KR100696867B1 - 트리멜라 푸시포미스(Tremella fuciformis) 및 그의 공생균인 하이폭실론 속(Hypoxylon sp.)균의 혼합균사체 추출물 또는 상기 혼합균사체 배양혼합물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경세포 분화 촉진용 건강기능성 식품 조성물 - Google Patents
트리멜라 푸시포미스(Tremella fuciformis) 및 그의 공생균인 하이폭실론 속(Hypoxylon sp.)균의 혼합균사체 추출물 또는 상기 혼합균사체 배양혼합물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경세포 분화 촉진용 건강기능성 식품 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR100696867B1 KR100696867B1 KR1020050099450A KR20050099450A KR100696867B1 KR 100696867 B1 KR100696867 B1 KR 100696867B1 KR 1020050099450 A KR1020050099450 A KR 1020050099450A KR 20050099450 A KR20050099450 A KR 20050099450A KR 100696867 B1 KR100696867 B1 KR 100696867B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- extract
- mycelium
- mixed
- culture
- hypoxylon
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 241000872605 Hypoxylon sp. Species 0.000 title claims abstract description 6
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 title claims abstract description 5
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 title abstract description 11
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 title abstract description 5
- 241000908178 Tremella fuciformis Species 0.000 title abstract description 4
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 230000004031 neuronal differentiation Effects 0.000 claims description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 2
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 claims description 2
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 claims description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 abstract description 14
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 abstract description 10
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 abstract description 10
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- 235000009414 Elaeocarpus kirtonii Nutrition 0.000 description 3
- 244000236151 Tabebuia pallida Species 0.000 description 3
- 235000013584 Tabebuia pallida Nutrition 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 2
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000005015 neuronal process Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 240000001810 Angelica gigas Species 0.000 description 1
- 235000018865 Angelica gigas Nutrition 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 244000111489 Gardenia augusta Species 0.000 description 1
- 235000018958 Gardenia augusta Nutrition 0.000 description 1
- AZKVWQKMDGGDSV-BCMRRPTOSA-N Genipin Chemical compound COC(=O)C1=CO[C@@H](O)[C@@H]2C(CO)=CC[C@H]12 AZKVWQKMDGGDSV-BCMRRPTOSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- AZKVWQKMDGGDSV-UHFFFAOYSA-N genipin Natural products COC(=O)C1=COC(O)C2C(CO)=CCC12 AZKVWQKMDGGDSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000012676 herbal extract Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 238000004080 punching Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/322—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the health of the nervous system or on mental function
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Botany (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
본 발명은 NGF(Nerve Growth Factor)와 같은 작용으로 신경세포의 분화를 촉진하는 효능을 갖는 트리멜라 푸시포미스(Tremella fuciformis)균사체 추출물 및 균사체 배양혼합물에 관한 것이다. 상기 배양 방법에 의하여 제조된 트리멜라 푸시포미스 균사체 추출물 및 균사체 배양혼합물의 경우 동물세포를 이용한 효능검증실험에서 신경 세포의 분화를 촉진시키는 작용을 나타내었다. 본 발명을 응용하여 신경세포의 분화를 촉진하기 위한 건강기능성 식품 및 의약품 개발에 NGF(Nerve Growth Factor)와 같은 작용으로 흰목이 균사체 추출물 및 균사체 배양혼합물의 적용을 용이하게 할 수 있다.
흰목이 균사체 추출물, 흰목이 균사체 배양혼합물, 신경성장인자(NGF)
Description
도1a는 대조군으로 배양액만을 처리 했을 때 PC12h 세포주의 신경축색돌기가 성장을 나타낸 도이다. 도1b는 액체 배양한 흰목이 균사체의 열수 추출물을 처리 했을 때 PC12h 세포주의 신경축색돌기 성장을 나타낸 것이고, 도1c는 액체 배양한 흰목이 균사체의 에탄올 추출물을 처리 했을 때 PC12h 세포주의 신경축색돌기 성장을 나타낸 도이다. 도1d는 고체 배양한 흰목이 균사체 배양혼합물의 열수 추출물을 처리 했을 때 PC12h 세포주의 신경축색돌기가 성장을 나타낸 것이고, 도1e는 고체 배양한 흰목이 균사체 배양혼합물의 에탄올 추출물을 처리 했을 때 PC12h 세포주의 신경축색돌기 성장을 나타낸 도이다.
