KR100773133B1 - 암 세포의 증식억제활성을 갖는2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논화합물을 함유하는 암 예방 및 치료를 위한 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 암 세포의 증식억제활성을 갖는 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논(2',4',5,7-tetrahydroxy-5',6-diprenyl flavanone) 화합물을 함유하는 암 질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물 및 건강기능식품을 제공하는 것으로, 상세하게는 본 발명의 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논은 구지뽕나무의 뿌리로부터 추출한 것으로서 단백질 인산화효소 CKⅡ(casein kinase 2)에 저해효과를 가지고 있기에 암 세포의 증식을 억제함으로서 암 예방 및 치료를 위한 약학조성물로 이용될 수 있다.

암, 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논, 구지뽕나무, 약학조성물.

Description

암 세포의 증식억제활성을 갖는 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논 화합물을 함유하는 암 예방 및 치료를 위한 조성물{Composition comprising 2',4',5,7-tetrahydroxy-5',6-diprenyl flavanone compound showing potent inhibiting activity of tumor cell propagation for the prevention and treatment of cancer disease}

본 발명은 암 세포의 증식억제활성을 갖는 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논(2',4',5,7-tetrahydroxy-5',6-diprenyl flavanon) 화합물을 함유하는 암 질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물에 관한 것이다.

[문헌 1] Pinna, L. A. Biochim. Biophys . Acta ., 1054, pp267-284, 1990

[문헌 2] Kelliher, M. A., Seldin, D. C. and Leder, P. EMBO J. 15, pp5160-5166, 1996

[문헌 3] Seldin, D. C. and Leder, P. Science , 267, pp894-897, 1995

[문헌 4] Allende, J. E. and Allende, C. C. FASEB J. 9, pp313-323, 1995

[문헌 5] Issinger, O. G. Pharmacol . & Ther. 59, pp1-30, 1993

[문헌 6] Hanna, D. E., Rethinaswamy, A. and Glover, C. V. J. Biol . Chem. 270, pp25905-25914, 1995

[문헌 7] 정보섭 및 신민교, 향약대사전, 영림사, pp544-545, 1998

[문헌 8] Harborne J.B. Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plant analysis , 3 rd Ed ., p6-7, 1998

[문헌 9] Herbert O. House: Modern Synthetic Reactions, 2 nd Ed., The Benjamin/Cummings Publishing Co., 1972

암은 인류가 해결해야 할 난치병 중의 하나로, 전 세계적으로 이를 치유하기 위한 개발에 막대한 자본이 투자되고 있는 실정이며, 우리나라의 경우, 질병 사망원인 중 제 1위의 질병으로서 연간 약 10 만 명 이상이 진단되고, 약 6 만 명 이상이 사망하고 있다. 이러한 암의 유발 인자인 발암물질로는 흡연, 자외선, 화학물질, 음식물, 기타 환경인자들이 있으나, 그 유발 원인이 다양하여 치료제의 개발이 어려울 뿐만 아니라 발생하는 부위에 따라 치료제의 효과 또한 각기 다르다. 현재 치료제로 사용되는 물질들은 상당한 독성을 지니고 있으며, 암 세포만을 선택적으로 제거하지 못하므로, 암의 발생 후 이의 치료뿐 아니라, 암의 발생을 예방하기 위한 독성이 적고 효과적인 항암제의 개발이 절실히 필요하다.

암이란 "제어되지 않은 세포성장"으로 특징지어지며, 이러한 비정상적인 세포성장에 의해 종양(tumor)이라고 불리는 세포 덩어리가 형성되어 주위의 조직으로 침투하고 심한 경우에는 신체의 다른 기관으로 전이되기도 한다. 학문적으로는 신생물(neoplasia)이라고도 불린다. 암은 수술, 방사선 및 화학요법으로 치료를 하더라도 많은 경우에 근본적인 치유가 되지 못하고 환자에게 고통을 주며 궁극적으로는 죽음에 이르게 하는 난치성 만성질환이다. 암의 발생요인으로는 여러 가지가 있으나, 내적 요인과 외적 요인으로 구분하기도 한다. 정상세포가 어떠한 기전을 거쳐 암세포로 형질전환이 되는지에 대해서는 정확하게 규명되지는 않았으나, 적어도 80 내지 90%가 환경요인 등 외적인자에 의해 영향을 받아 발생하는 것으로 알려져 있다. 내적 요인으로는 유전 인자, 면역학적 요인 등이 있으며, 외적 요인으로는 화학물질, 방사선, 바이러스 등이 있다. 암의 발생에 관련되는 유전자에는 종양형성유전자(oncogenes)와 종양억제유전자(tumor suppressor genes)가 있는데, 이들 사이의 균형이 위에서 설명한 내적 혹은 외적 요인들에 의해 무너질 때 암이 발생하게 된다.

