함하는 다양한 세포의 작용에 참여할 수 있는 가능성이 있다(Shikama et al., 1997, Trends. Cell.Biol., 7, 230-236) : Janknecht and Hunter, 1996, Nature, 383, 22-23). CBP/p300은 Wnt 표적으로 알려진 시아모이스 프로모터(siamois promoter)의 β-카테닌 중간체의 활성을 가능하게 한다(Hecht et al, 2000, EMBO J. 19, 8, 1839-1850). β-카테닌은 CBP의 CREB-결합 영역과 직접적으로 상호작용하고 β-카테닌은 TCF4/β-카테닌의 전사적 활성을 자극하기 위하여 CBP와 상승 작용한다(Ken-Ichi Takemaru and Randall T.Moon, 2000, J.Cell.Biol., 149, 2, 249, 254).
이러한 배경으로부터, Wnt 경로의 TCF4/β-카테닌과 CBP 복합체는 세포 생장의 조절, 종양형성, 세포의 소멸을 위한 표적 분자로서 작용할 수 있다. 즉, CBP의 억제에 의한 TCF4/β-카테닌의 전사적 경로를 차단하는 화합물이 필요하다. 그리고 그 결과 암의 치료 특히 결장 직장암의 치료에 사용할 수 있다.
본 발명은 생물학적 펩티드와 단백질의 리버스-턴 영역의 2차 구조를 모방한 구조적으로 제한된 화합물(또한 이하에서는 "리버스-턴 유사체”라고 지칭한다.)과 이것과 관련된 화학 라이브러리에 관한 것이다. 본 발명은 이러한 화합물을 포함하는 라이브러리 뿐 만 아니라 그것들의 합성과 스크리닝에 대해 밝힌다.
본 발명의 리버스-턴 유사체는 진단제, 예방제 또는 치료제로서의 사용을 포함하여(그러나 이것에 제한되지는 않는다.)생활성제로서 유용하다. 본 발명의 리버스-턴 유사체의 라이브러리들은 이러한 생활성제의 동정에서도 유용하다. 본 발명의 실시에서, 라이브러리는 수십 개 내지 수백 수천 개(또는 그 이상)의 개별적인 리버스-턴 구조들을 포함한다.(또한 이하에서는 “구성원들(members)”이라고 지칭하겠다.)
본 발명의 화합물은 다음 화학식(Ⅰ)의 구조를 갖는다.
Figure 112004014842603-pct00001
상기 화학식(Ⅰ)에서, A는 -(CHR3)- 또는 -(C=O)- 이고, B는 -(CHR4)- 또는 -(C=O)- 이고, D는 -(CHR5)- 또는 -(C=O)- 이고, E는 -(ZR6)- 또는 -(C=O)-이고, G는 -(XR7)n-, -(CHR7)-(NR8)-, -(C=O)-(XR9)- 또는 -(C=O)- 이고, W는 -(C=O)Y-, -(C=O)NH- , -(SO2) 또는 없고, Y는 산소 또는 황이고, X와 Z는 각각 질소 또는 CH 이고, n은 0또는 1 이고 ; 그리고 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9는 동일하거나 상이하고 아미노산 측쇄잔기나 이의 유도체, 분자의 잔여부분, 링커(linker)그리고 고체 지지체(solid support) 그리고 그것들의 입체이성질체(stereo isomer)로부터 독립적으로 선택된다.
하나의 양태에서 본 발명의 화합물은 상기 A는 -(CHR3)- 이며, B는 -(C=O)- 이며, D는 -(CHR5)- 이며 , E는 -(C=O)- 이며, G는 -(XR7)n- 인 다음 화학식(Ⅱ)의 구조를 갖는다.
Figure 112004014842603-pct00002
상기 화학식(Ⅱ)에서 W,Y 및 n은 위에서 정의된 바와 같고, R1, R2 ,R3 ,R5 및 R7 은 다음의 발명의 상세한 설명에서 정의된 바와 같다.
하나의 양태에서 본 발명의 화합물은 상기 A는 -(C=O)- 이며, B는 -(CHR4)- 이며, D는 -(C=O)- 이며, E는 -(ZR6)- 이며, G는 -(C=O)-(XR9)- 인 다음 화학식 (Ⅲ)의 구조를 갖는다.
Figure 112004014842603-pct00003
상기 화학식(Ⅲ)에서 W, Y 및 n은 위에서 정의된 것과 같고 Z는 질소 또는 CH(Z가 CH일 때 X는 질소이다.)이다. 그리고 R은 다음의 상세한 설명에서 정의된 바와 같다.
하나의 양태에서 본 발명의 화합물은 상기 A는 -(C=O)- 이며, B는 -(CHR4)- 이며, D는 -(C=O)- 이며, E는 -(ZR6)- 이며, G는 -(XR7)n- 인 다음 화학식(Ⅳ)의 구조를 갖는다. :
Figure 112004014842603-pct00004

상기 화학식(Ⅳ) 에서 W, Y 및 n은 위에서 정의된 바와 같고, Z는 질소 또는 CH(Z가 질소일 때, n은 0이고 Z가 CH일 때, X는 질소이고 n은 0이 아니다.) 그리고 R은 다음의 상세한 설명에서 정의된 바와 같다.
본 발명은 또한 화학식(Ⅰ)의 구조를 갖는 화합물을 포함하는 라이브러리뿐만 아니라 이러한 라이브러리의 합성과 동일한 생물학적으로 활성화된 화합물을 동정하기 위한 방법에 관한 것이다.
특히, 본 발명은 Wnt-신호 경로와 관련된 암을 포함하는 질병을 치료하기 위한 그것을 포함한 약학 조성물과 관련이 있다. 그것은 또한 Wnt-신호 경로와 관련된 암을 포함한 질병을 치료하기 위한 방법과 관련이 있다.
본 발명의 또 다른 측면들은 첨부된 도면과 다음의 상세한 설명을 참고하면 더욱 분명해질 것이다. 이를 위하여 여기에서 다양한 참고 자료가 제시될 것이다. 이것은 어떤 과정, 화합물 및 조성물에 대해서 묘사하고 있다. 그리고 전체에 걸쳐서 참고자료에 의해서 합성될 것이다.
이하에서는, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 한 측면에서는 리버스-턴 유사체의 구조는 다음의 화학식(Ⅰ)의 구조와 같음이 밝혀졌다.
Figure 112004014842603-pct00005
상기 화학식(Ⅰ)에서 A는 -(CHR3)- 또는 -(C=O)- 이고, B는 -(CHR4)- 또는 -(C=O)- 이고, D는 -(CHR5)- 또는 -(C=O)- 이고, E는 -(ZR6)- 또는 -(C=O)-이고, G는 -(XR7)n-, -(CHR7)-(NR8)-, -(C=O)-(XR9)-, 또는 -(C=O)- 이고, W는 -(C=O)Y-, -(C=O)NH-, -(SO2) 또는 없고, Y는 산소 또는 황이고, X와 Z는 각각 질소 또는 CH 이고, n은 0또는 1 ; 그리고 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9는 동일하거나 상이하고 아미노산 측쇄잔기나 이의 유도체, 분자의 잔여부분, 링커(linker)그리고 고체 지지체(solid support) 그리고 그것들의 입체이성질체(stereo isomer)로부터 독립적으로 선택된다.
더욱 상세하게는 R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9 는 아미노C2-5알킬, 구아니딘C2-5알킬 , C1-4알킬구아니디노C2-5알킬, 다이C1-4알킬구아니디노-C2-5알킬, 아미디노C2-5알킬, C1-4알킬아미디노C2-5알킬, 다이C1-4알킬아미디노C2-5알킬, C1-3알콕시, 페닐, 페닐 치환체(치환기는 각각 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐(Amidrazonyl), C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오르 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카복시, 시아노, 설퍼릴 또는 하이드록실 중 하나 이상을 선택할 수 있다), 벤질, 벤질 치환체(벤질에서의 치환기는 각각 치환기는 각각 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐 (Amidrazonyl), C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오르 C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카복시, 시아노, 설퍼릴 또는 하이드록실 중 하나 이상을 선택할 수 있다), 나프틸, 나프틸치환체(치환기는 각각 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐(Amidrazonyl), C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오르 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카복시, 시아노, 설퍼릴 또는 하이드록실 중 하나 이상을 선택할 수 있다), 비스-페닐 메틸, 비스-페닐 메틸 치환체(치환기는 각각 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐 (Amidrazonyl), C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오르 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카복시, 시아노, 설퍼릴 또는 하이드록실 중 하나 이상을 선택할 수 있다), 피리딜, 피리딜 치환체(치환기는 각각 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐(Amidrazonyl) , C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오르 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카복시, 시아노, 설퍼릴 또는 하이드록실 중 하나 이상을 선택할 수 있다), 피리딜C1-4알킬, 피리딜C1-4알킬치환체(피리딘 치환기는 각각 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐(Amidrazonyl), C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오르 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카복시, 시아노, 설퍼릴 또는 하이드록실 중 하나 이상을 선택할 수 있다), 피리미딜C1-4알킬, 피리미딜C1-4알킬 치환체(피리미딘 치환기는 각각 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐 (Amidrazonyl), C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오르 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카복시, 시아노, 설퍼릴 또는 하이드록실 중 하나 이상을 선택할 수 있다), 트리아진-2-일-C1-4알킬, 트리아진-2-일-C1-4알킬 치환체(트리아진 치환기는 각각 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐 (Amidrazonyl), C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오르 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카복시, 시아노, 설퍼릴 또는 하이드록실 중 하나 이상을 선택할 수 있다), 이미다조C1-4알킬, 이미다졸C1-4알킬치환체(이미다졸 치환기는 각각 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐(Amidrazonyl), C1-4알킬아미노, C1-4다이알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오르 C1-4알킬, C1-4알킬, C1-3알콕시, 니트로, 카복시, 시아노, 설퍼릴 또는 하이드록실 중 하나 이상을 선택할 수 있다), 이미다조리닐C1-4알킬, N-아미디노피페라지닐-N-C0-4알킬, 하이드록시C2-5알킬, C1-5알킬아미노C2-5알킬, 하이드록시C2-5알킬, C1-5알킬마아미노C2-5알킬, C1-5다이알킬아미노C2-5알킬, N-아미디노피페리디닐C1-4알킬 및 4-아미노사이클로헥실C0-2알킬로 구성되는 그룹으로부터 선택된다.
바람직하게는, 화학식(Ⅰ)에서 A는 -(C=O)-, B는 -(CHR4)-, D는 -(C=0)-, E는 -(ZR6)-, G는 -(XR7)n-, W는 -(C=O)Y- 또는 -(C=O)NH-, Y는 산소, X는 N, Z는 N 또는 CH, n은 0 또는 1이고;
R1은 C1-7알킬; C3-6사이클로알킬; 하이드록실, C1-6알콕시, C3-6사이클로알킬, (디옥소-디하이드로-이소인돌릴메틸)-C3-6사이클로알킬, 시아노, 할로겐, 아미노페닐, C1-6알콕시페닐, 디페닐, 테트라하이드로퓨라닐, C1-7알킬피롤리디닐, 피페리디닐, 모포리닐, 나프틸, 카바모일, 인돌릴, 페닐, 할로-페닐, 피리딜, 이미다졸릴, 퓨라닐 또는 티오퓨라닐 중에서 선택된 한 개의 치환기로 치환된 C1-7알킬; 페닐; C1-7알킬, C1-6알콕시, 트리플루오르 C1-7알킬 또는 할로겐 중에서 선택된 한 개의 치환기로 치환된 페닐; 벤질; C1-7알킬, C1-6알콕시, 트리플루오르C1-7알킬, 카르복시, 아미노, 디C1-7알킬아미노, 니트로 또는 할로겐 중에서 선택된 한 개 또는 두 개의 치환기로 치환된 벤질; 벤질옥시; 벤질옥시카르보닐; 페닐-아미노; 인다닐; 벤즈이미다졸릴; 로 구성되는 그룹으로부터 독립적으로 선택되거나 또는 W-R1은 페닐글리신이며;
R2는 C1-7알킬, C1-6알콕시, 페닐, 할로-페닐, C1-6알콕시페닐, 디C1-6알콕시페닐, 비스페닐, C1-7알킬나프틸, C1-6알콕시나프틸, 할로나프틸, 테트라하이드로퓨라닐, 티오퓨라닐, 피페리디닐, 피리딜, 모포리닐, 톨루일, 나프틸, 퀴놀리닐, 퀴녹살리닐, 벤즈이미다졸릴 또는 벤조퓨라닐 중에서 선택된 한 개 또는 두 개의 치환기로 치환된 C1-7알킬; C1-7알킬페닐; 벤질; 하이드록시, C1-7알킬, C1-6알콕시, C1-7알킬아미노, 디C1-7알킬아미노, 아미노, 트리플루오로C1-7알킬, 트리플루오로C1-6알콕시, 트리플루오로C1-7알킬티올, 카르복시, 할로C1-7알킬우레이도 또는 할로겐 중에서 선택된 한 개 또는 두 개의 치환기로 치환된 벤질; 퓨라닐C1-3알킬-아미노; 또는 테트라하이드로-나프틸이고,
R4는 C1-7알킬; C3-6사이클로알킬; C1-6알콕시, C1-7알킬티오, 비스페닐, C3-6사이클로알킬, 나프틸, 피리딜, 옥시피리디닐, 피롤릴, 나프틸아미노, 벤조일아미노 또는 하이드록시페닐 중에서 선택된 한 개 또는 두 개의 치환기로 치환된 C1-7알킬; 하이드록시-페닐; 벤질; 또는 하이드록시, 니트로, C1-7알킬, C1-6알콕시, 아미노, 벤질옥시카르보닐아미노, 카르복시, 할로겐 또는 시아노 중에서 선택된 치환기로 치환된 벤질이고,
R6는 수소이고,
R7은 C1-7알킬; 알릴; 스티릴메틸; 벤질; 또는 할로겐, 시아노 중에서 선택된 치환기로 치환된 벤질로 구성되는 그룹으로부터 독립적으로 선택된다.
