KR100444485B1 - 살충성 매트릭스 및 그 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 살충 박테리아 및 바이러스, 예를 들면 비. 투린지엔시스 결정 단백질 또는 포자 또는 이들의 혼합물 및 바큘로바이러스, 예를 들어 핵 다각체병 바이러스, 과립병 바이러스 및 비-차단 바이러스중에서 선택된 활성 살충 성분; 중합체; 및 무기 광-차단제를 포함하는 신규 생물학적 살충 조성물에 관한 것으로서, 상기 광-차단제는 활성성분을 자외선과 햇빛 차단제로부터 보호하며 중합체는 활성성분 및 광-차단제가 분산되어 있는 매트릭스를 형성한다. 생물학적 살충 조성물의 제조 방법 및 해충의 구제방법도 또한 본 발명의 영역내에 포함된다.

Description

살충성 매트릭스 및 이의 제조 방법

본 발명은 살충 박테리아 및 바이러스, 예를 들면 비. 투린지엔시스(B. thuringiensis) 결정 단백질 또는 포자 또는 이들의 혼합물 및 바큘로바이러스, 예를 들어 핵 다각체병 바이러스, 과립병 바이러스 및 비-차단 바이러스중에서 선택된 활성 살충 성분; 중합체; 및 무기 광-차단제를 포함하는 신규 생물학적 살충 조성물; 생물학적 살충 조성물의 제조방법;및 해충의 구제방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

독성의 부작용 또는 일부 화학적 살충제의 특이성의 결여와 관련된 연구 결과, 특히 살충성 박테리아 및 바이러스를 가진 생물학적 살충제를 개발하기에 이르렀다. 통상적으로 바실러스 투린지엔시스(Bacillus thuringiensis) 종은 모든 살충성 생물학적 구제제중 가장 성공적인 것이며, 비. 투린지엔시스 변종은 화학적 구제제에서와 동일한 방식으로 살충제로서 사용된다. 자연 발생적 바실러스중에서도 단백질 독소는 폴리펩티드 결정 독소이다. 이들은 레피도프테라 충(특히, 비. 투린지엔시스변종 쿠르스타키(kurstaki) 및 비. 투린지엔시스 변종 아이자와이(aizawai)); 콜레오프테라 충(특히, 비. 투린지엔시스 변종 테네브리오니스(tenebrionis)); 및 디프테라 충(특히, 비. 투린지엔시스 변종 이스라엘렌시스(israelensis))을 비롯한 다수종의 해충에 대해 활성을 띤다. 또한, 바이러스, 구체적으로 헬리오티스 에스피피(Heliothis spp)에 대해 효과적인 헬리오티스 핵 다각체병 바이러스(NPV) 및 알파파 및 트리코플러시아 니(Trichoplusia ni)에 대해 효과적인 오토그라파 캘리포니카(Autographa californica) 핵 다각체병 바이러스(NPV)와 같은 바큘로바이러스(baculoviruses)도 살충제에 사용되었었다.

생물학적 살충제는 통상적으로 화학적 살충제와 유사하게 제조되며 대개는 기존의 분사기 기법을 통해 살포된다. 이들 제제는 병원체 충(NPV와 같은 바이러스 또는 비. 투린지엔시스와 같은 박테리아), 포자 및/또는 결정형 델타 내독소로 구성될 수 있다. 그러나, 이들 제제는 당 분야에 사용될 경우 여러 단점을 갖는다. 생물학적 살충제를 햇빛 및 자외선에 노출시키면, 내독소를 포함한 폴리펩티드가 불활성화될 수 있으며, 이와 같은 노출은 포자의 핵산을 손상시켜 살충제의 효과를 저하시킨다. 이는 이그노포외 다수의 문헌 [Envirom. Entomol.. 6:411-415(1977)]를 참고로 한다. 이와 같이 계제의 효능이 저하되면, 해충의 구제가 요구되는 서식지의 감수성 식물에 대해 반복적으로 다순회 살포해야 한다. 이들 생물학적 살층계.

특히 바실러스 생물학적 살충제의 또다른 단점은, 소량의 투여시 영양-억제적(feeding-inhibitory)이긴 하나, 치사적이지는 않다는 점이다. 치사량 이하의, 영양-억제적 투여량을 섭취한 해충은 일정 시간 내지 수일 이하동안 영양을 중지한다. 이 특성은, 햇빛에 의해 생물학적 살충제가 불활성화 되면서 해충이 영양을 중지하는 경우, 타겟 해충의 구제력이 약해질 수 있다.

살충 박테리아 및 바이러스가 광 차단제와 함께 제제중에 함유된 살충 제제를 제공함으로써 햇빛에 대한 불안정성 문제를 해소하고자 하는 시도를 해왔다. 이들 제제에는 각각 캡슐화된 활성 독소와 불활성화된 것이 있으나, 이들은 모두 다수의 단점을 제공한다. 이들 단점은 각 제제에 있어서 특이적이다. 그러나, 캡슐화된 혼합물과 관련된 통상적인 단점의 예는, 캡슐 벽을 형성하는 중합체가 캡슐 내부에 항상 광 차단제를 보유할 수 있는 것이 아닌 점; 일부 경우 상당한 독성 물질이 캡슐제제중에 사용되는 점; 일부 캡슐은, 광 차단제의 임의의 실제 배리어로 작용하기 에 충분히 큰 입자를 제공할 수 없는 공정을 통해서만 제조되는 점(2-상 액체 에멀젼으로 형성된 것과 같은 극소형의 입자는 그 내부 전체에 걸쳐 거의 균일한 햇빛을 받는다); 캡슐 코팅이 환경에서 분해되기 쉬운 점이 있다.

비-캡슐화 혼합물과 관련된 단점은, 분사 장치를 통해 농작물 또는 타겟 위치에 살포한 후 대부분의 햇빛-차단제는 대개 유기체 또는 독소에 효과적일 정도로 충분히 접근하지 않는다는 점이며; 캡슐화된 혼합물도 또한 상기 단점을 가짐에 따라, 해충이 이 혼합물을 치사량-이하의 영양-억제적 투여량으로 섭취했음에도 불구하고, 일정시간 후에는 다시 정상의 식사량으로 회복된다.

