KR100554948B1 - 탈모 방지 및 모발 생장 촉진 효과를 가지는 생약 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 생지황, 하수오 및 황정 혼합 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로 본 발명의 추출물은 모모(毛母)의 상피 세포 성장 효과 및 마우스를 통한 모발 생장 효과를 나타내는바 탈모 방지, 개선 및 발모 효과를 나타내는 의약품 및 건강기능식품으로 유용하게 사용될 수 있다.

생지황, 하수오, 황정, 탈모, 발모, 대머리

Description

탈모 방지 및 모발 생장 촉진 효과를 가지는 생약 조성물{Herbal composition for preventing and improving baldness}

도 1은 혼합추출물(1), (2) 및 (3)의 모모(毛母)의 상피세포 성장 효과에 미치는 영향을 나타낸 도이며,

도 2는 혼합추출물(1), (4), (5) 및 (6)의 모모(毛母)의 상피세포 성장 효과에 미치는 영향을 나타낸 도이고,

도 3은 혼합추출물(1), (7) 및 (8)의 모모(毛母)의 상피세포 성장 효과에 미치는 영향을 나타낸 도이며,

도 4는 혼합추출물(1) 및 단일추출물(1) 내지 단일추출물(3)의 모모(毛母)의 상피세포 성장 효과에 미치는 영향을 나타낸 도이고,

도 5는 혼합추출물(1), (5), (7) 및 (8)의 발모 효과를 나타낸 도이며,

도 6a는 음성대조군의 모발 생장 효과를 나타낸 도이고,

도 6b는 혼합추출물(1)의 모발 생장 효과를 나타낸 도이며,

도 6c는 혼합추출물(5)의 모발 생장 효과를 나타낸 도이고,

도 6d는 혼합추출물(7)의 모발 생장 효과를 나타낸 도이며,

도 6e는 혼합추출물(8)의 모발 생장 효과를 나타낸 도이고,

도 6f는 양성 대조군인 미녹시딜(Minoxidil)의 모발 생장 효과를 나타낸 도이며,

도 6g는 양성 대조군인 H사의 마이녹실의 모발 생장 효과를 나타낸 도이고,

도 7a는 혼합추출물(1) 도포 전 피험자의 탈모 진행 상태를 나타낸 도이며,

도 7b는 혼합추출물(1)을 피험자에게 6개월 동안 도포했을 때, 피험자의 발모 진행 정도를 나타낸 도이다.

본 발명은 생지황, 하수오 및 황정 혼합 추출물을 함유하는 탈모 방지 및 모발 생장 촉진 효과를 갖는 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 머리는 두피에서 모발이 나오는 상태를 일컫는 것으로 몸이 허약하거나 또는 여러 가지 스트레스, 각종 공해 등으로 인하여 머리카락의 영양이 미약해지는가 하면 머리가 잘 빠지거나 심지어는 대머리 현상까지 이르게 되는데 이러한 현상은 여성보다는 남성에게서 월등하게 그 발생빈도가 높다고 하겠다. 모발이 잘 빠지거나 거칠며 영양이 없는 원인은 아직 과학적으로 명확하게 구명되지는 않았지만, 이는 유전적 소인이 가장 큰 것으로 알려져 있고, 그 밖에 내분비계의 장애, 자율신경계의 이상, 알레르기, 모근의 영양결핍, 세균 감염, 노화 등의 원인으로 추정되고 있다.

탈모증은 남녀 모두에게서 흔히 볼 수 있는 증상이며 이로 인해서 많은 사람들이 생활에 지장을 받고 있고 탈모증을 치료하거나 외모를 개선하기 위해서 상당한 사회적 비용이 지출되고 있다. 정상적인 모발의 성장은 성장기(anagen), 퇴축기(catagen) 그리고 휴식기(telogen)의 주기에 따라서 이루어진다. 동물의 털이나 인체의 다른 부위의 모발에 비해 인간 머리카락은 상대적으로 긴 성장주기를 가진다(성장기, 2-5년; 퇴축기, 수일-수주; 휴식기, 3달). 모발의 성장주기를 조절하는 과정에는 여러 요인이 관여하는 것으로 알려져 있으나 아직 정확한 작용 기작은 정확히 알려져 있다.

탈모증은 크게 두 종류가 있다. 첫째는 남성형 탈모증(male pattern baldness), 장년형 탈모증(alopecia seniles) 또는 남성 호르몬성 탈모증 (androgenic alopecia)이라고 불리는 것으로 중년 남성에게서 흔히 볼 수 있으며 전두부와 두정부에서 시작되고, 둘째로는 원형 탈모증(alopecia areata)이라고 불리는 것으로 원형 내지는 타원형의 비교적 경계가 명확한 탈모를 보이며 청소년기에 발생할 수 있는 탈모증이 있다. 탈모증은 남성에만 있는 질병이 아니고 여성에서도 발생하며, 탈모증의 대부분은 남성형 탈모증으로서 남녀에 상관없이 발생한다. 원형 탈모증 역시 남녀 모두에게 발생하나 여성이 남성에 비하여 발생 빈도가 낮다. (M. Inaba et al., Androgenetic Alopecia, Springer-Berlag, Tokyo, Japan, 1996).

