KR100602813B1

KR100602813B1 - 석창포 추출물을 포함하는 피부노화방지 조성물

Info

Publication number: KR100602813B1
Application number: KR1020030099478A
Authority: KR
Inventors: 김종광; 김주호; 신병모; 이원록
Original assignee: 코스맥스 주식회사
Priority date: 2003-12-30
Filing date: 2003-12-30
Publication date: 2006-07-19
Also published as: KR20050068283A

Abstract

본 발명은 석창포 (Acorus gramineus Solander)를 비극성 용매로 초임계 추출하여 얻어지는 석창포 친유성 추출물을 포함하는 피부노화방지 조성물를 제공한다. 또한, 본 발명은 석창포 (Acorus gramineus Solander)를 비극성 용매와 수용성 공용매를 사용하여 초임계 추출하여 얻어지는 석창포 친수성 추출물을 포함하는 피부노화방지 조성물을 제공한다.

석창포, 초임계 추출법, 항염증, 항산화

Description

석창포 추출물을 포함하는 피부노화방지 조성물{A composition against skin aging comprising an acorus gramineus Solander extract}

도 1은 본 발명의 석창포 친수성 추출물의 항염증 효과를 나타내는 도면이다.

도 2는 본 발명의 석창포 친유성 추출물의 항산화 효과를 나타내는 도면이다.

도 3은 본 발명의 석창포 친유성 추출물의 추출과정을 나타내는 흐름도이다.

도 4는 본 발명의 석창포 친수성 추출물의 추출과정을 나타내는 흐름도이다.

도 5는 본 발명의 석창포 친수성 추출물의 세포 독성 효과를 나타내는 도면이다.

도 6은 본 발명의 석창포 친유성 추출물의 세포 독성 효과를 나타내는 도면이다.

본 발명은 석창포 친유성 또는 친수성 추출물을 포함하는 피부노화방지 조성물에 관한 것이다.

피부 노화는 여러 가지 원인에 의하여 발생하는 것으로 알려져 있다. 알려진 피부 노화 원인의 예로는 자외선, 건조한 공기, 및 유해한 물질과의 접촉이 포함된다. 상기 유래한 물질에는 피부에 자극성인 다양한 화합물이 포함되며, 예를 들면, 세균, 활성 산소와 같은 자유 라디칼 화합물, 세제, 꽃가루 및 기타 여러 화학물질이 포함된다. 특히, 자유 라디칼 화합물은 인체 내에서 산화환원 반응과 같은 대사 반응의 부산물로서 발생하며, 반응성이 아주 강하기 때문에 세포나 조직에 치명적인 해를 끼치는 것으로 알려져 있다. 인체에 유해한 자유 라디칼 화합물의 예로는, 수퍼옥사이드 음이온를 포함한 활성 산소종이 포함된다. 수퍼옥사이드 음이온은 시토크롬 c (cytochrome c)와 크산틴 옥시다제 (xanthine oxidase)에 의한 반응에 의하여 부산물로써 생성될 수 있다.

상기와 같은 활성 산소종은 그 자체로서 뿐 아니라, 인체 조직에 염증을 유발하고, 이 염증에 의하여 유발되는 조직 손상에 의하여 주름 등을 형성하여 노화를 촉진하는 것으로 알려져 있다. 또한, 이러한 활성 산소종을 중화하는 방법에 대한 다양한 연구가 수행된 바 있다. 이러한 연구에 의하여 항산화 효과가 있는 것으로 알려진 물질의 예에는 토코페롤, 폴리페놀류, 보조효소(coenzyme) Q10, BHT 및 BHA가 포함된다. 또한 녹차, 상백피 및 황금과 같은 다양한 식물 종에는 피부 보호 효과가 우수한 폴리페놀류가 다양하게 함유되어 있으며, 이들의 추출물이 화장품에 폭 넓게 사용되고 있다. 그러나, 상기와 같은 종래 기술에 의하더라도 항산화 또는 항염증 효과를 갖는 물질에 대한 연구의 필요성은 여전히 남아 있다.

석창포 (Acorus gramineus Solander)는 천남성과에 속하는 다년초로서 대한 민국에서는 중부와 남부에서 자생한다. 한국특허공개 제2003-0061847호에는 석창포 생약 벌크에 100 % 메탄올을 첨가하여 실온에서 1 주일 동안 추출하여 얻어지는 석창포 추출물이 개시되어 있다. 이러한 석창포 추출물은 세포독성이 낮고, 멜라닌 생성억제 효과 및 활성산소를 감소시키는 효과가 있는 것으로 개시되어 있다.

