KR20050036114A - 아프리카산 영지버섯 추출물을 함유하는 감기의 치료 및예방을 위한 조성물 - Google Patents

아프리카산 영지버섯 추출물을 함유하는 감기의 치료 및예방을 위한 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 인플루엔자 바이러스 억제능을 갖는 아프리카산 영지버섯 (Ganoderma genus) 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 아프리카산 영지버섯 추출물은 항바이러스 효과 및 면역활성 기능의 증강에 의해 인플루엔자 바이러스의 증식을 억제하므로, 감기 치료 및 예방을 위한 의약품 또는 건강기능식품에 유용하게 이용할 수 있다.

Description

아프리카산 영지버섯 추출물을 함유하는 감기의 치료 및 예방을 위한 조성물{Composition comprising the extract of African Ganoderma mushroom for the treatment and protection of cold}
본 발명은 인플루엔자 바이러스 억제능을 갖는 아프리카산 영지버섯 추출물을 함유하는 감기의 치료 및 예방을 위한 조성물에 관한 것이다.
감기(感氣, common cold)란 코, 목구멍, 기관지 등 호흡기 점막의 급성 염증성 질환이나 알레르기성 질환의 총칭으로서, 급성비염(鼻炎), 급성인두염(咽頭炎), 급성후두염(喉頭炎), 급성편도염, 기관지염, 인플루엔자, 그 밖의 바이러스성 상기도감염증(上氣道感染症) 등을 포함한다.
감기의 원인으로서는 여러 종류의 바이러스, 세균에 의한 감염, 한랭이나 먼지 등의 자극, 체온분포의 불균형, 알레르기원 등이 있으나, 이들 중 한 가지만이 원인이 되는 감기는 적고, 대부분은 한랭이나 먼지의 자극, 체온분포의 불균형 등이 유인(誘因)이 되어 바이러스의 감염이 일어나 주된 역할을 한다는 것이 연구결과 밝혀졌다.
감기의 병원이 되는 바이러스는 50여 종에 이르나, 주요한 것은 인플루엔자 바이러스, 아데노 바이러스, RS 바이러스, 라이노 바이러스 등이다. 장티푸스균은 장티푸스에 걸리게 하는 등 병원체와 증세가 대응하는 것이 보통인데, 감기의 증세와 병원 바이러스와는 반드시 대응한다고 할 수 없으며, 많은 병원 바이러스가 비슷한 감기 증세를 일으키기 때문에 증세만으로는 구별할 수 없을 때가 많다. 연쇄구균, 포도상구균, 폐렴쌍구균, 인플루엔자균 등의 세균도 바이러스의 경우와 같은 유인에 의해서 감기의 원인이 될 때가 많다. 그러나 세균류는 대개 바이러스에 의한 염증에 혼합감염하여 감기의 합병증을 일으키는 데 관여한다.
한기(추위)와 먼지 같은 물리적, 화학적 자극도 경미한 감기의 증세를 일으킬 수 있으나, 이들만에 의한 자극은 일시적인 생체반응일 뿐 큰 증세없이 정상으로 회복된다. 보통의 감기는 추위나 먼지의 자극으로 일어난 호흡기 점막의 일시적인 빈혈 상태에 의하여 그 부분의 저항력이 떨어지고 이에 바이러스가 감염하여 활동하기 시작, 점막세포를 침범하면 증세가 나타나게 된다.
이들 질환은 콧물, 재채기, 기침, 발열이나 목이 아픈 증세 등 감기증후군이라고 할 수 있는 공통점이 많아 이들을 통틀어 ‘감기’라 하나, 의학의 발달에 따라 원인이 확실한 것은 인플루엔자, 알레르기성 비염 등과 같이 독립된 병명으로 부른다. 또한 증세가 약간 특이한 것은 급성비염, 급성인두염, 급성후두염, 급성편도염, 인두결막열, 기관지염 등과 같이 주로 아픈 부위에 의한 병명으로 부르는 경향이 생겨, 현재 감기라고 하면 좁은 의미의 감기, 즉 보통감기(인플루엔자 외의 바이러스성 감기)를 뜻한다.
감기와 독감은 서로 공통점이 많지만 특히 합병증에서 차이가 많이 나므로 구별하는 것이 좋은데, 감기와 마찬가지로 인플루엔자 바이러스(Influenza virus)(85%), 파라인플루엔자 바이러스(Parainfluenza virus), RS 바이러스, 아데노바이러스(Adenovirus)(15%) 등의 바이러스가 주된 원인이다. 유행성 독감을 일으키는 인플루엔자 바이러스는 항원형에 따라 A, B, C 세 가지 형으로 분류되는데, 이중 A형이 가장 항원 변이를 자주 일으키며, 범세계적인 대유행을 일으키는 원인 바이러스 중 90%를 차지하는 것으로 밝혀져 있다. 항원 변이라고 하는 것은 바이러스 표면에 있는 단백질 혹은 바이러스의 유전자 정보를 가지고 있는 RNA가 변화를 일으킴으로써 다른 특성을 갖게 되는 것으로, 바이러스가 살아남기 위한 혹은 진화를 위한 하나의 생존 전략이라 할 수 있다.