본 발명은 종래 기술의 조성물 및 제제의 단점을 해소한 것이다. 활성 단백질 독소는 중합체 매트릭스내에 캡슐화되거나 또는 장입되고, 입자들은 타겟 해충에 치사량인 투여량을 포함할 정도로 충분히 크다. 캡슐화 공정은, 활성 독소 또는 성분을 포함하는 대다수의 포자 및/또는 결정이 캡슐화되고, 소량의 포자 및 결정은 캡슐화 되지 않은 상태로 남도록 효과적으로 이루어 진다. 본 발명의 조성물의 성분 물질 및 공정은 생물학적 살충제의 활성 성분을 불활성화 시키거나 또는 나머지 독물학적 문제점을 남기지 않는다. 캡슐화된 입자는, 타겟 부위에 살포하는 동안 안정하며 환경중에서도 안정하다. 활성 성분은, 이를 섭취한 감수성 해충의 장내에 방출된다. 이 조성물은 거의 비-독성인 광-차단제를 함유하며, 이 차단제는 타겟 부위에 살포하는 동안 및 그 이후에도 조성물 매트릭스 내부에 잔재한다.

<발명의 요약>

생물학적 살충 효과 조성물. 및 상기 조성물의 제조방법은 해충으로부터 타겟 부위를 보호하기 위해 제공된다. 생물학적 살충제는, 활성 성분, 살충 박테리아 또는 바이러스, 예를 들면 바실러스 투린지엔시스 또는 바큘로바이러스중의 포자 또는 살충 결정 단백질 또는 이들의 혼합물과 중합체 및 무기 광-차단제를 혼합함으로써 제조하는데, 이때 중합체는 무기 광-차단제와 함께 활성성분용 매트릭스를 형성한다.

따라서, 본 발명의 제 1 특징은 다음 (a) 내지 (c)를 포함하는 생물학적 살충 효과 조성물을 제공하는 것이다:

(a) 살충 박테리아 및 바이러스 군중에서 선택된 활성 성분;

(b) 수성 매질중에서 중성 내지 알칼리성 조건하에는 가용성이며, 약산성 조건하에는 불용성인 중합체(이 중합체는 매트릭스를 형성함); 및

(c) 무기 광-차단제로서, 이 차단제는 수-불용성이며 중합체(b)에 의해 형성된 매트릭스내에서 활성성분과 함께 분산되고, 활성성분이 자외선 및 햇빛에 의해 불활성화되는 것을 방지한다.

바람직한 실시태양에서, 박테리아는 바실러스 에스피피이고 바이러스는 바큘로바이러스이다.

이렇게 제조된 조성물은 수성, 건조 또는 비-수성의 최종 제품으로 제제화될 수 있다.

제 2 특징에서, 본 발명은 하기 (a) 내지 (f) 단계를 포함하는 생물학적 살충 효과 조성물의 제조방법에 관한 것이다:

(a) 중합체 용액을 제조하는 단계로서, 상기 중합체는 수성 매질중에서 중성 내지 알칼리성 조건하에서는 가용성이며 약산성 조건하에서는 불용성인 단계;

(b) 무기 광 차단제의 분산액을 제조하는 단계;

(c) 박테리아 및 바큘로바이러스로 구성된 군중에서 선택된 살충 성분의 현탁액 배양물을 제공하는 단계;

(d) 휘발성 염기 용액을 제조한 후 단계(c)의 현탁액 배양액과 상기 용액을 혼합하는 단계;

(e) 광 차단제의 분산액과 중합체 용액을 혼합하여 제 2 분산액을 제공한 후 제 2 분산액을 활성 성분 현탁액 및 휘발성 염기 용액과 혼합하는 단계;

(f) 단계(e)의 혼합물을 분사 건조시키는 단계로서, 상기 활성성분 및 광 차단제는 중합체로 형성된 매트릭스중에 분산된다.

본 발명의 또다른 실시태양에는 하기 (a) 내지 (d)단계를 포함하는 생물학적 살충효과 조성물의 제조방법도 포함된다:

(a) 바실러스 투린지엔시스 살충 단백질 또는 포자 또는 이들의 혼합물 또는 바큘로바이러스를 비롯한 활성성분의 현탁액 배양물을 제공한 후 이 현탁액과 무기 광-차단제를 혼합하는 단계;

(b) 중합체 용액을 제조하는 단계로서, 상기 중합체는 수성 매질중에서 중성 내지 알칼리성 조건하에서는 가용성이고 약산성 조건하에서는 불용성이며, 또한 상기 중합체는 조성물의 약 3 내지 10%를 구성하는 카르복시 폴리아크릴산 또는 스티렌-무수 말레산인 단계;

(c) (a)의 혼합물과 (b)의 용액을 혼합하여 현탁액을 제조하는 단계; 및

(d) 현탁액을 분사 건조시키는 단계로서, 이때 활성 성분 및 광 차단제는 중합체로 형성된 매트릭스중에 분산되는 단계.

또다른 특징으로서, 본 발명은 살충 효과량의 상기 개시된 조성물을 구제가 요하는 지점에 살포하여 상기 지점의 해충을 구제하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 상기 방법 및 이를 통해 제조된 조성물 모두에 관한 것이다.

<발명의 상세한 설명>

본 발명의 생물학적 살충 조성물은 3개의 주성분, 즉 활성 살충 성분; 무기 광-차단제; 및 조성물용 매트릭스를 형성하는 중합체 성분으로 구성된다.

바람직한 실시태양에서, 활성성분은 비. 투린지엔시스, 비. 포필라(B.popillae), 비. 스파에리쿠스(B. sphaericus), 이중에서도 특히 비. 투린지엔시스와 같은 살충적 바실러스 에스피피로부터 취한다. 자연 발생적이거나 또는 재조합 DNA 기법을 통해 작제된 임의의 비. 투린지엔시스 아종으로부터 분리될 수 있는 살충적 결정 단백질이 특히 바람직하다.

비. 투린지엔시스의 분류는 생화학적 및 혈청학적 기준에 근거한다. 이들 분류는 특이적 표현형 특성을 가진 아종 또는 변종에 상응한다. 비. 투린지엔시스의 아종으로는 투린지엔시스, 쿠르스타키, 소토(sotto), 덴드롤리무스(dendrolimus), 엔토모시두스(entomocidus), 아이자와이, 모리소니(morrisoni), 톨워티(tolworthi), 이스라엘렌시스, 및 에이치. 드 바리야크 및 이. 프라숀의 문헌 [Classification of B. thuringiensis strains, Entomophaga, 35:233(1990)]에 개시된 기타의 것들이 있다. 아포화 과정동안, 비. 투린지엔시스는 결정형으로 유기체화된 다량의 하나 또는 그 이상의 살충 단백질을 합성한다. 포자가 성숙함에 따라 상기 결정은 환경중에 방출된다. 유전자를 암호화하는 결정 단백질은 잘 공지되어 있으며 cry 유전자로서 칭해진다. 각종 cry 유전자는 분리되었으며, 이들 유전자에 의해 암호화된 단백질은 해충의 특이성 면에서 서로 다른 것으로 판별되었다. 시판되는 우수한 비. 투린지엔시스 종은 4 또는 그 이상의 결정 단백질을 표현할 수 있으며, 이러한 점에서 비. 투린지엔시스로부터 분리된 결정 단백질은 하나이상의 결정형 독소 단백질을 포함할 수 있다.