일반적으로 사람의 두발이 탈모되는 원인은 유전적 요인, 노화의 진행, 약물 복용, 방사선 치료, 및 중병 후 스트레스 등을 들 수 있다. 생화학적 및 생리학적 관점에서 탈모 현상은 남성호르몬의 과다 활동, 두피 혈액순환의 문제 및 모발대사에 필수적인 영양소의 결핍의 세 가지 주요 원인에 의한 것이라고 알려져 있다. 상기 세 가지 요인들이 단독으로도 탈모를 유발할 수 있지만, 탈모요인들이 복합되어 상승작용을 일으키게 되면 탈모증이 가속화되고 증상이 심해지게 된다. 특히, 유전적 요인 또는 후천적 특수조건으로 인하여 남성호르몬의 생성, 변화, 인식 및 신호전달 과정이 과도하게 작동하여 모낭 조직이 조기 노화되는 경향을 갖게 된다면 그렇지 않은 일반인 보다 조기에 대머리가 될 확률이 높다. 또한 유전적 요인, 노화, 서구적 고지방 식생활 및 기타 외부적 요인으로 인하여 두피의 긴장도가 쉽게 높아지거나 동맥경화증 등의 증상이 있는 경우 혈액순환 장애가 쉽게 일어나므로 원활한 모발 대사에 장애가 생긴다.

원형 탈모증은 원형 또는 타원형으로 탈모의 경계가 명확하며, 단발 또는 다발이 될 수도 있고, 심하면 두발 전부 혹은 눈썹까지 빠지는 경우도 있다(범발성 탈모증). 단발성인 것들은 특별한 치료 없이 치유되기도 하지만 범위가 넓은 경우는 재발할 수 있다. 최근의 세포생물학적 연구에 의하면 원형탈모증이 일종의 자가면역질환인 것으로 밝혀지고 있다. 즉, 모포에 손상을 줄 수 있는 임파구(CD4+)가 모포의 주변에 집결하여 있고 주된 표적은 멜라닌세포(melanocyte), 각화세포 (keratinocyte), 모유두(dermal papilla), 그리고 혈관내피세포(vascular endothelium)로 알려져 있다.

남성형 탈모증이나 원형 탈모증 이외에, 각종 항암제를 투여하였을 때 탈모 현상이 발생한다. 항암제는 사람과 동물에 투여하였을 때 분열하는 조직에 가장 먼 저 작용하는데 암조직은 물론 조혈 장기, 위장관 내피세포군, 그리고 피부의 피지선과 모낭세포에도 작용하게 되므로 부작용으로 탈모가 유발된다.

최근에 현대인들에게는 대기오염과 같은 환경적인 요인과 정신적인 스트레스, 그리고 헤어 미용 제품의 과다 사용으로 인하여 원형 또는 불규칙한 원형으로 흔히 대머리라고 하는 탈모증이 많이 발생하고, 나이도 점차 낮아지고 있다. 이와 같은 대머리나 기타의 탈모증은 당사자들에게 심각한 스트레스를 유발시키고 자신감을 잃게 만들어 대인관계에 지장을 초래할 수 있으므로 발생 초기에 치료하는 것이 바람직하지만, 현재 시중에 판매되는 대머리 치료제들은 그 효과가 미약하거나 전혀 없고, 의학적으로도 검증되지 않은 것이 많아 오히려 인체에 심각한 부작용을 일으킬 문제점이 있다.

