KR100571215B1 - 복합적인치료요법을이용한hiv와다른바이러스감염의치료 - Google Patents

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Abstract

바이러스 감염, 특히 HIV의 예방 또는 치료를 위한 신규한 항바이러스 화합물을 개시한다. 이런 신규한 항바이러스성 치료요법에는 다른 항바이러스 치료요법제와 복합된 DP-178 또는 DP-107, 바이러스 융합 저해물질이 이용된다. 본 발명의 복합 치료요법은 단일 치료요법보다 우월한 공조 효과를 나타낸다. DP-178 또는 DP-107 및 다른 항바이러스 물질의 병용은 이상적인 치료요법이며, 신규한 기전으로 HIV 전염을 막고 치료요법제의 비-독성을 제공한다.

Description

복합적인 치료요법을 이용한 HIV와 다른 바이러스 감염의 치료
본 출원은 미국 특허출원 08/481,957의 일부-계속 출원이다.
본 발명은 신규한 복합 치료요법을 이용하여 바이러스 감염, 특히 HIV 감염을 치료하는 방법에 관한다. 이런 신규한 복합 치료요법에서는 펩티드 DP-178, DP-107, 또는 이들의 단편, 유사체 또는 동족체 및 적어도 하나의 다른 치료요법제를 이용한다.
DP-178은 HIV-1LAI 막통과 단백질(TM) gp41의 아미노산 638 내지 673에 상응하는 펩티드이다. DP-178에는 DP-178의 일부분, 유사체, 동족체가 포함되는데, 이들 모두 항-바이러스 활성을 가진다. 이런 항-바이러스 활성에는 감염되지 않은 CD-4+ 세포에 HIV 전염의 저해가 포함되지만 이에 국한되지 않는다. 또한, 본 발명은 사람과 사람 아닌 개체에서 감염되지 않은 세포에 레트로바이러스, 특히 HIV 전염의 저해물질로서 DP-178, DP-178 단편 및/또는 유사체 또는 동족체의 이용에 관계한다. 또한, 본 발명은 다른 외피바이러스에 존재하는 HIV-1LAI 막통과 단백질(TM) gp41의 아미노산 558-595에 상응하는 펩티드, 항-바이러스 펩티드 DP-107에 관계한다. 좀더 구체적으로, 본 발명은 바이러스감염, 특히 HIV 감염을 치료하기 위한 다른 치료요법제 및 DP-107, 이의 단편, 유사체 또는 동족체의 병용에 관한다. 또한, 본 발명은 DP-178 또는 DP-107 및 적어도 하나의 치료요법제를 함유하는 신규한 제약학적 조성물에 관한다.
2.1. 사람 면역결핍 바이러스
사람 면역결핍 바이러스(HIV)는 후천성 면역결핍증(AIDS) 및 다른 관련 질환의 원인이 되는 병인성 레트로바이러스이다(Barre-Sinoussi, F. et al., 1983, Science 220:868-870; Gallo; R. et al., 1984, Science 224:500-503). HIV에는 적어도 2가지 타입이 존재한다: HIV-1(Barre-Sinoussi, F. et al., 1983, Science 220:868-870; Gallo R. et al., 1984, Science 224:500-503) 및 HIV-2(Clavel, F. et al., 1986, Science 233:343-346; Guyader, M. et al., 1987, Nature 326:662-669). 또한, 이들 타입의 각 집단에는 상당한 유전성 이형성이 존재한다. HIV 바이러스에 의한 사람 CD-4+ T-임파세포의 감염은 세포형의 고갈을 유도하고, 이는 궁극적으로 기회적 감염, 신경 기능장애, 신조직 성장 및 종국의 죽음을 유도한다.
HIV는 레트로바이러스의 렌티바이러스 과이다(Teich, N. et al., 1984, RNA Tumor Viruses, Weiss, R. et al., eds., CSH-Press, pp. 949-956). 레트로바이러스는 이배성 단일-가닥 RNA 게놈을 포함하고, 바이러스 인코드된 역전사효소, RNA-의존성 DNA 중합효소에 의해 생산되는 DNA 중간물질에 의해 복제하는 작은 외피바이러스이다(Varmus, H., 1988, Science 240:1427-1439). 가령, 레트로바이러스에는 사람 T-세포 백혈병 바이러스(HTLV-1, -Ⅱ, -Ⅲ) 및 고양이 백혈병 바이러스와 같은 종양 바이러스이다. HIV 바이러스 입자는 p24와 p18로 지정된 단백질로 구성된 바이러스 코어로 구성된다. 바이러스 코어는 복제에 요구되는 바이러스 RNA 게놈과 효소를 포함한다. 미리스틸화된 gag 단백질은 바이러스 코어 주변에 외측 바이러스 껍질을 형성하고, 이는 감염된 세포막에서 유래된 지질막 외피에 의해 둘러싸이게 된다. HIV 외피 표면 당단백질은 하나의 160kD 전구체 단백질로 합성되는데, 이는 바이러스 발아(budding)동안 세포 프로테아제에 의해 2개의 당단백질 gp41과 gp120으로 분리된다. gp41은 막통과 단백질이고, gp120은 가능하면 3량체 또는 다량체 형태로 gp41과 비공유적으로 결합되어 남아있는 세포외 단백질이다(Hammarskjold, M. and Rekosh, D., 1989, Biochem. Biophys. Acta 989:269-280).
HIV는 CD-4 세포표면 단백질이 HIV-1 바이러스에 대한 세포 수용체로서 작용하기 때문에, CD-4+ 세포에 표적된다(Dalgleish, A. et al., 1984, Nature 312:763-767; Klatzmann et al., 1984, nature 312:767-768; Maddon et al., 1986, Cell 47:333-348). 세포내로 바이러스 진입은 세포 CD-4+ 수용체 분자에 결합하는 gp120에 의존하고, gp41은 바이러스 막에서 외피 당단백질 복합체를 고정하고(McDougal, J.S. et al., 1986, Science 231:382-382; Maddon, P.J. et al., 1986, Cell 47:333-348), 따라서 CD-4+ 세포에 대한 HIV의 굴성(tropism)을 설명한다.
2.2. HIV 치료
HIV 감염은 유행성이며, HIV 연관된 질병은 세계적으로 중요한 건강문제로 대두되고 있다. 효과적인 치료요법의 성공적인 설계를 위하여 상당한 노력이 경주되고 있긴 하지만, AIDS에 대한 항-레트로바이러스 치료제는 여전히 없다. 이런 약물의 개발 시도에서, HIV 생명 주기의 여러 단계가 치료요법적 개입을 위한 표적으로 간주되고 있다(Mitsuya, H. et al., 1991, FASEB J. 5:2369-2381). 개입은 HIV의 세포막에 결합, HIV RNA 게놈의 DNA로 역전사 또는 숙주세포로부터 바이러스의 탈출과 새로운 세포 표적의 감염을 저해하는 것이다.
HIV 감염 초기 단계에서 바이러스가 세포로 들어갈 수 없도록 하는 약물을 개발하려는 시도가 있었다. 여기에서, HIV에 대한 세포 표면 수용체인 CD-4+에 관심이 집중되었다. 가령, 재조합 가용성 CD-4는 바이러스 입자가 세포막에 있는 CD-4 분자와 만나기 전에 이들 바이러스 입자에 결합하여 HIV 감염성을 차단하는 것으로 나타났다(Smith, D.H. et al., 1987, Science 238:1704-1707). 특정 일차 HIV-1 분리체는 재조합 CD-4에 의한 저해에 상대적으로 민감성이 적었다(Daar, E. et al., 1990, Ann. Int. Med. 112:247-253). 또한, 재조합 가용성 CD-4 임상 시험에서 결정적인 결과가 도출되지 않았다(Schooley, R. et al., 1990, Ann. Int. Med. 112:247-253; Kahn, J.O. et al., 1990, Ann. Int. Med. 112:254-261; Yarchoan, R. et al., 1989, Proc. Vth Int. Conf. on AIDS, p564, MCP 137).
HIV에 길항하는 것으로 밝혀진 2',3'-디데옥시뉴클레오시도 유사체, 즉 AZT, ddI, ddC, d4T를 포함하는 바이러스 인코드된 역전사효소-표적 약물이 개발되었다(Mitsuya, H. et al., 1991, Science 249:1533-1544). 유익한 점은 있긴 하지만, 이들 뉴클레오시드 유사체는 약물 저항성 HIV 돌연변이의 급격히 출현으로 인하여 치료성이 없다(Lander, B. et al., 1989, Science 243:1731-1734). 또한, 이들 약물은 종종, 골수억제, 구토, 간기능 이상과 같은 독성 부작용을 나타낸다.
특정 바이러스 단백질의 결정적인 바이러스-특이적 2차 프로세싱을 수반하는 HIV 복제의 후기 단계 역시 항-HIV 약물 표적으로 제안되었다. 후기 단계 프로세싱은 바이러스 프로타제의 활성에 의존하기 때문에, 이런 프로테아제를 저해하는 약물이 개발되고 있다(Drickson, J., 1990, Science 249:527-533). 이들 후보 약물의 임상 결과는 여전히 의심스럽다.
HIV 감염치료용 백신 개발에 관심이 집중되고 있다. HIV-1 외피 단백질(gp160, gp120, gp41)은 AIDS 환자에 존재하는 항-HIV 항체에 대한 주요 항원으로 보인다(Barin, et al., 1985, Science 228:1094-1096). 따라서, 이들 단백질은 항-HIV 백신 개발에서 항원으로 작용하는 가장 유망한 후보로 보인다. 이를 위하여, 몇몇 연자들은 숙주 면역 시스템에 대한 면역성 표적으로 gp160, gp120 및/또는 gp41의 다양한 부분을 이용하기 시작하였다(참조: Ivanoff, L. et al., U.S. Pat. No. 5,141,867; Saith, G. et al., WO 92/22,654; Shafferman, A., WO 91/09,872; Formoso, C. et al., WO 90/07,119). 하지만, 이런 후보 백신에 관한 임상 결과는 여전히 미지수로 남아 있다.
최근에, 전신 면역 반응을 유도하는 이중 가닥 RNA가 바이러스 감염을 치료하는데 인터페론, AZT, 포스포노포르메이트와 같은 항-바이러스 물질과 병용되었다(Carter, W., U.S. Patent No. 4,950,652). 또한, 피리미딘 뉴클레오시드 유사체와 우리딘 포스포릴라제 저해물질을 병용하는 치료요법이 HIV 치료용으로 개발되었다. 이런 특이적 치료요법이 유익하기는 하지만, 일반적으로 복합 치료요법이 아지도티미딘(AZT)과 리바비린으로 시험관내에서 입증된 것처럼 길항작용의 잠재력을 보유한다(참조: 미국특허 4,950,652). 하지만, 복합 치료요법은 대부분 항-HIV 치료제의 높은 독성 및 낮은 수준의 효과로 인하여 문제점을 안고 있다. 따라서, 비독성이면서 효과적인 복합 치료요법이 요구된다.
본 발명은 다른 항바이러스물질과 바이러스 융합 저해물질(DP-178과 DP-107)의 병용에 기초한 신규한 복합 치료요법을 제공한다. DP-178과 DP-107은 바이러스가 세포에 융합되는 것을 예방하고 바이러스의 세포 전염을 효과적으로 예방할 수 있는 신규한 치료요법제이다. 또한, DP-178과 DP-107은 시험관내 연구와 실험 동물에서 비-독성인 것으로 입증되었다. 본 발명은 다른 항바이러스제 또는 다른 치료요법제와 이런 펩티드의 병용을 처음으로 보고하였다.
3. 발명의 요약
본 발명은 사람을 포함한 포유류에 바이러스 감염, 특히 HIV 감염을 치료하거나 예방하는 방법에 연관하는데, 상기 방법은 적어도 하나의 다른 치료요법제와 병용하여 DP-178 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량을 투여하는 것으로 구성된다.
본 발명은 사람을 포함한 포유류에 바이러스 감염, 특히 HIV 감염을 치료하거나 예방하는 방법에 연관하는데, 상기 방법은 적어도 하나의 다른 치료요법제와 병용하여 DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량을 투여하는 것으로 구성된다.
좀더 구체적으로, 본 발명은 사람을 포함한 포유류에 바이러스 감염, 특히 HIV 감염을 치료하거나 예방하는 방법에 연관하는데, 상기 방법은 적어도 하나의 다른 치료요법제와 병용하여 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량을 투여하는 것으로 구성된다. 본 발명은 DP-107, DP-178 또는 다른 항바이러스 물질을 동시에, 순차적으로 또는 교대로 투여하는 치료요법을 포함한다. 교대 치료요법이란 일정 기간동안 제 1 항바이러스 화합물을 투여하고, 이후 일정 기간동안 제 2 항바이러스 화합물을 투여하며, 이런 순차적 투여를 반복하여 치료요법에 대한 저항성 발생을 감소시키는 치료요법을 의미한다. 본 발명은 DP-107, DP-178 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체 및 적어도 하나의 다른 치료요법제, 특히 다른 항바이러스제를 병용하여 단독 치료요법제보다 공조 효과를 나타낸다.
또한, 본 발명은 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체 및 바이러스 감염 저해 물질의 작용부위와 상이한 작용부위를 갖는 적어도 하나의 다른 항바이러스 물질의 병용을 포함한다. 이런 병용은 공조 효과 또는 추가효과를 갖는 지에 상관없이, 이들 치료요법제의 이중 작용에 기초한 개선한 치료요법을 제공한다.
본 발명은 사람을 포함한 포유류에 바이러스 감염, 특히 HIV 감염을 치료하거나 예방하는 방법에 연관하는데, 상기 방법은 적어도 하나의 다른 치료요법제, 특히 적어도 하나의 다른 항바이러스제와 병용하여 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량을 투여하는 것으로 구성된다.
본 발명의 신규한 항바이러스 조성물은 항바이러스 활성에 요구되는 약물의 효과량을 감소시켜 독성을 감소시킬 뿐만 아니라 다중 기전을 통하여 바이러스를 공격함으로써 절대적인 항바이러스 효과를 향상시킬 수 있는 치료수단을 제공한다. 유사하게, 신규한 항바이러스 조성물은 단일 치료요법에 의한 바이러스 저항 발생을 우회하고 임상의에게 좀더 효과적인 치료 수단을 제공한다.
본 발명의 다른 측면은 바이러스 감염, 특히 HIV 감염을 치료하고 예방하는 제약학적 조성물을 포함하는데, 이때 상기 조성물은 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량, 적어도 하나의 다른 치료요법제, 제약학적 수용가능한 담체로 구성된다.
DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체와 복합되는 치료제에는 다양한 공지의 치료제가 포함된다. 적절하게는, 이런 복합은 상이한 공격 모드를 갖는 물질 및 DP-107 또는 DP-178의 병용이다. 이런 물질에는 rIFN α, rIFN β, rIFN γ와 같은 사이토킨: AZT, 3TC, D4T, ddI, 다른 디데옥시뉴클레오시드 또는 디데옥시플루오르뉴클레오시드와 같은 역전사효소 저해물질; 리바비린과 같은 바이러스 mRNA 캐핑 저해물질; ABT-538과 MK-639와 같은 HIV 프로테아제 저해물질; 항-HIV 활성을 갖는 리간드-결합분자와 같은 암토테리신 B; 당단백질 프로세싱의 저해물질인 카스타노스페르민이 포함된다.
따라서, 본 발명은 HIV를 포함한 다양한 바이러스를 치료하는 개선된 항바이러스 치료요법을 제공한다.
또한, 본 발명은 단일-물질 치료요법으로 이용된 물질보다 효과가 개선된 복합 치료요법을 제공한다.
또한, 본 발명은 DP-178과 DP-107 및/또는 이들 펩티드와 함께 이용되는 치료요법제의 독성을 감소시키는 복합 치료요법을 제공하여 좀더 높은 치료 지수를 제공한다.
본 발명은 단일 치료요법에 대한 저항성 발생을 우회하는 수단을 제공하는 복합 치료요법을 제공한다.
3.1. 정의
본 명세서에서, "바이러스 감염" 은 바이러스가 건강한 세포에 침투하고, 세포의 복제 기전을 이용하여 궁극적으로는 세포를 용혈시켜 죽게 하며, 바이러스 입자를 방출시켜 새로 생산된 후손 바이러스에 의해 다른 세포를 감염시키는 질병 상태를 의미한다. 특정 바이러스에 의한 잠복 감염 역시 바이러스 감염의 가능 결과이다.