본 발명의 아프리카산 영지버섯(Ganoderma genus)은 불로초과 (Ganodermataceae), 불로초속(Ganoderma)에 속하며, 아프리카 케냐의 고산 밀림지대에서 야생상태로 자생하는 활엽수 등에 기생하여 자라고 있는 버섯이다. 이곳의 생태적 특징은 적도부근의 열대지역임에도 불구하고 해발 5000m급의 고산지대로서 버섯의 생육에 최적환경을 갖추고 있다. 목질이 강한 활엽수의 고사목과 그루터기에 자생하며 그루터기에 직각으로 자란다. 그 모양은 말발굽 모양으로써 원형이다. 표면은 매끈하고 콩팥형, 반원형의 형태를 가진다. 앞면은 처음에 황백색을 띠고 있으나 생장하면서 먼저 자란 부분부터 적갈색 내지 자갈색으로 변해간다. 뒷면은 황백색을 띠고 관공이 무수히 나 있다. 대는 갓의 표면과 같은 색으로 약간 굴곡이 생긴다. 가벼운 접촉에 의해 흰색의 관공 표면에 갈색반점이 나타나기 때문에 예술가의 모자(artist conk)라 불리어진다.
기억력 감소 방지, 노화억제, 생리활성 세포활성, 항염, 항균작용, 혈압 강화작용, 항알레르기, 항히스타민, 항남성호르몬 작용 등에 유효한 것으로 알려져 있다. 그 외 항암효과를 나타내며, 추출물 역시 간암, 폐암 및 기타 여러 암들에 대한 우수한 치료 및 예방효과를 가짐이 임상실험에 의해 입증되었다.
독감 바이러스는 매년 전 세계적으로 발생하여 호흡기 질환을 일으키는데, 이 질환은 면역 능력이 약한 어린이와 노인들에 대해 치사율이 높고, 합병증으로 폐렴(pneumonia), 심폐질환(cardiopulmonary disease) 등의 기관지 질환들을 수반하는 경우 치사율이 더욱 높아져 국민 보건에 미치는 영향이 크다고 할 수 있다.
특히 1918년에 약 2,000 만 명의 사망자를 낸 스페인 독감 바이러스와 같이, 10 내지 20년 주기로 전 세계적으로 출현하는(pandemic) 독감 바이러스는 매우 치명적인데, 60년대의 홍콩 독감 바이러스 이후 이러한 독감 바이러스가 발생하지 않았다는 점을 고려하면, 가까운 미래에 치명적인 독감 바이러스의 출현이 예상되고 있다.
인플루엔자 바이러스는 호흡기에 감염되어 전신증상을 일으키고, 주기적으로 모습을 바꿀 뿐 아니라, 숙주를 죽이지 않고 숙주가 죽기 전에 다른 숙주로 이동하기 때문에 과학자들은 인플루엔자 바이러스는 인류의 종말까지 살아남는 바이러스일 것으로 추측한다. 인류에게 가장 큰 경제적 손실을 가져오는 바이러스이며 예방백신이 개발되어 있기는 하지만 바이러스의 변이를 따라 잡지는 못하고 있는 실정이며, 아직 근본적인 바이러스 치료는 이루어지지 않고 있다.
이에 본 발명자는 특정지역에서 영지버섯의 끓인 물을 복용하고 독감치료효과를 보였으며, 상시 복용하는 집단에서는 독감에 감염되지 않았다는 많은 사례에 근거하여, 아프리카산 영지버섯 추출물 및 분획물의 인플루엔자 바이러스 억제능을 실험한 결과, 그 탁월한 효능을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 아프리카산 영지버섯 추출물을 함유하는 감기 예방 및 치료용 조성물로써 의약품 및 건강기능식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 아프리카산 영지버섯(Ganoderma genus) 추출물을 함유하는 감기 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.
상기 영지버섯은 아프리카 케냐, 우간다, 탄자니아 등의 동남부 아프리카 지역, 바람직하게는 케냐에 자생하는 영지버섯을 포함한다.
상기 영지버섯 추출물은 조추출물 및 비극성 용매 가용성 추출물을 포함하며, 본 발명의 조추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올과 같은 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 또는 메탄올에 가용한 추출물을 의미하며, 비극성 용매 가용추출물은 헥산, 디클로로메탄 또는 에틸 아세테이트와 같은 비극성 용매, 바람직하게는 헥산 또는 에틸 아세테이트에 가용한 추출물을 의미한다.
또한, 상기 아프리카산 영지버섯 추출물에는 고분자 다당체(분자량 12,000이상) 분획을 갖는 아프리카산 영지버섯 열수 추출물 및 고분자 단백질(분자량 12,000이상) 분획을 갖는 아프리카산 영지버섯 냉침 추출물을 포함한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.
본 발명의 영지버섯 조추출물, 비극성용매 가용추출물, 고분자 다당체 분획을 갖는 열수 추출물 및 고분자 단백질 분획을 갖는 냉침 추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다.