더욱 바람직하게는 화학식(Ⅰ)에서 R1은 메틸, 펜틸, 헥실; 사이클로헥실; 하이드록시에틸, 메톡시프로필, 사이클로헥실메틸, (디옥소디하이드로이소인돌릴메틸)사이클로헥실메틸, 시아노메틸, 클로로에틸, 아미노페닐에틸, 메톡시페닐에틸, 디페닐메틸, 테트라하이드로퓨라닐메틸, 메틸피롤리디닐에틸, 피페리디닐에틸, 모포리닐에틸, 나프틸메틸, (하이드록시메틸페닐에틸)메틸카바모일에틸, N-카르복시벤질인돌릴에틸, 페닐에틸, 플루오로페닐에틸, 피리딜메틸, 피리딜에틸, 이미다졸릴프로필, 퓨라닐메틸, 티오퓨라닐메틸; 페닐; 메틸페닐, 메톡시페닐, 트리플루오로메틸페닐, 클로로페닐, 브로모페닐; 벤질; 메틸벤질, 메톡시벤질, 디메톡시벤질, 트리플루오로메틸벤질, 카르복시벤질, 아미노벤질, 디메틸아미노벤질, 니트로벤질, 디클로로벤질, 플루오로벤질, 디플루오로벤질; 벤질옥시; 벤질옥시카르보닐; 페닐-아미노; 인다닐; 벤즈이미다졸릴으로 구성되는 그룹으로부터 독립적으로 선택되거나 또는 W-R1으로서 페닐글리신이고;
R2는 이소아밀, 메톡시프로필, 페닐에틸, 플루오로페닐에틸, 메톡시페닐에틸, 메톡시페닐에틸, 디메톡시페닐에틸, 비스페닐에틸, 메틸나프틸메틸, 메톡시나프틸메틸, 플루오로나프틸메틸, 테트라하이드로퓨라닐메틸, 티오퓨라닐메틸, 티오퓨라닐에틸, 피페리디닐에틸, 피리딜메틸, 모포리닐에틸, 톨루일메틸, 나프틸메틸, 퀴놀리닐메틸, 퀴녹살리닐메틸, 벤즈이미다졸릴메틸, 벤조퓨라닐메틸; 메틸페닐; 벤질; 하이드록시벤질, 하이드록시메톡시벤질, 메틸벤질, 메톡시벤질, 메틸아미노벤질, 디메틸아미노벤질, 디메틸아미노할로벤질, 디할로디메틸아미노벤질, 디메틸디메틸아미노벤질, 메틸디메틸아미노벤질, 디에틸아미노벤질, 에틸메틸아미노벤질, 아미노벤질, 트리플루오로메틸벤질, 플루오로트리플루오로메틸벤질, 트리플루오로메톡시벤질, 트리플루오로메탄티올벤질, 카르복시벤질, 클로로에틸우레이도벤질, 플루오로벤질, 디플루오로벤질, 트리플루오로벤질, 클로로벤질, 디클로로벤질; 퓨라닐메틸-아미노; 또는 테트라하이드로나프틸 이고,
R4는 이소부틸; 사이클로헥실; 메톡시, 메틸티오에틸, 비스페닐에틸, 사이클로헥실메틸, 나프틸메틸, 피리딜메틸, 옥시피리디닐메틸, 피롤릴메틸, 나프틸아미노메틸, 벤조일아미노에틸, 하이드록시페닐에틸; 하이드록시페닐; 벤질; 하이드록시벤질, 니트로벤질, 메틸벤질, 부틸벤질, 부틸하이드록시벤질, 플루오로하이드록시벤질, 디하이드록시벤질, 니트로하이드록시벤질, 메톡시벤질, 아미노벤질, 벤질옥시카르보닐아미노벤질, 카르복시벤질, 카르복시메톡시벤질, 디메톡시벤질, 디플루오로벤질, 클로로벤질, 플루오로벤질, 디클로로벤질, 펜타플루오로벤질 또는 시아노벤질이고,
R6은 수소이고,
R7은 메틸, 프로필; 알릴; 스티릴메틸; 벤질; 디클로로벤질, 플루오로벤질 또는 시아노벤질 중에서 독립적으로 선택된다.
하나의 양태에서, E의 R1, R2, R6 그리고 G의 R7, R 8 및 R9는 동일하거나 상 이하고 화합물의 잔여부분을 나타낸다. 그리고 A의 R3, B의 R4 또는 D의 R5 는 아미노산 측쇄잔기 또는 이의 유도체로부터 선택된다. 본원에서 사용되는 바와 같이 “화합물의 잔여부분”은 R1, R2, R5, R6, R7, R 8 그리고/또는 R9의 위치에서 리버스-턴 유사체에 공유적으로 부착된 어떤 잔기, 제제, 화합물, 지지체, 분자, 링커 (linker), 아미노산, 펩티드 또는 단백질을 의미한다. 이 용어는 또한 아미노산 측쇄 잔기와 이의 유도체를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 “아미노산 측쇄 잔기”는 다음 <표1>에 나타낸 천연 아미노산 측쇄 잔기를 포함하여(이에 제한되는 것은 아니다) 천연 단백질에 존재하는 모든 아미노산 측쇄잔기를 나타낸다.
본 발명의 다른 천연 아미노산 측쇄 잔기는 3,5-다이브로모티로신, 3,5-다이이오도티로신, 하이드록실리신, γ-카복시글루타메이트, 포스포티로신 및 포스포세린의 측쇄 잔기를 포함하지만 이에 제한 되는 것은 아니다. 또한, 글리코실화 트레오닌, 세린 및 아스파라긴을 포함하는(그러나 이것만으로 제한되는 것은 아니다) 글리코실화 아미노산의 측쇄 잔기가 본 발명에서 실시에 사용될 수도 있다.


<표1> 아미노산 측쇄잔기
Figure 112004014842603-pct00006
천연 아미노산의 측쇄 잔기 외에, 본 발명의 아미노산 측쇄 잔기는 또한 이들의 다양한 유도체를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같은 아미노산 측쇄잔기의 “유도체”는 천연 아미노산 측쇄 잔기에 대한 변형 및/또는 변이체를 포함한다. 예를 들면, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신 및 페닐알라닌의 아미노산 측쇄 잔기는 일반적으로 저급 알킬, 아릴, 아르 알킬 잔기로 분류할 수 있다. 아미노산 측쇄 잔기의 유도체는 다른 직쇄 또는 측쇄, 환식 또는 비환식, 치환되거나 치환되지 않고, 포화되거나 포화되지 않는 저급 알킬, 아릴 또는 아릴 알킬 잔기를 포함한다.
본 원에서 사용된 바와 같은 “저급 알킬 잔기”는 탄소원자를 1 내지 12개 포함하고“저급 아릴 잔기”는 탄소원자를 6 내지 12개 포함하고“저급 아르 알킬 잔기”는 탄소원자를 7 내지 12개 포함한다. 따라서, 하나의 양태에서, 아미노산 측쇄 유도체는 C1-12알킬, C6-12아릴 및 C7-12아릴알킬 중에서 선택되고 더욱 바람직한 양태에서는 C1-7알킬, C6-10아릴, C7-11아릴알킬로부터 선택된다.
본 발명의 아미노산 측쇄 유도체는 저급 알킬, 아릴, 아릴알킬 잔기의 치환된 유도체도 포함하는데, 여기서 치환체는 화학적 잔기들 -OH, -OR, -COOH, -COOR, -CONH2, -NH2, -NHR, -SH, -SR, -SO2R, -SO2H, -SOR 및 할로겐 (F, Cl, Br 및 I포함) 중 하나 이상으로부터 선택된다(이들로 제한되지 않음). 상기 R은 각각 독립적으로 직쇄, 측쇄, 환식 또는 비환식, 치환되거나 치환되지 않고, 포화되거나 포화되지 않은 저급 알킬, 아릴 및 아르알킬 잔기로부터 선택된다. 더욱이, 본 발명의 환식 저급 알킬, 아릴 및 아릴알킬 잔기는 나프탈렌 뿐만 아니라 티오펜, 피롤, 푸란, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 피라졸, 3-피롤린, 피롤리딘, 피리딘, 피리미딘 ,푸린, 퀴놀린, 이소퀴놀린 및 카바졸과 같은 복소환식(heterocyclic) 화합물을 포함한다. 아미노산 측쇄 유도체는 또한 알킬 및 아르알킬 포스포네이트 및 실란을 포함하여 저급 알킬 그리고 아르알킬 잔기의 알킬 부분의 헤테로 알킬 유도체를 포함한다(이들로 제한되는 것은 아니다).
대표적인 R1, R2, R5, R6, R7, R8 그리고 R9 잔기는 특히 OH, -OR, -COR, -COOR, -CONH2, -CONR, -CONRR, -NH2, -NHR, -NRR, -SO2R, 및 -COSR을 포함하고, 상기 R은 위에서 정의된 바와 같다(이들로 제한되는 것은 아니다).
또 다른 양태에서, 아미노산 측쇄잔기 또는 이의 유도체(또는 R1, R2, R5 , R6, R7, R8 그리고 R9인 경우 화합물의 잔여부분),R1 , R2, R5, R6, R7, R8 또는 R9 는 다른 잔기 또는 화합물에 대한 결합을 용이하게 하는 링커일 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화합물은 진단 또는 스크리닝 분석에 사용하기 위해 비오틴과 같은 공지된 하나 이상의 화합물에 연결시킬 수 있다. 또한 R1, R2, R5, R 6, R7, R8 또는 R9 는 고체 지지체 (고체상에서 펩티드 합성에 사용되는 서포트)에 화합물을 결합시키는 링커일 수 있거나 지지체 자체일 수 있다. 이러한 양태에서 또 다른 잔기 또는 화합물 또는 고체 지지체(solid support)에 대한 연결이 R1, R2, R7 또는 R8위치에서 더욱 바람직하게는 R1 또는 R2위치에서 이루어지는 것이 바람직하다.
하나의 양태에서 본 발명의 리버스-턴 유사체 화합물은 상기 A는 -(CHR3)- 이며, B는 -(C=O)- 이며 , D는 -(CHR5)- 이며, E는 -(C=0)- 이며, G는 -(XR7) n- 인 다음 화학식(Ⅱ)의 구조를 갖는다.
Figure 112004014842603-pct00007
상기 화학식(Ⅱ)에서 R1, R2, R3, R5, R7, W, X 및 n은 위에서 정의된 바와 같다. 보다 바람직한 양태로는, R1, R2 및 R7은 화합물의 잔여부분을 나타내고, R3 또는 R5는 아미노산 측쇄 잔기로부터 선택된다.
다른 하나의 양태에서, 본 발명의 리버스-턴 유사체 화합물은 상기 A는 -(C=O)- 이며, B는 -(CHR4)- 이며, D는 -(C=O)- 이며, E는 -(ZR6)- 이며, G는-(C=0)-(XR9)-인 다음 화학식(Ⅲ)의 구조를 갖는다.
Figure 112004014842603-pct00008
상기 화학식(Ⅲ)에서 R1, R2, R4, R6, R9, W 및 X는 위에서 정의된 바와 같다. Z는 질소나 CH(Z가 CH이면 X는 질소이다.)이다. 보다 바람직한 양태에서는, R1, R2, R 6 및 R9는 화합물의 잔여부분을 나타내고, R4는 아미노산 측쇄잔기로부터 선택된다.
더욱 구체적인 양태에서는, 상기 A는 -(C=O)- 이며, B는 -(CHR4)- 이며, D는 -(C=O)- 이며, E는 -(ZR6)- 이며, G는 (XR7)n- 인 본 발명의 리버스-턴 유사체의 화합물은 다음 화학식(Ⅳ)의 구조를 갖는다.
Figure 112004014842603-pct00009
상기 화학식(Ⅳ) 에서 R1, R2, R4, R6, R7, W, X 및 n은 위에서 정의된 바와 같고 Z는 질소 또는 CH이다.(Z가 질소일 때 n은 0이고, Z가 CH일 때 X는 질소 그리고 n은 0이 아니다) 보다 바람직한 양태에서는, R1, R2, R6 및 R7 는 화합물의 잔여부분을 나타내고, R4는 아미노산 측쇄잔기로부터 선택된다. 이 경우 R6 또는 R7 은 Z와 X가 각각 CH일 때 아미노산 측쇄 잔기로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 리버스-턴 유사체는 적절한 출발 성분 분자(이하에서는“성분단편”이라고 한다)를 사용하여 제조할 수 있다. 요컨대, 화학식(Ⅱ)의 구조를 갖는 리버스-턴 유사체의 합성에 있어서 제1 및 제2 성분 단편을 커플링 시켜 결합된 제 1-제2 중간체를 형성시키고, 필요하다면 제3 및/또는 제4 성분 단편을 커플링시켜 제3-제4 중간체를 형성시키고(또는 시판되는 경우, 단일 제3 중간체를 사용할 수 있다) 결합된 제1-제2 중간체와 제3-제4 중간체(또는 제3 중간체)를 커플링시켜 제1-제2-제3-제4 중간체(또는 제1-제2-제3 중간체)를 수득하고, 이를 폐환시켜 본 발명의 리버스-턴 유사체를 수득한다. 또 다른 방법으로는, 화학식(Ⅱ)의 리버스-턴 유사체는 개개의 성분 단편들을 용액 중에서 단계별로 연속적으로 커플링시키거나 고체상 펩티드 합성에서 통상 실시되는 고체상 합성에 의하여 연속적으로 커플링시켜서 제조할 수 있다.