본 명세서에서, "바이러스 감염의 치료 또는 예방" 은 특정 바이러스의 복제를 저해하거나, 바이러스 전염을 저해하거나 또는 숙주에서 바이러스가 확립하는 것을 예방하고 바이러스 감염에 의한 질병의 증상을 감소시키거나 완화하는 것을 의미한다. 치료는 바이러스 로드(load)를 감소시키고 치사율 및/또는 이환율을 감소시키는 치료요법을 말한다.
본 명세서에서 "공조 효과" 는 하나이상 단일 약물의 부가 효과보다 좀더 효과적인 병용을 의미한다. 공조 효과는 바이러스 감염을 예방하거나 치료하기 위한 단일 치료요법의 약량을 감소시키는 능력을 의미한다. 이런 줄어든 약량은 효과의 감소없이 감소된 독성을 유발한다. 또한, 공조 효과는 항바이러스 활성을 개선된 효능, 다시 말하면 개선된 항바이러스 활성을 유도할 수 있다. 최종적으로, 공조 효과는 단일 치료요법에 대한 바이러스 저항성을 감소시킨다. DP-178 또는 DP-107 및 다른 치료요법제의 공조작용의 측정은 단락 5.5에 기술된 항바이러스 검사으로부터 수득한 결과에 기초한다. 이들 검사의 결과는 Chou와 Talalay의 복합방법(Chou and Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22:27-55) 및 마이크로컴퓨터 소프트웨어로 약량-효과 분석(Chou and Chou, 1987, software and manual. p19-64. Elsevier Biosoft, Cambridge, UK)을 이용하여 복합 지수를 얻는다. 복합 지수 값< 1 은 공조 효과를 나타내고, > 1 은 길항작용을 나타내며, 1은 부가 효과를 나타낸다.
이들 검사의 결과는 Pritchard와 Shipman의 방법을 이용하여 분석하였다(Pritchard and Shipman, 1990, Antiviral Research 14: 181-206). 상기 컴퓨터 프로그램은 이들 결과의 3차원 그래프를 통하여 항바이러스 물질 사이의 공조 또는 길항 작용을 측정할 수 있다.
"제약학적 수용가능한 담체" 는 활성 성분의 생물학적 활성의 효과를 간섭하지 않고 화학적으로 비활성이며 투여된 환자에 비-독성인 운반체를 의미한다.
본 명세서에서 "제약학적 수용가능한 유도체" 는 단락 5.1.2에 기술된 바와 같이 DP-178 또는 DP-107에 상응하고 개체에 상대적으로 비-독성이며 항바이러스 활성을 나타내는 유사체, 동족체 또는 이의 단편을 의미한다.
펩티드는 펩티드 결합에 의해 공유 결합된 2개이상의 아미노산으로 구성되는 유기화합물이다. 펩티드는 구성 아미노산의 수에 관하여 언급된다, 다시 말하면 디펩티드는 2개 아미노산으로 구성되고, 트리펩티드는 3개 아미노산으로 구성된다. 10개 이하의 아미노산을 포함하는 펩티드는 올리고펩티드라 하고, 10개 이상의 아미노산을 포함하는 펩티드는 폴리펩티드라 한다.
여기에 정의된 펩티드 서열은 아래와 같이 아미노산 잔기의 한문자 기호로 표시된다.
A (알라닌)
R (아르기닌)
N (아스파라긴)
D (아스파르트산)
C (시스테인)
Q (글루타민)
E (글루탐산)
G (글리신)
H (히스티딘)
I (이소루이신)
L (루이신)
K (리신)
M (메티오닌)
F (페닐알라닌)
P (프롤린)
S (세린)
T (트레오닌)
W (트립토판)
Y (티로신)
V (발린)
도 1은 HIVLAI에서 유도한 DP-178(SEQ ID:1) 아미노산 서열; HIV-1SF2(DP-185; SEQ ID:3), HIV-1RF(SEQ ID:4), HIV-1MN(SEQ ID:5)에서 유도한 DP-178 유사체; 2개 프로토타입 HIV-2 분리체의 아미노산 서열, 즉 HIV-2rod(SEQ ID: 6)와 HIV-2NIHZ(SEQ ID:7)에서 유도한 DP-178 유사체; 대조 펩티드: 스크램블 서열에서 DP-178의 아미노산 잔기를 통합하는 펩티드, DP-180(SEQ ID:2); HIV-1 세포없는 바이러스 감염을 저해하고 DP-178과 무관한 DP-118(SEQ ID:10); HIV-1 세포없는 바이러스 감염을 저해하고 DP-178과 무관한 DP-125(SEQ ID:8)(Wild et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci USA 89:10,537-10,541); DP-178과 무관한 DP-116(SEQ ID:9)은 세포-없는 바이러스 감염 검사에서 HIV-1 감염의 저해에 (-)인 것으로 밝혀졌다(Wild, et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci USA 89:10,537-10,541). 전체 도면에서, 한문자 아미노산 코드를 이용한다.
도 2는 합성 펩티드에 의한 HIV-1 세포-없는 바이러스 감염의 저해를 나타낸다. IC50은 처리되지 않은 대조와 비교할 때 감염된 세포에서 RT 생산을 50% 저해하는 펩티드 농도를 나타낸다. 대조: 처리된 배양물에서와 동일한 수준의 바이러스로 감염된 처리되지 않은 세포 배양물에 의해 생산되는 RT 수준.
도 3은 합성 펩티드 DP-178(SEQ ID:1)에 의해 HIV-1과 HIV-2 세포-없는 바이러스 감염의 저해를 나타낸다. IC50: 처리되지 않은 대조와 비교할 때 RT 생산을 50% 저해하는데 필요한 펩티드 농도. 대조: 처리된 배양물에서와 동일한 수준의 바이러스로 감염된 처리되지 않은 세포배양물에 의해 생산되는 RT 수준.
도 4는 CEM 세포에서 DP-178(SEQ ID:1)과 DP-116(SEQ ID:9)의 세포독성 연구. 세포증식 데이터를 도시한다.
도 5a-c는 DP-178-유도된 펩티드 항바이러스 데이터이다. 여기에 기재된 펩티드는 HIV-1 BRU 분리체 DP-178 영역(예로써 gp41 아미노산 잔기 615-717)의 주변 영역에서 유래되었다. 펩티드가 DP-178 점 돌연변이를 포함하는 경우에, 돌연변이된 아미노산 잔기는 짙은 배경으로 표시한다. 검사 펩티드에서 아미노- 또는 카르복시-말단기가 부가되거나 결실되는(이런 펩티드에서 발견되는 표준 아미도-와 아세틸-차단기와는 별개로) 경우에, 이런 변화를 표시한다.
도 5a에서 검사 펩티드 이름의 바로 우측 칼럼은 검사 펩티드의 크기를 나타내고, 펩티드가 DP-178 부분을 가로지르는 하나의 아미노산 펩티드 "보행(walk)"에서 유도되는 지를 나타낸다. 우측으로 바로 다음 칼럼은 검사 펩티드가 점 돌연변이를 포함하는지를 나타내고, 이의 우측 칼럼은 특정 아미노산 잔기가 DP-178-유래된 아미노산 서열에 부가되거나 이로부터 결실되는 지를 나타낸다.
도 5b는 검사 펩티드 이름의 바로 우측 칼럼은 펩티드가 DP-178 절두형인 지를 나타내고, 우측으로 바로 다음 칼럼은 펩티드가 점 돌연변이를 포함하는지를 나타내고, 이의 우측 칼럼은 펩티드가 DP-178 서열 자체에 부가되거나 이로부터 결실된 아미노산을 포함하는 지를 나타낸다.
도 5c는 펩티드 이름의 바로 우측 칼럼은 검사 펩티드가 점 돌연변이를 포함하는지를 나타내고, 이의 우측 칼럼은 아미노산 잔기가 DP-178 서열 자체에 부가되거나 이로부터 결실되는 지를 나타낸다.
도 6은 DP-107 및 DP-107 gp41 영역 절두된 펩티드 항바이러스 데이터이다. IC50은 앞서 정의된 바와 동일하고, IC50 값은 정제되지 않은 펩티드 조성물을 이용하여 IC50을 얻은 별표로 * 표시된 값을 제외하고 정제된 펩티드를 이용하여 수득하였다.
도 7은 원숭이 면역결핍 바이러스(SIV) TM(융합) 단백질 DP-178-유사 영역 항바이러스 데이터를 나타낸다. "NT"는 검사하지 않음.
본 발명은 사람을 포함한 포유류에서 HIV 감염을 치료하는 방법에 관하는데, 상기 방법은 DP-107, DP-178 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량 및 적어도 하나의 다른 치료요법제의 효과량을 투여하는 것으로 구성된다. 적절하게는, 치료요법제는 다른 항바이러스 물질이다.
본 발명은 바이러스감염, 특히 HIV 감염의 개선된 치료요법을 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 DP-107, DP-178 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량 및 바이러스 질환의 치료에 이용가능한 폭넓은 항바이러스 화합물중 적어도 한가지 치료요법제의 효과량으로 구성된 HIV 감염 치료용 조성물을 제공한다. 적절하게는, DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체는 레트로바이러스 저해물질, 바이러스 프로테아제 저해물질, 사이토킨 또는 사이토킨 저해물질, 또는 바이러스 융합 저해물질과 병용된다. 본 발명의 조성물은 바이러스 활성을 저해하거나 바이러스 발현을 저해하거나 또는 바이러스 전염을 저해하는데 충분한 양으로 환자에 투여된다.
본 발명의 방법에는 DP-178, DP-107, 적어도 하나의 다른 치료요법제를 예로써 혼합물로 동시에 또는 별도 화합물로 동시에, 순차적으로 또는 교대로 투여하는 치료요법을 포함한다. 교대 치료요법이란 일정 기간동안 제 1 항바이러스 화합물을 투여하고, 이후 일정 기간동안 제 2 항바이러스 화합물을 투여하며, 이런 순차적 투여를 반복하여 치료요법에 대한 저항성 발생을 감소시키는 치료요법을 의미한다. 또한, 본 발명은 본 발명의 제 1 펩티드를 투여하고, 이후 다른 항바이러스제를 투여하며, 그 다음 본 발명의 다른 펩티드를 투여하여 양 바이러스 융합 저해물질 DP-107과 DP-178 또는 이의 유도체를 다른 항바이러스 물질과 병용하는 교대 치료요법을 포함한다. 또한, 본 발명은 DP-178과 상기 펩티드, 예를 들면 DP-107의 병용을 포함한다.
DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체 및 한가지이상 치료제의 "복합" 투여는 양 치료제가 동일 개체의 정맥내로 치료 혼합물로 동시에 투여되거나 별개 화합물로 동시에 투여되는 과정을 나타낸다. "복합" 투여에는 먼저 제공된 물질, 이후 제 2 물질의 별도 투여가 포함된다.
본 출원인의 신규한 치료요법은 다른 치료요법제와 함께 바이러스 융합을 저해하고 바이러스의 세포간 전염을 저해하는 펩티드의 병용에 관한다. 이론에 제한되지 않고, 본 발명은 HIV가 감염 첫날부터 하루 24시간 복제한다는 확신에 기초한다. 따라서, 상이한 바이러스 감염 단계에서 항바이러스 치료를 이용하는 것이 바람직하다.
본원에 개시된 복합은 바이러스 감염 제 1 단계에서 작용하는 바이러스 융합 저해물질의 제 1 용도 및 상이한 표적에 작용하는 항바이러스 물질의 병용을 나타낸다.
DP-178과 DP-107의 작용부위는 바이러스 표면에 위치하고, 자유 바이러스의 숙주 세포 감염과 바이러스의 세포간 전염을 저해한다. 따라서, 본 출원인은 상이한 표적 또는 작용 기전을 갖는 하나이상의 약물과 병용된 DP-178 또는 DP-107이 추가 또는 공조 효과를 제공한다고 생각한다. 본 발명의 이런 복합으로, 약물을 좀더 낮고 독성이 덜한 농도로 사용할 수 있다. 복합 치료요법은 항바이러스 활성에 필요한 약물의 효과량을 감소시켜 이의 독성을 줄일 뿐만 아니라 다중 기전을 통하여 바이러스를 공격함으로써 절대적인 항-바이러스 효과를 개선한다. 최종적으로, 본 발명의 이런 복합은 바이러스 저항성의 발생 기회를 우회하거나 감소시키는 수단을 제공한다.
DP-178 및/또는 DP-107과 병용되는 바람직한 치료에는 바이러스에 대한 5가지 상이한 공격 방식을 포함하지만 이들에 국한되지 않는다: 역전사효소의 저해, 바이러스 mRNA 캡핑의 저해, HIV 프로테아제의 저해, 단백질 글리코실화의 저해, 바이러스 융합의 저해. 이들 공격 양식을 이용하는 물질에는 rIFN α, rIFN β, rIFNγ와 같은 사이토킨; AZT, 3TC, D4T, ddI, 디데옥시플로오르뉴클레오시드와 같은 역전사효소 저해물질; 리바비린과 같은 바이러스 mRNA 캡핑 저해물질; ABT-538과 MK-639와 같은 HIV 프로테아제 저해물질; 항-HIV 활성이 있는 리간드-결합분자로서 암토테리신 B; 당단백질 프로세싱의 저해물질로서 카스타노스페르민이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
5.1. DP-178 또는 DP-107을 이용한 HIV 치료
5.1.1. DP-178과 DP-107 펩티드
DP-178과 DP-107은 바이러스 융합을 저해하여 강력한 항바이러스 활성을 나타내는 펩티드이다. 이들 펩티드에는 DP-178; DP-178의 gp41 유래된 36개 아미노산 펩티드, 단편 또는 유사체; DP-178에 상동한 펩티드가 포함된다. 또한, 이들 펩티드에는 HIV-1LAI 막통과 gp41 단백질의 558 내지 595 잔기에 상응하는 38개 아미노산 펩티드인 DP-107에 유사하고 다른 외피형 바이러스 단백질에 존재하는 항바이러스 활성을 나타내는 펩티드가 포함된다. 사람과 비-사람 레트로바이러스, 특히 HIV 전염의 저해물질로서 본 발명의 펩티드를 이용하는 것은 미국 특허 08/073,028(1993, 6, 7); 미국 특허 08/264,531(1994, 6, 23); 미국 특허 08/255,208(1994, 6, 7); 미국 특허 08/360,107(1994, 12, 20); 미국 특허 08/374,666(1995, 1, 27); 미국 특허 08/470,896(1995, 6, 6); 미국 특허 08/485,264(1995, 6, 7)에서 상술한다.
특정 이론에 국한되지 않고, 다음 모델은 DP-178의 강력한 항-HIV 활성을 설명하기 위함이다. 바이러스 단백질, gp41에서 DP-178은 gp41-엑토도메인의 C-말단에 위치하는 추정 α-나선 영역에 상응하고, DP-107로 지칭되는 꼬인-코일 구조인 루이신 지퍼 모티프에 의해 상호작용구조가 영향을 받는 gp41상의 원부와 연관하는 것으로 보인다. 이들 두 도메인의 연관은 융합 과정에서 초기에 관여하는 분자 연결 또는 "분자 걸쇠" 를 반영한다. 루이신 지퍼 모티프는 막 융합에 관여하고, C-말단 α-나선 모티프는 바이러스 유도된 막 융합동안에 루이신 지퍼의 이용성을 조절하는 분자 안정 기전으로 작용하는 것으로 보인다.
펩티드로 합성된 DP-107과 DP-178은 바이러스 gp41과 복합체를 형성하는 능력 및 이의 융합과정의 간섭에 의해 HIV 감염과 융합의 강력한 저해제이다; 예로써, 고유 구조에서 융합 상태로의 바이러스 단백질의 구조적 전이동안에 DP-178과 DP-107 펩티드는 바이러스 gp41에서 개별 결합 부위에 접근하고 분열 효과를 발휘한다.
DP-107과 DP-178 도메인을 포함하는 gp41의 엑토도메인(gp41의 융합펩티드, 막통과 영역, 세포질 도메인을 제외)에 상응하는 절두형 재조합 gp41 단백질은 HIV-1 유도성 융합을 저해하지 않았다. 하지만, DP-107 도메인의 꼬인-코일 구조를 파괴시키는 단일 돌연변이 - DP-107 펩티드의 생물학적 활성의 전체 손실을 결과하는 돌연변이 -가 도입된 경우에, 비활성 재조합 단백질은 HIV-1 유도된 융합의 활성 저해물질로 변환되었다. 이런 변환은 DP-107 도메인인 루이신 지퍼로 분자 걸쇠로부터 강력한 DP-178 도메인을 해방시킴으로 발생할 수 있다.