본 발명은 PC12h 신경세포 분화 촉진효과를 갖는 흰목이 균사체 추출물 혹은 균사체 배양물에 관한 것으로, 보다 상세히는 흰목이 균사체를 적당한 배지와 조건에서 배양하여 신경성장 인자 활성을 갖는 흰목이 균사체 추출물 혹은 균사체 배양 혼합물을 생산하고 이를 추출하는 방법에 관한 것이다.
신경성장인자(Nerve growth factor, NGF)는 중추신경계에서 신경세포의 손상을 보호하는 작용을 하고(참조: J. Neurosci. Aug; 6(8): 2155-62, 1986) 성숙한 신경원 유지에 중요한 역할을 한다(참조: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 46: 384-391, 1960). 따라서 신경세포가 정상상태에서 생존, 성장, 분화하기 위해서는 신경성장인자와 같은 성장인자들이 필수적으로 요구된다고 할 수 있으며 이러한 신경성장인자는 치매의 예방과 치료에 있어 기존의 치료제들이 가지는 부작용 없이 효과적으로 작용할 것으로 기대된다. 그러나 이러한 신경성장인자는 분자량이 크기 때문에 뇌에서의 뇌-혈관 장벽(Blood brain barrier, BBB)을 통과하지 못하여 실제 임상에서의 치료효과를 기대하기 어렵다. 이에 내생하는 신경성장인자의 합성을 유도하거나, 혹은 신경성장인자와 유사한 역할을 하는 물질의 개발이 요구되는 실정으로 실제 많은 천연물로부터 이러한 물질을 탐색하고자 하는 연구가 진행되어지고 있다. 대표적인 연구로는 치자(Gardenia jasminoides Ellis)로부터 분리한 Genipin이 PC12h 동물세포에서 뛰어난 NGF 유사활성을 나타내었다는 보고가 있었으며(참조: Biol. Pharm. Bull. 19(6), 791-795, 1996) 그 외 당귀로부터 추출한 alkaloides(참조: Acta. Pharm. Sin, 24(9), 913-917, 2003)와 17종의 한약재 추출물에 대한 보고가 있다(참조: Biol. Pharm. Bull. 22(7), 752-755, 1999).
흰목이(Tremella fuciformis)는 영양기관인 균사체와 번식기관인 포자를 지닌 자실체로 나눌 수 있는데 균사체는 고등식물의 뿌리, 줄기 및 잎에 해당하며 자실체는 꽃에 해당한다고 볼 수 있으며 일반적으로 버섯이라 부른다.
본 발명자들은 이전에 흰목이 버섯(자실체)으로부터 열수 추출한 추출물이 신경성장인자 활성을 갖는다는 것을 밝혀내어 흰목이 추출물을 함유하는 치매 예방용 기능성 식품 조성물이라는 제목으로 특허 출원한 바 있다. 한편 본 발명은 이전에 특허 출원한 흰목이 버섯(자실체)으로부터 열수 추출한 성분이 아닌 고등식물의 뿌리, 줄기 및 잎에 해당하는 영양기관인 균사체 혹은 균사체를 곡물에 배양한 뒤 용매 추출하였을 때 신경성장 인자 활성을 갖는 것으로 원료가 전혀 다름을 밝히는 바이다.
본 발명자들은 PC12h 신경세포 분화 촉진효과를 갖는 흰목이 균사체 혹은 배양혼합물을 생산하고 이들로부터 추출한 추출물에 관한 것으로, 보다 상세히는 흰목이 균사체를 적당한 배지와 조건에서 배양하여 PC12h 신경세포 분화 촉진효과를 갖는 흰목이 균사체 및 균사체 배양혼합물 혹은 이들로부터 추출한 추출물을 건강식품 및 의약품으로 사용하는 것이다.