생약성분의 추출물을 이용하여 두피에 바르거나 복용함으로써 발모를 촉진시키려는 시도 또한 많이 있었는데, 난초과 식물의 추출물을 이용하는 경우(대한민국특허 제0157667호), 웅지와 만형자를 이용하는 경우(대한민국 특허 제0161338호), 만병초 엑기스를 유효성분으로 사용하는 경우(한국특허공개 제91-106호), 소나무잎 추출물을 이용한 발모촉진제(한국특허공개 제96-40346호), 누에 등을 이용한 발모촉진제(한국특허공개 제 90-2757호), 오갈피 뿌리, 단삼 뿌리, 적하수오 뿌리, 부채마, 및 메밀을 유효성분으로 하는 발모 육모제(한국공개 특2000-24499), 반하, 정향, 복분자, 산초, 만형자, 단삼 및 백자인을 이용하는 경우(대한민국 특허 제259037), 원잠아, 잠종, 잠태, 잠사, 및 번데기를 약 200℃에서 15분 정도 가열하여 얻은 기름을 사용하는 경우 (한국공개특허 제90-2757호), 인삼, 황기, 당귀, 하 수오, 호도, 복분자, 생지황, 보골지, 송채, 단삼, 홍화, 여정실 혼합 추출물을 사용하는 경우(한국공개특허 제90-13934호), 원잠아(누에나방), 잠종(누에씨), 번데기(누에), 검은깨, 다시마, 참깨, 및 호두알을 고압 고온 추출하여 사용하는 경우(한국공개특허 제90-5952호), 녹두분, 대두분, 흑미분, 들깨분, 참깨분, 호두분, 김분, 홍합분, 굴분, 멸치분, 미역분, 다시마분, 효모농축액 또는 이의 건조분을 혼합 사용하는 경우(대한민국 특허 제0260673호), 사상자, 솔잎, 및 원잠아를 사용하는 경우(한국공개특허 제90-002757호), 구기자 열매, 뿌리, 가지(줄기), 잎, 순, 꽃 및 강냉이 수염을 사용하는 경우(한국공개특허 특2000-36534호) 등이 공개된 바 있으나 그 작용 원리가 명확하지 않으며 효능이 충분히 검증되지 않은 실정이다.

상기와 같이, 전술한 공지의 방법 및 발모제들은 탈모 환자에게 경제적 부담 및 고통을 주거나 부작용을 유발하고, 효과가 일시적이거나 또는 단편적인 약리학적 기작만을 사용하는 등의 문제점을 가지고 있어서, 효과가 보다 탁월하고 지속적이며, 부작용이 없는 약제들의 요구가 증대되고 있는 실정이다.

본 발명의 생지황(Rehmannia glutinosa Libschitz var . purpurea Makino)은 현삼과에 속하는 다년생 초본식물의 신선한 뿌리를 약재로 쓰는데, 이것을 지황이라고 한다. 신선한 근경을 생지황 또는 선지황, 말린 것을 건지황, 생지황을 황주(黃酒)에 넣고 찌고 햇볕에 말린 것을 9번 거듭한 것을 숙지황이라고도 한다. 생지황은 맛과 성질은 달고 쓰며, 차갑다. 십이경락 중 심경(心經), 간경(肝經), 신경(腎經)에 들어간다. 효능은 열을 내리고, 피를 맑게 하고, 진액을 만들어준다. 임상응용 및 용법은 열이 몸의 속 부위인 영혈로 들어간 것, 진음이 손상되어 가슴이 답답하고 갈증을 느끼는 것, 혀가 심하게 붉으면서 건조한 것, 피가 섞인 기침, 피를 토하는 증상, 코피가 나는 증상, 소변이나 대변에 피가 섞여 나오는 증상, 또한 몸이 쇠약하여 나타나는 발열, 목이 붓고 아픈 증상, 당뇨병 등에 사용한다.

하수오(Cynanchum silfordii Hemsley)는 여뀌과에 속하는 다년생 덩굴초본으로 산삼과 견줄만한 약성을 인정받으며, 성질은 따뜻하고 맛은 쓰고 떫으며 독이 없다. 하수오는 고구마처럼 생겼는데 그보다 약간 작고, 인삼이 귀할 때는 인삼 대신으로, 숙지황이 없으면 대용품으로, 또는 숙지황이 있어도 숙지황보다 금기 기운이 덜하고 소화가 잘되기 때문 하수오를 쓰기도 하였다. 하수오는 당귀나 숙지황의 기능과 같이 피를 생성하여 원활하게 해주는 작용, 염증, 종기, 부스럼을 없애주는 작용을 하고 이외에도 가래와 담을 삭히고 부인의 산후병, 냉, 대하 등을 치료하고, 골수를 채우며, 근골을 튼튼하게 하는 작용이 있다. 생으로 쓸 경우에는 기운을 소통시켜 대변 소통을 원활히 해주는 작용 외에 해독작용을 하기도 하며 적당히 찌거나 삶은 다음에 말려서 쓰면 간과 신을 보해서 혈과 정이 생겨나게 한다. 머리를 검게 할 목적으로는 사용할 때는 검은 콩, 검은 깨와 함께 사용하는 것이 좋다고 되어 있다.

황정(Polygonatum sibiricum Redt .)은 나리과의 숙근초로서 전국각지의 숲 속에 자생한다. 줄기에 6줄의 능각이 있고 근경은 굵으며 옆으로 뻗는다. 근경의 마디에서 많은 수염뿌리가 난다. 대잎 둥글레(죽대)뿌리줄기를 황정이라고 하고, 과혈당을 일으킨 동물에게서 혈당량을 뚜렷이 줄이는 효과를 보인다. 또한 강심작용이 있어서 심장을 강하게 수축시키고 율동을 느리게 한다. 혈압을 높이며 호흡을 흥분시키기도 한다.