본 발명에서,“제1성분 단편”은 다음 화학식 S1의 구조를 갖는다.
Figure 112004014842603-pct00010
상기 화학식 S1에서 R2는 위에서 정의된 바와 같고, R은 펩티드 합성 시 사용하기에 적합한 보호 그룹이다. 적합한 R 그룹은 알킬 그룹이 있으며, 바람직한 양태에서 R은 메틸 그룹이다. 이러한 제 1성분 단편은 CH(OR)2-CHO나 CH(OR)2-CH2 -Hal(Hal는 할로겐 원자를 의미한다.) 로부터 H2N-R2의 치환에 의한 치환 반응 또는 환원성 아민화 반응에 의하여 쉽게 합성될 수 있다.
본 발명의 “두 번째 성분 단편”은 다음 화학식 S2의 구조를 갖는다.
Figure 112004014842603-pct00011
상기 화학식 S2에서 L1은 할로겐 원자와 같은 활성화된 카복실산 그룹이고, R4는 위 에서 정의된 바와 같고, P는 펩티드 합성에서 사용되는 적합한 아미노 보호그룹이다. 바람직한 보호 그룹은 t-부틸 디메틸실릴(t-butyl dimethylsilyl,TBDMS), t-부틸옥시카보닐(BOC), 메틸옥시카보닐(MOC), 9H-플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC), 그리고 알릴옥시카보닐(Alloc)이다. L이 -C(O)NHR,-NHR 일때 카복실 보호그룹을 사용할 수 있다. N-보호된 아미노산은 시판되고 있다. 예를 들면, FMOC 아미노산은 여러 공급원으로부터 시판되고 있다. 이들 화합물의 본 발명의 제2성분 단편으로의 전환은, N-보호된 아미노산의 카복실산 그룹의 활성화로 쉽게 달성할 수 있다. 적합한 활성화된 카복실산 그룹으로는 산 할로겐화물(acid halide)(여기서 X는 클로라이드 또는 브로마이드 등의 할라이드), 산 무수물(여기서 X는 아세틸과 같은 아실 그룹, N-하이드록시석신이미드 에스테르 및 펜타플루오로페닐 에스테르와 같은 반응성 에스테르이다.) 및 디사이클로헥실카보디이미드(DCC)와 같이 카보디이미드를 사용하여 커플링 반응에서 형성된 활성 중간체와 같은 기타 활성 중간체가 있다.
제 2성분 단편으로서 작용하는 아미노산 아지도(azido) 유도체의 경우, 이러한 화합물은 잘룸(Zaloom)등에 의해 기재된 반응(참조 : J.Org. Chem. 46 : 5173-76, 1981)에 의해 상응하는 아미노산으로부터 제조될 수 있다.
또 다른 방법으로, 본 발명 중 첫 번째 단편은 다음 화학식 S1'의 구조를 갖을 수 있다.
Figure 112004014842603-pct00012
상기 화학식 S1'에서 R은 위에서 정의된 바와 같고 L2는 할로겐 원자나 토실 그룹과 같은 이탈기이다. 그리고 두 번째 단편은 다음의 화학식 S'의 구조를 가질 수 있다.
Figure 112004014842603-pct00013
상기 화학식 S2'에서 R2, R3 그리고 P는 위에서 정의된 바와 같다.
본 발명의 “세번째 성분 단편”은 다음의 화학식 S3a 또는 S3b의 구조를 갖는다.:
Figure 112004014842603-pct00014
상기 화학식 S3a 또는 S3b에서 G, E, L 1 과 L2는 위에서 정의된 바와 같다. 적절한 세 번째 성분 단편은 다양한 원료로부터 상업적으로 얻을 수 있거나 또는 어떤 알려진 유기합성법에 의하여 준비될 수 있다.
더욱 상세하게는, 본 발명의 화학식(Ⅱ)의 리버스-턴 유사 구조는 제1 성분 단편과 제2 성분 단편을 반응시켜 결합된 제1-제2중간체를 수득한 다음 제1-제2 중간체와 제3성분 단편을 순차적으로 반응시켜 제1-제2-제3-제4 중간체를 제공한 다음 이러한 중간체를 폐환시켜 리버스-턴 유사체를 수득함으로써 합성된다.
화학식 I'의 리버스-턴의 일반적인 합성은 다음 기술에 의해 합성된다. 포스겐(phosgene)과 같은 커플링 반응제를 사용하여 첫 번째 성분 단편 1과 두 번째 성분 단편 2를 커플링시키고 N-탈보호화 한 후 합해진 제1-제2 중간체를 수득한다. 제1-제2 중간체는 아래와 같다. :
Figure 112004014842603-pct00015
상기식에서, R, R2, R4, R7, Fmoc, Moc 및 X는 위에서 정의된 바와 같고, Pol은 중합 지지체(polymeric support)를 나타낸다.
본 발명의 대표적인 조각 단편의 합성은 실시예와 작동예에 잘 설명되어 있다.
화학식(Ⅲ)과 (Ⅳ)의 구조를 갖는 리버스-턴 유사체는 위에서 기술한 단위 성분 합성법과 유사한 기술로 제조할 수 있으며 성분 단편에 따라서 적당히 변형될 수 있다.
위에서 언급된 바와 같이, 칸(Kahn)의 미국특허 제6,013,458호의 리버스-턴 유사체는 진단제, 예방제, 치료제와 같은 생활성제로서 유용하다. 대표적인 리버스-턴 유사체의 오피트 수용체 결합 활성은 미국특허 제6,013,458호에서 언급된 시예 9에 제시되어 있다. 상기 실시예에서, 본 발명의 리버스-턴 유사체는 방사선 표지된 엔케팔린 유도체의 δ및 μ오피트 수용체에 대한 결합을 효과적으로 억제하는 것으로 밝혀졌다. 데이터는 이들 수용체 작동물질 및 강력한 진통제로서의 리버스-턴 유사체의 유용성을 입증한다.
본 발명의 리버스-턴 유사체는 진단제, 예방제, 치료제와 같은 생활성제로 유용할 것이다.
본 발명에 따른 화합물은 리버스-턴 유사체이기 때문에 그것은 화학식(Ⅰ)의 화합물을 동물에게 효과적인 양으로 투여하는 것을 특징으로 하여 온혈 동물에서 펩티드와 관련된 요소를 전사하는 셀 신호를 변형하기 위해 사용될 수 있다.
또한 본 발명의 리버스-턴 유사체는 온혈 동물에서 PTB 영역들이 펩티드와 결합하는 것을 억제하기 위해, G 단백질 커플드 수용체(GPCR)와 온혈 동물의 이온채널을 변형하기 위해, 온혈 동물에서 세포 호르몬(cytokines)을 변형하기 위해 또한 효과적일 수 있다.
반면, 화학식(Ⅰ)의 구조를 갖는 특히 화학식(Ⅵ)의 구조를 갖는 화합물들은 암, 특히 직장암과 같은 Wnt-신호 경로 변형에 의한 질병을 억제하거나 치료하기 위하여 효과적이다.
Figure 112004014842603-pct00016
상기 화학식(Ⅵ)에서 Ra는 8에서 11까지의 링 구성원을 갖는 두 고리(bicyclic)아릴 그룹이다. 이러한 구성원들은 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1에서 3까지의 헤테로 원자들을 가질 수 있다. 그리고 Rb는 5에서 7까지의 링 구성원을 갖는 단일 고리 아릴 그룹이다. 이러한 구성원들은 질소, 산소 또는 황으로부터 선택된 1에서 2까지의 헤테로 원자를 가질 수 있다. 그리고 본 화합물의 아릴 링은 할라이드, 하이드록시, 시아노, 저급 알킬, 그리고 저급 알콕시 그룹으로부터 선택된 치환기 중 하나 이상을 가질 수 있다.
특히, Ra는 이소부틸, 벤질, 비스페닐메틸, C1-7알킬나프틸, C1-6알콕시나프틸, 할로나프틸, 피리딜, 톨루일, 나프틸, 퀴놀리닐, 퀴녹살리닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조퓨라닐, 페닐, 하이드록시페닐, 하이드록시메톡시페닐, C1-7알킬페닐, C1-6알콕시페닐, 디1-6알콕시페닐, C1-7알킬아미노페닐, 디C1-7알킬아미노페닐, 디C1-7알킬아미노할로페닐, 디C1-7알킬디C1-7알킬아미노페닐, C1-7알킬디C1-7알킬아미노페닐, 디할로디C1-7알킬아미노페닐, 아미노페닐, 트리플루오로C1-7알킬페닐, 할로트리플루오로C1-7알킬페닐, 트리플루오로C1-6알콕시, 트리플루오로C1-7알킬티올, 카르복시페닐, 할로C1-7알킬우레이도페닐, 플루오로페닐, 디플루오로페닐, 할로페닐, 디할로페닐, 펜타할로페닐 또는 트리할로페닐이고,
Rb는 하이드록시C1-7알킬, C1-6알콕시C1-7알킬, C3-6사이클로알킬, (디옥소디하이드로이소인돌릴메틸)C3-6사이클로알킬, 시아노, 아미노페닐C1-7알킬, C1-6알콕시페닐C1-7알킬, 디페닐C1-7알킬, 테트라하이드로퓨라닐, 나프틸, (하이드록시메틸페닐에틸)메틸카바모일C1-7알킬, 인돌릴C1-7알킬, 벤질, 할로페닐C1-7알킬, 피리딜, 피리딜C1-7알킬, 이미다졸릴C1-7알킬, 퓨라닐, 티오퓨라닐, 페닐, C1-7알킬페닐, C1-6알콕시페닐, 디C1-6알콕시페닐, 트리플루오로메틸페닐, 카르복시페닐, 아미노페닐, 디C1-7알킬아미노벤질, 니트로페닐, 디할로페닐 또는 할로-페닐이다.
더욱 바람직하게는 Ra는 페닐, 벤질, 나프틸, 피리딜, 퀴노리닐, 퀴녹살리닐, 벤즈이미다졸릴 또는 벤조퓨라닐 중에서 선택되며, Rb는 사이클로헥실, 테트라하이드로퓨라닐, 페닐, 벤질, 나프틸, 인돌릴, 이미다졸릴, 퓨라닐, 티오퓨라닐 또는 피리딜 중에서 선택될 수 있다.
따라서, 본 발명은 일반적인 화학식(Ⅵ)의 구조를 갖는 화합물의 안전하고 효과적인 양을 특징으로 하는 약학 조성물을 공급하는데 목적이 있다. 그리고 Wnt- 신호 경로 변형에 의한 특히 TCF4- β-카테닌- CBP복합체 변형에 의한 질병을 치료하기 위해서 사용되는 약학적으로 허용 가능한 담체를 공급하는데 목적이 있다.
또한 본 발명은 앞에서 정의된 본 발명의 조성물을 사용하여 종양의 생장을 억제하기 위한 방법; 앞에서 정의된 본 발명의 조성물을 사용하여 암세포의 소멸을 유도하는 방법; 앞에서 정의된 본 발명의 조성물을 사용하여 TCF4-β 카테닌-CBP 복합체 변형에 의한 질병을 치료하는 방법 ; 그리고 본 발명의 조성물과 5-플루오 르우라실(5-FU), 탁솔, 시스플라틴, 미토마이신 C, 테가푸르, 랠티트렉스드 (raltitrexed), 카페시타빈(capecitabine) 및 이리노테칸(irinotecan)과 같은 항암제를 함께 투여하여 직장암과 같은 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 바람직한 양태에서는, 본 발명의 화합물은 다음과 같은(6S,10R)- 구조(configuration)를 갖는다.
Figure 112004014842603-pct00017
상기 화학식(Ⅵa)에서 Ra와 Rb는 위에서 정의된 바와 같다.
한편 본 발명의 다른 측면에서는, 본 발명의 리버스-턴 유사체를 포함하는 라이브러리가 나타나 있다. 일단 조합되면, 본 발명의 라이브러리를 스크리닝하여 각각 구성원이 갖는 생활성도를 동정한다. 이러한 생활성 구성원을 위한 라이브러리의 스크리닝은 예를 들면, 라이브러리의 구성원의 결합 활성을 평가하거나 라이브러리 구성원이 기능분석에 미치는 효과를 평가하는 것을 포함한다. 스크리닝(Screening)은 보통 항체, 효소, 수용체, 또는 세포주와 같은 관심 있는 표적과 함께 라이브러리 구성원(또는 라이브러리 구성원의 아그룹)들을 접촉시킴으로써 달성된다. 라이브러리 구성원들은 관심 있는 표적과 함께 상호 반응할 수 있고, 이하에서는 이를 “생활성 라이브러리 구성원” 또는 “생활성 유사체”라고 한다. 예를 들면, 생활성 유사체는 항체 또는 수용체와 결합할 수 있거나 효소를 억제할 수 있는 라이브러리 구성원이 될 수 있다. 또는 세포주와 같은 기능성 반응을 유도하거나 길항시킬 수 있는 라이브러리 구성원이 될 수 있다. 즉, 본 발명의 라이브러리 스크리닝은 관심 있는 하나 이상의 생물학적 표적과 함께 반응할 수 있는 라이브러리 구성원을 결정한다. 또한 상호작용이 일어나면, 생활성 유사체는 라이브러리 구성원들로부터 동정될 수 있다. 라이브러리로부터 단일(또는 제한된 수)의 생활성 유사체를 동정하면 그 자체가 생물학적으로 활성이어서 진단제, 예방제 또는 치료제로서 유용하고, 당해 분야에서 주요화합물의 동정을 상당히 진보시키는 데 사용될 수 있는 리버스-턴 유사체가 수득된다.
