KR100596670B1 - 아토피성 피부염 치료 개선을 위한 목초액 추출구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분 함유 조성물

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Abstract

Description

Claims

KR100596670B1

Publication number: KR100596670B1
Application number: KR1020040089764A
Authority: KR
Inventors: 성 호 왕; 진 수 권
Original assignee: 오키내추럴(주)
Priority date: 2003-11-07
Filing date: 2004-11-05
Publication date: 2006-11-03
Also published as: KR20050044281A

본 발명은 목초액에서 추출한 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분을 함유하는 아토피성 피부염 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 안전할 뿐만 아니라, 아토피성 피부염 치료 개선 효과가 매우 뛰어난 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 약제 또는 건강기능식품의 원료로 유용하게 사용될 수 있다.

구아이알콜계 성분, 시링콜계 성분, 목초액, 아토피성 피부염

아토피성 피부염 치료 개선을 위한 목초액 추출 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분 함유 조성물{Composition containing guaiacol derivatives and syringol derivatives extracted from natural plant vinegar for improving treatment of atopy dermatitis}

도 1은 목초액에서 추출한 구아이알콜계 성분의 예를 나타내는 도이다.

도 2는 목초액에서 추출한 시링콜계 성분의 예를 나타내는 도이다.

도 3a는 효과평가 실험에서 부형제를 투여한 음성대조군의 육안적 관찰결과이다.

도 3b는 효과평가 실험에서 타크로리무스 연고를 투여한 양성대조군의 육안적 관찰결과이다.

도 3c는 효과평가 실험에서 본 발명의 조성물을 투여한 시험군의 육안적 관찰결과이다.

도 4a는 NC/Nga 마우스를 이용한 효과평가 실험에서 부형제를 투여한 음성대조군의 현미경 관찰결과이다.

도 4b는 NC/Nga 마우스를 이용한 효과평가 실험에서 타크로리무스 연고를 투여한 양성대조군의 현미경 관찰결과이다.

도 4c는 NC/Nga 마우스를 이용한 효과평가 실험에서 본 발명의 조성물을 투 여한 시험군의 현미경 관찰결과이다.

본 발명은 목초액에서 추출된 성분을 함유하는 아토피성 피부염 치료용 조성물에 관한 것이다.

아토피성 피부염이 알레르기질환의 일종이라는 것은 잘 알려져 있다. 사람의 체내에 '항원(알레르겐)'이 침입하면 그 이물을 퇴치하는 '항체'라고 하는 물질이 몸속에 생기고, 항체가 '항원'과 반응하여 무해한 물질로 바꾸려고 한다. 이것을 '면역반응'이라고 하는데, 사람에 따라서는 면역 반응이 지나치게 강해 몸에 유해한 형태로 나타나는 것이 '알레르기'이다. 아토피성 피부염은 두드러기, 알레르기성 비염, 기관지 천식 등과 함께 알레르기 질환의 대표적인 질환 중에 하나이다. 얼굴, 팔, 다리 등을 중심으로 심한 가려움을 수반하는 반점상의 습진이 생겨 피부가 빨갛게 부어오른다. 긁으면 세균이 침입하여 종기가 생기고 곪는 등 적절한 관리를 하지 않으면, 1-2주 간격으로 반복적으로 악화된다.

아토피성 피부염의 병리학적 검사상 각각의 소견은 병변의 단계에 따라 다르지만 대체로 만성이 되면 표피가 두꺼워지고 여러 가지 면역 반응에 관여하는 세포의 침윤이 관찰된다. 특히 면역 반응의 제일선을 담당하는 랑게르한스 세포가 증가되어 있으며, 비정상적으로 증가된 항원제시 능력을 가진다. 비만세포는 수가 증가되어 있고, 탈과립 상태를 나타낸다. 아토피성 피부염 환자의 80-90％에서 혈청 IgE가 증가되어 있고, 알레르기성 비염이나 천식이 동반되어 있는 경우에 특히 혈청 IgE가 높다.