본 발명의 영지버섯을 채취하여 물로 깨끗이 수세하고 건조 후 균질기 등을 이용하여 마쇄하여 분말화 한 후, 영지버섯 건조중량의 약 2 내지 30 배, 바람직하게는 약 15 내지 30 배에 달하는 부피의 물, 메탄올, 에탄올 및 부탄올과 같은 저급 알콜 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매로, 바람직하게는 메탄올로 20 내지 100 ℃, 바람직하게는 50 내지 70 ℃의 추출 온도에서 약 0.5시간 내지 2일, 바람직하게는 1 시간 내지 1일 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법, 바람직하게는 열수 추출로 1회 내지 5회, 바람직하게는 3회 연속 추출하여 감압 여과하고 여과추출물을 진공회전농축기로 20 내지 100 ℃, 바람직하게는 20 내지 70 ℃에서 감압 농축하여 물, 저급알콜 또는 이들의 혼합용매에, 바람직하게는 메탄올에 가용한 추출물로써 영지버섯 조추출물을 수득할 수 있다.
본 발명의 비극성용매 가용 추출물은 상기 영지버섯 조추출물을 물에 현탁한 후, 헥산, 에틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름과 같은 비극성 용매를 이용하여 추출하여 본 발명의 영지버섯 비극성용매 가용 추출물을 수득할 수 있다. 좀 더 구체적으로는 영지버섯 조추출물, 바람직하게는 영지버섯 메탄올 추출물에 영지버섯 건조중량의 약 2 내지 30 배, 바람직하게는 약 15 내지 30 배에 달하는 부피의 물을 넣고 잘 저으면서 녹인 후, 여기에 일정량의 헥산 또는 에틸 아세테이트를 혼합한 후, 3 내지 4 차례 반복, 분획하여 각각의 헥산 가용성 추출물 및 에틸아세테이트 가용성 추출물과 같은 비극성 용매 가용 추출물을 수득할 수 있다.
또한, 아프리카산 영지버섯 열수 추출물은 아프리카산 영지버섯을 물로 깨끗이 수세하고 건조시킨 다음, 건조상태의 영지버섯을 균질기를 이용하여 잘게 분쇄한 후, 영지버섯 건조 중량의 약 2 내지 30 배, 바람직하게는 약 3 내지 10 배에 달하는 부피의 물을 넣고 가열 멘틀을 이용하여 약 1 내지 24 시간, 바람직하게는 6 시간 동안 열수 추출한 후, 여지로 여과하여 수득한 열수 추출액에 약 1 내지 5 배, 바람직하게는 3 배의 저급알콜, 바람직하게는 냉(冷) 에탄올을 첨가하여 약 0 내지 10℃, 바람직하게는 4 ℃에서 약 12 내지 48 시간, 바람직하게는 24 시간 동안 침전시킨 다음, 상층액을 제거하고 원심분리하여 침전물을 모아 용매를 증발제거시킨 후, 약 50 내지 100 ℃, 바람직하게는 60 ℃에서 증류수로 펠렛(pallet)을 재용해시켜 원심분리하는 과정을 2 내지 5 회 반복수행하여 수득된 상층액을 약 0 내지 10 ℃, 바람직하게는 4 ℃에서, 약 12 내지 72 시간, 바람직하게는 48 시간 동안 증류수를 이용하여 투석한 후 동결건조하여 고분자 다당체(분자량 12,000이상) 분획을 갖는 본 발명의 아프리카산 영지버섯 열수 추출물을 수득할 수 있다.
또한, 본 발명의 아프리카산 영지버섯 냉침 추출물은 아프리카산 영지버섯을 채취하여 물로 깨끗이 수세하고 건조시킨 다음, 건조상태의 영지버섯을 균질기를 이용하여 잘게 분쇄한 후, 완충용액을 가하고 약 0 내지 10 ℃, 바람직하게는 4 ℃에서 약 12 내지 24 시간 방치하여 냉침 추출한 후, 추출액을 여과하여 단백질 침전제로 에탄올, 아세톤 또는 황산암모늄(Ammonium sulfate)과 같은 염, 바람직하게는 황산암모늄을 가하고 포화상태로 한 후, 원심분리하여 상층액을 제거하고 수득한 침전물을 완충용액으로 재용해시킨 다음, 재용해된 추출물을 완충용액을 이용하여 약 0 내지 10 ℃, 바람직하게는 4 ℃에서, 약 50 내지 100 시간동안, 바람직하게는 74 시간 동안 투석한 후, 단백질 양을 정량하여 고분자 단백질(분자량 12,000이상) 분획을 갖는 아프리카산 영지버섯 냉침 추출물을 수득할 수 있다.
본 발명은 상기 제조방법으로 얻어지는 감기의 예방 및 치료에 효과적인 아프리카산 영지버섯 추출물을 제공한다.
또한, 본 발명의 아프리카산 영지버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 감기의 예방 및 치료에 효과적인 조성물을 제공한다.
본 발명의 감기의 예방 및 치료용 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 80 중량 %, 바람직하게는 1.0 내지 50 중량 %를 포함한다.
본 발명의 추출물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 분획물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.
본 발명의 아프리카산 영지버섯 추출물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명에 따른 추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상세하게는, 제제화할 경우 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
아프리카산 영지버섯 추출물의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 일반적으로 0.01 내지 500 mg/㎏의 양, 바람직하게는 0.1 내지 100∼200 mg/㎏의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다. 또한 추출물의 투여량은 투여경로, 질병의 종류 및 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 아프리카산 영지버섯 추출물 자체는 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.
