KR100523753B1 - 산거울 추출물 함유 항염 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 산거울 추출물(Carex humilis Leyss)을 함유한 항염 조성물에 과한 것이다. 본 발명의 항염 조성물로는 피부 약제나 화장료 등을 들 수 있다.

본 발명의 항염 조성물은 안전성이 입증된 천연물의 추출물을 사용함으로써 이 조성물을 피부 약제 혹은 화장품에 사용하였을 때 외부자극에 의한 염증을 효과적으로 경감한다.

Description

산거울 추출물 함유 항염 조성물

본 발명은 산거울 추출물(Carex humilis Leyss)을 함유한 항염 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 항염 조성물로는 피부 약제나 화장료 등을 들 수 있다.

화장품은 피부의 보호 및 아름다움을 유지하기 위해 뿌리거나 바르는 물질을 총칭하는 말로서 피부나 신체의 구조에 변화 혹은 기능 장애를 초래하지 않아야 한다. 그러나 현재 화장품에는 향료, 방부제, 기제 등의 화학물질이 5,000 종 이상 사용되고 있어 각각의 구성 성분에 의하여 여러 부작용이 발생할 가능성이 있다(Maibach, H. I., Contact Dermatitis, 6; 369-404, 1980). 특히 최근에는 기능성 화장품에 대한 요구도 증대되면서 AHA(알파 하이드록시산)나 레티노익산(retinoic acid) 등의 성분을 포함한 제품들, 즉 피부에 다소의 부작용이 있더라도 각종 기능을 가진 다양한 화장품이 개발되고 있다. 이러한 각각의 성분들의 효과를 최대한 증진시키고 부작용을 최소화히기 위해 항염물질의 개발이 필요하다 하겠다.

염증은 세포나 조직이 어떠한 원인에 의해 손상을 받으면 그 반응을 최소화하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키려는 일련의 방어 목적으로 나타나는 것이며 신경 및 혈관, 임파관, 체액 반응, 세포 반응을 일으켜 결과적으로 동통, 부종, 발적, 발열 등을 일으켜 기능장애를 유발하는 것이다. 염증을 유발하는 원인으로는 위상, 화상, 동상, 방사선 등에 의한 무리적 요인과 산(acid)과 같은 화학물질에 의한 화학적 요인, 항체 반응이나 세포성 면역 반응에 의한 면역학적 요인들이 있으며 그외에 혈관이나 호르몬 불균형에 의해서도 발생된다. 외부 자극으로 손상된 세포들이 분비한 여러 화학 매개 물질에 의해 혈관 확장이 일어나고 투과성이 높아짐에 따라 항체, 보체, 혈장(plasma), 식균 세포들이 염증 부위로 몰려들게 된다. 이러한 현상이 홍반과 발명의 원인이 된다. 또한 혈관내의 단백질 함유액이 조직으로 방출되어 자극원이 희석됨과 동시에 방출된 섬유소와 항체 등이 상처 치유 및 방어작용을 하게 된다. 염증을 담당하는 매개체로 (a) 혈관 활성 아민(Vaso-active amines), (b) 혈관 활성 폴리펩타이드(Baso-active polypeptide)와 기타 매개물질 등이 있으며 혈관 활성 아민으로는 비만세포에서 분비되는 히스타민과 세레토닌 등이 있고 주로 혈관 확장과 투과성을 증진시키는 작용을 한다. 혈관 활성 폴리펩타이드인 키닌(kinin), 프라스민(plasmin), 컴프리먼트(complement) 등이 혈관 수축 및 주화성(chemotaxis) 작용을 하고 그외 인터루킨-6(IL-6) 등과 같은 림포카인과 아라키돈산(arachidonic acid) 등이 염증 반응을 담당한다. 물리적, 화학적 자극에 의해 활성화된 포스포리파제에 의해 생성된 아라키돈산은 다시 싸이크로옥시게나제(cyclooxygenase) 혹은 리포옥시게나제(lipooxygenase)의 2가지 경로를 거쳐 염증 매개체인 프로스타그란딘(prostaglandin), 류코트리엔(leukotriene)들로 대사되어 다양한 염증 반응을 매개한다(Thomas. R., Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol., 100, 1984).

