KR20160082129A

KR20160082129A - 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 함유하는 항노화용 피부 외용제 조성물

Info

Publication number: KR20160082129A
Application number: KR1020140194620A
Authority: KR
Inventors: 박준성; 김동현; 이옥찬; 황경환; 홍용덕
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2014-12-31
Filing date: 2014-12-31
Publication date: 2016-07-08

Abstract

본 발명은 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 함유하는 항노화용 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤의 시너지 효과를 이용한 항산화용, 콜라겐 합성 촉진용, 피부 탄력 개선용, 피부 주름 개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 저농도의 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 최적의 함량비로 함유함으로써, 항노화 효과가 우수하고, 진피에서 콜라겐 생합성을 증가시켜 주름 개선 및 탄력 회복 효과를 나타낸다.

Description

이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 함유하는 항노화용 피부 외용제 조성물{SKIN EXTERNAL COMPOSITION FOR ANTI-AGING CONTAINING ISOFLAVONE AND (2S)-1-O-linolenoyl-3-O-β-D-galactopyranosyl-sn-glycerol}

본 발명은 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 함유하는 항노화용 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤의 시너지 효과를 이용한 항산화용, 콜라겐 합성 촉진용, 피부 탄력 개선용, 피부 주름 개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

인간의 피부는 인체의 일차 방어막으로서 온도 및 습도의 변화, 자외선, 공해물질과 같은 외부 환경의 자극으로부터 체내의 기관을 보호해 주는 기능을 하며, 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다.

노화가 진행될수록 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히아루론산 및 당단백질의 함량 및 배열이 변하거나 감소하는 증상들이 나타나게 되고, 피부조직을 분해하는 효소인 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP: Matrix metalloproteinase)의 생합성이 증가하여 피부의 탄력이 감소하고 주름이 생성된다. 즉 자연적으로 진행되는 내인성 노화에 따른 세포 활성의 감소 및 미세염증에 의해 기질의 생합성이 감소되고, 자외선, 대기오염 등 여러가지 유해 환경에 의한 스트레스의 증가로 인해 피부 조직의 분해 및 변성이 가속화되어 피부 기질이 파괴되고 얇아지면서 피부 노화의 제반 증상들이 나타나게 된다.

이러한 피부 내적 및 외적 요인에 의한 피부 상태의 변화를 방지하고, 건강한 피부 상태를 유지하기 위해서 기존에 알려진 각종 동물, 식물, 미생물 등으로부터 얻은 생리 활성 물질들을 화장품에 부가하여 사용함으로써 피부 상태를 개선시키기 위한 노력이 있어 왔다.

이소플라본(isoflavone)은 주로 콩에 함유된 식물성 화합물로서, 이소플라본은 제니스테인(genistein) 글리코시드, 다이드제인(daidzein) 글리코시드, 글리시테인(glycitein) 글리코시드 및 이들의 배당체와 유도체로 구성되어 있는데, 대부분이 제니스틴(genistin) 및 다이드진(daidzin)과 같은 배당체 형태이다. 이들은 미생물 발효 또는 글루코시다제 등의 효소에 의하여 당 잔기가 가수분해되어 체내 흡수율이 높은 비배당체(aglycon)인 제니스테인(genistein) 등으로 변한다 (한국등록특허 제10-0500641호). 이소플라본은 항산화제, 항균제 및 금속 킬레이트제의 효과가 있다고 보고된 바 있으며 (Middleton et al., 1992; Dixon et al., 2002), 항노화, 피부 주름 개선 등의 효과가 있다고 알려져 있다.

한편, 본 발명의 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 이라는 공지의 화합물은 항암, 항염 등의 효과를 가진다고 알려져 있으나(Cha B-J et al., Glycosyl glycerides from hydrophobic Panax ginseng inhibited NO production in LPS-stimulated RAW264.7 cells, Journal of Ginseng Research (2014), doi:10.1016/j.jgr.2014.10.005), 항노화 효과가 있는지에 대해서는 알려진 바가 없다.