본 발명은 한방제로 사용되고 있는 생약, 야채, 과일, 꽃 등의 식물 추출물 가운데 안정성이 뛰어나고 탈모 방지 및 발모 효능을 가진 원료를 찾고자 하는 노력을 계속 해오는 가운데 생지황, 하수오 및 황정의 혼합 추출물이 모모(毛母)의 상피 세포 성장 효과 및 마우스를 통한 모발 생장 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 탈모 방지 및 발모 효과를 갖는 천연의 약재인 생지황, 하수오 및 황정 혼합추출물을 포함하는 약학 조성물 및 건강기능식품을 제공하는데 있다.

상기 목적에 따라, 본 발명은 탈모 방지 및 발모 효과를 갖는 생지황, 하수오 및 황정 혼합추출물을 포함하는 조성물을 제공한다.

본원에서 정의되는 혼합 추출물은 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 저급 알콜 용매에 가용한 극성용매 가용추출물 및 비극성용매 가용 추출물이며, 바람직하게는 에탄올 가용 추출물, 더욱 바람직하게는 70%에탄올 가용 추출물임을 특징으로 한다.

본 발명의 생지황, 하수오 및 황정 혼합추출물은 그 구성 배합비가 생지황 : 하수오 : 황정(1~10 : 1~5 : 1~5), 바람직하게는 생지황 : 하수오 : 황정(1~6 : 1~3 : 1~3)의 중량비(w/w)임을 특징으로 한다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 생지황, 하수오 및 황정 혼합추출물은 우선, 생지황은 세척 후 음건하여 세절하고, 하수오 및 황정은 불순물을 제거하여 세절한 후 생지황, 하수오 및 황정, 바람직하게는 그 구성 배합비가 생지황 : 하수오 : 황정(1~10 : 1~5 : 1~5)의 중량비(w/w), 더욱 바람직하게는 그 구성 배합비가 생지황 : 하수오 : 황정(1~6 : 1~3 : 1~3)의 중량비(w/w)로 이것의 1 내지 10, 바람직하게는 1 내지 5배 부피의 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등과 같은 C₁ 내지 C₄의 저급 알콜의 극성 용매 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매, 바람직하게는 에탄올을 가하여 0.5 내지 10시간, 바람직하게는 2 내지 5시간 동안 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 등의 추출방법으로, 바람직하게는 환류 추출한 후, 추출액을 여지로 감압 여과하는 제 1단계 ; 상기 제 1단계에서 얻은 조추출물에 수포화 헥산(Hexane)을 첨가하여 3회 층으로 분리한 후 헥산(Hexane) 층만을 모아 40 내지 80℃, 바람직하게는 60 내지 70℃ 온도에서 감압 농축한 후, 증류수를 가해 현탁하여 진공 동결건조, 열풍건조 또는 분사방식에 의한 건조법으로, 바람직하게는 -44℃, 70 x 10^-3 mbar 조건 하에서 1 ~ 5일, 바람직하게는 2 내지 3일 동안 동결 건조하여 분말 상태의 생지황, 하수오 및 황정의 추출물을 수득하는 제 2단계의 공정을 통하여 본 발명의 정제된 혼합 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기의 제조방법으로 얻어진 생지황, 하수오 및 황정의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 및 발모 촉진용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 탈모 방지 및 발모 촉진용 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

본 발명의 추출물을 포함하는 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학 조성물을 제공한다. 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들 면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 생지황, 하수오 및 황정 혼합 추출물을 함유하는 발모촉진용 또는 탈모방지용 조성물은 두발 또는 피부에 적용할 수 있는 피부 외용제 제형으로서 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 100㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 10㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명은 탈모 방지 및 발모 촉진 효과를 갖는 생지황, 하수오 및 황정 혼합 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 본 발명의 혼합추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.

