KR100500641B1

KR100500641B1 - 이소플라본 아글리콘 제니스테인을 함유하는 탈모 방지또는 모발 성장 촉진용 조성물

Info

Publication number: KR100500641B1
Application number: KR10-2002-0043829A
Authority: KR
Inventors: 조원희; 박원석; 신성연; 백석윤
Original assignee: 주식회사 태평양
Priority date: 2002-07-25
Filing date: 2002-07-25
Publication date: 2005-07-12
Also published as: KR20040009776A

Abstract

본 발명은 이소플라본 아글리콘 제니스테인을 함유하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 조성물에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 5알파-리덕타아제 활성을 억제하는 제니스테인의 함량이 90% 이상으로 매우 높은 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말을 유효성분으로 함유하고, 선택적으로 통상의 모발 성장 촉진 보조 성분을 함유함으로써, 탈모 방지 효과 또는 모발 성장 촉진 효과가 매우 뛰어난 모발용 조성물에 관한 것이다.

Description

이소플라본 아글리콘 제니스테인을 함유하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 조성물 {Composition for preventing falling out of the hair or promoting growth of the hair containing isoflavone aglycon genistein}

남성의 형질발현에 있어서, 남성 성충동, 골격근 증가, 남성외부생식기 발달, 음낭 성장, 정자형성 등은 테스토스테론이 관여하고 여드름, 피지증가, 탈모 및 전립선비대증 등은 디하이드로테스토스테론이 해당 조직에서 관여하는 것으로 알려져 있다. 이와 같은 남성 호르몬 의존성 질환 중 남성형 탈모는 미용을 중시하는 현대사회의 남성들에게 심각한 정신적 고통을 주고 있기 때문에, 탈모의 기전을 밝히고 이를 개선하기 위한 연구가 활발히 진행되어 왔다.

탈모의 가장 큰 원인으로는 유전적 원인과 남성 호르몬을 들 수 있다. 특히, 탈모 현상을 보이는 사람의 경우, 디하이드로테스토스테론(DiHydro Testosterone(DHT)이 생체 내에서 특히 높은 수준으로 발현되는 것이 관찰됨에 따라 탈모의 주요 원인으로 주목을 받고 있다. 이 경우, 두피에 있는 테스토스테론 수용체 부분에 DHT가 지속적으로 결합하여 모낭을 위축시킴으로써 탈모를 유발하는 것으로 알려져 있는데 특히, 여러 모낭 세포에서 디하이드로테스토스테론은 테스토스테론에 비하여 호르몬 수용체에 더욱 잘 결합하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 디하이드로테스토스테론은 5알파-리덕타아제(5α-reductase)에 의하여 생성되는 것으로 알려져 있다.

5알파-리덕타아제는 피지선, 모낭, 전립선 또는 부고환 등 남성 호르몬 반응성 조직에 존재하며 정소에서 생합성되는 남성 호르몬인 테스토스테론을 활성 남성 호르몬인 디하이드로테스토스테론으로 전환시키는 환원효소이다. 사춘기 이후 5알파-리덕타아제에 의하여 과량 분비되는 디하이드로테스토스테론은 피지세포에서 피지를 과잉 생성하는 주원인 물질로 작용하여 여드름 및 남성형 탈모를 유발한다. 다시 말하면, 남성형 탈모증은 5알파-리덕타아제의 작용에 의한 디하이드로테스토스테론의 과잉생성이 그 원인인 것이다. 이에, 디하이드로테스토스테론의 생성을 촉진하는 5알파-리덕타아제의 생성 및 활성을 억제하는 물질을 개발하여 발모제 또는 탈모 방지제로 이용하기 위한 연구들이 활발히 진행되고 있다.

남성형 탈모를 예방 또는 치료하기 위한 방법으로 종래에는 프로게스테론 (progesterone)과 같은 에스트로겐(estrogen) 등의 여성 호르몬을 투여하는 방법이 이용되어 왔다. 즉, 에스트로겐은 두피에 있는 테스토스테론 수용체에 DHT와 경쟁적으로 결합함으로써, DHT가 수용체에 결합하는 횟수(기회)를 줄이는 것이다. 그러나, 여성 호르몬제 등은 그 효과에 비하여 피부 염증 발생, 특히 남성들에게 있어 여성화와 같은 예기치 않은 부작용을 발생시킬 우려가 있어 현재는 사용을 중단하거나 극미량을 사용하고 있는 실정이다.