상기 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 두 화합물의 성질에 착안하여, 본 발명자들은 피부의 콜라겐 감소를 기존의 화합물에 비하여 월등하게 억제시킬 수 있는 물질을 찾고자 예의 노력한 결과, 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 특정 비율로 혼합하였을 때 콜라겐 생합성 증가로 인한 피부 주름 개선 및 피부 탄력 개선 효과 등의 항노화 효과가 있음을 발견하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

한국등록특허 제10-0500641호

본 발명의 목적은 저농도의 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 최적의 함량비로 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공하는데 있다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물로서,

상기 이소플라본을 조성물 총 중량에 대하여 0.01~0.1 중량%로 함유하고, 상기 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 조성물 총 중량에 대하여 1.0~10.0 중량%로 함유하며,

상기 이소플라본:(2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤의 함량비는 몰농도비로 1:25~1:50인 것을 특징으로 하는 항노화용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 저농도의 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 최적의 함량비로 함유함으로써, 항노화 효과가 우수하고, 진피에서 콜라겐 생합성을 증가시켜 주름 개선 및 탄력 회복 효과를 나타낸다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

본 발명은 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물로서, 상기 이소플라본을 조성물 총 중량에 대하여 0.01~0.1 중량%로 함유하고, 상기 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 조성물 총 중량에 대하여 1.0~10.0 중량%로 함유하며; 상기 이소플라본:(2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤의 함량비는 몰농도비로 1:25~1:50인 것을 특징으로 하는 항노화용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명에서 사용된 대두배아 이소플라본 (Soybean Germ Isoflavone)은 식물, 특히 콩과식물에 많이 존재하는 물질로 바이오이소젠이라 지칭하기도 한다.

상기 대두배아 이소플라본의 구체적인 예로는 당과 결합된 형태인 제니스틴, 다이드진, 그리시틴; 당이 제거된 형태인 제니스테인, 다이드제인, 그리시테인 또는 이들의 혼합물 등이 있다. 한편, 대두배아 이소플라본은 효소를 이용하여 당을 제거한 어글리콘(aglycone) 형태가 50%이상 함유되어 있으며, 일반적으로 당과 결합한 형태인 천연 이소플라본에 비해 당을 제거한 형태가 피부 흡수력이 훨씬 우수하다(한국특허 제99020416호 및 제99039042호).

대두 이소플라본류 중 항암 활성이 가장 뛰어난 것으로 알려진 제니스테인은 다양한 연구를 통하여 디에틸스틸베스트롤 (DiEthylStilbestrol, DES) 또는 에스트라디올(estradiol)의 1×10^-3∼1×10^-5 정도의 에스트로겐 효과를 갖고 있는 것으로 알려져 있어, 본 발명의 실시예에서는 이소플라본 중 제니스테인을 사용하였으나, 반드시 이에만 한정되는 것은 아니다.

상기 조성물에서 이소플라본의 함량은 생체외(in vitro) 실험 및 생체내(in vivo) 실험을 근거로 조성물 총 중량에 대하여 0.01~0.1중량%이다. 이때, 함량이 0.01중량% 미만이면 활성 성분으로서 작용을 기대하기 어려우며, 0.1 중량%를 초과하면 증상 개선 효과가 오히려 감소한다.

본 발명에서 사용되는 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤(분자량: 514)은 하기 화학식 1의 구조를 가진다.

[화학식 1]

본 발명의 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤은 식물에서 추출될 수도 있고, 당업계에 공지된 방법에 따라 합성하여 사용할 수도 있으며, 상업적으로 시판되는 것을 사용할 수도 있다.

또한, 상기 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤의 함량은 생체외(in vitro) 실험 및 생체내(in vivo) 실험을 근거로 조성물 총 중량에 대하여 1.0~10.0 중량%이다. 이때, 함량이 1.0 중량% 미만이면 활성성분으로서 작용을 기대하기 어려우며, 10.0 중량%를 초과하면 증상 개선 효과가 미약하다.

본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 사용하여 주름, 탄력 등의 증상을 전반적으로 효과적으로 개선할 수 있다.

본 발명에 의한 피부외용제 조성물은 저농도의 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 다음의 일정성분비, 즉, 이소플라본 0.01~0.1 중량% 함유시 이소플라본:(2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤은 몰농도비로 1:25 ~ 1:50으로 함유할 경우 피부 항노화 효과가 더욱 우수하다.

본 발명에 의한 항노화용 피부 외용제 조성물은 항산화용인 것을 특징으로 한다.