본 발명은 상기에 기재된 감기의 예방 및 개선 효과를 나타내는 아프리카산 영지버섯 추출물 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 추출물들을 포함하는 조성물은 감기의 예방 및 개선을 위한 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 아프리카산 영지버섯 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 각종 식품류, 예를 들어, 캔디, 초콜릿, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.
이때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은, 일반적으로 본 발명의 건강 기능 식품 조성물의 경우 전체 식품 중량의 0.01 내지 50 중량 %, 바람직하게는 0.1 내지 20 중량 %로 가할 수 있으며, 건강 기능 음료 조성물의 경우 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강 기능 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등;과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.
이 외 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그다지 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명은 다음의 실시예 및 실험예에 의거하여 더욱 상세히 설명되나, 본 발명이 실시예 또는 실험예에 의해 제한되지는 않는다.
실시예 1. 아프리카산 영지버섯 열수 추출물의 제조
아프리카산 영지버섯(아프리카 케냐에서 채집)을 10 ㎏을 채취하여 물로 깨끗이 수세하고 건조(차광된 음지에서 건조)시킨 다음, 건조상태의 영지버섯 20g을 균질기(homogenizer)를 이용하여 잘게 분쇄한 후, 가열 멘틀(heating mantle)에 영지버섯 20 g 당 물 1 ℓ를 넣고 100 ℃에서 6 시간동안 열수 추출한 후, 여지(filter paper)로 여과(filtering)하여 수득한 열수 추출액 0.8 ℓ에 3배의 냉(cold) 95 % 에탄올을 첨가하여 4 ℃에서 24시간동안 침전시킨 다음, 상층액을 제거하고 2800 rpm, 4 ℃, 20 분의 조건으로 원심분리하여 침전물만을 수집(harvesting)한 후, 침전물의 에탄올을 증발시킨 후, 60 ℃의 고온에서 증류수로 펠렛(pellet)을 재용해시켜 원심분리하는 과정을 3회 반복수행하여 수득된 상층액을 4 ℃에서 48 시간동안 증류수를 이용하여 투석(투석막 Mw 12,000이상)하고, 투석이 끝난 후 동결건조하여 고분자 다당체(분자량 12,000이상) 분획을 갖는 아프리카산 영지버섯 열수 추출물 1 g을 수득하였다.
실시예 2. 아프리카산 영지버섯 냉침 추출물의 제조
아프리카산 영지버섯(아프리카 케냐에서 채집)을 10 ㎏을 채취하여 물로 깨끗이 수세하고 건조(차광된 음지에서 건조)시킨 다음, 건조 상태의 영지버섯 50 g을 균질기(homogenizer)를 이용하여 잘게 분쇄한 후, 영지버섯 20 g 당 50 mM 트리스-염산(Tris-HCl, pH 8.0) 완충용액 0.2 ℓ를 가하고 4 ℃에서 하룻밤동안 방치하여 냉침 추출한 후에, 추출액을 여과하여 황산암모늄(Ammonium Sulfate)을 가하고 100 % 포화상태로 한 후 원심분리(8000 g, 20 분)하여 상층액을 제거하고 수득한 침전물을 50 mM 트리스-염산(pH 8.0)과 50 mM 염화나트륨 완충용액으로 재용해 시킨 다음, 재용해된 추출물을 50 mM 트리스-염산(pH 8.0), 50 mM 염화나트륨 완충용액을 이용하여 4 ℃에서 72시간동안 투석(투석막 Mw 12,000 이상)하고, 투석이 끝난 후 단백질 양을 정량하여 고분자 단백질(분자량 12,000이상) 분획을 갖는 아프리카산 영지버섯 냉침 추출물 15㎖(농도 300 ㎍/㎖)를 수득하였다.
실시예 3. 아프리카산 영지버섯 조추출물의 제조
아프리카산 영지버섯(아프리카 케냐에서 채집)을 채취하여 물로 깨끗이 수세하고 건조(차광된 음지에서 건조)시킨 다음, 건조상태의 영지버섯 200 g을 균질기(homogenizer)를 이용하여 잘게 분쇄한 후, 가열 멘틀(heating mantle)에 넣고 메탄올 4 ℓ를 넣은 후, 79 ℃에서 일정시간(12 h) 간격으로 3회 반복 추출하여 얻은 추출액을 여지로 여과한 다음, 회전감압농축기(rotary vacuum evaporator)를 이용하여 감압 농축하여 영지버섯 조추출물 7 g을 수득하였다.
실시예 4. 아프리카산 영지버섯 헥산 가용성 분획물의 제조
상기 실시예 3에서 얻은 영지버섯 조추출물 즉, 영지버섯 메탄올 추출물 6.5 g을 300 ㎖ 3차 증류수에 넣고 1시간 가량 저으면서 녹인 후, 헥산 1.5 ℓ를 가하여 혼합하고 3차례 반복 분획하여 헥산 가용성 분획물을 얻은 후, 이 헥산 가용성 분획물을 여과 후 감압 농축시켜 영지버섯 헥산 가용성 추출물 0.5 g을 수득하였고, 4 ℃ 냉장고에 보관하면서 시료로 사용하였다.