암은 혈액암과 고형암으로 크게 분류되며, 폐암, 위암, 유방암, 구강암, 간암, 자궁암, 식도암, 피부암 등 신체의 거의 모든 부위에서 발생한다. 이들 악성종양을 치료하기 위해 사용하는 방법들 중 수술이나 방사선 요법을 제외한 화학요법제를 총칭하여 항암제라고 하며, 주로 핵산의 합성을 저해하여 항암활성을 나타내는 물질이 대부분이다. 화학요법제는 크게 대사길항제(antimetabolites), 알킬화제 (alkylating agents), 유사분열억제제(antimitotic drugs), 호르몬제(hormones) 등으로 분류되며, 암세포의 증식에 필요한 대사과정을 저해하는 대사길항제로는 엽산유도체(methotrexate), 퓨린유도체(6-mercaptopurine, 6-thioguanine), 피리미딘유도체(5-fluorouracil, Cytarabine) 등이 있으며, DNA의 구아닌 등에 알킬기를 도입하여 DNA의 구조를 변형시키고 사슬절단을 시켜 항암효과를 발휘하는 알킬화제로는 니트로겐 머스타드계 화합물(chlorambucil, cyclophosphamide), 에틸렌이민계 화합물(thiotepa), 알킬설포네이트계 화합물(busulfan), 니트로소우레아계 화합물 (carmustine), 트리아젠계 화합물(dacarbazine)이 있다. 분열시기 특이성 약물로서 유사분열을 차단하여 세포분열을 억제하는 유사분열억제제에는 악티노마이신 D (actinomycin D), 독소루비신, 블레오마이신, 미토마이신과 같은 항암성항암제, 빈 크리스틴, 빈블라스틴과 같은 식물알칼로이드, 탁산환을 포함하는 유사분열 저해제인 탁소이드 등이 포함된다. 이외에 부신피질호르몬이나 프로게스테론과 같은 호르몬제와 시스플라틴 같은 백금함유 화합물이 항암제로서 사용되고 있다.

단백질 인산화효소 CKII(casein kinase 2)는 지금까지 조사된 모든 진핵세포에 존재하며, 2 분자의 촉매 서브유닛(α 혹은 α′)과 2 분자의 조절 서브유닛(β)으로 구성되어 있다(Pinna, L. A. Biochim. Biophys . Acta . 1054, pp267-284, 1990). CKII의 α서브유닛을 지시하는 유전자를 파괴했을 때 효모가 죽는 것으로 보아 CKII는 세포의 생육에 필수적이라는 사실을 알 수 있다. 그리고 CKII의 발현량은 정상 조직보다 암 조직이나 백혈병 세포에서 높게 나타나고, CKII의 α서브유닛을 과발현시킨 형질전환 쥐에서 임파종 발생이 촉진된다(Kelliher, M. A., Seldin, D. C. and Leder, P. EMBO J. 15, pp5160-5166, 1996; Seldin, D. C. and Leder, P. Science 267, pp894-897, 1995). 그리고 CKII가 세포증식에 관여하는 많은 단백질(예를 들어 c-Myc, c-Myb, c-Jun, p53, DNA topoisomerase II)들을 인산화할 수 있고(Allende, J. E. and Allende, C. C. FASEB J. 9, pp313-323, 1995; Issinger, O. G. Pharmacol . & Ther. 59, pp1-30, 1993), 세포주기의 G1기 및 G2/M기의 전이에 관여한다(Hanna, D. E., Rethinaswamy, A. and Glover, C. V. J. Biol . Chem. 270, pp25905-25914, 1995). 이러한 결과들은 CKII가 암 발생이나 세포의 증식 및 분열과정에 관여한다는 사실을 시사한다.