본 발명에 의한 항노화용 피부 외용제 조성물은 콜라겐합성 촉진용인 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에 의한 항노화용 피부 외용제 조성물은 피부 탄력 개선용인 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에 의한 항노화용 피부 외용제 조성물은 피부 주름 개선용인 것을 특징으로 한다.

상기한 본 발명의 항노화용 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물로서 제형화될 수 있으며, 화장품학 또는 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화될 수 있다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로서, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형 (리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한 포말 (foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 구체적으로 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일 및 바디에센스 등의 화장료로 제형화될 수 있다.

또한 본 발명에 의한 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제 (foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.

또한, 본 발명의 조성물은 피부 개선 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.

이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명을 보다 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[참고예 1]

본 발명의 조성물의 효능을 실험하기 위한 이소플라본(제니스테인)은 하기와 같이 농축 분말의 형태로 제조하였다.

제1단계. 대두 추출물의 제조

대두 2 ㎏에 각각 헥산 6 ℓ를 넣고, 상온에서 3회 교반 추출하여 탈지시킨 다음, 탈지된 대두 1 kg에 80 % 메탄올 4 ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 후, 15 ℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압농축하여 얻은 엑기스를 물에 현탁한 후, 에테르 1 ℓ로 5회 추출하여 색소를 제거하고, 수층을 1-부탄올 500 ㎖로 3회 추출하였다. 이로부터 얻은 총 1-부탄올층을 감압농축하여 1-부탄올 엑기스를 얻고, 이를 소량의 메탄올에 녹인 다음, 대량의 에틸아세테이트에 추가하여, 생성된 침전물을 건조함으로써, 대두 추출물 300 g을 수득하였다.

제2단계. 미생물을 이용한 제니스테인( genistein , 4',5,7- 트리하이드록시 이소플라본)의 제조

상기 (1)에서 수득한 대두 추출물 10 g을 100 ㎖의 이온수에 용해시키고, 121 ℃에서 30분간 멸균하여 30 ℃로 냉각한 후, 미리 배양된 아스퍼질러스 니거(Aspergillus niger, KCCM 11885)를 액체량 대비 5~10 %로 접종하여 30 ℃에서 7일 동안 배양시킨 후, 박층 크로마토그래피로 기질의 소거율을 확인하여 기질이 완전히 소실되면 반응을 종료시켰다. 이 배양액을 5,000 내지 10,000 rpm으로 원심분리하여 회수한 침전물을 증류수로 3회 세척 후 원심분리하여 침전물로써 반응액을 얻은 다음, 상기 침전물에 에탄올(200㎖)을 가해 교반시킨 후(3회), 침전된 염들을 여과를 통해 제거하였다. 그 다음, 여과된 여액을 감압농축하여 조 생성물을 수득하였다. 이후 상기 수득된 조 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(클로로포름: 메탄올 = 8:1 ~ 4:1)로 분리하여 제니스테인 0.12 g을 수득하였다.

[참고예 2]

본 발명의 조성물의 효능을 실험하기 위한 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤은 선행기술(Cha B-J et al., Glycosyl glycerides from hydrophobic Panax ginseng inhibited NO production in LPS-stimulated RAW264.7 cells, Journal of Ginseng Research (2014), doi:10.1016/j.jgr.2014.10.005)에 공지된 방법으로 인삼 추출물로부터 분리하여 사용하였다.

[참고예 3]

참고예 1의 제니스테인 2.70ug과 증류수 5mL를 혼합하여 제니스테인 2μM 표준용액을 6개를 제조하였다. 제조된 2μM 표준용액 중 5개에 대하여 각각 증류수를 15mL, 20mL, 45mL, 95mL 및 995mL를 첨가하여 0.5μM, 0.4μM, 0.2μM, 0.1μM 및 0.01μM 제니스테인 표준용액을 제조하였다.

[참고예 4]

참고예 2의 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 257ug과 증류수 5mL를 혼합하여 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 100μM 표준용액을 3개를 제조하였다. 제조된 100μM 표준용액 중 2개에 대하여 각각 증류수를 45mL 및 495mL를 첨가하여 10μM, 1μM (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 표준용액을 제조하였다.

