KR100531642B1 - 아프리카산 상황버섯 추출물을 함유하는 헤르페스 바이러스 관련 질환의 치료 및 예방을 위한 약학조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 헤르페스 바이러스(HSV) 억제능을 갖는 아프리카산 상황버섯(Phellinus genus) 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 아프리카산 상황버섯 추출물은 항 바이러스 효과에 의해 헤르페스 바이러스의 증식을 억제하므로, 헤르페스 바이러스 관련 질환의 치료 및 예방을 위한 의약품 또는 건강기능식품에 유용하게 이용할 수 있다.

Description

아프리카산 상황버섯 추출물을 함유하는 헤르페스 바이러스 관련 질환의 치료 및 예방을 위한 약학조성물{Pharmaceutical composition comprising the extract of African Phellinus mushroom for treatment and protection of disease related to simple herpes virus}

본 발명은 헤르페스 바이러스 억제능을 갖는 아프리카산 상황버섯 추출물을 함유하는 헤르페스 바이러스 관련 질환의 치료 및 예방을 위한 조성물에 관한 것이다.

헤르페스 바이러스(Herpes Simple Virus; 이하 HSV)는 헤르페스(Herpesvirus)과에 속하는 단순포진 바이러스이다. 모든 헤르페스 바이러스들은 구조적으로 유사하며, 지단백성 외피로 둘러싸인 정 20면체 핵심부를 가진 구형 바이러스로 유전체는 선상의 이중나선 DNA로 되어 있으며, 외피보유바이러스이다. 단순포진(simple herpes)은 단순 헤르페스 바이러스 1형 및 2형이 점막이나 피부에 침범하여 일으키는 급성 수포성 질환으로 열반진이라고도 한다. 1회에 그치기도 하지만 재발을 되풀이하는 것이 보통이며, 1형 바이러스는 주로 입 주위에 단순포진을 유발하고 2형 바이러스는 성기 부위에 감염을 일으킨다. 보통 여러 개의 붉은 물집이 생기며, 이 때 발열, 전신무력감, 근육통, 림프절이 붓는 등 다양한 전신 증세가 나타난다. 물집은 며칠 후 저절로 터지며 흉터를 남기지 않고 회복되는데 기간은 1 내지 3주 정도 걸리고, 드물게는 전신에 퍼져서 수두양 발진을 일으킨다.

초기감염은 단순 헤르페스 바이러스에 감염되지 않았던 사람이 처음 감염된 경우이며, 감염 초기에는 인체에 바이러스에 대한 항체가 없지만 병이 진행됨에 따라서 항체가 증가한다. 보통 증상 없이 피부 및 점막을 침범하여 항체만 생기는 급성 치은구내염이 발생하고 그 밖에 성기와 눈·비강 등을 침범하기도 한다. 재발감염은 과거에 간순 헤르페스 바이러스에 감염되었던 사람이 반복적으로 감염되는 경우이다. 환자의 혈청에는 항체가 잇으며 이 항체는 바뀌지 않는다. 재발성 단순포진은 외상, 발열, 일광, 월경, 변비 정서적 긴장 등에 의하여 유발된다.

헤르페스 바이러스와 관련된 질환으로는 치은구내염, 파종성 단순포진, 성기포진 및 수뇌막염과 같은 것이 있다. 치은구내염: 가장 흔한 초기감염으로 일반적으로 어린아이와 젊은 성인에게 많이 발생하고 입술, 혀, 잇몸, 구강점막, 인두, 드물게는 상기도에 물집을 형성하여 결국에는 미란을 일으키는 것이 특징이다. 고열·권태감·국소림프절증이 따르고 수일에서 4주일 가량 지나면 완쾌된다. 파종성 단순포진: 중증 포진성 치은구내염으로 시작하여 간이나 폐 등 내부장기를 침범하여 사망하는 경우도 있다. 신생아와 미숙아에게 많이 나타나며 영양결핍, 홍역, 면역억제제 사용, 아토피 피부염 등의 경우에 많이 발생한다. 성기포진: 남성은 귀두·음경·요도에서 여성은 음순·외음부·음핵·자궁경부에 많이 발생한다. 수포는 단독 또는 군집형으로 나타나며 며칠 내에 터져 궤양을 형성한다. 감염은 약 8일간 지속되며 흉터 없이 치유된다. 드물게는 월경·정서불안·성교·외상 등에 의하여 동일한 부위에 반복적으로 재발한다. 수뇌막염: 목의 강직, 정신증상, 혼수, 경련 등의 증세가 나타나며 치명적이다. 발생부위에 따라 각결막염·비염·요도염 등도 발생할 수 있다.

