KR100788035B1 - 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물 또는 키트 - Google Patents

방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물 또는 키트 Download PDF

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Abstract

본 발명은 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물, 이들 유전자를 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트, 이들 유전자로부터 발현되는 단백질을 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물, 또는 이들 단백질을 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트에 관한 것이다. 상기 유전자 또는 상기 유전자로부터 발현되는 단백질을 포함하는 본 발명의 조성물 또는 키트는 방사선에 의해 유도된 암의 진단을 위해 유용하게 사용할 수 있다.

Description

방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물 또는 키트{A composition or kit for diagnosing a cancer induced by radiation}
도 1은 방사선 및 발암물질(MNU)에 유도된 종양의 헤마토실린/에오신 염색 결과를 보여주는 사진이다.
도 2는 RT-PCR에 의해 발현의 변화가 재확인된 유전자의 발현 패턴을 보여주는 도이다.
도 3은 리얼 타임 PCR(Real Time PCR)에 의한 유전자 발현의 정량적 측정 결과를 보여주는 도이다.
본 발명은 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물, 이들 유전자를 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트, 이들 유전자로부터 발현되는 단백질을 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물, 또는 이들 단백질을 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트에 관한 것이다.
방사선은 DNA를 절단하거나 유전자 변형을 유도하여 암을 유발함은 잘 알려진 사실이다. 방사선이 암을 유발할 수 있음은 1895년 뢴트겐 (Roentgens)이 X-선을 발명하고 난 후 알려졌다. 방사선에 의하여 발생하는 것으로 처음 보고된 암은 피부암이었고 그 후 백혈병의 발생도 보고되었다 (Upton AC (1986) Historical perspective on radiation carcinogenesis: in Radiation Carcinotenesis, Upton AC, Alber RE, Burns FJ and Shore RE (eds) pp1-10, Elsvier, New York). 실험동물을 이용한 방사선 발암연구는 2차 세계대전 후 본격적으로 시작되었고 지난 30년간 대량의 마우스 및 랫트를 이용한 연구가 시도되었다 (Fry RJM and Storer JB (1987) External radiation carcinogenesis: in Advances in Radiation Biology, Lett JT (ed.) Vol 13, pp 31-90, Academic Press, New York). 이러한 연구의 결과 방사선이 암을 유발한다는 결정적인 증거를 제시하였으며 히로시마 및 나가사키 원폭피해자 및 체르노빌 원자력발전소 방사성물질 누출사고 등의 여러 가지 방사선 피폭에 대한 역학연구의 결과가 첨부되면서 방사선이 강력한 암유발 물질임을 확인할 수 있었다. 이중에서 히로시마/나가사기 원폭 피해자들에 대한 자료는 방사선이 대부분의 조직 및 대부분의 연령에 암을 유발함을 제시하였다. 또한 방사선 치료는 다양한 종류의 암에 필수적인 치료 방법으로 알려져 있으나, 방사선 치료 후 방사선에 의한 발암유전자의 발현 및 발암억제유전자 발현 억제 등의 유전자변이를 유도하여 방사선에 의한 이차암을 유발할 수 있다고도 알려져 있다.
현재까지 알려진 방사선에 의한 발암 관련 연구를 살펴보면, 방사선은 유전자의 돌연변이를 비롯하여 염색체변이, 세포의 불활성화를 유도하며(Breimer LH (1988) Ionizing radiation-induced mutagenesis. Br J Cancer 57: 6-18), 또한 발암유전자의 발현을 유도하여 암세포화를 유도하는 것으로 알려져 있으나(Krolewski B and Little JB (1995) Alterations of mdm2 gene in X-ray transformed mouse 10T1/2 cells clones. Int J Oncol, 6: 1123-1127; Vahakangas KH, Samet JM, Metcalf RA, Welsh JA, Bennett WP, Lane DP and Harris CC (1992) Mutation of p53 and ras genes in radon-associated lung cancer from uranium miners. Lancet 339: 576-580; Dutrillaux B (1997) Ionizing radiation induced malignancies in man. Radioprotection, 32: C431-C440), 아직까지 왜 이러한 현상을 유도하는지에 대한 정확한 기전은 알려져 있지 않다.
현재 원자력발전소 수의 증가 및 방사선 및 방사성 동위원소의 사용 증가에 따른 종사자들의 방사선에 의한 암 발생의 위험성이 대두되고 있지만, 방사선에 의해 유도되는 암은 방사선 자체의 특수성(물리적 인자)으로 다른 화학적 발암물질이나 바이러스성 발암물질과는 암 생성에 있어 차이가 있을 것이라 추정하고 있을 뿐, 현재까지 방사선에 의해 유도되는 암과 다른 화학적 발암물질에 의해 유도되는 암과의 유전자 발현의 차별성은 아직까지 확인된바 없으며 병리학적으로도 이러한 원인적 차별성을 확인하지 못하고 있다.
방사선에 의해 유도되는 암의 경우, 화학적 발암 물질이나 바이러스성 발암 물질과는 별개의 암 발생 메커니즘을 가지고 있을 것으로 추정되므로, 방사선에 의한 암 또는 다른 원인에 의한 암을 차별화하여 진단할 수 있는 유전적 마커를 알아낸다면 화학적 발암 물질이나 바이러스성 발암 물질에 의해 유도된 암과는 차별화된 방사선에 의해 유도되는 암에 대해 특별히 효과적인 진단, 예방 또는 치료 방법을 제공할 수 있을 것이다.
따라서 본 발명은 방사선에 의해 유도되는 암 조직에서 발현의 변화를 보이는 유전자를 규명하여, 화학적 발암 물질이나 바이러스성 발암 물질 등의 다른 인자에 의해 유도되는 암과는 구별하여 방사선에 의해 유도되는 암을 진단할 수 있는 진단용 조성물 및 진단용 키트를 제공하고자 한다.
본 발명은 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 구체예에서, 상기 조성물은 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함한다.