본 발명은 생물학적으로 적당한 배지와 조건에서 배양하여 PC12h 신경세포 분화 촉진효과를 갖는 것을 특징으로 하는 흰목이 균사체 추출물 및 균사체 배양혼합물을 제공하는 데 목적이 있다.
본 발명의 구성은 크게 PC12h 신경세포 분화 촉진효과를 갖는 흰목이 균사체 추출물 및 균사체 배양혼합물로 이루어진다. 여기서 말하는 균사체 배양혼합물은 곡물배지를 포함하는 배양한 균사체를 말하는 것으로 균사체 생장과정에서 만들어 지는 유용한 성분, 예를 들면 다당류, 펩타이드, 비타민등을 상당량 함유하게 되며 부수적으로 풍미와 음용을 용이하게 하는 것이다. 이를 입증하는 방법은 PC12h 세포를 이용하여 신경성장 인자(NGF; Nerve Growth Factor)활성을 확인하는 과정으로 구분 되어 진다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시 예에 한정되는 것은 아니다.
〈실시예 1〉흰목이 균사체의 혼합배양
흰목이 균과 공생균인 Hypoxylon sp.의 혼합배양단계이다. 흰목이 균은 MCM배지(glucose 30g/L, peptone 2.0g/L, MgSO4·7H2O 0.5g/L, KH2PO4 0.46g/L, K2HPO4 1.0g/L, yeast extract 2.0g/L)를 함유한 평판배지에서 30℃, 2주간 배양하였다. 한편, 흰목이 균의 공생균인 Hypoxylon sp.을 MCM배지에서 25℃, 1주간 배양한 것을 cork bore로 펀칭(punching)하여 2주간 배양한 흰목이 균에 접종한 뒤 10일간 배양하여 혼합균을 만들었다. 흰목이 균의 성장이 활발하게 되도록 혼합균을 만드는 과정을 반복해서 진행하여 가장 성장이 활발할 때 실시예 2로 넘어간다.
〈실시예 2〉액체 배양에 의한 흰목이 균사체 생산
실시예 1에서 만들어진 혼합균을 일정량의 증류수와 함께 멸균된 균질 믹서기(homogenizer)에서 분쇄한다. 다음은 500㎖ 배플 플라스크(baffled flask)에 일정량의 MCM액체배지를 넣고 실시예 1에서 만들어진 혼합균을 일정량 접종하고 온도 28℃±2℃, pH 6.5, 진탕속도 120rpm에서 실시하였다. 흰목이 균사체 배양액 100㎖중의 액체 균사체의 농도는 600nm에서의 O.D값으로 0.3이상 성장하였을 때를 확인하여 종말점으로 결정하였다. 배양을 마친 균사체는 수확하고 건조한 후 열수 추출 혹은 에탄올 추출하였다. 이때 수분의 증발은 최대한 억제하여 가장 안정된 조건에서 추출이 되도록 하였다.
〈실시예 3〉곡물 배양에 의한 흰목이 균사체 배양혼합물 생산
실시예 1에서 만들어진 혼합균을 일정량의 증류수와 함께 멸균된 균질 믹서기(homogenizer)에서 분쇄한다. 표1에 나타난 조성표와 같이 수분함량이 40％이상 되도록 멸균한 콩 혹은 통밀등 300g에 실시예 1에서 만들어진 혼합균을 5％ 정도의 농도(v/w)로 접종하고 28℃±2℃에서 30일간 정치 배양한다. 배양된 균사체는 전체적으로 흰색을 띠며 곡물배지의 표면을 충분히 덮을 정도로 자랐을 때를 확인하여 종말점으로 결정 하였다. 배양을 마친 균사체 배양혼합물을 수확하고 건조한 후 열수 추출 혹은 에탄올 추출하였다.