아토피성 피부염의 증상을 억제하는 치료약으로 스테로이드제가 있는데, 이것은 부신에서 분비되는 호르몬으로 염증이나 알레르기 반응을 억제하는 작용이 있고, 류마티스에 효과가 있으며, 장기 이식의 거부반응을 억제하는 면역억제제로서도 자주 사용되고 있다. 그러나 부작용이 심하고, 의존성이 심하다는 문제점이 있다.

한편 탄가마(숯 굽는 가마)등 공기가 적은 곳에 목재를 쌓아놓고 불을 지펴 탄가마 내부 온도가 350-450℃가 되면 백색의 연기가 나오며 목재는 숯으로 된다. 이과정에서 탄가마의 연돌을 통해 배출되는 이 연기를 집연구(集煙口)에서 모아 냉각연돌에 통과시키게 되면 결로 현상에 의해 갈색의 미립자 물방울이 생성되고, 이를 한곳에 모아서 얻어진 액체가 조목초액이다. 이 조목초액을 내산성 재질의 용기에 담아 6개월 내지 1년간 자연 상태에 정치시키면 3개층으로 분리된다. 최상층은 경유질층이며, 중간층부분이 목초액이고, 하층은 타르층이다. 이 중간층 만을 분리하면 pH 3의 유효한 통상의 기초 목초액을 얻게되는 것이다. 이러한 기초 목초액은 개미산, 초산, 락산 등의 유기산; 페놀, 크레졸, 2,4-및 3,5-키시레놀 등의 페놀류 성분; 포름알데히드, 아세트알데히드, 프로피온 알데히드 등의 카보닐 화합물류 성분; 및 메탄올, 에탄올 알코올류 성분 등 약 280여종의 유기산과 미네랄, 게르마늄 등 13종의 희유원소가 함유되어 있는 것으로 알려져 있다.

목초액은 일본의 명치시대, 청일전쟁 전부터 이용되기 시작하였으나, 이용목 적이 목초액의 주성분인 초산의 제조였기 때문에, 그 후 초산이 합성화학에 의해 순도가 높은 제품을 쉽게 싼 값에 생산하게 됨으로써, 목초액의 이용은 거의 사라지게 되었다. 2차 대전 전후 목초액의 이용은 재개되었으나, 현재까지 그 이용법은 목초액에 함유된 성분들의 이용이 아니고, 목초액의 특유의 냄새, 색깔을 그대로 이용하는 것으로서, 예들 들면 목초액의 연기 냄새(smoke flavours)를 그대로 이용해서 햄, 베이컨, 소세지 등의 제조에 있어 훈연의 효과를 대신 할 수 있게 사용하거나, 잘구워진 물고기나 고기 등의 색깔을 연출하는 식품 첨가물로 그 이용 방법이 매우 단순하였다.

일본에서도 목초액을 사용하여 무좀이나 아토피성 피부염, 당뇨병, 간염 등의 증상을 개선하려는 시도가 있었으나, 목초액에 함유되어 있는 유해성분(타르, 메탄올, 벤조피렌, 메틸콜란스렌 등)들의 존재로 인체에 대한 안전성이 확보되지 않아 그 연구는 매우 제한적이었다.

목초액은 숯가마의 연기에서 채취한 산림자원이다. 목초액은 수목에 함유되어 있는 셀룰로오즈, 리그닌 등의 성분을 열로 분해하여 만들어지는 것으로, 목초액에는 다양한 작용을 하는 유기성분이 200여종 이상이나 함유되어 있다. 그러나 목초액에는 유효성분 뿐만 아니라 유해성분인 타르, 메탄올, 벤조피렌, 메틸콜란스렌 등이 기준치 이상 함유되어 있어서, 인체에 대한 안전성이 의심되었고 건강에 유익한 성분으로 인정을 받을 수 없었다. 또한 목초액에 함유되어있는 유효성분들이 명확히 규명 및 분류되지 않아서, 목초액이 가지고 있는 기능성을 예측 확인 할 수 없었다.

따라서 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 인체에 대한 안전성이 확보된, 목초액에서 추출한 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분을 함유하는 아토피성 피부염 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

전술한 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 목초액에서 추출한 아래의 화학식 1로 표시되는 구아이알콜계 성분 및 아래의 화학식 2로 표시되는 시링콜계 성분을 함유하는 아토피성 피부염 치료용 조성물을 제공한다.