본 발명의 다른 구체예에서, 상기 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)의 유전자는 각각 서열번호 1 내지 8의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖거나 이들 염기서열 중 1 이상의 염기가 치환, 결실 또는 부가된 염기서열을 갖는다.
본 발명의 다른 구체예에서, 상기 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)의 유전자는 각각 서열번호 9 내지 16의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖거나 이들 염기서열 중 1 이상의 염기가 치환, 결실 또는 부가된 염기서열을 갖는다.
본 발명은 또한 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) 으로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 구체예에서, 상기 조성물은 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질을 포함한다.
본 발명의 다른 구체예에서, 상기 조성물 중의 단백질은 각각 서열번호 1 내지 8의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖거나 이들 염기서열 중 1 이상의 염기가 치환, 결실 또는 부가된 염기서열을 갖는 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)의 유전자로부터 발현된 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에서, 상기 조성물 중의 단백질은 각각 서열번호 9 내지 16의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖거나 이들 염기서열 중 1 이상의 염기가 치환, 결실 또는 부가된 염기서열을 갖는 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)의 유전자로부터 발현된 것일 수 있다.
본 발명은 또한 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) 으로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트를 제공한다.
본 발명의 한 구체예에서, 상기 키트는 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함한다.
본 발명의 다른 구체예에서, 상기 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)의 유전자는 각각 서열번호 1 내지 8의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖거나 이들 염기서열 중 1 이상의 염기가 치환, 결실 또는 부가된 염기서열을 갖는다.
본 발명의 다른 구체예에서, 상기 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)의 유전자는 각각 서열번호 9 내지 16의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖거나 이들 염기서열 중 1 이상의 염기가 치환, 결실 또는 부가된 염기서열을 갖는다.
본 발명은 또한 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) 으로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트를 제공한다.
본 발명의 한 구체예에서, 상기 키트는 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)으로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질을 포함한다.
본 발명의 상기 구체예에서, 상기 키트 중의 단백질은 각각 서열번호 1 내지 8의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖거나 이들 염기서열 중 1 이상의 염기가 치환, 결실 또는 부가된 염기서열을 갖는 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)의 유전자로부터 발현된 것일 수 있다.
본 발명의 상기 구체예에서, 상기 키트 중의 단백질은 각각 서열번호 9 내지 16의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖거나 이들 염기서열 중 1 이상의 염기가 치환, 결실 또는 부가된 염기서열을 갖는 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)의 유전자로부터 발현된 것일 수 있다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명하고자 한다.
본 발명에서 사용하는 용어는 달리 언급하지 않는 한, 명세서 전반에 걸쳐 동일한 의미로 사용되는 것으로 간주된다.
본 발명에서는 방사선 또는 화학적 발암물질에 의해 랫트에서 흉선암을 유도한 후, 방사선 또는 화학적 발암물질에 의해 유도된 암조직 중 병리학적으로 같은 소견을 보이는 암조직을 cDNA 마이크로어레이 방법을 사용하여 유전자 발현 양상을 분석하고, 방사선에 의해서 유도된 암조직에서만 발현의 변화를 보이는 유전자를 알아내고자 Real Time PCR 분석을 실시하여 최종적으로 하기 8개의 유전자를 규명하였다: 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3).
본 발명에 의해 규명된 방사선에 의해서 유도된 암조직에서만 발현의 변화를 보이는 상기 8개의 유전자는 종전에 방사선에 의해서 유도된 암과의 관련성에 대해서는 전혀 보고되지 않은 것으로 현재 이들 유전자에 대해 알려져 있는 내용은 다음과 같다.
코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II) : 혈액응고인자, 간 경화와 같은 만성 간 질환 으로 인해 간의 기능 부전일 경우 이 인자의 결핍으로 인해여 혈액응고장애가 생기는 것으로 알려져 있으나, 간암 환자의 경우 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II) (prothrombin) 의 양이 증가되는 임상보고가 있긴 하나, 간암의 발생으로 인한 부가적인 증가이며 발암과의 관련성은 보고된 바 없다. (Levels of plasma des-γ-carboxy protein C and prothrombin in patients with liver diseases. World J Gastroenterol, 2004; 10 : 3073-3075)
림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75) : 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75)는 면역과 관련된 인자로서, 항원인식 세포의 표면인자이다. 항원의 인식과 관련성으로 인해 면역세포의 항암작용과 연관성이 보고된 바 있으며, 따라서 발암과 반대의 작용인 항암작용과 연관성이 있을 것으로 보고되고 있다. (Targeting antigens to activated dendritic cells in vivo cures metastatic melanoma in mice. Cancer research, 2005; 65: 7007- 7012)
엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor): 암세포가 계속적인 성장 이후에 전이될 때 일종의 단백질 분해효소(예컨대, 매트릭스 메탈로프로테네이즈(matrix metalloproteinase))가 중요 작용을 하게 되는데, 이 인자는 단백질 분해효소를 억제하게 되므로 암 억제 (항암)와 관련성이 있다고 볼 수 있다. (Transcriptional down regulation of rat gene, WDNM2, in metastatic DMBA-8 cells. Cancer research, 1989; 49: 5323-5328)
스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A): 폐암과 관련된 보고에서 이 인자의 유전자 발현 증가가 보고되고 있으나 발암성과의 확실한 연관성은 밝혀지지 않았다 (A Small proline-rich protein 2A regulated by vitamin A in tracheal epithelial cells is induced in lung tumor. Am J Respir Cell Mol Biol, 1993; 9: 434-440)
프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16): 흉선에서의 T세포의 면역과 관련된 인자로, 암과의 연관성은 보고된 바 없다. (Prss 16 is not required for T cell development. Molecular and Cellular Biology, 2005; 25: 789-796)
케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25) (CCL25): CCL25는 이를 인지하는 수용체인 CCL9 (CC chemokine receptor 9)과 함께 T-세포의 기능에 관여하는 것으로 보고된 바 있으며 면역과 관련된 기능을 담당하고 있으나 발암과 관련된 보고는 없다. (CC chemokine ligand 25 enhances resistance to apoptosis in CD4+T cells from patiences with T-cell lineage acute and chronic lymphocytic leukemia by means of livin activation. Cancer research, 2004; 64: 7579-7587)
9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA) : 인간에서의 동일한 기능을 할 것으로 생각되어지는 XIST 유전자의 기능을 상실할 경우 암 발생의 보고가 되어있으나, 방사선에 의해 유도되는 암과의 관련성은 전혀 보고된 바 없다. (Loss of the inactive X chromosome and replication of the active X in BRCA-/- defective and wild type breast cancer cells. Cancer research, 2005; 65: 2139-2146)
유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) : 이 인자는 마우스의 정자 생성에 필수라는 보고가 있으나, 방사선에 의해 유도되는 암과의 관련성은 전혀 보고된 바 없다. (A Y-encoded subunit of the translation initiation factor Eif2 is essential for mouse spermatogenesis, Nat Genet, 2001; 29:49-53)
본 발명에 따르면 상기 8개의 유전자는 방사선에 의해 유도된 암에서 발현이 변화되는 양상이 관찰되었다.