식물성 에스트로겐으로 알려져 있는 이소플라본을 사용한 양모제 또는 육모제는 미국 특허 제 6,017,893에서 공지된 바 있으나, 이소플라본의 추출 방법 또는 이소플라본 성분의 조성 비율 및 탈모 방지 효과를 나타내는 작용 기전에 관한 기술적인 언급은 전혀 없다.

이에, 본 발명자들은 이소플라본이 여성 호르몬인 에스트로겐과 유사한 역할을 하는 대체물인 점과, 양모 또는 탈모 방지 효과를 가지며 인체에도 안전한 물질이라는 점에 착안하고 대두로부터 이소플라본류를 분리 정제하여 연구한 결과, 이소플라본 아글리콘 성분인 제니스테인(genistein)이 탁월하게 낮은 농도에서도 디하이드로테스토스테론의 생성을 유발하는 5알파-리덕타아제의 활성을 강력하게 억제한다는 사실을 발견하게 되었다. 이를 기초로 본 발명자들은 이소플라본 아글리콘 제니스테인을 유효성분으로 함유하는 조성물, 특히 제니스테인에 통상의 모발 성장 촉진 보조 성분을 더 첨가하여 제조한 조성물이 탈모 방지 효과 또는 모발 성장 촉진 효과가 매우 뛰어남을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 이소플라본 아글리콘 활성 성분인 제니스테인의 함량을 90% 이상으로 농축시킨 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말을 제조하는 방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 이소플라본 아글리콘 활성 성분인 제니스테인의 함량을 90% 이상으로 농축시켜 제조한 제니스테인 농축 분말을 함유함으로써 5알파-리덕타아제를 억제함을 특징으로 하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 이소플라본 아글리콘 활성 성분인 제니스테인의 함량을 90% 이상으로 농축시켜 제조한 제니스테인 농축 분말을 함유하는 조성물에 모발 성장 촉진 보조 성분을 더 첨가함으로써 탈모 방지 효과 또는 모발 성장 촉진 효과가 더욱 뛰어난 모발용 조성물을 제공하는데 있다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 5알파-리덕타아제 활성을 억제하는 제니스테인의 함량이 90% 이상으로 매우 높은 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말을 0.0001∼10중량% 함유하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 조성물을 제공함을 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

콩은 인류의 중요한 식량 자원으로 활용되어 왔으며, 단백질, 필수지방산, 인지질, 비타민 E 및 칼슘 등이 풍부해 사람이 섭취할 경우 여러 가지 생리활성을 나타내는 것으로 알려져 있다. 콩은 고혈압 방지, 혈전 용해, 혈중 콜레스테롤 저하 효과 등의 각종 성인병 예방효과가 있고, 뿐만 아니라 항암성, 항돌연변이성, 노화방지는 물론 두뇌 활동과 피부미용에도 좋은 것으로 알려져 있다. 또한, 콩은 고추장, 된장, 간장, 콩 요쿠르트를 비롯해 두유, 두부, 유부 등으로 이용할 수 있는 유용한 식품이다.

최근 콩의 성분과 기능에 대하여 관심이 증가하고 있는데, 특히 콩 속에 함유된 기능성 성분인 이소플라본(isoflavone)에 대한 관심이 날로 증가하고 있다. 이소플라본 함량은 콩의 품종과 제배 조건에 따라 크게 다른데, 보통 0.1∼0.4% 정도이며, 이중 두부나 대두 단백 제조시 30∼50% 정도가 손실된다. 이소플라본은 암, 심장병, 고혈압, 골다공증, 갱년기 장애, 신장병 등의 예방 및 치료에 효과가 있다고 알려져 있다.

