KR100620151B1 - 단백질분해효소 처리에 의한 아므르 불가사리 유래의 기능성 화장품용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 바실러스 아밀로리쿼페이션스(Bacillus amyloliquefaciens), 바실러스 리케니포미스(Bacillus licheniformis) 균으로부터 추출된 식품가수분해용 단백질분해효소 처리에 의한 아므르 불가사리 유래의 항균활성, 항산화활성, 피부 미백효과를 가지는 기능성 화장품용 조성물에 관한 것으로, 본 발명은 아므르 불가사리에 단백질분해효소를 처리하여 항균활성, 항산화활성, 피부의 미백효과가 있는 신규한 기능성 화장품용 조성물을 제공하는 뛰어난 효과가 있다.
아므르 불가사리, 생리활성물질, 단백질분해효소, 항균활성, 항산화활성, 미백효과, 기능성 화장품용 조성물

Description

단백질분해효소 처리에 의한 아므르 불가사리 유래의 기능성 화장품용 조성물{Functional cosmetic compositions isolated from Asterias amurensis by protease treatment}
도 1은 아므르 불가사리에 바실러스 아밀로리쿼페이션스(Bacillus amyloliquefaciens ), 바실러스 리케니포미스( Bacillus licheniformis ) 균으로부터 추출된 식품가수분해용 단백질분해효소를 처리한 후 용매순차추출, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 및 고성능 액체크로마토그래피를 이용한 본 발명 아므르 불가사리 유래의 항균활성, 항산화활성, 피부 미백효과가 있는 기능성 화장품 조성물을 추출하기 위한 공정도를 도시한 것이다.
본 발명은 바실러스 아밀로리쿼페이션스(Bacillus amyloliquefaciens), 바실러스 리케니포미스(Bacillus licheniformis) 균으로부터 추출된 식품가수분해용 단백질분해효소 처리에 의한 아므르 불가사리 유래의 항균활성, 항산화활성, 피부 미백효과가 있는 기능성화장품용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 본 발명은 아므르 불가사리를 용매순차추출 후, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피로 분리·정제하여 얻은 항균활성, 항산화활성, 피부 미백효과가 검정된 생리활성물질과 아므르 불가사리를 용매순차추출 후 얻은 유기산 합성한 잔사로 신규한 기능성 화장품용 조성물에 관한 것이다.
불가사리는 몸은 편평한 별모양으로 연안에서 우리가 가장 흔하게 접할 수 있는 해양동물중의 하나로서, 전국 연안에 약 30여종의 불가사리가 서식하고 있으며, 번식률은 대단히 높아서 마리당 200∼300만개를 산란하며, 극피동물문의 바다나리강, 불가사리아강, 거미불가사리아강, 성게강, 해삼강에 포함되는 해산 무척추동물이다. 우리나라에는 불가사리류 47종이 보고도어 있으며 남쪽에 비해 북방계의 종이 풍부하다. 이들은 북태평양에 널리 분포하는 종으로서 일본의 북부와 북미쪽에 공통해 있는 종이다. 이들을 보면 빗살판불가사리류(Ctenodiscus), 작은불가사리류(Leptychaster), 검은띠불가사리류(Luidia), 헛불가사리류(Pseudarchaster), 애기불가사리류(Henricia), 햇님불가사리류(Solaster), 입방불가사리류(Pteraster), 문어불가사리류(Plazaster), 일본불가리류(Distolasterias), 아팰불가사리류(Aphelasterias), 그리고 우리나라 남해안일대에 광범위하게 서식하고 있으며 양식장에 피해를 주고 있다고 알려져 있는 아므르불가사리류(Asterias) 등이다.