실시예 5. 아프리카산 영지버섯 에틸아세테이트 가용성 분획물의 제조
상기 실시예 3에서 얻은 영지버섯 조추출물 즉, 영지버섯 메탄올 추출물 6.5 g을 300 ㎖ 3차 증류수에 넣고 1시간 가량 저으면서 녹인 후, 에틸아세테이트 1.5 ℓ를 가하여 혼합한 후 3차례 반복, 분획하여 에틸아세테이트 가용성 분획물을 얻은 후, 이 에틸 아세테이트 가용성 분획물을 여과 후 감압 농축시켜 영지버섯 에틸 아세테이트 가용성 추출물 2.5 g을 수득하여 시료로 사용하였고, 4 ℃ 냉장고에 보관하면서 시료로 사용하였다.
실험예 1. 아프리카산 영지버섯 추출물의 항바이러스 활성 측정
인플루엔자 바이러스 타입 A/바이에른/05/97(H1N1)의 항바이러스 약효 검색을 하기 위하여 바이러스에 감염된 MDCK 세포(Marbin＆Darby Canine Kidney)의 CPE 저해정도를 MTT 검색법으로 측정하였다. 96-웰 플레이트에 MDCK 세포(6×103/㎖)로 분주하여 증식시킨 후, DME/2% FBS 배양액으로 희석된 인플루엔자 바이러스 타입 A/바이에른 바이러스를 각 웰에 접종량이 100 CCID50(50% cell culture inhibiotory dose)가 되도록 50 ㎕씩 접종하고 1 시간 동안 37 ℃에서 흡착시킨 후 배양액을 제거하였다. 각 농도(0.00001 ~ 100 ㎍/㎖)로 희석된 약물을 듀플리케이트 (duplicate)로 각 웰에 100 ㎕씩 첨가하고 37 ℃에서 CO2 배양기에서 3일간 배양한 다음, 0.1 ㎎의 MTT용액을 모든 웰에 가해 준 후, 37 ℃에서 2시간 동안 배양하였다. 플레이트를 450×g에서 5분간 원심분리한 후 배지를 30 ㎕만 남기고 모두 제거한 다음, 각 웰에 DMSO 100 ㎕ 씩을 가하여 포르마잔(formazan)결정이 녹을 때까지 진탕한 후 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
약효평가결과에서 약물의 독성에 의한 영향을 알 수 있도록 바이러스 접종시 바이러스가 첨가되지 않은 배양액을 세포에 더한 다음(mock-infected) 바이러스로 접종된 세포와 같은 방법으로 처리하였다. 즉, 한시간 배양 후 배지를 제거하고 배양액으로 희석된 약물을 듀플리케이트(duplicate)로 첨가한 다음, 3일간 배양하여 약물이 첨가된 각 웰의 살아남은 세포수를 약물이 첨가되지 않은 세포 대조군 웰과 비교하였다.
실험 결과, 인플루엔자 바이러스에 대한 억제능력은 전체 세부 분획물에서 고르게 나타내었다. CC(cytotoxic concentration), VC(effective concentration) 및 SI(selectivity index)는 하기 수학식 1에 의해 결정되었다.
CC = 시료만 첨가된 O.D / 세포 대조군 O.D
VC = {(시료와 바이러스 첨가된 O.D - 바이러스 대조군 O.D)/(세포 대조군 O.D - 바이러스 대조군 O.D)}×100(%)
SI = CC/VC
열수추출
번호 적정농도 처리(ug/㎖) CC VC SI
1 10 (-9) 0.00001 94.93 70.69 1.34
2 10 (-8) 0.0001 89.69 66.04 1.36
3 10 (-7) 0.001 89.47 57.60 1.55
4 10 (-6) 0.01 91.83 63.13 1.45
5 10 (-5) 0.1 86.80 51.48 1.69
6 10 (-4) 1 86.26 43.77 1.97
7 10 (-3) 10 91.72 42.31 2.17
8 10 (-2) 100 94.72 23.54 4.02
냉침추출
번호 적정농도 처리(ug/㎖) CC VC SI
1 10 (-9) 0.00001 81 61 1.337
2 10 (-8) 0.0001 85 78 1.091
3 10 (-7) 0.001 85 75 1.129
4 10 (-6) 0.01 88 56 1.582
5 10 (-5) 0.1 81 59 1.374
6 10 (-4) 1 89 73 1.210
7 10 (-3) 10 95 64 1.483
8 10 (-2) 100 75 50 1.498
조추출물
번호 적정농도 처리 (ug/ml) CC VC SI
1 10 (-9) 0.00001 89.47 64.58 1.39
2 10 (-8) 0.0001 79.09 72.44 1.09
3 10 (-7) 0.001 74.49 70.40 1.06
4 10 (-6) 0.01 85.40 72.88 1.17
5 10 (-5) 0.1 82.41 59.78 1.38
6 10 (-4) 1 77.70 72.15 1.08
7 10 (-3) 10 72.56 67.49 1.08
8 10 (-2) 100 83.26 40.71 2.05
헥산 추출물
번호 적정농도 처리 (ug/㎖) CC VC SI
1 10 (-9) 0.00001 75.34 88.01 0.86
2 10 (-8) 0.0001 76.52 74.91 1.02