본 발명의 라이브러리의 펩티드 유사체의 합성은 본 발명의 첫 번째,두 번째,세 번째 성분 조각을 함께 결합해서 공지된 펩티드 합성 기술을 사용해서 수행될 수 있다. 더욱 상세하게는, 어떤 아미노산 배열은 구조적으로 제한된 리버스-턴 유사체의 N-말단과 C-말단에 첨가될 수 있다. 이를 위하여 유사체는 공지 기술에 따라 PAM 수지와 같은 고체 지지체에서 합성하거나(see,e.g., John M. Stewart and Janis D.Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 1984, Pierce Chemical Comp., Rockford, Ⅲ) 알콜 부착에 의해 실릴-연결된(silyl-linked) 수지에서 합성될 수 있다.(see Randolph et al., J. Am Chem. Soc. 117 : 5712-14, 1995).
또한, 용액과 고체상의 합성을 조합한 기술을 사용하여 본 발명의 펩티드 유사체를 합성할 수 있다. 예를 들면, 고체 지지체를 사용하여 구조적으로 제한된 리버스-턴이 서열에 첨가되는 지점까지 선형 펩티드 서열을 합성할 수 있다. 용액 합 성 기술에 의해 이미 합성된 적합한 구조적으로 제한된 리버스-턴 유사체를 고체상 합성에서 다음의 “아미노산”에 첨가시킬 수 있다.(즉 N-말단과 C-말단을 갖는 구조적으로 제한된 리버스-턴 유사체를 선형 펩티드에 첨가될 다음 아미노산으로 사용할 수 있다.) 구조적으로 제한된 리버스-턴 유사체 구조를 배열에 혼합할 때 추가의 아미노산을 고체 지지체에 결합한 펩티드를 완성시키기 위해 첨가할 수 있다. 또한 보호된 펩티드 서열의 선형 N-말단과 C-말단을 고체 지지체에서 합성할 수 있고, 지지체를 제거할 수 있고 공지된 용액 커플링 기술을 사용하여 용액에서 구조적으로 제한된 리버스-턴 유사체를 커플링시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 라이브러리를 구성하는 방법이 기재되어 있다. 전통적인 조합화학 기술(see, e.g., Gallop et al., J.Med. Chem. 37 : 1233-1251, 1994)은 다수의 화합물이 기본적인 분자 골격에서 시약들의 순차적인 조합에 의해 신속하게 제조되게 한다. 조합 기술은 천연 아미노산으로부터 유도된 펩티드 라이브러리를 구성하는데 사용되어져 왔다. 예를 들면, 20개의 적합하게 보호된 상이한 아미노산으로 이루어진 20개의 혼합물을 취하고 각각을 20개의 아미노산 중 하나와 커플링 시킴으로써 400개의 디펩티드로 이루어진 라이브러리가 생성된다. 이러한 과정을 7번 반복함으로써 약 26억 개의 옥타펩티드로 이루어진 펩티드 라이브러리를 제조한다.
특히, 본 발명의 펩티드 유사체의 라이브러리는 공지된 펩티드 활성 기술을 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들면, 리버스-턴 유사체 라이브러리[4,4,0]의 일반 적인 도식(scheme)은 다음과 같다:
Figure 112004014842603-pct00018
본 발명의 펩티드 유사체의 라이브러리의 합성은 공지된 기술인 96 웰 플레이트를 갖는 플렉스켐 반응 블록(FlexChem Reactor Block)을 사용하여 수행될 수 있다. 위의 과정에서 ‘Pol’은 브로모아세탈 수지를 나타낸다. 그리고 상세한 과정이 아래에 제시되어 있다.
1단계
브로모 아세탈 수지(resin)(37mg, 0.98mmol/g)와 DMSO에 R2-아민을 넣은 용액을 96개의 판을 갖는 로빈 블록(Robbins block)에 넣는다. 반응기는 회전식 오븐을 사용하여 12시간 동안 약 60℃에서 흔든다. 수지(resin)는 DMF, MeOH로 세척한 후 DMC으로 세척한다.
2단계
시판되고 있는 DMF에 Fmoc아미노산(4당량), PyBob(4당량), HOAt(4당량), 그 리고 DIEA(12당량)을 녹인 용액을 수지에 넣는다. 반응물을 상온에서 12시간 동안 흔든 후 수지를 DMF, MeOH로 세척한 후 DCM으로 세척한다.
3단계
반응 전에 DMF에 의해 팽윤된 수지에 DMF 속의 25% 피페리딘을 첨가하고 반응물을 상온에서 30분 동안 흔든다. 디프로텍션(deprotection)단계를 다시 반복하고 수지는 DMF, 메탄올로 세척한 후 DCM으로 세척한다. DMF에 히드라진 산(4당량), HOBt(4당량), 그리고 DIC(4당량)을 녹인 용액에 수지를 첨가한다. 그리고 반응 반응물을 상온에서 약 12시간 동안 흔든다. 수지는 DMF, MeOH로 세척한 후 DCM으로 세척한다.
4a 단계 (히드라진 산은 MOC 카르밤산염(carbamate)이다.)
3단계에서 얻은 수지를 상온에서 18시간 동안 포름산으로 처리한다.(각 웰 마다 1.2ml씩) 수지를 여과에 의하여 제거한 후, 여과액은 생성물을 오일의 형태로 얻기 위해 스피드 백(Speed Vac, SAVANT)을 사용하여 감압 하에 응축한다. 생성물은 50%의 물/아세토니트릴로 희석한다. 그리고 나서 동결 건조한다.
4b 단계(Fmoc 히드라진 산은 아이소시아네이트(isocynate) 통해 요소를 만드는데 사용된다.)
반응 전에 DMF에 의해 팽윤된 수지에 DMF 속의 25% 피페리딘을 첨가한다. 그리고 반응물을 상온에서 약 30분 동안 흔든다. 이러한 디프로텍션(deprotection)과정을 다시 반복하고 수지는 DMF, Methanol로 세척한 후 DCM으로 세척한다. DCM에 의해서 팽윤된 수지에 반응 전에 아이소시아네이트(isocynate)(5당량)을 DCM에 넣는다. 수지를 상온에서 약 12시간 동안 흔든 후 DMF, MeOH로 세척한 후 DCM으로 세척한다. 수지는 상온에서 포름산으로(각 웰 당 1.2ml씩) 약 18시간 동안 처리한다. 수지를 여과에 의해서 제거한 후 여과액은 생성물을 오일의 형태로 얻기 위해서 스피드 백을 사용하여 감압 시킨다. 생성물은 50%물/아세토니트릴로 희석시킨 후 동결 건조한다.
4c단계(Fmoc 히드라진 산으로부터 활성화된 카바메이트를 통해 요소(urea)를 만드는 방법)
반응 전에 DMF에 의해 팽윤된 수지에 DMF 속의 25% 피페리딘을 첨가한다. 그리고 반응물을 상온에서 약 30분 동안 흔든다. 이러한 디프로텍션(deprotection)과정을 다시 반복하고 수지는 DMF, MeOH로 세척한 후 DCM으로 세척한다. 반응 전에 DCM에 의해 팽윤된 수지에 DCM 속의 p-니트로페닐 클로로포름산(5당량) 그리고 다이이소프로필 에틸아민(5당량)을넣는다. 반응물을 상온에서 약 12시간 동안 흔든 후, 수지를 DMF, MeOH으로 세척한 후 DCM으로 세척한다. (반응 전에 DCM에 의해 팽윤된 수지에 1차 아민을 가하고 12시간 동안 흔든 후, 수지를 DMF, MeOH으로 세척한 후 DCM으로 세척한다.) 반응 후 수지는 상온에서 약 18시간 동안 포름산으로 처리한다.(각 웰당 1.2ml씩) 수지를 여과에 의해서 제거한 후 여과액을 생성물을 오 일로 얻기 위해 스피드 백을 사용하여 감압 하에서 응축시킨다. 생성물은 50% 물/아세토니트릴로 희석하고 동결 건조시킨다.
이러한 히드라진 산의 중간체의 핵심이 되는 블록 라이브러리를 만들기 위하여 상술하는 실시예에 따라 합성한다.
<표2>는 본 발명에 따라 제조될 수 있는 [4,4,0]리버스-턴 유사체 라이브러리를 보여준다. 이것의 대표적인 제조물은 예4에 주어져 있다.
<표2> [4,4,0] 리버스-턴 유사체의 라이브러리
Figure 112004014842603-pct00019
Figure 112004014842603-pct00020
Figure 112004014842603-pct00021
Figure 112004014842603-pct00022
Figure 112004014842603-pct00023
Figure 112004014842603-pct00024
Figure 112004014842603-pct00025
Figure 112004014842603-pct00026
Figure 112004014842603-pct00027
Figure 112004014842603-pct00028
Figure 112004014842603-pct00029
Figure 112004014842603-pct00030
Figure 112004014842603-pct00031
Figure 112004014842603-pct00032
Figure 112004014842603-pct00033
Figure 112004014842603-pct00034
Figure 112004014842603-pct00035
Figure 112004014842603-pct00036
Figure 112004014842603-pct00037
Figure 112004014842603-pct00038
Figure 112004014842603-pct00039
Figure 112004014842603-pct00040

또한 본 발명의 펩티드 유사체 라이브러리의 합성은 [4,3,0]리버스-턴 유사체의 라이브러리의 일반적인 도식(scheme)을 사용하여 수행될 수 있다.
Figure 112004014842603-pct00041

본 발명의 두 고리식 주형 라이브러리의 펩티드 유사체의 합성은 공지기술에 의해 96 웰 플레이트를 갖는 플렉스켐 리엑터 블록(FlexChem Reator Block)을 사용하여 수행될 수 있다. 위의 도식 중에 ‘Pol’은 브로모 아세탈수지를 나타낸다. 상세한 과정은 이하에서 서술한다.
단계1
브로모아세탈 수지(1.6mmol/g)와 DMSO에 녹인 R1아민 용액(2M용액)을 96 웰 로빈 블록 (96 well Robbins block)에 넣는다. 반응물은 12시간 동안 회전식 오븐(Robbins Scientific)을 사용하여 60℃에서 흔든다. 수지는 DMF, MeOH로 세척한 후 DCM으로 세척한다.
단계2
DMF에 시판되고 있는 Fmoc-아미노산(4당량), PyBob(4당량), HOAt(4당량)그리고 DIEA(12당량)을 녹인 용액을 수지에 첨가한다. 반응물을 상온에서 12시간 동안 흔든 후 수지를 DMF, MeOH로 세척한 후 DCM으로 세척한다.
단계3
반응 전에 DMF에 의해 팽윤된 수지에 DMF 속의 25%피페리딘을 넣는다. 반응 후 상온에서 약 30분 동안 반응물을 흔든다. 디프로텍션(deprotection) 단계를 다시 반복한다. 그리고 DMF,MeOH로 세척한 후 DCM으로 세척한다. 히드라진 카보모일 클로라이드(4당량), HOBt(4당량), 그리고 DIC(4당량)을 DMF에 녹인 용액을 수지에 넣는다. 반응 후 혼합물을 상온에서 약 12시간 동안 흔든 후 수지를 DMF, MeOH로 세척한 후 DCM으로 세척한다.
단계4
반응 전에 DFM에 의해 팽윤된 수지에 DMF 속의 25% 피페리딘을 넣는다. 그 후 상온에서 30분 동안 혼합물을 흔든다. 이러한 디프로텍션(deprotection)단계를 다시 반복하고, DMF, 메탄올로 세척하고 나서 DCM으로 씻는다. 반응 전에 DFM에 의해 팽윤된 수지에 DMF 속의 R1-아이소시아네이트(5당량)을 넣는다. 반응 후 혼합물을 상온에서 12시간 동안 흔든 후 수지를 DMF, MeOH로 세척한 후 DCM으로 세척한다.
단계5
수지는 상온에서 18시간 동안 포름산으로 처리한다.(각 웰 당 1.2ml씩) 수지를 여과기로 제거한 후 여과액을 생성물을 오일로 얻기 위해 스피드 백을 사용하여 감압 하에서 응축시킨다. 이 생성물은 50%물/아세토니트릴로 희석시킨다. 그리고 나서 동결 건조한다.
<표3>은 본 발명에 따라 제조된 [4,3,0]리버스 턴 유사체의 라이브러리를 보여준다. 또 이것의 대표적인 제조물은 예5와 같다.
<표3> [4,3,0]리버스-턴 유사체 라이브러리
Figure 112004014842603-pct00042
Figure 112004014842603-pct00043
Figure 112004014842603-pct00044
Figure 112004014842603-pct00045
Figure 112004014842603-pct00046
Figure 112004014842603-pct00047
Figure 112004014842603-pct00048
Figure 112004014842603-pct00049

본 발명의 또 다른 측면에서는 생활성을 위한 라이브러리를 스크리닝하는 방법과 생활성 라이브러리 구성원을 분리하는 방법에 대하여 밝히고 있다. 본 발명의 라이브러리는 다양한 기술과 방법에 의한 생물활성이 스크리닝되고 있다. 일반적으로, 스크리닝 조사는 (1) 생물학적으로 관심있는 표적(예를 들면 라이브러리의 유사체와 표적간 결합을 가능하게 하는 수용체)과 라이브러리리 구성원을 접촉시킴에 의해서, (2) Lam et al.이나 Griminski et al.에 의해 밝혀진 열량측정법과 같은 적절한 조사에 의하여 결합될 수 있는 결과를 찾음으로써 수행될 수 있다. 바람직한 양태에서는 라이브러리 구성원들은 용액 상태이고 목표 물질은 고체상에서 고정 되어 있다. 또한 라이브러리는 고체상에서 고정될 수 있으며 용액에서 목표에 의한 접촉에 의해서 탐지될 수 있다.