따라서, 상기 유전자를 이용하면, 예컨대 상기 유전자의 전부 또는 일부를 프로브로 사용하여 대상자의 체액으로부터 분리한 핵산과 하이브리드화한 후 당분야에 공지된 다양한 방법, 예컨대 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcription polymerases chain reaction), 써던블로팅(southern blotting), 노던 블롯팅(Northern blooting) 등으로 이를 검출함으로써 대상자에서 상기 유전자가 고발현된 상태인지 조사하면 방사선에 의해 유도된 암의 발생 여부를 판단할 수 있다. 상기 프로브를 방사선 동위원소 또는 효소 등으로 표지하면 용이하게 유전자의 존재를 확인할 수 있다.
그러므로, 본 발명은 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) 으로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물을 제공한다.
상기 유전자 중 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)의 4개의 유전자는 화학적 발암물질에 의해서는 발현되지 않고, 방사선에 의해서만 발현이 유도되는 것으로 조사되었다. 따라서, 대상자로부터 얻은 시료가 이들 4개의 유전자와 반응하는 경우, 보다 정확하게 방사선에 의해 유도된 암을 진단해 낼 수 있다.
따라서 본 발명의 조성물은 바람직하게는 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함한다.
본 발명의 조성물은 상기 유전자 외에도 핵산의 구조를 안정하게 유지시키는 증류수 또는 완충액을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물을 이용하면 방사선에 의해 유도된 암을 진단할 수 있다. 따라서, 본 발명은 상기 조성물과 대상체로부터 얻은 시료 간의 반응을 확인하여 방사선에 의해 유도된 암을 진단하는 방법을 제공한다.
본 발명의 진단 방법에서 상기 유전자를 포함하는 조성물과 시료 간의 반응의 확인은 DNA-DNA, DNA-RNA, DNA-단백질 간의 반응 여부를 확인하는데 사용되는 통상적인 방법들, 예컨대 DNA 칩, 단백질 칩, 중합효소 연쇄반응 (PCR), 노던 블롯팅, 서던 블롯팅, 효소면역반응 (ELISA), 2-D 겔 분석, 효모 2-하이브리드 시스템 (yeast two-hybrid system) 및 시험관 내 결합 에세이 (in vitro binding assay) 등을 이용할 수 있다.
또한, 상기 8개의 유전자로부터 발현된 단백질을 이용하면, 예컨대 상기 유전자들로부터 발현된 단백질의 전부 또는 일부를 프로브로 사용하여 대상자의 체액으로부터 분리한 핵산 또는 단백질과 하이브리드화한 후 당분야에 공지된 다양한 방법, 예컨대 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcription polymerases chain reaction), 웨스턴 블로팅(western blotting) 등으로 이를 검출함으로써 대상자에서 상기 유전자가 고발현된 상태인지 조사하면 방사선에 의해 유도된 암의 발생 여부를 판단할 수 있다. 상기 프로브를 방사선 동위원소 또는 효소 등으로 표지하면 용이하게 유전자의 존재를 확인할 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) 으로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물을 제공한다.
상기 유전자 중 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)의 4개의 유전자는 화학적 발암물질에 의해서는 발현되지 않고, 방사선에 의해서만 발현이 유도되는 것으로 조사되었다. 따라서, 대상자로부터 얻은 시료가 이들 4개의 유전자들로부터 발현된 단백질과 반응하는 경우, 보다 정확하게 방사선에 의해 유도된 암을 진단해 낼 수 있다.
따라서 본 발명의 조성물은 바람직하게는 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질을 포함한다.
본 발명의 조성물은 상기 단백질 외에도 단백질의 구조를 안정하게 유지시키는 증류수 또는 완충액을 포함할 수 있다.
다르게는 본 발명의 조성물은 상기 단백질 대신 상기 단백질에 대한 특이적 항체를 포함할 수 있다. 이 경우, 항원-항체 반응을 통해 방사선에 의해 발현이 유도된 상기 단백질을 검출해 내어 방사선에 의해 유도되는 암을 진단할 수 있다.
본 발명의 조성물을 이용하면 방사선에 의해 유도된 암을 진단할 수 있다. 따라서, 본 발명은 상기 조성물과 대상체로부터 얻은 시료 간의 반응을 확인하여 방사선에 의해 유도된 암을 진단하는 방법을 제공한다.
본 발명의 진단 방법에서 상기 단백질을 포함하는 조성물과 시료 간의 반응의 확인은 DNA-DNA, DNA-RNA, DNA-단백질 간의 반응 여부를 확인하는데 사용되는 통상적인 방법들, 예컨대 DNA 칩, 단백질 칩, 중합효소 연쇄반응 (PCR), 노던 블롯 팅, 서던 블롯팅, 효소면역반응 (ELISA), 2-D 겔 분석, 효모 2-하이브리드 시스템 (yeast two-hybrid system) 및 시험관 내 결합 에세이 (in vitro binding assay) 등을 이용할 수 있다.
본 발명은 또한 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) 으로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트를 제공한다.