식물체 색소의 일종인 이소플라본은 식물에서 유래한다는 의미의 피토(phyto)와, 에스트로겐과 기능이 유사하다는 의미의 에스트로겐(estrogen)이 합해져 식물성 에스트로겐(phytoestrogen)이라고 불리는데, 특히 에스트로겐성 스테로이드와 유사한 구조를 갖고 있는 헤테로고리성 페놀계 화합물(heterocyclic phenol compound)이다.

이소플라본은 제니스테인(genistein) 글리코시드, 다이드제인(daidzein) 글리코시드, 글리시테인(glycitein) 글리코시드 및 이들의 배당체와 유도체로 구성되어 있는데, 대부분이 제니스틴(genistin) 및 다이드진(daidzin)과 같은 배당체 형태이다. 이들은 미생물 발효 또는 글루코시다제 등의 효소에 의하여 당 잔기가 가수분해되어 체내 흡수율이 높은 비배당체(aglycon)인 제니스테인(genistein) 등으로 변한다. 글루코시드의 구조를 화학식 1에, 아글리콘의 구조를 화학식 2에 각각 나타내었다. 또한, 대두 중의 이소플라본 및 이소플라본 아글리콘의 종류 및 구조식을 다음 표 1에 나타내었다.

R₃	R₄	R₅	화합물	R₁	R₂	화합물
H	H		다이드진	H	H	다이드제인
OH	H		제니스틴	OH	H	제니스테인
H	OCH₃	H	글리시틴	H	OCH₃	글리시테인
H	H	COCH₃	아세틸다이드진
OH	H	COCH₃	아세틸제니스틴
H	OCH₃	COCH₃	아세틸글리시틴
H	H	COCH₂COOH	말로닐다이드진
OH	H	COCH₂COOH	말로닐제니스틴
H	OCH₃	COCH₂COOH	말로닐글리시틴

대두 이소플라본류 중 항암 활성이 가장 뛰어난 것으로 알려진 제니스테인은 다양한 연구를 통하여 디에틸스틸베스트롤(DiEthylStilbestrol, DES) 또는 에스트라디올(estradiol)의 1×10^-3∼1×10^-5 정도의 에스트로겐 효과를 갖고 있는 것으로 알려졌는데, 특히 에스트로겐 수용체에 대하여 DES 또는 에스트라디올과 경쟁적으로 결합하는 경우 제니스테인의 결합능력이 100~10000배 더 높다고 보고되었다〔Tian CY, Hu CQ, XU G, Song HY, Assessment of estrogenic activity of natural compounds using improve E-screen assay, Acta Pharmacol Sin (2002)Jun;23(6) :572-62; Morito k, Hirose T, Kinjo J, Hirakawa T, Okawa M, Nohara T, Ogawa S, Inoue S, Muramatsu M, Masamune Y, Interaction of phytoestrogens with estrogen receptors alpha and beta. Biol Pharm Bull (2001) Apr;24(4):351-63〕. 이소플라본 아글리콘(비배당체) 형태인 제니스테인은 항에스트로겐(anti-estrogen)으로 작용을 하나, 배당체인 제니스테인은 이와 같은 암세포 증식 억제 효과를 보이지 않는데, 이것은 배당체(당 유도체)의 경우 세포막 투과성이 적어지고 작용 단백질과의 친화도가 저하되기 때문이다.

본 발명에 따른 5알파-리덕타아제 억제용 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말의 제조방법은 하기의,

(1) 대두를 분쇄한 후 여과하여 제조된 대두유액의 단백질을 응고 침전시켜 대두 농축액을 획득하는 단계;

(2) 상기 정제된 대두 농축액의 무기염류 및 단당류를 제거한 농축액을 동결건조하여 이소플라본 분말을 획득하는 단계;

(3) 상기 이소플라본 분말에 증류수를 넣고 아스퍼질러스 나이거 (Aspergillus niger) 및 트리코더마 르에세이(trichoderma reesei)를 2:1∼3:1의 범위로 접종하고 혼합배양하는 단계;

(4) 상기 배양액을 원심분리한 상등액을 여과한 다음 동결건조하여 이소플라본 아글리콘을 제조하는 단계;

(5) 상기 이소플라본 아글리콘을 실리카겔을 이용한 크로마토그래피법으로 농축하여 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축분말을 제조하는 단계를 포함하여 구성된다.