본 발명의 펩티드 DP-178은 HIV-1LAI 분리체에서 막통과 단백질 gp41의 아미노산 638 내지 673에 상응하고, 36개 아미노산 서열을 가진다(아미노 말단에서 카르복시 말단으로): NH2-YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF-COOH(SEQ ID: 1).
DP-178은 본 출원인의 동시계속 출원 08/470,896(1995, 6, 6); 08/374,666(1995, 1, 27); 08/264,531(1994, 6, 23); 08/255,208(1994, 6, 7)에서도 상술한다.
전장 DP-178(SEQ ID:1) 36-mer에 추가하여, 본 발명의 펩티드는 항바이러스 활성을 나타내는 DP-178(SEQ ID:1) 펩티드의 절두형을 포함한다. 이런 절두된 DP-178(SEQ ID:1) 펩티드는 3개 내지 36개 아미노산 잔기(예로써, 트리펩티드에서 36-mer 폴리펩티드 범위의 펩티드)로 구성되는데, 여기에는 하기 표 1과 2에 기재된 것들이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 이들 표에서 펩티드 서열은 아미노(좌)에서 카르복시(우) 말단으로 기재한다. "X" 는 아미노기(-NH2)를 나타내고, "Z" 는 카르복실기(-COOH)를 나타낸다. 대안으로, "X" 및/또는 "Z" 는 소수성기, 아세틸기, FMOC기, 아미도기, 또는 공유 부착된 거대분자를 나타낸다.
DP-107은 강력한 항바이러스 활성을 나타내는 HIV-1LAI 막통과(TM) gp41 단백질의 잔기 558과 595에 상응하는 38개 아미노산 펩티드이다. DP-107은 HIV-1-유래된 항-바이러스성 펩티드이고, 또한 다른 비-HIV-1 외피 바이러스에서도 발견될 수 있다. DP-107은 본 출원인의 동시계속 출원 08/470,896(1995, 6, 6); 08/374,666(1995, 1, 27); 08/264,531(1994, 6, 23); 08/255,208(1994, 6, 7)에서 상술한다.
DP-107 또는 DP-178 절두형의 결실 또한 본 발명에 속한다. 이런 결실은 DP-107 또는 DP-107-유도체 펩티드 서열에서 하나이상 아미노산의 제거로 구성되는데, 생성 펩티드 서열의 하한 길이는 4 내지 6개 아미노산이다. 이런 결실은 펩티드 서열의 단일 인접하거나 하나이상 분리된 부분을 포함한다. 하나이상의 이런 결실이 DP-107 또는 DP-107 절두형에 도입될 수 있는데, 이런 결실은 본원에 기술된 107x178x4, ALLMOTI5 또는 PLZIP 조사 모티프에 의해 인지되거나, 항융합성 또는 항바이러스성 활성을 나타내거나, 또는 꼬인-코일 펩티드 구조와 관련된 세포내 과정을 조절하는 능력을 나타내는 펩티드를 결과해야 한다.
DP-107과 DP-107 절두형은 본 출원인의 동시계속 출원 08/374,666 (1995, 1, 27)에 더욱 상세히 설명한다.
한문자 아미노산 코드를 사용한다.
"X"는 아미노기; 카르보젠조옥실, 단실 또는 T-부틸옥시카르보닐을 포함한 소수성기; 아세틸기; 9-플로오레닐메톡시-카르보닐(FMOC)기; 지질-지방산 공액체, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 탄수화물을 포함하지만 이에 국한되지 않는 거대분자 운반기를 나타낸다.
"Z"는 카르복실기; 아미노기; T-부틸옥시카르보닐기; 지질-지방산 공액체, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 탄수화물을 포함하지만 이에 국한되지 않는 거대분자 운반기를 나타낸다.
한문자 아미노산 코드를 사용한다.
"X"는 아미노기; 카르보젠조옥실, 단실 또는 T-부틸옥시카르보닐을 포함한 소수성기; 아세틸기; 9-플로오레닐메톡시-카르보닐(FMOC)기; 지질-지방산 공액체, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 탄수화물을 포함하지만 이에 국한되지 않는 거대분자 운반기를 나타낸다.
"Z"는 카르복실기; 아미노기; T-부틸옥시카르보닐기; 지질-지방산 공액체, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 탄수화물을 포함하지만 이에 국한되지 않는 거대분자 운반기를 나타낸다.
5.1.2. DP-178과 DP-107 유사체와 동족체
본 발명의 항바이러스 펩티드는 DP-178(SEQ ID:1) 서열을 포함하는 펩티드, 또는 하나이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 보유하는 DP-178 절두형 서열을 포함하지만 이에 국한되지 않는 DP-178 및/또는 DP-178 절두형 유사체를 포함한다. 하기에서 설명하는 DP-178 동족체의 유사체 역시 본 발명의 영역에 속한다. 본 발명의 DP-178 유사체는 항바이러스 활성을 나타내고, 증가된 생체이용성, 안정성 또는 감소된 숙주 면역 인지와 같은 유익한 특징을 추가로 갖는다.
HIV-1과 HIV-2 외피 단백질은 구조적으로 구별되지만, HIV-1과 HIV-2의 DP-178-상응하는 영역내에 상당한 아미노산 보존이 나타난다. 아미노산 보존은 주기적인 특징인데, 이는 구조 또는 기능의 일부 보존을 의미한다. 따라서, 아미노산 치환의 가능한 종류는 본 발명에 따른 DP-178 펩티드의 구조를 안정화시킬 것으로 예상되는 아미노산 변화를 포함한다.
아미노산 치환은 보존되거나 보존되지 않은 특징일 수 있다. 보존된 아미노산 치환은 예로써, 글루탐산(E)에서 아스파르트산(D)으로 아미노산 치환과 같은 유사한 하전, 크기 및/또는 소수성의 아미노산으로 DP-178(SEQ ID:1) 펩티드 서열의 하나이상 아미노산을 대체하는 것이다. 보존된 치환만 진행되는 경우에 생성 펩티드는 DP-178(SEQ ID:1) 또는 이로부터 유도된 DP-178 펩티드에 기능적으로 등가이다. 비-보존된 치환은 예로써, 글루탐산(E)에서 발린(V)으로 아미노산 치환과 같은 상이한 하전, 크기 또는 소수성의 아미노산으로 DP-178(SEQ ID:1) 펩티드 서열의 하나이상 아미노산을 대체하는 것이다.
아미노산 삽입은 2 내지 15개 아미노산 길이의 잔기 또는 단일 아미노산 잔기로 구성된다. 하나이상의 삽입은 DP-178(SEQ ID:1), DP-178 단편, 유사체 또는 동족체로 도입될 수 있다.
DP-178(SEQ ID:1), 단편, 유사체 또는 동족체의 결실 역시 본 발명의 영역에 속한다. 이런 결실은 DP-178 또는 DP-178-유도체 펩티드 서열에서 하나이상 아미노산의 제거로 구성되는데, 생성 펩티드 서열의 하한 길이는 4 내지 6개 아미노산이다. 이런 결실은 펩티드 서열의 단일 인접하거나 하나이상 분리된 부분을 포함한다.
본 발명의 펩티드에는 항바이러스 활성을 나타내는 DP-178(SEQ ID:1) 또는 DP-178 절두형의 유사체를 포함한다. 이런 DP-178 유사체는 DP-178(SEQ ID:1)이 유래되는 gp41 펩티드 부분에 상응하는 다른(비-HIV-1LAI) 바이러스의 펩티드 영역의 아미노산 서열로 구성된다. 이런 바이러스에는 다른 HIV-1 분리체와 HIV-2 분리체가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 다른(비-HIV-1LAI) HIV-1 분리체의 상응하는 gp41 펩티드 영역으로부터 유래된 DP-178 유사체는 예로써 하기의 펩티드 서열을 포함한다.
SEQ ID:3(DP-185), SEQ ID:4, SEQ ID:5는 각각 HIV-1SF2, HIV-1RF, HIV-1MN 분리체로부터 유래된다. 밑줄로 표시된 아미노산 잔기는 DP-178(SEQ ID:1) 펩티드에 상응하는 위치와 차별되는 잔기를 의미한다. 이런 DP-178 동족체중 하나인 DP-185(SEQ ID:3)는 하기 단락 6에서 작업 실시예로 제시되는데, 여기서 DP-185(SEQ ID:3)는 항바이러스 활성을 나타낸다. 또한, 본 발명의 DP-178 동족체는 앞서 밝힌 절두, 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 포함할 수 있다.
이에 더하여, 도 1에서 도시된 바와 같이 DP-178 서열에 상응하는 HIV-1과 HIV-2 분리체의 영역내에 놀랄만한 유사성이 존재한다. HIV-2NIHZ 분리체로부터 유래된 DP-178 동족체는 36개 아미노산 서열을 갖는다(아미노 말단에서 C-말단으로).
표 3과 4에서는 HIV-2MIHZ DP-178 동족체의 일부 가능 절두형을 보여주는데, 이들은 3개 내지 36개 아미노산의 펩티드(즉, 트리펩티드에서 36mer 폴리펩티드 크기의 펩티드)로 구성된다. 이들 표에서 펩티드 서열은 아미노(좌)에서 카르복시(우) 말단으로 기재한다. "X" 는 아미노기(-NH2)를 나타내고, "Z" 는 카르복실기(-COOH)를 나타낸다. 대안으로, "X" 및/또는 "Z" 는 소수성기, 아세틸기, FMOC기, 아미도기, 또는 공유 부착된 거대분자를 나타낸다.
한문자 아미노산 코드를 사용한다.
"X"는 아미노기; 카르보젠조옥실, 단실 또는 T-부틸옥시카르보닐을 포함한 소수성기; 아세틸기; 9-플로오레닐메톡시-카르보닐(FMOC)기; 지질-지방산 공액체, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 탄수화물을 포함하지만 이에 국한되지 않는 거대분자 운반기를 나타낸다.
"Z"는 카르복실기; 아미노기; T-부틸옥시카르보닐기; 지질-지방산 공액체, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 탄수화물을 포함하지만 이에 국한되지 않는 거대분자 운반기를 나타낸다.
한문자 아미노산 코드를 사용한다.
"X"는 아미노기; 카르보젠조옥실, 단실 또는 T-부틸옥시카르보닐을 포함한 소수성기; 아세틸기, 9-플로오레닐메톡시-카르보닐(FMOC)기; 지질-지방산 공액체, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 탄수화물을 포함하지만 이에 국한되지 않는 거대분자 운반기를 나타낸다.
"Z"는 카르복실기; 아미노기; T-부틸옥시카르보닐기; 지질-지방산 공액체, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 탄수화물을 포함하지만 이에 국한되지 않는 거대분자 운반기를 나타낸다.
5.1.3. DP-178과 DP-107의 준비.
본 발명의 펩티드는 당분야에 공지된 기술로 합성하거나 준비할 수 있다(Creighton, 1983, Proteins: Structures and Molecular Principles, W.H. Freeman and Co., NY). 가령, 짧은 펩티드는 고형 서포트 또는 용액에서 합성할 수 있다. 긴 펩티드는 재조합 기술을 이용하여 만들 수 있다. 본 발명의 펩티드를 인코드하는 뉴클레오티드 서열은 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 합성하고, 클론하고, 발현시킬 수 있다(Sambrook, et al., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Press, NY).
대안으로, 본 발명의 펩티드는 펩티드의 아미노산 잔기를 연결하는 하나이상의 결합이 비-펩티드 결합이 되도록 합성할 수 있다. 이들 비-펩티드 결합은 당업자에게 공지된 반응을 이용하여 만들 수 있는데, 여기에는 이미노, 에스테르, 하이드라지드, 세미카르바지드, 아조 결합이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 전술한 서열을 포함하는 펩티드는 펩티드의 안정성, 생체이용성 또는 저해활성이 강화되도록 아미노 또는 카르복시 말단에 존재하는 다른 화학 작용기를 이용하여 합성할 수 있다. 가령, 카르보벤조실, 단실 또는 t-부틸옥시카르보닐기와 같은 소수성기가 펩티드의 아미노 말단에 추가될 수 있다. 유사하게, 아세틸기 또는 9-플로렌일메톡시-카르보닐기가 펩티드의 아미노 말단에 위치될 수 있다(표 1-5에서 "X" ). 또한, 소수성기, t-부틸옥시카르보닐 또는 아미도기는 펩티드의 카르복시 말단에 추가될 수 있다(표 1-4에서 "Z" ). 또한, 본 발명의 펩티드는 공간적 형태가 변화되도록 합성할 수 있다. 가령, 통상적인 L-이성체가 아닌 펩티드의 아미노산 잔기의 하나이상 D-이성체를 이용한다. 또한, 본 발명에 따른 펩티드의 아미노산 잔기의 적어도 하나는 널리 알려진 자연적으로 발생되지 않는 아미노산 잔기로 치환될 수 있다. 이런 변형은 본 발명에 따른 펩티드의 안정성, 생체이용성 또는 저해작용을 증가시킨다.
추가로, 전술한 펩티드중 하나는 아미노 또는 카르복시 말단에 공유 결합된 비-펩티드 거대분자 운반기를 보유할 수 있다. 이런 거대분자 운반기에는 지질-지방산 공액체, 폴리에틸렌 글리콜 또는 탄수화물이 포함된다. DP-178과 DP-107의 절두형, 유사체, 동족체는 본 출원인의 동시계속 출원 08/073,028(1993, 6, 7); 08/264,531(1994, 6, 23); 08/255,208 (1994, 6, 7); 08/360,107(1994, 12, 20)에서 충분히 설명한다.
5.1.4. 본 발명에 따른 펩티드의 치료요법적 용도
본 발명의 DP-178(SEQ ID:1), DP-178 단편, 유사체, 동족체는 강력한 항바이러스 활성을 갖는다. 적절하게는, 본 발명의 DP-107-유도체 펩티드와 DP-178-유도체 펩티드는 항바이러스성 활성을 가진다. 이와 같이, 본 발명의 펩티드는 사람과 비-사람 바이러스와 레트로바이러스, 특히 HIV가 감염되지 않은 세포로 전염되는 것을 저해하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 펩티드에 의해 전염이 저해되는 사람 레트로바이러스에는 HIV-1과 HIV-2의 모든 균주 및 사람 T-임파세포 바이러스(HTLV-Ⅰ과 Ⅱ)가 포함되지만 이에 국한되지 않는다. 본 발명의 펩티드에 의해 전염이 저해되는 비-사람 레트로바이러스에는 소 백혈증 바이러스, 고양이 육종과 백혈병 바이러스, 원숭이 면역결핍바이러스, 육종과 백혈병 바이러스, 양 진행성 폐렴 바이러스가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
본 발명의 펩티드에 의해 전염이 저해되는 비-레트로바이러스성 바이러스에는 사람 호흡기 합체 바이러스, 고양이 디스템퍼 바이러스, 뉴캐슬 질병 바이러스, 사람 파라인플루엔자 바이러스, 인플루엔자 바이러스가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
본 발명은 복합 치료요법에서 펩티드를 이용한 상기 레트로바이러스성 바이러스와 비-레트로바이러스성 바이러스의 치료를 포함한다.
5.2. DP-178 또는 DP-107과 병용되는 항바이러스성 물질
본 발명에 따라, DP-178 또는 DP-107 바이러스 융합 저해물질은 달성되는 항바이러스 효과를 개선시키기 위하여 다른 치료요법제와 병용될 수 있다. 적절하게는, DP-178 또는 DP-107은 다른 항바이러스성 물질과 병용될 수 있다. DP-178 또는 DP-107과 병용될 수 있는 다른 항바이러스 물질에는 바이러스 복제와 관련된 상이한 표적 분자에 기능하는 물질, 예를 들면 역전사효소 저해물질, 바이러스 프로테아제 저해물질, 글리코실화 저해물질; 바이러스 전염에 관련된 상이한 표적 분자에 작용하는 물질; 동일 분자에서 상이한 위치에 작용하는 물질; 바이러스 저항성의 발생을 저해하거나 감소시킬 수 있는 물질이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 당업자는 이런 활성을 나타내는 다양한 항바이러스성 치료요법을 잘 알고 있을 것이다.