바람직하게는, 상기 키트는 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함한다.
본 발명은 또한 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) 으로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트를 제공한다.
바람직하게는, 상기 키트는 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질을 포함한다.
다르게는 상기 키트는 상기 단백질 대신 상기 단백질에 대한 특이적 항체를 포함할 수 있다. 이 경우, 항원-항체 반응을 통해 방사선에 의해 발현이 유도된 상기 단백질을 검출해 내어 방사선에 의해 유도되는 암을 진단할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)의 유전자 중 하나 이상의 유전자에 대한 안티센스 유전자(anti-sense gene)를 포함하는 방사선에 의해 유도되는 암 치료용 조성물을 제공한다.
코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) 으로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함하는 조성물을 이용하면 상기 유전자와 반응하는 항암제를 스크리닝해 낼 수 있다.
따라서, 본 발명은 상기 유전자를 포함하는 방사선에 의해 유도되는 암을 치료할 수 있는 항암제 스크리닝용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 조성물과 시험대상물질을 접촉시킨 후 시험대상물질이 상기 유전자의 발현을 억제하는 활성을 나타내는지를 결정하여 방사선에 의해 유도되는 암을 치료할 수 있는 항암제를 스크리닝하는 방법을 제공한다.
추가로, 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) 으로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 조성물을 이용하면 상기 유전자로부터 발현된 단백질과 반응하는 항암제를 스크리닝해 낼 수 있다. 따라서, 본 발명은 상기 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 방사선에 의해 유도되는 암을 치료할 수 있는 항암제 스크리닝용 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 조성물과 시험대상물질을 접촉시킨 후 시험대상물질이 상기 단백질의 활성을 억제하는 활성을 나타내는지를 결정하여 방사선에 의해 유도되는 암을 치료할 수 있는 항암제를 스크리닝하는 방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 예컨대 상기 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A); 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16); 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25); 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA); 및 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3)의 유전자는 각각 서열번호 1 내지 8의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖거나 이들 염기서열 중 1 이상의 염기가 치환, 결실 또는 부가된 염기서열을 가질 수 있다.
서열번호 1의 mRNA 서열은 마우스 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II) 유전자의 mRNA 서열(NCBI Accession number: NM_010168)을 나타내고; 서열번호 2의 mRNA 서열은 마우스 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75) 유전자의 mRNA 서열(NM_013825)을 나타내며; 서열번호 3의 mRNA 서열은 마우스 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor)의 mRNA 서열(NM_007969)을 나타내고; 서열번호 4의 mRNA 서열은 마우스 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)의 mRNA 서열(BC010818)을 나타내고, 서열번호 5의 mRNA 서열은 마우스 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16) 유전자의 mRNA 서열(NM_019429.1)을 나타내며; 서열번호 6의 mRNA 서열은 마우스 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25)의 mRNA 서열(NM_009138)을 나타내고; 서열번호 7의 mRNA 서열은 마우스 9 days embryo whole body의 mRNA 서열(AK051106)을 나타내며; 서열번호 8의 mRNA 서열은 마우스 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) 유전자의 mRNA 서열(NM_012011)을 나타낸다.
서열번호 1 내지 8의 mRNA 서열 외에도, 이와 상동성을 갖는 인간 또는 래트의 mRNA에 상보적인 cDNA 서열을 갖는 인간 또는 래트의 유전자 또는 이들 유전자로부터 발현된 단백질 또한 본 발명의 목적을 위해 사용될 수 있다. 예컨대, human 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II) (prothrombin)로서 NCBI Accession number: V00595의 mRNA 서열에 상보적인 cDNA 서열을 갖는 유전자, Human 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75) (LY75)로서 NCBI Accession number: NM_002349의 mRNA 서열에 상보적인 cDNA 서열을 갖는 유전자, Human small proline rich protein (sprII)로서 NCBI Accession number: M20030의 mRNA 서열에 상보적인 cDNA 서열을 갖는 유전자, Human protease, serine, 16 (thymus) (PRSS16)으로서 NCBI Accession number: NM_005865의 mRNA 서열에 상보적인 cDNA 서열을 갖는 유전자, human Small inducible cytokine A25 precursor (CCL25)로서 NCBI Accession number: U86358의 mRNA 서열에 상보적인 cDNA 서열을 갖는 유전자, 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA)와 유사한 기능을 보이는 human XIST로서 NCBI Accession number: U80460의 mRNA 서열에 상보적인 cDNA 서열을 갖는 유전자, human translation initiation factor eIF-2 gamma chain로서 NCBI Accession number: L19161의 mRNA 서열에 상보적인 cDNA 서열을 갖는 유전자를 사용할 수 있다.
또한, 서열번호 1 내지 8의 mRNA 서열 외에도, 이들 서열의 일부분에 해당하는 mRNA 서열에 상보적인 cDNA 서열을 갖는 마우스, 인간 또는 래트의 유전자 또는 이들 유전자로부터 발현된 단백질 또한 본 발명의 목적을 위해 사용될 수 있다. 예컨대, 본 발명의 실시예에서 사용된 서열번호 9 내지 16의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖거나 이들 염기서열 중 1 이상의 염기가 치환, 결실 또는 부가된 염기서열을 갖는 유전자 또는 이들 유전자로부터 발현된 단백질이 본 발명의 목적을 달성하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명에 있어서, 서열번호 9 내지 16의 mRNA 서열은 각각 서열번호 1 내지 8의 mRNA 서열의 부분적 서열로서, 서열번호 9의 mRNA 서열은 마우스 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II) 유전자의 mRNA 서열(NCBI Accession number: AI854486)을 나타내고; 서열번호 10의 mRNA 서열은 마우스 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75) 유전자의 mRNA 서열(AA867690)을 나타내며; 서열번호 11의 mRNA 서열은 마우스 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor)의 mRNA 서열(AI385534)을 나타내고; 서열번호 12의 mRNA 서열은 마우스 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)의 mRNA 서열(AI661184)을 나타내고, 서열번호 13의 mRNA 서열은 마우스 프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16) 유전자의 mRNA 서열(AI448615)을 나타내며; 서열번호 14의 mRNA 서열은 마우스 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25)의 mRNA 서열(AI158138)을 나타내고; 서열번호 15의 mRNA 서열은 마우스 9 days embryo whole body의 mRNA 서열(AA690387)을 나타내며; 서열번호 16의 mRNA 서열은 마우스 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) 유전자의 mRNA 서열(AI661184)을 나타낸다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.