상기와 같은 5알파-리덕타아제 억제용 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말의 제조방법에 있어서, (1) 및 (2)단계는 본 분야에서 통상적으로 알려져 있는 이소플라본 분말의 제조방법으로 대체할 수 있다. 즉, 통상적으로 알려져 있는 이소플라본 분말을 사용하여 상기 (3) 단계 이하의 과정을 수행함으로써 본 발명에 따른 이소플라본 아글리콘 농축분말을 제조할 수 있다.

상기 (1), (2)단계를 거쳐 획득한 이소플라본 분말 중 제니스테인 글리코시드의 농도는 본 발명 실험 결과 약 6∼7%에 불과하였으나, 최종 (5)단계에서 획득한 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말을 박층크로마토그래피법으로 확인한 결과 제니스테인의 함량이 90% 이상으로 매우 높게 나타났다.

즉, 본 발명에 따른 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말은 분말 중 제니스테인의 함량이 90% 이상으로 농축된 것이다.

본 발명의 방법에 의하여 제조된 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말을 함유하는 조성물을 이용하여 5알파-리덕타아제 억제 시험을 실시한 결과, 5알파-리덕타아제 활성을 억제하는 효과가 매우 뛰어난 것으로 나타났다. 즉, 본 발명에서는 이소플라본 아글리콘 제니스테인이 5알파-리덕타아제 억제효과가 있음을 밝힌 것이다. 이는 이소플라본의 양모제 또는 육모제로서의 효과가 이소플라본이 5알파-리덕타아제의 활성을 억제하고, 결과적으로 디하이드로테스토스테론의 생성을 억제하는 작용기전에 의해 발생하는 것임을 입증하는 것이다. 특히, 본 발명은 다양한 이소플라본류 중 아글리콘의 일종인 제니스테인이 5알파-리덕타아제를 억제하는 효과가 월등히 뛰어난 유효성분임을 밝힌 것이다.

또한, 본 발명에 따른 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말을 유효성분으로 함유하는 조성물을 이용하여 모발 성장 유효성 평가 시험 동물인 C57BL/6 마우스를 이용한 동물시험 및 탈모증이 있는 사람에 대한 임상시험 결과, 피부 발적 등의 부작용이 전혀 나타나지 않으면서 양모 또는 탈모 방지 효과가 우수한 것으로 나타났다.

본 발명에 따른 탈모 방지용 또는 모발 성장 촉진용 조성물은 5알파-리덕타아제 활성 억제 효과가 있는 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축분말을 유효성분으로 함유함을 특징으로 한다. 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001∼10중량%가 바람직하다. 즉, 0.0001 중량% 미만에서는 그 효과가 충분히 발휘되지 않으며, 10중량% 초과에서는 용량에 비례하는 효과를 보이지 못할 뿐만 아니라 제형을 유지하기가 어려워진다. 그러나, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명에 따른 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 조성물은 이소플라본 아글리콘 제니스테인 이외에 본 분야에서 통상적으로 알려져 있는 모발 성장 촉진 보조 성분에 배합하는 성분을 더 함유할 수 있다. 이러한 모발 성장 촉진 보조 성분으로는 혈액 순환을 촉진하는 고추틴크, 초산 토코페롤,세포 활성과 모근을 자극하는 인삼 추출물, 산수유 추출물, 엘-멘톨 및 살균이나 각질 용해를 위한 살리실산 중 어느 하나 이상을 선택하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 상기와 같은 모발 성장 촉진제는 이소플라본 아글리콘 제니스테인의 탈모 효과 또는 모발 성장 촉진 효과에 방해를 주지 않고, 제형을 유지할 수 있는 농도 범위에서 제한 없이 사용할 수 있으나, 인체 안전성이나 제형 안정성을 고려하여 산수유 추출물 0.0001∼1.0중량%, 고추틴크 0.0001∼10.0중량%, 인삼 추출물 0.0001∼10.0중량%, 초산토코페롤 0.0001∼10.0중량%, 살리실산 0.0001∼0.1중량% 및 엘-멘톨 0.0001∼0.1중량%로 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 조성물은 통상 두피에 적용시킬 수 있는 모든 제형의 제품으로 제조할 수 있으나, 샴푸, 헤어컨디셔너, 헤어토닉, 헤어로션, 액상의 양모제 타입의 제형 또는 이들 제형의 에어졸 타입의 제형으로 제조하는 것이 바람직하다.