불가사리류는 육식성의 적게 먹는 동물로서 먹이에 대해 아주 민감하게 반응한다. 그래서 이미패류와 고동, 굴 등의 연체동물, 작은 갑각류, 다모류, 성게, 거미불가사리 등의 극피동물이 먹이가 된다. 자망에 걸린 어류도 먹으며 굴, 홍합, 조개 양식장에는 많은 불가사리가 습격하여 피해를 주는 수가 있다. 먹이습성상 잡식성이지만 특히 조개류를 좋아하기 때문에 패류양식장에서는 이를 해적생물로 간주하여 매년 퇴치작업을 벌이고 있다. 그러나 불가사리는 이동하는 것은 포식하지 못할 뿐만 아니라 아주 느리게 움직이는 소라고동도 건강한 개체는 불가사리에 희생되지 않으며 이동이 불가능하게 되었거나 죽은 개체, 그리고 정착성 조개류가 주 먹이이다. 급격히 줄어드는 수중자원 만큼 불가사리 숫자도 자연 감소하고 있다. 불가사리의 효용가치는 지금으로서는 전무하다고 볼 수 있다. 체포한 불가사리를 비료대용으로 사용하려는 시도가 있었지만 그 효과는 아직까지는 인정받지 못하고 있으며 불가사리의 식품으로서의 이용가치를 알아보기 위하여 불가사리를 조리해 보았으나 식용으로서는 불가하였다. 최근에 불가사리에 다량 함유된 아연성분을 추출하여 건강 식품으로 소개된 바가 있다. 또한, 불가사리를 활용한 항암물질과 기능성 가축사료를 만드는 연구가 활발하게 이뤄지고 있다.
본 발명자는 이러한 점에 착안하여 우리 나라 패류 양식어장에 크게 피해를 주는 것으로 알려진 아므르 불가사리의 효용가치를 높이는 일환으로 생리적 활성을 갖는 물질을 분리해냄으로써 해양신물질을 기능성 소재화하고 상기 물질을 대량생산하고자 본 발명을 실시하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 아므르 불가사리에 바실러스 아밀로리쿼페이션스( Bacillus amyloliquefaciens ), 바실러스 리케니포미스( Bacillus licheniformis ) 균으로부터 추출된 식품가수분해용 단백질분해효소를 처리하여 항균활성, 항산화활성, 피부 미백효과가 있는 기능성화장품용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 상기 목적은 아므르 불가사리에 바실러스 아밀로리쿼페이션스( Bacillus amyloliquefaciens ), 바실러스 리케니포미스( Bacillus licheniformis ) 균으로부터 추출된 식품가수분해용 단백질분해효소를 처리한 후 용매순차 추출, 실 리카겔 컬럼 크로마토그래피 및 고성능액체크로마토그래피로 분리·정제한 후 상기 분획의 물질규명 및 생리적 활성을 검정하고, 아므르 불가사리잔사를 유기산 합성하여 검정된 생리활성물질과 유기산 합성한 아므르 불가사리잔사로 기능성 화장품(스킨, 로션, 팩)을 제조하여 항균활성, 항산화활성, 미백효과를 검색함으로써 달성하였다.
이하, 본 발명의 구성을 구체적으로 설명한다.
본 발명은 아므르 불가사리 시료의 용매순차추출 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 및 고성능액체크로마토그래피로 분리·정제하는 단계; 상기분획의 물질규명 및 생리활성 검정단계; 불가사리잔사의 유기산 합성단계; 상기규명된 생리활성물질과 유기산 합성한 아므르 불가사리잔사로 기능성 화장품제조 후 항균활성, 항산화활성, 미백효과 검정단계로 구성된다.
본 발명에서 사용된 불가사리는 우리 나라 패류 양식어장에 크게 피해를 주는 것으로 알려진 아므르 불가사리(Asterias amurensis)를 시료로 하였으며, 표면의 수분을 제거하여 균질기 (Waring blender Co., USA)로 갈아서 분석용 시료로 하였다.
본 발명 아므르 불가사리 유래의 기능성 화장품 조성물은 아므르 불가사리에 3배(v/w)의 증류수를 첨가하고 바실러스 아밀로리쿼페이션스(Bacillus amyloliquefaciens ), 바실러스 리케니포미스( Bacillus licheniformis ) 균으로부터 추출된 식품가수분해용 단백질분해효소를 첨가하여 50℃에서 3∼5시간 동안 교반한 후 원심분리하여 상등액과 잔사를 분리한 다음, 분리된 잔사에 3배(v/w)의 메탄올을 첨가하여 4℃에서 5∼6시간 동안 교반한 후, 진공여과하여 상등액과 잔사를 분리한 다음, 분리된 잔사에 3배(v/w)의 아세톤을 첨가하여 4℃에서 5∼6시간 동안 교반한 후, 진공여과하여 상등액과 잔사를 분리함으로써 상등액을 회수하여 얻음을 특징으로 한다.