본 발명은 본문에 참고 인용된 티. 야마모토 및 지. 파웰의 문헌 [Advanced Engineered Pesticides (레오 김 저술), 1993]중의 표 1에 나열 및 개시된 것과 같은 다양한 유전자에 의해 암호화된 임의의 비 투린지엔시스 결정형 단백질을 포함할 수 있다. 본 발명은 또한 처리된 활성 독소를 포함한다. 예를 들어 보통 레피도프데라에 대한 높은 활성을 가진 비. 투린지엔시스 쿠르스타키 변종을 처리하면 콜레오프테라-활성 cry IlIA 유전자를 형질 발현시킬 수 있다. 임의의 바실러스 활성 독소는 본 발명에 사용할 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 그러나, 어떤 방식으로든 본 발명을 제한하려는 것은 아니나, 바람직한 독소 단백질로는 CryIA, CryIB, CryIC, CryID, CryIE, CryIF, CryIG, CryII, CryIII, CryIV, CryIH, CryV, CtyA, CtyB 및 임의의 변종, 이들의 혼합물 또는 단편이 있다. 특히 바람직한 독소로는 CryIC, CryIA(a), CryIA(b), CryIA(c), CryIE, CryIIA 및 이들의 변종, 혼합물 및 단편이 있다.

재조합 기술은 당업자에게는 잘 공지되어 있으며, 이것들로는 독소 단백질, 특히 바실러스 변종의 수를 증가시키는 결합 및 전자주입법 및 단백질 디자인을 사용하여 유전자 표현 융합 또는 혼성 단백질을 형성하는 방법이 있다. 혼성 유전자의 예는, 다른 Cry 단백질. 구체적으로 CryIE 및 CryIC의 단편을 포함하는 G27이다. 이 단백질은 또한 본문에 참고 인용된 보쉬외 다수의 문헌 [Biotechnology 12: 915-918 (1994)]에 기재되어 있다. 당업자는 다른 혼성 유전자를 알고 있으며, 상기 예는 어떤 방식으로든 본 발명을 제한하고자 하는 것이 아니다.

다양한 비. 투린지엔시스 변종에 의해 제조된 살충 결정형 단백질 이외에도, 상기 변종에 의해 제조된 포자도 또한 살충 특성을 가질 수 있다. 예를 들어, 일부 포자는 갈레리아 멜로넬라(Galleria mellonella)와 같은 해충에 대해 효과적인 것으로 공지되어 있다.

또다른 바람직한 실시태양에서, 활성 성분은 바큘로바이러스이다. 바큘로바이러스는 3개의 아군, 즉 핵 다각체병 바이러스(NPV); 과립병 바이러스(GV) 및 폴리드르나비르데(polydrnavirdae)로 나뉘는 거대한 바이러스 군이다.

바큘로바이러스의 잇점중 하나는 이들의 숙주 특이성이다. 가장 널리 특징화된 바큘로바이러스는 오토그라파 캘리포니카 핵 다각체병 바이러스(NPV)이다. 이 바이러스는 감염된 숙주 세포의 핵중에 바이러스 차단체를 형성하는 것을 특징으로 한다. 차단체의 크기는 각 아군에 따라 다르다. 차단체는 결정형 단백질 구조체로서, 여기에는 비리온이 삽입된다.

본 발명에서 바람직한 바큘로바이러스는 오토그라파 캘리포니카 NPV, 헬리오티스제아 NPV, 스포도프테라 엑시구아(Spodoptera exigua) NPV, 및 아난그라파 팔시페라(Anangrapha falcifera) NPV 변종이다. 바실러스 투린지엔시스에 대해 상기 언급된 바와 같이 바큘로바이러스의 재조합 변종도 또한 본 발명의 영역내에 포함된다. 바큘로바이러스에 대해서는 문헌 [Biology of Baculoviruses, I 및 II권, 그라나도스 및 페드릭 저술, CRC 출판, 보카 라톤, FL 1986]을 참고한다.

살충 활성 성분은 조성물의 약 10 내지 약 90중량%, 바람직하게는 약 30 내지 약 80중량%, 가장 바람직하게는 약 45 내지 75중량%를 구성할 것이다.

중합체는 통상적으로 직쇄 또는 측의 패턴 또는 이들의 조합 패턴으로 단량체 분자의 화학적 다중 결합을 통해 형성된 분자로서 정의된다. 중합체는 단일종의 단량체로부터 독점적으로 형성될 수 있거나, 또는 2 또는 그 이상의 단량체류를 사용할 수도 있다. 본 발명에서, 바람직한 중합체는 폴리비닐 아세테이트; 폴리(아크릴산) 또는 에스테르 또는 이의 카르복시 유도체; 쉘락; 및 스티렌과 무수 말레산의 공중합체 및 이의 유도체; 및 이들의 혼합물이다. 특히 바람직한 것은 고분자량의 중합체 및 공중합체이며, 가장 바람직한 것은 스티렌/무수 말레산 공중합체 및 카르복시 폴리아크릴산이다.

조성물의 매트릭스를 형성하는 중합체는 다음의 통상적인 특징으로 정의된다. 중합체는 광 차단제를 보유할 수 있어야 한다. 이 중합체는 처리된 식충이 노출되는 환경에서는 불용성이되, 단 통상적으로 알칼리성인 해충 서식지 환경에서는 가용성이어야 한다. 또한 이 중합체는, 담체가 액체인 경우 제제의 담체중에서 용해되지 않아야 한다. 이 중합체는 또한 분사 탱크 및 분사 시설중에 담체로서 사용된 물에 거의 불용성이어야 한다. 중합체로 형성된 매트릭스는, 처리 및 취급동안 조성물 또는 최종 생성물 제제가 받는 마모 및 기계적 힘을 견딜 정도로 충분히 비-취약성을 가져야 한다.

중합체 용액의 pH는 약 3.5 내지 약 9.0, 바람직하게는 약 5.0 내지 약 8.0, 가장 바람직하게는 5.5 내지 7.0이어야 한다.

중성 내지 알칼리성 조건은 약 pH 6.0 내지 약 pH 11.5, 바람직하게는 약 pH 6.5 내지 약 11.0 이어야 한다. 약산성 조건은 약 pH 6.0 내지 약 pH 4.0, 바람직하게는 pH 5.5 내지 약 pH 4.0으로 정의된다. 수성 매질은 물이 용매인 것이다.

통상적으로 중합체는 조성물의 약 0.5 내지 약 25중량%, 바람직하게는 약 1 내지 약 15중량%, 가장 바람직하게는 약 3 내지 10중량%를 구성할 것이다.