이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 하지만, 본 발명의 권리범위가 이들에 한정하는 것은 아니다.

〔실시예〕이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말의 제조

제 1단계. 대두로부터 이소플라본 농축 분말의 획득

대두 10kg(정식품)에 상수 3ℓ을 첨가한 후, 20∼30℃의 온도에서 약 4시간동안 침지시켰다. 이를 믹서로 분쇄하고 200메쉬(mesh) 여과망으로 여과하여 약 10%의 대두유액 25L을 얻었다. 이것을 93∼95℃에서 30분간 가열한 다음, 85℃로 냉각하여 글루코노델타락톤, 염화 마그네슘 및 황산 칼슘을 첨가하여 단백질을 응고 침전시키고 상등액을 분리하였다. 상기 공정은 일반 두부 제조 공정과 동일하며, 이 때 침전물과 분리된 상등액을 순물이라 칭하기로 하였다. 상등액의 pH는 6.8, 고형분 농도는 3%이었다.

상기 상등액(순물)에 퍼라이트를 5% 첨가하고 여과한 다음, 이 여액을 RO Membrane(De Danske Sukkerfabrikker 회사의 CA865PP)을 이용하여 5∼30℃ 조건에서 통과시켜 단백질 응고 침전에 사용된 염화마그네슘 등의 무기염류 및 단당류들을 제거하여 200㎖의 정제된 농축액을 얻었다.

이 농축액을 진공 동결건조하여 미황색의 이소플라본 분말 10g을 얻었다.

획득한 이소플라본 분말 중 제니스테인의 구성 비율을 조사하여 표 2에 나타내었다.

이소플라본	농도 (%)
다이드제인 글리코시드 (다이드진)	15.3
제니스테인 글리코시드 (제니스틴)	6.4
글리시테인 글리코시드 (글리시틴)	3.5

제 2단계. 이소플라본 분말로부터 이소플라본 아글리콘의 획득

상기 획득한 이소플라본 분말에 증류수를 넣어 농도가 5∼30%가 되도록 한 다음, 120℃에서 30분간 멸균하여 30℃로 냉각하였다. 여기에, 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger) KCCM 11885 균주를 액체량 대비 5∼10%, 트리코더마 르에세이(Trchodermal reesei) KCCM 355를 액체량 대비 5∼15% 즉, 상기 두 균주를 약 2:1∼3:1의 비율로 접종하여 2∼5일간 혼합 배양하였다.

상기 배양액을 5,000∼10,000rpm으로 원심분리하여 회수한 침전물을 증류수로 3회 세척하고 이를 재회수한 다음, 원심분리하여 얻은 침전물에 95% 메틸알코올을 가하여 80℃로 가온하였다. 이것을 통상적으로 알려진 여과 장치로 여과하여 침전물과 이소플라본 아글리콘을 분리한 다음, 이소플라본 아글리콘액을 동결건조하여 생물학적 활성이 높은 것으로 알려진 이소플라본의 아글리콘 2.5g을 얻었다.