그러나, 이 석창포 추출물은 100 % 메탄올만을 추출용매로 사용하였기 때문에, 친수성 물질만을 포함하며, 메탄올은 인체에 유해하여 최종 추출물로부터 완전하게 제거하여야 한다는 문제점이 있었다.

본 발명자들은 인체에 유해하지 않은 이산화탄소를 주용매로하여 초임계 추출법에 의하여 석창포로부터 피부노화방지에 유용한 물질을 탐색하던 중, 석창포 친유성 추출물과 친수성 추출물이 항염증 또는 항산화 효과가 있다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명의 목적은 항염증 또는 항산화 활성을 갖는, 석창포 친유성 추출물을 포함하는 피부노화방지 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 항염증 또는 항산화 활성을 갖는, 석창포 친수성 추출물을 포함하는 피부노화방지 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 석창포를 비극성 용매로 초임계 추출하여 얻어지는 석창포 친유성 추출물을 포함하는 피부노화방지 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 석창포는 줄기 또는 뿌리 부위인 것이 바람직하다.

본 발명의 일 구체예에 있어서, 초임계 추출법에 사용되는 상기 비극성 용매는 이산화탄소, 석유에테르, 에틸에테르, 및 시클로헥산 등이 포함될 수 있으나, 바람직하게는 이산화탄소이다.

본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 초임계 추출법은 비극성 용매와 함께 친유성 용매를 공용매로서 포함할 수 있다. 상기 공용매에는 스쿠알렌일 수 있다. 스쿠알렌은 5개의 이소프렌으로 구성된 C₃₀의 화합물로서, 스쿠알렌은 합성, 반합성 또는 동물 또는 식물체로부터 추출된 것일 수 있다. 예를 들면, 상어 간유로부터 추출된 스쿠알렌이거나, 올리브유로부터 추출된 피토스쿠알렌 (phytosqualene)일 수 있다. 이러한 친유성 공용매의 함량은 상기 비극성 용매에 대하여 10 %이내 인 것이 바람직하다.

본 발명의 일 구체예에서, 본 발명의 상기 석창포 친유성 추출물은 이산화탄소와 피토스쿠알렌을 용매로서 사용하고, 280 기압 내지 320 기압, 35 ℃ 내지 45 ℃에서 추출하는 단계를 포함하는 초임계 추출법에 의하여 추출된 것일 수 있다. 추출시간은 추출조건에 따라 적절하게 조정할 수 있으며, 바람직하게는 24 시간 내지 3일, 더욱 바람직하게는 36 시간 내지 72 시간이 될 수 있으나, 이들 예에 한정되는 것은 아니다.

이러한 본 발명의 석창포 친유성 추출물을 포함하는 조성물은, 항염증, 항산화 효과를 지니고 있어, 피부 노화를 방지할 수 있다. 따라서, 본 발명의 조성물은 피부노화 방지 효과를 갖는 화장품에 유용하나, 이러한 용도에 한정되는 것은 아니 다.

본 발명의 석창포 친유성 추출물은 그대로 사용해도 좋고, 또한 본 발명의 효과를 손상시키지 않는 범위에서 공지의 의학적으로 피부외용으로 허용된 기제 또는 첨가제와 배합될 수 있다. 예를 들면, 화장품 재료 성분으로 물, 알콜류, 유분, 계면활성제, 방부제, 향료, 색소, 보습제, 증점제, 수용성 고분자, 산화방지제, 킬레이트제, pH 조정제, 발포제, 비타민류, 아미노산류, 또는 항균제와 배합될 수 있다.

본 발명의 석창포 친유성 추출물의 함량은, 석창포 친유성 추출물의 특성을 그대로 발휘할 수 있는 범위이면, 특별히 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 조성물 전체에 대해서 0.01~10 %(w/v)의 양으로 함유되는 것일 수 있다.