위 화학식 1 및 2에서, R은 수소, 알킬, 옥소알킬 또는 알케닐이다.

또한 본 발명은 목초액에서 추출한 위 화학식 1로 표시되는 구아이알콜계 성분, 위 화학식 2로 표시되는 시링콜계 성분 및 항알레르기 효과가 있는 한방추출물 을 함유하는 아토피성 피부염 치료용 조성물을 제공한다.

전술한 바와 같이 목초액에는 다양한 작용을 할 것으로 예상되는 유기성분이 200여종 이상 함유되어 있지만, 동시에 타르, 메탄올, 벤조피렌 등과 같은 유해한 성분도 많이 함유되어 있다. 또 목초액에 함유되어 있는 유효성분이 분류 및 규명되지 않아 목초액이 가지고 있는 약리적 효과는 밝혀지지 않았다.

따라서 본 발명자는 여러 방법을 이용하여 목초액에서 유해한 성분을 제거하는 방법을 개발하였고(대한민국특허 등록번호 제0290986호와 제0212472호 참조), 이와 같은 방법으로 정제된 목초액의 유효성분을 분류하고 규명하였다. 또 분류, 규명된 목초액 유효성분의 약학적, 생리학적 효과를 밝히기 위해 많은 연구를 수행한 결과 목초액에서 추출한 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분을 함유하는 본 발명의 조성물이 아토피성 피부염 치료 용도로 이용할 수 있다는 것을 발명하였다.

또 본 발명자는 기존의 목초액이 여러 부작용으로 인하여 사용될 수 없었다는 점을 감안하여, 본 발명의 조성물에 대한 여러 가지 안전성 실험을 실시하였고, 이를 통하여 목초액에서 추출한 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분을 함유하는 본 발명의 조성물이 인체에 안전하다는 것을 확인하였다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 목초액에서 추출한 아래의 화학식 1로 표시되는 구아이알콜계 성분 및 아래의 화학식 2로 표시되는 시링콜계 성분을 포함하는 아토피성 피부염 치료용 조성물을 제공한다.

<화학식 1>

<화학식 2>

구아이알콜계 성분의 예로는 구아이알콜, 4-메틸구아이알콜, 4-에틸구아이알콜, 4-프로필구아이알콜, 바닐린(vanillin), 4-(2-프로피오)-바닐론(4-(2-propio)-vanillone), 4-(1-프로피오)-바닐론, 유게놀(eugenol), E-이소유게놀, Z-이소유게놀, 아세토바닐론 등이 있다. 그 화학식을 종합하여 도 1에 나타내었다.

시링콜계 성분의 예로는 시링콜, 4-메틸시링콜, 4-에틸시링콜, 4-프로필시링콜, 시링콜알데히드(syringaldehyde), 4-(2-프로피오)-시링콘(4-(2-propio)-syringone), 4-(1-프로피오)-시링콘, 4-(2-프로페닐)-시링콜(4-(2-propenyl)-syringol), E-4-(1-프로페닐)-시링콜, Z-4-(1-프로페닐)-시링콜, 아세토시링콘(acetosyringone) 등이 있다. 그 화학식을 종합하여 도 2에 나타내었다.

또한 본 발명은 목초액에서 추출한 위 화학식 1로 표시되는 구아이알콜계 성 분, 위 화학식 2로 표시되는 시링콜계 성분 및 항알레르기 효과가 있는 한방추출물을 함유하는 아토피성 피부염 치료용 조성물을 제공한다.

바람직하게는, 목초액에서 추출한 구아이알콜계 성분과 시링콜계 성분을 함유하는 본 발명의 조성물은 조성물 총 중량을 기준으로 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분을 10^-6 내지 90 중량% 함유하고, 항알레르기 효과가 있는 한방추출물 0.05 내지 50 중량%를 함유한다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 구아이알콜계 성분 10^-6 내지 30 중량% 및 시링콜계 성분 10^-6 내지 40 중량% 및 항알레르기 효과가 있는 한방추출물 0.05 내지 50 중량%를 함유한다. 본 발명의 조성물은 위와 같은 함량을 갖는 경우에 있어 가장 바람직한 아토피성 피부염 치료 효과를 가진다.