상기 조성물은 4주령 ICR mice를 구입하여 체중이 비슷한 동물을 무작위법으로 균등히 암, 수 각군당 10마리씩 분배하여 2g/kg의 농도로 2주간 매일 반복 투여 하였으나 암, 수 모두 실험기간동안 사망하지 않았으며 체중변화, 운동상태, 외관변화등 특별한 이상은 발견되지 않았다.
[표 1] 곡물배양 배지 조성표
〈실시예 4〉흰목이 균사체의 추출물 제조
흰목이 균사체 추출물은 열수 추출물과 에탄올 추출물로 나누어 실시하였다.
열수 추출물은 건조한 균사체 100g에 1L의 증류수를 혼합하고 환류추출기에서 100℃, 12시간 동안 추출하였다. 에탄올 추출물은 건조한 균사체 100g에 1L의 에탄올를 혼합하고 환류추출기에서 65℃∼70℃, 12시간 동안 추출하였다. 이때 수분의 증발은 최대한 억제하여 추출이 되도록 하였다. 이렇게 추출된 시료를 와트만 필터페이퍼(Whateman filter paper No. 2)를 이용하여 여과하고, 진공회전 농축기로 농축하여 용매를 완전히 제거한 후 동결건조 하여 열수 추출물 5.8g과 에탄올 추출물 4.6g을 제조하였다.
〈실시예 5〉흰목이 균사체 배양 혼합물의 추출물 제조
흰목이 균사체 배양혼합물의 추출물은 열수 추출물과 에탄올 추출물로 나누어 실시하였다. 열수 추출물은 보리를 배지로 사용하여 건조한 균사체 배양혼합물 100g에 1L의 증류수를 혼합하고 환류추출기에서 100℃, 12시간 동안 추출하였다. 에탄올 추출물은 건조한 균사체 배양혼합물100g에 1L의 에탄올를 혼합하고 환류추출기에서 65℃∼70℃, 12시간 동안 추출하였다. 이때 수분의 증발은 최대한 억제하여 추출이 되도록 하였다. 이렇게 추출된 시료를 와트만 필터페이퍼(Whateman filter paper No. 2)를 이용하여 여과하고, 진공회전 농축기로 농축하여 용매를 완전히 제거한 후 동결건조 하여 열수 추출물 14.4g과 에탄올 추출물 7.5g을 제조하였다.
〈 실험예 1〉신경세포분화촉진효과(Neuritogenic Effect) 측정
Collagen(200㎍/㎖, Type I, Sigma) 용액으로 코팅된 6 well plate에 5x104 cells/well의 농도로 세포를 분주하여 37℃, 5％ CO2 로 설정된 배양기에서 24시간 동안 배양한 후, Serum이 함유되지 않은 분화배지(DMEM/F-12, Gibco BRL)으로 세포를 1회 세척하고 transferrine(40uM), insulin(1㎍/㎖), progesterone(1㎍/㎖)과 시료가 함유된 분화 배지를 처리한다. 분화되지 않은 PC12h 세포에 흰목이 균사체 혹은 균사체 배양혼합물로 부터 추출한 추출물을 투여하고 72시간동안 37℃, 5％ CO2 배양기(Sanyo, Japan)에서 배양하였다. 배양 후 0.1％ glutalaldehyde 용액 1㎖을 이용하여 세포를 고정시키고 Image analyzer(Leica Qwin, Germany)를 이용하여 신장된 신경세포돌기의 길이를 측정하였다. 각 실험군당 10부분씩 임의로 선정하여 그 부위에서 가장 긴 신경세포돌기 순으로 10개씩 측정하였다. 측정된 신경돌기의 길이는 ANOVA test와 T-test를 통하여 유의성을 검증하였다. 결과는 표1에 나타내었으며, 비교예로 NGF(Nerve Growth Factor 0.1 ㎍/ml) 및 PBS(Phosphate Buffered Saline)를 사용하였다.