본 발명의 상기 석창포 친유성 추출물을 포함하는 노화방지 조성물은 피부외용으로 사용할 수 있는 제형이면 어느 것이나 포함된다. 이들 제형에는 예를 들면, 영양로션, 영양크림, 맛사지크림, 영양에센스, 팩, 메이컵베이스, 파운데이션, 바디오일, 헤어오일, 샴프, 및 린스로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상이 포함되나, 이들 예에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 또한, 석창포를 비극성 용매와 수용성 공용매를 사용하여 초임계 추출하여 얻어지는 석창포 친수성 추출물을 포함하는 피부노화방지 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 수용성 공용매의 예에는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 1,3-프로판디올, 1,3-부틸렌 글리콜 및 이들의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상이 포함되나, 이들 예에 한정되는 것은 아니다. 바람직하게는, 상기 수용성 공용매는 1,3-부틸렌 글리콜과 에탄올의 혼합용액인 것이며, 더욱 바람직하게는 1,3-부틸렌 글리콜과 95% 에탄올의 혼합물 (100 : 5)이다. 추출시간은 추출조건에 따라 적절하게 조정할 수 있으며, 바람직하게는 24 시간 내지 3 일, 더욱 바람직하게는 36 시간 내지 72 시간이 될 수 있으나, 이들 예에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 석창포 친수성 추출물은 이산화탄소와 1,3-부틸렌 글리콜과 에탄올의 혼합용액을 용매로서 사용하고, 280 기압 내지 320 기압, 35 ℃ 내지 45 ℃에서 추출하는 단계를 포함하는 초임계 추출법에 의하여 추출된 것일 수 있다. 바람직하게는, 이산화탄소와 1,3-부틸렌 글리콜과 95 % 에탄올의 혼합 용액 (100 : 5)을 용매로서 사용하고, 280 기압 내지 320 기압, 35 ℃ 내지 45 ℃에서 36 시간 내지 72 시간 동안 추출하는 단계를 포함하는 초임계 추출법에 의하여 추출된 것이다. 공용매의 양은 바람직하게는, 이산화탄소에 대하여 10 % 이하, 더욱 바람직하게는 5 %이하인 것이 바람직하다.

이러한 본 발명의 석창포 친수성 추출물을 포함하는 조성물은, 항염증, 항산 화 효과를 지니고 있어, 피부 노화를 방지할 수 있다. 따라서, 본 발명의 조성물은 피부노화 방지 효과를 갖는 화장품에 유용하나, 이러한 용도에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 석창포 친수성 추출물은 그대로 사용해도 좋고, 또한 본 발명의 효과를 손상시키지 않는 범위에서 공지의 의학적으로 피부외용으로 허용된 기제 또는 첨가제와 배합될 수 있다. 예를 들면, 화장품 재료 성분으로 물, 알콜류, 유분, 계면활성제, 방부제, 향료, 색소, 보습제, 증점제, 수용성 고분자, 산화방지제, 킬레이트제, pH 조정제, 발포제, 비타민류, 아미노산류, 또는 항균제와 배합될 수 있다.

본 발명의 석창포 친수성 추출물의 함량은, 석창포 친수성 추출물의 특성을 그대로 발휘할 수 있는 범위이면, 특별히 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 조성물 전체에 대해서 0.01~10 %(w/v)의 양으로 함유되는 것일 수 있다.

본 발명의 상기 석창포 친수성 추출물을 포함하는 노화방지 조성물은 피부외용으로 사용할 수 있는 제형이면 어느 것이나 포함된다. 이들 제형에는 예를 들면, 화장수, 영양로션, 영양크림, 맛사지크림, 영양에센스, 팩, 메이컵베이스, 파운데이션, 바디오일, 헤어오일, 샴프, 및 린스로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상이 포함되나, 이들 예에 한정되는 것은 아니다.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예 에 한정되는 것은 아니다.

실시예

이하의 실시예에 사용되는 석창포는 우리나라 중부와 남부에서 자생하는 석창포의 줄기와 뿌리를 원료로 사용하였다.