한편, 바람직스럽게는 상기 아므르 불가사리 유래의 기능성 화장품 조성물은 상기 용매순차추출물에서 얻은 상등액을 5:5(v/v) 및 3:7(v/v)의 CH3Cl3 : MeOH 용매계로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(200 메쉬)를 수행하여 분리·정제한 다음, 분리한 분획물을 9:1(v/v)의 비율로 혼합된 CH3Cl3 : MeOH 용매계로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(400 메쉬)를 수행하여 분리·정제한 다음, 분리한 분획물(4번 분획)을 80:20(v/v)의 아세토나이트릴:물 용매계(유속 4 mL/min)로 고성능 액체크로마토그래피를 통해 수행하여 얻은 분획물임을 특징으로 한다.
한편, 바람직스럽게는 상기 아므르 불가사리 유래의 기능성 화장품 조성물은 상기 용매순차추출하여 얻은 잔사를 1,200℃에서 10시간 회화 후 0.67의 칼슘/젖산 몰비로 유기산(젖산) 합성하여 100℃에서 24시간 열풍건조하여 100 메쉬로 분쇄하여 얻은 분획물임을 특징으로 한다.
본 발명 아므르 불가사리 유래의 기능성 화장품 조성물은 상기 용매순차추출물에서 얻은 상등액을 CH3Cl3 : MeOH 용매계로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(200 및 400 메쉬)를 수행하여 분리·정제한 다음, 분리한 분획물(4번 분획)을 80:20(v/v)의 아세토나이트릴:물 용매계(유속 = 4 mL/min)로 고성능 액체크로마토그래피를 통해 수행하여 얻은 분획물(5∼6분 분획)과 상기 용매순차추출한 후 얻은 잔사를 1,200℃에서 10시간 회화 후 0.67의 칼슘/젖산 몰비로 유기산(젖산) 합성하여 100℃에서 24시간 열풍건조하여 100 메쉬로 분쇄하여 얻은 분획물임을 특징으로 한다.
이하, 본 발명의 구체적인 방법을 실시예를 들어 상세히 설명하고자 하지만 본 발명의 권리범위는 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 : 본 발명에서 아므르 불가사리 시료의 용매순차추출 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피및 고성능액체크로마토그래피로 분리·정제하는 단계
본 발명 아므르 불가사리 용매추출물로부터 생리활성효과를 가지는 기능성 화장품용 조성물을 분리하기 위해 도 1의 단계 1∼4에 따라 바실러스 아밀로리쿼페이션스(Bacillus amyloliquefaciens), 바실러스 리케니포미스(Bacillus licheniformis ) 균으로부터 추출된 식품가수분해용 단백질분해효소를 처리한 효소군으로부터 메탄올 및 아세톤 순서로 용매순차추출 후 단계 2와 같이 CH3Cl3 : MeOH (v/v = 10:0, 9:1, 7:3, 5:5, 3:7, 1:9, 0:10) 용매계로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography I(200 mesh))를 이용하여 각 분획별로 50 mL씩 취하여 총 7개의 분획으로 분리 및 정제한 다음, 단계 3과 같이 CH3Cl3 : MeOH (10:0, 9:1, 7:3, 5:5, 3:7, 1:9, 0:10) 용매계로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography Ⅱ(200 mesh))를 이용하여 각 분획별로 50 mL씩 취하여 총 21개의 분획으로 분리·정제하였다. 이때 단백질분해효소로서 사용한 프로타멕스TM(ProtamexTM , 노보엔자임 社, 덴마크)는 바실러스 아밀로리쿼페이션스( Bacillus amyloliquefaciens ), 바실러스 리케니포미스( Bacillus licheniformis ) 균으로부터 추출된 식품가수분해를 위해 사용하는 바실러스 프로테아제 컴플렉스( Bacillus protease complex)이며, 최적 온도는 35∼60℃, 최적 pH는 5.5∼7.5 범이이다. 그 후 단계 4와 같이 분리한 분획물(4번 분획)을 80:20(v/v)의 아세토나이트릴:물 용매계(유속 = 4 mL/min)로 고성능 액체크로마토그래피를 통해 수행하여 얻은 1종류의 분획(5∼6분 분획)으로 분리·정제하였다.