또한, 탈모 예방 및 발모 촉진 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 전체 식품 중량의 0.01 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제, 액제 등의 형태를 포함한다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한점이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 참고예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 생지황, 하수오 및 황정 혼합 추출물의 제조

1-1. 혼합추출물(1)

생지황은 수돗물로 잘 세척하고 하루 동안 건조시킨 후 세절하고, 하수오 및 황정은 불순물을 제거하여 세절한 후 생지황 50g, 하수오 25g, 황정 25g(중량비(w/w) = 2 : 1 : 1)를 준비하여 70%(v/v) 에탄올 수용액 300㎖를 가한 후 3 시간 동안 환류 장치를 이용하여 추출하고 와트만지(whatman No.2)에 여과한 후 감압 농축하여 에탄올 추출물을 수득하였다. 상기 에탄올 추출물에 400㎖의 수포화 헥산 (Hexane)을 첨가하여 3회 층으로 분리하여 헥산(Hexane)층만을 모아 60 내지 70℃ 온도에서 감압 농축한 후, 증류수 50㎖을 가해 현탁하여 -44℃, 70 x 10^-3 mbar 조건 하에서 2 ~ 3일 동안 동결 건조하여 최종적으로 분말 상태의 생지황, 하수오 및 황정의 혼합 추출물(1) 0.42g를 수득하였다.

1-2. 혼합추출물(2)

하수오는 수돗물로 잘 세척하고 하루 동안 건조하여 세절하고, 하수오 및 황정은 불순물을 제거한 후 세절하여 생지황 50g, 하수오 25g, 황정 25g(중량비(w/w) = 2 : 1 : 1)에 물 300㎖를 가한 후 3 시간 동안 환류 장치를 이용하여 추출하고 와트만지(whatman No.2)에 여과한 후 감압 농축하여, 증류수 50 ㎖을 가하고 현탁시킨 후 -44℃, 70 x 10^-3 mbar 조건 하에서 2 ~ 3일 동안 동결 건조하여 생지황, 하수오 및 황정의 혼합 추출물(2) 20.4g를 수득하였다.

1-3. 혼합추출물(3)

하수오는 수돗물로 잘 세척하고 하루 동안 건조하여 세절하고, 하수오 및 황정은 불순물을 제거한 후 세절하여 생지황 50g, 하수오 25g, 황정 25g(중량비(w/w) = 2 : 1 : 1)에 70%(v/v) 에탄올 수용액 300 ㎖를 가한 후 3 시간 동안환류 장치를 이용하여 추출하고 와트만지(whatman No.2)에 여과한 후 감압 농축하여 증류수 50㎖을 가하고 현탁시킨 후 -44℃, 70 x 10^-3 mbar 조건 하에서 2 ~ 3일 동안 동결 건 조하여 생지황, 하수오 및 황정의 혼합 추출물(3) 12.0 g를 수득하였다.

1-4. 혼합추출물(4)

생지황은 수돗물로 잘 세척하고 하루 동안 건조하여 세절하고, 하수오 및 황정은 불순물을 제거하여 생지황 50g, 하수오 50g, 황정 50g (중량비(w/w) = 1 : 1 : 1)에 70%(v/v) 에탄올 수용액 450㎖를 가한 후 3 시간 동안 환류 장치를 이용하여 추출하고 와트만지(whatman No.2)에 여과한 후 감압 농축하여 에탄올 추출물을 수득하였다. 상기 에탄올 추출물에 400㎖의 수포화 헥산(Hexane)을 첨가하여 3회 층으로 분리하여 헥산(Hexane)층만을 모아 60 내지 70℃ 온도에서 감압 농축한 후, 증류수 50㎖을 가해 현탁하여 -44℃, 70 x 10^-3 mbar 조건 하에서 2 ~ 3일 동안 동결 건조하여 최종적으로 분말 상태의 생지황, 하수오 및 황정의 혼합 추출물(4) 31.34g를 수득하였다.

1-5. 혼합추출물(5)

수돗물로 잘 세척하여 하루 동안 건조한 생지황 25g, 불순물을 제거한 하수오 50g 및 황정 25g(중량비(w/w) = 1 : 2 : 1)를 실시예 1-4와 같은 방법으로 생지황, 하수오 및 황정의 혼합 추출물(5) 15.59g를 수득하였다.

1-6. 혼합추출물(6)

생지황은 수돗물로 잘 세척하고, 하수오 및 황정은 불순물을 제거하여 생지 황 40g, 하수오 40g 및 황정 20g(중량비(w/w) = 1 : 1 : 1)를 준비하여 실시예 1-4와 같은 방법으로 생지황, 하수오 및 황정의 혼합 추출물(6) 21.06g를 수득하였다.

1-7. 혼합추출물(7)

생지황은 수돗물로 잘 세척하고 하루 동안 건조시킨 후 세절하고, 하수오 및 황정은 불순물을 제거하여 세절한 후 생지황 50g, 하수오 25g 및 황정 25g(중량비(w/w) = 2 : 1 : 1)에 70%(v/v) 에탄올 수용액 300㎖를 가한 후 3 시간 동안 환류 장치를 이용하여 추출하고 와트만지(whatman No.2)에 여과한 후 감압 농축하여 에탄올 추출물을 수득하였다. 상기 에탄올 추출물에 400㎖의 수포화 클로로포름(Chloroform)을 첨가하여 3회 층으로 분리하여 클로로포름(Chloroform) 층만을 모아 60 내지 70℃ 온도에서 감압 농축한 후, 증류수 50㎖을 가해 현탁하여 -44℃, 70 x 10^-3 mbar 조건 하에서 2 ~ 3일 동안 동결 건조하여 최종적으로 분말 상태의 생지황, 하수오 및 황정 혼합추출물(7) 0.36g를 수득하였다.