치료방법으로는 우선 안정과 휴식을 취하여 정신적인 긴장을 풀고 외상·햇빛 등 유발인자에 노출되지 않도록 주의하고, 물집이 있는 경우에는 냉습포 요법이 효과가 있으며, 또한 약물치료로 항바이러스제를 바르거나 복용하며, 세균의 2차 감염을 방지하기 위하여 항생제 연고를 바른다.

헤르페스 바이러스에 효과가 있는 것으로는 아시클로버, 리바비린 등이 알려져 있다.

상황(桑黃)버섯은 옛날부터 중국에서는 상이(桑耳)라고도 하여 뽕나무, 느릅나무, 사시나무, 오리나무 등의 활엽수의 심재부에 자생하는 버섯으로 소나무비늘버섯과(Hymenochaetaceae)의 진흙버섯속(Phellinus Ouel. Em.lmaz)에 속하는 백색부후균이다. 우리나라에서 상황버섯이라 함은 목질 진흙버섯(Phellinus Linteus)을 지칭한다. 상황버섯은 옛날부터 자궁출혈, 월경불순 등의 부인병치료제로 사용되어 왔으며 최근에는 높은 항암율 때문에 각광을 받고 있다. 상황버섯의 약리작용에 대한 약학계 및 의학계의 연구를 통해 지금까지 알려진 바로는 소화기 계통의 암인 위암, 식도암, 십이지장암, 결장암, 직장암을 비롯한 간암 수술 후 화학요법을 병행할 때 면역기능을 활성화한다는 것이다. 상황버섯의 효능이 다당류 베타글루칸에 의한 것으로 밝혀진 이후 다당류에 대한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 일반적으로 버섯류는 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 비타민 B2, B3, C, 섬유질아미노산을 함유하고 있는데, 상황버섯은 이런 성분외에 다당류 베타글루칸(polysaccharide β-glucan)을 함유하고 있다. 베타글루칸은 인체의 면역력을 높임으로써 몸안에 침입한 세균이나 이물질을 격퇴하고, 감염되어도 발병을 억제시키는 역할을 한다.

상황버섯과 관련한 종래의 발명으로, 한국특허출원 제 2001-0003264호는 펠리누스 린테우스 균주 및 이로부터 분리정제된 항암 면역활성 다당류에 대해 개시하고 있으며, 한국특허출원 제1998-0015617호는 펠리누스속 균주로부터 균사체 또는 자실체를 대량 배양하여 그로부터 면역증강활성을 나타내는 신규한 다당류물질의 분리 정제에 대해 개시하고 있다. 한국특허등록 제 10-0174433호는 펠리누스 린테우스 균주의 균사체로부터 분리 정제된 항암활성 다당류, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 약학적 조성물에 대해 개시하고 있으며, 한국특허출원 제 2000-0054319호는 금사상황버섯 추출물의 항암제로서의 용도에 대해 개시하고 있으며, 한국특허등록 제 10-0348115호는 자연산 상황버섯 추출물을 함유하는 발모제 조성물 및 이의 제조방법에 대해 개시하고 있다. 이외에도 상황버섯 및 그 추출물을 이용한 의약품 및 건강 식품들에 대한 많은 연구들이 국내외적으로 이루어지고 있다.

그러나, 진흙버섯에 속하는 모든 버섯이 이 같은 약효가 있는 것은 아니며 현재까지 밝혀진 바에 의하면 목질진흙버섯, 말똥진흙버섯, 전나무진흙버섯 정도이다.

본 발명의 아프리카산 상황버섯(Phellinus genus)은 소나무비늘버섯과(Hymenochaetaceae) 진흙버섯속(Phellinus)에 속하며, 아프리카 케냐의 고산 밀립지대에서 야생상태로 자생하는 뽕나무과에 속하는 활엽수 등에 기생하여 자라고 있는 버섯이다. 이곳의 생태적 특징은 적도부근의 열대 지역임에도 불구하고 해발 5000 m급의 고산지대로서 버섯의 생육에 최적환경을 갖추고 있다. 다년생이며, 표면은 회갈색 또는 암회색을 띄고 딱딱한 외피를 가져 매끈하다. 하면은 움푹하고 담갈색을 띠며 다공성이다. 포자는 작고 유구형이다. 해마다 층이 증가하며, 증가한 층이 뚜렷이 구분되어 쉽게 셀 수 있기에 이로부터 나이를 정확히 측정할 수 있다. 자실체는 다년생 경재이다. 일반적으로 갓은 말굽형이며 높이 11 cm, 폭 20 cm, 두께 8 cm에 이른다. 자라면 윗부분은 검게 갈라지며, 암회색을 띄고 표면이 거칠어진다. 완전히 자라면 갓은 그을듯한 색을 띄게 되며, 평평해진다. 아프리카산 상황버섯은 살아있거나 죽은 목재를 부패시켜 백목질 및 심재부에 백색 부패물을 생성한다.