DP-178 또는 DP-107, 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체는 뉴클레오시드 유도체와 같은 레트로바이러스 저해물질과 병용될 수도 있다. 뉴클레오시드 유도체는 RNA와 DNA의 빌딩 블럭인 퓨린과 피리미딘 뉴클레오시드의 변형 형태이다. 강력한 항-HIV 약물로서 연구중인 뉴클레오시드 유도체의 대부분은 전체 게놈이 전사되기에 앞서 바이러스 DNA 복제의 조기 종결을 유도한다. 이들 유도체는 후속 뉴클레오시드에 결합할 수 있는 3' 치환체가 부재하고, 이로 인하여 사슬 형성이 종결된다. 3'아지도-3'-티미딘(AZT)과 디데옥시이노신(ddI)과 같은 뉴클레오시드 유도체는 시험관내와 생체내에서 HIV-1 복제 저해물질로서 연구되었다. 뉴클레오시드 유사체는 HIV 감염과 AIDS 치료에 유일하게 승인된 치료제이다(Fischl et al., 1987 N. Engl. J. Med. 317, 185-191; Mitsuya and Broder, 1987 Nature 325, 773-778). 이런 화합물은 역전사효소를 저해하여, cDNA 합성을 차단하는 기능을 한다(Mitsuya and Broder, 1987). 이들 저해물질은 HIV-1의 감염 주기에서 초기에 작용하여 T-세포 게놈에 통합을 저해한다. 하지만, AZT 치료요법은 저항성 HIV 균주의 발생을 유발하고(Larder 1989, 1991, Ibid) 장기간 치료에서 AIDS 환자에 독성을 나타낸다(Fischl et al., 1987, N. Engl. J. Med. 317:185-191; Creagh-Kirk, et al., 1988, J.A.M.A. 260:3045-3048).
또한, DP-178 또는 DP-107, 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체에는 아래와 같은 뉴클레오시드 유도체와 병용될 수 있다; 2',3'-디데옥시아데노신(ddA); 2',3'-디데옥시구아노신(ddG); 2',3'-디데옥시이노신(ddI); 2',3'-디데옥시시티딘(ddC); 2',3'-디데옥시티미딘(ddT); 2',3'-디데옥시-디데옥시티미딘(d4T); 3'-아지도-2',3'-디데옥시티미딘(AZT). 대안으로, 할로겐화된 뉴클레오시드 유도체, 예를들면 2',3'-디데옥시-2'-플루오르아데노신; 2',3'-디데옥시-2'-플루오르이노신; 2',3'-디데옥시-2'-플루오르티미딘; 2',3'-디데옥시-2'-플로로시토신을 포함하지만 이들에 국한되지 않는 2',3'-디데옥시-2'-플루오르뉴클레오시드; 2',3'-디데옥시-2',3'-디데하이드로-2'-플루오르티미딘(Fd4T)을 포함하지만 이들에 국한되지 않는 2',3'-디데옥시-2',3'-디데하이드로-2'-플루오르뉴클레오시드가 이용될 수 있다. 적절하게는, 본 발명의 2',3'-디데옥시-2'-플루오르뉴클레오시드에는 플루오르 연결이 베타 형태로 존재하는 2',3'-디데옥시-2'-베타-플루오르아데노신(F-ddA), 2',3'-디데옥시-2'-베타-플루오르이노신(F-ddI), 2',3'-디데옥시-2'-베타-플로로시토신(F-ddC)이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 이런 복합된 조성물을 이용하면 뉴클레오시드 유도체의 약량을 줄임으로써 이런 물질과 연관된 독성을 감소시킬 수 있고, 동시에 항바이러스성 펩티드의 사용으로 인하여 항바이러스성 활성을 상실하지 않는다. 게다가, 이런 복합된 조성물은 바이러스 저항성을 줄이거나 회피한다.
본 발명에서 항바이러스성 펩티드와 뉴클레오시드 유도체의 바람직한 복합에는 DP-107, DP-178 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량과 HIV 감염을 치료하기 위한 AZT의 효과량; 및 DP-107, DP-178 또는 이의 제약학적 유도체의 효과량과 ddI의 효과량이 포함된다.
본 발명에 따라, DP-178 또는 DP-107, 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체는 벤질아사이클로우리딘(BAU); 벤질옥시벤질아사이클로우리딘(BBAU); 아미노메틸-벤질아사이클로우리딘(AMBAU); 아미노메틸-벤질옥시벤질아사이클로우리딘(AMB-BAU); 하이드록시메틸-벤질아사이클로우리딘(HMBAU); 하이드록시메틸-벤질옥시벤질아사이클로우리딘(HMBBAU)을 포함한 아사이클로우리딘 화합물을 포함하지만 이에 국한되지 않는 우리딘 포스포릴라제 저해물질과도 병용될 수 있다.
본 발명에 따라, DP-178 또는 DP-107, 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체는 rIFNα, rIFNβ, rIFNγ, TNFα의 저해물질, MNX-160을 포함하지만 이들에 국한되지 않는 사이토킨이나 사이토킨 저해물질과도 병용될 수 있다. 사람 rIFN-αA(>108 IU/mg)와 rIFNγ(1.4 x 108 IU/mg)는 Hoffman LaRoche에서 구한다. 사람 rIFN β Ser 17(1.0 x 108 IU/mg)은 Trifon Biosciences에서 구할 수 있다. 참고 표준은 WHO(사람 IFNα WHO 표준 B,69,19와 사람 IFN β, WHO no. G-023-902-527), 또는 National Institute of Allergy and Infectious Disease(human γ, National Institute of Health no. G-023-901-530)에서 구한다.
본 발명에 따라, DP-178 또는 DP-107, 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체는 MK-639(Merck), 인비라제(사퀴나비르, Roche), ABT-538(Abbott, CAS Reg. No 155213-67-5), AG1343, VX-478(Burroughs Wellcome/Glaxo, CAS Reg, No. 161814-49-9), DMP450, SC-52151(Telinavir)을 포함하지만 이들에 국한되지 않는 바이러스성 프로테아제 저해물질과 병용할 수 있다. 프로테아제 저해물질은 합체(바이러스 발아)동안 또는 합체이후에 주로 작용하여 바이러스가 성숙한 감염 상태로 되는 것을 저해한다. 가령, ABT-538은 시험관내에서 강력한 항바이러스 활성 및 생체에서 긍정적인 약리역학과 안정성 프로필을 갖는 것으로 나타났다(Ho, et al., 1995, Nature 373: 123-126). AIDS 환자에 ABT-538 투여는 혈장 HIV-1 수준을 급격하게 감소시키고 CD4 임파세포의 수를 실질적으로 증가시킨다. ABT-538 처리이후에 혈장 병독혈증의 급격한 감소는 자유 바이러스의 제거 및 HIV-1을 생산하는 세포의 상실을 반영하는데, 그 이유는 상기 약물이 새로운 감염을 실제 차단하기 때문이다. ABT-538 치료는 CD4 임파세포의 바이러스-매개된 파괴를 감소시킨다. HIV 감염의 초기 단계에서 바이러스 융합을 저해하는 DP-178 및/또는 DP-107과 이런 처리를 복합하면 공조 효과 및 상당한 임상적 충격을 주게 된다.
DP-178 또는 DP-107, 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체는 5'-mRNA 프로세싱을 간섭하는 항-HIV 약물, 예를 들면 리바비린(Ribavirin(Virazole), Viratel Inc.)과 병용할 수도 있다. 리바비린은 작용 기전이 충분히 밝혀지지는 않았지만, mRNA cap 구조 형성에서 구아노신과 경쟁하거나 이들 분자의 기능적 메틸화 반응을 간섭하는 것으로 생각된다. DP-178 및/또는 DP-107에 의한 바이러스 융합의 저해를 회피하는 바이러스는 리바비린에 의해 차단되고, 따라서 DP-178 및/또는 DP-107 및 리바비린의 항-HIV 기전은 공조 효과를 나타낸다.
또한, DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체는 스테롤과 상호작용하고 이들에 비가역적으로 결합하는 폴리엔 마이크로리드 항진균성 항생제인 암포테리친 B(Gibco에서 얻은 Fungizone)와 같은 치료요법제와 병용된다. 암포테리친 B는 HIV를 포함한 다양한 지질-외피 바이러스에 활성을 갖는 독특한 물질을 대표한다. 암포테리친은 심각한 생체내 독성을 나타내지만, 상기 약물의 메틸 에스테르 형은 항-HIV 활성을 나타내고 시험관에서 낮은 세포독성 프로필을 보인다. 따라서, 암포테리친 B 또는 이의 메틸 에스테르는 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 유도체와 병용할 수 있다. 이런 복합된 조성물은 항바이러스 활성을 상실하지 않으면서 좀더 낮은, 다시 말하면 독성이 좀더 적은 약량의 암포테리친 B 또는 이의 메틸 에스테르를 이용할 수 있도록 하는데, 그 이유는 항바이러스 펩티드 DP-178 또는 DP-107과 병용되기 때문이다.
본 발명에 따라, DP-178 또는 DP-107, 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체는 카스타노스페르민(Boehringer Mannheim)과 같은 당단백질 프로세싱의 저해물질과 병용할 수도 있다. 카스타노스페르민은 당단백질 프로세싱을 저해하는 식물 알칼로이드이며, HIV가 2개의 글리코실화된 단백질 gp120과 gp41을 보유하기 때문에 항-HIV로 작용한다. 단백질 글리코실화는 CD4와 gp120의 상호작용에 중요한 역할을 한다. 카스타노스페르민의 존재하에 합성된 후손 비리온에 의한 감염 조건하에서 HIV의 감염성은 약화되었다. 따라서, 카스타노스페르민과 복합된 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체는 바이러스 진입을 공조 저해함으로써 감염을 약화시키는 작용을 한다.
HIV를 치료하는 방법에 이용되는 바람직한 복합은 DP-107, DP-108 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량 및 ddI의 효과량: DP-107, DP-178 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량 및 3TC의 효과량: DP-107, DP-178 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량 및 리바비린 효과량을 이용하는 것이다.
HIV를 치료하는 방법에 이용되는 다른 바람직한 복합은 DP-107, DP-178 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량 및 베타-인터페론의 효과량을 이용하는 것이다.
HIV를 치료하는 방법에 이용되는 또 다른 복합은 DP-107, DP-178 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 효과량 및 프로테아제 저해물질의 효과량을 이용하는 것이다.
전술한 항바이러스성 치료요법제와 복합된 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 치료요법적 효과를 평가하기 위하여, 이들 복합된 조성물은 당분야에 공지된 방법에 따라 항바이러스 활성을 검사할 수 있다. 가령, 실시예 6에서 상술하는 바와 같이, HIV 세포독성, 합체 형성, 역전사효소 활성, 또는 바이러스성 RNA 또는 단백질의 생성을 저해하는 DP-178과 AZT 복합된 조성물의 능력을 시험관내에서 검사할 수 있다.
5.2.1. HIV-저해성 복합 조성물의 치료요법적 용도
전술한 바와 같은 개량되거나 공조된 DP-178 또는 DP-107 복합 치료요법은 합체 형성과 HIV 비리온 생산을 방지하여 노출된 환자에서 HIV 진행을 저해하기 위하여 본 발명에 따라 생체내에 이용할 수 있다. 본 발명의 복합 치료요법은 HIV-감염된 면역억제된 환자의 질병을 치료하거나 예방하는 데에도 유용하다. 가령, 항바이러스성 펩티드 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체는 HBV, EBV, CMV 및 TB를 비롯한 다른 기회적 감염에 항바이러스 효과를 나타내는 항진균제와 병용할 수 있다.
적절하게는, 본 발명의 항-바이러스성 펩티드인 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 유도체는 HIV 감염에 대하여 이용된다. 하기에서 상술하는 복합 치료요법의 효과량은 적절한 약리학적 담체에 제제화되고, 주사(예, 정맥내, 복막내, 근육내, 피하 등), 상피 또는 점막피부 내막을 통한 흡수(예, 구강 점막, 직장과 질상피 내막, 비인두 점막, 내장 점막 등); 경구, 경피 또는 제약분야에서 이용가능한 다른 수단 등을 포함하지만 이들에 국한되지 않는 수단에 의해 투여될 수 있다.
5.3. 제약학적 제제화, 약량 및 투여방식
5.3.1. 제약학적 조성물
사람에게 바이러스 감염의 치료 또는 예방에 유용한 본 발명의 제약학적 조성물은 활성 성분인 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체 및 적어도 한가지의 다른 치료요법제를 함유한다. 본 발명의 제약학적 조성물은 부가 및/또는 공조 효과를 보이는 복합 치료요법을 제공한다.
적절하게는, DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체를 함유하는 제약학적 조성물은 역전사효소 저해물질, 프로테아제 저해물질, mRNA 프로세싱 저해물질, 단백질 글리코실화의 저해물질, 바이러스 융합 저해물질과 같은 적어도 하나의 다른 항바이러스 물질을 함유한다. 이런 물질에는 뉴클레오시드 유사체 또는 사슬 종결인자(디데옥시뉴클레오시드)가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
본 발명에서 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체와 병용될 수 있는 다른 적절한 치료요법제에는 2-데옥시-D-글루코오스(2-dGlc), 데옥시노지리마이신, 아사이클로구아노신, 리바비린(비라졸), 리팜피신(리파딘), 아다만티딘, 리파부틴, 간시클로버(DHPG), 플루오르요오드아라시토신, 이도슈린, 트리플루오로티미딘, 아데닌 아라비노시드(ara-A), ara-AMP, 브로모비닐데옥시우리딘, 브로모비닐아라우라실(BV-araU)(Bristol-Meyers Squibb(1-베타-D-아라비노푸라노시드-E-5-[2-브로모비닐]우라실)) 라만타딘, 아릴돈, 디아릴아미딘, (S)-(p-니트로벤질-)6-티오이노신, 포스포노프르메이트가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
본 발명의 신규한 제약학적 조성물에는 DP-178, DP-107, 이의 제약학적 유도체 및 라팜피신(리파딘); DP-178 또는 DP-107 및 AZT; DP-178 또는 DP-107 및 ddI; DP-178 또는 DP-107 및 ddC; DP-178 또는 DP-107 및 아다만티딘; DP-178 또는 DP-107 및 아사이클로구아노신; DP-178 또는 DP-107 및 2-데옥시-D-글루코오스; DP-178 또는 DP-107 및 데옥시노지리마이신; DP-178 또는 DP-107 및 인터페론-α; DP-178 또는 DP-107 및 간시클로버가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 본 발명은 또한 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체 및 선택적으로 하나이상의 다른 치료요법적 화합물을 포함하는 제약학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 펩티드는 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 투여할 수 있다. 적절하게는, 약물은 제제화되고 전신 투여된다. 제제화와 투여 기술은 "Remington's Pharmaceutical Sciences" , 18th ed., 1990, Mack Publishing Co., Easton, PA.에서 확인할 수 있다. 적절한 경로에는 경구, 직장, 경점막 또는 장내 투여; 비경구 전달, 예를 들면 근육내, 피하, 수내에 주사, 또는 척수강내, 직접 심실내, 정맥내, 복막내, 비강내 또는 안구내 주사가 포함된다. 가장 바람직한 투여는 정맥 투여이다. 주사용으로 본 발명의 물질은 수용액, 적절하게는 생리적합성 완충액, 예를 들면 Hank 용액, 링거액 또는 생리 식염수에서 제제화될 수 있다. 경점막 투여의 경우에, 장벽을 적절히 투과하는 침투물질을 제제화에 이용할 수 있다. 이런 침투물질은 당분야에 공지되어 있다.
이에 더하여, 이들 펩티드는 HIV 바이러스에 대한 급성 노출이후에 이전에 감염되지 않았던 개체에서 예방적 척도로 이용될 수 있다. 이들 펩티드의 이런 예방적 용도의 실례는 모체에서 태아 및 HIV 전염의 가능성이 존재하는 다른 환경으로 전염, 예를들면 작업자가 HIV-포함 혈액 산물에 노출되는 보건 관리 환경에서 사건을 예방하는 것이다. 이런 경우에 본 발명의 펩티드는 예방 백신의 역할을 하는데, 이때 숙주에서는 본 발명의 펩티드에 대한 항체가 생성되고, 상기 항체는 예로써 추가적인 HIV 감염을 저해함으로써 HIV 바이러스를 중화시키는 작용을 한다. 이런 이유로, 예방적 백신으로서 본 발명에 따른 펩티드의 투여는 세포를 감염시키는 HIV 능력을 저해함으로써 HIV를 중화시키는 충분한 면역 반응을 생성시키는데 효과적인 농도의 펩티드를 숙주에 투여하는 것으로 구성된다. 정확한 농도는 투여될 특정 펩티드에 따라 달라지지만, 당업자에게 널리 공지된 면역반응의 발생을 분석하는 표준 기술을 이용하여 결정할 수 있다.
