KR100443156B1

KR100443156B1 - 악취제거용 에멀젼 액상 미생물 제제 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR100443156B1
Application number: KR1020030024808A
Authority: KR
Inventors: 박성훈; 김유진; 황재웅; 장석진
Original assignee: 에코바이오젠주식회사
Priority date: 2003-04-18
Filing date: 2003-04-18
Publication date: 2004-08-05

Abstract

본 발명은 악취제거용 액상 미생물 제제 및 그의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명 에멀젼 상 액상 미생물 제제는 폐수 및 분뇨내의 유기물질을 신속히 분해시키고, 각종 악취의 제거능력이 뛰어난 효과가 있다. 또한, 본 발명 미생물 제제는 장기간 안정성을 향상시킨 미생물 제제로 높은 활성도와 생균수를 유지하고 있을 뿐만 아니라, 유통 및 보관에 따른 미생물의 사멸을 방지할 수 있으며, 액상형태로 제조되어 별도의 활성화 단계 없이 폐수에 투입 즉시 효과를 발휘할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.

Description

악취제거용 에멀젼 액상 미생물 제제 및 이의 제조방법{LIQUID-TYPE MICROBIAL AGENT FOR ODORS REMOVAL AND ITS MANUFACTURING METHOD}

본 발명은 악취제거용 액상 미생물 제제 및 그 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 산업폐수, 밀폐식 오수정화조, 쓰레기처리장 및 축산폐수처리에 유용한 활성 미생물군을 함유하는 에멀젼상의 고효율 미생물 제제에 관한 것이다.

경제발전에 따른 산업활동의 급변화에 따라 최근 생활하수 및 산업폐수 등이 환경오염의 주범으로 사회적으로 큰 관심의 대상이 되고 있을 뿐만 아니라 이로 인해 발생하는 악취는 매년 많은 민원을 야기시키고 있는 실정이다. 특히 분뇨, 오·폐수 등에서 발생하는 암모니아나 황화수소와 같은 가스는 그 자체의 특유한 냄새로 인해 불쾌감을 유발할 뿐만 아니라 낮은 농도에서도 구토, 두통 등을 유발하며 농도가 높을 경우 인체에 커다란 해를 미치는 것으로 알려져 있다. 이러한 악취문제를 해결하기 위한 방법중의 하나로서 악취제거 활성 미생물을 이용한 미생물 제제가 환경친화적인 방법으로서 널리 사용되고 있다. 이러한 생물학적 처리방법은 다양한 오염물질을 분해시킬 수 있으며, 처리비용이 저렴하고, 2차 오염을 일으키지 않는다는 장점으로 널리 채택되고 있다. 미생물 제제의 가장 큰 역할은 오염원의 자연 생분해 속도를 증가시켜 신속히 원상회복 시키는데 있다. 현재 이들 미생물 제제들은 유용 미생물을 담체에 부착시킨 후 건조 분쇄하여 분말 상으로 제품화하거나, 또는 액상 형태로 제조되어 사용되고 있는데, 대부분이 제제의 활성도 및 장기간 안정성 등에 있어 매우 미흡한 실정이다. 즉, 대부분의 미생물 제제의 경우 환경변화에의 적응성이 낮아 만족할만한 효력을 발휘하지 못하고 있을 뿐 아니라 안정성에 많은 문제가 있는 것이 사실이다. 이중 분말상 제제의 경우 보존성은 좋으나 미생물의 재활성화 효율이 떨어지는 문제가 있고, 액상 제제의 경우 제제화의 불안정성에 의해 장기간 보존 시 미생물의 생존력이 저하되므로 미생물 제제로서의 기능을 충분히 발휘하지 못하고 있다. 따라서 미생물 제제의 경우 다양한 미생물 종류, 강한 활성도 및 장기간 안정성 등이 필수요소라 하겠다. 따라서 다양한 유용 미생물들을 휴면상태로 장기 보관할 수 있는 제제화 개발이 요청되고 있다.

본 발명은 상기의 문제점을 해결하기 위해서 안출된 것으로써, 본 발명의 목적은 폐수 및 분뇨내의 유기물질을 신속히 분해시키고, 각종 악취의 제거능력이 우수한 활성 미생물군을 포함하는 악취 제거능이 우수한 미생물 제제 및 이의 제조방법을 제공함에 있다.

