KR100235382B1 - 전기화학발광식 광섬유바이오센서 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 GOT와 GPT효소활성반응에 의하여 생성된 글루타메이트의 탈수소효소반응을 매개하는 글루타메이트탈수소효소층과, 상기 효소층에서 생성되는 NAD(P)H와 반응하여 빛을 발생하게 하는 트리스(2,2-비피리딜)루테늄(Ⅱ)층과, 전압이 인가되는 전극과, 상기한 NAD(P)H와 트리스(2,2-비피리딜)루테늄(Ⅱ)와의 반응에서 발생되는 빛을 감지하는 감지부를 포함하는 구성을 가진 광섬유바이오센서를 제공하여 글루타메이트-옥살로아세테이트 트랜스아미네이즈(GOT)와 글루타메이트-파이루베이트 트랜스아미네이즈(GPT) 효소활성을 순차적으로 측정할 수 있게 한다.

Description

전기화학발광식 광섬유바이오센서
본 발명은 신체간기능의 이상, 혹은 간염에 걸렸을 경우 혈액 중으로 과량 유출되는 효소인 글루타메이트-옥살로아세테이트 트랜스아미네이즈(glutamate-oxalaoacetate transaminase, GOT)와 글루타메이트-파이루베이트 트랜스아미네이즈(glutamate-pyruvate transaminase, GPT) 활성을 정량적으로 측정할 수 있는 전기화학발광식(Electrochemiluminescence) 광섬유바이오센서(fiber-optic biosensor)에 관한 것으로, 특히 한가지의 효소 반응만으로 간편하게 GOT와 GPT의 양을 동시에 측정할 수 있는 광섬유바이오센서에 관한 것이다. 더 나아가, 본 발명의 광섬유바이오센서를 사용하여 한가지의 효소반응 시스템, 즉 GOT와 GPT 두 효소반응의 공통산물인 글루타메이트를 기질로 하는 글루타메이트 탈수소효소만을 사용하여 신속하게 GOT/GPT의 효소량을 동시에 측정할 수 있는 흐름계 분석법(flow injection analysis, FIA)을 적용한 측정시스템을 구현하는데 있다.
일반적으로 임상에서 측정되는 간기능 검사 항목중 GOT 와 GPT는 간염진단 뿐 아니라 간의 손상 또는 간기능 저하의 지표가 되는 중요한 효소이다. 또한, GOT와 GPT 이들 두가지 트랜스아미네이즈는 간 뿐만 아니라, 심장기능의 이상유무를 판단할 경우에도 그 측정이 중요한 효소로 알려져 있다. 이러한 GOT와 GPT는 간이 손상을 입거나 비정상적인 상태일 경우에 혈액 중으로 유출되기 때문에 이들의 혈중 효소량 측정은 임상학적 진단 정보를 얻는데 있어 매우 유용하다.
GOT는 생체내에서 아미노산의 일종인 아스파테이트(L-aspartate)의 아미노기를 알파케토글루타레이트(α-ketoglutarate)에 전이하여 글루타메이트(L-glutamate)와 옥살로아세테이트(oxaloacetate)로 전환시킨다. 한편 역반응이 일어나는 경우는 아스파테이트가 생성된다.
반면, GPT는 알라닌(L-alanine)의 아미노기를 알파케토글루타레이트(α-ketoglutarate)에 전이하여 글루타메이트(L-glutamate)와 파이루베이트(pyruvate)를 생성하는 반응에 관여한다.
이들 효소반응을 요약하면 다음과 같다.
Figure kpo00000
Figure kpo00001
따라서 GOT는 아스파테이트 트랜스아미네이즈(aspartate transaminase, AST)라고 불리우기도 하며, GPT는 알라닌 트랜스아미네이즈(alanine transaminase, ALT)라고 불리우기도 한다.
GOT와 GPT를 분석하는 기존의 분석 방법은 세계특허 WO91/13169 등에서 기술된 바와 같이 위의 화학식 1과 화학식 2에서 각각 생성된 옥살로아세테이트와 파이루베이트를 기질로 하는 효소반응을 이용하여 개발되었다.
이와 같은 방법은 이미 진단 킷트 형태로 상용화되어 있다.