제 3단계. 이소플라본 아글리콘의 농축

상기 획득한 이소플라본 아글리콘에 증류수를 넣어 농도가 5∼30%가 되도록 한 후 120℃에서 30분간 멸균하고 다시 30℃로 냉각한 다음 실리카겔(silica gel)을 이용한 크로마토그래피 법으로 농축하였다. 즉, 이소플라본 아글리콘 현탁액을 물로 미리 적셔 놓은 실리카겔로 채워진 컬럼의 윗부분에 장착하였다. 용출 용매로는 유기 용매인 에틸 아세테이트(ethyl acetate)와 포름산(formic acid), 그리고 물을 각각 8:2:3의 비율로 혼합하여 사용하였다. 이소플라본 아글리콘 활성 물질인 제니스테인을 포함하는 분획을 박층크로마토그래피(Thin Layer Chromatography, TLC)법으로 확인하였다(도 1). 이렇게 획득한 제니스테인을 포함하는 분획을 탈수(evaporation)하여 건조시킨 결과, 제니스테인 함량이 90% 이상으로 농축된 이소플라본 아글리콘 제니스틴 농축 분말 1g을 획득할 수 있었다. 본 실험에서는 이소플라본 아글리콘 농축 분말 중 제니스테인 함량이 91.30%로 농축되었다.

〈시험예 1〉이소플라본 아글리콘 제니스테인의 5알파-리덕타아제 활성 억제능 평가

본 발명 이소플라본 아글리콘 제니스테인의 5알파-리덕타아제 활성 억제능을 평가하였다. 5알파-리덕타아제는 8∼10주령의 수컷 스프라그-다우리[adult, Spraque-Dawley, male rat]의 간에서 얻었고, 이를 단백질 정량을 통하여 효소 현탁액(enzyme suspension)으로 준비하였다. 효소반응용액(enzyme reaction solution)은 인산 완충 용액(PBS)에 보조인자인 NADP를 첨가하고, 5알파-리덕타아제의 반응기질로 방사선으로 표지된 테스토스테론(3H testosterone)을 사용하였다.

효소반응용액:효소현탁액:제니스테인분말을 7:2:1의 비율로 2분간 항온조에서 반응시킨 다음 반응용매를 날려보내고 남은 물질을 전개 용매에 녹여 박층크로마토그램(TLC)에 전개하였다. 테스토스테론의 디하이드로테스토스테론으로의 전환률을 측정하였으며, 그 결과를 대조군(제니스테인 농축 분말을 첨가하지 않고 대두 추출 분말을 첨가하였을 때의 전환율)과 비교하여 5알파-리덕타아제 억제율을 평가하였다. 억제율 평가 계산 방법은 아래와 같다.

A : 제니스테인 농축 분말 미 첨가시 테스토스테론에서 디하이드로테스토스테론으로의 전환율

B : 제니스테인 농축 분말 첨가시 테스토스테론에서 디하이드로테스토스테론으로의 전환율

상기 억제율 측정 결과는 아래의 표 3과 같다

시료 종류	제니스테인 농축 분말 첨가 (시험군)				대두 추출 분말 첨가 (대조군)
시료 농도	0.1	0.01	0.001	0.0001	0.1	0.01	0.001	0.0001
억제율(%)	100	100	78.6	56.2	17.8	9.7	6.9	3.1

상기 표 2를 통하여, 본 발명 이소플라본 아글리콘 제니스테인은 5알파-리덕타아제의 활성을 저해함으로써, 테스토스테론의 디하이드로테스토스테론으로의 전환을 억제하는 효과가 매우 뛰어난 것을 확인할 수 있다.

〈제조예〉제니스테인 농축 분말을 함유한 모발 성장 촉진용 조성물의 제조

본 발명에 따른 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축분말과 기타 보조성분을 사용하여 다음의 표 4에 나타난 조성비로 액상의 모발 성장 촉진용 조성물을 제조하였다.

원료명	제조예 1	제조예 2	제조예 3	제조예 4	제조예 5	제조예 6	비교예 1
에탄올	40	40	40	40	40	40	40
제니스테인농축 분말	0.1	0.001	0.0001	1	1	0.1	0
산수유 추출물	0	0	0	0	0.1	0.1	0.1
고추 틴크	0	0	0	0	0.5	0.5	0.5
인삼 추출물	0	0	0	0	1	1	1
초산 토코페롤	0	0	0	0	1	1	1
살리실산	0	0	0	0	0.3	0.3	0.3
엘-멘톨	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
트윈 20	0.3	0.3	0.3	0.3	0.3	0.3	0.3
향료	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량
색소	적량	적량	적량	적량	적량	적량	적량
물	100중량%가 될 때까지 첨가

〈시험예 2〉동물을 이용한 모발 성장 촉진 효과 측정

본 발명 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말의 모발 성장 촉진 효과를 시험하였다. 이를 위하여, 생후 42∼56일된 마우스(C57BL/6, male)의 등 부위의 털을 제거하고 상기 제조예 및 비교예의 양모제 조성물에 대하여 각각 10마리씩 등 부위에 1일 1회, 100㎕를 28일간 도포하였다.