본 발명의 다른 목적은 미생물 제제에 포함되어 있는 활성 미생물군을 유통기간 및 저장 중 높은 생존율 및 활성을 유지토록 하는 안정한 액상 미생물 제제 및 이의 제조방법을 제공함에 있다.

본 발명의 악취제거용 에멀젼 액상 미생물 제제의 제조방법은 토양시료와 발효퇴비, 폐수처리조에서 유기물 분해능 및 탈취성능이 우수한 균주를 각각 분리·선별하는 단계; 상기에서 분리한 각 균주의 전 배양단계; 전배양된 각각의 균주를 생물반응기에서 배양하는 단계; 상기 각 배양액에서 얻은 세포를 각각의 셀 페이스트로 제조하는 단계; 및 상기 각 셀 페이스트를 혼합한 후 생물학적으로 부합하는 부형제를 첨가하여 에멀젼 액상 미생물 제제를 제조하는 단계를 포함한다.

본 발명의 일 특징으로는, 본 발명자는 먼저 다양한 환경으로부터 농화배양을 통해 유기물 분해능이 우수하고, 각종 악취 환경의 물리·화학적 성상에 부합하는 유용 광합성 미생물 및 활성 미생물들을 탐색, 확보하였다. 본 발명에 사용된 균주로는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtillus), 바실러스 서큘란스(Bacillus circulans), 크리세오모나스 루테올라(Chryceomonas luteola), 티오바실러스 에스피(Thiobacillus sp.) 및 로도슈도모나스 에스피(Rhodopseudomonas sp.)로 총 5균주로 구성되어 있다. 상기 균주들은 탄수화물, 단백질, 지질 및 섬유소와 같은 유기물 분해와 악취제거능이 우수한 미생물을 순수 분리하여 선별된 미생물들이다.

각 미생물에 대한 기능을 살펴보면, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtillits)와 바실러스 서큘란스(Bacillus circulans)는 고분자의 물질을 저분자의 수용성 유기화합물로 분해하는 효과가 있으며, 크리세오모나스 루테올라(chryceomonas luteola)는 지방산, 글리세롤, 글루코스, 초산 등의 저분자 유기화합물을 자화(자기소화)시키는 효과가 있고, 티오바실러스 종(Thiobacillussp.)은 황화수소, 메틸메르캅탄 등의 유황계 악취물질의 분해제거시키는 효과가 있으며, 로도슈도모나스 팔루스트리스(Rhodopseudomonas palustris)는 미생물의 대사작용에 의해 악취유발물질을 제거하는 효과가 있다.

상기 균주 중 바실러스 서큘란스 종은 바실러스 서브틸리스 종보다 리파아제 활성이 더 좋기 때문에, 바실러스 서큘란스 종만을 사용하는 것보다 바실러스 서브틸리스종을 함께 사용함으로써, 지질에 대한 분해를 더욱 좋게 할 수 있다.

상기 균주는 글리세롤(25%) 저장법으로 장기보존하고, 영양한천 배지에 주기적으로 계대배양하여 보존한다.

본 발명의 다른 특징은 여러 가지 영양염류 및 미생물 보존제와 안정화제를 이용하여 미생물 제제의 제제화까지 장기보관이 가능한 셀 페이스트(cell paste)를 제조한다는 것이다. 즉, 먼저 각 미생물에 대해서 장기 보관이 가능한 셀 페이스트를 제조한 후, 미생물 제제시마다 각 셀 페이스트를 적당한 비율로 혼합하여 미생물 제제를 제조하게 된다.

각각의 셀 페이스트를 제조한 후, 이를 혼합하여 미생물 제제를 제조함으로써 발생되는 장점으로, 첫째, 적절한 량의 셀을 취하여 사용할 수 있으므로 이용이 간편하고 쉬우며, 둘째, 미생물 제제의 제조시마다 미생물 배양의 단계를 거치지 않기 때문에 미생물 제제의 제조가 간편하다는 것이다. 종래에는, 미생물 제제를 만들 때마다 별도의 미생물 배양단계를 거쳐야 하며 미생물만을 냉장보관할 경우 시간이 지날수록 생존능이 떨어져 장기간 보관이 어려웠으나, 본 발명은 각 균주를 셀 페이스트로 제조하게 됨으로, 미생물활성을 유지하면서 별도의 미생물 배양단계를 거치지 않아 미생물 제제로의 제제화까지 장기간 냉장보관이 가능하다는 장점이 있다.