[표 2] 흰목이 균사체 혹은 균사체 배양혼합물로 부터 추출한 추출물의 신경세포분화촉진(Neuritogenic) 효과
대조군으로 사용한 PBS처리군의 평균 신경돌기 길이는 71.37±2.72 ㎛이었으며 본 발명에 사용된 실시예를 통하여 제조된 흰목이 균사체 열수 추출물과 에탄올 추출물의 처리군 에서는 대조군인 PBS와 비교하였을 때 본 실험에서 처리된 농도에서 유의적인 분화촉진효과(P＜0.01)가 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 특히 흰목이 균사체의 에탄올 추출물의 경우 100ng/㎖의 농도에서 신경돌기 길이가 105±2.19㎛로 대조군과 비교하여 147％ 증가하였으며 다른 실험군에 비하여 가장 좋은 분화 촉진효과를 나타난 것을 알 수 있었다. 한편 흰목이 균사체 배양 혼합물의 열수 추출물과 에탄올 추출물의 처리군 에서는 대조군인 PBS와 비교하였을 때 본 실험에서 처리된 농도에서 흰목이 균사체의 열수 추출물과 에탄올 추출물의 결과와 마찬가지로 유의적인 분화촉진효과(P＜0.01)가 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 그러나 흰목이 균사체 배양 혼합물의 열수 추출물과 에탄올 추출물의 경우 동일농도에서 흰목이 균사체 추출물의 신경돌기 분화촉진효과보다는 낮은 것으로 나타났다(표 2).
이상 설명하고 실시예를 통하여 알 수 있는 바와 같이, 본 발명은 신경세포의 분화를 촉진하는 효능을 갖는 트리멜라 푸시포미스(Tremella fuciformis)균사체 추출물 및 균사체 배양혼합물에 관한 것이다. 본 발명에 따라 새로운 소재로서 신경세포의 분화를 촉진하는 효능을 갖는 트리멜라 푸시포미스 균사체 추출물 및 균사체 배양 혼합물의 생산과 추출을 통하여 건강식품 및 의약품산업에 기여할 수 있는 매우 유용한 발명인 것으로 판단된다.
Claims (3)
- 트리멜라 푸시포미스(Tremella fuciformis) 및 그의 공생균인 하이폭실론 속(Hypoxylon sp.)균의 혼합균사체 추출물 또는 상기 혼합균사체 배양혼합물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경세포 분화 촉진용 건강기능성 식품 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 배양은 곡물배지에서 배양하는 것임을 특징으로 하는 조성물.
- 제2항에 있어서, 상기 곡물배지는 콩, 밀, 보리, 옥수수 및 쌀로 이루어진 군 중에서 선택되는 하나 이상의 곡물배지인 것을 특징으로 하는 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020050099450A KR100696867B1 (ko) | 2005-10-21 | 2005-10-21 | 트리멜라 푸시포미스(Tremella fuciformis) 및 그의 공생균인 하이폭실론 속(Hypoxylon sp.)균의 혼합균사체 추출물 또는 상기 혼합균사체 배양혼합물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경세포 분화 촉진용 건강기능성 식품 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020050099450A KR100696867B1 (ko) | 2005-10-21 | 2005-10-21 | 트리멜라 푸시포미스(Tremella fuciformis) 및 그의 공생균인 하이폭실론 속(Hypoxylon sp.)균의 혼합균사체 추출물 또는 상기 혼합균사체 배양혼합물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경세포 분화 촉진용 건강기능성 식품 조성물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR100696867B1 true KR100696867B1 (ko) | 2007-03-20 |
Family
ID=41563557
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020050099450A KR100696867B1 (ko) | 2005-10-21 | 2005-10-21 | 트리멜라 푸시포미스(Tremella fuciformis) 및 그의 공생균인 하이폭실론 속(Hypoxylon sp.)균의 혼합균사체 추출물 또는 상기 혼합균사체 배양혼합물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경세포 분화 촉진용 건강기능성 식품 조성물 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR100696867B1 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102351730B1 (ko) | 2020-12-23 | 2022-01-17 | 고려홍삼원 주식회사 | 흰목이버섯 발효 콜라겐 펩타이드 조성물 및 이의 제조방법 |
-
2005