본 발명의 조성물에 사용된 무기 광 차단제는 자외선과 햇빛을 모두 차단하는 것이며, 이것에는 광-흡수제와 광-반사제가 모두 포함될 수 있다. 광-차단제는 중합체 물질 및 활성 살충 성분과 혼화성을 띠어야 하며, 조성물이 감수성 해충에 의해 섭취되기 전에 처해지는 임의의 환경에서는 불용성이어야 한다.

통상적으로 자외선에 대한 생물학적 살충제의 안정성이 햇빛에 대한 안정성의 좋은 지침자가 되는 것은 아니다. 일부 광-차단제는 수은 증기 램프에 의해 발생되는 자외선하에서는 양호하게 작용할 수 있으나, 태양 광선에 대해서는 보호 기능을 하지 못한다. 또한 유용하면서도 실용적이려면, 광-차단제는 제제중에 실용적으로 함유될 수 있는 양에서 작용하여야 한다. 자외선 또는 햇빛을 강하게 흡수하지 않는 물질은 통상적으로 상당히 다량으로 사용하여야 하므로, 햇빛 또는 자외선에 대한 실제의 보호 기능을 제공하려면 그러한 물질을 주성분으로 하는 임의의 입자가 통상적으로 커야 한다. 통상적으로, 물에 불용성인 점토. 금속 산화물, 및 무기 광물 및 염료를 본 발명의 광-차단제로서 사용할 수 있다. 2개의 특이적 광-차단제 류가 본 발명에 특히 유용하며, 이들로는 이산화 티탄, 광 반사제 및 카본 블랙, 광 흡수제가 있다. 또한, 멜라닌 및 세균 로돕신을 광-차단제로서 사용할 수도 있다. 이들 제제의 혼합물은 본 발명의 조성물에 함유시킬 수도 있다.

광-차단제는 조성물의 약 5내지 약 90중량%. 바람직하게는 약 5내지 약 60중량%, 가장 바람직하게는 약 10 내지 약 50중량%를 구성한다.

본 발명의 특히 바람직한 조성물은 약 30 내지 약 80중량%의 활성성분, 약 1 내지 약 15중량%의 중합체 및 약 5 내지 약 60중량%의 무기 광-차단제를 포함한다. 퍼센테이지는 조성물의 중량을 기준으로 한다.

본원에 사용된 "매트릭스"는, 본 발명의 중합체 분자로 구성되며 조성물의 나머지 성분들에 의해 점유된 공허, 공극 또는 공간을 포함하는 연속의 고형상을 의미하는 것이다. 약 60중량% 이상의 활성성분, 바람직하게는 60중량%가 중합체 매트릭스내에 보유되어야 한다. 본원에 사용된 용어 "분산된"은 광 차단제 또는 활성성분의 개별 입자들이 거의 균일하게 분산되도록 매우 잘 혼합되는 것을 의미한다. 이들은 본원에 기재된 바와 같이 물 또는 중합체 용액중에 분포할 수 있다. 또한, 현탁액중의 입자들은 그 자체적으로는 소립자들의 큰 응집체를 형성하지 못한다. 이러한 목적상, 큰 응집체는 약 5 이상 내지 약 30미크론의 직경, 바람직하게는 약 5 내지 약 20미크론의 직경을 가진 것으로 간주된다.

바람직한 실시태양에서, 조성물은 바실러스 투린지엔시스로부터의 포자 및 결정형 단백질중에서 선택된 활성 살충 성분, 카르복시 폴리아크릴산 중합체 또는 스티렌-무수 말레산 공중합체 또는 이들의 혼합물 및 광-차단제인 카본 블럭을 포함한다.

활성 성분은 자연 발생적 비. 투린지엔시스 균주 또는 비. 투린지엔시스의 재조합 균주중에서 취할 수 있으며, 이때 외인성 결정 암호화 독소 유전자는 형질 발현된다. 또다른 바람직한 실시태양은 비. 투린지엔시스 변종 쿠르스타키중에서 선택된 활성성분을 포함한다. 또다른 실시태양은 바실러스 투린지엔시스 변종 아이자와이의 변종중에서 선택된 활성성분을 포함한다. 또다른 실시태양은 CryIC, CryIA(a), CryIA(b), CryIIA, CryIA(c) 및 이들의 단편과 혼성 단백질을 비롯한 이들의 혼합물로 구성된 군중에서 선택된 활성 독소를 포함한다.

본 발명의 생물학적 살충 조성물은 다음의 일반적인 방법을 통해 제조할 수 있다. 비. 투린지엔시스의 살충 성분은 당업계에 잘 공지된 방법을 통해 입수할 수 있으나, 통상적으로 조성물에 사용될 단백질 및 포자는 발효 제조 공정동안 제조될 것이다. 발효 공정은 잘 공지되어 있으며, 본문에 참고 인용된 엔트비슬외 다수의 문헌 [Bacillus thuringiensis, an Environmental Biopesticide, 윌리 앤드 선즈(1993)]에서 버나드 및 우츠에 의해 발표되었다. 해당 유전자를 보유한 바실러스 투린지엔시스 변종은 활성 독소로서 형질 발현되고, 통상적으로 질소원, 카르보히드레이트 원, 및 무기 염을 포함하는 적합한 자양 매질중에서의 발효 공정을 통해 재생되거나 또는 증식된후 약 pH 7.0의 적절한 pH로 적정된다. 그러한 발효 공정은 약 20℃ 내지 약 40℃의 온도에서 24 내지 72시간동안 수행하는 것이 용이하다. 비. 투린지엔시스 변종의 현탁액 농축물은, 발효액을 원하는 농도까지 증발시키거나 원심분리 시킴으로써 수득할 수 있다.

바실러스 투린지엔시스 현탁액은 통상적으로 약 2 내지 10중량%의 결정형 살충 단백질 및 유사량의 포자를 포함한다. 비. 투린지엔시스 현탁액에는 다른 첨가제, 예를 들면 수산화 암모늄과 같은 휘발성 염기 및 황산과 같은 비-휘발성 산이 있을 수 있다. 바람직한 실시태양에서는, 황산 암모늄 용액을 제조한 후 활성 성분 현탁액과 혼합한다.

본 발명의 바큘로바이러스 성분은 당업계에 잘 공지된 기법을 통해 증식될 수 있으며, 이는 앤더슨외 다수의 문헌 [Proc.IV IFS: Ferment. Technol. Today, 623-628, 1972] 및 챠크라보티, 에스.외 다수의 문헌 [Australas. Biotechnol., 5(2), 82-86, 1995]를 참고하는데, 이 두 문헌은 모두 본문에 참고 인용한다.