본 발명의 악취제거용 액상 미생물 제제를 제조하기 위한 전단계인 각각의 균주에 대한 셀 페이스트는 다음과 같이 제조한다

먼저, 플레이트 또는 글리세롤을 이용하여 보관된, 유기물 분해능 및 탈취성능이 우수한 균주를 고온·고압 살균한 영양배지에서 25∼30℃, 200∼250rpm의 조건으로 12~24시간 동안 진탕배양한다(전 배양 단계).

상기 진탕배양한 배양액을 영양배지에 접종하여 생물반응기에서 교반 배양한다. 생물반응기에서의 교반 배양은 25∼35℃, pH 5.5∼7.5, 200∼600rpm, 공기공급량 0.5∼1vvm의 조건으로 12~36시간 동안 수행된다. 배양이 종료되면 배양액을 원심분리하여 세포를 회수한다. 중량비로 인산이수소나트륨 0.05~1.0%, 인산수소이나트륨 0.2~2%, 스킴밀크 1~5%, 글리세롤 5~30%, 및 마그네슘 이온, 칼슘 이온, 망간 이온, 철 이온 10~200 ppm의 각종 미네랄 이온이 각각 혼합 용해되어 있는 멸균된 pH 6.5~7.5의 완충용액에 상기 회수된 세포를 현탁한 후 교반하여 셀 페이스트(cell paste)를 제조하게 된다.

본 발명에서 셀 페이스트는 미생물 제제의 제제화에 필요한 활성 미생물들의 장기간 보존을 위한 수용체로서 미생물의 활성저하 방지 및 장기간 안정성 확보를 위해 스킴밀크, 글리세롤과 같은 미생물 안정화제와 각종 영양염류를 포함하고 있다. 따라서, 제제화시 매번 미생물을 배양할 필요가 없으며, 보존중인 셀 페이스트를 사용할 수 있다.

본 발명의 다른 특징으로는, 본 발명의 미생물 제제는 분해능이 우수한 균주를 이용하여 상기의 방법으로 제조된 각각의 셀 페이스트를 혼합한 후, 생물학적으로 부합하는 부형제를 첨가하여 탈취능이 우수하고 안정한 에멀젼상의 액상 미생물 제제를 제조하는 것이다. 미생물 제제화시 계면활성제 및 유화 보호제를 이용하여 미생물을 안정한 형태로 에멀젼화시킴으로서 제제의 장기간 안정성을 확보할 수 있다.

본 발명의 에멀젼 액상 미생물 제제는 상기에서 제조된 각각의 셀 페이스트를 혼합한 후, 중량비로 인산이수소나트륨 0.05~1.0%, 인산수소이나트륨 0.2~2%, 카복시메틸셀룰로오즈 0.1~1%, 마그네슘 이온, 칼슘 이온, 망간 이온, 철 이온이 각각 10~200 ppm, 고급 알코올 0.01~0.5%, 유기성 계면활성제 0.1~2%를 첨가하여 최종 미생물의 농도가 1∼5×10⁸cfu/ml이 되도록 교반하여 제조한다.

본 발명의 셀 페이스트 제조시 및 미생물 제제의 제조시 사용되는, 인산이수소나트륨과 인산수소이나트륨에 의한 pH 완충 시스템은 제품의 pH를 일정하게 유지시켜 주며, 제품의 안정성을 유지시켜 준다.

본 발명에 사용되는 각종 미네랄 이온은 제품의 미생물 보존과 폐수 투입 시 미생물들의 빠른 활성화를 유도하며, 카복시메틸셀룰로오즈와 고급 알코올류는 유화 보조제로서 에멀젼 형태의 액상 미생물 제제의 안정성을 증대시킨다.

본 발명의 에멀젼 형성에 사용되는 유기성 계면활성제는 비이온성 계면활성제인 트리톤(Triton) 계열과 이온성의 트윈(Tween) 계열의 혼합사용으로 보다 우수한 에멀젼 형태의 액상 미생물 제제를 제조할 수 있다.

본 발명에 의한 미생물 제제는 공지의 우수 균주를 분리, 선별하여 혼합한 후 안정한 에멀젼 입자로 형성시켜 장기간 안정성을 향상시킨 미생물 제제로 높은 활성도와 생균수를 유지하고 있을 뿐만 아니라, 유통 및 보관에 따른 미생물의 사멸을 방지할 수 있다. 또한 액상형태로 제조되어 별도의 활성화 단계 없이 폐수에 투입 즉시 효과를 발휘할 수 있다.

이하, 본 발명의 구체적인 구성을 실시예를 통해 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.