실시예 1 : 석창포 친유성 추출물의 제조예 1

건조된 석창포 (Acorus gramineus Solander) 줄기와 뿌리 315 g을 분쇄하여 내부 용적 1.2 L의 초임계 추출조 (자체제작)에 투입하고 추출조를 밀봉하고, 고압용 기체펌프를 이용하여 추출조에 이산화탄소를 공급하여 압력을 높였다. 동시에 고압용 액체펌프를 이용하여 유용성 (oil soluble) 공용매인 피토스쿠알렌 (phytosqualane) 을 1.1 g/min 의 속도 (이산화탄소의 2.8 % 비율)로 이산화탄소 와 동시에 추출조에 투입하였다. 압력이 300 기압에 달하면 이산화탄소와 공용매의 공급을 중단하고, PID 온도제어기를 이용하여 추출조에 외부를 감싸고 있는 열선을 이용하여 추출조 내부의 온도를 0.5 ℃/min 속도로 40 ℃까지 승온시켰다. 승온으로 인한 추출조의 압력은 추출조의 출구에 부착된 압력조절기를 이용하여 이산화탄소를 일부 배출하여 압력을 300 기압으로 조절하고, 추출조의 온도와 압력을 40 ℃, 300 기압으로 50 분 동안 유지시켰다.

고압용 기체펌프를 재가동하여, 20 L/min의 유량으로 이산화탄소를 추출조에 연속적으로 공급하는 동시에 고압용 액체펌프를 재가동하여 피토스쿠알렌 (phytosqualane) (CRM International 사, 프랑스)을 1.1 g/min 속도 (이산화탄소의 2.8 중량% 비율)로 공급하였다. 동시에 출구 쪽에 부착된 압력조절기를 이용하여 추출물을 방출시키며, 추출조의 온도와 압력을 일정하게 유지시켰다. 압력조절기를 통하여 방출된 압력 및 온도 강하로 인하여 이산화탄소가 고체 드라이아이스로 전이되어 최종 출구 쪽의 튜브가 막히는 현상이 발생하므로, 이를 방지하기 위하여 압력조절기의 온도를 70 ℃로 유지하였다. 방출된 추출물은 상압으로 감압되어 이산화탄소는 대기로 방출되고, 석창포의 친유성 유효성분과 공용매를 함께 포집기 내로 회수하였다. 상기 과정을 2 시간 40분 동안 수행한 후 유용성 공용매 투입을 중단하고 추출 조업을 종료하였다. 추출에 소모된 피토스쿠알렌의 양은 177 g 이었다 (도 3 참조).

상기와 같이 얻어진 178 g의 조추출물을 3,000 rpm에서 40 분 동안 원심 분리한 다음, 수용액 층을 제거하여 본 발명의 석창포 친유성 추출물 164 g을 얻었다.

실시예 2 : 석창포 친유성 추출물의 제조예 2

건조된 석창포 (Acorus gramineus Solander) 뿌리와 줄기 378 g을 분쇄하여 내부 용적 1.2 L의 초임계 추출조에 투입하고, 실시예 1과 동일한 추출과정을 수행하여 석창포 친유성 추출물 197 g을 얻었다.

실시예 3 : 석창포 친수성 추출물의 제조예 1

건조된 석창포 (Acorus gramineus Solander) 뿌리와 줄기 200g을 분쇄하여 내부 용적 1.2 L의 초임계 추출조에 투입하고, 추출조를 밀봉하고, 고압용 기체펌프를 이용하여 추출조에 이산화탄소를 공급하여 압력을 높였다. 동시에 고압용 액체펌프를 이용하여 수용성 공용매인 1,3-부틸렌 글리콜과 95 % 에탄올의 혼합 용액 (1,3-부틸렌 글리콜 : 95% 에탄올 = 100 : 5)을 1.1 g/min 속도 (이산화탄소의 2.8 % 비율)로 이산화탄소와 동시에 추출조에 투입하였다. 압력이 300 기압에 달하면 이산화탄소와 공용매의 공급을 중단하고, PID 온도제어기를 이용하여 추출조에 외부를 감싸고 있는 열선을 이용하여 추출조 내부의 온도를 0.5 ℃/min 속도로 40 ℃까지 가온시켰다. 가온으로 인한 추출조의 압력은 추출조의 출구에 부착된 압력조절기를 이용하여 이산화탄소를 일부 배출하여 압력을 300 기압으로 조절하고, 추출조의 온도와 압력을 40 ℃, 300 기압으로 50 분 동안 유지시켰다.