질병치료와 관련한 의학적 효능은 이미 오래 전부터 동양의학에서 잘 알려져 있다. 항암효과를 나타내며, 추출물 역시 간암, 폐암 및 기타 여러 암들에 대한 우수한 치료 및 예방효과를 가짐이 임상실험에 의해 입증되었다.

그러나, 지금까지 상기 아프리카산 상황버섯의 항 헤르페스 바이러스 효과에 대해서는 연구되어진 바 없다.

본 발명자는 각종 헤르페스 바이러스 관련 질환으로 고생하던 특정지역 주민들이 상황버섯의 끓인 물을 복용하던 중 탁월한 치료효과를 보인 것에 착안하여, 아프리카산 상황버섯 추출물 및 세부분획물의 HSV 억제능을 실험한 결과, 그 탁월한 효능을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 아프리카산 상황버섯 추출물을 함유하는 헤르페스 바이러스 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물로써 의약품 및 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 아프리카산 상황버섯( Phellinus genus) 추출물을 함유하는 헤르페스 바이러스 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

상기 상황버섯은 아프리카 케냐, 우간다, 탄자니아 등의 동남부 아프리카 지역, 바람직하게는 케냐에 자생하는 상황버섯을 포함한다.

상기 헤르페스 바이러스 관련 질환으로는 치은구내염, 파종성 단순포진, 성기포진 또는 수뇌막염 등이 있다.

상기 상황버섯 추출물은 조추출물 또는 비극성 용매 가용성 추출물로써, 조추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올과 같은 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 또는 메탄올에 가용한 추출물을 의미하며, 비극성 용매 가용추출물은 헥산, 디클로로메탄 또는 에틸 아세테이트와 같은 비극성 용매, 바람직하게는 헥산 또는 에틸 아세테이트에 가용한 추출물을 포함한다.

또한, 상기 아프리카산 상황버섯 추출물에는 고분자 다당체(분자량 12,000이상) 분획을 갖는 아프리카산 상황버섯 열수 추출물 및 고분자 단백질(분자량 12,000이상) 분획을 갖는 아프리카산 상황버섯 냉침 추출물을 포함한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명의 상황버섯 조추출물, 비극성용매 가용추출물, 고분자 다당체 분획을 갖는 열수 추출물 및 고분자 단백질 분획을 갖는 냉침 추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다.

본 발명의 상황버섯을 채취하여 물로 깨끗이 수세하고 건조 후 균질기 등을 이용하여 마쇄하여 분말화 한 후, 상황버섯 건조중량의 약 2 내지 30 배, 바람직하게는 약 15 내지 30 배에 달하는 부피의 물, 메탄올, 에탄올 및 부탄올과 같은 저급 알콜 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매로, 바람직하게는 메탄올로 20 내지 100 ℃, 바람직하게는 50 내지 70 ℃의 추출 온도에서 약 0.5시간 내지 2일, 바람직하게는 1 시간 내지 1일 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법, 바람직하게는 열수 추출로 1회 내지 5회, 바람직하게는 3회 연속 추출하여 감압 여과하고 여과추출물을 진공회전농축기로 20 내지 100 ℃, 바람직하게는 20 내지 70 ℃에서 감압 농축하여 물, 저급알콜 또는 이들의 혼합용매에, 바람직하게는 메탄올에 가용한 추출물로써 상황버섯 조추출물을 수득할 수 있다.

본 발명의 비극성용매 가용 추출물은 상기 상황버섯 조추출물을 물에 현탁한 후, 헥산, 에틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름과 같은 비극성 용매를 이용하여 추출하여 본 발명의 상황버섯 비극성용매 가용 추출물을 수득할 수 있다. 좀 더 구체적으로는 상황버섯 조추출물, 바람직하게는 상황버섯 메탄올 추출물에 상황버섯 건조중량의 약 2 내지 30 배, 바람직하게는 약 15 내지 30 배에 달하는 부피의 물을 넣고 잘 저으면서 녹인 후, 여기에 일정량의 헥산 또는 에틸아세테이트를 혼합한 후, 3∼4 차례 반복, 분획하여 각각의 헥산 가용성 추출물 및 에틸아세테이트 가용성 추출물과 같은 비극성 용매 가용 추출물을 수득할 수 있다.