통상적으로 한 방법은 특정의 바큘로바이러스에 민감한 해충의 유충을 키운 후 이 유충을 바큘로바이러스 접종물로 감염시키는 단계를 포함한다. 바큘로바이러스 감염이 과정대로 이루어진 후에는, 감염 유충 사체를 균질화 한다. 제 2의 통상적인 방법에서는, 해충의 세포를 자양 배지중의 세포 배양 용기내에서 증식시킨다. 이 용기는 바큘로바이러스의 접종물로 접종한다. 바큘로바이러스 감염이 과정대로 진행되면, 용기의 내용물을 수거한 후 원심분리 또는 여과를 통해 바큘로바이러스를 회수한다.

중합체 용액은, 중합체를 물에 약 0.5 내지 약 20중량%의 농도로 넣고, 온도를 약 60℃ 내지 약 80℃, 바람직하게는 약 70℃로 상승시키고, 부드럽게 진탕한 후 수성염기, 바람직하게는 수산화 암모늄 또는 수산화 나트륨을 최종 pH가 약 5.5 내지 약 8.0, 바람직하게는 약 7 내지 약 8이 될 정도의 시간에 걸쳐 첨가함으로써 제조한다. 이 혼합물은 이어서 수시간 또는 하룻밤동안 교반함으로써 중합체를 완전히 용해시킨다. 모든 혼합물 및 분산액은 고 전단-강도 혼합기를 사용하여 제조하면 바람직하다.

pH 조건은 적당량의 휘발성 염기, 예를 들면 수성 암모니아, 및 비-휘발성 산, 예를 들면 황산과 중합체 용액을 혼합하는 것을 비롯한 다양한 수단을 통해 이룰 수 있다. 조건의 선택은 분사 건조이전에 용액중에 중합체가 남아 있을 필요 여부 및 분사 과정동안 충분량의 휘발성 염기가 증발될 필요 여부에 따라 좌우된다. 분사 건조시킬 현탁액중의 적당량의 비-휘발성 산 및 휘발성 염기를 혼합하면, 중합체 매트릭스중의 활성 성분 및 광-차단제의 생성된 입자는, 물중에 재-현탁되는 경우 예비-분사 현탁액의 pH보다 pH 단위가 약 0.5 내지 약 2.5 낮은, 바람직하게는 약 1.0가 낮은 pH를 가진다. 산출된 pH는 중합체가 용이하게 용해되기에는 너무 강한 산성을 지니므로 물에 현탁시키면 입자상에 물리적 안정성을 부여한다.

현탁액에는 다른 첨가제, 예를 들면 중합체가 이가 양이온, 예를 들어 EDTA의 존재하에 가교 결합 및 침전화를 진행시키는 경향을 완화시키는 화합물을 첨가할 수 있다.

중합체 용액중의 무기 광-차단제 분산액은, 물을 중합체 용액, 임의로는 리그노설페이트와 같은 분산제에 첨가함으로써 제조한다. 분산제는 당업계에 잘 공지되어 있다. 광-차단제는 이어서 혼합물에 첨가한 후 바람직하게는 고-전단 믹서를 사용하여 혼합한다.

생성된 혼합물은 분사 건조하여, 대부분의 수분 및 휘발성 염기를 증발시킨다. 분사 건조기는 통상적인 방식으로 작동시킴으로써 직경 크기가 1 내지 50미크론인 입자를 제조하는데, 이때 바람직한 중간 크기(평균 부피)는 약 10 내지 40미크론이다. 또한, 입자 크기 분포는 입자의 60% 이상, 보다 바람직하게는 입자의 80%가 중간 직경에 가까운 크기를 갖도록 비교적 좁게 한다.

본 발명의 조성물은 다른 통상의 제제 및 첨가제를 포함할 수 있음을 강조하여야 한다. 그러한 제제로는 계면활성제, 예를 들면 옥틸페놀 에톡실레이트; 안정화제. 예를 들면 프로피온산; 충전제, 예를 들면 탈지된 두분; 유동제 또는 항-케이킹제, 예를 들면 합성 침전된 실리카; 분산제, 예를 들면 축합된 나프탈렌 설폰산의 나트륨 염등이 있으나, 이들에 국한되는 것은 아니다. 계면활성제의 양은 다양하게 조절될 수 있다. 편이상, 그러한 제제는 조성물의 약 0.1 내지 약 50중량%, 보다 바람직하게는 약 0.5 내지 약 40중량%, 가장 바람직하게는 1 내지 약 20중량%를 구성할 수 있다.

본 발명의 조성물은 또한 제제화될 수 있으며, 당업자는 제제화된 생물학적 살충제품의 다수의 제조방법을 알고 있다. 이들 방법들은 기술 및 특허 문헌에 기재되어 있으며, 이것들로는 과립, 습윤성 분말, 수성 및 유성의 유동성 농축물 등의 제조방법이 있다. 다음의 예는 어떤 방식으로든지 본 발명을 국한시키고자 하는 것이 아니며 설명을 위해 제시한 것이다.

A. 습윤성 분말 제제 : 63%의 활성 성분, 10%의 유동화제(침전화된 실리카), 4%의 계면활성제(나프탈렌 설포네이트), 13%의 분산제(알킬아릴폴리옥시 아세테이트), 7%의 담체(아타풀가이트 점토), 및 3%의 분리제(EDTA).

B. 과립 : 63%의 살충 성분, 20%의 유동화제(침전화된 실리카). 3%의 계면활성제(선형 알킬 벤젠 설포네이트), 5%의 분산제(음이온 계면활성제와 나트륨 리그노설포네이트의 배합물) 및 9%의 담체(카올린 점토).

활성 살충 성분 및 임의의 부가의 제제를 함유한 본 발명의 조성물은 구제가 요하는 지점에서, 살충 효과량의 조성물을 상기 지점에 살포함으로써 해충을 구제하는 방법에 사용할 수 있으며, 상기 지점으로는 농작물 재배지 또는 해충 서식지를 들 수 있으나, 이들에 국한되는 것은 아니다. 레피도프테라, 디프테라 및 콜레오프테라 해충의 잠재적인 서식지인 타겟 지점으로는 밀, 옥수수, 쌀 및 보리와 같은 곡물; 면; 콩과 식물; 해바라기와 같은 오일 식물; 채소 작물; 낙엽수 및 침엽수; 난 및 덩쿨 작물; 및 생수체가 있으나 이들에 국한되는 것은 아니다. 살충 효과량은 구제할 해충의 실제적 치사를 유도하는 활성 성분의 양이다.

상기 제제는 물-분산성이며 살포되기 전에 물로 희석시킬 수 있다. 각 경우의 적당한 농도, 희석도 및 적절한 시기 및 살포 방법은 구제할 병원균의 성질 및 처리할 식물의 종류에 따라 좌우되며 당업자라면 쉽게 알 수 있을 것이다.