실시예 2 : 본 발명에서 아므르 불가사리 시료의 용매순차추출 후 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 및 고성능액체크로마토그래피로 분리·정제한 분획물의 물질 규명 및 생리활성검정
상기 실시예 1에서 아므르 불가사리 시료의 용매순차추출 후 실리카겔 컬럼크로마토그래피 및 고성능 액체크로마토그래피로 분리·정제한 분획물을 가스크로마토그래피/질량분석기(GC/MSD)로 분석하여 물질을 규명하였다.
그 결과는 표 1에 나타내었다.
번호 보유시간(분) 화합물 분자량 분획 1
1 12.50 Dodecanoic acid C12:0 미량
2 15.17 Tridecanoic acid C13:0 미량
3 18.08 Tetradecanoic acid C14:0,228 1.28
4 18.26 4,8,12-Trimethyl tetradecanoic acid 256 미량
5 21.06 Pentadecanoic acid C15:0,242 미량
6 22.63 14-Methyl pentaedecanoic acid 256 0.07
7 24.14 Hexadecanoic acid C16:0,256 4.89
8 24.93 (Z)-9-hexadecanoic acid C16:1 0.38
9 25.62 14-Methyl hexadecanoic acid 270 0.42
10 26.10 15-Methyl hexadecanoic acid 270 0.16
11 26.71 9,12-Hexadedienoic acid C16:2(n-16) 0.33
12 27.05 Heptadecanoic acid C17:0 0.32
13 28.48 16-Methyl heptadecanoic acid 284 0.17
14 30.08 Octadecanoic acid C18:0 7.49
15 30.75 7-Octadecenoic acid C18:1 0.89
16 31.02 9-Octadecenoic acid C18:1 2.92
17 34.30 6,9,12-Octadecatrienoic acid C18:3(n-6) 0.73
18 34.87 9,12,15-Octadecatrienoic acid C18:3(n-3) 1.31
19 36.25 6,9,12,15-Octadecatetraenoic acid C18:4(n-3) 1.15
20 38.54 9-Eicosenoic acid C20:1(n-11) 3.54
21 38.81 11-Eicosenoic acid C20:1(n-9) 4.53
22 39.14 13-Eicosenoic acid C20:1(n-7) 0.84
23 39.69 6,11-Eicosadienoic acidd C20:2(n-9) 3.49
24 39.88 11,14-Eicosadienoic acid C20:2(n-6) 0.24
25 41.23 11,13-Eicosadienoic acid C20:2(n-7) 0.67
26 44.34 5,8,11,14-Eicosatetraenoic acid C20:4(n-6) 0.68
27 46.39 5,11,14,17-Eicosatetraenoic acid C20:4(n-3) -
28 49.47 5,8,11,14,17-Eicosapentaenoic acid C20:5(n-3) 26.04
29 52.06 13-Decosenoic acid C22:1(n-9) 0.23
30 55.27 4,7,10,13,16,19-Docosahexaenoic acid C22:6(n-3) 4.28
1)- : 미검출. 용매를 제외한 각 화합물의 면적비로 계산, 분획 1(7∼9분), 분획 2(9∼10분) 분획 3(11∼12분).
표 1에서 나타난 바와 같이, 아므르 불가사리(Asterias amurensis)에서는 29종의 지방산이 검출되었다. 이중에서 5,8,11,14,17-eicosapentaenoic acid (EPA)가 26.04%로 가장 높은 함량을 차지하였고, 다음으로 octadecanoic acid, hexadecanoic acid의 순이었다. 아므르 불가사리에서는 이중결합구조를 가지고 있는 5,8,11,14,17-eicosapentaenoic acid가 26.04%와 단일결합구조만을 가지고 있는 octadecanoic acid, hexadecanoic acid등이 주요한 물질로 추정되었다.
실험예 1 : 항균활성 검정
항균력은 페이퍼 디스크(paper disk) 법에 따라 검색하고, 실험균주로서 대표적인 혐기성 여드름균인 프로피오니박테리움 애크니스(Propionibacterium acnes) 1종과 피부 백선균류 5종인 (에피더모파이톤 플로코숨)Epidermophyton floccosum, (마이크로스프럼 아우도우이니)Microsproum audouinii, (트리코파이톤 페루지넘)Trichophyton ferrugineum, (트리코파이톤 멘타르로파이테스)Trichophyton mentagrophytes, (트리코파이톤 러브럼)Trichophyton rubrum 등, 총 6종의 균주를 사용하였다.