또한, 아프리카산 상황버섯 열수 추출물은 아프리카산 상황버섯을 물로 깨끗이 수세하고 건조시킨 다음, 건조상태의 상황버섯을 균질기를 이용하여 잘게 분쇄한 후, 상황버섯 건조 중량의 약 2 내지 30 배, 바람직하게는 약 3 내지 10 배에 달하는 부피의 물을 넣고 가열 멘틀을 이용하여 약 1 내지 24 시간, 바람직하게는 6 시간 동안 열수 추출한 후, 여지로 여과하여 수득한 열수 추출액에 1 내지 5 배, 바람직하게는 3 배의 저급알콜, 바람직하게는 냉(冷) 에탄올을 첨가하여 약 0 내지 10 ℃, 바람직하게는 4 ℃에서 약 12 내지 48 시간, 바람직하게는 24 시간 동안 침전시킨 다음, 상층액을 제거하고 원심분리하여 침전물을 모아 용매를 증발제거시킨 다음, 약 50 내지 100 ℃, 바람직하게는 60 ℃에서 증류수로 펠렛(pellet)을 재용해시켜 원심분리하는 과정을 2 내지 5 회 반복수행하여 수득된 상층액을 0 내지 10 ℃, 바람직하게는 4 ℃에서 약 12 내지 72 시간, 바람직하게는 48 시간 동안 증류수를 이용하여 투석한 후 동결건조하여 고분자 다당체(분자량 12,000 이상) 분획을 갖는 본 발명의 아프리카산 상황버섯 열수 추출물을 수득할 수 있다.

또한, 본 발명의 아프리카산 상황버섯 냉침 추출물은 아프리카산 상황버섯을 채취하여 물로 깨끗이 수세하고 건조시킨 다음, 건조상태의 상황버섯을 균질기를 이용하여 잘게 분쇄한 후, 완충용액을 가하고 약 0 내지 10 ℃, 바람직하게는 4 ℃에서 약 12 내지 24 시간 방치하여 냉침 추출한 후, 추출액을 여과하여 단백질 침전제로 에탄올, 아세톤 또는 황상암모늄(Ammonium sulfate)과 같은 염, 바람직하게는 황산암모늄을 가하고 포화상태로 한 후, 원심분리하여 상층액을 제거하고 수득한 침전물을 완충용액으로 재용해 시킨 다음, 재용해된 추출물을 완충용액을 이용하여 0 내지 10 ℃, 바람직하게는 4 ℃에서 50 내지 100 시간 동안, 바람직하게는 74 시간 동안 투석한 후, 단백질 양을 정량하여 고분자 단백질(분자량 12,000이상)분획을 갖는 아프리카산 상황버섯 냉침 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기 제조방법으로 얻어지는 헤르페스 바이러스 관련질환의 예방 및 치료에 효과적인 아프리카산 상황버섯 추출물을 제공한다.

또한, 본 발명의 상기 아프리카산 상황버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 헤르페스 바이러스 관련질환의 예방 및 치료에 효과적인 조성물을 제공한다.

본 발명의 헤르페스 바이러스 관련질환의 예방 및 치료용 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 80 중량 %, 바람직하게는 1.0 내지 50 중량 %를 포함한다.

본 발명의 추출물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 분획물과 결합 뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명의 아프리카산 상황버섯 추출물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상세하게는, 제제화할 경우 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

아프리카산 상황버섯 추출물의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 일반적으로 0.01 내지 500 mg/㎏의 양, 바람직하게는 0.1 내지 100∼200 mg/㎏의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다. 또한 추출물의 투여량은 투여경로, 질병의 종류 및 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 아프리카산 상황버섯 추출물 자체는 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.

본 발명은 상기에 기재된 헤르페스 바이러스 관련 질환의 예방 및 개선 효과를 나타내는 아프리카산 상황버섯 추출물 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 추출물들을 포함하는 조성물은 헤르페스 바이러스 관련질환의 예방 및 개선을 위한 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 아프리카산 상황버섯 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 각종 식품류, 예를 들어, 캔디, 초콜릿, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

이때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은, 일반적으로 본 발명의 건강 기능 식품 조성물의 경우 전체 식품 중량의 0.01 내지 50 중량 %, 바람직하게는 0.1 내지 20 중량 %로 가할 수 있으며, 건강 기능 음료 조성물의 경우 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등;과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

이 외 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그다지 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명은 다음의 실시예 및 실험예에 의거하여 더욱 상세히 설명되나, 본 발명이 실시예 또는 실험예에 의해 제한되지는 않는다.