다음의 실시예는 본 발명의 구체적인 실시태양을 보다 상세히 설명하는 것이다. 당업자들은 알 수 있듯이, 이들 실시예는 설명을 위한 것이며 제한하기 위해 제시한 것은 아니다. 또한 각 실시예 1 A 내지 D에서는, 전술된 성분 또는 이들의 부수-변형 성분을 사용하여 10개 이상의 복제 조성물을 제조하였다.

실시예 1 : 살충 조성물

A. 카본 블랙 및 카르복시 폴리아크릴산:

89g의 물을 70℃로 가열한 후 부드럽게 교반하면서 10g의 카르복시폴리아크릴산(Carboset 525, 비에프 굿리치 제공)을 첨가했다. 이어서, 4시간에 걸쳐 동일한 간격을 두고 5개의 동일한 분취량으로 1g의 30% 수산화 암모늄 수용액을 첨가했다. 이 용액(I)은 하룻밤동안 교반하였다.

10g의 카본 블랙(Printex P, 데구사 제공)을 90g의 물에 첨가한 후 고 전단-강도 혼합기를 사용하여 3시간동안 혼합하였다. 이 카본 블랙 분산액(II)의 pH는 25%의 황산 수용액을 사용하여 2.0으로 적정하였다.

16g의 분산액(II)을 4g의 용액(I)에 첨가한 후, 30분 이상동안 고 전단-강도 혼합기를 사용하여 혼합함으로써 pH가 약 5.9 내지 6.4인 중합체 용액(III)중의 카본 블랙 분산액을 제조하였다. CryIA(c) 및 CryIA(b)를 포함한, 비. 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 변종 SA 12포자 및 결정의 8g의 분말 제제를 72g의 물과 혼합한 후 2시간동안 교반하였다. 25% 황산 수용액을 사용하여 이 현탁액의 pH를 4.2로 적정한 후 30%의 수산화 암모늄 수용액을 사용하여 5.0으로 다시 적정하였다. 이 pH 적정 과정은 2회 이상 반복하였다. 비. 투린지엔시스 현탁액의 pH는 30%의 수산화 암모늄 수용액을 가진 제제(III)보다 0.1 단위 높게 적정하고, 이들 두개를 고전단-강도 혼합기를 사용하여 45분 이상동안 혼합하였다. 생성된 혼합물은 주입공기 온도가 약 180℃이고, 저하된 공기압이 약 52 밀리바이고, 분사 속도가 약 10mL/분이고, 분무 공기 압력이 4바이며, 분사 노즐은 약 10 내지 20미크론의 중간 직경을 가진 좁은 크기 분포를 가지도록 조절된 부치 190 미니 분사 건조기를 사용하여 분사 건조시켰다. 이 샘플은 햇빛하에서 약 20mW-시간/㎠(360mm에서 측정)의 반감기를 갖는 반면, 카본 블랙을 함유하지 않는 점을 제외하고는 다른 점은 모두 동일한 샘플은 약 10mW-시간/㎠이었다. 반감기의 측정 방법은 본문에 참고 인용된 파울러외 다수의 문헌 [Photo-stability Preparation of B. thuringiensis and Use of Light-Absorbing Protectants, Eighth IUPAC International Congress on Pesticide Chemistry, 1994.7, 와싱턴, 디씨]에 기재되어 있다.

B. 이산화 티탄 및 카르복시 폴리아크릴산:

중합체 용액(I)은 실시예 1A에 기재된 바와 같이 제조하였다. 4.2g의 비. 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 변종 SA 12 포자 및 결정의 분말 제제를 79.2g의 물과 혼합한 후 2시간동안 교반하였다. 이 현탁액의 pH는 25%의 황산 수용액을 사용하여 4.2로 적정한 후 30%의 수산화 암모늄 수용액을 사용하여 6.2로 다시 적정하였다. 이 pH 적정 과정은, 30%의 수산화 암모늄 수용액을 사용하여 pH 6.5로 적정하기 전에 2회 이상을 반복하였다.

비. 투린지엔시스 현탁액에는 4.6g의 이산화 티탄(Tronox, 케르-멕기 제공)을 첨가한 후 고전단-강도 혼합기로 혼합함으로써 분산액(IV)을 제조하였다. 이어서, 0.4g의 EDTA를 3.6g의 물과 혼합한 후 분산액(IV)에 첨가했다. 이후 즉시, 8g의 중합체 용액(I)을 첨가한 후 고 전단-강도 혼합기를 사용하여 45분 이상동안 혼합하였다.

이어서, 생성된 혼합물은 실시예 1A에서와 같이 분사 건조시켰다. 샘플은 햇빛하에서 약 20mW-시간/㎥의 반감기를 갖는 데 반해, 이산화 티탄을 함유하지 않는 점을 제외하고는 다른 점은 동일한 샘플은 10mW-시간/㎠의 반감기를 갖는다.

C. 카본 블랙 및 스티렌/무수 말레산 공중합체:

10g의 스티렌/무수 말레산 공중합체(Scripset 520, 몬산토 제공)를 부드럽게 교반하면서 83.2g의 물에 첨가했다. 이어서, 6.8g의 30%의 수산화 암모늄 수용액을 동일한 간격을 두고 10개의 동일한 크기의 분적으로 5시간에 걸쳐 첨가하였다. 이 용액(V)은 하룻밤동안 교반하였다. 이어서, 10g의 카본 블랙을 90g의 물과 0.2g의 98% 황산에 첨가한 후 고전단-강도 혼합기를 사용하여 3시간동안 혼합함으로써 분산액(VI)을 형성하였다. 16g의 분산액(VI)을 4g의 용액(V)에 첨가한 후 고전단-강도 혼합기를 사용하여 30분 이상동안 혼합함으로써 pH가 약 5.9 내지 6.4인 중합체 용액(VII)중의 카본 블랙 분산액을 제조하였다.

8g의 비. 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 변종 SA 12 포자 및 결정의 분말 제제를 72g의 물과 혼합한 후 2시간동안 교반하였다. 이 현탁액의 pH는 25%의 황산 수용액을 사용하여 4.2로 적정한 후 30%의 수산화 암모늄 수용액을 사용하여 6.3으로 적정하였다. 비. 투린지엔시스의 pH는 이어서, 30% 수산화 암모늄 수용액을 함유한 제제(VII)보다 0.1 단위 높게 적정하고, 이 두 용액을 고전단-강도 혼합기를 사용하여 45분 이상동안 혼합하였다.

생성된 혼합물은 통상적인 분산 건조 시설을 사용하여 분사 건조시키고, 이때 공정은 중간 직경이 약 10 내지 20미크론인 좁은 크기 분포를 갖도륵 제어하였다. 샘플은 햇빛하에 약 20mW-시간/㎠의 반감기를 갖는데 반해, 카본 블랙을 함유하지 않는 것을 제외한 다른 점은 동일한 샘플은 반감기각 약 10mW-시간/㎠이었다.