그 결과는 화상분석기를 이용하여 털을 제거한 면적에 대하여 신생모가 자란 비율을 구하여 비교하였으며, 그 비율이 70% 이상일 경우 모발 성장 촉진 효과가 있다고 판단하였다(도 2 내지 도 8).

구분	제조예 1	제조예 2	제조예 3	제조예 4	제조예 5	제조예 6	비교예 1
면적비 (%)	79.2	73.6	70.1	85.1	89.6	82.1	31.8

상기의 결과와 같이, 제니스테인 농축 분말을 함유하는 제조예 1 내지 6의 조성물은 비교예 1의 조성물과 비교하여 2배 이상의 높은 모발 성장 촉진 효과를 나타내었고, 기타의 보조 성분을 포함하는 경우가 그렇지 않은 경우보다 더 높은 모발 성장 촉진 효과를 나타내었다.

〈시험예 3〉모발 성장 촉진 효과 임상 측정

상기 시험예 1 및 시험예 2에서 확인한 이소플라본 아글리콘 제니스테인의 5알파-리덕타아제에 대한 뛰어난 활성 억제 효과와 동물 실험에서 나타난 모발 성장 촉진 효과를 임상에서 확인하고자 탈모증이 있는 대상자를 선정하여 그 임상 효과를 측정하였다.

이소플라본 아글리콘 제니스테인을 함유한 상기 제조예 4 및 이를 함유하지 않는 비교예 1을 사용하여 모발 성장 촉진에 관한 임상 시험을 실시하였다. 30∼50세의 성인 남성 탈모증이 있는 사람 또는 일일 평균 탈모수가 100개 이상인 사람을 10명씩 대상으로 선정하였다.

사용 방법은 탈모 부위에 1일 2∼3회 약 2㎖ 정도를 도포하는 것으로 하고, 효과 확인의 정도에 따라 최소 1개월에서 최대 3개월까지 사용하였으며 그 이상은 효과가 없는 것으로 하였다.

효과의 판정은 세발시 일일 평균 탈모량, 육안 판정 소견 및 자각 증상개선 정도를 다음 표의 척도에 따라 5단계로 평가하고, 종합적으로 전반적인 개선도를 상기 평가 척도의 평균으로 하였다. 최종 판정은 종합적인 전반 개선도 3.0 점 이상을 유효하다고 하였다. 그 결과를 다음의 표 5에 나타내었다

단계 구분	세발시 탈모량	자각 증상	육안 판정
5	현저한 감소	현저한 감소	현저한 감소
4	중등도 감소	중등도 감소	중등도 감소
3	경도 감소	경도 감소	경도 감소
2	불변	불변	불변
1	악화 (탈모 증가)	악화	악화

단계 구분	세발시 탈모량	자각 증상	육안 판정	종합 개선도
제조예 4	4.3	3.9	4.1	4.1
비교예 1	2.4	2.5	2.4	2.4

상기의 결과와 같이, 이소플라본 아글리콘 제니스테인을 함유하는 제조예 4의 양모제 조성물은 비교예 1의 조성물에 비하여 현저한 탈모 개선 효과를 나타내었으며, 사용기간 중 대상자 전원에게서 어떠한 부작용도 발견되지 않아 인체에도 안전한 조성물임을 알 수 있었다.

이상의 시험예 1 내지 3을 통하여, 이소플라본 아글리콘 제니스테인은 5알파-리덕타아제의 활성을 강력하게 억제하고, 이소플라본 아글리콘 제니스테인을 함유한 양모제 조성물의 모발 성장 촉진 효과는 이를 함유하지 않은 경우에 비하여 매우 월등함을 알 수 있었다.