실시예

실시예 1: 본 발명 미생물 제제의 악취제거능이 우수한 균주의 분리 및 선별

본 발명의 악취제거능이 우수한 미생물 제제를 제조하기 위해, 국내의 다양한 토양시료와 발효퇴비, 폐수처리조 등을 대상으로 이들 환경 내에 존재하는 유기물 분해능 및 탈취성능이 우수한 균주를 분리·선별하였다.

먼저, 재취한 시료를 증류수에 현탁하고, 현탁액의 일부를 분리용 배지에 도말·접종하여 상온에서 배양하였다. 배양 후에 형성된 콜로니를 액체배양액(Luria-Bertani broth)에 현탁한 후에, 암모니아수와 황화나트륨(황화수소원)을 함유한 배지에 접종하여 내성이 탁월한 균주를 분리하였다. 선별분리된 균주를 Bergey's Manual의 분류 및 기준에 따라 형태학적, 생리학적 특성을 조사한 결과, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtillis), 바실러스 서큘란스(Bacilluscirculans), 크리세오모나스 루테올라(Chryceomonas luteola), 티오바실러스 에스피(Thiobacillus sp.), 로도슈도모나스 에스피(Rhodopseudomonas sp.)의 5종의 균주로 동정되었다. 상기 5종의 균주를 광학현미경으로 형태학적 특성을 관찰하고, 생리·생화학적 특성과 API 동정시스템을 이용하여 기질 이용성과 효소활성을 조사하여 동정하였다. 표 1에는 선별분리된 5종 균주의 기능성 효소활성능을 나타내었다.

표 1. 선별균주의 기능성 효소활성능

기질미생물	아밀라아제(Amylase)	프로테아제(Protease)	리파아제(Lipase)	셀룰라아제(Cellulase)
B. subtillis	+++	+++	++	+
B. circulans	+++	+++	+++	+
Chry. luteola	++	+++	++	-
Thiobacillussp.	++	++	+	+
Rhodopseudomonassp.	+	++	+	-

- : 없음, + : 약, ++ : 보통, +++ : 강

표 1에 나타난 바와 같이, 동일한 바실러스 종이라도 바실러스 서큘란스 종이 바실러스 서브틸리스 종보다 리파아제 활성이 더 우수함을 알 수 있다. 따라서, 바실러스 서큘란스 종만을 사용하는 것보다 바실러스 서브틸리스종을 함께 사용하여 미생물 반응기의 미생물 제제를 제조함으로써, 지질에 대한 분해능을 좋게 할 수 있다.

실시예 2: 본 발명 미생물 제제의 셀 페이스트의 제조

본 발명 미생물 제제의 악취제거능이 우수한 미생물 균주의 셀 페이스트로의 제조를 위해, 우선, 각 미생물 균주를 포함하는 각각의 플레이트에서 단일 콜로니를 취하여, 150 mL의 배지(Luria-Bertani broth)에 현탁하고 상기 현탁액을 진탕배양기(Model VS-8480SR, 비젼과학, 대한민국)에서 30℃, 250 rpm의 조건으로 12시간 동안 전(前)배양하였다.

상기 진탕배양한 각각의 전배양액을 3 L의 LB 영양배지가 들어있는 5L 용-생물반응기(Model KF-5L, KoBioTech, 인천)에 3 L에 대한 5%(즉, 150mL)를 접종하고, 다음은 표 2과 같은 조건으로 교반 배양시켜 각각의 활성 미생물 배양액을 얻었다.

표 2. 선별 균주별 생물 반응기의 운전 조건

미생물	온도(℃)	pH	교반속도(rpm)	배양시간(hr)	공기공급량(vvm)
B. subtillis	27	6.2	300	12	0.5
B. circulans	27	6.2	300	12	0.5
Chry. luteola	33	7.4	500	24	1
Thiobacillus sp.	33	5.8	200	36	0.5
Rhodopseudomonas sp.	27	6.5	300	36	1

상기의 방법으로 제조된 각각의 미생물 배양액을 4℃, 12,000 rpm의 조건에서 원심분리하여 세포를 회수하였다.

상기에서 얻은 각각의 세포를 중량비로 인산이수소나트륨 0.05%, 인산수소이나트륨 0.5%, 스킴밀크 3%, 글리세롤 20% 및 마그네슘 이온, 칼슘 이온, 망간 이온, 철 이온이 각각 100ppm으로 혼합 용해되어 있는 멸균된 pH 6.5~7.5 의 완충용액에 현탁한 후 교반하여 각각 5종의 셀 페이스트를 제조하였다.