3 10 (-7) 0.001 82.84 91.94 0.90
4 10 (-6) 0.01 77.06 86.99 0.89
5 10 (-5) 0.1 76.74 103.44 0.74
6 10 (-4) 1 70.53 84.52 0.83
7 10 (-3) 10 79.09 66.04 1.20
8 10 (-2) 100 79.52 27.18 2.93
에틸아세테이트 추출물
번호 적정농도 처리 (ug/㎖) CC VC SI
1 10 (-9) 0.00001 79.09 93.54 0.85
2 10 (-8) 0.0001 80.05 93.83 0.85
3 10 (-7) 0.001 82.84 92.38 0.90
4 10 (-6) 0.01 66.78 86.70 0.77
5 10 (-5) 0.1 77.91 58.61 1.33
6 10 (-4) 1 74.70 62.69 1.19
7 10 (-3) 10 70.74 46.83 1.51
8 10 (-2) 100 75.99 33.58 2.26
실험예 2. 아프리카 영지버섯 추출물의 독성 측정
2-1. 아프리카산 영지버섯 추출물의 세포 독성
아프리카산 영지버섯 추출물의 세포 독성을 측정하기 위하여, 장내바이러스에 민감한 포유동물 유래의 세포주인 RD(Rabdomyosaarcoma, 6×104/세포)를 사용하여 실험실 내에서 아프리카산 영지버섯 각각의 추출물, 즉 열수 추출물, 조추출물, 헥산 추출물, 에틸 아세테이트 추출물의 세포독성을 MTT 분석법(MTT assay)으로 측정하였으며, 이때 각 추출물의 농도는 1 ㎎/㎖로 하였다.
먼저, 세포 단분자층(6×104/세포)을 37 ℃에서 하룻밤 동안 배양한 후, 아프리카산 영지버섯 시료를 10 배 희석하고, 희석된 시료를 100 ㎕가한 다음, 37 ℃에서 3일 동안 배양한 후, MTT 염색약(MTT staining) 50 ㎕를 가하고, 37 ℃에서 2시간 동안 배양한 다음, 배지를 버리고 DMSO 150 ㎕를 가하고, 1 시간동안 휘저은 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그리고 각 추출물의 세포 대조군(PBS) 평균에 대비한 OD 값을 비교하였으며, 세포 대조군의 평균을 일정한 선으로 나타내어 이를 기준으로 이 선보다 높은 것은 세포독성이 없고, 이 선보다 낮은 것은 세포독성이 있는 것으로 판정하였다.
그 결과, 아프리카산 영지버섯의 열수 추출물에 대한 세포 독성을 나타낸 하기 표 6 및 그 외 조추출물, 헥산 추출물, 에틸 아세테이트 추출물에 대한 세포 독성을 나타낸 하기 표 7에서 알 수 있는 것처럼, 아프리카산 영지버섯 각각의 추출물들의 유의한 세포독성을 찾을 수 없었다(도 6 및 도 7 참조).
번호 역가 처리 평균 O.D
1 세포 대조군 0 mg/㎖ 0.409
2 무(無)희석 10 mg/㎖ 0.905
3 시료 10(-1) 1 mg/㎖ 0.205
4 시료 10(-2) 100 ㎍/㎖ 0.187
5 시료 10(-3) 10 ㎍/㎖ 0.168
6 시료 10(-4) 1 ㎍/㎖ 0.326
7 시료 10(-5) 100 ng/㎖ 0.337
8 시료 10(-6) 10 ng/㎖ 0.374
9 시료 10(-7) 1 ng/㎖ 0.382
10 시료 10(-8) 100 pg/㎖ 0.346
11 시료 10(-9) 10 pg/㎖ 0.336
12 시료 10(-10) 1 pg/㎖ 0.530
번호 역가 처리 평균 O.D
조추출물 헥산 추출물 에틸 아세테이트 추출물
1 세포 대조군 0 mg/㎖ 0.630 0.630 0.630
2 시료 10(-1) 1 mg/㎖ 0.100 0.249 0.059
3 시료 10(-2) 100 ㎍/㎖ 0.700 0.770 0.953
4 시료 10(-3) 10 ㎍/㎖ 0.640 0.733 0.785
5 시료 10(-4) 1 ㎍/㎖ 0.821 0.703 0.748
6 시료 10(-5) 100 ng/㎖ 0.759 0.652 0.810
7 시료 10(-6) 10 ng/㎖ 0.810 0.714 0.846
8 시료 10(-7) 1 ng/㎖ 0.748 0.640 0.816
9 시료 10(-8) 100 pg/㎖ 0.679 0.645 0.671
10 시료 10(-9) 10 pg/㎖ 0.755 0.830 0.642
11 시료 10(-10) 1 pg/㎖ 0.615 0.713 0.834
2-2. 영지버섯 추출물의 조직 독성
아프리카산 영지버섯 추출물의 조직 독성을 측정하기 위하여, 수술시 적출되는 조직중 염색소견상 정상조직으로 판정된 포유동물 유래의 조직인 대장 조직(Nude mouse : normal colon)을 사용하여 아프리카산 영지버섯 조추출물, 헥산 추출물, 에틸 아세테이트 추출물의 조직 독성 실험을 측정하기 위하여 MTT 분석법을 실시하여, 여러 가지 오차를 고려하여 저해율이 30 % 이상인 경우만 그 추출물에 대하여 독성이 있다고 판단하였다. 저해율은 하기 수학식 2로 계산하였다.