[시험예 1] 피부 항산화 효과 증가 측정

인간 각질형성세포(Normal Human Epidermal Keratinocyte)는 Lonza 에서 제공하는 NHEK-Neo, Pooled(NeonatalNormal Human Epidermal Keratinocytes, Pooled: 제품번호 00192906)를 사용하였다. 각질형성세포를 24웰 플레이트의 각 웰에 5×10⁴개를 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 16시간 후, 제니스테인을 0.001μM로 처리하였다. 이 때 비교를 위하여 대조군은 제니스테인 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 처리하지 않았다. 2시간 뒤에 배양액을 제거한 후, 각 웰에 100㎕의 인산완충염액(PBS)을 넣었다. 이 각질형성세포에 자외선 B(UVB) 램프(Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki社, Japan)를 이용하여 자외선 30mJ/㎠를 조사한 다음, PBS를 덜어내고 각 웰에 각질형성세포 배양액 200㎕를 첨가하였다. 여기에 제니스테인을 다시 처리하고 일정 시간대별로 자외선 자극에 의해 증가한 활성 산소종의 양을 정량하였다. ROS의 양은 ROS에 의해 산화되는 DCF-DA(dichlorofluorescindiacetate)의 형광을 측정하는 Tan의 방법을 참고하여 정량하였다(Tan et al., 1998, J. Cell Biol. Vol. 141, pp. 1423-1432).

상기의 과정을 제니스테인에 대하여, 2μM, 0.5μM, 0.4μM, 0.2μM, 0.1μM 및 0.01μM로 각각 실시(참고예 3의 표준용액 사용)하였으며, 또한 상기의 과정을 제니스테인 대신 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤에 대하여, 1μM, 10μM 및 100μM으로 각각 실시(참고예 4의 표준용액 사용)하였다. 이러한 결과를 비히클만 처리한 대조군의 ROS에 대한 비율로 산출하여 하기 표 1에 나타내었다.

시험물질	UVB 30 mJ/cm² 조사 후 경과된 시간
시험물질	0hr	2hr	3hr
비히클	100	244	287
UVB + 비히클	100	325	381
UVB + 제니스테인 0.01μM	100	300	340
UVB + 제니스테인 0.1μM	100	296	332
UVB + 제니스테인 0.2μM	100	292	321
UVB + 제니스테인 0.4μM	100	286	316
UVB + 제니스테인 0.5μM	100	283	314
UVB + 제니스테인 2μM	100	279	303
UVB + (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 1μM	100	321	379
UVB + (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 10μM	100	315	358
UVB + (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 100μM	100	304	345

상기 표 1의 결과에서, 제니스테인 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤은 각각 저농도에서도 자외선에 의해 피부 세포 손상을 일으키는 것으로 알려진 ROS의 생성을 억제하지만, 무처리 비히클에 자외선 자극 후 측정된 ROS의 양과 거의 비슷한 수준으로 항산화 효능이 미약함을 알 수 있다.

또한, 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤의 ROS 억제에 관한 시너지 효과를 확인하기 위해 상기 농도별 제니스테인(2μM, 0.5μM, 0.4μM, 0.2μM, 0.1μM 및 0.01μM)에 각각 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 10μM을 더 처리하였을 때의 결과를 표 2에 나타내었다.

	제니스테인 농도	UVB 30 mJ/cm² 조사 후 경과된 시간
	제니스테인 농도	0hr	2hr	3hr
제니스테인 + (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 10μM	0.01μM	100	290	337
	0.1μM	100	279	319
	0.2μM	100	261	302
	0.4μM	100	263	305
	0.5μM	100	274	313
	2μM	100	281	328

상기 표 2로부터, 이소플라본과 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 각각 단독으로 사용하는 경우보다, 혼합하여 사용하였을 때 시너지로 인하여 항산화 효과가 더 우수함을 확인할 수 있었다.

또한, (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 10μM에 대하여 제니스테인을 0.2~0.4μM로 혼합하였을 때 ROS 제거에 대한 시너지 효과가 가장 효과가 좋았던 것으로 나타나, 이소플라본:(2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤의 최적 함량비는 몰농도비 기준 1:25~1:50임을 확인할 수 있었다.

