KR100563087B1 - Ｎａｄｐｈ-사이토크롬 ｐ450환원효소 및 이를 코딩하는유전자 - Google Patents

Ｎａｄｐｈ-사이토크롬 ｐ450환원효소 및 이를 코딩하는유전자 Download PDF

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Abstract

본 발명은 사이토크롬 P450(CYP 450)의 활성을 촉진하는 효소인 NADPH-사이토크롬 P450 환원효소, 상기 효소를 코딩하는 유전자, 상기 유전자를 함유하는 재조합벡터, 상기 재조합벡터로 형질전환된 미생물 및 상기 효소 또는 상기 형질전환된 미생물을 이용하는 것을 특징으로 하는 NADPH-사이토크롬 P450 환원효소의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, CYP450을 사용하여 생물학적 합성되는 의약품, 농약 등의 화학물질의 제조에 있어서, CYP450의 활성을 증가시켜 여러 화학물질의 제조효율을 높일 수 있다.
NADPH-사이토크롬 P450 환원효소, CYP 450, NADPH

Description

ＮＡＤＰＨ-사이토크롬 Ｐ450환원효소 및 이를 코딩하는 유전자 {NADPH-Cytochrome P450 Enzyme and the Gene Encoding the Same}
도 1은 효모에서 발현된 NADPH-CYP450환원효소에 의한 NADPH 환원 활성의 증가를 나타낸 HPLC 결과를 나타낸 것으로, 화살표는 나린제린으로부터 생성된 제니스테인의 피크이다.
발명의 분야
본 발명은 사이토크롬 P450(CYP 450) 단백질의 활성을 촉진하는 효소인 NADPH-사이토크롬 P450 환원효소, 상기 효소를 코딩하는 유전자, 상기 유전자를 함유하는 재조합벡터, 상기 재조합벡터로 형질전환된 미생물 및 상기 효소 또는 상기 형질전환된 미생물을 이용하는 것을 특징으로 하는 NADPH-사이토크롬 P450 환원효소의 제조방법에 관한 것이다.
발명의 배경
사이토크롬 P450(CYP 450)은 주로 인체의 중요 생리활성의 대사효소로써 작용하기 때문에 의약학적 측면에서 아주 중요한 단백질이면서, 원형동물, 식물, 동물, 곰팡이, 미생물에 존재하는 단백질 군으로 스트렙토마이세스 속에서는 45개 종에서 CYPs가 발견되었다. 진핵생물의 CYP가 세포막에 부착된 상태인 것과는 반대로, 스트렙토마이세스 속의 CYP는 수용액 상태로 발현되며, 이들 중 극히 일부만의 특성이 알려져 있다. CYP는 대부분의 원핵세균의 기초대사에서 필수적인 것은 아니며, 탄수화물, 테르펜 등의 분해작용에 관여하여 세균에 탄소나 에너지원을 제공한다 (Omura, T., Biochem. Biophys. Res. Commun., 266:690, 1999).
또한, 스테로이드, 담즙산, 지방산, 프로스타글란딘, 류코트리엔, 바이오제닉 아민 및 이차대사산물과 같은 세포내에서 생산되는 여러 산물의 산화, 과산화 및 환원 작용에 관여한다.
CYP의 주된 역할은 여러 기질을 단일 산화시키는 것이다. 이 반응에는 산소분자와 NADPH 또는 NADH가 필요하며, 대부분의 세균성 CYP는 NADH로부터 필요한 전자를 얻는다. 이들은 알릴 위치, 이중결합 또는 비활성화된 C-H 결합에 산소원자를 결합시킨다. CYP는 헴-티오레이트를 포함하는 효소를 코딩하며, 주로 마크로라이드 항생제의 생합성 유전자 클러스터에 위치하여, 마크로라이드의 구조적 다양성을 가져오는 프리커서의 입체-특이적 및 부위-특이적 산화를 촉매한다(Lamb, D.C. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 307:610, 2003).
NADPH-사이토크롬 P450 환원효소는 NADPH로부터 사이토크롬 P450으로 전자를 전달해주는 효소이며, 여러 약물이나 외래 화합물의 단일 전자환원을 촉매하는 효소로서, CYP의 활성에 중요한 역할을 하는 효소이나, 상기 효소를 사용하여 CYP의 발현 또는 활성을 증가시키는 방법에 대한 연구는 보고된 바 없다.
이에, 본 발명자들은 벼(Oriza sativa)에서 NADPH-사이토크롬 P450 환원효소 유전자를 분리하고, 이를 CYP450의 하나인 이소플라본 합성효소(IFS)를 발현하는 효모에 형질전환시켜, NADPH-사이토크롬 P450 환원효소에 의한 이소플라본 합성효소의 활성 증가를 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 사이토크롬 P450 단백질의 활성을 증가시키는 NADPH-CYP450 환원효소 및 그 유전자를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터 및 상기 재조합 벡터로 형질전환된 미생물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 형질전환된 미생물을 배양하는 것을 특징으로 하는 상기 NADPH-CYP450 환원효소의 제조방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 CYP450을 이용한 기질의 전환을 통해 반응물을 제조하는 방법에 있어서, 상기 NADPH-CYP450 환원효소, 상기 형질전환된 미생물 또는 그 파쇄물을 첨가하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 2의 아미노산 서열을 가지는 NADPH-CYP450 환원효소를 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 NADPH-CYP450 환원효소를 코딩하는 유전자를 제공한다. 본 발명에 있어서, 상기 유전자는 서열번호 1의 염기서열을 가지는 것을 특징으로 할 수 있으며, 상기 유전자는 Oriza sativa 유래인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명은 또한 상기 유전자를 함유하는 재조합 벡터 및 상기 재조합 벡터로 형질전환된 미생물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 미생물은 효모인 것을 특징으로 할 수 있고 상기 미생물은 CYP450을 발현하는 효모인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명은 또한, 상기 형질전환된 미생물을 배양하는 것을 특징으로 하는 상기 NADPH-CYP450 환원효소의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 또한, CYP450을 이용한 기질의 전환을 통하여 반응물을 제조하는 방법에 있어서,