그 결과는 표 2에 나타내었다
분획물 투명환 (mm)1)
그람 양성균 곰팡이
P.acnes E.floccosum M.audouinii T.ferrugineum T.mentagrophytes T.rubrum
대조구 -2) - - - - -
3종류의 혼합분획물(분획 1∼3) 10 10 9 8.5 9 9
1)페이퍼디스크법에 따라 검출됨. 2)- : 미검출.
표 2에서 나타난바와 같이, 본 실험에서 분리한 기능성물질은 피부의 피지안에서 잘 자라는 것으로 알려진 대표적인 균인 Propionibacterium acnes에 대해서는 매우 효과가 잘 나타났다. 피부 백선균에서도 매우 우수한 항균효과를 가지고 있음을 알 수 있었다.
실험예 2 : 항산화활성 검정
항산화활성 시험은 Blios의 방법 (1958)에 준하여 DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl, Aldrich Co., USA) 활성을 측정하였다. 즉 조제한 DPPH 용액 0.8 mL에 에탄올 3∼4 mL을 가하고 10초 동안 강하게 진탕하여 분광 광도계의 흡광도 값이 0.95-0.99가 되도록 에탄올의 양을 조정한 다음 시료 0.2 g을 취하여 앞에서 조절한 적정량의 에탄올과 DPPH용액 0.8 mL를 가하여 10초 동안 강하게 진탕한 후 10분 동안 방치하고 525 nm에서 흡광도를 측정하여, DPPH radical 소거능 (%)을 구하였다.
그 결과는 표 3과 같다.
분획물 항산화활성(EDA50, mg/mL)
3종류의 혼합분획1) 15.59
1)분획 1, 분획 2 및 분획 3의 혼합물 ; 단위 : EDA50 (mg/mL)
표 3에서 나타나바와 같이, DPPH의 radical 소거능(%)을 EDA50 (mg/mL)으로 환산한 결과, EDA50이 15.59로 우수하게 나타났다.
실험예 3 : 미백효과 검정
미백효과는 Chen 및 Kubo의 방법 (2002)을 변형하여 5% (w/v) 시료 0.1 mL, 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 6.8) 1.8 mL, mushroom tyrosinase 0.1 mL (125 units) 및 2.5 mM L-DOPA 1 mL등 총 4.5 mL의 반응액을 10초간 진탕 후 25oC 에서 10분간 배양한 후 475 nm에서 측정하였다.
분획물 억제활성 (%)
3종류의 혼합분획1) 40.19
1)분획 1, 분획 2 및 분획 3의 혼합물
본 실험에서는 아므르 불가사리로부터 고성능 액체크로마토그래피에 의해 최종 분리·정제한 분획물은 미백효과가 우수하였다. 올리브오일에서의 미백효과나 Aloesin의 미백효과와 비교하여 볼 적에 본 실험의 결과는 매우 우수하여 미백의 기능성 효과를 충분히 응용할 수 있다고 생각되었다.
실시예 3 : 본 발명에서 아므르 불가사리 시료의 용매순차추출 후 얻은 잔사의 유기산 합성
상기 실시예 1에서 용매순차추출 후 상등액과 잔사를 분리한 다음, 얻은 잔사를 열풍 건조한 아므르 불사사리의 잔사는 탄산칼슘(CaCO3)가 대부분이다. 따라서 탄산칼슘(CaCO3)을 상업용 회화로 (1,200℃)에서 10시간 회화한 후, 탄산칼슘(CaO)로 전환시켰다. 다음으로 산화칼슘(CaO)에 유기산을 반응시킬 목적으로 미백효과가 좋은 젖산을 선정하였다. 즉, 아므르 불가사리는 칼슘/젖산의 몰비를 0.67로하여 12시간 교반하여 열풍건조기 (100℃)에서 24시간 건조하여 100 메쉬로 분쇄하였다. 이 분말을 물에 분산시켜 pH를 측정한 결과 pH 5.5-5.6의 범위였다. 즉, 건강한 사람의 피부 (pH 5.5 범위)와 비슷한 pH 범위를 유지하고 있었다. 이러한 결과를 보면 아므르 불가사리 잔사는 머드팩용 화장품의 기본 소재로 활용될 가치가 있다고 판단되었다.