면역학적 반응을 강화시키기 위하여, 이들 펩티드는 적절한 어쥬번트와 함께 제제화될 수 있다. 이런 어쥬번트에는 수산화알루미늄과 같은 미네랄 겔; 리졸레시틴, 플루로닉 폴리올, 폴리음이온과 같은 표면 활성 물질; 다른 펩티드; 오일 유제; BCG와 코리네박테리아 파르붐(Corynebacterium parvum)과 같은 유용한 사람 어쥬번트 등이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 여기에 상술된 백신 조성물을 도입하는 데에는 많은 방법이 이용될 수 있다. 이들 방법에는 경구, 피내, 근육내, 복막내, 정맥내, 피하, 비강 경로가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
투여되는 본 발명에 따른 펩티드의 효과량은 생물학적 반감기, 생체이용성, 독성과 같은 변수를 해결하는 당업자에게 널리 공지된 과정을 통하여 결정할 수 있다. 하기 실시예 6에 제시된 데이터에서는 DP-178이 펩티드 ㎖당 10 ng의 순환수준을 달성하는데 요구되는 약량에서 생체내 유효함을 증명한다.
5.3.2. 약량
바이러스 감염된 사람을 비롯한 포유류를 치료하는데 있어서, DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 치료요법적으로 효과량, 다시 말하면 바이러스 복제를 저해하는데 충분한 양으로 투여한다. 가령, DP-178 또는 DP-107은 약 12주간 하루에 0.1 mg/kg 내지 1.0 mg/kg 양으로 주입 투여된다. 바람직한 약량은 약 12주동안 20 mg 내지 35 mg이다; DP-107, DP-178 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 동등한 매일 약량은 약 7 mg 내지 70 mg이다. 가장 바람직한 약량은 약 12주동안 20 mg 내지 35 mg이다. DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체는 하루에 1번 내지 하루에 4번, 적절하게는 이틀에 1번 내지 하루에 1번 간격으로 투여된다. 바람직한 약량은 DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체의 1 mg/㎖ 내지 10 mg/㎖ 혈장 농도를 달성하도록 투여된다. 이는 완충 식염수에 녹인 투여된 활성 성분의 2.0% 용액을 무균 주사하여 달성할 수 있다(화학분야의 당업자에게 공지된 임의 적절한 식염수 용액을 이용할 수 있다). 바람직한 혈액 수준은 HPLC에 의해 측정된 혈장수준에 의해 확인되는 바와 같이, DP-107 또는 DP-178의 연속 주입에 의해 유지된다.
DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체에 병용되는 치료요법제, 예를 들면 항바이러스 물질의 효과량은 다양한 항바이러스 물질에 대한 당업자에게 공지된 권고량에 기초한다. 가령, 의사용 표준 참고서에서 AZT, ddI, 인터페론-β에 대한 약량을 찾아볼 수 있다. 이에 더하여, 항바이러스제를 비롯한 다른 치료요법제에 대한 약량 역시 기존 문헌에 보고되어 있는데, 예를 들면 ABT-538은 하루 600-1,200mg/day로 경구 투여된다(Ho, et al., 1995, Nature 373:123-126). 이들 권장되거나 공지된 수준은 단락 5.4에 상술된 검사법을 이용하여 DP-178, DP-107 또는 제약학적 수용가능한 유도체와 복합하여 이들 약량의 효능을 검사한 이후에, 전술한 약량의 약 10% 내지 50%까지 낮출 수 있다. 의사는 독성, 골수, 간 또는 신장 기능이상 또는 약물-약물간 부작용으로 인하여 약량을 낮추는 치료요법을 중단하거나 종료하거나 또는 조정하는 방법과 시기를 알고 있다. 역으로, 의사는 임상 반응이 부적절한 경우에 좀더 높은 수준으로 치료를 조정할 수 있다.
치료요법적 효과량은 환자에서 증상을 개선하거나 생존을 연장시킬 만큼 충분한 양의 화합물을 말한다. 이런 화합물의 독성과 치료요법적 효능은 세포 배양물 또는 실험동물에서 예로써 LD50(집단의 50%에서 치사량)과 ED50(집단의 50%에서 치료요법적 효과량)을 결정하기 위한 표준 제약학적 과정으로 결정할 수 있다. 독성과 치료요법적 효과간 약량 비율은 치료요법적 지수이며, LD50/ED50 비율로 표시한다. 치료요법 지수가 높은 화합물이 선호된다. 이들 세포 배양물 검사와 동물 연구에서 수득된 데이터를 이용하여 사람에서 이용할 수 있는 약량 범위를 공식화할 수 있다. 적절하게는, 이런 화합물의 약량은 독성이 거의 없거나 없는 ED50을 포함하는 순환 농도 범위내에 있다. 약량은 이용된 약형 및 이용된 투여경로에 따라 상기 범위내에서 변할 수 있다. 본 발명에 따른 방법에 이용되는 화합물에서, 치료요법적 효과량은 세포 배양물 검사로 우선 산정할 수 있다. 약량은 IC50(세포 배양물 측정에서 처리되지 않은 대조와 비교하여 감염된 세포로부터 RT 생산의 1/2 최대 저해를 달성하는 검사 화합물의 농도)을 포함한 순환 혈장 농도를 얻기 위한 동물 모델에서 공식화할 수 있다. 이런 정보는 사람에서 유용한 약량을 좀더 정확하게 결정하는데 이용될 수 있다. 혈장에서 수준은 예로써 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)로 측정할 수 있다.
5.4. 제약학적 제제화 및 투여 경로
DP-178, DP-107 또는 이의 제약학적 유도체를 함유하는 제약학적 조성물은 바이러스 감염, 특히 HIV 감염을 치료하는 용량에서 상기 조성물 자체, 또는 적절한 담체 또는 부형제와 혼합된 제약학적 조성물의 형태로 사람 환자에 투여된다. 본 발명에 따른 화합물의 제제화와 투여 기술은 "Remington's Pharmaceutical Sciences" , Mack Publishing Co., Easton, PA, latest edition 에서 확인할 수 있다.
하기 단락 6에서 상술된 실시예에서 입증된 바와 같이, 본 발명에 따른 펩티드의 항바이러스 활성은 서브타입 특이성을 보인다, 다시 말하면 특이적인 펩티드는 특정 바이러스의 활성을 저해하는데 유효하다. 본 발명의 이런 특징은 많은 장점을 제공한다. 가령, 이런 한가지 장점은 진단 분야에서 바이러스 분리체의 실체를 확인하기 위하여 본 발명에 따른 펩티드의 항-바이러스성 특이성을 이용할 수 있다는 것이다. HIV에 대하여, 바이러스 분리체가 HIV-1 또는 HIV-2 균주로 구성되는 지를 용이하게 결정할 수 있다. 가령, 감염되지 않은 CD-4+ 세포는 HIV DP-178(SEQ ID:1)을 보유하는 것으로 확인된 분리체로 공동-감염시키고, 이후 예로써 단락 5.2에서 전술한 기술을 이용하여 세포 상층액의 레트로바이러스 활성을 분석한다. 레트로바이러스 활성이 완전히 또는 거의 완전히 저해된 이들 분리체는 HIV-1을 포함한다. 바이러스 활성이 변화되지 않거나 약간 감소된 이들 분리체는 HIV-1을 포함하지 않는 것으로 간주한다. 이후, 이런 분리체는 본 발명에 따른 하나이상의 다른 DP-178 펩티드로 처리하고, 후속으로 바이러스 활성을 검사하여 바이러스 분리체의 실체를 결정할 수 있다.
본 발명의 실시를 위하여 본원에 개시된 화합물을 전신 투여에 적합한 약형으로 만들기 위하여 제약학적 수용가능한 담체를 이용하는 것은 본 발명의 범위에 속한다. 담체의 선택 및 적절한 제조 실행으로, 본 발명의 조성물 특히, 용액으로 제제화된 조성물은 정맥 주사에 의해 비경구적으로 투여할 수 있다. 화합물은 당분야에 공지된 제약학적 수용가능한 담체를 이용하여 경구 투여에 적합한 약형으로 만들 수 있다. 이런 담체를 이용하여 본 발명의 화합물은 치료 환자의 경구 섭취를 위한 정제, 알약, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로 제제화할 수 있다.
가령, 적합한 투여 경로는 경구, 직장, 경점막 또는 장내 투여; 근육내, 피하, 수막내 주사 및 척수강내, 직접 심실내, 정맥내, 복막내, 비강내 또는 안구내 주사와 같은 비경구 전달; 경피, 국소, 질내 투여 등을 포함한다. 약형에는 정제, 알약, 분산액, 현탁액, 좌약, 용액, 캡슐, 크림, 패치, 미니펌프 등이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
따라서, 본 발명에 이용될 수 있는 제약학적 조성물은 제약학적으로 이용가능한 제형으로 활성 화합물의 가공을 조장할 수 있는 부형제와 보조제를 포함하는 하나 이상의 생리학적으로 수용가능한 담체를 이용하여 통상적인 방식으로 제제화 할 수 있다. 적절한 조성물은 선택된 투여경로에 따라 달라진다.
주사용으로 본 발명의 물질은 수용액, 적절하게는 Hank 용액, 링거액 또는 생리학적 염 완충액과 같은 생리학적 완충액에서 제제화될 수 있다. 경점막 투여를 위하여, 장벽을 침투하는데 적합한 침투물질이 제제화에 이용될 수 있다. 침투 물질은 당분야에 공지되어 있다.
경구 투여를 위하여, 화합물은 당분야에 널리 공지된 제약학적 수용가능한 담체와 활성 화합물을 복합하여 제제화할 수 있다. 이런 담체는 본 발명의 화합물이 치료 환자의 경구 섭취를 위한 정제, 알약, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로 제제화될 수 있도록 한다. 경구용 제약학적 조성물은 정제 또는 당의정 코어를 얻기 위하여 필요할 경우 적절한 보조제를 첨가한 이후에, 고체 부형제로 생성 혼합물을 연마하고 과립 혼합물을 처리하여 얻을 수 있다. 적절한 부형제에는 락토오스, 수크로오스, 만니톨 또는 솔비톨과 같은 당; 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 검 트라가칸스, 메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸-셀룰로오스, 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨과 같은 셀룰로오스 제형; 또는 폴리비닐피롤리돈(PVP)을 포함하는 충전물질이다. 필요한 경우, 분해제를 첨가할 수 있는데, 여기에는 교차-결합된 폴리비닐 피롤리돈, 아가, 또는 알긴산이나 이의 염, 예를 들면 알기네이트 나트륨이 포함된다.
적절한 피복으로 당의정 코어를 제공한다. 이를 위하여, 농축된 당 용액이 이용되며, 아라비아 고무, 활석, 폴리비닐 피롤리돈, 카르보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜, 이산화티타늄, 래커 용액, 적절한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 선택적으로 포함할 수 있다. 활성 화합물의 서로 다른 복합을 확인하거나 특성화하기 위하여 정제 또는 당의정에 염료 또는 안료를 첨가할 수 있다.
경구로 이용될 수 있는 제약학적 제형에는 젤라틴으로 만들어진 푸쉬-피트 캡슐, 글리세롤 또는 솔비톨과 같은 가소화제와 젤라틴으로 만들어진 연성 밀봉 캡슐이 포함된다. 푸쉬-피트 캡슐은 락토오스와 같은 충전물질, 전분과 같은 결합제, 활석, 스테아레이트 마그네슘과 같은 윤활제, 선택적으로 안정제와 혼합된 활성 성분을 함유할 수 있다. 연성 캡슐에서, 활성 화합물은 지방산, 액체 파라핀, 액체 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적정 액체에 용해되거나 현탁된다. 또한, 안정제가 첨가될 수 있다. 경구 투여용 조성물은 이런 투여에 적합한 약량으로 존재한다.
볼(buccal) 투여를 위하여, 조성물은 통상적인 방식으로 정제 또는 당과 형태를 갖는다.
흡입에 의한 투여를 위하여, 본 발명에 사용되는 화합물은 디클로로디플루오르메탄, 트리클로로플루오르메탄, 디클로로테트라플루오르에탄, 이산화탄소 또는 다른 적절한 기체와 같은 추진제를 이용하여, 가압 팩 또는 분무기로부터 에어로졸 분무 형태로 통상적으로 제공된다. 가압된 에어로졸의 경우에, 단위 약량은 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공하여 결정할 수 있다. 흡입기에서 사용할 수 있는 젤라틴 캡슐과 카트리지는 락토오스 또는 전분과 같은 적절한 분말과 화합물의 분말 혼합물을 포함하도록 제제화된다.
화합물은 거환 주사 또는 연속 주입과 같은 주사에 의한 비경구 투여용으로 제제화될 수 있다. 주사용 조성물은 첨가된 보존제와 함께 앰플 또는 다중 약량 용기의 단위 약형으로 제공될 수 있다. 조성물은 현탁액, 용액, 또는 오일이나 수용성 운반제에 녹인 유제와 같은 형태를 취하고, 현탁제, 안정제, 분산제와 같은 조성제를 함유할 수 있다.
비경구 투여용 제약학적 조성물에는 수용성 형태로 활성 화합물의 수용액이 포함된다. 또한, 활성 화합물의 현탁액은 적절한 오일성 주사용 현탁액으로 만들 수 있다. 적절한 친지성 오일 또는 운반제에는 참깨유와 같은 지방오일; 에틸 올레이트 또는 트리글리세리드와 같은 합성 지방산 에스테르; 또는 리포좀이 포함된다. 수용성 주사 현탁액은 카르복시메틸 셀룰로오즈 나트륨, 솔비톨 또는 덱스트란과 같은 현탁액의 점성을 증가시키는 물질을 함유할 수 있다. 선택적으로, 현탁액은 화합물의 용해도를 증가시켜 매우 농축된 용액의 제조를 가능하게 하는데 적합한 안정화제 또는 물질을 함유할 수 있다.
대안으로, 활성 성분은 사용에 앞서 무균의 비-발열물질 물과 같은 적절한 운반체로 재구성할 수 있는 분말 형태일 수 있다.
화합물은 코코아 버터 또는 다른 글리세리드와 같은 통상적인 좌약을 비롯한 좌약 또는 관장약과 같은 직장 조성물로 제제화될 수도 있다.
전술한 조성물 이외에, 화합물은 데포트 제형으로 제제화될 수 있다. 장기간 작용하는 조성물은 이식(예, 피하 또는 근육내) 또는 근육내 주사에 의해 투여할 수 있다. 따라서, 화합물은 적절한 중합성이나 소수성 물질(예, 수용가능한 오일에서 유제로) 또는 이온 교환 수지를 이용하여 제제화하거나, 또는 용해도가 낮은 유도체, 예를 들면 불용성 염으로 제제화될 수 있다.
본 발명의 소수성 화합물에 대한 제약학적 담체는 벤질 알코올, 비-극성 계면활성제, 물과 혼합가능한 유기 고분자, 수상을 포함하는 공용매 시스템이다. 공 용매 시스템은 VPD 공-용매 시스템이다. VPD는 3% w/v 벤질 알코올, 8% w/v 비극성 계면활성제 폴리소르베이트 80, 65% w/v 폴리에틸렌 글리콜 300을 함유하고, 나머지 용적이 절대 알코올로 구성되는 용액이다. VPD 공-용매 시스템(VPD:5w)은 수용액에서 5% 덱스트로스 수용액으로 1:1 희석된 VPD로 구성된다. 이런 공-용매 시스템은 소수성 화합물에 잘 용해되기 때문에, 전신 투여시에 낮은 독성을 나타낸다. 자연적으로, 공-용매 시스템의 비율은 용해도와 독성 특성의 변화없이 상당히 다양하게 변할 수 있다. 또한, 공용매 성분의 동일성도 변할 수 있다; 가령, 폴리소르베이트 80 대신에 다른 저-독성 비극성 계면활성제를 사용할 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜의 분별 크기가 변할 수 있다; 다른 생체적합성 고분자, 예를 들면, 폴리비닐 피롤리돈이 폴리에틸렌 글리콜을 대체할 수 있다: 다른 당이나 폴리사카라이드가 덱스트로스를 대체할 수 있다.