<표4>는 본 발명에 의한 라이브러리로부터 선택되는 생물활성 시험을 위한 화합물과 그들의 IC50 값을 보여준다. 이것들은 예6에서 묘사된 바와 같이 조사 유전자의 조사에 의해서 측정된다.
<표4> 선택된 라이브러리 화합물의 IC50(μM)
Figure 112004014842603-pct00050
Figure 112004014842603-pct00051
Figure 112004014842603-pct00052
Figure 112004014842603-pct00053
Figure 112004014842603-pct00054
Figure 112004014842603-pct00055
Figure 112004014842603-pct00056
Figure 112004014842603-pct00057
Figure 112004014842603-pct00058
Figure 112004014842603-pct00059
본 발명에서 일반적인 화학식(Ⅰ) 특히 일반적인 화학식(Ⅵ)의 화합물은 그것의 CBP와의 특별한 결합 때문에 암 세포에서 CBP 중간체의 전사 활동을 억제할 수 있다. 그리고 본 발명의 화합물과 함께 SW480세포의 CBP의 면역침강에 의하여 지지된다.
본 발명의 화합물은 또한 SW480세포에서 서바이빈 발현을 억제할 수 있다. 그리고 따라서, 암세포에서 종양 활동을 억제한다. 본 발명의 화합물은 암세포를 억제하기 위하여 사용될 수 있다. 그리고 따라서, 세포의 생장을 조절하는 데에도 사용될 수 있다. 이러한 결과를 지지하는 근거로, 본 발명의 화합물은 또한 SW480 세포에서 CASPASE-3 활동을 유도할 수 있고, 따라서 세포에서 세포사멸을 유도할 수 있음을 보여준다.
암 세포에서 종양 활동을 확인하기 위하여 생체 외 MTS 세포 독성조사에서 다음 방법에 의해 시험된다.
세포 독성 조사
SW480 또는 HCT116 세포를 96웰 마이크로플레이트(10000셀/웰)에 넣고 37℃에서 24시간 동안 배양한다. 세포는 24시간 동안 다양한 농도에서 TCF4 화합물로 처리한다. 20㎕의 MTS 용액을 각 웰에 넣고 37℃에서 2시간 동안 배양시킨다. 세포생존 능력은 마이크로플레이트 리더기(분자 장치)를 사용하여 490nm에서 흡수도를 읽음으로써 측정할 수 있다. 그리고 각 농도에서 화합물의 세포독성을 계산할 수 있다.
생장 억제 조사
SW480 또는 HCT116 세포를 96 웰 마이크로 플레이트(10000셀/웰)에 두고 37℃에서 24시간 동안 배양한다. [3-(4,5-다이메틸티아졸-2-일)-5-(3-카르복시페닐)-2-(4-술포페닐)-2H-테트라조리움, 분자내 염](MTS)용액(Promega)을 각 웰에 넣고 37℃(negative control)에서 2시간 동안 배양한 후 흡광도를 읽는다. 그리고 나서 세포를 48시간 동안 다양한 농도에서 TCF4로 처리한다. 20㎕의 MTS용액을 각 웰에 넣고 37℃에서 2시간 동안 배양한다. 세포 생활력은 마이크로 플레이트 리더(분자에 의한 장치)를 사용해서 490nm에서 흡광도를 읽어서 측정할 수 있다. 그리고 각 농도에서 반응물의 세포독성을 계산하였다.
선택된 라이브러리 화합물을 위한 종양활동의 결과는 <표5>에서 보이는 바와 같다.
<표5>
Figure 112004014842603-pct00060
Figure 112004014842603-pct00061
Figure 112004014842603-pct00062
Figure 112004014842603-pct00063
Figure 112004014842603-pct00064
Figure 112004014842603-pct00065

본 발명의 또 다른 측면에서, 일반적인 화학식(Ⅰ)의 구조를 갖는 화합물 특히 일반적인 화학식(Ⅵ)의 구조를 갖는 화합물을 포함하는 약학 조성물이 밝혀져 있다. 본 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제조하기 위하여, 당업자들은 적절하게 알려진 공지된 지식과 기술을 이용할 수 있다. 일반적으로 알려진 다양한 담체들과 다른 첨가제들이 본 발명의 조성물을 제조하는데 사용되었다. 본 발명의 약학 조성물은 치료되어야 할 질병의 상태에 따라 일반적인 방법으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 경구제, 직장제 또는 주사제 등으로 투여될 수 있다.
이러한 목적을 위하여, 본 발명의 화합물은 예를 들면 정제, 캡슐, 수용액, 유액 또는 부유물,(지질)에멀젼, 분산체, 좌약, 연고, 크림, 물방울(drop), 무균 주사 수용액, 유액 또는 부유물과 같은 공지된 기술에 의하여 제조될 수 있다.
본 발명의 적절한 약학 조성물은 본 발명의 화합물을 약 1mg에서 약 1g의 정제 또는 캡슐과 같은 단위 용량을 갖는 경구 제제에 적합하다.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명의 약학 조성물은 정맥의, 피하의, 근육의 주사제로 적합하게 사용될 수 있다. 환자는 본 발명의 화합물을 약1ug/1kg에서 1g/1kg 의 용량으로 정맥의, 피하의, 근육의 주사제로 받아들일 수 있을 것이다. 정맥의, 피하의, 근육의 주사제의 용량은 일시주사에 의하여 주어질 수 있다. 또한 정맥 주사제의 용량은 일정한 시간마다 지속적으로 주입함에 의하여 주어질 수 있다.
또한 환자는 하루에 한 번 내지 네 번 투여되는 조성물을 비경구 용량과 거의 동일한 경구 용량으로 투여 받을 수 있다.
다음 표는 사람의 치료나 예방을 위해서 화합물과 그것들의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 대표적인 조제물의 1회분 투여량의 형태를 나타낸 것이다.
정제 1 mg/tablet
화합물 100
락토오스(Lactose)Ph. Eur. 179
크로스카멜로스소디움 (Croscarmellose sodium) 12.0
폴리비닐피롤리돈 (Polyvinylpyrrolidone) 6
마그네슘스테아레이트 (Magnesium stearate) 3.0
정제2 mg/tablet
화합물 50
락토오스(Lactose) Ph. Eur. 229
크로스카멜로스 소디움 (Croscarmellose sodium) 12.0
폴리비닐 피롤리돈 (Polyvinylpyrrolidone) 6
마그네슘스테아레이트 (Magnesium stearate) 3.0

정제 3 mg/tablet
화합물 1.0
락토오스(Lactose) Ph. Eur. 92
크로스카멜로스 소디움 (Croscarmellose sodium) 4.0
폴리비닐 피롤리돈 (Polyvinylpyrrolidone) 2.0
마그네슘 스테아레이트 (Magnesium stearate) 1.0

캡슐 mg/capsule
화합물 10
락토오스(Lactose) Ph. Eur. 389
크로스카멜로스 소디움 (Croscarmellose sodium) 100
마그네슘 스테아레이트 (Magnesium stearate) 1.0

주사액 I (50mg/ml)
화합물 0.5% w/v
등장 수용액 100%까지(to 100%)

일반적인 화학식(Ⅰ)의 화합물, 특히 화학식(Ⅵ)의 화합물을 포함하는 약학 조성물은 암이나 직장암과 같은 Wnt-신호 경로 변이에 의한 질병의 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 측면에서는, 본 발명의 화합물을 안전하고 효과적인 양으로 암 세포에 투여하는 것을 특징으로 하는 개체 내의 종양 세포의 생장을 억제하기 위한 방법에 대하여 나타나 있다. 이러한 화합물을 포함하는 조성물은 또한 종양 세포의 억제를 위해 사용될 수 있다. 따라서 이러한 방법은 포유류 동물체에서 암 치료에 효과적으로 사용될 수 있다. 그것은 직장암의 치료에 유리하게 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에서는 Wnt-신호 경로 변형에 의한 질병을 치료하기 위한 방법, 일반적인 화학식(Ⅰ), 특히 일반적인 화학식(Ⅵ)의 구조를 갖는 화합물을 안전하고 효과적인 양으로 환자에게 투여하는 것을 특징으로 하는 방법에 대해 나타나 있다. 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물들은 또한 이러한 목적으로 사용될 수 있다.
이러한 관계에서 본 발명에서는 일반적인 화학식(Ⅰ), 특히 일반적인 화학식(Ⅵ)의 구조를 갖는 화합물이나 이를 포함하는 조제된 조성물은 Wnt-신호 경로와 와 관련된 암 세포의 과다발현을 일으킨다고 믿고 있는, TCF4- β카테닌 - CBP 복합체 변형에 의한 질병을 치료하는데 유용하게 사용될 수 있다. 따라서 본 발명의 또 다른 측면에서는 일반적인 화학식(Ⅰ), 특히 일반적인 화학식(Ⅵ)의 구조를 갖는 화합물을 사용해서, TCF4- β카테닌- CBP 복합체 변형에 의한 질병을 치료하기 위한 방법을 제공한다.
더욱이, 암의 치료에서는 또한 환자의 종양 세포에서 세포소멸을 유도하는 것과 밀접한 관련이 있기 때문에, 본 발명은 또한 일반적인 화학식(Ⅰ), 특히 일반적인 화학식(Ⅵ)의 구조를 갖는 화합물을 사용해서 암 세포에서의 세포소멸을 유도하는 방법을 나타낸다.
공지된 기술로부터 알려진 바와 같이 5-FU[플루오로우라실 ; 5-플루오로-2,4(1H,3H)-피리미딘디원]은 배양된 구강암 세포에서 세포 소멸을 유도할 수 있다(D. Tong et al., Oral Oncology 36, 2000, 236-241). 더욱이, 결장암(colon cancer)은 5-FU에 민감하다는 것이 알려져 있다(D.Arango et al., Cancer Research 61, 2001, 4910-4915). 따라서 본 발명에서는 항암효과가 있는 5-FU와 본 발명의 화학식(Ⅰ), 특히 일반적인 화학식(Ⅵ)의 구조를 갖는 화합물의 조합물을 제조하고 SW480 세포주(cell line)에 대하여 시험하였다. 그 결과 본 발명의 화합물과 5-FU 조합물, 특히 TCF4 화합물이 SW480 세포와 같은 암 생장을 억제하는 데 놀랄만한 효과가 있다는 것을 알았다.
따라서, 본 발명의 또 다른 측면에서는 제 1항의 화학식(Ⅰ)과 특히 화학식 (Ⅵ)의 구조를 갖는 화합물에 5-FU와 같은 다른 항암 제제를 혼합한 화합물을 안전하고 효과적인 양으로 환자에게 투여하는 것을 특징으로 하는 암 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 화합물은 서바이빈 활성을 억제할 수 있음을 보여준다. 블랑크-브루드 등은 논문에서(Blanc-Brude et al., Nat. Medicine 8 : 987, 2002) 서바이빈은 병리학상의 관-벽 재성형(vessel-wall remodeling)에서 중요한 민무늬근 세포 소멸의 중요한 조절인자임을 보였다. 따라서 본 발명의 또 다른 측면에서는 환자의 필요에 따라 본 발명의 리버스-턴 유사체의 안전하고 효과적인 양을 투여하는 것을 특징으로 하는 혈관 확장술과 관련이 있는 재협착을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명의 한 양태에서는 재협착(restenosis)을 치료한다. 즉, 본 발명의 리버스-턴 유사체를 재협착이 발생한 환자에게 투여하면 재협착에 의한 고통, 정도를 감소시킬 수 있다. 또한 본 발명은 다른 양태에서는 재협착을 예방한다. 즉, 새로운 또는 추가의 재협착이 발생할 것으로 예상되는 환자에게 본 발명의 리버스-턴 유사체를 투여하면 재협착에 의한 고통, 정도를 감소시킬 수 있다. 임의적으로 환자는 포유류 동물체이다.
본 발명의 화합물은 TCF/β-카테닌의 전사를 억제할 수 있음을 보여준다. 로도바 등은 논문에서(Rodova et al., J. Biol. Chem. 277 : 29577, 2002) PKD-1 촉진자(promoter)는 β-카테닌/TCF 경로의 표적이 됨을 보였다. 따라서 본 발명의 또 다른 측면에서는 환자의 필요에 따라 본 발명의 리버스-턴 유사체의 안전하고 효과적인 양을 투여하는 것을 특징으로 하는 다낭신 질병(polycystic kidney disease)을 치료하거나 예방하는 방법을 제공함을 목적으로 한다. 본 발명의 하나의 양태에서는 본 발명은 다낭신 질병을 치료한다. 즉, 본 발명의 리버스-턴 유사체를 다낭신 질병이 있는 환자에게 투여하여 다낭신 질병의 고통, 정도를 감소시킬 수 있다. 다른 양태에서 본 발명은 다낭신 질병을 예방한다. 즉, 본 발명의 리버스-턴 유사체를 새로운 또는 추가의 다낭신 질병의 발생할 것으로 예상되는 환자에게 투여하 면 다낭신 질병의 예상되는 고통, 정도를 감소시킬 수 있다. 임의적으로 환자는 포유류 동물체이다.