D. 카본 블랙 및 카르복시폴리아크릴산:

4g의 카르복시폴리아크릴산(Carboset 525, 굿리치 제공)을 22.7g의 물에 첨가하고, 온도를 약 70℃로 상승시킨 후 부드럽게 교반하여 농축된 수산화 나트륨을 약 1 내지 8시간동안 첨가하여 최종 pH가 약 7 내지 8이 되도록 함으로써 중합체 용액(I)을 제조하였다. 이 혼합물은 이어서 수시간동안 또는 하룻밤동안 교반함으로써 중합체를 완전히 용해시켰다. 중합체 용액중의 카본 블랙(Printex G, 데구사 제공)분산액은, 197.3g의 물을 중합체 용액(I)에 첨가한 후, 0.66g의 리그노설포네이트 또는 유사한 분산제(예를 들면 펜실베니아, 필라델피아 소재 롬 앤드 하스사의 Tamol SN; 또는 사우스 캐롤라이나, 챨스 하이츠 소재 웨스트바코의 Polyfon H)를 첨가하고, 33g의 카본 블랙을 첨가한 후 고전단 혼합기를 사용하여 혼합함으로써 제조하였다. 황산 암모늄 용액(III)은, 4.2g의 염을 물 30g에 용해시킴으로써 제조하였다. 63g의 비. 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 변종 SA 12 포자 및 결정의 분말 제제를 500g의 물과 혼합한 후 2시간동안 교반하였다. 이 Bt 현탁액(IV)은 (III)중의 황산 암모늄 용액과 혼합하고, pH는 필요에 따라 진한 수산화 나트륨 또는 진한 황산을 사용하여 6.3으로 적정하였다. 예비-분사 슬러리(V)는, (IV)중의 Bt 현탁액을 (II)중의 중합체 용액중의 카본 블랙 분산액과 혼합함으로써 제조하였다. 예비-분사 슬러리는 상기 실시예 1A에 기재된 바와 같이 분사 건조시켰다. 이 샘플은 햇빛하에서 반감기가 약 100mW-시간/㎠인데 반해, 카본 블럭을 함유하지 않은 점을 제외하고는 동일한 샘플의 반감기는 10mW-시간/㎠이었다.

E. 카본 블랙 및 스티렌/말레산 공중합체:

오토그라파 캘리포니카 핵 다각체병 바이러스(NPV)로써 제제를 제조하였는데, 이 제제는 총 고형물 함량이 5.4%인 수성 현탁액으로서, 이 현탁액 100g을 하룻밤동안 페블 밀링하면서 5g의 분산제(Morwet, 윗코 코오포레이션 제공)와 395g의 물에 분산시키고, 이 분산액 66.1g은 이어서, 66.1g의 NPV 현탁액과 혼합한 후 pH를 8.6으로 적정함으로써 제 2 분산액을 제조하였다. 스티렌/무수 말레산 공중합체 용액은, 200g의 물을 제외하고는 실시예 1C에 기재된 바와 같이 제조하였다. 이 중합체 용액은 제 2 분산액과 혼합하였고, 생성된 혼합물은 실시예 1A에 기재된 바와 같이 분사 건조시켰다.

실시예 2: 살충 활성

분사 건조 조건을 조절함으로써 중간 입자 크기를 약 4 내지 45미크론 범위에서 다르게 한 점을 제외하고는 상기 실시예 1C에 기재된 바와 같이 샘플을 제조하였다.

저하된 공기압은 약 52 내지 약 43밀리바에서 조절되고, 분사 속도는 약 10 내지 약 7mL/분으로 조절되며, 분사 노즐은 소정의 좁은 크기 분포를 갖도록 조절하였다. 샘플을 0.2% 계면 활성제(Sylad 309, 다우 코닝 제공)와 함께 물에 현탁시킨후 6 내지 10개의 잎 단계 상태의 넓은 잎의 양배추 식물상에 분사시켰다. 침착물이 건조된 후, 잎들을 수거하여 제 1 중간 형태(instar)의 트리코플러시아 니 유충을 접근시켰다. 4일동안 배양시킨 후, 치사율을 측정하고 피니의 문헌 [D. J., Probit Analysis, 캠브리지 유니버시티 프레스(1964)]에 기재된 바와 같이 EC50을 판정하였다(제 1 도 참고). EC50은 50% 치사율(치사)을 유도하는 농도로서 정의된다. 이 도면은 중합체 개개의 포자 및 결정이 잎의 표면에 퍼짐에 따라 치사량-이하의 영양-억제적 투여량으로 존재하는 것이 방지되어 있지 않은 대조군과는 대비를 이루는 본 발명의 활성을 도시한 것이다.

실시예 3 : 살충 활성의 효능 및 지속성

상기 실시예 1A에 기재된 바와 같이 샘플을 제조하되, 양은 다음과 같이 조절하였다: 4g의 용액(I)을 48g의 분산액(II)과 혼합하고, 4.8g의 비. 투린지엔시스 분말을 43.2g의 물과 혼합하였다. 이 생성된 분사 건조된 분말(VIII)은 물에 현탁시킨후 실시예 2 에 기재된 바와 동일한 방식으로 0.33 1b/ac 비. 투린지엔시스에 상응하는 살포 속도로 양배추상에 분사하였다. 카본 블랙 또는 중합체를 포함하지 않은 대조군 샘플도 또한 0.85 1b/ac 비. 투린지엔시스에 상응하는 속도로 양배추상에 분사하였다. 이어서, 식물을 햇빛에 노출시키고, 잎들을 수거한 후 티. 니 유충을 접근시켰다. 햇빛에 대한 노출 일수와 함수 관계로서 치사율(비처리된 식물에 대해 조정한 값)은 표 1에 제시한다.

[표 1]

실시예 4 : 지속성

비. 투린지엔시스와 카본 블랙의 1:1 혼합물(IX)을 총 고형물 10%의 농도로 유리판상에 30g/ac에 상응하는 분사 속도로 분사시킨 경우, 햇빛하의 반감기는 약 26mW-시간/㎠이었다. 농도가 1%의 총 고형물로 감소하는 경우, 반감기는 약 15mW-시간/㎠로 저하되었다. 유리 판상의 이러한 낮은 고형물 수준에서는, 햇빛으로부터 효과적으로 보호하기에는 비. 투린지엔시스 제제에 근접한 카본 블랙의 양이 불충분하다-나머지 광-차단제 층도 입사 광선의 상당부를 흡수할 정도로 충분치는 않다. 통상적인 농작 용도에서는, 임의의 실용성을 갖도록 1%를 초과하지 않는 총 고형물 농도로 분사할 경우 살충제가 효과적이어야 한다.