실시예 1. 아프리카산 상황버섯 열수 추출물의 제조

아프리카산 상황버섯(아프리카 케냐에서 채집)을 10 ㎏ 채취하여 물로 깨끗이 수세하고 건조(차광된 음지에서 건조)시킨 다음, 건조상태의 상황버섯 200 g 을 균질기(homogenizer)를 이용하여 잘게 분쇄한 후, 가열 멘틀(heating mantle)에 상황버섯 20 g 당 물 1 ℓ를 넣고 100 ℃에서 6 시간동안 열수 추출한 후, 여지(filter paper)로 여과(filtering)하여 수득한 열수 추출액 0.8 ℓ에 3배의 냉(cold) 95 % 에탄올을 첨가하여 4 ℃에서 24시간동안 침전시킨 다음, 상층액을 제거하고 2800 rpm, 4 ℃, 20 분의 조건으로 원심분리하여 침전물만을 수집(harvesting)한 후, 침전물의 에탄올을 증발시킨 후, 60 ℃의 고온에서 증류수로 펠렛(pellet)을 재용해시켜 원심분리하는 과정을 3회 반복수행하여 수득된 상층액을 4 ℃에서 48 시간동안 증류수를 이용하여 투석(투석막 Mw 12,000 이상)하고, 투석이 끝난 후 동결건조하여 고분자 다당체(분자량 12,000 이상) 분획을 갖는 아프리카산 상황버섯 열수 추출물 1 g을 수득하였다.

실시예 2. 아프리카산 상황버섯 냉침 추출물의 제조

아프리카산 상황버섯(아프리카 케냐에서 채집)을 10 ㎏을 채취하여 물로 깨끗이 수세하고 건조(차광된 음지에서 건조)시킨 다음, 건조 상태의 상황버섯 50 g 을 균질기(homogenizer)를 이용하여 잘게 분쇄한 후, 상황버섯 20 g 당 50 mM 트리스-염산(Tris-HCl, pH 8.0) 완충용액 0.2 ℓ를 가하고 4 ℃에서 하룻밤동안 방치하여 냉침 추출한 후에, 추출액을 여과하여 황산암모늄(Ammonium Sulfate)를 가하고 100 % 포화상태로 한 후 원심분리(8000 g, 20 분)하여 상층액을 제거하고 수득한 침전물을 50 mM 트리스-염산(pH 8.0)과 50 mM 염화나트륨 완충용액으로 재용해 시킨 다음, 재용해된 추출물을 50 mM 트리스-염산(pH 8.0), 50 mM 염화나트륨 완충용액을 이용하여 4 ℃에서 72시간동안 투석(투석막 Mw 12,000 이상)하고, 투석이 끝난 후 단백질 양을 정량하여 고분자 단백질(분자량 12,000 이상) 분획을 갖는 아프리카산 상황버섯 냉침 추출물 15 ㎖(농도 250 ㎍/㎖)를 수득하였다.

실시예 3. 아프리카산 상황버섯 조추출물의 제조

아프리카산 상황버섯(아프리카 케냐에서 채집)을 채취하여 물로 깨끗이 수세하고 건조(차광된 음지에서 건조)시킨 다음, 건조상태의 상황버섯 200 g을 균질기(homogenizer)를 이용하여 잘게 분쇄한 후, 가열 멘틀(heating mantle)에 넣고 메탄올 4 ℓ를 넣은 후, 79 ℃에서 일정시간(12 h) 간격으로 3회 반복 추출하여 얻은 추출액을 여지로 여과한 다음, 회전감압농축기(rotary vacuum evaporator)를 이용하여 감압 농축하여 상황버섯 조추출물 7 g을 수득하였다.

실시예 4. 아프리카산 상황버섯 헥산 가용성 분획물의 제조

상기 실시예 3에서 얻은 상황버섯 조추출물 즉, 상황버섯 메탄올 추출물 6.5 g을 300 ㎖ 3차 증류수에 넣고 1시간 가량 저으면서 녹인 후, 헥산 1.5 ℓ를 가하여 혼합하고 3차례 반복 분획하여 헥산 가용성 분획물을 얻은 후, 이 헥산 가용성 분획물을 여과 후 감압 농축시켜 상황버섯 헥산 가용성 추출물 0.5 g을 수득하였고, 4 ℃ 냉장고에 보관하면서 시료로 사용하였다.