실시예
본 실시예에서는 방사선 또는 화학적 발암물질에 의해 마우스에서 흉선암을 유도하고, 유도된 암조직 중 병리학적으로 같은 소견을 보이는 암조직을 cDNA 마이크로어레이 분석 (디지탈 지노믹스 주식회사) 및 리얼 타임 PCR 분석(BioRad iQTM SYRB Green SuperMix사용)을 실시하여 방사선에 의해서 유도된 암조직에서만 발현의 변화를 보이는 유전자를 규명하였다.
실시예 1: 랫트에서의 암의 유도 및 암조직의 분석
(1) 마우스에서의 흉선암의 유도
6주령의 암컷 마우스 (C57BL/6, SLC, Japan)를 2그룹으로 나누어 한 그룹은 1.5Gy 방사선을 1주에 1번씩 4회 조사하였고 다른 그룹은 발암물질인 MNU (N-methylnitrosourea, Sigma) 60mg/kg을 1주에 1번씩 4회 복강 내 투여하였다 (Newcomb EW (1997) Clonal evolution of N-methylnitrosourea-induced C57BL/6J thymic lymphomas by analysis of multiple genetic alterations. Leukemia research, 21:189-198]). 감마선은 (137Cs) (Atomic Energy of Canada, Ltd., Canada)을 3.81 Gy/min 선량률로 조사하였다.
그 결과는 하기 표 1과 같다. 방사선에 의해 암을 유도한 경우 발암물질에 의해 암을 유도한 경우보다 암의 발생빈도 및 발생한 암의 개수 등이 적었으나 암 의 크기 등에서는 발암물질에 의해 유도된 암과 차이가 없었다.
표 1. 랫트에서 방사선 및 MNU에 의한 흉선암 유발
발암원 유발기간(주) 발생빈도(%) 종양무게(g)
<0.5 0.5-1 >1
방사선 12 52/103(50) 24 24 4
MNU 10 18/25(77) 8 8 2
(2) 마우스에서 유도된 흉선암의 조직학적 분석
종양 조직을 제거한 후 조직을 10% 완충 포르말린으로 고정하고, 파라핀으로 포매(embedding)하여 포르말린 블록을 만들었다. 이를 0.2 um 크기로 조직 절편을 만들어 유리 슬라이드에 붙힌 후 헤마토실린/에오신(hematoxylin/eosin) 염색을 실시하여 조직학적으로 관찰하였다.
그 결과, 도 1에서 볼 수 있는 바와 같이 방사선에 의해 유도된 암조직의 경우 양성종양 (Adenoma 및 Papilloma)에서부터 악성종양까지 다양한 병리학적 소견을 나타내었으나 발암물질에 의해 생성된 암조직의 경우 모두 악성종양을 나타내었다. 악성종양의 경우에도 악성화 정도를 나타내는 정도에 따라 단계 I(Stage I)은 비투여 대조군과 유사한 소견을 보이며 단계 II(Stage II)의 경우 부검시에는 정상적인 흉선의 무게였으나 대조군에 비해 T 림프구 표지자의 차이를 보이고 단계 III(Stage III)은 부검시 매우 종대된 흉선을 가지고 있으며 림프종을 가지고 있었으며 Newcomb EW (1997) Clonal evolution of N-methylnitrosourea-induced C57BL/6J thymic lymphomas by analysis of multiple genetic alterations. Leukemia research, 21:189-198]에서의 실험결과와 동일한 악성종양에 대한 병리학적 소견을 보였다.
실시예 2: cDNA 마이크로어레이 분석을 통한 암조직에서 특이적으로 발현의 변화를 보이는 유전자군의 검출
방사선에 의해 유도된 암 및 발암물질에 의해 유도된 암에서 총 RNA(total RNA)를 분리하였다. 대조군으로는 정상 랫트 흉선에서 분리한 RNA를 사용하여 시행하였다. 총 RNA의 분리는 상품화된 Triazol TM (Life Technology, Inc; Gaithersburg, MD, USA)을 이용하였다. 총 RNA를 역전사에 의해 32P-표지된 cDNA 프로브(32P-labled cDNA probe)를 만들었다. 어레이 혼성화(array hybridization)를 위해 마우스 cDNA 마이크로어레이 (Digital Genomics, Seoul, Korea)를 사용하였다.
2회의 cDNA 마이크로어레이 분석 실험을 실시하였다. 분석 결과는 표 2 및 표 3에서 볼 수 있는 바와 같다. 표 2는 유전자칩에서 MNU에 의해 유도한 암 조직에서 정상 흉선 조직과 비교하여 특이적으로 발현의 변화를 보이는 23개의 유전자군을 나타낸다. 표 3은 유전자칩에서 방사선에 의해 유도된 암 조직에서 특이적으로 발현의 변화를 보이는 32개의 유전자군을 나타낸다. 본 명세서에서 기재한 수탁번호(accession number)는 미국의 NCBI(National center for Biotechnology Information-National Institute of Heath (NIH))에서 부여한 번호이다.