본 발명의 화합물은 Wnt 신호의 발현을 억제할 수 있음을 보여준다. 하나이 등은 논문에서(Hanai et al., J. Cell Bio. 158 : 529, 2002) 혈관생성 억제제 (anti-angiogenic factor)로 알려진 엔도스타틴이 Wnt 신호를 억제함을 보였다. 따라서, 본 발명의 다른 측면에서는 환자의 필요에 따라 본 발명의 리버스-턴 유사체의 안전하고 효과적인 양을 투여하는 것을 특징으로 하는 혈관생성 변형 질병(aberrant angiogenic)을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명의 하나의 양태에서는 혈관생성 변형 질병을 치료하는 것이다. 즉, 본 발명의 리버스-턴 유사체를 혈관생성 변형 질병이 있는 환자에게 투여하여 혈관생성 변형 질병에 의한 고통, 정도를 감소시킬 수 있다. 다른 양태에서 본 발명은 혈관생성 변형 질병을 예방한다. 즉, 본 발명의 리버스-턴 유사체를 새로운 또는 추가의 혈관생성 변형 질병이 발생할 것으로 예상되는 환자에게 투여하면 혈관생성 변형 질병의 예상되는 고통, 정도를 감소시킬 수 있다. 임의적으로 환자는 포유류 동물체이다.
본 발명의 화합물은 Wnt 신호의 발현을 억제할 수 있음을 보여준다. 센 등은 논문에서(Sen et al., P.N.A.S.(USA) 97 : 2791, 2000) 류머티스성 관절염이 걸린 포유류에서 RA활액 조직에서 Wnt와 Fz의 Wnt발현이 증가됨을 보였다. 따라서, 본 발명의 다른 측면에서는 환자의 필요에 따라 본 발명의 리버스-턴 유사체의 안전하 고 효과적인 양을 투여하는 것을 특징으로 하는 류머티스성 관절염을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. 하나의 양태에 있어서 본 발명은 류머티스성 관절염을 치료한다. 즉, 본 발명의 리버스-턴 유사체를 류머티스성 관절염이 있는 환자에게 투여하여 류머티스성 관절염의 고통, 정도를 감소시킬 수 있다. 다른 양태에서 본 발명은 류머티스성 관절염을 예방한다. 즉, 본 발명의 리버스-턴 유사체를 새로운 또는 추가의 류머티스성 관절염이 발생할 것으로 예상되는 환자에게 투여하면 류머티스성 관절염의 예상되는 고통, 정도를 감소시킬 수 있다. 임의적으로 환자는 포유류 동물체이다.
본 발명의 화합물은 Wnt 신호의 발현을 억제할 수 있음을 보여준다. 유쓰오프 등은 논문에서(Uthoff eg al., Int. J. Oncol. 19 : 803, 2001) 흐트러진 특이형태 상향 조절과 fz(Wnt 경로 분자)가 궤양성의 대장염(Chron의 질병환자와 비교하여)을 일으킨다는 것을 보였다. 따라서 본 발명의 다른 측면에서는 환자의 필요에 따라 본 발명의 리버스-턴 유사체의 안전하고 효과적인 양을 투여하는 것을 특징으로 하는 궤양성의 대장염을 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 필요에 따라 환자에게 투여하고 본 발명의 리버스-턴 유사체의 적절하고 효과적인 양을 그 내용으로 한다. 하나의 양태에서 본 발명은 궤양성의 대장염을 치료한다. 즉, 본 발명의 리버스-턴 유사체를 궤양성의 대장염이 있는 환자에게 투여함으로써 궤양성 대장염의의 고통, 정도를 감소시킬 수 있다. 다른 양태에서 본 발명은 궤양성 대장염을 예방한다. 즉, 본 발명의 리버스-턴 유사체를 새로운 또는 추 가의 궤양성의 대장염의 발병이 예상되는 환자에게 투여하면 예상되는 궤양성 대장염의 고통, 정도를 감소시킬 수 있다. 임의적으로 환자는 포유류 동물체이다.
도1은 SW480 세포에 대한 본 발명의 화합물의 IC50의 측정을 위한 그래프이다. SW480 세포에서 세포 생장 억제에 있어서 IC50 값을 얻기 위하여 실시예4에서 준비된 화합물을 다양한 농도에서 측정하였다. 특히, 당해 시험 화합물에 의한 반딧불형광 억제의 정도와 레닐라 루시퍼라제 활성이 결정되었다. 그 결과, SW480 세포의 생장에 대항하는 당해 시험 화합물의 IC50은 <표4>에 나타나 있다. 상세한 과정은 실시예6에서 나타난 것과 같다.
다음은 본 발명의 화합물, 조성, 사용하는 방법을 예시하기 위해 제시된 것이지만, 이로써 본 발명이 제한되지는 않는다.
[제조예1] : (N-Fmoc-N'-R3-히드라지노)-아세트 산의 제조
(1) N-Fmoc-N'- 메틸 히드라진의 제조
Figure 112004014842603-pct00066
2L, 가지가 두개 달린 둥근 바닥 플라스크(two-neck,round-bottomed-flask)에 유리마개와 칼슘 튜브를 끼운다. THF에 메틸히드라진 설페이트(20g,139mmol)를 녹인 용액(300ml)을 넣고, THF에 DiBoc(33g,153mmol)을 녹인 용액을 넣는다. 중탄산 나트륨(sodium bicarbonate)포화 수용액(500ml)을 깔대기를 통해서 방울방울 떨어뜨리고(dropwise)2시간 동안 격렬하게 교반한다. 6시간후 THF에 Fmoc-Cl(39g, 153mmol)을 녹인 용액을 천천히 가한다. 결과물은 0℃에서 6시간 동안 교반한다. 혼합물은 EA(500ml)로 추출하고 유기층을 남겨둔다. 용액은 황산나트륨과 함께 건조한 후 진공에서 증발시킨다. 다음 단계는 정제 없이 진행된다.
1L, 가지가 두개 달린 둥근 바닥 플라스크(two-necked, round-bottomed-flask)에 유리마개와 칼슘 튜브를 끼운다. 반응물에 MeOH(300ml)를 넣고 진한 염산(30mL, 12N)을 얼음물 조에서 교반하면서 깔대기를 통하여 천천히 넣는다. 그리고 밤새도록 교반한다. 혼합물은 EA(100ml)로 추출하고 유기층을 남겨둔다. 용액은 황산 나트륨으로 건조하고 진공에서 증발시킨다. 잔여물은 n-헥세인(hexane)과 EA로 결정화하여 정제하고 결과물을 얻는다(32.2g, 83%).
1HNMR (DMSO-D6) δ7.90~7.88 (d, J=6 Hz, 2H,), δ7.73~7.70 (d, J=9 Hz, 2H,), 7.44~7.31 (m, 4H), 4.52~4.50 (d, J=6 Hz, 2H), 4.31~4.26 (t, J=6 Hz, 1H), 2.69 (s, 1H)
(2)(N-Fmoc-N'-메틸-히드라지노)-아세트 산 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112004014842603-pct00067
1L, 가지가 두개 달린 둥근 바닥 플라스크(two-necked,round-bottmo-flask)에 유리마개와 칼슘 튜브에 연결된 환류 응축기를 끼운다. 톨루엔(300ml)에 N-Fmoc-N'-메틸-히드라진(20g, 75mmol)을 녹인 용액을 넣는다. 톨루엔(50ml)에 t-부틸 브로모 아세테이트(22g, 111mmol)를 녹인 용액을 천천히 넣는다. Cs2CO3(49g, 149mmol)을 천천히 넣는다. NaI(11g, 74mmol)를 격렬하게 교반하면서 천천히 넣는다. 반응물은 하루 동안 환류 온도(reflux temperature)에서 교반한다. 혼합물을 여과하고 유기층을 에틸 아세테이트(EA)(500ml)로 추출한다. 용액은 황산나트륨으로 건조하고 진공에서 증발시킨다. 헥세인(haxane) : EA = 2 : 1용액을 사용해서 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻는다(19.8g, 70%).
1H-NMR (CDCl3-d) δ7.78~7.75 (d, J=9 Hz, 2H,), δ7.61~7.59 (d, J =6 Hz, 2H,), 7.43~7.26 (m, 4H), 4.42~4.40 (d, J=6 Hz, 2H), 4.23 (b, 1H), 3.57 (s, 2H), 2.78 (s, 3H), 1.50 (s, 9H)
(3) (N-Fmoc-N'-메틸-히드라지노)-아세트 산의 제조
Figure 112004014842603-pct00068
1L, 가지가 두개 달린 둥근 바닥 플라스크(two-neck, round-bottmoed-flask)에 유리마개와 칼슘 튜브로 연결된 환류 응축기를 연결시킨다. (N-Fmoc-N'-메틸-히드라지노)-아세트산 t-부틸 에스테르(20g, 52mmol)을 넣는다. 염산용액(150ml, 디옥산 4M용액)을 얼음물 조에서 격렬하게 교반하면서 천천히 넣는다. 반응물은 상온에서 하루 동안 교반한다. 용액은 40℃에서 감압 하에서 완전하게 농축시킨다. 포화 NaHCO3 수용액(100ml)을 넣고 물층은 디에틸 에테르(100ml)로 씻어낸다. 진한염산을 0℃에서 천천히 방울방울로 떨어뜨린다(pH 2-3). 혼합물을 추출하고 유기층은 남겨둔다.(500mL, MC) 용액은 황산나트륨으로 건조하고 진공에서 증발시킨다. 잔여물은 n-헥세인(n-hexane)과 에틸 아세테이트(ethyl acetate)로 재결정하여 정제한다(12g, 72%).
1H-NMR (DMSO-d6) δ12.38(s, 1H), 8.56(b, 1H), 7.89~7.86(d, J=9 Hz, 2H,), δ7.70~7.67 (d, J=9 Hz, 2H,), 7.43~7.29 (m, 4H), 4.29~4.27 (d, J=6 Hz, 2H), 4.25~4.20 (t, J=6 Hz, 1H), 3.47 (s, 2H), 2.56 (s, 3H)

[제조예2] :(N-Moc-N'-R- 히드라지노)-아세트 산의 제조
(1) (N'- 메톡시카보닐-히드라지노)-아세트산 에틸 에스테르의 제조
Figure 112004014842603-pct00069
메틸 카바제이트(methyl carbazate)(50mg, 0.55mol)을 DMF(300ml)에 녹이고, 에틸 브로모아세테이트(ethyl bromoacetate)(68ml, 0.555mol), 포타슘 카보네이트( potassium carbonate)(77g, 0.555mol)을 반응기에 넣는다. 혼합물은 50℃에서 5시간 동안 유지한다. 반응이 완결되면 혼합물을 여과하고 EtOAc로 희석한다. 그리고 소금물로 세척한다(3번). 정제하지 않은 생성물은 칼럼(column)에 의해 정제한다(용리액(eluent) : Hex/EtOAc=4/1). Pdt : 72g(무색의 오일)
(2)[N-R7 -N' -메톡시카보닐- 히드라지노]- 아세트 산 에틸 에스테르
Figure 112004014842603-pct00070
에틸 에스테르(10g, 0.05mol), 탄산 칼륨(6.9g, 0.05mol), 그리고 R3-브롬화물(14.1g, 0.06mol)을 DMF에 녹였다(200ml). 그리고 혼합물을 5시간 동안 50℃에서 따뜻하게 유지한다. 반응이 완결된 후 혼합물을 여과하고, EA로 희석시킨다. 그리고 소금물로 씻는다(3번). 정제되지 않은 생성물은 크로마토그래피로 정제한다(용리액(eluent): Hex/EtOAc=4/1).
(3)[N-R7-N'-메톡시카보닐-히드라지노]-아세트 산
Figure 112004014842603-pct00071
알킬화된 에틸 에스테르(9.5g, 0.03mol)은 THF/물(1/1,ml)에 녹이고 0℃에서 2N NaOH(28.3ml)용액을 넣는다. 혼합물은 상온에서 2시간 동안 교반한다. 시작 물질인 에스테르가 UV에서 탐지되지 않게 되면, 용액을 EA로 희석한 후 분리한다. 수용액 층은 1N 염산에 의해 pH3~4로 산성화시킨다. 그리고 화합물은 DCM에 의해서 추출한다.(3번). 혼합된 유기 층은 MgSO4로 건조하고 증발시켜서 노란색 고체를 얻는다.
[실시예1]
(1) Nβ-Moc-Nα-벤질-히드라지노글리신의 제조
Figure 112004014842603-pct00072
본 화합물은 문헌에 기재된 과정에 따라 제조된다(참조: Cheguillaume et.al., Synlett, 2000, 3, 331).
(2) 1-메톡시카보닐-2,8-다이벤질-6-메틸-4,7-다이옥소-헥사하이드로피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진의 제조
Figure 112004014842603-pct00073
브로모아세탈 수지(60mg, 0.98mmol/g)와 DMSO에 벤질 아민을 녹인 용액(2.5ml, 2M)을 스크류 마개로 덮인 유리병 속에 둔다. 반응물은 12시간 동안 회전식 오븐(rotating oven)을 사용하여 60℃에서 흔든다. 수지는 여과에 의해서 모으고 DMF로 세척한 후 DCM으로 세척한다.
NMP에 Fmoc-알라닌(4당량), HATU(4당량), 그리고 DIEA(4당량)을 녹인 용액을 수지에 첨가한다. 반응물을 상온에서 4시간 동안 흔든 후 수지를 여과에 의해서 모은다. 그리고 DMF, DCM으로 세척한 후 DMF로 세척한다.
수지에 DMF속의 20% 피페리딘을 넣는다. 상온에서 8분 동안 반응물을 흔든 후, 수지를 여과에 의해서 모으고 DMF, DCM로 세척한 후 DMF로 세척한다.
Nβ-Moc-Nα-벤질-히드라지노글리신(4당량), HOBT(4당량) 그리고 DIC(4당량) 을 DMF에 녹인 용액을 위에서 준비한 수지에 첨가한다. 반응물을 상온에서 세 시간 동안 흔든 후 수지를 여과액에 의해서 모으고 DMF, DCM으로 세척한 후 MeOH로 세척한다. 수지는 상온에서 진공상태에서 말린다.