[시험예 2] 피부세포의 콜라겐 생합성 효능 측정

클라보사로부터 입수한 KF-4109 인체 섬유아세포를 10⁴ 개의 농도로 48공 평판배양기에 배양한 후, 하기 표 3의 시험물질 2μM, 0.5μM, 0.4μM, 0.2μM, 0.1μM 및 0.01μM (참조예 3의 표준용액 사용)을 포함한 배지((2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤은 1, 10, 100μM; 참조예 4의 표준용액 사용)로 교체하였다)로 교체하였다. 배양 48시간 후 상등액을 수확해서(harvest) ELISA(Takara MK101) 방법을 사용하여 생성된 프로콜라겐의 양을 정량하였다. 그 결과는 아무것도 처리하지 않은 대조군을 100으로 하여 그 비교치를 하기 표 3에 나타내었다.

	농도	콜라겐 생성량
제니스테인	0.001μM	101.4
	0.01μM	133.8
	0.1μM	154.6
	0.2μM	156.2
	0.4μM	158.4
	0.5μM	160.8
	2μM	156.7
(2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤	1μM	100.9
	10μM	129.7
	100μM	157.6

상기 표 3으로부터, 제니스테인 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤은 각각 저농도에서도 콜라겐 생합성을 증가시키나, 그 효과가 미약함을 알 수 있었다.

또한, 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤의 콜라겐 생합성에 관한 시너지 효과를 확인하기 위해 상기 농도별 제니스테인(2μM, 0.5μM, 0.4μM, 0.2μM, 0.1μM 및 0.01μM)에 각각 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 10μM을 더 처리하였을 때의 결과를 표 4에 나타내었다.

	제니스테인 농도	콜라겐 생성량
제니스테인 + (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 10μM	0.01μM	153.2
	0.1μM	154.1
	0.2μM	168.9
	0.4μM	170.1
	0.5μM	161.5
	2μM	154.0

상기 표 4로부터, 이소플라본과 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 각각 단독으로 사용하는 경우보다 혼합하여 사용하였을 때 시너지로 인하여 콜라겐 생합성 효과가 더 우수함을 확인할 수 있었다.

또한, (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤 10μM에 대하여 제니스테인을 0.2~0.4μM로 혼합하였을 콜라겐 생합성에 대한 시너지 효과가 가장 좋았던 것으로 나타나, 이소플라본:(2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤의 최적 함량비는 몰농도비 기준 1:25~1:50임을 확인할 수 있었다.

[참고예 5] 실시예 1~8 및 비교예 1~6의 제조

하기 표 5의 조성에 따라 통상적인 방법으로 실시예 1~8 및 비교예 1~6의 영양크림을 제조하였다(단위: 중량%).

배합성분 (함량: 중량%)	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4	비교예 1	비교예 2	비교예 3	비교예 4
정제수	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100
제니스테인	0.031	0.026	0.019	0.016	1.5	0.1	-	-
(2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤	1.469	1.474	1.480	1.484	-	-	1.5	0.1
식물성 경화유	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50
스테아린산	0.60	0.60	0.60	0.60	0.60	0.60	0.60	0.60
글리세롤스테아레이트	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00
스테아릴 알코올	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00
폴리글리세릴-10 펜타스테아레이트&베헤닐 알코올&소디움스테아로일락틸에이트	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00
아라키딜베헤닐 알코올&아라키딜글루코사이드	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00
세틸아릴 알코올&세테아릴글루코스사이드	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00	2.00
PEG-100 스테아레이트&글리세롤올레이트&프로필렌글리콜	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50	1.50
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	11.0	11.0	11.0	11.0	11.0	11.0	11.0	11.0
사이클론메티콘	6.0	6.0	6.0	6.0	6.0	6.0	6.0	6.0
방부제, 향	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8	0.8
트리에탄올아민	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1

[시험예 3] 사람에서의 주름 개선 효과

상기 표 5의 비교예 1~4 및 실시예 1~4의 조성으로 제조한 영양크림에 대하여 주름개선효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 측정하였다.

30대 여성 80명을 각각 비교예 1~4 및 실시예 1~4로 10명씩 8조로 나누어 매일 1회 8주간 도포하게 한 후, 실리콘을 이용하여 레플리카를 떠서 주름의 상태를 주름측정기(visiometer, SV600, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)로 측정하여 화상분석하였다. 그 결과는 도포 8주 후의 각각의 파라미터 값에서 도포 전 파라미터 값을 뺀 것의 평균을 산출하여 하기 표 6에 나타내었다.