염증을 소실시키기 위해 염증원의 제거, 생체 반응 및 증상을 감소시키는 작용을 하는 것을 항염제라 한다. 현재까지 항염의 목적으로 이용되고 있는 물질로는 비스테로이드계로 프루페나믹산(flufenamic acid), 이부프로펜(ibuprofen), 벤지다민(benzydamine), 인도메타신(indomethacin) 등이 있고 스테로이드계통으로 프레드니솔론(prednisolone), 덱사메타손(dexamethasone) 등이 있으나 피부에 대한 안전성 면에서나 화장료 배합시의 안정성 면에서 대부분 문제점을 안고 있어서, 그 사용이 제한되고 있다(김 창종, 병태심리학, 한림상사, pp 61-69, 1988).

본 발명은 이러한 문제점들을 해결하고 보다 우수한 항염 물질을 탐색하고자 하는 연구의 일환으로 이미 그 안전성이 입증되어 있는 천연물들 중에서 항염 효과가 우수한 물질을 탐색하던 중 산거울 추출물이 우수한 싸이크로옥시게나제의 저해제이고 인토루킨-6 생산 저해제일 뿐만아니라 동물에 대한 항염 실험에서 그 효과가 입증되어 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 항염 조성물을 산거울 추출물을 함유하고 있다.

산거울은 그늘진 바위틈이나 건조한 숲속에서 자라는 다년초로서 사초과에 속하며 뿌리는 짧고 옆으로 뻗는 줄기가 없다. 이제까지 특별한 효능이 알려져 있지 않다.

본 발명은 앞서 언급한 선거울 추출물을 피부 약제나 화장료 등에 첨가하는 것이다.

본 발명을 좀 더 자세히 설명하면 상기 산거울 추출물을 건조 중량에 대하여 0.001%-20%(w/w), 바람직하게는 0.01%-10%(w/w)를 앞서 언급한 피부 약제나 화장료에 첨가한다. 상기 농도 이하에서는 실질적인 효과를 기대하기 어렵고, 이상의 농도에서는 제형상 및 제품 안정성에 영향을 미친다. 본 발명을 다음의 추출예, 실험예 및 실시예로 더욱 상세히 설명하고자 한다. 그러나 본 발명이 하기의 예에만 국한되지는 않는다.

<추출예>

신선한 산거울의 뿌리 1 ㎏을 잘게 절단하여 상온에서 80% 메탄올 수용액 1 ℓ에 두 번 추출한다. 이 추출물을 감압 농축기로 농축한 다음 거름종이(Whatman No. 1)로 걸러 침전을 제거하고 감압 건조하여 약 92 g의 추출물을 얻었다.

<실험예 1>

상기 추출예에서 얻어진 산거울 추출물에 대하여 항염 효과를 다음과 같이 측정하였다.

싸이크로옥시게나제는 양 저정낭(sheep seminal vesicle)로부터 추출한 것으로 Pel-Freeze사의 것을 사용하였다. 싸이크로옥시게나제 추출과정을 간략히 설명하면 양 저정낭을 분쇄 후 10,000 g에서 10분 동안 원심분리한다. 상등액을 다시 150,000 g에서 1 시간 동안 원심분리하여 침전물을 분리하고 완충액에 녹인 후 효소원으로 사용하였다.

먼저, 1100 μM 아라키돈산과 25 ㎍ 헤모글로빈을 트리스 완충액(0.1 M, pH 8.0)에 넣어 기질을 만들고 이 기질에 10,000 unit의 싸이크로옥시게나제와 산거울 추출물을 각각 다른 농도로 첨가한다. 효소의 싸이크로옥시게나제 활성은 초기 산소 소모량을 산소 측정기(Yellow Spring Instrument company, model 53 oxygen monitor)로 측정한다. 싸이크로옥시게나제 저해 효과는 다음과 같은 식으로 구한다. 그 결과를 다음 표 1에 제시한다.