표 2. 유전자 칩에서 MNU에 의해 유도된 암조직에서 정상 흉선조직과 비교하여 특이적으로 발현의 변화를 보이는 유전자군
유전자명 수탁번호
트랜스퍼린 리셉터(Transferrin receptor) AI426448
사이클린 D1(Cyclin D1) AI850048
피불린 1(Fibulin 1) AI845853
판코니 아네미아, 컴플리멘테이션 그룹 A (Fanconi anemia, complementation group A) AI448464
프로필린 2(Profilin 2) AI324234
글루코코르티코이드 인듀스드 트랜스크립트 1 (Glucocorticoid induced transcript 1) AI449499
멤브레인-스패닝 4-도메인즈, 서브패밀리 A, 멤버4B (Membrane-spanning 4-domains, subfamily A, member 4B) AI662494
히스토컴패티빌리티 2, 클래스 II 안티젠 A, 베타 1 (Histocompatibility 2, class II antigen A, beta 1) AI845868
패티 애시드 바인딩 프로테인 5, 에피더말 (Fatty acid binding protein 5, epidermal) AI853846
마크로파지 갈락토스 N-아세틸-갈락토사민 스페시픽 렉틴 2 (Macrophage galactose N-acetyl-galactosamine specific lectin 2) AI480756
엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor) AI385534
뉴런 스페시픽 진 패밀리 넘버 2 (Neuron specific gene family member 2) AA060966
프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16) AI448615
케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25 (Chemokine (C-C motif) ligand 25) AI158138
9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA (9 days embryo whole body cDNA) AA690387
유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3 (Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) AI661184
인터페론-스티뮬레이티드 프로테인 (Interferon - stimulated protein) AI463054
CD83 안티젠 (CD83 antigen) AI837100
CD5 안티젠 (CD5 antigen) AI117259
튜불린, 알파 4 (Tubulin, alpha 4) AI325223
CD52 안티젠 (CD52 antigen) AA762273
이뮨 어소시에이티드 뉴클레오타이드 4 (Immune associated nucleotide 4) AI448110
1-아실글리세롤-3-포스페이트 O-아실트랜스퍼레이즈 1 (1-acylglycerol-3-phosphate O-acyltransferase 1) AI528891
표 3. 유전자칩에서 방사선에 의해 유도된 암조직에서 특이적으로 발현의 변화를 보이는 유전자군
유전자명 수탁번호
카테닌 알파 라이크-1(catenin α like-1) AI 152317
임포틴 4(Importin 4) AI467390
폴리머레이즈 (DNA 다이렉티드), 엡실론 (Polymerase (DNA directed), epsilon) AA608457
CD68 안티젠(CD68 antigen) AA863715
코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II) AI854486
사이클린 D1(Cyclin D1) AI850048
인돌아민-피롤 2,3 디옥시제네이즈 (Indoleamine-pyrrole 2,3 dioxygenase) AA871317
뉴클레오포린155(Nucleoporin 155) AI060336
N-myc 다운스트림 레귤레이티드 진 1 (N-myc downstream regulated gene 1) AI852317
본 매로우 스트로말 셀 안티젠 1 (Bone marrow stromal cell antigen 1) AI647987
DNA 프라이메이즈, p49 서브유닛 (DNA primase, p49 subunit) AI451984
그란자임 A(Granzyme A) AI324331
멜라노코틴 2 리셉터(Melanocortin 2 receptor) AI153955
칼슘/칼모듈린-디펜던트 프로테인 카이네이즈 IV (Calcium/calmodulin-dependent protein kinase IV) AA939631
EGF-라이크 도메인 7(EGF-like domain 7) AA874240
징크 핑거 프로테인 36, C3H 타입-라이크 1 (Zinc finger protein 36, C3H type-like 1) AI 528715
림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75) AA867690
시스타틴 B(Cystatin B) AI853012
케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25 (Chemokine (C-C motif) ligand 25) AI158138
브랜스드 체인 아미노트랜스퍼레이즈 1, 사이토졸릭 (Branced chain aminotransferase 1, cytosolic) AI846139
Rab6 인터액팅 프로테인 2 (Rab6 interacting protein 2) AA874216
엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터 (Extracellular proteinase inhibitor) AI385534
유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3 (Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) AI 661184
DanJ(Hsp40) 호몰로그, 서브패밀리 C, 멤버 4 (DanJ(Hsp40) homologue, subfamily C, member 4) AI854131
마이오신 바인딩 프로테인 H(Myosin binding protein H) AI385643
리컴비네이션 액티베이팅 진 1 (Recombination activating gene 1) AA874997
프로테아제, 세린 16(티머스)(Protease, serine 16 (thymus)) AI 448615
스몰 프롤린-리치 프로테인 2A (Small proline-rich protein 2A) AI414574
프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16) AI448615
케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25 (Chemokine (C-C motif) ligand 25) AI158138
9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA (9 days embryo whole body cDNA) AA690387
실시예 3: 리얼 타임 PCR(Real Time PCR) 분석을 통한 유전자의 발현량 분석
유전자칩에서 발현의 변화를 보이는 유전자 중 실제로 발현의 차이를 보이는 유전자를 확인하고자 리얼 타임 PCR(Real Time PCR) 분석을 수행하여 정량적으로 분석하였다. 먼저, 역전사 중합효소 연쇄반응 (Reverse transcriptase PCR)을 수행하고, 이에 의해 만들어진 주형 DNA를 이용하여 리얼 타임 PCR(Real Time PCR) 분석을 수행하였다.
(1) 역전사 중합효소 연쇄반응 (Reverse transcriptase PCR)
RNA를 분리한 후 1㎍의 총 RNA(total RNA)를 사용하여 역전사를 수행하였다. 1㎍(X) 총 RNA(total RNA), 17-X ㎕ RNase가 없는 물(RNase-free water)로 RNA를 준비한 후 65℃에서 5분간 반응시킨 다음, 반응 혼합물(Reaction mixture)을 넣고 37℃에서 1시간 동안 cDNA를 합성한 후, 다시 95℃에서 5분간 리버스 트랜스크립테이즈(Revers Transcriptase)를 불활성화시켰다. 반응 혼합물(Reaction mixture) (RT mixture)의 구성은 2.5㎕ 10X 완충액(buffer), 2.5㎕(uM) dNTP 혼합물, 1.25㎕ Oligo dT 프라이머, 1.25㎕(U) 리버스 트랜스크립테이즈(Revers Transcriptase), 0.5㎕ RNasin으로 구성되었다. 이렇게 합성된 cDNA를 사용하여 PCR을 수행하였다. PCR에서 사용된 각각의 프라이머는 발현된 유전자의 서열을 토대로 프라이머 제작 회사에 의뢰하여 만든 것으로서(프라이머 제조 회사 : (주) 제노텍), 하기 표 4에 나타낸 서열을 가지며, 모두 58℃의 어닐링 온도(Annealing Temperature)를 갖도록 제작되었다.