본 발명의 구지뽕 나무(Cudrania tricuspidata)는 뽕나무과(Moraceae)에 속하는 관목으로 구지뽕나무의 목부, 뿌리, 경엽 및 과실 모두 약재로 사용한다. 구지 뽕 나무의 목부는 자목이라 하여 부인의 붕중(崩中), 혈결(血結)을 치료하고, 구지뽕 나무의 뿌리는 코르크층을 벗겨낸 근피를 약재로 사용하는바, 이는 자목백피(라 하여 보신고정(補腎固精), 양혈서근(凉血舒筋)의 효능이 있으며, 자수경엽은 구지뽕 나무의 경엽(莖葉)으로서 여기에는 모린(morin), 포풀린(populnin), 스태치드린(stachydrine) 및 프로린(proline), 글루타민산, 아르기닌(arginine), 아스파라긴산이 함유되어 있으며, 소염(消炎), 지통(止痛), 거풍(祛風)의 효능이 있고, 자수과실은 구지뽕 나무의 과실로 청열(淸熱), 양혈(凉血), 서근활략(舒筋活略)의 효능이 있다.(정보섭 및 신민교, 향약대사전, 영림사, pp544-545, 1998)

2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논은 구지뽕나무의 뿌리에서 추출, 정제한 화합물로서 상기 문헌 어디에도 본 발명의 화합물이 암세포의 증식억제활성을 가져 암 질환의 예방 및 치료를 위한 조성물로서 사용되었다는 교시나 개시된 바 없다.

따라서, 이에 본 발명자들은 구지뽕나무의 뿌리에서 추출한 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논이 단백질 인산화 효소인 CKⅡ를 저해, 암 세포의 증식 억제 활성을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 수행하기 위하여, 본 발명은 암 세포의 증식 억제 활성을 갖는 하기 화학식 1의 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 암 질환의 예방 및 치료를 위한 약 학조성물을 제공한다.

상기 암 질환은 일반적인 암 질환을 포함하며, 바람직하게는 위암, 결장암, 유방암, 폐암, 비소세포성폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두부 또는 경부암, 피부 또는 안구 내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부근암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병(Hodgkin's disease), 식도암, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, 중추신경계(CNS; central nervous system) 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종 등으로부터 선택된 하나 이상의 질환을 포함한다.

본 발명의 화합물은 식물로부터 추출, 분리하거나 당업계에 잘 알려진 합성방법에 의해 제조가 가능하다.

이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

구체적으로, 본 발명의 추출물은 구지뽕나무의 뿌리 껍질을 음건, 세절한 후, 뿌리 시료 중량의 약 2 내지 20배 부피의 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 등의 비극성용매 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매로, 바람직하게는 클로로포름을 가하여 20 내지 100℃에서 약 10시간 내지 2주일, 바람직하게는 1주일동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법, 바람직하게는 환류냉각법을 사용하여 추출한 후에, 이를 통상의 방법에 따라 여과, 농축 및 건조하여 비극성용매 가용추출물을 수득가능하다.

또한, 상기 비극성 용매 가용 추출물을 증류수 등으로 수회 분획 및 세척하여 정제한 후에 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있다(Harborne J.B. Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plant analysis , 3 rd Ed ., p6-7, 1998).

예를 들어, 상기 정제된 비극성용매 가용추출물을 감압농축하고, 이 감압농축액을 실리카겔 컬럼크로마토 그래피를 용출용매, 바람직하게는 클로로포름:메탄올 혼합용매로 수행하여 정제한 후 클로로포름:메탄올(10:1)에 용출되는 용출분획을 다시 용출용매, 바람직하게는 클로로포름:아세톤 혼합용매를 용출용매로 하여 컬럼크로마토그래피를 재실시함으로서 플라바논 화합물을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기의 제조방법으로 얻어진 구지뽕나무 추출물로부터 분리된 화합물인 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논 화합물을 유효성분으로 함유하는 암 질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물을 제공한다.