실시예 5. 아프리카산 상황버섯 에틸아세테이트 가용성 분획물의 제조

상기 실시예 3에서 얻은 상황버섯 조추출물 즉, 상황버섯 메탄올 추출물 6.5 g을 300 ㎖ 3차 증류수에 넣고 1시간 가량 저으면서 녹인 후, 에틸아세테이트 1.5 ℓ를 가하여 혼합한 후 3차례 반복, 분획하여 에틸아세테이트 가용성 분획물을 얻은 후, 이 에틸 아세테이트 가용성 분획물을 여과 후 감압 농축시켜 상황버섯 에틸 아세테이트 가용성 추출물 2.5 g을 수득하여 시료로 사용하였고, 4 ℃ 냉장고에 보관하면서 시료로 사용하였다.

실험예 1. 아프리카산 상황버섯 추출물의 헤르페스바이러스 억제 효과

1-1. 시료의 준비

본 실험에 사용하는 시료인 아프리카산 상황버섯 열수 추출물(상기 실시예 1), 냉침 추출물(상기 실시예 2), 조추출물(상기 실시예 3), 헥산 추출물(상기 실시예 4) 및 에틸 아세테이트 추출물(상기 실시예 5)과 대조군인 아시클로버(Acyclovir)는 본 실험에 사용하는 배지(MEM)를 사용하여 각각 100 ㎍/㎖의 농도로 희석하였으며, 10 배씩 십진 희석하였다.

1-2. 각 추출물의 헤르페스바이러스 억제 효과 측정

상기 실험예 1-1과 같은 아프리카산 상황버섯 각각의 추출물의 항 HSV(Herpes Simplex Virus) 효과를 MTT 검색법으로 측정하였으며, 하기와 같이 실험을 수행하였다.

먼저, 96 웰 마이크로플레이트(well microplate)에 균일하게 베로 세포(Vero cell, 3.5×10⁴세포/㎖)를 접종하여 하룻밤 안정화시킨 후, 96 웰에서 배양액을 제거하고 여기에 100TCID₅₀의 역가를 갖는 HSV 100 ㎕를 접종하고(국립보건원 소화기계 바이러스과에서 분양), 1시간동안 37 ℃에서 흡착한 뒤 바이러스액을 제거한 다음, 여기에 각 농도로 희석된 약물을 각 웰에 50 ㎕씩 분주하고, 마지막으로 모든 웰에 배양액 150 ㎕씩 분주하였으며, 모든 약제는 100 ug/㎖을 기준으로 하여 10^-8까지 희석하여 접종한 후, 3일간 37 ℃에서 배양한 뒤 마이크로플레이트 리더(엘라이자(Eliza))로 540nm에서 흡광도(OD)를 측정하였다.

그 결과, 각 추출물의 헤르페스 바이러스 억제능은 하기 표 1 및 도 1a 및 도 1b에서 볼 수 있는 것처럼, 각 추출물의 100 ug/㎖∼10 pg/㎖의 광범위한 희석농도에서 바이러스 억제능력을 나타내었으며, 특히 에틸 아세테이트 추출물의 효과가 가장 우수하였으며 이는 대조약제로 사용한 아시클로버의 억제범위보다 10 배 내지 100 배 우수한 결과이다.

시료농도	흡광도(OD)
	세포대조군	바이러스대조군	아시클로버	열수추출물	냉침추출물	조추출물	헥산추출물	에틸아세테이트추출물
100㎍/㎖	1.277	0.083	0.737	0.439	0.253	0.176	0.862	0.776
10㎍/㎖	0.523	0.189	0.708	0.096	0.173	0.112	0.206	0.719
1㎍/㎖	0.995	0.241	0.355	0.156	0.408	0.329	0.663	0.507
100ng/㎖	0.757	0.171	0.421	0.270	0.448	0.336	0.378	0.422
10ng/㎖	0.550	0.144	0.510	0.399	0.159	0.335	0.236	0.588
1ng/㎖	0.772	0.228	0.367	0.129	0.395	0.215	0.283	0.465
100pg/㎖	0.773	0.201	0.169	0.295	0.345	0.245	0.356	0.421
10pg/㎖	0.534	0.179	0.167	0.202	0.258	0.205	0.224	0.323

2. 아프리카 상황버섯 추출물의 세포독성 측정

아프리카산 상황버섯 추출물의 세포 독성을 측정하기 위하여, 장내바이러스에 민감한 포유동물 유래의 세포주인 RD(Rabdomyosarcoma, 6×10⁴/세포)를 사용하여 실험실 내에서 아프리카산 상황버섯 각각의 추출물, 즉 열수 추출물, 조추출물, 헥산 추출물, 에틸 아세테이트 추출물의 세포독성을 MTT 분석법(MTT assay)으로 측정하였으며, 이때 각 추출물의 농도는 1 mg/㎖로 하였다.