실시예 4 : 실시예 2 및 실시예 3에서 규명된 생리활성물질과 유기산 합성한 아므르 불가사리잔사로 기능성 화장품(스킨, 팩, 로션) 제조 후 항균활성, 항산화활성, 미백효과 검정
상기 실시예 2 및 3에서 규명된 생리활성물질과 유기산 합성한 아므르 불가사리잔사로 기능성 화장품(스킨, 팩, 로션)을 제조하였다. 젖산반응 처리한 불가사리 잔사는 머드팩으로 개발하고자 기본조성물은 분말상 필 오프타입(2003)에 준하여 제조하였는데, 이때 전체 조성물의 30%를 차지하는 카올린(kaolin)의 일부를 본 실험에서는 젖산 처리된 불가사리 분말로 15% 대체하여 분석 실험하였다. 다음으로 불가사리에서 추출한 기능성물질을 첨가하는 경우에는 추가로 0.2%을 첨가하여 제조하였다. 응용시는 물에 용해하여 알긴산나트륨으로 겔화시켜, 피막을 형성하게끔 하였다(표 5).
스킨화장품에서는 시판용 스킨 베이스를 구입하여 제조하였는데 그 조성비는 (표 6)와 같다. 여기서 스킨화장품에서는 아므르 불가사리로부터 추출 및 분획한 기능성물질들을 0.1 및 0.2% (w/w)를 각각 첨가하여 기능성 효과를 실험하였다.
로션화장품의 경우(표 7)는 스킨화장품에서와 마찬가지로 아므르 불가사리로부터 추출 및 분획한 기능성물질들을 0.2% (w/w)를 각각 첨가하여 기능성 효과를 실험하였다.
스킨 베이스 조성
종류 함량(%)
카올린(kaloin) 30
탈크(talc) 20
소듐 알지네이트(sodium alginate) 10
칼슘 설페이트(calcium sulfate) 35
소듐 카로보네이트(sodium carbonate) 5
로션 베이스 조성
종류 함량(%)
1,3-부틸렌 글라이콜(1,3-butylene Glycol) 6
에탄올(ethanol) 10
올레일알콜(oleylalcohol) 0.1
글리세린(glycerin) 4
POE(20) 솔비탄 모노라우레이트[POE(20) sorbitan Monolaurate] 0.5
POE(15) 라우릴 알코올 에테르[POE(15) lauryl alcohol ether] 0.5
프래그런스(Fragrance) 미량
증류수(D.W) 78.9
팩 베이스 조성
종류 함량(%)
세틸 알코올(cetyl alcohol) 1
밀납(bees wax) 0.5
바세린(vaselin) 2
스쿠알렌(squalene) 3
다이메틸 폴리실록산(dimethyl polysiloxane) 2
글리세롤 모노스테아릭산 에스터(glycerol monosteraric acid ester) 2
1,3-부틸렌 글라이콜(1,3-butylene glycol) 4
카르보메르(carbomer) 0.3
트리에탄올라민(triethanolamine) 0.3
부틸렌 파라벤, 프로필 파라벤(butyl paraben, propyl paraben) 0.5
에탄올(ethanol) 5
증류수(D.W) 79.4
미백효과는 Chen 및 Kubo의 방법 (2002)을 변형한 Tyrosinase inhibitory activity를 측정하였다.
실험예 1 : 항균활성 검정
항균활성은 여드름균과 백선균을 포함한 6종의 균을 대상으로 한 paper disk법으로 측정하였다.
스킨
제품3) 투명환 (mm)1)
그램양성균 곰팡이
P.acnes E.floccosum M.audouinii T.ferrugineum T.mentagrophytes T.rubrum
대조군 -2) - - - - -
실험군 1 9 - - - - -
실험군 2 9.5 - - - - -
1)페이퍼디스크법에 따라 검출됨. 2)- : 미검출. 3)대조군 : 스킨 베이스, 실험군 1 : 스킨 베이스 + 0.1% 분획물, 실험군 2 : 스킨 베이스 + 0.2% 분획물.
로션
제품3) 투명환 (mm)1)
그램양성균 곰팡이
P.acnes E.floccosum M.audouinii T.ferrugineum T.mentagrophytes T.rubrum
대조군 -2) - - - - -
실험군 8.5 - - - - -
1)페이퍼디스크법에 따라 검출됨. 2)- : 미검출. 3)대조군 : 로션 베이스, 실험군 : 로션 베이스 + 0.2% 분획물.