1-8. 혼합추출물(8)

실시예 1-7과 같은 방법으로, 클로로포름(Chloroform) 대신 부탄올(butanol)을 이용하여 0.41 g의 생지황, 하수오 및 황정 혼합추출물(8)을 수득하였다.

비교실시예 1. 생지황, 하수오 및 황정 단일 추출물의 제조

1-1. 단일추출물(1)

수돗물로 생지황 세척하여 하루 동안 건조시킨 생지황 200g를 세절하여 70%(v/v) 에탄올 수용액 300㎖를 가한 후 3 시간 동안 환류장치를 이용하여 추출하고 와트만지(whatman No.2)에 여과한 후 감압 농축하여 생지황 에탄올 추출물을 수득하였다. 상기 에탄올 추출물에 400㎖의 수포화 헥산(Hexane)을 첨가하여 3회 층으로 분리하여 헥산(Hexane)층만을 모아 60 내지 70℃ 온도에서 감압 농축한 후, 증류수 50㎖을 가해 현탁하여 -44℃, 70 x 10^-3 mbar 조건하에서 2 ~ 3일 동안 동결 건조하여 0.51 g의 생지황 단일추출물(1)을 수득하였다.

1-2. 단일추출물(2)

불순물을 제거한 하수오 100g를 상기 비교실시예 1-1과 같은 방법으로 하수오 단일추출물(2) 0.43 g를 수득하였다.

1-3. 단일추출물(3)

불순물을 제거한 황정 100g를 상기 비교실시예 1-1와 같은 방법으로 황정 단일추출물(3) 0.27g를 수득하였다.

실험예 1. 추출 용매에 따른 모모 상피 세포( Hair epithelial cell ) 성장 효과에 미치는 영향 실험

상기 실시예 1에서 수득한 혼합추출물(1), 혼합추출물(2) 및 혼합추출물(3)이 마우스의 모모 상피세포의 성장에 미치는 영향을 알아보기 위해 4일 된 C3H/HeSlc 마우스(중앙실험동물, SLC사, Japan)의 등 쪽 피부를 분리하여 세포를 분리하였다. 50U/㎖ 페니실린, 50㎍/㎖ 스트렙토마이신, 10% FCS(fetal calf serum, Gibco, 16000)이 포함된 DMEM 배지에 3 x 10⁵ cell/㎖가 되도록 하여 타입 1 콜라겐(collagen)으로 코팅된 24 웰(well)에 접종하여 1일 동안 37℃, 5% CO₂ 습윤 조건 하에서 배양하였다. 24 시간 후 5㎍/㎖ 소의 인슐린(bovine insulin, Sigma, I6634), 5pg/㎖ 마우스 EGF(Sigma E4127), 40㎍/㎖ 소의 뇌하수체 추출물(bovine pituitary extract, Gibco 13028), 10㎍/㎖ 휴먼 트랜스페린(human transferrin, Sigma, T3309), 0.4㎍/㎖ 하이드로코르티손(hydrocortisone, Sigma, H0888), 0.63pg/㎖ 프로게스테론(progesterone), 14㎍/㎖ O-포스포릴에타놀아민(O-phosphorylethanolamine, Sigma, P0503), 6.1㎍/㎖ 에탄올아민(ethanolamine, Sigma, E0135), 50U/㎖ 페니실린(penicillin), 50㎍/㎖ 스트렙토마이신(streptomycin, Gibco, 15140)이 포함된 MCDB153 배지(Sigma, M7403)로 바꾸고, 37℃, 5% CO₂ 습윤 조건 하에서 2일 간격으로 새로운 배지로 갈아 주면서 5일간 더 배양하였다.

배양한 마우스 모모 상피 세포에 상기 실시예 1에서 수득한 혼합추출물(1), 혼합추출물(2) 및 혼합추출물(3)을 처리하여 24시간 동안 배양한 후 5 ㎎/㎖의 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)시약 200㎕를 배 지에 넣고 37℃, 5% CO₂ 습윤 조건 하에서 4 시간 동안 배양하였다. 배양 시, 살아있는 세포에는 보라색의 크리스탈이 형성된다. 4 시간 배양 후 배지를 제거하고 DMSO 400㎕를 넣어 30분 동안 쉐이킹 인큐베이터(shaking incubator)에서 크리스탈을 녹인 후 540nm에서 흡광도를 측정하여 세포 성장의 정도를 확인하여 마우스의 모모 상피 세포 성장 효과에 미치는 영향을 도 1에 나타내었다. 실험 결과 도 1에 나타난 것처럼, 혼합추출물(2)을 제외하고 세포 성장 효과를 나타내었으며, 특히 혼합추출물(1)이 뛰어난 모모 상피 세포 성장 효과를 나타내었다.