아토피성 피부염을 치료하기 위하여 지금까지 통상적으로 사용되어온 한방추출물들의 치료효과는 충분하지 못하였다. 본 발명은 또한 이러한 치료효과가 부족한 한방추출물들을 목초액에서 추출한 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분과 혼합하여 사용할 경우 치료효과가 매우 상승된다는 놀라운 사실을 제공한다. 항알레르기 효과가 있는 한방추출물로는 면역반응을 유도하는 성질이 있는 히스타민의 방출을 억제하는 당귀추출물, 가려움증을 억제하는 천궁추출물 등이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 항알레르기 효과가 있는 한방추출물로는 예를 들어 백작약 추출물, 감초 추출물, 복령 추출물, 황금 추출물, 오미자 추출물, 생강추출물, 백작약 추출물, 숙지황 추출물, 단삼 추출물, 백출 추출물, 구기자 추출물, 영지 추출물, 백하수오 추출물, 인삼 추출물 등이 사용될 수 있다.

통상적으로 사용되는 대부분의 약학적 유효성분들은 열에 불안정하기 때문에 제조과정상 열을 가할 수 없다는 문제점을 내포하고 있는 반면, 본 발명의 구아이알콜계 화합물과 시링콜계 화합물은 목초액에서 추출한 화합물들이고, 추출을 위해 사용된 목초액은 수목의 열분해를 통해서 얻은 물질이기 때문에 열에 매우 안정하다는 장점이 있다.

정제된 목초액 중에서 유효성분을 분류, 규명하는 것은 약학 분야에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 행하여 질 수 있다. 예를 들어 칼럼을 이용한 분류법, 유기용매 등을 이용한 추출법 등이 사용될 수 있다. 보다 구체적으로 정제된 목초액 중에서 유효성분을 분류하는 것은 에테르 등의 유기용매를 사용하여 분류될 수 있다. 본 발명의 바람직한 일 실시예로, 정제된 목초액의 유효성분은 에테르 등의 유기용매를 이용한 추출액을 산 및 알칼리 처리하여 얻을 수 있다. 정제된 목초액 중의 유효성분 규명은 GC-MSD를 이용하여 수행될 수 있다.

정제된 목초액 중의 산성 분획, 페놀성 분획, 중성 분획 및 염기성 분획 중에서 페놀성 분획이 아토피성 피부염 치료 개선 효과를 가진다. 페놀성 분획의 유용한 유효성분으로는 구아이알콜(guaiacol)계 성분과 시링콜(syringol)계 성분이 있으며, 이들 유효성분이 아토피성 피부염 치료 개선 효과를 가질 것으로 기대된다. 구아이알콜 및 시링콜계 성분은 정제된 목초액의 특유한 냄새를 유발하는 성분으로 휘발성이 강한 폴리페놀성 화합물이다.

본 발명 조성물의 아토피성 피부염 치료 효과는 본 발명이 속한 분야에서 통 상적으로 사용되는 동물모델을 사용하여 평가될 수 있다. 예를 들어 NC/Nga 마우스가 이용될 수 있다. 보다 구체적으로 본 발명의 조성물을 4주간 경구투여할 경우, 아토피 동물모델인 NC/Nga 마우스에 있어 피부병변의 감소정도로 본 발명 조성물의 효과를 평가할 수 있다. 본 발명의 조성물은 피부의 육안적 소견과 병리학적 소견을 기초로 판단할 때 아토피성 피부염의 치료를 위하여 널리 사용되는 기존 의약품보다 뛰어난 개선 효과를 가진다.

한편, 지금까지 목초액은 그 안전성이 문제시 되어 왔기 때문에 사용되지 못하였다. 따라서 목초액에서 추출한 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분을 포함하는 본 발명의 조성물의 안전성은 매우 중요한 평가요소가 된다. 이러한 안전성은 약학 분야에서 통상적으로 사용되는 안전성 평가방법이 이용될 수 있다. 예를 들어 본 발명의 조성물의 인체 안전성 평가는 급성독성 시험, 유전독성 시험, 아급성 독성 시험 등의 독성 평가 방법들이 이용될 수 있다.