고압용 기체펌프를 재가동하여 20 L/min의 유량으로 이산화탄소를 추출조에 연속적으로 공급하는 동시에 고압용 액체펌프를 재가동하여 1,3-부틸렌 글리콜과 95 % 에탄올의 혼합 용액 (1,3-부틸렌 글리콜 : 95% 에탄올 = 100 : 5)을 1.1 g/min 속도로 공급하였다. 동시에 출구 쪽에 부착된 압력조절기를 이용하여 추출물을 방출시키며 추출조의 온도와 압력을 일정하게 유지시켰다. 압력조절기를 통하여 방출된 압력 및 온도강하로 인하여 이산화탄소가 고체 드라이아이스로 전이되어 최종 출구쪽의 튜브가 막히는 현상이 발생하므로, 이를 방지하기 위하여 압력조절기의 온도를 70 ℃로 유지하였다. 방출된 추출물은 상압으로 감압 되어 이산화탄소는 대기로 방출되고, 석창포 뿌리와 줄기의 수용성 유효성분과 공용매를 함께 포집기 내로 회수하였다. 상기 과정을 6 시간 동안 수행한 후 수용성 공용매 투입을 중단 하고 추출조업을 종료하였다 (도 4 참조).

상기와 같이 얻어진 조추출물을 3,000 rpm에서 30 분 동안 원심분리한 다음, 상층의 유층을 제거하여 석창포 친수성 추출물 321 g을 얻었다.

실시예 4 : 석창포 친수성 추출물의 제조예 2

건조된 석창포 (Acorus gramineus Solander) 뿌리와 줄기 232 g을 분쇄하여 내부 용적 1.2 L의 초임계 추출조에 투입하고, 실시예 3과 동일한 추출과정을 수행하여 석창포 친수성 추출물 368 g을 얻었다.

실시예 5 : 석창포 친수성 추출물의 인터루킨-8 생산 억제능 시험

실시예 4에서 얻어진 석창포 친수성 추출물이 항염증 효과를 갖는지를 측정하였다. 일반적으로 인간 급성 모노사이트성 백혈병 (acute monocytic leukemia) 세포주인 THP-1 세포 (ATCC Cat. No. TIB-202)는 외부 자극물질인 리포폴리사카라이드 (lipopolysaccharide)(LPS)에 의해 자극되면, 호염증성 사이토카인으로 알려진 인터루킨-8을 세포 밖으로 분비한다. IL-8은 염증을 유발하는 사이토카인으로 알려져 있어, THP-1 세포에 의한 IL-8 생산 증감 여부를 통해 항염증 효과 여부를 판단할 수 있다.

(1) 항염증 효과 실험 과정

실험 과정은 다음과 같았다.

(1) THP-1 세포를 96 웰 플레이트의 각 웰 당 2 x 10⁵ 의 세포를 각각 분주 한 다음, 10 % FBS가 보충된 RPMI 1640 배지에서 1일 동안 배양하였다.

(2) THP-1 세포의 자극물질인 LPS를 세포에 처리하고, 10 % FBS가 보충된 RPMI 1640 배지에서 배양하여 세포를 활성화시켰다.

(3) THP-1 세포를 LPS로 처리한 웰에, 시험물질을 각 농도별로 세포에 처리한 후 16시간 배양하였다.

(4) 세포를 원심분리로 침전시킨 후, 상층액을 모았다.

(5) 수집된 각 상층액을 96 웰에 100 μl 씩 분주하였다. 여기에, 희석된 바이오티닐화된 검출 항체를 50 ml 씩 투여한 후, 상온에서 1 시간동안 배양하였다.

(6) 각 웰을 PBS로 3 회 세척한 후, 다시 스트렙타비딘-HRP 100μl를 분주하였다.

(7) 30 분 동안 상온에 배양한 다음, PBS로 3 회 세척하였다.

(8) 각 웰에 TMB 용액을 100μl 씩 첨가 후, 상온에서 약 2 분 내지 15 분 빛이 들지 않는 곳에 방치하였다.

(9) 황산용액 100μl를 각 웰에 첨가한 후, A₄₅₀nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과 측정된 흡광도를 이용하여 인터루킨-8의 증감을 계산하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에 나타낸 바와 같이, 석창포 친수성 추출물을 세포에 처리하였을 경우, 0.1 % 농도에선 IL-8 생산량이 감소되지 않았지만, 1.0 %와 4.0 %의 시료를 처리한 결과 THP-1 세포에 의한 IL-8 생산이 크게 억제되었다. 이 러한 결과는 석창포 친수성 추출물에 의해 IL-8 생산이 감소됨을 확인하여 항염증 효과가 있음을 알 수 있었다.