실험예 2. 혼합 중량비에 따른 추출물이 마우스 모모 상피 세포( hair epithelial cell ) 성장 효과에 미치는 영향 실험

상기 실시예 1에서 수득한 혼합추출물(4) 내지 혼합추출물(6)이 마우스의 모모 상피 세포의 성장 효과에 미치는 영향을 알아보기 위해 실험예 1과 동일한 방법으로 실험하여 도 2에 나타내었다. 실험 결과 도 2에 보여지는 바와 같이 모모 상피 세포의 성장 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.

실험예 3. 분획을 거친 추출물이 마우스 모모 상피 세포( hair epithelial cell ) 성장 효과에 미치는 영향 실험

상기 실시예 1에서 수득한 혼합추출물(1), 혼합추출물(7) 및 혼합추출물(8)이 마우스의 모모 상피 세포 성장 효과에 미치는 영향을 알아보기 위해 실험예 1과 동일한 방법으로 실험하여 그 결과를 도 3에 나타내었다. 실험 결과 도 3에서 보여지는바와 같이 혼합추출물(1)은 뛰어난 세포 성장 효과를 나타내었으며, 혼합추출물(7)은 50 ㎍/㎖ 이하 범위에서는 낮은 세포 성장 효과를 나타내지만, 그 이상의 범위에서는 세포 성장 효과를 보였으나 혼합추출물(8)에서는 효과를 확인할 수 없었다.

실험예 4. 단일 추출물이 마우스 모모 상피 세포( hair epithelial cell ) 성장 효과에 미치는 영향 실험

상기 비교실시예 1에서 수득한 단일추출물(1) 내지 단일추출물(3)이 마우스의 모모 상피 세포의 성장 효과에 미치는 영향을 알아보기 위해 실험예 1과 동일한 방법으로 실험하여 그 결과를 도 4에 나타내었다. 실험 결과, 도 4에서 보여지는바와 같이 단일추출물(1) 내지 단일추출물(3)이 마우스의 모모 상피 세포의 성장에 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 5. C3H / HeSlc 마우스를 통한 모발 생장 효과 실험

상기 실시예 1에서 수득한 혼합추출물(1), 혼합추출물(5), 혼합추출물(7) 및 혼합추출물(8)을 시료로 이용하여 마우스에서의 실제 모발 생장 효과실험을 실시하였다. 7 주령의 C3H/HeSlc 마우스의 등 부위 털을 제거하고, 등 부위 피부가 깨끗한 것을 골라 물질군마다 4마리씩을 선정하여 매일 상기 시료 물질을 개체당 200㎕씩, 2주 동안 도포하며 진행하였으며, 양성 대조군으로 1% 미녹시딜(Minoxidil) 및 H사의 마이녹실을 이용하였다.

시간 경과에 따른 모발 생장정도 및 분포도를 각각 비교하였으며, 모발 생장 정도를 비교하기 위하여 대조군에는 상기 시료를 녹인 용매(64% 에탄올, 20% propylene glycol, 16% 증류수)를 각 개체에 동일하게 도포하여 모발의 생장 상태를 관찰하였다. 2주 후의 모발의 분포 정도를 다음 표 1, 도 5 및 도 6a 내지 도 6g에 나타내었다.

경과시간	시험물질
	대조군	혼합추출물(1)	혼합추출물(5)	혼합추출물(7)	혼합추출물(8)	미녹시딜(minoxidil)	마이녹실(H사)
2주	51.97%	94.79%	79.35%	87.31%	83.44%	90.91%	89.11%

표 1 및 도 5에서 보여지는바와 같이, 혼합추출물(1), (5), (7) 및 (8)은 양성 대조군인 미녹시딜 및 마이녹실과 유사하거나 뛰어난 발모 효과를 나타내었다. 또한 혼합추출물(1)은 양성 대조군인 미녹시딜과 마이녹실 보다 더욱 뛰어난 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다. 특히 H사의 마이녹실은 이용된C3H/HeSlc 마우스에서 피부 자극의 흔적이 발견되어, 본 발명의 혼합추출물이 피부 자극이 없는 안전한 물질임이 확인되었다.