급성독성 시험은 국립보건안전연구원 고시 제94-3호 '의약품 등의 독성시험기준' 및 국립보건안전연구원 '독성시험 표준작업 지침서'의 일반독성시험법에 따라서 수행될 수 있으며, 폐사율, 임상증상, 체중변화, 해부병리소견 등이 평가된다. 이러한 급성독성시험을 통하여 본 발명의 조성물은 매우 안전한 것으로 평가된다. 급성독성시험의 결과를 종합하면 목초액에서 추출한 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분을 함유하는 본 발명의 조성물은 마우스에 경구투여시 아무런 급성독성을 나타내지 않으며 LD₅₀ 값은 5,000mg/체중kg 이상일 것으로 생각되며, 이 용량은 본 발명의 조성물의 예상 1일 섭취용량의 50배에 달하는 용량으로 경구투여시 안전한 것으로 확인된다.

유전독성시험은 국립보건안전연구원 고시 제94-3호 '의약품 등의 독성시험기준' 및 국립보건안전연구원 '독성시험 표준작업 지침서'의 유전독성시험법에 따라 평가될 수 있다. 예를 들어 유전독성시험은 Salmonella typhimurium을 이용한 복귀돌연변이 시험, 포유류의 배양세포를 이용한 염색체이상시험, 설치류의 골수세포를 이용한 소핵시험 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 조성물은 S.typhimurium TA1535, TA1537, TA98, TA100을 이용한 복귀돌연변이시험에서 시험적용농도 62-5000ug/plate 범위에서 복귀돌연변이를 유발하지 않고, 포유류 배양세포를 이용한 염색체이상시험에서 시험적용농도 1.25-5mg/ml의 범위에서 염색체 이상을 유발하지 않는다. 또한 설치류를 이용한 소핵시험에서 시험적용용량 1250-5000mg/kg의 범위에서 소핵을 유발하지 않는다. 이러한 결과는 본 발명의 조성물이 유전독성을 나타내지 않는 매우 안전한 물질임을 의미한다.

아급성 독성평가는 국립보건안전연구원 고시 제94-3호 '의약품 등의 독성시험기준'에 따라 평가될 수 있다. 예를 들어 시험물질을 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 g/kg/일의 용량으로 ICR계 암수 마우스에 주 6회 총 28일간 경구투여한 후, 투여기간동안 사망동물, 일반증상 및 체중변화를 관찰하여 평가된다. 최종 투여 후 육안적부검소견, 장기무게측정, 혈액학적·혈액생화학적검사, 조직병리학적검사 등을 실시한다. 본 발명의 조성물은 위의 모든 평가항목에서 모두 안전한 것으로 판단되며, 본 발명의 조성물의 무독성량은 5.0g/kg/day이상으로 확인된다.

목초액에서 추출된 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분을 포함하는 본 발명의 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 감미제, 착색제, 착향제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 의하여 정제, 캡슐제, 산제, 과립제, 현탁제, 유제, 시럽제, 액제 또는 비경구 투여용 제제와 같은 단위 투여형 또는 수회 투여용 약제학적 제제로 제형화될 수 있다.

목초액에서 추출된 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분을 포함하는 본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여할 수 있으며, 하루에 유효성분으로서 본 발명의 조성물을 체중 1kg당 0.001 내지 0.5g, 바람직하게는 0.01 내지 0.2g의 양을 1 내지 수회 나누어 투여할 수 있다. 특정 개체에 대한 투여용량 수준은 개체의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율, 질환의 정도에 따라 변화될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명이 이들 실시에만으로 한정되는 것은 아니다.