실시예 3: 본 발명 악취제거능이 우수한 에멀젼 상 액상 미생물 제제의 제조

본 발명 악취제거능이 우수한 에멀젼상 액상 미생물 제제를 제조하기 위해, 상기에 제조한 5종의 셀 페이스트를 동일한 비율로 1g씩 혼합한 후, 중량비로 인산이수소나트륨 0.05%, 인산수소이나트륨 0.5%, 카복시메틸셀룰로오즈 0.5%, 마그네슘 이온, 칼슘 이온, 망간 이온, 철 이온이 각각 100 ppm, 고급 알코올 0.02%, 트리톤 X-100(Triton X-100) 0.4% 및 트윈 20(Tween 20) 0.4% 첨가하고 교반하여 에멀젼 상의 액상 미생물 제제를 제조하였다. 최종 미생물농도는 2×10⁸cfu/mL 이 되도록 조절하였다.

실험예 1: 본 발명 미생물 제제의 안정성 조사

본 실시예에서 제조된 액상 미생물 제제를 상온에서 보존하면서 제제의 안정성을 관찰한 결과를 표 3에 나타내었다. 연속희석에 의한 평판 희석법에 의해 미생물의 균수를 측정하여 제제의 안정성을 평가하였다.

표 3. 미생물 제제의 안정성

보존기간(주)	균 수 (cfu/mL)	생존율 (%)
보존기간(주)	대조구	제제	대조구	제제
0	2.50 X 10⁸	2.50 X 10⁸	100	100
1	3.57 X 10⁶	2.50 X 10⁸	1.43	100
2	8.50 X 10⁵	2.48 X 10⁸	0.34	99
4	·	2.43 X 10⁸	·	97
8	·	2.38 X 10⁸	·	95
12		2.33 X 10⁸		93
16		2.30 X 10⁸		92

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 미생물 제제는 상온에서 16주간 보관 시에도 활성 미생물의 수가 90%이상 유지됨을 알 수 있다.

실험예 2: 본 발명 미생물 제제의 탈취효능 조사

실시예에서 제조된 미생물 제제를 일반 분뇨 오수에 투입하여 탈취능을 조사하였다. 1,000 mL-플라스크에 분뇨 오수 200 mL을 넣은 후, 암모니아수와 황화나트륨(황화수소원)을 각각 200 ppm 첨가하였다. pH를 6~7로 조정한 후 입구를 밀봉한 다음, 25℃에서 진탕배양하면서 본 미생물 제제를 100 ppm 투여하였다. 동일한 조건에서 미생물 제제를 투여하지 않은 플라스크를 대조구로 하였으며, 12시간마다 가스 검지관으로 시료를 채취하여 탈취효능을 평가하였다.

표 4. 미생물 제제의 악취제거 효율

시간(hr)	황화수소 (ppm)	암모니아 (ppm)
시간(hr)	대조구(제거율, %)	제제(제거율, %)	대조구(제거율, %)	제제(제거율, %)
0	120(0)	110(0)	110(0)	120(0)
3	103(6.4)	25(77.3)	85(13.6)	35(70.8)
6	87(20.1)	15(86.4)	85(22.7)	20(83.3)
9	79(28.2)	10(90.9)	77(30.0)	15(87.5)
12	71(35.5)	8(92.7)	69(37.3)	12(90.0)

표 4에 나타난 바와 같이, 본 발명에 의한 미생물 제제의 탈취능력은 3시간 경과 후 악취물질의 발생량이 초기 발생량의 절반 이하의 수준으로 감소하였고, 이후 12시간 경과 후에는 암모니아와 황화수소 모두 90% 이상의 제거율을 나타냄을 확인할 수 있었다.

이상, 상기 실시예 및 실험예를 통해 살펴본 바와 같이, 본 발명 에멀젼 상 액상 미생물 제제는 폐수 및 분뇨내의 유기물질을 신속히 분해시키고, 각종 악취의 제거능력이 뛰어난 효과가 있다. 또한, 본 발명 미생물 제제는 장기간 안정성을향상시킨 미생물 제제로 높은 활성도와 생균수를 유지하고 있을 뿐만 아니라, 유통 및 보관에 따른 미생물의 사멸을 방지할 수 있으며, 액상형태로 제조되어 별도의 활성화 단계 없이 폐수에 투입 즉시 효과를 발휘할 수 있는 뛰어난 효과가 있다. 따라서, 본 발명 에멸젼 상 액상 미생물 제제는 악취제거 관련 산업상 매우 유용한 발명이다.