수지를 상온에서 18시간 동안 포름산(2.5ml)으로 처리한다. 수지를 여과액에 의해서 제거한 후, 여과액은 오일로 생성물을 얻기 위해 감압 하에서 응축시킨다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm; 1.51 (d, 3H), 2.99 (m, 1H), 3.39 (d, 1H), 3.69 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 4.02 (d, 1H), 4.24 (d, 1H), 4.39 (d, 1H), 4.75 (d, 1H), 5.14 (q, 1H), 5.58 (dd, 1H), 7.10-7.38 (m, 10H).
[실시예2]
(1) N'-Fmoc-N-메틸-히드라지노카보닐 클로라이드의 제조
Figure 112004014842603-pct00074
N-메틸 히드라진 카복실산 9H-플로렌-9-일메틸 에스테르(107mg, 0.4mmol)를 15ml의 CH2Cl2에 녹인 용액과 NaHCO3 포화 수용액의 냉각된 이상성의 혼합물을 급속하게 교반한다. 한편 톨루엔(1.03ml, 2mmol)을 단일 부분(single portion)으로 첨가한다.
반응물은 30분동안 교반하고 유기상을 모은다. 그리고 수용액상은 CH2Cl2로 추출한다. 혼합된 유기층은 MgSO4로 건조시키고, 여과한 후 거품의 고체로서 카바모일 클로라이드 128mg을 사용하여 감압 하에서 농축시킨다.(주의: 포스겐 증기는 매우 독성이 강하다. 후드에서 사용하라) 생성물은 정제하지 않고 다음 고체상의 합성에 사용된다.
(2)2,5-다이메틸-7-벤질-3,6-다이옥소-헥사하이드로-[1,2,4]트리아졸[4,5-a]피라진-1-카복실 산 벤질아미드의 제조
Figure 112004014842603-pct00075
브로모아세탈 수지(30mg, 0.98mmol/g)와 DMSO(1.5ml, 2M)에 벤질 아민을 녹인 용액을 스크류 캡이 있는 유리병에 둔다. 반응물은 회전식 오븐(Robbins Scientific)을 사용하여 12시간 동안 60℃에서 흔든다. 수지는 여과에 의해서 모으고, DMF로 세척한 후 DCM으로 세척한다.
NMP에 Fmoc-알라닌(3당량), HATU(3당량), 그리고 DIEA(3당량)을 녹인 용액을 수지에 넣는다. 반응물을 상온에서 약 4시간 동안 흔든 후, 수지를 여과에 의해서 모은다. 그리고 DMF, DCM로 세척한 후 DMF로 세척한다.
수지에 DMF 속의 20%피페리딘을 첨가한다. 반응물을 상온에서 8분 동안 흔든 후, 수지를 여과에 의해서 모으고, DMF, DCM으로 세척한 후 DMF로 세척한다.
DCM에 단계 (1)에서 얻은 N'-Fmoc-N-메틸-히드라지노카보닐 클로라이드(5당량), DIEA(5당량)을 녹인 용액을 위에서 준비한 수지에 넣는다. 반응물을 상온에서 4시간 동안 흔든 후, 수지를 여과에 의해서 모은다. 그리고 DMF, DCM로 세척하고, 그리고 나서 DMF로 세척한다.
수지에 DMF 속의 20% 피페리딘을 넣는다(수지1g당 10ml). 상온에서 반응물을 8분 동안 흔든 후, 수지를 여과에 의해서 모은다. 그리고 DMF,DCM로 세척하고 그리고 나서 DMF로 세척한다.
수지를 DCM에 벤질 이소시아네이트(4당량)와 DIEA(4당량)을 넣은 혼합물로 상온에서 4시간 동안 처리한다. 그리고 나서 수지를 여과에 의해서 모으고 DMF, DCM으로 세척한다. 그리고 나서 MeOH로 세척한다. 수지를 진공 속에서 상온으로 건조한다.
수지는 상온에서 14시간 동안 포름산으로 처리한다. 수지를 여과에 의해서 제거한 후, 여과액은 오일 상태로 생성물을 얻기 위해 감압 하에서 응축한다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δppm ; 1.48 (d, 3H), 2.98 (s, 3H), 3.18 (m, 1H), 3.46 (m, 1H), 4.37-4.74 (m, 5H), 5.66 (dd, 1H), 6.18 (m, 1H), 7.10-7.40 (m, 10H).
[실시예3]
2,5,7-트리메틸-3,6-다이옥소-헥사하이드로-[1,2,4]트리아조로[4,5-a]피라진-1-카복실산 벤질아미드의 제조
본 화합물은 실시예2와 같은 과정에 따라 제조된다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δppm ; 1.48 (d, 3H), 2.99 (s, 3H), 3.03 (s, 3H), 3.38 (m, 1H), 3.53 (dd, 1H), 4.36 (dd, 1H), 4.52 (q, 1H), 4.59 (dd, 1H), 5.72 (dd, 1H), 6.19 (br.t, 1H), 7.10-7.38 (m, 5H).
[실시예4]
2-메틸-5-(p-하이드록시페닐메틸)-7-나프틸메틸-3,6-다이옥소-헥사하이드로-[1,2,4]트리아조로[4,5-a]피라진-1-카복실산 벤질 아미드의 제조
브로모아세탈 수지(30mg, 0.98mmol/g)과 DMSO에 나프틸메틸 아민을 녹인 용액(1.5ml.2M)을 스크류 캡이 있는 유리병에 넣는다. 반응물은 회전식 오븐(Robbins Scientific)을 사용하여 60℃에서 12시간 동안 흔든다. 수지는 여과에 의해서 모으고, DMF로 세척하고 그리고 나서 DCM으로 세척한다.
NMP에 Fmoc-Tyr(OBut)-OH(3당량), HATU(3당량), 그리고 DIEA(3당량)을 녹인 용액을 수지에 넣는다. 반응물을 상온에서 4시간 동안 흔든 후, 수지를 여과에 의해서 모은다. DMF, DCM으로 세척하고 그리고 나서 DMF로 세척한다.
수지에 DMF 속의 20% 피페리딘을 넣는다. 반응물을 상온에서 8분 동안 흔든 후 수지를 여과에 의해서 모은다. DMF, DCM으로 세척하고 그리고 나서 DMF로 세척한다.
DCM에 N'-Fmoc-N-메틸-히드라지노카보닐 클로라이드(5당량), DIEA(5당량)을 녹인 용액을 위에서 준비한 수지에 넣는다. 반응물을 상온에서 4시간 동안 흔든 후, 수지를 여과에 의해서 모은다. DMF, DCM으로 세척하고 그리고 나서 DMF로 세척한다.
수지에 DMF 속의 20% 피페리딘을 넣는다(수지 1g당 10ml). 상온에서 8분동안 흔든 후 수지를 여과에 의해서 모은다. DMF, DCM으로 세척하고 그리고 나서 DMF로 세척한다.
수지를 DCM에 벤질이소시아네이트(4당량)와 DIEA(4당량)을 넣은 혼합물로 상온에서 4시간 동안 처리한다. 그리고 나서, 수지를 여과에 의해서 모으고 DMF, DCM으로 세척한 후 MeOH로 세척한다. 수지를 진공 속에서 상온으로 건조한다.
수지를 상온에서 14시간 동안 포름산으로 처리한다. 수지를 여과에 의해서 제거한 후, 여과액을 오일 상태의 생성물로 얻기 위해 감압 하에서 응축시킨다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δppm ; 2.80-2.98 (m, 5H), 3.21-3.37 (m, 2H), 4.22-4.52 (m, 2H), 4.59 (t, 1H), 4.71 (d, 1H), 5.02 (dd, 1H), 5.35 (d, 1H), 5.51 (d, 1H), 6.66 (t, 2H), 6.94 (dd, 2H), 7.21-8.21 (m, 12H).
[실시예5]
2-메틸-6-(p-하이드록시페닐메틸)-8-나프틸-4,7-다이옥소-헥사하이드로피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1-카복실산 벤질아미드의 제조
브로모아세탈 수지(60mg, 0.98mmol/g)와 DMSO(2.5ml, 2M)에 나프틸 아민을 녹인 용액을 스크류 캡이 있는 유리병에 둔다. 반응물은 12시간 동안 회전식 오븐(Robbins Scientific)을 사용하여 60℃에서 흔든다. 수지는 여과에 의해서 모으고 DMF로 세척한 후 DCM으로 세척한다.
NMP에 Fmoc-Tyr(OBut)-OH(4당량), HATU(PerSeptive Biosystems)(4당량)을 녹인 용액을 수지에 넣는다. 반응물을 상온에서 4시간 동안 흔든 후, 수지를 여과에 의해서 모으고 DMF, DCM으로 세척한 후 DMF로 세척한다.
수지에 DMF 속의 20% 피페리딘을 넣는다. 반응물을 상온에서 8분 동안 흔든 후 , 수지를 여과에 의해서 모은다. 그리고 DMF, DCM으로 세척한 후 DMF로 세척한다.
DMF에 Nβ-Fmoc-Nα-벤질-히드라지노글리신(4당량), HOBT(Advanced ChemTech) (4당량) 그리고 DIC(4당량)을 녹인 용액을 위에서 준비한 수지에 넣는다. 반응물을 상온에서 3시간 동안 흔든 후, 수지를 여과에 의해서 모은다. DMF로 세척한 후 DCM으로 세척한다. 수지에 DMF속의 20% 피페리딘을 넣는다(수지 1g당 10ml). 반응물을 상온에서 8분 동안 흔든 후, 수지를 여과에 의해서 모은다. DMF, DCM으로 세척한 후 DMF로 세척한다.
수지를 DCM에 벤질 이소시아네이트(4당량), DIEA(4당량)을 넣은 혼합물로 상온에서 4시간 동안 처리한다. 그리고 나서 수지를 여과에 의해서 모으고, DMF, DCM으로 세척한 후 MeOH로 세척한다. 수지를 진공 속에서 상온으로 건조시킨 후, 수지를 상온에서 18시간 동안 포름산(2.5ml)으로 처리한다. 수지를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 오일 상태의 생성물로 얻기 위해 감압 하에서 응축한다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δppm ; 2.73 (s, 3H), 3.13 (d, 1H), 3.21-3.38 (m, 3H), 3.55 (d, 1H), 3.75 (t, 1H), 4.22 (dd, 1H), 4.36 (dd, 1H), 4.79 (d, 1H), 5.22 (t, 1H), 5.47 (m, 2H), 6.68 (d, 2H), 6.99 (d, 2H), 7.21-8.21 (m, 12H); MS (m/z, ESI) 564.1 (MH+) 586.3 (MNa+).
[실시예6]
SW480 세포에 대항하는 IC50의 측정을 위한 생물학적 분석(bioassay)과 세포선의 세포독성 시험은 다음과 같은 방법에 따른다. 시험 화합물은 예4에 의해서 준비된다.
Figure 112004014842603-pct00076
정보제공 유전자의 조사
SW480 세포는 감염 시약인 슈퍼펙트(Superfect)를 사용해서 감염시켰다(참조 : Quagen, 301307). 세포는 감염 전에 하루 동안 트립신화 시킨다. 그리고 50~80%정도 융합되기 위해서 6 웰 플레이드에 둔다(5×10 cells/well).
DNA 4 마이크로 그램(TOPFlash)과 1마이크로 그램(pRL-null)을 150㎕의 무혈청 배양기로 희석한다. 그리고 30㎕의 슈퍼펙트(Superfect) 감염 시약을 첨가한다. DNA-슈퍼펙트(Superfect) 혼합물은 15분 동안 상온에서 배양한다. 그리고 나서 10%의 FBS DMEM 1㎖를 이 복합체에 넣고 추가적으로 3시간 동안 배양한다. 복합체가 형성되면 세포는 항생제 없이 PBS로 두 번 세척한다.
DNA-슈퍼펙트 감염 시약(Superfect tansfect reagent) 복합체는 3시간 동안 5% CO2에서 37℃에서 배양되기 전의 세포에 적합하다. 배양 후 10% FBS로 회복된 배지를 첨가하면 최종 부피가 1.18ml가 된다. 3시간 동안 배양한 후, 세포는 96 웰 플레이트(3×10000cells/well)에서 수확되고 자생된다. 5% CO2, 37℃에서 밤새도록 배양한 후, 세포를 24시간 동안 시험 화합물로 처리한다. 마지막으로, 활성도를 발광 효소 조사에 의해서 확인한다.
도 1은 SW480 세포를 위한 위에서 제시된 화합물의 IC50 측정의 결과를 나타낸 것이다.
SRB(Sulforhodamine B) 법
아래에 제시된 세포에서 위의 화합물의 생장억제 효과는 SRB(sulforhodamine B) 법에 의해서 측정될 수 있다. 100㎕ 배지에 있는 SW480 세포를 96-웰 플레이트에 각각 두고 24시간 동안 부착해 둔다. 화합물을 원하는 마지막 농도를 생산하기 위해서 웰에 첨가하고, 플레이트는 48시간 동안 37℃에서 배양한다. 100㎕의 차가운(4℃) 10% 트리클로로로아세트산을 각각의 웰에 첨가하여 세포를 고정시킨다. 그리고 1시간 동안 4℃에서 배양하여 세포를 고정시킨다. 플레이트는 탈염수로 5번 씻고, 공기 중에서 말린다. 세포는 15분 동안 웰에 100㎕ SRB 용액(1% 아세트 산(v/v)에 0.4% SRB(w/v)를 넣은)을 첨가하여 염색시킨다. 염색되지 않고 남은 염료를 제거하기 위하여 염색 후, 플레이트를 1% 아세트산으로 재빠르게 5번 씻고, 공기 중에서 건조한다. 결합된 염료는 플레이트를 읽기 전에 10mmol/L의 트리스 베이스(pH 10.5)로 용해시킨다. 흡광도(OD)는 분자 장치로 515nm의 파장에서 플레이트 리더를 읽는다. 생장의 저해는 상대적인 생활력(%의 조절)으로 표현되고 GI50은 로그/프로빗 변환 후에 농도-반응 곡선으로부터 계산할 수 있다.