저해율 = [(대조군 O₂ - 시료 O₂)/대조군 O₂] x 100

여기서 O₂란 초기 산소 소모량을 뜻한다.

[표 1]

n = 3

위의 결과에서 볼 수 있듯이 산거울 추출물은 사이크로옥시게나제에 대한 저해효과가 우수함을 알 수 있다.

<실험예 2>

MH60 세포주는 IL-6 의존성 세포주로서 시료에 의한 MH60 세포 증식 억제 정도를 측정함으로써 시료가 얼마나 IL-6 작용을 저해하는 지를 알아보았다. MH60 세포를 1x10⁵ cells/㎖dl 되도록 희석한 다음 96-웰(well) 플레이트의 웰당 100 ㎕씩 접종하고 최종 농도가 0.3 U/㎖이 되도록 희석한 인간 IL-6 50 ㎕와 산거울 추출물 50 ㎕를 가하였다. 이때 대조군은 시료 대신 시료에 포함되어 있는 농도의 DMSO(디메틸설폭사이드)를 함유하는 RPMI-10% FBS(소태아 혈청) 배지 50 ㎕를 가하였고, 블랭크(blank)군은 인간 IL-6 시료 대신 RPMI-1640-10% FBS 배지를 100 ㎕ 가하였다. 이것을 37 ℃, 5% CO₂ 조건에서 48시간 배양 후 MTT(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드) 시료를 4시간 동안 첨가한다. 원심분리 후 침전물을 아이소프로판으로 녹인 다음 분광 광도계를 이용, 570 ㎚에서 흡광도를 측정하여 세포의 증식 정도를 측정한다. 산거울 추출물의 MH-60 세포 성장 억제능은 다음과 같은 식으로 구한다. 그 결과를 다음 표 2에 제시한다.

억제율(%)=(1-

)×100

[표 2]

n = 5

산거울 추출물의 IC50(억제 농도 50)은 3.72 ㎍/㎖ 정도이며 산거울 추출물은 강력하고 우수한 IL-6 작용 억제작용이 있음을 알 수 있다.

이와 같이 항염 효과가 우수한 산거울 추출물을 가지고 다음과 같은 조성물을 제조하였다.

실시예 1

실시예 2

실시예 3

실시예 4

실시예 5

<실험예 3>

산거울 추출물을 아라키돈산으로 염증을 일으킨 귀에 도포한 후 귀 두께를 측정함으로써 얼마나 염증을 억제하는 지를 측정하였다(Richard P.G., Alan J.L. et al., Agents and Actions, Vol. 17, 2, 1985).

10 마리의 마우스(Balb/c)의 양쪽 귀 중 우측 귀를 시험 부위, 죄측 귀를 대조 부위로 설정하여 우측 귀에는 상기 산거울 추출물의 실시예들 또는 양성 대조군인 인도메타신을, 좌측 귀에는 각각의 기제(산거울 추출물을 함유하지 않은 실시예들)를 도포한다. 30분 경과 후 아라키돈산(1 ㎍/20 ㎖)를 도포하고 1 시간 후에 마이크로미터로 양쪽 귀 두께를 5회씩 반복 측정하여 부종 정도를 계산한다. 그 결과를 다음 표 3에 제시한다.

억제율(%)=(A-B)/A×100

A: 아라키돈산 도포 귀의 평균 두께

B: 시료 도포군 귀의 평균 두께

[표 3]

n = 10

표 3에서 볼 수 있듯이 본 발명에 의한 실시예들은 마우스에 있어서 염증 반응을 막아준다.

본 발명의 항염 조성물은 안전성이 입증된 천연물의 추출물을 사용함으로써 이 조성물을 피부 약제 혹은 화장품에 사용하였을 때 외부자극에 의한 염증을 효과적으로 경감한다.

Claims (2)

1. 산거울 추출물을 건조중량으로 0.001 내지 20 중량% 함유하는 항염 조성물.
2. 제 1 항에 있어서, 항염 조성물이 화장료인 항염 조성물.