저해율(%)= 100 -〔(추출물의 O.D / 대조군의 O.D) ×100 〕
그 결과, 아프리카산 영지버섯 조추출물의 조직 독성은 하기 표 8a 및 도 8a에, 헥산 추출물의 조직독성은 8b에, 에틸 아세테이트 추출물의 조직독성은 8c에 나타내었다. 이 때, 도에는 저해율 30 %일 때를 일정한 선으로 표시하여, 이 선 이상 막대가 올라간 추출물은 독성이 있다고 판정하였다. 하기 표 8a 내지 8c(도 8a 내지 8c 참조)에서 볼 수 있는 것처럼, 아프리카산 영지버섯의 각각의 추출물들은 30 % 이상의 저해율을 나타낸 것이 없으므로 정상조직에서 독성이 없는 것으로 판단되었다.
번호 처리 IR 생존율
1 PBS 0 % 100 %
2 1 mg -16 % 116 %
3 100 ㎍ -18 % 118 %
4 10 ㎍ 20 % 80 %
5 1 ㎍ 0 % 100 %
번호 처리 IR 생존율
1 PBS 0 % 100 %
2 1 mg 29 % 71 %
3 100 ㎍ 25 % 75 %
4 10 ㎍ -3 % 103 %
5 1 ㎍ 0 % 100 %
번호 처리 IR 생존율
1 PBS 0 % 100 %
2 1 mg 3 % 97 %
3 100 ㎍ 6 % 94 %
4 10 ㎍ 15 % 85 %
5 1 ㎍ 2 % 98 %
참조예 1. 아프리카산 영지버섯 동정
본 발명의 아프리카산 영지버섯의 종류를 동정하기 위하여, DNA 염기서열을 (주)마이크로 아이디에 의뢰하여 분석하였으며, ITS rDNA 염기서열분석 (sequencing)으로 동정하였다. 이 때 먼저, % 유사성(similarity) 값을 구하고, 키무라스 투-파라메터 모델(Kimuras two-parameter model) (Kimura, M. A., J. Mol. Evol., 16, pp111-120, 1980)에 의하여 진화적인 거리(evolutionary distance)를 계산한 다음, 네이버-조이닝 방법(Neighbor-joining method) (Saitou, N. and Nei, M., Mol. Biol. Evol., 4, pp406-425, 1987)으로 계통수(phylogenetic tree)를 작성하였다. 한편, 계통수(Tree)의 스케일 바(scale bar)는 0.1 또는 0.01 각 위치의 치환(substitution per site)을 의미하며, 계통수에서 각 가지(branch) 옆의 숫자는 부트스트랩 비율(bootstrap percentage)을 의미한다. 참고로 가노더마 속의 ITS 염기서열의 경우 ITS1과 ITS2가 독립적으로 데이터베이스에 등록된 경우가 많기 때문에 같은 균주에 대한 두개의 염기서열을 다운로드(download)하여 하나의 염기서열로 합하여 분석하였다. ITS1과 ITS2 사이에 존재하는 5.8S rDNA 염기서열은 분석에서 제외하였다.
그 결과, 결정된 염기서열의 개수는 567 bp로 그 염기서열은 도 9 및 서열번호 1에 나타내었다. 본 균주는 가노더마 속(Ganoderma genus)에 속하는 진균으로 판명되었다.
본 발명의 아프리카산 영지버섯 추출물은 아래와 같은 제형으로 투여할 수 있으며, 아래의 제제예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 내용이 제한되는 것은 아니다.
제제예 1. 주사제제의 제조
실시예 3의 아프리카산 영지버섯 조추출물 100 ㎎
소디움 메타비설파이트 3.0 ㎎
메틸파라벤 0.8 ㎎
프로필파라벤 0.1 ㎎
주사용 멸균증류수 적량
상기의 성분을 혼합하고 통상의 방법으로 최종 부피가 2 ㎖이 되도록 제조한 후, 2 ㎖용량의 앰플에 충전하고 멸균하여 주사제를 제조한다.
제제예 2. 정제의 제조
실시예 3의 아프리카산 영지버섯 조추출물 200 ㎎
유당 100 ㎎
전분 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 적량
통상의 정제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3. 캡슐제의 제조
실시예 3의 아프리카산 영지버섯 조추출물 100 ㎎
유당 50 ㎎
전분 50 ㎎
탈크 2 ㎎
스테아린산마그네슘 적량
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제제예 4. 액제의 제조
실시예 3의 아프리카산 영지버섯 조추출물 1000 ㎎
설탕 20 g
이성화당 20 g
레몬향 적량
정제수를 가하여 전체 1000 ㎖로 맞추었다. 통상의 액제의 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 갈색병에 충전하고 멸균시켜 액제를 제조하였다.