실시예 1 : 정제 목초액의 기능 성분 분류 및 규명

정제 목초액의 기능 성분 규명에는 HP-INNOWAX 컬럼(크로스링크된 폴리에틸렌 글리콜, 30mm×0.25mm(I.D.)×0.25um(F.T.))과 HP-5MS(크로스링크된 5% 페닐메틸실리콘, 30mm×0.25mm(I.D.)×0.25um(F.T.))컬럼을 사용하였고, 사용기기로는 HP 5890 Series Ⅱ Plus GC와 5972 MSD를 이용하였다. 오븐 온도는 50℃에서 2분간 유 지시킨 후, 220℃까지 분당 3℃씩 승온하였으며 이후 220℃에서 5분간 유지하였다. 주입구 온도는 200℃, 검출기 온도는 250℃, 헬륨의 유속은 0.72ml/min으로 하였으며, split ratio는 10으로 하였다.

GC-MSD 분석에는 오븐 온도는 40℃에서 5분간 유지시킨 후 220℃까지 분당 3℃씩 승온하였으며 이후 220℃에서 5분간 유지하였다. 헬륨의 유속은 1 ml/min으로 하였고, split ratio는 50으로 하였다. 가속전압은 70eV로 하였으며 대부분의 화합물의 추정 및 동정에는 시판품과의 비교실험을 하거나 mass library data를 이용하였다.

정제 목초액을 유기용매로 추출한 다음 추출물의 성분조성을 조사하였다. 목초액 20ml를 100ml 용량의 분액여두에 넣고 에테르로 추출하였다. 이후 에테르층에 5% NaHCO₃을 첨가하여 수층으로부터 카르보닐부를 분리하였다. 분리한 수층을 30% H₂SO₄으로 중화한후 에테르로 추출하여 카르보닐부를 얻었다. 카르보닐부를 추출한 후 남은 에테르층에 2N NaOH를 넣어 페놀부를 수층으로부터 분리하였다. 분리한 수층은 카르보닐부 추출 시와 동일한 방법으로 중화한 후 에테르로 추출하여 페놀부를 얻었다. 이처럼 카르보닐부와 페놀부를 추출하고 남은 에테르 층으로부터 중성부와 염기성부를 얻었다. 모든 에테르층은 감압농축하여 중량을 측정한 후 이로부터 각각의 분획에 대한 함량을 계산하였다. 이와 같이 각각의 추출물은 산 및 알칼리 처리에 의해 산성 분획, 페놀성 분획, 중성분획 및 염기성 분획으로 구분한 다음 GC 및 GC-MS를 사용하여 각 분획의 구성성분을 분석하였다. 그 결과를 아래의 표 1에 나타내었다.

분획	분획비율(%)	성분(화합물)	비율(%)
중성 분획	24.8%	피페로날(piperonal)	1.61
		쿠마린(coumarin)	0.4
		1-인다논(1-indanone)	2.02
		확인 안됨(N.D.)	95.97
		합계	100
산성 분획	25.3%	아세트 산(acetic acid)	13.44
		말톨(maltol)	7.91
		아세토페논(acetophenone)	1.57
		확인 안됨(N.D.)	77.08
		합계	100
페놀성 분획	47.0	구아이아콜(guaiacol)	30.60
		4-메틸 구아이아콜(4-methyl guaiacol)	0.60
		4-에틸 구아이아콜(4-ethyl guaiacol)	1.91
		4-프로필 구아이아콜(4-propyl guaiacol)	2.34
		바닐린(vanillin)	3.17
		4-(2-프로피오)바닐론(4-(2-propio)vanillone)	0.11
		4-(1-프로피오)바닐론(4-(1-propio)vanillone)	3.40
		유게놀(eugenol)	3.62
		E-이소유게놀(E-isoeugenol)	0.21
		아세토-바닐론(aceto-vanillone)	1.45
		시링콜(syringol)	28.40
		4-메틸 시링콜(4-methyl syringol)	4.47
		4-에틸 시링콜(4-ethyl syringol)	2.66
		4-프로필 시링콜(4-propyl syringol)	1.30
		시링콜알데히드(syringaldehyde)	1.49
		4-(2-프로피오)-시링콘(4-(2-propio)-syringone)	0.60
		4-(1-프로피오)-시링콘(4-(1-propio)-syringone)	0.23
		4-(2-프로페닐)-시링콜(4-(2-propenyl)-syringol)	0.32
		E-4-(1-프로페닐)-시링콜(E-4-(1-propenyl)-syringol)	0.83
		Z-4-(1-프로페닐)-시링콜(Z-4-(1-propenyl)-syringol)	1.40
		아세토시링콘(acetosyringone)	0.05
		확인 안됨(N.D.)	10.84
		합계	100
염기성 분획	2.9	3-에틸펜탄(3-ethylphentane)	37.93
		4-메틸렌 사이클로헥사논(4-methylene cyclohexanone)	17.24
		2,6-디-tert-부틸퀴논(2,6-di-tert-butylquinone)	27.59
		확인 안됨(N.D.)	17.24
		합계	100
합계	100