또한, 구지뽕나무는 오랫동안 생약 및 식용으로 사용되어 오던 약재로서 이들로부 터 추출된 본 발명의 추출물들 또는 이로 부터 분리된 화합물들 역시 독성 및 부작용 등의 문제가 없다.

본 발명의 암질환의 예방 및 치료효과를 갖는 화합물은 통상의 치환기들의 합성 및 분획 방법을 통하여 합성될 수 있다(Herbert O. House: Modern Synthetic Reactions, 2 nd Ed., The Benjamin/Cummings Publishing Co., 1972).

본 발명의 화합물은 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다.

약학적으로 허용 가능한 염으로는 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴과 같은 수혼화성 유기 용매를 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올(예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.

이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산 (propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산(lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르빈산, 카본산, 바닐 릭산, 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

본 발명의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 본 발명의 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용 가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨 염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드로브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트(토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.

상기와 같은 방법으로 얻어진 본 발명의 화합물의 암 세포의 증식억제활성효과를 알아보기 위하여, 단백질 인산화 효소인 CKⅡ에 미치는 영향을 시험하여 본 결과, 본 발명의 화합물은 CKⅡ의 활성을 현저히 억제시켜 암 세포의 증식을 억제함을 확인할 수 있었다.

본 발명의 암 질환의 예방 및 치료용 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하 여 상기 화합물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

본 발명의 화합물을 포함하는 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 화합물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골(macrogol), 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물은 1일 0.0001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 10mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위을 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 화합물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명은 암 질환의 예방 효과를 나타내는 상기 화합물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 본 발명의 화합 물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.

또한, 암 질환의 예방 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제, 액제 등의 형태를 포함한다.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 화합물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 화합물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 화합물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논은 구지뽕 나무의 뿌리로부터 추출한 것으로서 단백질 인산화 효소인 CKⅡ에 저해효과를 가지고 있기에 암 세포의 증식을 억제함으로서 암 예방 및 치료를 위한 약학조성물로 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 구지뽕나무 비극성용매 가용추출물의 제조

대구약전골목에서 구지뽕나무를 구입하여 그 뿌리의 껍질을 음건하고 세절하여 얻은 시료 3㎏을 클로로포름 15L에 넣고, 환류냉각 장치를 이용하여 수욕조 상 에서 25℃에서 1주일 동안 추출하였다. 이 상층액을 모은 후, 감압 농축하여 구지뽕나무 클로로포름 가용추출물 94g을 수득하였다.

실시예 2. 2′,4′,5,7- 테트라하이드록시 -5′,6- 디프레닐 플라바논 화합물의 분리 및 정제

상기 실시예 1에서 수득한 구지뽕나무 비극성용매 가용추출물 94g을 수층과 클로로포름층을 분획을 하고, 이 클로로포름 유기용매층을 포화소금물로 세척한 후 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압농축하여 농충액 72g을 수득하였다. 이 농축액 72 g을 실리카겔(230 -400 메쉬, 머크)로 충진 시킨 컬럼에 로딩하여 클로로포름 3 L를 용출시킨 후 클로로포름 _: 메탄올을 30 : 1 (2000 ml), 20 : 1 (1500 ml), 10 : 1 (1500 ml), 5 : 1 (1500 ml) 비율의 전개용매에 의해 순차적으로 용출시켜, 용출된 분획 중 클로로포름 : 메탄올의 비율이 10 : 1 인 부분을 농축하였다. 이 농축액을 클로로포름 : 아세톤 조건으로 극성을 점차적으로 높여 컬럼크로마토그래피를 실시하여, 클로로포름 : 아세톤의 비율이 8 : 1일때 하기와 같은 물성치를 갖는 본 발명의 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논 화합물 180 mg을 수득하였다.

2′,4′,5,7- 테트라하이드록시 -5′,6- 디프레닐 플라바논

성상 : 노란색의 침상 결정

LRFABMS : m/z 424 [M⁺]의 분자이온

IR(liquid film) Vmax 3442cm^-1(OH), 1636cm^-1(chelated C=O)

UV(CHCl₃) λmax 289, 334nm

¹H-NMR δ ppm : 5.54(1H, dd, J=12.8, 3.0Hz), 2.83(1H, dd, J=17.3, 3.0Hz), 3.15(1H, dd, J=17.3, 12.8Hz)

실험예 1. 2′,4′,5,7- 테트라하이드록시 -5′,6- 디프레닐 플라바논 화합물의 단백질 인산화 효소인 CK Ⅱ의 활성에 미치는 영향

상기 실시예 2에서 수득한 본 발명의 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논 화합물이 단백질 인산화 효소인 CKⅡ에 미치는 영향을 실험하였다.