상기 NADPH-CYP450 환원효소, 상기 형질전환된 미생물 또는 그 파쇄물을 첨가하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 CYP450은 이소플라본 합성효소(IFS)이고, 기질 및 반응물은 각각 나린제닌 및 제닌스테인인 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명자들은 벼(Oriza sativa) 유전자 게놈을 검색하여 CYP450 환원효소 유전자와 유사성이 높은 유전자를 분리하였다. 분리된 유전자를 유전자 재조합법에 의해 pESC Yeast Tagging Vector시스템을 이용하여 발현하여 이의 효소 활성을 확인한 후 이 효모에 CYP450 유전자를 함유한 재조합 벡터를 도입하여 CYP450 환원효소 유전자와 같이 효모에서 발현한 후에 발현된 CYP450 효소 유전자의 발현증가 및 CYP450 효소의 활성 증가를 확인하였다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다 할 것이다.
실시예 1: CYP450 환원효소유전자의 클로닝
벼 CYP450 환원효소유전자는 벼의 게놈 데이터베이스(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/Genome/PlantBlast.shtml?7)에서 이미 연구가 되어있는 애기장대의 NADPH-CYP450 환원효소 유전자(ATR1, X66016)와 상동성을 갖는 염기서열을 BLAST를 이용하여 63%의 상동성과 76%의 유사성을 갖는 염기서열을 얻었다.
NADPH-CYP450환원효소의 cDNA를 얻기위하여, 20일을 동안 배양한 벼(Oriza sativa)에서 전체 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA는 올리고 dT 프라이머를 사용하여 역전사과정을 통해 cDNA를 합성하였다. 상기 cDNA를 주형으로 하여 벼의 게놈에서 얻은 염기서열을 바탕으로 만든 하기 프라이머(서열 3 및 서열 4)를 이용하여 PCR 을 실시하였다.
서열 3: 5'- caaccaaaccctcgcttc -3'
서열 4: 5'- gctagagcgagctatttctga -3'
PCR은 Taq DNA 중합효소를 상기 벼의 cDNA와 상기 두 프라이머(서열 3 및 서열 4)를 혼합하여 94oC에서 60초, 55oC에서 60초간, 72oC에서 120초의 사이클을 40회 반복하여 2.1kb에 해당하는 CYP450 환원효소유전자를 대량 증폭하였다. 증폭된 DNA 단편을 클로닝 벡터인 pGEM-T easy(Promega Co., 미국)에 클로닝하여 플라스미드 pGEM/CPR을 제작하고, 상기 플라스미드를 이용하여 삽입된 DNA 단편의 염기서열을 결정하였다 (서열 1).
실시예 2: CYP450 환원효소의 발현벡터 제작
본 실시예에서는 벼의 CYP450 환원효소 유전자를 효모에서 발현시키기 위하여 효모발현용 벡터인 pESC(Stratagene, USA)를 이용하여 플라스미드를 클로닝하였다.
실시예 1에서 제작한 CYP450 환원효소 유전자가 삽입된 pGEM/CPR 플라스미드를 SpeI 제한효소 부위를 삽입하여 제작한 CYP450 환원효소 유전자 클로닝용 프라이머(서열 5 및 서열 6)와 함께 pfu Taq 중합효소를 이용해 PCR을 수행하였다.
서열 5: 5'-atggcgctggcgctgg-3'
서열 6: 5'-atactagttcaccatacgtcacggagcctg-3'
PCR을 통해 수득된 CYP450 환원효소유전자 단편은 SpeI으로 절단한 후, SpeI 및 SmaI으로 절단된 pESC 벡터와 라이게이션하였다. 상기 라이게이션한 플라스미드들은 CYP450유전자의 하나인 이소플라본 합성효소 유전자(IFS)를 발현하는 효모(Saccharomyces cerevisiae)에 형질전환시켰다. IFS를 발현하는 효모는 다음과 같은 방법으로 형질전환하여 제조하였다.
IFS 발현 효모의 제조
효모를 하룻밤 배양한 후 O.D600에서 0.4가 되도록 YPD배지(1% Yeast extract, 2 %Peptone, 2% Dextrose)를 더 넣어 준 후 4시간 정도를 더 키운다. 이렇게 키운 효모는 3500rpm으로 원심분리 후 1×TE버퍼 20ml로 세척하고 다시 3500rpm으로 원심분리 하였다. 효모 펠렛을 1×LiAc/0.5×TE 용액 2ml에 현탁시킨 후 10분 동안 상온에서 놓아둔다. 그 후 연어 정자 DNA 10㎕와 함께 IFS유전자를 삽입한 벡터 10㎕를 같이 넣은 후 1×LiAc/40% PEG-3350/1×TE 용액 700㎕를 넣어 주고 잘 섞어 준다. 30℃에서 30분동안 두었다가 DMSO 88㎕를 넣어주고 다시 42℃에서 7분 동안 둔다. 그 후 원심분리를 하여 효모를 모은 후 1×TE 1ml을 이용하여 세척하고, 원심분리를 통해 효모를 모아 배양접시에 도말한 후 배양된 효모 콜로니들을 PCR방법을 통해 IFS 유전자가 삽입된 콜로니를 선별하였다.