제약학적 조성물은 적절한 고체나 겔 상태 담체 또는 부형제를 또한 함유할 수 있다. 이런 담체 또는 부형제에는 탄산칼슘, 인산칼슘, 다양한 당, 전분, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 폴리에틸렌 글리콜과 같은 고분자가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 본 발명에 이용하는데 적합한 제약학적 조성물에는 의도한 목적을 달성하는 효과량으로 활성 성분을 함유하는 조성물이 포함된다. 효과량은 본원에 제시된 상세한 개시에 비추어, 당업자가 용이하게 결정할 수 있다.
5.5. 항바이러스 활성의 검사
본 발명의 복합 요법에 나타나는 항바이러스 활성은 하기에서 상술하는 바와 같이, 무-세포 바이러스에 의해 감염을 저해하는 능력 또는 합체 형성을 억제하는 능력을 검사할 수 있는 시험관내 검사를 실시하여 측정할 수 있다. 이들 검사를 이용하여, 펩티드의 상대적 항바이러스 활성과 같은 변수는 일정한 바이러스 균주에서 나타내고 펩티드의 균주 특이적 저해 활성을 측정할 수 있다. 세포융합검사는 시험관에서 HIV-유도된 합체 형성을 저해하는 펩티드 능력을 검사하는데 이용될 수 있다. 이런 검사는 만성적으로 HIV-감염된 세포와 검사 치료제의 존재하에 감염되지 않은 CD-4+ 세포(예, Molt 또는 CEM 세포)를 배양하는 단계로 구성된다. 각 복합 요법에서, 농도 범위를 테스트할 수 있다. 상기 범위는 펩티드가 첨가되지 않은 대조 배양물도 포함한다. 당업자에게 공지된 표준 배양 조건을 이용한다. 적정 기간(37℃, 24h)동안 배양한 이후, 배양물은 다핵 거대세포의 존재를 현미경으로 검사하는데, 이의 존재는 세포 융합과 합체 형성을 지시한다.
역전사효소(RT) 검사는 다른 항바이러스제와의 복합에서 무-세포 HIV에 의해 CD-4+ 세포의 감염을 저해하는 펩티드 능력을 검사하는데 이용될 수 있다. 이런 검사는 검사되는 복합된 다른 항바이러스와 펩티드의 존재하에 적정 농도(TCID50)의 바이러스와 CD-4+ 세포를 배양하는 단계로 구성된다. 당업자에 공지된 배양 조건을 이용한다. 전술한 바와 같이, 펩티드가 첨가되지 않은 대조 배양물과 함께 다양한 농도의 펩티드가 이용될 수 있다. 적정 시간(7일)동안 배양한 이후, 무-세포 상층액을 표준 과정에 따라 수득하고 성공적인 감염의 측도로 RT 활성의 존재를 검사한다. RT 활성은 Goff et al.(Goff, S. et al., 1981, J. Virol. 38:239-248) and/or Willey et al.(Willey, R. et al., 1988, J. Virol. 62:139-147)에 상술한 표준 기술을 이용하여 검사할 수 있다. 이들의 문헌은 여기에 참고로 한다.
비-레트로바이러스 활성을 검사하는 데에는 당업자에게 널리 알려진 표준 방법을 이용할 수 있다. 호흡기 합체 바이러스와 파라인플루엔자 바이러스 활성 검사 기술은 Pringle et al.(Pringle, C.R. et al., 1985, J. Medical Virology을 참조한다. 이런 기술에 관한 전반적인 고찰은 "Zinsser Microbiology" , 1988, Joklik, W.K. et al., eds., Appleton ＆ Lange, norwalk, CT, 19th ed.를 참조한다.
5.5.1. HIV-1 감염의 상이한 단계에서 작용하는 항바이러스 화합물의 검사
HIV-1 감염의 상이한 단계에서 작용하는 항바이러스 화합물을 연구하기 위한 3가지 독립된 시험관내 검사는 당업자에게 널리 공지되어 있다(Lambert et al., 1993, Antiviral Res. 21: 327-342). 이런 검사를 이용하여, 전술한 항바이러스 물질중 한가지와 복합된 DP-178, DP-107 또는 제약학적 수용가능한 이의 유도체의 효과를 평가할 수 있다. 모든 검사는 24-웰 플레이트(Nunc.)에서 실시한다. 저해 물질의 5배 연속 희석액은 100% DMSO에서 만들고 200 x 최종 농도를 달성한다. 배양 웰에 1/200 vol. 희석액을 첨가하여, 0.5% DMSO의 최종 농도 및 저해물질의 원하는 농도를 달성한다. 실험은 2가지 저해물질의 고정된 비율(1:10 또는 1:40, AZT:DP-178)의 희석액이나 농도가 가변적인 희석액으로 실시한다.
첫째, 급성 감염 검사는 시험관내에서 CD-4+ 세포 손실의 원인이 되는 신속한 복제와 세포병인성 효과를 모델로 한다. 항바이러스 화합물을 나타내는 급성 감염된 Molt4 세포의 처리 검사는 T-세포에서 HIV-1 감염의 확산을 저해하는데 효과적이다. 이들 검사를 위해, 3 x 104 감염되지 않은 Molt4 세포/웰은 HIV-1의 50 TCID(균주 LA1)로 감염시켰다. 저해물질의 원액은 100% DMSO에서 준비하고, 0일에 1.5시간 바이러스 흡수기간 직후에 첨가한다. 배양물은 동일 농도의 저해물질을 함유하는 배지로 1일과 4일에 재공급한다. 시료는 7일에 수거한다.
둘째, 통합된 프로바이러스를 포함하고 낮은 수준으로 연속적인 바이러스 발현을 나타내는 만성적으로 감염된 세포는 감염성 비리온의 생체 저장소를 대표하고, 궁극적으로 병적 진행의 원인이 된다. 만성적으로 감염된 세포는 성장 배지에서 3회 세척하고 웰당 6 x 104 세포 밀도로 도말한다. 저해물질은 0일에 첨가한다. 배양물은 동일 농도의 저해물질을 함유하는 성장 배지로 1일과 3일에 재공급한다. 검사물질은 5일에 수거한다.
셋째, 이들 연구에 이용된 공-배양 검사는 배양물에서 자유 세포 확산뿐만 아니라 세포-세포 융합과 확산을 수반하기 때문에, 생체내 감염의 적절한 모델이 된다. 이런 검사에서, 3 x 104 감염되지 않은 Molt4 세포는 24 웰 평판에서 웰당 3 x 103 H9/LA1 또는 CEM/LA1 만성 감염된 세포로 공동 배양한다. 저해물질은 0일에 첨가하고, 검사 평판은 저해물질을 함유하는 성장배지로 1일과 3일에 공급한다. 검사물질은 5일에 수거한다. 항바이러스 활성은 여러 변수로 측정한다: 처리된 배양물로부터 펠렛화된 세포의 웨스턴 블랏 분석, RT 수준, 상층액에서 p24 항원 수준.
복합된 약물 효과는 다음의 방정식을 이용하여, Chou and Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22:27-55의 다중 분석 방법 및 '마이크로컴퓨터 소프트웨어로 약량-효과 분석' (Chou and Chou, 1987, software and manual. p19-64. Elsevier Biosoft, Cambridge, UK)으로 산정한다.
이때, CI은 복합지수이고,
(Dx)1은 x % 효과만을 산출하는데 요구되는 약물 1의 약량이고,
(D)1은 (D)2와의 복합에서 동일 x % 효과를 산출하는데 요구되는 약물 1의 약량이다. (Dx)2와 (D)2의 값은 약물 2 에서 유사하게 유도된다. α값은 중간 효과 방정식을 이용한 약량 효과 곡선의 플롯으로부터 결정한다.
이때, fa는 약량 D에 의해 영향을 받는 부분,
fu는 감염되지 않은 부분이고,
Dm은 50% 효과에 요구되는 약량이고,
m은 약량-효과 곡선의 기울기이다. 상호 배타적 약물(즉, 유사한 작용 방식)의 경우, 약물 단독 또는 이들의 병렬 모두 중간메디안 효과 플롯에 정렬한다. 상호 비-배타적인 약물(독립적인 작용방식)은 중앙 효과 플롯에서 평행선이 되지만, 혼합물에서 오목한 상향 곡선이 된다. 물질이 상호 배타적인 경우에 α는 0이고, 상호 비-배타적인 경우에 α는 1이다. 상호 비-배타성을 추정하여 얻은 값은 상호 배타적인 약물에서보다 약간 크다. <1인 CI값은 공조 효과를 나타내고, >1 값은 길항 효과를 나타내며, =1은 부가 효과를 나타낸다.
복합된 약물 효과는 MacSynergy computer program(Pritchard and Shipman, 1990, Antiviral Research 14: 181-206)에 의해 계산할 수 있다. 이런 컴퓨터 프로그램은 약물-약물 상호작용의 3차원 그래프 분석을 허용한다. 항바이러스 화합물의 복합에서 관찰되는 공조 결과는 MacSynergy 프로그램으로 계산하고 3차원 막대그래프로 표시하는데, 여기서 약물 상호작용의 퍼센트는 약물농도와 대비하여 플롯한다. 공조 결과는 막대그래프의 높이로 나타내고, 길항 효과는 그래프 아래의 음성 값으로 나타낸다.
6. 실시예: DP-178(SEQ ID:1)은 HIV-1 감염의 강력한 저해제이다.
본 실시예에서는 DP-178(SEQ ID:1)이 무-세포 바이러스에 의한 HIV-1 매개된 CD-4+ 세포-세포 융합과 감염의 강력한 저해물질임을 보인다. 융합 검사에서, 상기 펩티드는 1-10 ng/㎖ 농도에서 바이러스 유도된 항체 형성을 완전히 차단한다. 감염성 검사에서, 저해 농도는 다소 높고, 90 ng/㎖에서 감염을 저해한다. DP-178(SEQ ID:1)의 항바이러스 활성은 HIV-1에 상당한 특이적이다. 이에 더하여, HIV-1 유래된 DP-178 동족체를 대표하는 합성 펩티드 DP-185(SEQ ID:3) 역시 HIV-1 중재된 합체형성을 차단하는 것으로 밝혀졌다.
6.1. 재료와 방법
6.1.1. 펩티드 합성
펩티드는 Applied Biosystems Model 431A 펩티드 합성기에서 Fast Moc 화학을 이용하여 합성하였다. 아미데이트화된 펩티드는 Rink 수지(Advanced Chemtech)를 이용하여 준비하고, 자유 카르복시 말단을 보유하는 펩티드는 Wang(p-알콕시-벤질-알코올) 수지(Bachem)에서 합성하였다. 제 1 잔기는 적절한 수지에 이중 결합되고, 후속 잔기는 단일 결합되었다. 각 결합단계이후 아세트산 무수물 캡핑을 실시하였다. 펩티드는 트리플루오르아세트산(TFA)(10㎖), 물(0.5㎖), 티오아니졸(0.5㎖), 에탄디티올(0.25㎖), 결정성 페놀(0.75g)로 처리하여 수지로부터 절단하였다. 정제는 역상 HPLC로 실시하였다. 정제되지 않은 펩티드 약 50mg 시료는 물/아세토니트릴 0.1% TFA 선형 구배로 Waters Delta Pak C18 칼럼(19mm ×30cm, 15u spherical)에서 크로마토그래피하였다. 동결건조된 펩티드는 건조시켜 보관하고, 펩티드 용액은 물에서 1 mg/㎖로 만들었다. 전기분무 질량 분석법에서 아래아 같은 결과가 산출되었다. DP-178(SEQ ID:1): 4491.87(calculated 4491.94); DP-180(SEQ ID:2):4491.45(calculated 4491.94); DP-185(SEQ ID:3): not done(calculated 4546.97).
6.1.2. 바이러스
HIV-ILAI 바이러스는 R. Callo(Popovic, M. et al., 1984, Science 224:497-508)에서 수득하고, 10% 태아 송아지 혈청을 함유하는 RPMI 1640에서 배양된 CEM 세포에서 증식시켰다. 감염된 CEM 세포에서 얻은 상층액은 0.2㎛ 필터를 통과시키고, 감염성 역가는 바이러스 복제를 뒷받침하는 AA5 세포주를 이용한 마이크로 감염성 검사에서 측정하였다. 이를 위하여, 25㎕ 연속 희석된 바이러스는 96-웰 미량적정 평판에서 2 x 105/㎖ 농도로 75㎕ AA5 세포에 첨가하였다. 각 바이러스 희석액은 삼중으로 검사하였다. 세포는 매일 새로운 배지를 첨가하여 8일간 배양시켰다. 감염 8일후, 상층액 시료는 상층액에 방출되는 역전사효소 활성으로 바이러스 복제를 검사하였다. TCID50은 Reed and Muench 공식(Reed, L.J. et al., 1983, Am. J. Hyg. 27:493-497)에 따라 산정하였다. AA5 세포주에서 실시한 측정에서, 이들 연구에 이용된 HIV-1LAI와 HIV-1MN 원액의 역가는 약 1.4 x 106과 3.8 x 104 TCID50/㎖로 나타났다.
6.1.3. 세포 융합 검사
약 7 x 104 Molt는 전술한 바와 같이, 100㎕ 최종 용적의 배양 배지에서 96-웰 평판(1/2 면적 클러스터 평판; Costar, Cambridge, MA)에 HIV-1LAI 바이러스로 만성 감염된 1 x 104 CEM 세포와 함께 배양하였다(Matthews, T.J. et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:5424-5428). 펩티드 저해물질은 10㎕ 용적으로 첨가하고, 세포혼합물은 37℃에서 24시간동안 배양하였다. 이때, 다핵 거대세포는 단일 시역에서 전체 웰을 가시화시킬 수 있는 40x 배율에서 현미경 관찰로 평가하였다.
6.1.4. 무-세포 바이러스 감염검사
합성 펩티드는 7일간 0, 0.04, 0.4, 4.0, 40㎍/㎖의 펩티드 농도에서 25 TCID50 Unit의 HIV-2NIH2와 CEM CD4+ 세포, 또는 247 TCID50 (도면 2의 실험) 또는 62 TCID50(도면 3의 실험)의 HIV-1LAI 바이러스와 함께 37℃에서 배양하였다. 결과의 역전사 효소(RT) 활성(cpm)은 하기 단락 6.1.5에서 기술한 검사를 이용하여 측정하였다. TCID50 계산에 관한 설명은 Reed, L.J. et al., 1938, Am. J. Hyg. 27:493-497을 참조한다.
6.1.5. 역전사 효소검사
마이크로-역전사효소(RT) 검사는 Goff et al.(Goff, S. et al., 1981, J. Virol. 38:239-248)과 Willey et al.(Willey, R. et al., 1988, J. Virol. 62:139-147)에서 채택하였다. 바이러스/세포 배양물로부터 상층액은 1% 트리톤 X-100으로 조정한다. 10㎕ 상층액 시료는 96-웰 U-자형 바닥 미량적정 플레이트에서 RT 칵테일 50㎕에 첨가하고, 시료는 37℃에서 90분간 배양하였다. RT 칵테일은 75mM KCl, 2mM 디티오트레이톨, 5mM MgCl2, 5㎍/㎖ 폴리 A(Pharmacia, cat. No. 27-4110-01), 0.25 U/㎖ 올리고 dT(Pharmacia, cat. No. 27-7858-01), 0.05% NP40, 50mM 트리스-HCl, pH 7.8, 0.5μM 비-방사능 활성 dTTP, 10μCi/㎖ 32P-dTTP(Amersham, cat. No. PB.10167)을 함유한다.
배양 기간이후, 40㎕ 반응 혼합물은 부분적으로 진공이 적용되는 GB003(S+S) 필터 페이퍼의 한 시트상의 S+S 미니폴드에 유지되는 2xSSC 완충액(0.3M NaCl과 0.003M 구연산나트륨)에 포화된 Schleicher와 Schuell(S+S) NA45 막(또는 DE81 페이퍼)에 공급하였다. 미니폴드의 각 웰은 완전한 진공하에 200㎕ 2xSSC로 4회 세척하였다. 막은 미니폴드로부터 제거하고 과량의 2xSSC로 파이렉스 접시에서 2회 이상 세척하였다. 마지막으로, 막은 흡수 페이퍼에서 배수시키고 와트만 #3 페이퍼에 위치시키며 사란(Saran) 랩으로 덮고 -70℃에서 하룻밤동안 필름에 노출시켰다.