분획별로는 페놀성 분획의 비율(47%)이 가장 높았고, 염기성 분획의 비율 (2.9%)이 가장 낮았다. 각각의 분획을 이용하여 아토피 피부염 개선 효과를 조사한 결과 다른 분획에 비하여 페놀성 분획의 효과가 월등히 뛰어났다.

페놀성 분획에서는 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분의 비율이 89.16%로 페놀성 분획의 주요한 구성성분이었다. 구아이알콜계 성분과 시링콜계 성분은 목재의 구성성분인 리그닌(lignin)의 구아이아실 유닛(guaiacyl unit)과 시링길 유닛(syringyl unit)이 열분해되어 생성되는 화합물로 정제 목초액의 특유의 향인 그을음 냄새(smoky aroma) 또한 이들 화합물로부터 유발된다. 이러한 결과를 바탕으로 구아이알콜계 성분과 시링콜계 성분이 정제 목초액의 기능성 성분임을 확인하였다.

실시예 2 : 아토피성 피부염 치료 효과 평가

본 발명 조성물의 아토피성 피부염 치료 효과를 평가하기 위하여 아토피성 피부염의 치료에 널리 사용되어지고 있는 타크로리무스(Tacrolimus) 연고(Protopic^TM, 한국후지사와약품)와 본 발명의 조성물을 비교평가하였다. 본 발명의 조성물로 구아이알콜계 성분 8.95 중량%, 시링콜계 성분 18.53 중량%, 감초, 당귀, 백작약, 복령, 황금, 오미자, 생강 및 천궁을 원료로 하는 한방추출물 22.92% 및 정제수 49.60%를 함유한 조성물을 이용하였고, 양성대조군으로는 아토피성 피부염의 치료제로 사용되고 있는 시판 타크로리무스 연고를 사용하였고, 음성대조군으로 부형제인 증류수를 사용하였다. 상기 감초, 당귀, 백작약, 복령, 황금, 오미자, 생강 및 천궁을 원료로 하는 한방추출물에서 각각의 성분들은 동일중량으로 이용되었으며, 물을 사용하여 본 발명이 속한 분야에서 잘 알려진 통상적인 추출방법으로 추출되었다.

아토피성 피부염 치료제 평가를 위해 통상적으로 이용되는 동물 모델인 NC/Nga 마우스를 이용하였다. NC/Nga 마우스는 일반사육환경에서 노출되어 자라게 되면 6-7주부터 사람에서의 아토피성 피부염과 유사한 병변이 발생하게 되고, 16-18주령이 되면 피부건조증, 딱지가 앉은 상처 및 작은 결정의 병변이 관찰되는 동물이다. 음성대조군, 양성대조군 및 본 발명의 조성물을 4주 동안 1,000mg/체중kg의 분량으로 증류수에 희석하여 하루에 1회 경구투여하였다. 4주 후 일정 부분의 피부를 절개해 손상정도를 평가하였다.

종합적 평가를 위하여 육안적 부검을 실시하였다. 내부장기의 소견으로는 별다른 이상이 관찰 되지는 않았지만, 피부의 외부소견에서 육안적으로 등쪽의 아래 피부에 작은 반흔양의 상처가 있는 동물이 음성대조군에서는 7마리, 양성 대조군에서는 4마리, 본 발명의 조성물 시험군에서는 2마리가 관찰되어 유의성 있는 차이가 나타났다. 각각의 육안적 평가 결과를 도 3a, 3b 및 3c에 나타내었다. 도 3a(음성대조군 투여)는 아토피 피부염이 유발되었던 NC/Nga 마우스 8마리 중 2마리의 아토피 피부염의 개선정도를 사진결과로 나타내며, 도 3b(양성대조군 투여)는 아토피 피부염이 유발되었던 NC/Nga 마우스 8마리 중 2마리의 아토피 피부염의 개선정도를 사진결과로 나타내며, 도 3c(본 발명의 조성물 투여)는 아토피 피부염이 유발되었던 NC/Nga 마우스 8마리 중 2마리의 아토피 피부염의 개선정도를 사진결과로 나타낸다.