Claims

a) 토양시료와 발효퇴비, 폐수처리조에서 유기물 분해능 및 탈취성능이 우수한 각각의 균주를 분리·선별하는 단계;

b) 상기에서 분리한 각 균주를 멸균상태의 영양배지에서 25∼30℃, 200∼250 rpm의 조건으로 12~24시간 동안 각각 진탕배양하는 단계;

c) 상기 각 배양액을 각각의 영양배지에 접종하여 생물반응기에서 교반 배양하고, 배양이 종료된 배양액을 원심분리하여 세포를 회수하고, 중량비로 인산이수소나트륨 0.05~1.0%, 인산수소이나트륨 0.2~2%, 스킴밀크 1~5%, 글리세롤 5~30%, 및 마그네슘 이온, 칼슘 이온, 망간 이온, 철 이온이 각각 10~200 ppm이 혼합 용해되어 있는 멸균된 pH 6.5~7.5의 완충용액에 상기 회수된 세포를 현탁한 후 교반하여 각각의 셀 페이스트를 제조하는 단계; 및

d) 상기 제조된 각각의 셀 페이스트를 혼합한 후, 중량비로 인산이수소나트륨 0.05~1.0%, 인산수소이나트륨 0.2~2%, 카복시메틸셀룰로오즈 0.1~1%, 마그네슘 이온, 칼슘 이온, 망간 이온, 철 이온이 각각 10~200 ppm, 고급 알코올 0.01~0.5%, 유기성 계면활성제 0.1~2%를 첨가하여 최종 미생물 농도가 1∼5×10⁸cfu/mL 이 되도록 교반하는 단계를 포함하되,

상기 각 균주는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtillits), 바실러스 서큘란스(Bacillus circulans), 크리세오모나스 루테올라(chryceomonas luteola), 티오바실러스 종(Thiobacillus sp.) 및 로도슈도모나스 팔루스트리스(Rhodopseudomonas palustris)인 것을 특징으로 하는 에멀젼 액상 미생물 제제의 제조방법.
제 1항에 있어서, 상기 유기성 계면활성제는 비이온성 계면활성제인 트리톤(Triton) 계열과 이온성의 트윈(Tween) 계열을 혼합 사용하는 것을 특징으로 하는 에멀젼 액상 미생물 제제의 제조방법.
제 1항에 있어서, 상기 c)단계에서 생물반응기에서의 교반 배양은 25∼35℃, pH 5.5∼7.5, 200∼600rpm, 공기공급량 0.5∼1vvm의 조건으로 12~36시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 에멀젼 액상 미생물 제제의 제조방법.
a) 유기물 분해능 및 탈취성능이 우수한 균주를 분리·선별하는 단계;

b) 상기에서 분리한 균주를 멸균상태의 영양배지에서 25∼30℃, 200∼250 rpm의 조건으로 12~24시간 동안 진탕배양하는 단계; 및

c) 상기 배양액을 영양배지에 접종하여 생물반응기에서 교반 배양하고, 배양이 종료된 배양액을 원심분리하여 세포를 회수하고, 중량비로 인산이수소나트륨 0.05~1.0%, 인산수소이나트륨 0.2~2%, 스킴밀크 1~5%, 글리세롤 5~30%, 및 마그네슘 이온, 칼슘 이온, 망간 이온, 철 이온이 각각 10~200 ppm이 혼합 용해되어 있는 멸균된 pH 6.5~7.5의 완충용액에 상기 회수된 세포를 현탁한 후 교반하여 셀 페이스트를 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 셀 페이스트의 제조방법.
제 4항에 있어서,

상기 유기물 분해능 및 탈취성능이 우수한 균주는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtillits), 바실러스 서큘란스(Bacillus circulans), 크리세오모나스 루테올라(chryceomonas luteola), 티오바실러스 종(Thiobacillus sp.) 및 로도슈도모나스 팔루스트리스(Rhodopseudomonas palustris)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 셀 페이스트의 제조방법.
제 4항에 있어서,

상기 c)단계에서, 생물반응기에서의 교반 배양은 25∼35℃, pH 5.5∼7.5, 200∼600rpm, 공기공급량 0.5∼1vvm의 조건으로 12~36시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 셀 페이스트의 제조방법.