(2) 세포 독성 실험

석창포 친수성 추출물이 세포에 독성이 없으며, 위에서 관찰된 항염증 효과가 세포 독성에 의하여 유도되는 것이 아니라는 것을 확인하기 위하여, MTT [테트라졸리움 염 : 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐 테트라졸리움 브로마이드] 분석을 수행하였다.

MTT 분석은 불멸화된 인간 케라티노사이트 (kerationcyte)인 HaCaT 세포주를 사용하고, ATCC MTT 세포 증식 분석 키트 (Cat. No. 30-1010K)를 이용하였다.

HaCaT 세포주를 각 웰당 10⁵ 세포/ml로 96 웰 플레이트에 첨가하고, 24 시간 동안 배양하였다. 다음으로, MTT 시약 10 ㎕를 가한 후 4 시간 동안 배양한 다음, ELISA 리더를 사용하여 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 측정 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에 나타낸 바와 같이, IL-8 생산 억제 효과가 나타나는 1.0 %와 4.0 %에서 전혀 세포독성을 보이지 않았다. 따라서, 석창포 친수성 추출물의 항염증 효과는 세포독성에 의한 것이 아니라는 것이 확인되었다. 또한, 본 발명의 석창포 친수성 추출물은 세포독성이 전혀 없어 피부에 안전하게 사용될 수 있다.

실시예 6 : 석창포 친유성 추출물의 항산화 효과 시험

실시예 1에 따라 추출된 석창포 친유성 추출물의 항산화 효과를 DPPH 법으로 라디칼 제거 활성 (radical scavenging activity : RSA)을 측정하여 시험하였다. 1,1-디페닐-2-피크릴히드라질(DPPH) (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)은 색을 띠고 있는 라디칼 화합물로서 시료 중 특정 물질이 라디칼 제거 활성 (RSA)을 가지고 있는 경우, 잔존 발색량을 측정함으로써 그 존재 여부를 확인할 수 있다.

구체적인 측정 과정은 다음과 같았다.

(1) 적당량의 석창포 친유성 추출물을 용매에 녹였다. 블랑크 (blank) 실험군으로서 동일 부피의 용매를 사용하였고, 대조군은 석창포 친유성 추출물을 포함하지 않은 용매 (음성 대조군) 또는 DPPH 용액 (양성 대조군)을 사용하였다.

(2) 이 석창포 친유성 추출물 용액 100 ㎕에 200 μM DPPH 900 ㎕를 첨가하여 혼합한 다음, 상온에서 30 분 동안 배양하였다.

(3) 30 분 동안 반응시킨 다음, 517 nm에서의 흡광도 측정을 측정하여, 잔존 DPPH의 양을 계산하였다.

그 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2는 석창포 친유성 추출물을 양을 달리하여 포함하는 용액에 대하여 얻어지는 흡광도를 양성 대조군의 흡광도와 비교하여 낮아진 비율로서 나타내었다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 석창포 친유성 추출물의 첨가 양에 따라 DPPH 제거 효과는 선형적으로 비례하여 증가하였다. 13.30 % 석창포 친유성 추출물과의 30 분 동안의 반응에 의하여 DPPH를 약 90 % 이상 제거할 수 있어, 강력한 항산화 활성을 가지고 있음을 알 수 있었다.

실시예 7 : SOD (superoxide dismutase)를 이용한 항산화 효과 시험

실시예 2에 따라 제조된 석창포 친유성 추출물에 대해 니트로블루테트라졸륨 (nitroblue tetrazolium) (NBT) 환원법을 원리로 하는 SOD 테스트와코 (와코퓨어케미컬)를 사용하여 96 웰 플레이트에서 측정하였다.

0.24 M의 NBT와 0.4 M 크산틴 (xanthine)을 함유하는 발색시약 95μl에 석창포 친유성 추출물을 포함하는 검체 10μl을 첨가하고, 크산틴옥시다제 (xanthine oxidase) 효소액 95μl을 더 첨가하고, 37℃, 30 분 동안 배양하였다. 그 후, 반응정지액 (69 mM 소듐도데실설페이트) 100μl로 효소반응을 정지시키고, 마이크로플레이트 리더 EL-340 (BIO-TEK INSTRUMENT)로 OD₅₆₂ nm을 측정하였다. 효소 대신에 정제수를 가한 샘플을 바탕 값 (blank)으로 하고, 대조군은 석창포 친유성 추출물 대신에 용매를 사용하였다.