표 4. 각각의 유전자에 대해 제작된 프라이머 서열
유전자명 프라이머 서열
카테닌 알파 라이크-1(catenin α like-1) cgcgttctgtgaaaagtcag ttgccacatatttgatggtc tt
임포틴 4(Importin 4) tgaccaggcagagtatgacg cccacagcaaaggacttctc
폴리머레이즈 (DNA 다이렉티드), 엡실론 (Polymerase (DNA directed), epsilon) attcgtcgacatggaacaga cttttggagcaggcagtagg
CD68 안티젠(CD68 antigen) ttctgctgtggaaatgcaag caattgatgagaggcagcaa
코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II) tccaccttttcagacggaac atgacaccaagcgaggagat
사이클린 D1(Cyclin D1) ggcacctggattgttctgtt cttcgcaaaggcagagtctt
인돌아민-피롤 2,3 디옥시제네이즈 (Indoleamine-pyrrole 2,3 dioxygenase) ggggtacgaatcccatgact tcctacagggaatgcacaga
N-myc 다운스트림 레귤레이티드 진 1 (N-myc downstream regulated gene 1) ttttgggcaccgttacaaat ttacctgccaactcctaccg
본 매로우 스트로말 셀 안티젠 1 (Bone marrow stromal cell antigen 1) gagatgccaccttggtgttt gaaagaagcctgaccgaatg
멜라노코틴 2 리셉터(Melanocortin 2 receptor) cagcaggatgaaatgaagca atgatcacagccaggaggac
칼슘/칼모듈린-디펜던트 프로테인 카이네이즈 IV (Calcium/calmodulin-dependent protein kinase IV) tcagcaggtcaagcacaaac tcaaacaggaggaggagcat
EGF-라이크 도메인 7(EGF-like domain 7) gccagagactttgcatctcc ctgcagcctgtacacctcct
징크 핑거 프로테인 36, C3H 타입-라이크 1 (Zinc finger protein 36, C3H type-like 1) agcggaatgtcttgagatgg ttctcccctttgtgttggac
림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75) agccacttagcactgcatcc cccctgtgaacaacctgaat
시스타틴 B(Cystatin B) tgctcaactcccttctctcc tcaaggttgatgttggtgga
케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25) ggtggagaaccccaacagta tagaagacggcacttcagca
브랜스드 체인 아미노트랜스퍼레이즈 1, 사이토졸릭 (Branced chain aminotransferase 1, cytosolic) gattatcttggaattgaagc gattgcacgagggccgctgta ct
Rab6 인터액팅 프로테인 2 (Rab6 interacting protein 2) agaacggggcagttacattg ggagagtgtgtctcccaagg
엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor) cgcagttttggaacttgtga caagcatggggtctgtaggt
유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) gaaaatgaaaataacctggc aatgcgtgactatcaagcca aca
DanJ(Hsp40) 호몰로그, 서브패밀리 C, 멤버 4 (DanJ(Hsp40) homologue, subfamily C, member 4) gcagggagaggacaatgaag ccggatcattacagccatct
마이오신 바인딩 프로테인 H(Myosin binding protein H) tctgaagagggtgccagtct accataggaacagcgaatgg
리컴비네이션 액티베이팅 진 1 (Recombination activating gene 1) tagcacatccttcccctgac catttgcaatggggagtctt
스몰 프롤린-리치 프로테인 2A (Small proline-rich protein 2A) gctgagaaggctcctctgaa ccttcatcctccatgtgctt
프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16) cggtgctcaccatttctttt ttgactggcacctactgcat
9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA (9 days embryo whole body cDNA) gaagatggagccaggttgaa gcccattcctacccatacaa
유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) gaaaatgaaaataacctggc aatgcgtgactatcaagcca aca
삭제
각각 2㎕의 cDNA를 사용하였고, 반응 혼합물(Reaction mixture)을 넣고 95℃에서 5분 동안 변성(Denaturation) 시킨 후 94℃ 1분(변성(Denaturation)), 58℃ 1분(어닐링(Annealing)), 72℃ 1분(폴리머리제이션(Polymerization))으로 30 회의 PCR을 수행한 후 다시 72℃에서 5분 동안 폴리머리제이션(Polymerization)을 수행하였다. 반응 혼합물(Reaction mixture) (PCR 혼합물)의 구성은 2㎕ 10X 완충액(buffer), 2.5㎕ (uM) dNTP 혼합물, 1㎕ 전진 프라이머(Forward Primer), 1㎕ 후진 프라이머(Reward Primer), 0.1㎕ (U) Taq DNA 폴리머레이즈(Taq DNA Polymerase)(TaKaRa), 11.4㎕ D.W로 구성되었다.
(2) 리얼 타임 PCR(Real Time PCR) 분석
역전사 중합효소 연쇄반응 (Reverse transcriptase PCR)으로 만들어진 주형 DNA 5㎕당 0.5μM 프라이머와 50 mM Tris, pH 8.5 (25℃), 3mM MgCl2 , 500 mg/ml 소혈청알부민(bovine serum albumin), 0.2 mM dNTP, 및 0.2 U Taq 폴리머라아제가 혼합되어 있는 2X SYBR Green I (F400L, FINNZYMES)을 1:4로 희석하여 PCR 혼합액을 DNA 엔진 옵틱 2 시스템(DNA Engine Optic 2 system)(MJ Research)에 장착하여 중합효소 연쇄반응을 시켰다. 중합연쇄반응이 일어나는 동안 PTC-200 DNA 엔진 사이클러(DNA Engine Cycler) (MJ Research)와 CFD-3220 옵티콘 2 디텍터(Opticon 2 Detector) (MJ Research)는 SYBR Green I이 발광하는 형광을 측정하고, 이 형광의 강도는 증폭 사이클이 증가함에 따라 점점 증가하게 되며 동시에 제공한 DNA에서 표준 곡선을 도출하여 이 곡선으로부터 DNA의 발현을 확인하였다.