이상의 실시예 및 시험예를 통하여 설명한 바와 같이, 본 발명은 대두로부터 추출한 이소플라본 아글리콘 제니스테인이 테스토스테론을 디하이드로테스토스테론으로 전환시켜 탈모를 유발하는 5알파-리덕타아제의 활성을 억제함으로써 탈모를 방지하는 효과가 있음을 밝혔을 뿐만 아니라, 대두로부터 제니스테인의 함량이 90% 이상으로 매우 높은 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축 분말을 제조하고, 이를 함유한 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 조성물을 제조함으로써 남성형 탈모를 효과적으로 치료 및 예방할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.

도 1은 대두로부터 추출한 이소플라본 아글리콘 활성 물질인 제니스테인을 포함하는 분획을 박층크로마토그래피(Thin Layer Chromatography, TLC)한 결과이다.

도 2는 모발을 제거한 마우스(C57BL/6, male)의 등 부위에 제조예 1의 조성물을 도포하고 28일 후 모발 성장 정도를 촬영한 사진이다.

도 3은 모발을 제거한 마우스(C57BL/6, male)의 등 부위에 제조예 2의 조성물을 도포하고 28일 후 모발 성장 정도를 촬영한 사진이다.

도 4는 모발을 제거한 마우스(C57BL/6, male)의 등 부위에 제조예 3의 조성물을 도포하고 28일 후 모발 성장 정도를 촬영한 사진이다.

도 5는 모발을 제거한 마우스(C57BL/6, male)의 등 부위에 제조예 4의 조성물을 도포하고 28일 후 모발 성장 정도를 촬영한 사진이다.

도 6은 모발을 제거한 마우스(C57BL/6, male)의 등 부위에 제조예 5의 조성물을 도포하고 28일 후 모발 성장 정도를 촬영한 사진이다.

도 7은 모발을 제거한 마우스(C57BL/6, male)의 등 부위에 제조예 6의 조성물을 도포하고 28일 후 모발 성장 정도를 촬영한 사진이다.

도 8은 모발을 제거한 마우스(C57BL/6, male)의 등 부위에 비교예 1의 조성물을 도포하고 28일 후 모발 성장 정도를 촬영한 사진이다.

Claims

조성물 총 중량에 대하여 하기의 단계를 거쳐 제조되고 제니스테인의 함량이 90% 이상인 이소플라본 아글리콘 제니스테인을 0.0001∼10 중량%의 양으로 함유함으로써 5 알파-리덕타아제의 활성을 억제하는 것임을 특징으로 하는 탈모방지 또는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물:

(1) 이소플라본 분말에 증류수를 넣고 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger) 및 트리코더마 르에세이(trichoderma reesei)를 2:1∼3:1의 범위로 접종하고 혼합배양하는 단계;

(2) 상기 배양액을 원심분리한 상등액을 여과한 다음 동결건조하여 이소플라본 아글리콘을 제조하는 단계; 및

(3) 상기 이소플라본 아글리콘을 실리카겔을 이용한 크로마토그래피법으로 농축하여 이소플라본 아글리콘 제니스테인 농축분말을 제조하는 단계.
삭제
제 1항에 있어서, 상기 조성물에 고추틴크, 초산 토코페롤, 인삼 추출물, 산수유 추출물, 엘-멘톨 및 살리실산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 모발 성장 촉진제 보조 성분을 더 첨가하는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물.
삭제
제 1항 또는 제 3항에 있어서, 상기 조성물은 샴푸, 헤어컨디셔너, 헤어토닉 또는 헤어로션의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물.
삭제
삭제
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제 1항에 있어서, 상기 제조공정 중 (1) 단계에서 사용한 이소플라본 분말은,

대두를 분쇄한 후 여과하여 제조된 대두유액의 단백질을 응고 침전시켜 대두 농축액을 획득하는 단계; 및 상기 정제된 대두 농축액의 무기염류 및 단당류를 제거한 농축액을 동결건조하여 이소플라본 분말을 획득하는 단계를 거쳐 제조된 것임을 특징으로 하는 탈모 방지 또는 모발 성장 촉진용 화장료 조성물.