6.2. 결과
6.2.1. 감염된 세포-유도된 합체 형성의 펩티드 저해
만성적으로 HIV-1 감염된 CEM 세포와 함께 감염되지 않은 Molt4 세포를 하룻밤동안 공동-배양함으로써 유도된 합체 형성을 차단하는 펩티드 능력을 항바이러스 활성의 초기 선별에서 검사하였다. 이런 실험의 결과는 여기에 제시한다. 이들 실험중 첫 번째 실험으로 10㎕/㎖와 12.5ng/㎖ 사이 농도의 DP-178(SEQ ID:1) 펩티드는 세포 융합과정의 차단을 검사하였다. 이들 실험에서, HIV-1LAI, HIV-1MN, HIV-1RF, HIV-1SF2 바이러스로 만성 감염된 CEM 세포는 감염되지 않은 Molt4 세포와 하룻밤동안 공동-배양하였다. 결과(도 4)에서는 DP-178(SEQ ID:1)이 사용된 최저 DP-178(SEQ ID:1) 농도에서도 HIV-1 분리체 각각에 대하여 완전한 보호를 제공한다는 것을 보여준다. HIVLAI 저해에서, 검사된 최저 농도는 12.5ng/㎖ 이었다; 모든 다른 HIV-1 바이러스에서 DP-178(SEQ ID:1)의 최저농도는 100 ng/㎖이었다. DP-178(SEQ ID:1)과 동일 아미노산을 보유하지만 무작위로 배열된 제 2 펩티드, DP-180(SEQ ID:2)은 40㎍/㎖의 높은 농도에서도 항-융합 활성을 보이지 않았다(도 4). 이런 관찰 결과는 DP-178(SEQ ID:1)의 저해 효과가 주로 서열-특이적이고 비-특이적 펩티드/단백질 상호작용과는 무관하다는 것을 시사한다. DP-178 저해 작용의 실제 종점(즉, 저해 효과 최저 농도)은 1-10 ng/㎖ 범위에 있다.
이후 일련의 실험은 HIV-1 유도된 합체 형성을 저해하는 DP-178(SEQ ID:1) 동족체의 준비와 검사에 관한다. 도 1에 도시된 바와 같이, DP-185(SEQ ID:3)의 서열은 DP-178(SEQ ID:1)과 약간 상이한데, 이의 주요 서열은 HIV-1SF2 분리체에서 유래되고 N-말단 부근에 DP-178(SEQ ID:1)과 상당히 다른 몇몇 아미노산을 포함한다. 도 4에 도시된 바와 같이, DP-185(SEQ ID:3)는 최저 검사 농도인 312.5 ng/㎖에서도 저해 활성을 보였다.
그 다음 일련의 실험은 DP-178(SEQ ID:1) HIV-1과 HIV-2 저해 활성의 비교에 관한다. 도 5에 도시된 바와 같이, DP-178(SEQ ID:1)은 1ng/㎖ 이하의 펩티드 농도에서 HIV-1 매개된 합체 형성을 차단하였다. 하지만, DP-178(SEQ ID:1)은 10㎍/㎖과 같은 상당히 높은 농도에서 HIV-2 매개된 합체 형성을 저해하는데 실패하였다. HIV-1 매개된 세포 융합의 저해물질로서 DP-178(SEQ ID:1)의 이런 놀라운 4log 선택성은 DP-178(SEQ ID:1)의 작용에서 예상치 못한 HIV-1 선택성을 입증한다. HIV-1 매개된 세포 융합의 DP-178(SEQ ID:1) 저해 및 검사 농도에서 동일 세포형에서 HIV-2 매개된 세포 융합을 저해시킬 수 없는 펩티드의 무능력은 DP-178(SEQ ID:1)의 항바이러스 활성과 연관된 선택성이 상당함을 입증한다.
6.2.2. 무-세포 바이러스에 의한 감염의 펩티드 저해
이후, DP-178(SEQ ID:1)은 무-세포 HIV-1 바이러스에 의한 CD-4+ CEM 세포 감염을 차단하는 능력을 검사하였다. 도 2에 도시된 결과는 HIV-1LAI 분리체에 의한 CEM 세포의 감염을 차단시키는 DP-178(SEQ ID:1)의 능력을 분석하는 실험의 결과이다. 상기 실험에는 3가지 대조 펩티드, DP-116(SEQ ID:9), DP-125(SEQ ID:8), DP-118(SEQ ID:10)이 포함되었다. DP-116(SEQ ID:9)은 이런 검사에서 비활성으로 이미 밝혀진 펩티드이고, DP-125(SEQ ID:8; Wild, C. et al. 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10, 537)와 DP-118(SEQ ID:10)은 이런 검사에서 이미 활성으로 밝혀진 펩티드이다. 각 농도(0, 0.04, 0.4, 4, 40㎍/㎖)의 펩티드는 247 TCID50 Unit HIV-1LAI 바이러스 및 CEM 세포와 함께 배양하였다. 7일간 배양후, 무-세포 상층액은 성공적인 감염의 척도로서 RT 활성의 존재를 검사하였다. 도 2에 도시된 결과는 DP-178(SEQ ID:1)이 90 ng/㎖(IC50=90ng/㎖)와 같은 낮은 농도에서 HIV-1 바이러스 분리체에 의해 매개된 새로운 감염 과정을 저해하는 것을 입증한다. 대조적으로, 2가지 양성 대조 펩티드, DP-125(SEQ ID:8)와 DP-118(SEQ ID:10)은 약 5㎍/㎖의 60배 이상 높은 IC50 농도를 갖는다.
독립된 실험에서, DP-178(SEQ ID:1)의 HIV-1과 HIV-2 저해작용은 CEM 세포 및 HIV-1LAI 또는 HIV-2NIHZ로 검사하였다. 이들 실험에는 62 TCID50 HIV-1LAI 또는 25 GCID50 HIV-2NIHZ가 사용되었고 7일간 배양되었다. 도 3에 도시된 바와 같이, DP-178(SEQ ID:1)은 약 31ng/㎖의 IC50으로 HIV-1 감염을 저해하였다. 대조적으로, DP-178(SEQ ID:1)은 HIV-2NIHZ에 대하여 훨씬 높은 IC50을 보였고, 따라서 DP-178(SEQ ID:1)은 HIV-2 저해제보다는 HIV-1 저해제로서 2 log 이상 높은 잠재력을 갖는다. 이런 발견은 단락 6.2.1.에서 상술한 융합 저해 검사의 결과와 일치하고, 상당한 수준의 선택성(예, HIV-2보다는 HIV-1)을 더욱 뒷받침한다.
7. 실시예: HIV-1 저해제, DP-178(SEQ ID:1)은 비독성이다.
본 실시예에서 36개 아미노산 합성 펩티드 저해제 DP-178(SEQ ID:1)은 검사된 최대 펩티드 농도(40㎍/㎖)에서도 배양중인 세포에 비-독성이었다.
7.1. 재료와 방법
세포 증식과 독성 검사: 각 펩티드 농도에서 3.8 x 105 CEM 세포를 T25 플라스크에서 37℃에서 3일간 배양하였다. 검사된 펩티드는 도 1에서 설명하는 바와 같이 DP-178(SEQ ID:1)과 DP-116(SEQ ID:9)이었다. 사용된 각 펩티드의 농도는 0, 2.5, 10, 40㎍/㎖이었다. 세포 수는 0, 24, 48, 72 배양 시간에 획득하였다.
7.2. 결과
강력한 HIV-1 저해물질 DP-178(SEQ ID:1)이 세포독성 효과를 나타내는 지는 배양중인 세포의 증식과 생존능에 이들 펩티드의 영향을 검사하여 평가하였다. CEM 세포는 다양한 농도의 DP-178(SEQ ID:1)과 DP-116(SEQ ID:9), HIV 저해제로서 무효한 것으로 밝혀진 펩티드의 존재하에 배양하였다(Wild, C. et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10, 537-10, 541). 또한, 세포는 이들 펩티드 없이 배양하였다.
세포독성 연구의 결과에서 DP-178 (SEQ ID:1)이 배양중인 세포에 세포독성 효과를 나타내지 않음을 알 수 있다. 하기 표 5에서 볼 수 있는 바와 같이, DP-178(SEQ ID:1)의 최대 검사 농도(40㎍/㎖)에서 3일간 배양된 세포의 증식과 생존능 특징은 DP-116(SEQ ID:9) 또는 비-펩티드 대조와 별다른 차이가 없었다. 세포증식 데이터 역시 도 6에 그래프로 나타낸다. 단락 6에 제시된 작업 실시예에서 입증된 바와 같이, DP-178(SEQ ID:1)은 1-10ng/㎖ 펩티드 농도에서 HIV-1 매개된 합체 형성을 완전히 저해하고, 적어도 90ng/㎖ 농도에서 무-세포-바이러스 감염을 완전히 저해하였다. 따라서, 본 연구는 HIV 저해 약량의 3 log 이상의 펩티드 농도에서도 DP-178(SEQ ID:1)이 세포독성 효과를 나타내지 않음을 입증한다.
8. 실시예: DP-107과 DP-178 펩티드 절두형과 돌연변이의 항-바이러스 활성
본 실시예에서는 DP-107과 DP-178 절두형과 돌연변이의 항-바이러스 활성을 연구하였다. 이들 DP-107과 DP-178 변형된 펩티드중 일부는 실질적인 항바이러스 활성을 보이는 것으로 밝혀졌다.
8.1. 재료와 방법
항-HIV 검사: 실행된 항바이러스 검사는 단락 6.1에서 상술한 바와 동일하다. 검사에는 HIV-1/IIIb 또는 HIV-2 NIHZ 분리체를 이용하였다. 정제된 펩티드를 이용하였고 다른 것은 도 5a-c에서 상술하였다.
펩티드: 본 연구에서 특성화된 펩티드는 아래와 같다.
1) 도 5a-c는 HIV-1 BRU 분리체의 DP-178 영역을 포함하고 이로부터 유래된 펩티드를 나타낸다. 특히, 상기 영역은 gp41 아미노산 잔기 615에서 아미노산 잔기 717까지 연장된다. 기재된 펩티드는 DP-178 서열 아미노산로부터 변화되는 상기 영역의 절두 및/또는 돌연변이를 포함한다. 또한, 특정 펩티드는 도면에 표시한 바와 같이, 부가되거나 제거된 아미노 또는 카르복시 말단기를 갖는다.
2) 도 6에서는 HIV-1 BRU 분리체의 DP-107 아미노산 서열을 둘러싸는 gp41 영역 및/또는 DP-107의 절두를 대표하는 펩티드이다. 특정 펩티드는 도면에 표시한 바와 같이, 차단되지 않거나 바이오티닐화된다.
차단된 펩티드는 아실 N-말단과 아미노 C-말단을 포함하였다.
8.2. 결과
항-HIV 항바이러스 데이터는 도 5a-c에 기재된 1군 DP-178-유래된 펩티드에서 얻었다. 도시된 결과에서 전장 비-돌연변이 DP-178 펩티드(도 5a-c에서 T20)는 4ng/㎖이다.
도 5에서, 다수의 DP-178 절두형은 낮은 IC50 값에서 입증되는 바와 같이, 높은 항바이러스 활성을 보였다. 여기에는 검사 펩티드 T-50, T-624, T-636 내지 T-641, T-645 내지 T-650, T-652 내지 T-654, T-656이 포함된다. T-50은 잔기의 음영된 배경으로 표시된 점 돌연변이를 보유하는 검사 펩티드이다. HIV-1-유래된 검사 펩티드는 분명한 균주-특이적 항바이러스 활성을 보였다. HIV-2 NIHZ 분리체에서 검사된 펩티드는 항-HIV-2 항바이러스 활성을 전혀 보이지 않았다.
도 5B에 기재된 펩티드는 DP-178의 아미노(T-4)와 카르복시(T-3) 말단 절반을 대표하는 검사 펩티드이다. 아미노 말단 펩티드는 활성이 없지만(IC50>400㎍/㎖), 카르복시 말단 펩티드는 강한 항바이러스 활성(IC50=3㎍/㎖)을 보였다. 다수의 다른 검사 펩티드 역시 높은 항바이러스성 활성을 보였다. 여기에는 T-61/T-102, T-217 내지 T-221, T-235, T-381, T-677, T-377, T-590, T-378, T-591, T-271 내지 T-272, T-611, T-222 내지 T-223, T-60/T-224를 포함한다. 특정 항바이러스 펩티드는 DP-178 아미노산 서열로부터 변화되는 점 돌연변이 또는 부가된 아미노산 잔기를 포함한다.
도 5C에서, DP-178 아미노산 서열 자체에 점 돌연변이 및/또는 아미노 또는 카르복시 말단 변형을 도입한다. 도면에 도시된 바와 같이, 기재된 검사 펩티드의 대부분은 강력한 항바이러스 활성을 보인다.
도 6에 도시된 바와 같이, DP-107 펩티드의 절두형(도 5에서 T21)을 만들고 검사하였다. 도 6에서는 DP-107 서열이 존재하는 gp41 영역으로부터 추가 아미노산 잔기를 포함하는 차단되거나 차단되지 않은 펩티드와 관련된 데이터를 나타낸다. 대부분의 펩티드는 낮은 IC50 값에서 입증되는 바와 같이, 항바이러스 활성을 보였다.
따라서, 본 단락에서 제시하는 결과는 전장 DP-107과 DP-178이 강력한 항바이러스 활성을 보일 뿐만 아니라, 이들 펩티드의 절두형 역시 실질적인 항바이러스 특성을 보유한다는 것을 입증한다.
9. 실시예: SIV DP-178/DP-107 유사체: 항바이러스 특성
본 실시예에서는 전술한 컴퓨터-보조된 조사 모티프를 이용하여 확인된 원숭이 면역결핍 바이러스(SIV) DP-178-유도체 펩티드의 항-SIV 활성을 검사하였다. 몇가지 확인된 펩티드는 항바이러스 능력을 갖는 것으로 확인되었다.
9.1. 재료와 방법
항-SIV 항바이러스 검사: 여기에 이용된 검사는 Langolis et al.(Langolis, A.J. et al., 1991, AIDS Research and Human Retroviruses 7:713-720)에서 보고한 바와 동일하였다.
펩티드: 본 연구에서 특성화된 펩티드는 도 7에 도시된 바와 같이, T-391 내지 T-400이다. 이들 펩티드는 SIV TM 단백질의 DP-178 유사 영역을 통한 워크(walk)를 대표한다.
각 펩티드는 100㎍/㎖에서 100ng/㎖까지 2배 연속 희석하여 검사하였다. 각 검사에서, 펩티드를 포함하지 않은 웰 역시 이용하였다.
9.2. 결과
도 7에 요약한 데이터는 SIV TM 단백질의 DP-178-유사 영역을 통한 "펩티드 워크" 를 통하여 얻은 항바이러스 정보를 나타낸다.
도 7에 도시된 바와 같이, 펩티드 T-391 내지 T-400을 검사하였는데, 이들은 정제안된 펩티드로서 강력한 항바이러스 활성을 보였다.
따라서, 단락 8에 제시된 실시예에서 상술한 컴퓨터 보조된 검색에서 항-SIV 항바이러스 화합물을 대표하는 바이러스 펩티드 도메인이 성공적으로 확인되었다.
본 발명은 본 발명의 개별 특징을 설명하는 특정 구체예에 한정되지 않으며, 이의 기능적으로 균등한 방법과 성분이 본 발명의 영역에 포함된다. 또한, 본원에 상술된 것에 추가하여, 본 발명의 다양한 개변은 명세서와 도면으로부터 당업자에게 명백하다. 이런 개변 역시 본 발명의 영역에 속한다.

Claims (54)

  1. HIV 감염을 치료하기 위한 복합 요법에 이용되고, 도 6에 나타난 바와 같이, DP-107 또는 T-1 내지 T-3, T-6 내지 T-8, T-10, T-21, T-36, T-37, T-48, T86으로 구성된 DP-107의 유도체 및 다른 치료요법제를 함유하는 조성물에 있어서, DP-107 또는 상기 유도체 및 다른 치료요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되고, 상기 다른 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  2. HIV 감염을 치료하기 위한 복합 요법에 이용되고, 도 5에 나타난 바와 같이, DP-178 또는 T-3, T-4, T-50, T-60 내지 T-65, T-83, T-89, T-90, T-95 내지 T-99, T-102, T-103, T-156, T-212 내지 T-231, T-234, T-235, T-270 내지 T-273, T-376 내지 T-379, T-381, T-382, T-570, T-573, T-574, T-589 내지 T-591, T-595, T-608 내지 T-612, T-621 내지 T-625, T-627 내지 T-661, T-677, T-700 내지 T-708, T-711, T-712, T-714, T-715, T-716으로 구성된 DP-178의 유도체 및 다른 치료요법제를 함유하는 조성물에 있어서, DP-178 또는 상기 유도체 및 다른 치료요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되고, 상기 다른 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  3. HIV 감염을 치료하기 위한 복합 요법에 이용되고 DP-178을 함유하는 조성물에 있어서, DP-178 및 다른 치료요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되고, 상기 다른 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  4. 제 1항, 2항, 3항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 MK-639(인디나비르), 사퀴나비르, ABT-538(리토나비르), AG1343(넬피나비르), VX-478(암프레나비르), DMP450(모제나비르) 또는 SC-52151(텔리나비르)인 것을 특징으로 하는 조성물.