<표6> [실시예4]에서 얻어진 화합물의 생체 조건 밖에서의 세포독성 조사
Figure 112004014842603-pct00077
본 발명의 특정한 형태가 예시를 목적으로 본 원에서 기술되기는 하였지만, 본 발명의 요지 및 범위를 벗어나지 않고서도 각종 변형이 이루어질 수 있다는 것을 인지할 것이다. 따라서 본 발명은 첨부된 청구의 범위에 의해서만 제한된다.
생물학적으로 활성 펩티드와 단백질의 리버스-턴 범위의 2차 구조를 모방한 발명의 화합물은 서바이빈 발현, TCF/β-카테닌 전사, 그리고 Wnt 신호의 발현을 억제할 수 있다. 따라서 , 본 발명은 포유류에서 종양 세포의 생장을 억제하는 방법, 다른 항종양 제제의 조합물로 암을 치료하는 방법, 혈관 확장술(angioplasty)과 관련된 재협착, 다낭신 질병(polycystic kidney disease), 혈관생성 변형 질병( aberrant angiogenesis disease), 류머티스성 관절염 질병(rheumatoid arthritis disease) 그리고 궤양성의 대장염(ulcerative colitis)과 같은 질병을 치료하고 예방하는 방법 뿐만 아니라 생물학적으로 활성이 있는 화합물, 그리고 화합물의 라이브러리를 동정하는 방법을 제공할 수 있다.

Claims (24)

  1. 하기 화학식(Ⅰ)의 화합물.
    Figure 112009037248995-pct00078
    상기 화학식(Ⅰ)에서,
    A는 -(C=O)-,
    B는 -(CHR4)-,
    D는 -(C=0)-,
    E는 -(ZR6)-,
    G는 -(XR7)n-,
    W는 -(C=O)Y- 또는 -(C=O)NH-,
    Y는 산소,
    X는 N,
    Z는 N 또는 CH,
    n은 0 또는 1이고;
    R1은 C1-7알킬; C3-6사이클로알킬; 하이드록실, C1-6알콕시, C3-6사이클로알킬, (디옥소-디하이드로-이소인돌릴메틸)-C3-6사이클로알킬, 시아노, 할로겐, 아미노페닐, C1-6알콕시페닐, 디페닐, 테트라하이드로퓨라닐, C1-7알킬피롤리디닐, 피페리디닐, 모포리닐, 나프틸, 카바모일, 인돌릴, 페닐, 할로-페닐, 피리딜, 이미다졸릴, 퓨라닐 또는 티오퓨라닐 중에서 선택된 한 개의 치환기로 치환된 C1-7알킬; 페닐; C1-7알킬, C1-6알콕시, 트리플루오르 C1-7알킬 또는 할로겐 중에서 선택된 한 개의 치환기로 치환된 페닐; 벤질; C1-7알킬, C1-6알콕시, 트리플루오르C1-7알킬, 카르복시, 아미노, 디C1-7알킬아미노, 니트로 또는 할로겐 중에서 선택된 한 개 또는 두 개의 치환기로 치환된 벤질; 벤질옥시; 벤질옥시카르보닐; 페닐-아미노; 인다닐; 벤즈이미다졸릴; 로 구성되는 그룹으로부터 독립적으로 선택되거나 또는 W-R1은 페닐글리신이며;
    R2는 C1-7알킬, C1-6알콕시, 페닐, 할로-페닐, C1-6알콕시페닐, 디C1-6알콕시페닐, 비스페닐, C1-7알킬나프틸, C1-6알콕시나프틸, 할로나프틸, 테트라하이드로퓨라닐, 티오퓨라닐, 피페리디닐, 피리딜, 모포리닐, 톨루일, 나프틸, 퀴놀리닐, 퀴녹살리닐, 벤즈이미다졸릴 또는 벤조퓨라닐 중에서 선택된 한 개 또는 두 개의 치환기로 치환된 C1-7알킬; C1-7알킬페닐; 벤질; 하이드록시, C1-7알킬, C1-6알콕시, C1-7알킬아미노, 디C1-7알킬아미노, 아미노, 트리플루오로C1-7알킬, 트리플루오로C1-6알콕시, 트리플루오로C1-7알킬티올, 카르복시, 할로C1-7알킬우레이도 또는 할로겐 중에서 선택된 한 개 또는 두 개의 치환기로 치환된 벤질; 퓨라닐C1-3알킬-아미노; 또는 테트라하이드로-나프틸이고,
    R4는 C1-7알킬; C3-6사이클로알킬; C1-6알콕시, C1-7알킬티오, 비스페닐, C3-6사이클로알킬, 나프틸, 피리딜, 옥시피리디닐, 피롤릴, 나프틸아미노, 벤조일아미노 또는 하이드록시페닐 중에서 선택된 한 개 또는 두 개의 치환기로 치환된 C1-7알킬; 하이드록시-페닐; 벤질; 또는 하이드록시, 니트로, C1-7알킬, C1-6알콕시, 아미노, 벤질옥시카르보닐아미노, 카르복시, 할로겐 또는 시아노 중에서 선택된 치환기로 치환된 벤질이고,
    R6는 수소이고,
    R7은 C1-7알킬; 알릴; 스티릴메틸; 벤질; 또는 할로겐, 시아노 중에서 선택된 치환기로 치환된 벤질로 구성되는 그룹으로부터 독립적으로 선택된다.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 R1은 메틸, 펜틸, 헥실; 사이클로헥실; 하이드록시에틸, 메톡시프로필, 사이클로헥실메틸, (디옥소디하이드로이소인돌릴메틸)사이클로헥실메틸, 시아노메틸, 클로로에틸, 아미노페닐에틸, 메톡시페닐에틸, 디페닐메틸, 테트라하이드로퓨라닐메틸, 메틸피롤리디닐에틸, 피페리디닐에틸, 모포리닐에틸, 나프틸메틸, (하이드록시메틸페닐에틸)메틸카바모일에틸, N-카르복시벤질인돌릴에틸, 페닐에틸, 플루오로페닐에틸, 피리딜메틸, 피리딜에틸, 이미다졸릴프로필, 퓨라닐메틸, 티오퓨라닐메틸; 페닐; 메틸페닐, 메톡시페닐, 트리플루오로메틸페닐, 클로로페닐, 브로모페닐; 벤질; 메틸벤질, 메톡시벤질, 디메톡시벤질, 트리플루오로메틸벤질, 카르복시벤질, 아미노벤질, 디메틸아미노벤질, 니트로벤질, 디클로로벤질, 플루오로벤질, 디플루오로벤질; 벤질옥시; 벤질옥시카르보닐; 페닐-아미노; 인다닐; 벤즈이미다졸릴으로 구성되는 그룹으로부터 독립적으로 선택되거나 또는 W-R1으로서 페닐글리신이고;
    R2는 이소아밀, 메톡시프로필, 페닐에틸, 플루오로페닐에틸, 메톡시페닐에틸, 메톡시페닐에틸, 디메톡시페닐에틸, 비스페닐에틸, 메틸나프틸메틸, 메톡시나프틸메틸, 플루오로나프틸메틸, 테트라하이드로퓨라닐메틸, 티오퓨라닐메틸, 티오퓨라닐에틸, 피페리디닐에틸, 피리딜메틸, 모포리닐에틸, 톨루일메틸, 나프틸메틸, 퀴놀리닐메틸, 퀴녹살리닐메틸, 벤즈이미다졸릴메틸, 벤조퓨라닐메틸; 메틸페닐; 벤질; 하이드록시벤질, 하이드록시메톡시벤질, 메틸벤질, 메톡시벤질, 메틸아미노벤질, 디메틸아미노벤질, 디메틸아미노할로벤질, 디할로디메틸아미노벤질, 디메틸디메틸아미노벤질, 메틸디메틸아미노벤질, 디에틸아미노벤질, 에틸메틸아미노벤질, 아미노벤질, 트리플루오로메틸벤질, 플루오로트리플루오로메틸벤질, 트리플루오로메톡시벤질, 트리플루오로메탄티올벤질, 카르복시벤질, 클로로에틸우레이도벤질, 플루오로벤질, 디플루오로벤질, 트리플루오로벤질, 클로로벤질, 디클로로벤질; 퓨라닐메틸-아미노; 또는 테트라하이드로나프틸 이고,
    R4는 이소부틸; 사이클로헥실; 메톡시, 메틸티오에틸, 비스페닐에틸, 사이클로헥실메틸, 나프틸메틸, 피리딜메틸, 옥시피리디닐메틸, 피롤릴메틸, 나프틸아미노메틸, 벤조일아미노에틸, 하이드록시페닐에틸; 하이드록시페닐; 벤질; 하이드록시벤질, 니트로벤질, 메틸벤질, 부틸벤질, 부틸하이드록시벤질, 플루오로하이드록시벤질, 디하이드록시벤질, 니트로하이드록시벤질, 메톡시벤질, 아미노벤질, 벤질옥시카르보닐아미노벤질, 카르복시벤질, 카르복시메톡시벤질, 디메톡시벤질, 디플루오로벤질, 클로로벤질, 플루오로벤질, 디클로로벤질, 펜타플루오로벤질 또는 시아노벤질이고,
    R6은 수소이고,
    R7은 메틸, 프로필; 알릴; 스티릴메틸; 벤질; 디클로로벤질, 플루오로벤질 또는 시아노벤질 중에서 독립적으로 선택된다.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 A는 -(C=O)-, B는 -(CHR4)-, D는 -(C=O)-, E는 -(ZR6)- 및 G는 -(XR7)n- 인 치환기를 갖는 하기 화학식 (Ⅳ)의 화합물.
    Figure 112009037248995-pct00081
    상기 화학식(Ⅳ)에서 R1, R2, R4, R6, R7, W, X 및 n은 상기 제1항에서 정의된 바와 같고, Z는 질소 또는 CH(Z가 질소일 때 n은 0이고, Z가 CH일 때 n은 1이다)이다.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 제 5 항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅳ)의 화합물은 하기 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 하기 화학식(Ⅵ)의 화합물.
    Figure 112009037248995-pct00082
    상기 화학식(Ⅵ)에서,
    Ra는 이소부틸, 벤질, 비스페닐메틸, C1-7알킬나프틸, C1-6알콕시나프틸, 할로나프틸, 피리딜, 톨루일, 나프틸, 퀴놀리닐, 퀴녹살리닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조퓨라닐, 페닐, 하이드록시페닐, 하이드록시메톡시페닐, C1-7알킬페닐, C1-6알콕시페닐, 디1-6알콕시페닐, C1-7알킬아미노페닐, 디C1-7알킬아미노페닐, 디C1-7알킬아미노할로페닐, 디C1-7알킬디C1-7알킬아미노페닐, C1-7알킬디C1-7알킬아미노페닐, 디할로디C1-7알킬아미노페닐, 아미노페닐, 트리플루오로C1-7알킬페닐, 할로트리플루오로C1-7알킬페닐, 트리플루오로C1-6알콕시, 트리플루오로C1-7알킬티올, 카르복시페닐, 할로C1-7알킬우레이도페닐, 플루오로페닐, 디플루오로페닐, 할로페닐, 디할로페닐, 펜타할로페닐 또는 트리할로페닐이고,
    Rb는 하이드록시C1-7알킬, C1-6알콕시C1-7알킬, C3-6사이클로알킬, (디옥소디하이드로이소인돌릴메틸)C3-6사이클로알킬, 시아노, 아미노페닐C1-7알킬, C1-6알콕시페닐C1-7알킬, 디페닐C1-7알킬, 테트라하이드로퓨라닐, 나프틸, (하이드록시메틸페닐에틸)메틸카바모일C1-7알킬, 인돌릴C1-7알킬, 벤질, 할로페닐C1-7알킬, 피리딜, 피리딜C1-7알킬, 이미다졸릴C1-7알킬, 퓨라닐, 티오퓨라닐, 페닐, C1-7알킬페닐, C1-6알콕시페닐, 디C1-6알콕시페닐, 트리플루오로메틸페닐, 카르복시페닐, 아미노페닐, 디C1-7알킬아미노벤질, 니트로페닐, 디할로페닐 또는 할로-페닐이다.
  10. 제 9 항에 있어서, 상기 Ra는 페닐, 벤질, 나프틸, 피리딜, 퀴노리닐, 퀴녹살리닐, 벤즈이미다졸릴 또는 벤조퓨라닐 중에서 선택되며, Rb는 사이클로헥실, 테트라하이드로퓨라닐, 페닐, 벤질, 나프틸, 인돌릴, 이미다졸릴, 퓨라닐, 티오퓨라닐 또는 피리딜 중에서 선택되는 화합물.
  11. 제 10 항에 있어서, 상기 Ra는 나프틸이며, Rb는 사이클로헥실, 테트라하이드로퓨라닐, 페닐, 벤질, 나프틸, 인돌릴, 이미다졸릴, 퓨라닐, 티오퓨라닐 또는 피리딜인 화합물.
  12. 삭제
  13. 청구항 제1항의 화합물과 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 종양 세포의 생장 억제용 약학 조성물.
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