제제예 5. 건강 식품의 제조
실시예 3의 아프리카산 영지버섯 조추출물 1000 ㎎
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B1 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 6. 건강 음료의 제조
실시예 3의 아프리카산 영지버섯 조추출물 1000 ㎎
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
본 발명의 영지버섯 추출물은 항바이러스 효과 및 면역활성 기능의 증강에 의해 인플루엔자 바이러스의 증식을 억제하므로, 감기의 치료 및 예방을 위한 약학조성물 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 아프리카산 영지버섯 열수 추출물의 항바이러스 활성을 관찰한 도이고,
도 2는 아프리카산 영지버섯 냉침 추출물의 항바이러스 활성을 관찰한 도이며,
도 3은 아프리카산 영지버섯 조추출물의 항바이러스 활성을 관찰한 도이고,
도 4는 아프리카산 영지버섯 헥산 추출물의 항바이러스 활성을 관찰한 도이며,
도 5는 아프리카산 영지버섯 에틸 아세테이트 항바이러스 활성을 관찰한 도이고,
도 6은 아프리카산 영지버섯 열수 추출물의 세포독성을 측정한 도이며,
도 7은 아프리카산 영지버섯 각 용매 추출물의 세포독성을 측정한 도이고,
도 8a 내지 도 8c는 아프리카산 영지버섯 각 용매 추출물의 조직독성을 측정한 것으로, 도 8a는 조추출물의 조직독성을 측정한 도이고, 도 8b는 헥산 추출물의 조직독성을 측정한 도이며, 도 8c는 에틸 아세테이트 추출물의 조직독성을 측정한 도이고,
도 9는 아프리카산 영지버섯의 염기서열을 나타낸 도이다.
<110> KIM, JIN-DONG LEE, JONG-SUNG <120> Composition comprising the extract of African Ganoderma mushroom for the treatment and protection of cold <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 567 <212> DNA <213> Ganoderma genus <400> 1 gaaggatcat tatcgaattt ttgaccgggt tgtagctggc cttccgaggc atgtgcacgc 60 cctgctcaat ccactctaca cctgtgcact tactgtgggt gacggatcgc aaagcgggct 120 tcttgtccgt tataaagcgc atctgtggcc tgcgtttatc acaaactctt tgaaagtact 180 agaatgtaat attgggatat aatagatcta tatacaactt tcagcaacgg atctcttggc 240 tctcgcatcg atgaagaacg cagcgaaatg cgataagtaa tgtgaattgc agaattcagt 300 gaatcatcga atctttgaac gcaccttgcg ctccttggta ttccgaggag catgcctgtt 360 tgagtgtcat gaaatcttca acttgcaacc tctttgcgga gtttgtaggc ttggacttgg 420 agggcttgtc ggcctttaac ggtcggctcc tcttaaatgc attagcttga ttccttgcgg 480 atcggctgtc ggtgtgataa aatgtctacg ccgtgaccgt gaagcgtttg gatgagcttc 540 caaccgtctt gcttcaaaga caacttt 567

Claims (10)

  1. 아프리카산 영지버섯(Garnoderma genus)추출물을 함유하는 감기의 예방 및 치료용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 영지버섯은 아프리카 케냐에서 자생하는 영지버섯 추출물인 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 영지버섯은 서열번호 1에 기재된 염기서열을 갖는 영지버섯인 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 영지버섯 추출물은 조추출물 또는 비극성 용매 가용성 추출물인 조성물.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 조추출물은 물 또는 메탄올로 추출한 것인 조성물.
  6. 제 4항에 있어서, 상기 비극성 용매 가용추출물은 헥산 또는 에틸 아세테이트로 추출한 것인 조성물.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 고분자 다당체(분자량 12,000이상)분획을 갖는 영지버섯 열수 추출물인 조성물.
  8. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 고분자 단백질(분자량 12,000이상)분획을 갖는 영지버섯 냉침 추출물인 조성물.
  9. 아프리카산 영지버섯 추출물 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 감기의 예방 및 개선용 건강기능식품.
  10. 제 9항에 있어서, 건강음료인 건강기능식품.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN103800330A (zh) * 2013-09-06 2014-05-21 青岛农业大学 火木层孔菌中环二肽c5在抗禽流感h5n1病毒上的应用
CN103800333A (zh) * 2013-09-06 2014-05-21 青岛农业大学 火木层孔菌中环二肽c8在抗禽流感h5n1病毒上的应用

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CN103800330A (zh) * 2013-09-06 2014-05-21 青岛农业大学 火木层孔菌中环二肽c5在抗禽流感h5n1病毒上的应用
CN103800333A (zh) * 2013-09-06 2014-05-21 青岛农业大学 火木层孔菌中环二肽c8在抗禽流感h5n1病毒上的应用
CN103800330B (zh) * 2013-09-06 2016-03-09 青岛农业大学 火木层孔菌中环二肽c5在抗禽流感h5n1病毒上的应用
CN103800333B (zh) * 2013-09-06 2016-03-09 青岛农业大学 火木层孔菌中环二肽c8在抗禽流感h5n1病毒上的应用

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