  5. 제 1항, 2항, 3항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 AZT, ddI, ddC, ddA, d4T 또는 3TC인 것을 특징으로 하는 조성물.
  6. 제 1항, 2항, 3항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 인터페론-α, 인터페론-β 또는 인터페론-γ인 것을 특징으로 하는 조성물.
  7. 제 2 항에 있어서, DP-178 유도체는 T-624, T-636 내지 T-641, T-645 내지 T-650, T-652 내지 T-654, T-656에서 선택되는 펩티드인 것을 특징으로 하는 조성물.
  8. HIV 복제를 저해하기 위한 복합 요법에 이용되고, 도 6에 나타난 바와 같이, DP-107 또는 T-1 내지 T-3, T-6 내지 T-8, T-10, T-21, T-36, T-37, T-48, T86으로 구성된 DP-107의 유도체 및 다른 치료요법제를 함유하는 조성물에 있어서, DP-107 또는 상기 유도체 및 다른 치료요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되고, 상기 다른 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  9. HIV 복제를 저해하기 위한 복합 요법에 이용되고, 도 5에 나타난 바와 같이, DP-178 또는 T-3, T-4, T-50, T-60 내지 T-65, T-83, T-89, T-90, T-95 내지 T-99, T-102, T-103, T-156, T-212 내지 T-231, T-234, T-235, T-270 내지 T-273, T-376 내지 T-379, T-381, T-382, T-570, T-573, T-574, T-589 내지 T-591, T-595, T-608 내지 T-612, T-621 내지 T-625, T-627 내지 T-661, T-677, T-700 내지 T-708, T-711, T-712, T-714, T-715, T-716으로 구성된 DP-178의 유도체 및 다른 치료요법제를 함유하는 조성물에 있어서, DP-178 또는 상기 유도체 및 다른 치료요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되고, 상기 다른 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  10. HIV 복제를 저해하기 위한 복합 요법에 이용되고 DP-178 및 다른 치료요법제를 함유하는 조성물에 있어서, DP-178 및 다른 치료요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되고, 상기 다른 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  11. HIV 복제를 저해하기 위한 복합 요법에 이용되고, 도 6에 나타난 바와 같이, DP-107 또는 T-1 내지 T-3, T-6 내지 T-8, T-10, T-21, T-36, T-37, T-48, T86으로 구성된 DP-107의 유도체 및 다른 치료요법제를 함유하는 조성물에 있어서, DP-107 또는 상기 유도체 및 다른 치료요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되고, 상기 다른 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  12. HIV 레트로바이러스의 세포로의 전파를 저해하기 위한 복합 요법에 이용되고, 도 5에 나타난 바와 같이, DP-178 또는 T-3, T-4, T-50, T-60 내지 T-65, T-83, T-89, T-90, T-95 내지 T-99, T-102, T-103, T-156, T-212 내지 T-231, T-234, T-235, T-270 내지 T-273, T-376 내지 T-379, T-381, T-382, T-570, T-573, T-574, T-589 내지 T-591, T-595, T-608 내지 T-612, T-621 내지 T-625, T-627 내지 T-661, T-677, T-700 내지 T-708, T-711, T-712, T-714, T-715, T-716으로 구성된 DP-178의 유도체 및 다른 치료요법제를 함유하는 조성물에 있어서, DP-178 또는 상기 유도체 및 다른 치료요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되고, 상기 다른 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  13. HIV 레트로바이러스의 세포로의 전파를 저해하기 위한 복합 요법에 이용되고 DP-178 및 다른 치료요법제를 함유하는 조성물에 있어서, DP-178 및 다른 치료요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되고, 상기 다른 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  14. 제 8항, 9항, 10항, 11항, 12항, 13항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 MK-639(인디나비르), 사퀴나비르, ABT-538(리토나비르), AG1343(넬피나비르), VX-478(암프레나비르), DMP450(모제나비르) 또는 SC-52151(텔리나비르)인 것을 특징으로 하는 조성물.
  15. 제 8항, 9항, 10항, 11항, 12항, 13항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 AZT, ddI, ddC, ddA, d4T 또는 3TC인 것을 특징으로 하는 조성물.
  16. 제 8항, 9항, 10항, 11항, 12항, 13항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 인터페론-α, 인터페론-β 또는 인터페론-γ인 것을 특징으로 하는 조성물.
  17. 제 10항에 있어서, DP-178 유도체는 T-624, T-636 내지 T-641, T-645 내지 T-650, T-652 내지 T-654, T-656에서 선택되는 펩티드인 것을 특징으로 하는 조성물.
  18. HIV 감염을 치료하기 위한 복합 요법에 이용되고, 도 6에 나타난 바와 같이, DP-107 또는 T-1 내지 T-3, T-6 내지 T-8, T-10, T-21, T-36, T-37, T-48, T86으로 구성된 DP-107의 유도체 및 다른 치료요법제를 함유하는 제약학적 조성물에 있어서, DP-107 또는 상기 유도체 및 다른 치료요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되고, 상기 다른 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  19. HIV 감염을 치료하기 위한 복합 요법에 이용되고, 도 5에 나타난 바와 같이, DP-178 또는 T-3, T-4, T-50, T-60 내지 T-65, T-83, T-89, T-90, T-95 내지 T-99, T-102, T-103, T-156, T-212 내지 T-231, T-234, T-235, T-270 내지 T-273, T-376 내지 T-379, T-381, T-382, T-570, T-573, T-574, T-589 내지 T-591, T-595, T-608 내지 T-612, T-621 내지 T-625, T-627 내지 T-661, T-677, T-700 내지 T-708, T-711, T-712, T-714, T-715, T-716으로 구성된 DP-178의 유도체 및 다른 치료요법제를 함유하는 제약학적 조성물에 있어서, DP-178 또는 상기 유도체 및 다른 치료요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되고, 상기 다른 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  20. HIV 감염을 치료하기 위한 복합 요법에 이용되고 DP-178을 함유하는 제약학적 조성물에 있어서, DP-178 및 다른 치료요법제는 동시에 또는 순차적으로 투여되고, 상기 다른 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  21. 제 18항, 19항, 20항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 MK-639(인디나비르), 사퀴나비르, ABT-538(리토나비르), AG1343(넬피나비르), VX-478(암프레나비르), DMP450(모제나비르) 또는 SC-52151(텔리나비르)인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  22. 제 18항, 19항, 20항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 AZT, ddI, ddC, ddA, d4T 또는 3TC인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  23. HIV 감염을 치료하기 위한 키트에 있어서, 아래와 같이 구성되는 것을 특징으로 하는 키트:
    (a) DP-107, DP-178 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체를 함유하는 제약학적 조성물; 이 때 DP-107의 유도체는 T-1 내지 T-3, T-6 내지 T-8, T-10, T-21, T-36, T-37, T-48, T86으로 구성된 것에서 선택되며; DP-178 유도체는 T-3, T-4, T-50, T-60 내지 T-65, T-83, T-89, T-90, T-95 내지 T-99, T-102, T-103, T-156, T-212 내지 T-231, T-234, T-235, T-270 내지 T-273, T-376 내지 T-379, T-381, T-382, T-570, T-573, T-574, T-589 내지 T-591, T-595, T-608 내지 T-612, T-621 내지 T-625, T-627 내지 T-661, T-677, T-700 내지 T-708, T-711, T-712, T-714, T-715, T-716으로 구성된 것에서 선택되며;
    (b) 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 다른 치료요법제를 함유하는 제약학적 조성물;
    여기서, 상기 제약학적 조성물 (a)와 b)는 동시적, 개별적 또는 순차적 사용을 위하여 제제화되고 포장된다.
  24. 제 23항에 있어서, 제약학적 조성물 (a)와 (b)는 반복 사용에 적합한 것을 특징으로 하는 키트.
  25. HIV 감염을 치료하는데 동시에 또는 순차적으로 사용되고, 도 5에 나타난 바와 같이, DP-178 또는 T-3, T-4, T-50, T-60 내지 T-65, T-83, T-89, T-90, T-95 내지 T-99, T-102, T-103, T-156, T-212 내지 T-231, T-234, T-235, T-270 내지 T-273, T-376 내지 T-379, T-381, T-382, T-570, T-573, T-574, T-589 내지 T-591, T-595, T-608 내지 T-612, T-621 내지 T-625, T-627 내지 T-661, T-677, T-700 내지 T-708, T-711, T-712, T-714, T-715, T-716으로 구성된 DP-178의 유도체 및 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 다른 치료요법제를 함유하는 조성물.
  26. HIV 감염을 치료하는데 동시에 또는 순차적으로 사용되고 DP-178 및 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 다른 치료요법제를 함유하는 조성물.
  27. HIV 감염을 치료하는데 동시에 또는 순차적으로 사용되고, 도 6에 나타난 바와 같이, DP-107 또는 T-1 내지 T-3, T-6 내지 T-8, T-10, T-21, T-36, T-37, T-48, T86으로 구성된 DP-107의 유도체 및 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 다른 치료요법제를 함유하는 조성물.
  28. 제 25항, 26항, 27항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질인 것을 특징으로 하는 조성물.
  29. 제 25항 또는 26항에 있어서, 치료요법제는 DP-107인 것을 특징으로 하는 조성물.
  30. 제 25항, 26항, 27항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 역전사효소 저해물질인 것을 특징으로 하는 조성물.
  31. 제 25항, 26항, 27항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 HIV 프로테아제 저해물질인 것을 특징으로 하는 조성물.
  32. 제 1항 내지 3항, 제 8항 내지 13항, 제 25항 내지 27항중 어느 한 항에 있어서, 순차적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  33. 제 32항에 있어서, 순차적으로 경구 투여되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  34. 제 32항에 있어서, 순차적으로 비경구 투여되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  35. 제 34항에 있어서, 순차적으로 피하 투여되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  36. 제 1항 내지 3항, 제 8항 내지 13항, 제 25항 내지 27항중 어느 한 항에 있어서, 동시에 투여되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  37. 제 36항에 있어서, 동시에 경구 투여되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  38. 제 36항에 있어서, 동시에 비경구 투여되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  39. 제 38항에 있어서, 동시에 피하 투여되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  40. HIV 복제를 저해하기 위한 복합 요법에 이용되고, 도 6에 나타난 바와 같이, DP-107 또는 T-1 내지 T-3, T-6 내지 T-8, T-10, T-21, T-36, T-37, T-48, T86으로 구성된 DP-107의 유도체; 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 다른 치료요법제; 제약학적으로 수용가능한 담체를 함유하는 조성물.
  41. HIV 복제를 저해하기 위한 복합 요법에 이용되고, 도 5에 나타난 바와 같이, DP-178 또는 T-3, T-4, T-50, T-60 내지 T-65, T-83, T-89, T-90, T-95 내지 T-99, T-102, T-103, T-156, T-212 내지 T-231, T-234, T-235, T-270 내지 T-273, T-376 내지 T-379, T-381, T-382, T-570, T-573, T-574, T-589 내지 T-591, T-595, T-608 내지 T-612, T-621 내지 T-625, T-627 내지 T-661, T-677, T-700 내지 T-708, T-711, T-712, T-714, T-715, T-716으로 구성된 DP-178의 유도체; 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 다른 치료요법제; 제약학적으로 수용가능한 담체를 함유하는 조성물.
  42. HIV 복제를 저해하기 위한 복합 요법에 이용되고 DP-178; 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 다른 치료요법제; 제약학적으로 수용가능한 담체를 함유하는 조성물.
  43. 제 40항, 41항, 42항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 바이러스 진입 저해물질인 것을 특징으로 하는 조성물.
  44. 제 41항 또는 42항에 있어서, 치료요법제는 DP-107인 것을 특징으로 하는 조성물.
  45. 제 40항, 41항, 42항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 역전사효소 저해물질인 것을 특징으로 하는 조성물.
  46. 제 40항, 41항, 42항중 어느 한 항에 있어서, 치료요법제는 HIV 프로테아제 저해물질인 것을 특징으로 하는 조성물.
  47. HIV 감염을 치료하기 위한 키트에 있어서, 아래와 같이 구성되는 것을 특징으로 하는 키트:
    (a) DP-107 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체를 함유하는 제약학적 조성물; 이 때 DP-107의 유도체는 T-1 내지 T-3, T-6 내지 T-8, T-10, T-21, T-36, T-37, T-48, T86으로 구성된 것에서 선택되며, DP-178 유도체는 T-3, T-4, T-50, T-60 내지 T-65, T-83, T-89, T-90, T-95 내지 T-99, T-102, T-103, T-156, T-212 내지 T-231, T-234, T-235, T-270 내지 T-273, T-376 내지 T-379, T-381, T-382, T-570, T-573, T-574, T-589 내지 T-591, T-595, T-608 내지 T-612, T-621 내지 T-625, T-627 내지 T-661, T-677, T-700 내지 T-708, T-711, T-712, T-714, T-715, T-716으로 구성된 것에서 선택되며;
    (b) 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 다른 치료요법제를 함유하는 제약학적 조성물;
    여기서, 상기 제약학적 조성물 (a)와 (b)는 동시적, 개별적 또는 순차적 사용을 위하여 제제화되고 포장된다.
  48. HIV 감염을 치료하기 위한 키트에 있어서, 아래와 같이 구성되는 것을 특징으로 하는 키트:
    (a) DP-178 또는 이의 제약학적 수용가능한 유도체를 함유하는 제약학적 조성물; 이 때 DP-107의 유도체는 T-1 내지 T-3, T-6 내지 T-8, T-10, T-21, T-36, T-37, T-48, T86으로 구성된 것에서 선택되며; DP-178 유도체는 T-3, T-4, T-50, T-60 내지 T-65, T-83, T-89, T-90, T-95 내지 T-99, T-102, T-103, T-156, T-212 내지 T-231, T-234, T-235, T-270 내지 T-273, T-376 내지 T-379, T-381, T-382, T-570, T-573, T-574, T-589 내지 T-591, T-595, T-608 내지 T-612, T-621 내지 T-625, T-627 내지 T-661, T-677, T-700 내지 T-708, T-711, T-712, T-714, T-715, T-716으로 구성된 것에서 선택되며;
    (b) 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 다른 치료요법제를 함유하는 제약학적 조성물;
    여기서, 상기 제약학적 조성물 (a)와 (b)는 동시적, 개별적 또는 순차적 사용을 위하여 제제화되고 포장된다.
  49. HIV 감염을 치료하기 위한 키트에 있어서, 아래와 같이 구성되는 것을 특징으로 하는 키트:
    (a) DP-178을 함유하는 제약학적 조성물;
    (b) 바이러스 진입 저해물질, 역전사효소 저해물질, HIV 프로테아제 저해물질에서 선택되는 다른 치료요법제를 함유하는 제약학적 조성물;
    여기서, 상기 제약학적 조성물 (a)와 (b)는 동시적, 개별적 또는 순차적 사용을 위하여 제제화되고 포장된다.
  50. 제 47항, 48항, 49항중 어느 한 항에 있어서, 제약학적 조성물 (a)와 (b)는 반복 사용에 적합한 것을 특징으로 하는 키트.
  51. 제 47항, 48항, 49항중 어느 한 항에 있어서, 제약학적 조성물 (b)는 바이러스 진입 저해물질인 것을 특징으로 하는 키트.
  52. 제 48항 또는 49항에 있어서, 제약학적 조성물 (b)는 DP-107인 것을 특징으로 하는 키트.
  53. 제 47항, 48항, 49항중 어느 한 항에 있어서, 제약학적 조성물 (b)는 역전사효소 저해물질인 것을 특징으로 하는 키트.
  54. 제 47항, 48항, 49항중 어느 한 항에 있어서, 제약학적 조성물 (b)는 HIV 프로테아제 저해물질인 것을 특징으로 하는 키트.
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