먼저, 세포 단분자층(6×10⁴/세포)을 37 ℃에서 하룻밤 동안 배양한 후, 아프리카산 상황버섯 시료를 10 배 희석하고, 희석된 시료를 100 ㎕가한 다음, 37 ℃에서 3일 동안 배양한 후, MTT 염색약(MTT staining) 50 ㎕를 가하고, 37 ℃에서 2시간 동안 배양한 다음, 배지를 버리고 DMSO 150 ㎕를 가하고, 1 시간동안 휘저은 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그리고 각 추출물의 세포 대조군(PBS) 평균에 대비한 OD 값을 비교하였으며, 세포 대조군의 평균을 일정한 선으로 나타내어 이를 기준으로 이 선보다 높은 것은 세포독성이 없고, 이 선보다 낮은 것은 세포독성이 있는 것으로 판정하였다.

그 결과, 아프리카산 상황버섯의 열수 추출물에 대한 세포 독성을 나타낸 하기 표 2 및 도 2 에서 알 수 있는 것처럼, 아프리카산 상황버섯 각각의 추출물들의 유의한 세포독성을 찾을 수 없었다.

시료농도	평균. OD
	세포대조군	아시클로버	열수추출물	냉침추출물	조추출물	헥산추출물	에틸아세테이트 추출물
100 ㎍/㎖	0.785	1.382	1.29	1.748	0.423	0.804	0.958
10 ㎍/㎖	0.840	1.768	1.016	0.855	0.642	0.808	0.977
1 ㎍/㎖	1.263	1.681	0.828	0.966	0.503	0.838	0.901
100 ng/㎖	1.019	0.972	1.125	1.292	0.603	1.101	0.902

참조예 1. 아프리카산 상황버섯 동정

본 발명의 아프리카산 상황버섯의 종류를 동정하기 위하여, DNA 염기서열을 (주)마이크로 아이디에 의뢰하여 분석하였으며, ITS rDNA 염기서열분석(sequencing)으로 동정하였다. 이 때 먼저, % 유사성(similarity) 값을 구하고, 키무라스 투-파라메터 모델 (Kimuras two-parameter model) (Kimura, M. A., J. Mol. Evol., 16, pp111-120, 1980)에 의하여 진화적인 거리(evolutionary distance)를 계산한 다음, 네이버-조이닝(Neighbor-joining) 방법 (Saitou, N. and Nei, M., Mol. Biol. Evol., 4, pp406-425, 1987)으로 계통수(phylogenetic tree)를 작성하였다. 한 편, 계통수(Tree)의 스케일 바(scale bar)는 0.1 또는 0.01 각 위치 당 치환(substitution per site)를 의미하며, 계통수에서 각 가지(branch) 옆의 숫자는 부트스트랩 퍼센테이지(bootstrap percentage)을 의미한다.

본 균주를 ITS 부분의 염기서열에 의해 NCBI 블라스트 서치(blast search)한 결과, 결정된 염기서열의 개수는 701 bp로 그 염기서열은 도 3 및 서열번호 1에 나타내었다. 본 균주는 여러 펠리너스 속(Phellinus genus)에 속하는 진균으로 판명되었다.

본 발명의 아프리카산 상황버섯 추출물은 아래와 같은 제형으로 투여할 수 있으며, 아래의 제제예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 내용이 제한되는 것은 아니다.

제제예 1. 주사제제의 제조

실시예 3의 아프리카산 상황버섯 조추출물 100 ㎎

소디움 메타비설파이트 3.0 ㎎

메틸파라벤 0.8 ㎎

프로필파라벤 0.1 ㎎

주사용 멸균증류수 적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 방법으로 최종 부피가 2 ㎖이 되도록 제조한 후, 2 ㎖용량의 앰플에 충전하고 멸균하여 주사제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

실시예 3의 아프리카산 상황버섯 조추출물 200 ㎎

유당 100 ㎎

전분 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 적량

통상의 정제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캡슐제의 제조

실시예 3의 아프리카산 상황버섯 조추출물 100 ㎎

유당 50 ㎎

전분 50 ㎎

탈크 2 ㎎

스테아린산마그네슘 적량

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

제제예 4. 액제의 제조

실시예 3의 아프리카산 상황버섯 조추출물 1000 ㎎

설탕 20 g

이성화당 20 g

레몬향 적량

정제수를 가하여 전체 1000 ㎖로 맞추었다. 통상의 액제의 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 갈색병에 충전하고 멸균시켜 액제를 제조하였다.