- 2005-10-21 KR KR1020050099450A patent/KR100696867B1/ko active IP Right Grant
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 공개특허공보 제2003-95228호 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102351730B1 (ko) | 2020-12-23 | 2022-01-17 | 고려홍삼원 주식회사 | 흰목이버섯 발효 콜라겐 펩타이드 조성물 및 이의 제조방법 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101347219B1 (ko) | 밀리타리스 동충하초의 재배방법 | |
| JP3593429B2 (ja) | 冬虫夏草の人工培養方法 | |
| KR20070055373A (ko) | 아토피 피부염 개선제 조성물 | |
| TWI459953B (zh) | 提高蛹蟲草產能及有效成份之固態培養基組合物 | |
| KR100919070B1 (ko) | 사포닌을 함유하는 근채류 발효 활성을 갖는 균주를 이용한근채류 발효물의 제조방법 | |
| JP3830731B2 (ja) | アントロディアカンフォラータ（Ａｎｔｒｏｄｉａｃａｍｐｈｏｒａｔａ）の分離株、その培養物の生産方法、及びそれにより得られる産生物 | |
| KR101238968B1 (ko) | 에르고티오닌이 함유된 산삼발효산물을 제조하는 방법 | |
| KR100696867B1 (ko) | 트리멜라 푸시포미스(Tremella fuciformis) 및 그의 공생균인 하이폭실론 속(Hypoxylon sp.)균의 혼합균사체 추출물 또는 상기 혼합균사체 배양혼합물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경세포 분화 촉진용 건강기능성 식품 조성물 | |
| JP3911427B2 (ja) | 新規セスキテルペン系化合物、その製造方法及び組成物 | |
| KR20080004515A (ko) | 유산균 배양에 의해 얻어지는 혈압 저하제 | |
| KR101270972B1 (ko) | 식물 추출물을 포함하는 항진균 조성물 | |
| WO2012165735A1 (ko) | 버섯균사체쌀 추출물을 포함하는 당뇨병 또는 비만 치료용 약학 조성물 | |
| KR100572405B1 (ko) | 무독화 옻 추출물의 제조 방법 및 그 추출물의 용도 | |
| Elsharnouby et al. | Improvement of silymarin content in cell cultures of Silybum marianum by copper sulphate elicitor | |
| KR20170040555A (ko) | 녹용 배양액을 이용한 시알산 함유 콩나물 및 이의 재배 방법 | |
| KR100496666B1 (ko) | 고등균류를 이용한 발효 인삼 제조 방법 및 이를 포함하는기능성 인삼제품 | |
| KR20200045748A (ko) | 콩과 식물 배양근의 효소 처리 추출물을 함유하는 피부 탄력 증진용 또는 피부 주름 개선용 조성물 | |
| KR20170117971A (ko) | 팽이버섯 추출물을 이용한 가바(gaba)성분 함유 유산균 발효액의 제조방법 | |
| JP2004344027A (ja) | 冬虫夏草菌糸体の培養方法及び組成物 | |
| KR20220073362A (ko) | 백강잠 생성능이 우수한 신규한 보베리아 바시아나 hy-51 균주 및 이의 이용 | |
| KR20060009612A (ko) | 동충하초균주에 의한 인삼 사포닌의 전환 및 코디세핀강화 방법 | |
| KR20010087699A (ko) | 감마-아미노낙산의 함량이 높은 동충하초의 재배방법 | |
| KR20170024370A (ko) | 팽이버섯 추출물을 이용한 가바(gaba)성분 함유 유산균 발효액의 제조방법 | |
| JP2021529183A (ja) | 酵母抽出物を含む糖尿改善または抗酸化用の組成物と酵母抽出物の製造方法 | |
| KR101335788B1 (ko) | 해동드립을 이용한 생천마 발효추출물을 제조하는 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20130111 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20140110 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20150109 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20160111 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20170106 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20180110 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190121 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20200113 Year of fee payment: 14 |