이어서, 샘플을 상기 실시예 1C에 기재된 바와 같이 제조한 후 1%의 총 고형물의 농도로 유리 판상에 30ga/ac에 상응하는 분사 속도로 분사하였다. 햇빛하의 반감기는 130mW-시간/㎠ 이상이었다. 이 결과는, 무기 광-차단제의 입자와 비. 투린지엔시스 제제의 포자 및 결정이 긴밀하게 접촉하도록 보유된 상태에서의 중합체의 효용성, 및 이 조성물이 햇빛에 의해 불활성화되는 것을 효과적으로 막는다는 것을 입증해준다.

도 1 은 실시예 3에 기재된 조성물 대 대조군 샘플의 EC₅₀ 활성을 나타낸 것이다.

Claims (22)

1. (a) 살충 박테리아 및 바이러스로 이루어진 군중에서 선택된 활성 성분;

   (b) 수성 매질중에서 중성 내지 알칼리성 조건하에는 가용성이며 약산성 조건하에서는 불용성인 매트릭스를 형성하는 중합체;

   (c) 물에 불용성이고 중합체(b)에 의해 형성된 매트릭스내에 활성성분과 함께 분산되며, 활성성분이 자외선 및 햇빛에 의해 불활성화되는 것으로부터 보호하는 무기 광-차단제를 포함하는 생물학적 살충 효과 조성물.
2. 제 1 항에 있어서, 활성 성분이 바실러스 투린지엔시스(Bacillus thuringiensis)결정 단백질 또는 포자 또는 이들의 혼합물인 조성물.
3. 제 1 항에 있어서, 활성 성분이 조성물의 약 30 내지 80중량%를 구성하고, 중합체는 조성물의 약 1 내지 약 15중량%를 구성하며, 무기 광-차단제는 조성물의 약 5 내지 약 60중량%를 구성하는 조성물.
4. 제 1 항에 있어서, 상기 활성성분이 바실러스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키(kurstaki)의 변종으로부터 제공되는 조성물.
5. 제 1 항에 있어서, 상기 활성성분이 바실러스 투린지엔시스 변종 아이자와이(aizawai)의 변종으로부터 제공되는 조성물.
6. 제 1 항에 있어서, 상기 활성성분이 바실러스 재조합 균주로부터 제공되는 조성물.
7. 제 1 항에 있어서, 상기 활성성분이 자연발생적 바실러스의 변종으로부터 제공되는 조성물.
8. 제 2 항에 있어서, 활성성분이 CryIC, CryIA(a), CryIA(b), CryIA(c), CryIIA 및 CryIE와 이들의 혼합물 및 단편으로 구성된 군중에서 선택되는 조성물.
9. 제 1 항에 있어서, 중합체가 카르복시 폴리아크릴산 또는 스티렌-무수 말레산 공중합체인 조성물.
10. 제 1 항에 있어서, 무기 광-차단제가 카본 블랙, 이산화 티탄 또는 이들의 혼합물인 조성물.
11. 제 1 항에 있어서, 바이러스가 오토그라파 캘리포니카(Autographa californica)NPV, 헬리오티스 제아(Heliothis zea) NPV, 스포도프테라 엑시구아(Spodoptera exigua) NPV, 아난그라파 팔시페라(Anangrapha falcifera) NPV를 비롯한 바큘로바이러스인 조성물.
12. 제 1 항에 있어서, 상기 조성물이 부가로 과립, 습윤성 분말, 수성의 유동성 제제 또는 유성의 유동성 제제로서 제형화되는 조성물.
13. 구제가 요하는 지점에 제 1 항의 조성물을 살충적 유효량으로 살포함으로써 상기 지점의 해충을 구제하는 방법.
14. 제 13 항에 있어서, 해충이 레피도프테라 해충인 방법.
15. 제 13 항에 있어서, 해충이 콜레오프테라 해충인 방법.
16. (a) 수성 매질중에서 중성 내지 알칼리 조건하에서는 가용성이고 약알칼리 조건하에서는 불용성인 중합체 용액을 제조하는 단계;

    (b) 무기 광-차단제 분산액을 제조하는 단계;

    (c) 박테리아 및 바이러스로 구성된 군중에서 선택된 활성 살충 성분의 현탁액 배양물을 제공하는 단계;'

    (d) 휘발성 염기 용액을 제조한 후 이 용엑을 단계(c)의 현탁액과 혼합하는 단계;

    (e) 광-차단제 분산액과 중합체 용액을 혼합하여 제 2 분산액을 제조한 후 제 2 분산액을 활성 성분 현탁액 및 휘발성 염기 용액과 혼합하는 단계; 및

    (f) 상기 (e)단계의 혼합물을 분사 건조시키는 단계를 포함하고, 상기 활성성분 및 광-차단제는 중합체로 형성된 매트릭스중에 분산되는 생물학적 살충 효과 조성물의 제조방법.
17. 제 16 항에 있어서, 상기 박테리아가 살충 단백질 또는 포자 또는 이들의 혼합물을 비롯한 바실러스 투린지엔시스인 방법.
18. 제 16 항에 있어서, 상기 광-차단제가 카본 블랙 또는 이산화 티탄 또는 이들의 혼합물이고 조성물의 약 5 내지 60중량%를 구성하는 방법.
19. 제 18 항에 있어서, 중합체가 카르복시 폴리아크릴산 또는 스티렌-무수 말레산의 공중합체이고, 조성물의 약 1 내지 15중량%를 구성하는 방법.
20. 제 16 항의 방법에 의해 제조된 생물학적 살충 조성물.
21. (a) 살충 단백질 또는 포자 또는 이들의 혼합물을 비롯한 바실러스 투린지엔시스 또는 바큘로바이러스의 현탁액 배양물을 활성성분으로서 수득한 후 이 현탁액을 무기 광-차단제와 혼합하는 단계;

    (b) 수성 매질중에서 중성 내지 알칼리 조건하에서는 가용성이고 약산성 조건하에서는 불용성인 중합체의 용액을 제조하는 단계로서, 상기 중합체는 카르복시 폴리아크릴산 또는 스티렌-무수 말레산의 공중합체이고 조성물의 약 3 내지 10중량%를 구성하는 단계;

    (c) 단계 (a)의 혼합물을 단계 (b)의 용액과 혼합하여 현탁액을 제조하는 단계; 및 (d) 현탁액을 분산 건조시키는 단계로서, 활성성분 및 광-차단제는 중합체로 형성된 매트릭스중에 분산되는 단계를 포함하는 생물학적 살충 효과 조성물의 제조방법.
22. 제 21 항의 방법을 통해 제조된 생물학적 살충 조성물.