병리조직학적 검사를 하기 위하여 현미경 관찰을 실시하였다. 관찰결과를 피부병변은 피부궤양, 급·만성 염증세포 침윤, 피부 상피세포의 중층화적 비후 및 자국(scar)잔존으로 평가하였다. 각각의 결과를 표 2, 3, 4, 5 및 도 4a, 4b, 4c에 나타내었다.

염증세포침윤(손상정도)
시료	시험군수	손상없음	아주 약한 손상	약한 손상	중간 손상
음성대조군	8	0	3	3	2
양성대조군	8	0	4	3	1
본 발명 조성물	7	3	3	1	0

비후(손상정도)
시료	시험군수	손상없음	아주 약한 손상	약한 손상	중간 손상
음성대조군	8	0	2	5	1
양성대조군	8	0	3	3	2
본 발명 조성물	7	4	2	1	0

자국(갯수)
시료	시험군수	0	1	2	3	4	5
음성대조군	8	1	2	1	2	1	1
양성대조군	8	4	3	1	0	0	0
본 발명 조성물	7	5	1	1	0	0	0

피부 3cm 길이에서 피부궤양은 음성대조군에서 50％의 발생을 보인 반면, 본 발명의 조성물 시험군에서는 14.3％의 발생을 보였다. 염증은 피하조직 또는 궤양주위에서 관찰되었으며 음성대조군은 모두 급성 또는 만성 염증세포 침윤이 관찰되었으나, 본 발명의 조성물 시험군은 약 57％에서만 염증소견을 보였다. 상피세포 비후는 음성대조군에서 모두 부분적으로 비후가 관찰된 반면, 본 발명의 조성물 시험군은 약 57％가 정상으로 관찰되었다. 자국(Scar)은 음성대조군에서 8마리 중 7마리가 관찰된(87.5％) 반면, 본 발명의 조성물 시험군에서는 7마리 중 2마리에서만 관찰(28.6％)되었다. 또한 육안소견 및 병리조직적인 관찰결과 모두에 있어 본 발명의 조성물 시험군은 양성대조군보다 양호한 결과를 나타내었다. 이러한 결과로부터 본 발명의 조성물이 아토피성 피부염 치료에 탁월한 효과가 있음을 알 수 있다.

본 발명은 목초액에서 추출한 구아이알콜계 성분 및 시링콜계 성분을 포함하는 아토피성 피부염 치료용 조성물을 제공한다. 보다 바람직하게 본 발명은 목초액에서 추출한 구아이알콜계 성분, 시링콜계 성분 및 항알레르기 효과가 있는 한방추출물을 포함하는 아토피성 피부염 치료용 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 급성독성, 유전독성, 아급성 독성 등이 없는 안전한 조성물일 뿐만 아니라, 아토피성 피부염 치료 효과가 매우 뛰어나다. 본 발명의 조성물은 아토피성 피부염 치료용 약제 또는 건강기능식품의 원료로 유용하게 사용될 수 있다.

피부궤양(손상정도)

목초액에서 추출한 하기 화학식 1로 표시되는 구아이알콜계 성분; 하기 화학식 2로 표시되는 시링콜계 성분; 및 당귀 추출물, 천궁 추출물, 감초 추출물, 복령 추출물, 황금 추출물, 백작약 추출물, 오미자 추출물 및 생강 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 한방추출물을 함유하는 아토피성 피부염 치료용 조성물.

<화학식 1>

<화학식 2>

상기 화학식 1 및 2에서, R은 수소, 탄소수 1 내지 3의 알킬, 탄소수 1 내지 3의 옥소알킬 또는 탄소수 1 내지 3의 알케닐임.
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