제제예 5. 건강 식품의 제조

실시예 3의 아프리카산 상황버섯 조추출물 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B₁ 0.13 ㎎

비타민 B₂ 0.15 ㎎

비타민 B₆ 0.5 ㎎

비타민 B₁₂ 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 6. 건강 음료의 제조

실시예 3의 아프리카산 상황버섯 조추출물 1000 ㎎

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

본 발명의 상황버섯 추출물은 헤르페스 바이러스의 증식을 억제하는 효과를 가진다. 또한, 생체 내에서 부작용이 없고 약물 내성도 유발하지 않기 때문에 안전하게 장기간 투여할 수 있으므로, 헤르페스 바이러스 관련질환의 치료 및 예방을 위한 약학조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

도 1a 내지 1b는 아프리카산 상황버섯 추출물의 HSV 억제능을 측정한 것으로,

도 1a는 아프리카산 상황버섯 각 용매 추출물의 HSV 억제능을 측정한 결과도이며,

도 1b는 아프리카산 상황버섯 에틸아세테이트 추출물과 아시클로버를 비교한 도이며,

도 2는 아프리카산 상황버섯 각 용매 추출물의 세포독성을 측정한 도이고,

도 3은 아프리카산 상황버섯의 염기서열을 나타낸 도이다.

<110> KIM, JIN-DONG LEE, JONG-SUNG <120> Composition comprising the extract of African Phellinus mushroom for treatment and protection of disease related to simple herpes virus <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 701 <212> DNA <213> Phellinus genus <400> 1 gaacctgcgg aaggatcatt atcgagtttt tgaaagcgag gcttgctgct ggcgcagaaa 60 cgcgcatgtg cacggccttc gcgctcaaat ccactcaacc ccctgtgcac ctttatcctg 120 tcggagcgag tagcttgaga cctttttggg acgtagtagc cggtaatagt agaaaggagg 180 gtaacagctc cattcgaaag gcgaaaaggc cctaactcga gcgaaaactt tggcttgtat 240 tttataaacc acatttgttg tcctgtgaat gttaatgctc cttgtgggcg agaataaata 300 caactttcaa caacggatct cttggctctc gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat 360 aagtaatgtg aattgcagaa ttcagtgaat catcgaatct ttgaacgcac cttgcgcccc 420 ttggtattcc gaggggcatg cctgtttgag tgtcatgtta acctcaaatc acacttgtct 480 tttggggctt tgtggtttgg acctggaggt ttctgctggc cctgcggtcg gctcctctta 540 aatgcattag ctgggtttcg gctcgcgttt gtggtgtaat agttaattct ttcgcctgag 600 cgcttgcctg atgggcccgc ttctaattgt ctgcttggtc ggacaaggtc ctttggcctt 660 cttgactctt ttgacctcaa atcaggtagg actacccgct g 701

Claims (11)

1. 아프리카 케냐에서 자생하는 아프리카산 상황버섯(Phellinus genus) 추출물을 함유하는 헤르페스 바이러스로 인한 치은구내염, 파종성 단순포진, 성기포진 및 수뇌막염 질환의 예방 및 치료용 약학조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 제 1항에 있어서, 상기 상황버섯은 서열번호 1에 기재된 염기서열을 갖는 상황버섯인 조성물.
5. 제 1항에 있어서, 상기 상황버섯 추출물은 조추출물 또는 비극성 용매 가용성 추출물인 조성물.
6. 제 5항에 있어서, 상기 조추출물은 물 또는 메탄올로 추출한 것인 조성물.
7. 제 5항에 있어서, 상기 비극성 용매 가용 추출물은 헥산 또는 에틸 아세테이트로 추출한 것인 조성물.
8. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 고분자 다당체(분자량 12,000이상)분획을 갖는 상황버섯 열수 추출물인 조성물.
9. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 고분자 단백질(분자량 12,000이상)분획을 갖는 상황버섯 냉침 추출물인 조성물.
10. 삭제
11. 삭제