팩
제품3) 투명환 (mm)1)
그램양성균 곰팡이
P.acnes E.floccosum M.audouinii T.ferrugineum T.mentagrophytes T.rubrum
대조군 -2) - - - - -
실험군 1 8.5 - - - - -
실험군 2 9.5 - - - - -
1)페이퍼디스크법에 따라 검출됨. 2)- : 미검출. 3)대조군 : 팩 베이스, 실험군 1 : 30g 카오린, 실험군 1 : 15g 카오린 + 15g 유기산합성 잔사, 실험군 2 : 15g 카오린 + 15g 유기산합성 잔사 + 0.2% 분획물.
표 8, 9 및 10에 나타난 바와 같이 여드름균에서는 아므르 불가사리 추출물과 젖산 처리된 잔사를 첨가한 스킨, 로션 및 팩에서 모두 항균 효과가 나타났다. 팩이나 로션에 비해 스킨에서 더 높은 항균효과를 나타내었다. 그러나 5종의 백선균에서는 모두 항균효과를 나타나지 않았다. 이러한 결과는 항균성실험에서 첨가되는 기본농도가 1,000μg인데 반해 제품에서의 실험에서는 1/50로 희석되었기 때문인 것으로 나타났다.
실험예 2 : 항산화활성 검정
항산화 시험은 Blios의 방법 (1958)에 준하여 DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl, Aldrich Co., USA) 활성을 측정하였다.
스킨
제품1) 대조군 실험군 1 실험군 2
항산화성(%) 45.14 68.55 78.32
1)대조군 : 스킨 베이스, 실험군 1 : 스킨 베이스 + 0.1% 혼합분획물, 실험군 2 : 스킨 베이스 + 0.2% 혼합분획물.
로션
제품1) 대조군 실험군
항산화성(%) -2) 16.70
1)대조군 : 로션 베이스, 실험군 : 로션 베이스 + 0.2% 분획물. 2)- : 미검출.
팩
제품1) 대조군 실험군 1 실험군 2
항산화성(%) -2) - 2.12
1)대조군 : 팩 베이스, 실험군 1 : 30g 카오린, 실험군 1 : 15g 카오린 + 15g 유기산합성 잔사, 실험군 2 : 15g 카오린 + 15g 유기산합성 잔사 + 0.2% 분획물. 2)- : 미검출.
표 11, 12 및 13에 나타나 바와 같이, 아므르 불가사리로부터 기능성물질의 추출물과 젖산 처리된 잔사를 첨가한 스킨, 로션 전반적으로 스킨이 로션이나 팩등에 비해 매우 높은 항산화 활성을 나타내었다. 스킨, 로션 및 팩에서 불가사리 추출물 첨가시에 모두 항산화 효과가 나타났다. 팩에서는 젖산 처리된 불가사리 잔사만을 첨가한 경우에느 항산화 효과가 나타나지 않았으나 잔사와 추출물 동시에 첨가한 경우에는 항산화 효과가 나타났다. 이는 본 실험에서 얻어진 추출물에 의한 항산화 효과가 우수함을 알 수 있었다.
료션과 팩에서의 기초조성물에서는 모두 항산화 효과가 나타나지 않았으나 스킨에서는 항산화 효과가 나타나 것으로 보아 스킨 기초조성물에서 기인된 것으로 사료된다. 따라서 아므르 불가사리 추출물은 우수한 기능성 화장품 소재로서의 가능성을 나타내었다.
실험예 3 : 미백효과 검정
스킨
제품1) 대조군 실험군 1 실험군 2
억제활성(%) -2) 1.13 4.43
1)대조군 : 스킨 베이스, 실험군 1 : 스킨 베이스 + 0.1% 혼합분획물, 실험군 2 : 스킨 베이스 + 0.2% 분획물. 2)- : 미검출.
로션
제품1) 대조군 실험군
억제활성(%) -2) 24.80
1)대조군 : 로션 베이스, 실험군 : 로션 베이스 + 0.2% 분획물. 2)- : 미검출.
팩
제품1) 대조군 실험군 1 실험군 2
억제활성(%) -2) 19.67 27.00
1)대조군 : 팩 베이스, 실험군 1 : 30g 카오린, 실험군 1 : 15g 카오린 + 15g 유기산합성 잔사, 실험군 2 : 15g 카오린 + 15g 유기산합성 잔사 + 0.2% 분획 물. 2)- : 미검출.