리얼 타임 PCR 분석 결과는 표 5, 표 6, 도 2 및 도 3에 나타낸 바와 같다. 유전자칩에서 MNU 및/또는 방사선에 의해 유도한 암 조직에서 정상 흉선 조직과 비교하여 특이적으로 발현의 변화를 보이는 상기 표 2 및 표 3의 유전자군 중 4개의 유전자(프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16), 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25(Chemokine (C-C motif) ligand 25), 9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA(9 days embryo whole body cDNA), 유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) )는 발암물질 및 방사선에 의해 유도된 암조직에서 모두 발현의 변화가 확인되었고, 4개의 유전자(코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II), 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75), 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A))는 방사선에 의해 유도된 암조직에서만 발현의 차이가 있었다.
표 5. 리얼 타임 PCR을 통하여 발현의 변화를 확인한 방사선 유발 유전자군
유전자명 수탁번호 서열번호
코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II) AI854486 9
림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75) AA867690 10
엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor) AI385534 11
스몰 프롤린-리치 프로테인 2A (Small proline- rich protein 2A) AI414574 12
삭제
표 6. 리얼 타임 PCR을 통하여 발현의 변화를 확인한 방사선 및 MNU 유발 유전자군
유전자명 수탁번호 서열번호
프로테아제, 세린 16(Protease, serine 16) AI448615 13
케모카인 (C-C 모티프) 리간드 25 (Chemokine (C-C motif) ligand 25) AI158138 14
9 데이즈 엠브리오 홀 바디 cDNA (9 days embryo whole body cDNA) AA690387 15
유케리요틱 트랜스레이션 이니시에이션 팩터 2, 서브유닛 3(Eukaryotic translation initiation factor 2, subunit 3) AI661184 16
삭제
결과적으로, 상기 리얼 타임 PCR 분석을 통해 방사선에 의해 유도한 암 조직에서 특이적으로 발현의 변화를 보이는 8개의 유전자를 확인할 수 있었다. 이들 유전자는 방사선에 의한 암을 다른 원인에 의한 암과 차별화하여 진단할 수 있는 유전적 마커로서 활용할 수 있다.
본 발명에서는 발암물질에 의해 발현된 유전자들과는 구별되는 방사선에 의해 발현되는 특이 유전자들을 밝혔다. 이들 유전자는 방사선에 의한 발암 기전연구 및 관련 유전자에 대한 연구 기초 자료로 활용할 수 있을 뿐만 아니라, 방사선에 의한 암을 다른 원인에 의한 암과 차별화하여 진단할 수 있는 유전적 마커로서 활용할 수 있다. 따라서, 이들 유전자 또는 이들 유전자로부터 발현되는 단백질을 포함하는 본 발명의 조성물 또는 키트는 방사선에 의해 유도된 암의 진단을 위해 유용하게 사용할 수 있다.
서열목록 전자파일 첨부

Claims (16)

  1. 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서, 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)의 유전자가 각각 서열번호 1 내지 4의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)의 유전자가 각각 서열번호 9 내지 12의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물.
  5. 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 항체를 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물.
  6. 삭제
  7. 제5항에 있어서, 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)의 유전자가 각각 서열번호 1 내지 4의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물.
  8. 제5항에 있어서, 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)의 유전자가 각각 서열번호 9 내지 12의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물.
  9. 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트.
  10. 삭제
  11. 제9항에 있어서, 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)의 유전자가 각각 서열번호 1 내지 4의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트.
  12. 제9항에 있어서, 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)의 유전자가 각각 서열번호 9 내지 12의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트.
  13. 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)로 구성된 유전자군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 항체를 포함하는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트.
  14. 삭제
  15. 제13항에 있어서, 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)의 유전자가 각각 서열번호 1 내지 4의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트.
  16. 제13항에 있어서, 코아귤레이션 팩터 II(Coagulation factor II); 림포사이트 안티젠 75(Lymphocyte antigen 75); 엑스트라셀룰라 프로테네이즈 인히비터(Extracellular proteinase inhibitor); 및 스몰 프롤린-리치 프로테인 2A(Small proline-rich protein 2A)의 유전자가 각각 서열번호 9 내지 12의 mRNA 서열과 상보적인 cDNA 서열을 갖는 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 키트.
KR1020060062365A 2006-07-04 2006-07-04 방사선에 의해 유도된 암의 진단용 조성물 또는 키트 KR100788035B1 (ko)

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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030037856A (ko) * 2001-11-06 2003-05-16 (주)바이오인스티튜트 리보솜 단백질 ｓ3에 대한 다클로날항체 및 이를 이용한암진단 킷트
US20030232356A1 (en) 2002-02-08 2003-12-18 Dooley Thomas P. Skin cell biomarkers and methods for identifying biomarkers using nucleic acid microarrays
KR20030095821A (ko) * 2002-06-14 2003-12-24 한국원자력연구소 방사선 피폭 측정용 유전자, 이를 이용한 방사선 피폭측정방법, 및 이를 함유한 ｄｎａ칩

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030037856A (ko) * 2001-11-06 2003-05-16 (주)바이오인스티튜트 리보솜 단백질 ｓ3에 대한 다클로날항체 및 이를 이용한암진단 킷트
US20030232356A1 (en) 2002-02-08 2003-12-18 Dooley Thomas P. Skin cell biomarkers and methods for identifying biomarkers using nucleic acid microarrays
KR20030095821A (ko) * 2002-06-14 2003-12-24 한국원자력연구소 방사선 피폭 측정용 유전자, 이를 이용한 방사선 피폭측정방법, 및 이를 함유한 ｄｎａ칩

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Int J Radiat Biol. Vol.70(6), pp.711-7, (1996)

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