얻어진 흡광도 결과로부터, 수퍼옥사이드 (superoxide) 음이온 (O₂ ^-)의 제거율을 다음과 같은 식에 의하여 계산하였다.

O₂ ^- 제거율 (%) = (A-B)/A×100 (A: 대조군의 흡광도, B: 실험군의 흡광도)

그 결과 석창포 친유성 추출물의 농도가 0.2 % 일 때, 수퍼옥사이드 음이온 제거율이 57%로 나타나, 석창포 친유성 추출물이 활성산소 제거에 효과가 있는 것으로 나타났다.

실시예 8 : 석창포 친유성 추물물의 세포 독성 시험

석창포 친유성 추출물이 세포에 독성이 없으며, 위에서 관찰된 항염증 효과가 세포 독성에 의하여 유도되는 것이 아니라는 것을 확인하기 위하여, MTT [테트라졸리움 염 : 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐 테트라졸리움 브로마이드] 분석을 수행하였다.

MTT 분석은 불멸화된 인간 케라티노사이트 (keratinocyte)인 HaCaT 세포주를 사용하고, ATCC MTT 세포 증식 분석 키트 (Cat. No. 30-1010K)를 이용하였다.

HaCaT 세포주를 각 웰당 10⁴ 세포/ml로 96 웰 플레이트에 첨가하고, 24 시간 동안 배양하였다. 다음으로, MTT 시약 10 ㎕를 가한 후 4 시간 동안 배양한 다음, ELISA 리더를 사용하여 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 측정 결과를 도 6에 나타내었다. 도 6에 나타낸 바와 같이, IL-8 생산 억제 효과가 나타나는 1.0 %와 4.0 %에서 전혀 세포독성을 보이지 않았다. 따라서, 석창포 친유성 추출물의 항염증 효과는 세포독성에 의한 것이 아니라는 것이 확인되었다. 또한, 본 발명의 석창포 친유성 추출물은 세포독성이 전혀 없어 피부에 안전하게 사용될 수 있다.

이상과 같은 실시예의 결과로부터, 본 발명의 석창포 친유성 추출물은 항산화 효과를 가지고 있으며, 석창포 친수성 추출물은 항염증 효과를 가지고 있음을 알 수 있었다. 이러한 본 발명의 석창포 추출물은 초임계 추출법에 의하여 추출되었기 때문에, 빠른 시간내에 저온에서 추출될 수 있으며, 인체에 무해한 용매를 사용할 수 있어 예를 들면, 화장품과 같은 피부 노화방지의 용도에 유용하다.

본 발명의 석창포 친유성 추출물에 의하면, 항산화 효과가 우수하여 피부노화 방지 조성물로서 사용될 수 있다.

본 발명의 석창포 친수성 추출물에 의하면, 항염증 효과가 우수하여 피부노화 방지 조성물로서 사용될 수 있다.

Claims

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석창포 (Acorus gramineus Solander)를 이산화탄소와 수용성 공용매를 사용하여 초임계 추출하여 얻어지는 석창포 친수성 추출물을 포함하는 항염증 효과를 갖는 화장료 조성물.
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제5항에 있어서, 상기 수용성 공용매는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 1,3-프로판디올, 1,3-부틸렌 글리콜 및 이들의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 항염증 효과를 갖는 화장료 조성물.
제5항에 있어서, 상기 수용성 공용매는 1,3-부틸렌 글리콜과 에탄올의 혼합물인 것을 특징으로 하는, 항염증 효과를 갖는 화장료 조성물.
제5항에 있어서, 상기 석창포 친수성 추출물은 이산화탄소와 1,3-부틸렌 글리콜과 에탄올의 혼합용액을 용매로서 사용하고, 280 기압 내지 320 기압, 35 ℃ 내지 45 ℃에서 추출하는 단계를 포함하는 초임계 추출법에 의하여 추출된 것을 특징으로 하는 항염증 효과를 갖는 화장료 조성물.
제5항 및 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 화장수, 영양로션, 영양크림, 맛사지크림, 영양에센스, 팩, 메이컵베이스, 파운데이션, 바디오일, 헤어오일, 샴프, 린스로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 항염증 효과를 갖는 화장료 조성물.