키나아제 분석 완충액(Kinase assay buffer, 20 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 150 mM KCl, 10 mM MgCl_{2 ,} 30 mM PNPP, 1 mM DTT, 1 mM EGTA)에 0.6 mM ATP ([γ-³²P]ATP, 50-100 cpm/pmol) 5㎕, 카제인(casein) 단백질 용액(10 mg/㎖) 3 ㎕, CKII 1 ㎕를 넣어 전체 양을 30 ㎕로 하고 본 발명의 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논 화합물을 0 내지 666 μM을 처리하여 37℃에서 20 분간 반응시켰다. 반응액 10 ㎕를 포스포셀룰로즈 페이퍼(phosphocellulose paper)에 흡착시킨 후 100 mM 인산(phosphoric acid)으로 4회 씻고 신틸레이션 카운 터(scintillation counter)로 방사능을 측정하였다.

상기 실험 수행의 결과, 도 1에서 보는 바와 같이 본 발명의 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논 화합물을 처리하지 않았을 경우에는 CKⅡ의 활성이 100%였던 것이, 본 발명의 화합물 농도 83μM일 때에는 CKⅡ의 활성은 약 48%로 급격히 감소하여 166μM일 때에는 43%, 333μM일 때에는 34%, 666μM일 때에는 20%로 현저히 감소하여 본 발명의 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논 화합물의 농도 의존적으로 단백질 인산화 효소인 CKⅡ의 활성은 현저히 억제됨을 확인할 수 있었다. 본 발명의 화합물의 CKⅡ에 대한 IC₅₀은 약 78μM이다.

따라서, CKⅡ는 단백질 인산화 효소로서 이는 암세포에서 높은 활성을 가질 뿐 만아니라 세포증식에 필수적인 효소로서 본 발명의 화합물은 이 CKⅡ에 대한 억제활성을 가지고 있으므로 암세포의 증식을 억제할 수 있음을 알 수 있다.

실험예 2. 급성독성실험

6 주령의 특정병원체부재(specific pathogen-free, SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 각 그룹당 2마리씩의 동물에 본 발명의 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논 화합물을 500㎎/㎏의 용량으로 1회 경구투여 하였다. 실험물질 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상 및 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 강장기와 흉강 장기의 이상여부를 관찰하였다.

그 결과, 실험 물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사 및 부검 소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 이상의 결과, 본 발명의 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논 화합물은 랫트에서 각각 500㎎/㎏ 까지도 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD₅₀)은 500㎎/㎏ 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

본 발명의 화합물을 포함하는 약학조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

실시예 2의 화합물 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

실시예 2의 화합물 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

실시예 2의 화합물 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

실시예 2의 화합물 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO₄12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

실시예 2의 화합물말 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 음료의 제조

실시예 2의 화합물 100 ㎎

비타민 C 15 g

비타민 E (분말) 100 g

젖산철 19.75 g

산화아연 3.5 g

니코틴산아미드 3.5 g

비타민 A 0.2 g

비타민 B₁ 0.25 g

비타민 B₂ 0.3g

물 정량

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다. 상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

도 1은 본 발명의 2′,4′,5,7-테트라하이드록시-5′,6-디프레닐 플라바논 화합물을 투여하였을 경우 단백질 인산화 효소인 CKⅡ에 대한 억제효과를 나타낸 도이다.

Claims (2)

1. 암세포의 증식 억제 활성을 갖는 하기 화학식 1의 2',4',5,7-테트라하이드록시-5',6-디프레닐 플라바논 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암 질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물.

   (화학식 1)

   
2. 제 1항 있어서, 상기 암질환은 위암, 결장암, 유방암, 폐암, 비소세포성폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두부 또는 경부암, 피부 또는 안구 내 흑색종, 자궁암,내분비선암, 갑상선암 또는 부갑상선암인 약학조성물.

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