사용8주 후 임상결과	R1	R2	R3	R4	R5
실시예1	-0.35	-0.33	-0.31	-0.04	-0.03
실시예2	-0.40	-0.37	-0.36	-0.06	-0.03
실시예3	-0.35	-0.34	-0.33	-0.07	-0.04
실시예4	-0.31	-0.31	-0.28	-0.05	-0.03
비교예1	-0.29	-0.27	-0.22	-0.06	-0.03
비교예2	-0.19	-0.18	-0.14	-0.05	-0.06
비교예3	-0.25	-0.24	-0.18	-0.02	-0.04
비교예4	-0.20	-0.17	-0.16	-0.07	-0.05
* R1 : 주름 등고선의 최고치와 최저치의 차이값 R2 : 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값들의 평균 R3 : 5개씩 나눈 R1값 중 최고치 R4 : 주름 등고선의 베이스라인(baseline)에서 각 각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값 R5 : 주름 등고선의 베이스라인(baseline)에서 각 각의 주름 윤곽을 뺀 값의 차이 값

상기 표 6에서와 같이, 이소플라본 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 일정성분비로 함유하여 제조한 실시예 1 내지 실시예 4의 피부 외용제 조성물의 피부 주름 개선 효과가 우수함을 알 수 있었다.

[시험예 4] 인체에서 피부 탄력 개선 측정

상기 표 5의 조성으로 제조한 영양 크림의 피부 탄력 개선 효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 측정하였다.

30대 건강한 여성 80명을 실시예 1~8 및 비교예 1~6으로 각각 10명씩 8조로 나누어, 각 조에 상기 비교예 1~4 및 실시예 1~4의 영양크림을 온도 24-26℃, 습도 75% 조건에서 매일 2회씩 12주간 안면에 도포한 후 피부탄력측정기 Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다. 그 결과는 표 7에 나타내었다. 표 7의 결과치는 피부탄력측정기 Cutometer SEM 575)의 △R8 값으로 기재하였는데, R8값은 피부 점탄성(viscoelasticity) 의 성질을 나타낸다.

이와 별도로 시험을 종료한 시점에 시험 대상자들로 하여금 설문지를 작성하게 하여 기기적인 평가와 동시에 주관적인 효능 평가도 실시하였다. 그 결과는 하기 표 8에 나타내었다.

도포군	피부 탄력 효과
실시예1	0.38
실시예2	0.42
실시예3	0.41
실시예4	0.39
비교예1	0.23
비교예2	0.20
비교예3	0.25
비교예4	0.21

도포군	응답자 수(인)
도포군	매우 양호	양호	보통	미흡
실시예1	3	5	1	1
실시예2	4	4	1	1
실시예3	4	3	2	1
실시예4	4	3	3	0
비교예1	2	3	4	1
비교예2	1	2	4	3
비교예3	2	2	4	2
비교예4	1	1	5	3

상기 표 7에 나타난 바와 같이, 저농도 제니스테인 및 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 함유한 실시예 1~4의 조성물을 도포한 군에서는 비교예를 도포한 군에 비해서 피부탄력성이 더 증가되었다.

한편, 표 8에 나타난 바와 같이, 설문조사를 통해서도 본 발명에 의한 조성물인 실시예 1~4를 도포한 경우 피부 탄력성이 개선됨을 확인할 수 있었다.

Claims

이소플라본 및 하기 화학식 1로 표시되는 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물로서,
상기 이소플라본을 조성물 총 중량에 대하여 0.01~0.1 중량%로 함유하고, 상기 (2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤을 조성물 총 중량에 대하여 1.0~10.0 중량%로 함유하며,
상기 이소플라본:(2S)-1-O-리놀레노일-3-O-β-D-갈락토피라노실-sn-글리세롤의 함량비는 몰농도비로 1:25~1:50인 것을 특징으로 하는 항노화용 피부 외용제 조성물.
[화학식 1]
제1항에 있어서, 상기 이소플라본은 제니스틴(genistin), 다이드진(daidzin), 그리시틴(glycitin), 제니스테인(genistein), 다이드제인(daidzein), 및 그리시테인(glycitein)으로 구성되는 군에서 선택되는 1종 이상임을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 항산화용임을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 콜라겐 합성 촉진용임을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 탄력 개선용임을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 주름 개선용임을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일 및 바디에센스로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.