실험예 6. 혼합추출물(1)의 피부 자극성 시험

상기 실시예 1에서 수득한 혼합추출물(1)의 피부 자극 정도를 알아보기 위하여 식품의약품안전청 고시1999-61호 "의약품의 독성 시험 기준"에 따라 본 연구소 내부적으로 뉴질랜드 화이트(New Zealand White) 수컷 토끼를 대상으로 피부자극시험을 실시하였다. 관찰은 첩포 24시간 후 첩포 부위에 대한 홍반, 가피형성, 부종형성 등의 피부자극 반응을 관찰하였다.

혼합추출물(1)을 토끼의 피부에 적용한 결과, 혼합추출물(1)에 따른 일반증상의 변화는 관찰되지 않았으며, 사망동물도 관찰되지 않았다. 또한 홍반, 가피 형성 등을 관찰한 결과 6마리 2마리에서 가벼운 홍조가 발견되었으나, 자극성을 평가한 결과 자극 지수가 약한 자극성 물질로 분류되어 자극성이 거의 없는 물질로 평가되어 안전하게 사용할 수 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 7. 혼합추출물(1)의 임상실험을 통한 모발 생장 효과 시험

32세의 여성 피험자는 탈모가 급격히 시작되어 불과 몇 개월 만에 앞머리와 정수리 부분의 원형 탈모로 머리숱이 거의 없어 대머리의 조짐이 보이기 시작했다. 증상으로는 머리 가려움, 비듬, 스트레스에 의한 피로, 신장 기능과 내분비 계통 저하로 탈모가 심각하게 진행되어 왔다.

이에 본 발명에 따른 혼합추출물(1)을 1일 3회에 걸쳐 두피에 도포하게 하였다. 도포 30일 후부터 머리 가려움과 비듬이 없어지면서 건강이 호전되는 동시에 현저하게 탈모 현상이 줄어들어 점차 정상화되면서 도포 3개월 후부터 정수리 부분의 탈모된 부위에서 솜털 같은 머리카락이 나기 시작 하더니 약 2 cm 자라 나오면서 뒤이어 연속적으로 머리카락이 자라기 시작하여 도포 6개월 만에 거의 정상적인 모발 상태로 회복되었다. 본 피험자의 도포 기간에 따른 발모 사진을 도 7b에 나타내었다.

도 7b에서 확인할 수 있듯이, 본 발명에 따른 혼합추출물(1)의 우수한 모발 생장효과와 장기간 도포에 따른 인체 무해성을 확인할 수 있었다.

본 발명의 생지황, 하수오 및 황정 혼합추출물을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

실시예 1의 혼합추출물(1) 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

실시예 1의 혼합추출물(5) 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

실시예 1의 혼합추출물(7) 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

실시예 1의 혼합추출물(8) 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO₄·12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

실시예 1의 혼합추출물(1) 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 친수성 연고제의 제조

번호	원 료	함량(중량%)	함량(중량%)
1	실시예 1의 혼합추출물(1)	0.5	-
2	백색 바세린	250	250
3	스테아릴 알콜	220	220
4	에칠(또는 메칠)p-옥시벤조에이트	0.25	0.25
5	프로필렌 글리콜	120	120
6	라우릴 황산 나트륨	15	15
7	프로필 p-옥시벤조에이트	0.15	0.15

제제예 7. 건강 식품의 제조

실시예 1의 혼합추출물(7) 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B₁ 0.13 ㎎

비타민 B₂ 0.15 ㎎

비타민 B₆ 0.5 ㎎

비타민 B₁₂ 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 8. 건강 음료의 제조

실시예 1의 혼합추출물(1) 100 ㎎

비타민 C 15 g

비타민 E(분말) 100 g

젖산철 19.75 g

산화아연 3.5 g

니코틴산아미드 3.5 g

비타민 A 0.2 g

비타민 B₁ 0.25 g

비타민 B₂ 0.3g

물 정량

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

상기와 같이, 본 발명은 생지황, 하수오 및 황정 혼합 추출물은 모모(毛母)의 상피 세포 성장 효과 및 마우스를 통한 모발 생장 효과를 나타내는바, 탈모 방지, 개선 및 발모 효과를 나타내는 의약품 및 건강기능식품에 이용할 수 있다.

Claims (6)

1. 구성 배합 중량비(w/w)가 생지황(1~6) : 하수오(1~3) : 황정(1~3)인 생지황, 하수오 및 황정 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 탈모 방지 및 발모 촉진용 약학조성물.
2. 삭제
3. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 70%(v/v)에탄올 수용액, 클로로포름 또는 헥산으로부터 선택된 용매에 가용한 추출물인 약학조성물.
4. 제 1항에 있어서, 상기 추출물 연고제 또는 경피 투여제의 국소 적용 제제 형태인 것을 특징으로 하는 약학조성물.
5. 삭제
6. 삭제

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