재조합 벡터의 확인
NADPH-CYP450 환원효소 유전자가 삽입된 플라스미드로 형질전환된 효모는 우라실과 히스티딘이 없는 이스트 배지(Yeast Nitrogen Base 1.7g, Ammonium Sulfate 5g, -Ura/-His Drop out suplement 0.77g, Glucose 2%, /L, PH 5.8)에서 선발하였으며, 선발된 효모로부터 플라스미드를 분리하여 PCR을 통해 NADPH-CYP450 환원효소 유전자의 유무를 확인하고, pESC-CPR로 명명하였다.
실시예 3: CYP450 환원효소의 분리
NADPH-CYP450 환원효소의 발현유도
pESC-CPR로 형질전환된 효모는 글루코스가 포함된 100ml의 Ura/-His배지에 접종하여, 30oC에서 24시간 동안 200rpm으로 진탕배양하였다. 상기 효모는 600nm의 파장에서 흡광도가 2.0이 되도록 더 배양한 후, 3500rpm에서 5분간 원심분리하여 배지를 제거한 후, 500ml의 갈락토오스가 첨가된 새로운 Ura/-His배지를 첨가하여, 흡광도가 0.4가 되도록 배양 한 후, 30oC 200rpm에서 20시간 정도 배양하여 CYP450 환원효소의 발현을 유도하였다.
재조합 단백질의 분리
재조합 NADPH-CYP450 환원효소 단백질은 효모의 마이크로 좀에 위치하므로 효모의 마이크로좀을 분리하여 회수하였다. NADPH-CYP450 환원효소의 발현을 유도시킨 효모를 425-600㎛ 크기의 글래스 비드(glass bead)와 같이 세차게 볼텍싱하여 물리적으로 효모의 세포벽을 파쇄한 후, 36000rpm으로 90분간 원심분리하여 상층액을 분리하여 NADPH-CYP450환원효소가 포함된 마이크로좀 용액을 사용하였다.
실시예 4: 유전자의 발현 확인과 기질 반응을 통한 활성 확인
효모에서의 NADPH-CYP450 환원효소 발현 확인
NADPH-CYP450 환원효소 유전자가 삽입된 플라스미드로 형질전환된 효모(Saccharomyces cerevisiae/pESC-CPR)와 NADPH-CYP450 환원효소 유전자가 삽입되지 않은 플라스미드만 삽입되어있는 효모(Saccharomyces cerevisiae/pESC)의 마이크로좀을 실시예 3의 방법으로 분리하여 NADPH-CYP450 환원효소의 활성을 측정하였다.
상기활성은 Cytochrome c Reductase (NADPH) Assay Kit(CY0100, 시그마, USA)를 사용하여 측정하였다. 측정방법은 상기 분리한 마이크로좀 용액과 상기 키트의 Working용액, NADPH 용액(0.85mg/ml)을 각각 50㎕, 950㎕ 및 100㎕씩 섞어 주고 550nm의 파장에서 NADPH를 환원시키는 정도를 분광광도계를 사용하여 측정하여 효모에서의 NADPH-CYP450 환원효소의 발현과 활성을 확인하였다.
HPLC를 이용한 활성 측정
실시예 3의 방법으로 NADPH-CYP450 환원효소의 발현을 유도한 후 마이크로좀을 분리하였다. 상기 NADPH-CYP450 환원효소와 CYP450단백질을 포함하는 마이크로좀에 NADPH를 최종농도 1mM으로 첨가하고, 나린제닌을 최종농도 100μM 이 되도 록 첨가하였다. 반응액은 30oC 에서 2시간동안을 반응시킨 후, 에틸아세테이트를 이용하여 두 번 추출 하고, 추출액을 진공건조한 후, 메탄올에 녹여 HPLC를 통해 정량하였다.
사용한 HPLC조건은 다음과 같다. 컬럼은 SUMICHIRAL OA-7000컬럼(직경 5um, 4.6mm × 25Cm)이며 분석 시 흘려주는 완충용액은 50mM 인산(Phosphate, pH3.0)을 사용하였다. 시간당 농도 구배는 0분에 아세토니트릴 10%, 10분까지 아세토니트릴 30%, 40분까지 아세토니트릴 60%로 흘려주었으며 유속은 분당 1ml이었고 파장은 270nm로 측정하였다.
도 1은 효모에서 발현된 CYP450환원효소에 의한 NADPH 환원 활성의 증가를 나타낸 HPLC 결과이다. 도 1에 나타난 바와 같이, 아이소플라본 합성효소(IFS)만 단독으로 발현된 효모의 마이크로좀 분리액을 처리한 나린제닌보다 아이소플라본 합성효소와 CYP450환원효소가 함께 발현된 효모의 마이크로좀 분리액을 처리한 나린제닌에서 훨씬 더 많은 제닌스테인이 생성되는 것을 확인하였다.
그러므로, 효모에서 CYP450 환원효소 유전자가 이소플라본 합성효소(IFS) 효소활성과 유전자 발현을 크게 증가 시키는 것을 확인할 수 있었다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따 라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
본 발명은 사이토크롬 P450 단백질의 활성을 증가시키는 NADPH-CYP450 환원효소 및 그 유전자를 제공하는 효과가 있다. 본 발명은 또한, 상기 유전자를 포함하는 재조합 벡터 및 상기 재조합 벡터로 형질전환된 미생물을 제공하는 효과가 있다. 본 발명은 또한, 상기 형질전환된 미생물을 배양하는 것을 특징으로 하는 상기 NADPH-CYP450 환원효소의 제조방법을 제공하는 효과가 있다. 본 발명은 또한, CYP450을 이용한 기질의 전환을 통해 반응물을 제조하는 방법에 있어서, 상기 NADPH-CYP450 환원효소, 상기 형질전환된 미생물 또는 그 파쇄물을 첨가하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공하는 효과가 있다.
본 발명에 따르면, CYP450을 사용하여 생물학적으로 합성되는 의약품, 농약 등의 화학물질의 제조에 있어서, CYP450의 활성을 증가시켜 의약품의 제조효율을 높일 수 있다.
서열목록 전자파일 첨부