표 14, 15 및 16에서 나타난 바와 같이, 아므르 불가사리로부터 기능성물질의 추출물과 젖산 처리된 잔사를 첨가한 스킨, 로션 및 팩의 미백 효과를 측정한 결과 기초조성물을 제외한 불가사리 추출물과 젖산 처리된 잔사를 첨가한 스킨(∼4.43%), 로션(∼24.80%), 팩(∼27.00%) 모두에서 미백효과가 나타났다. 스킨에서 각 추출물의 첨가량에 따라 미백 효과는 증가하는 경향을 보였고, 스킨에 비해 로션과 팩에서는 높게 나타났다. 젖산 처리된 아므르 불가사리 잔사만을 첨가한 경우에도 미백 효과가 나타나 잔사에 처리한 젖산의 미백효과를 확인할 수 있었다. 그리고 젖산 처리한 잔사에다가 추출물을 함께 첨가한 경우도 상승효과를 얻을 수 있었다. 따라서 본 실험을 통하여 제조된 화장품 소재류 즉, 스킨, 팩 및 로션은 여드름 균에 대해 항균효과가 우수하고, 미백 및 항산화성이 있는 것으로 밝혀져, 기존 상업적으로 제조되어 나오는 제품에 비하여 생리 기능성면에서 매우 우수하였다.
상기 실시예 및 실험예를 통해 살펴본 바와 같이, 본 발명은 바실러스 아밀로리쿼페이션스( Bacillus amyloliquefaciens ), 바실러스 리케니포미스( Bacillus licheniformis) 균으로부터 추출된 식품가수분해용 단백질분해효소 처리에 의한 아므르 불가사리 유래의 항균활성, 항산화활성, 피부 미백효과를 가지는 기능성 화장품용 조성물에 관한 것으로, 본 발명은 아므르 불가사리에 단백질분해효소를 처리하여 항균활성, 항산화활성, 피부의 미백효과가 있는 신규한 기능성 화장품용 조성물을 제공하는 뛰어난 효과가 있다. 따라서, 본 발명은 아므르 불가사리 유래의 항균활성물질, 항산화활성물질, 피부 미백효능이 있는 물질을 유효성분으로 하는 우수한 기능성 화장품을 제조할 수 있어 기능성제품제조산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

Claims (4)

  1. 아므르 불가사리(Asteriasamurensis) 추출물을 유효성분으로 함유함을 특징으로 하는 피부미백용 화장품 조성물
  2. 제 1항에 있어서, 상기 아므르 불가사리 추출물은 아므르 불가사리에 3배(v/w)의 증류수를 첨가하고 바실러스 아밀로리쿼페이션스(Bacillus amyloliquefaciens ), 바실러스 리케니포미스( Bacillus licheniformis ) 균으로부터 추출된 식품가수분해용 단백질분해효소를 첨가하여 50℃에서 3∼5시간 동안 교반한 후 원심분리하여 상등액과 잔사를 분리한 다음, 분리된 잔사에 3배(v/w)의 메탄올을 첨가하여 4℃에서 5∼6시간 동안 교반한 후, 진공여과하여 상등액과 잔사를 분리한 다음, 분리된 잔사에 3배(v/w)의 아세톤을 첨가하여 4℃에서 5∼6시간 동안 교반한 후, 진공여과하여 상등액과 잔사를 분리함으로써 상등액을 회수하여 얻음을 특징으로 하는 피부미백용 화장품 조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 상등액을 5:5(v/v) 및 3:7(v/v)의 CH3Cl3 : MeOH 용매계로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(200 메쉬)를 수행하여 분리·정제한 다음, 분리한 분획물을 9:1의 비율로 혼합된 CH3Cl3 : MeOH 용매계로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(400 메쉬)를 수행하여 분리·정제한 다음, 분리한 분획물(4번 분획)을 80:20(v/v)의 아세토나이트릴:물 용매계(유속 4 mL/min)로 고성능 액체크로마토그래피를 통해 수행하여 얻은 분획물(5∼6분 분획)임을 특징으로 하는 피부미백용 화장품 조성물.
  4. 제 2항에 있어서, 상기 잔사를 1,200℃에서 10시간 회화 후 0.67의 칼슘/젖산 몰비로 유기산(젖산) 합성하여 100℃에서 24시간 열풍건조하여 100 메쉬로 분쇄하여 얻은 분획물임을 특징으로 하는 피부미백용 화장품 조성물.
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