Claims (11)

  1. 서열번호 2의 아미노산 서열을 가지는 NADPH-CYP450 환원효소.
  2. 제1항의 NADPH-CYP450 환원효소를 코딩하는 유전자.
  3. 제2항에 있어서, 서열번호 1의 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 유전자.
  4. 제2항에 있어서, 유전자는 Oriza sativa 유래인 것을 특징으로 하는 유전자.
  5. 제2항의 유전자를 함유하는 재조합 벡터.
  6. 제5항의 재조합 벡터로 형질전환된 미생물.
  7. 제6항에 있어서, 미생물은 효모인 것을 특징으로 하는 형질전환된 미생물.
  8. 제7항에 있어서, CYP450을 발현하는 효모인 것을 특징으로 하는 형질전환된 미생물.
  9. 제6항의 형질전환된 미생물을 배양하는 것을 특징으로 하는 제1항에 따른 NADPH-CYP450 환원효소의 제조방법.
  10. CYP450을 이용한 기질의 전환을 통하여 반응물을 제조하는 방법에 있어서,
    제1항의 NADPH-CYP450 환원효소, 제6항의 형질전환된 미생물 또는 그 파쇄물을 첨가하는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, CYP450은 이소플라본 합성효소(IFS)이고, 기질 및 반응물 은 각각 나린제닌 및 제닌스테인 인 것을 특징으로 하는 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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논문

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101803174B1 (ko) 2016-03-04 2017-11-29 인하대학교 산학협력단 코돈 최적화된 사이클로스포린 특이적 p450 수산화효소 및 이를 이용한 대장균 기반의 최적화된 사이클로스포린 생전환 방법

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