즉, GPT 측정의 경우 화학식 1의 반응에서 생성된 옥살로아세테이트가 말레이트 탈수소효소(malate dehydrogenase, MDH)의 반응으로 말레이트로 전환되는데, 이때 조효소인 NADH(1,4-dihydronicotinamid adenine dinucleotide)가 NAD+(β-nicotinamide-adenine dinucleotide)로 전환된다(화학식 3).
따라서 GOT 효소활성은 1분당 생성되는 옥살로아세테이트의 양에 비례하므로 MDH의 반응에 의해 소모되는 NADH의 양을 측정함으로써 GOT의 양을 알 수 있게 된다.
보통 이것은 기존의 분광학적 방법을 사용하여 365㎚의 파장하에서 1분당 NADH의 흡광도 감소 변화를 측정한다(J. Clin. Invest., 34: 131-133, 1995).
Figure kpo00002
한편, GPT의 측정은 (2)의 반응에서 생성된 파이루베이트가 락테이트 탈수소효소(lactate dehydrogenase, LDH)의 반응으로 락테이트로 전환되는 것을 이용한다(화학식 4).
이 반응에서도 역시 조효소인 NADH가 NAD+로 전환되기 때문에 NADH의 흡광도 변화를 측정하는 같은 원리를 이용하고 있다(J. Lab. Clin. Med., 46: 785-789, 1955).
Figure kpo00003
이 밖에도 화학식 1과 화학식 2에서 얻어진 옥살로아세테이트와 파이루베이트를 여러 효소 반응에 의해 발색염료를 형성한 후 이를 가시광선 흡수 측정법으로 정량하기도 한다(U.S. patent 4,271,265).
위와 같은 반응기작에 기초하여 GOT와 GPT를 측정하기 위한 전기화학식 바이오센서도 몇 가지 보고된 바 있다.
첫째, 옥살아세테이트 탈탄산효소(oxalacetate decarboxylase)라는 효소의 반응을 이용한 예이다. GOT 반응 화학식 1에서 생성된 옥살로아세테이트를 옥살아세테이트 탈탄산효소 반응 및 파이루베이트 산화효소(puruvate oxidase)를 연속적으로 이용한 분석시스템이 보고된 바 있으며(Anal. Chem., 56: 1876-1880, 1984), GPT 반응 화학식 2에서 생성된 파이루베이트를 기질로 생성되는 과산화수소(H2O2) 또는 소모되는 용존산소의 양을 전기화학적으로 측정하는 방법(Anal. Chim. Acta., 159: 81-86, 1984)이 보고된 바 있다.
다른 한 예는 글루타메이트 산화효소(glutamate oxidase) 또는 글루타메이트 탈수소효소(glutamate dehydrogenase) 반응을 이용하여 GOT와 GPT의 효소반응 화학식 1과 화학식 2에서 공통으로 생성되는 글루타메이트를 측정하는 경우이다. 글루타메이트 산화효소를 이용하는 경우는 화학식 5와 같이 생성되는 과산화수소의 전극 산화반응을 전기화학적으로 측정하므로써 GOT와 GPT를 정량할 수 있다(Anal. Chim. Acta. 245: 57-62, 1991).
Figure kpo00004
반면, 글루타메이트 탈수소효소 반응을 이용하는 경우는 화학식 6과 같이 생성되는 조효소인 NAD(P)H의 전극산화반응으로부터 GOT와 GPT를 정량할 수 있다.
Figure kpo00005
전혈(whole blood)이나 혈청(serum)중의 GOT 혹은 GPT측정은 대부분 분광학적인 방법을 이용한 분석법을 채택하고 있다.
이미 기술한 바와 같이 기존의 상용화된 진단 킷트의 경우 대부분 말레이트 탈수소효소와 락테이트 탈수소효소의 반응결과 소모되는 NADH의 흡광도 변화를 측정하는 시스템이다.
따라서 이들 방법은 GOT 및 GPT 측정시 두가지 효소반응 시스템을 각각 적용해야 하며, 동시측정은 불가능하다. 또한 NADH 측정을 위한 자외선 흡수분광법(UN absorption spectrometry)이나 형광분석법의 경우 광원(light sorce)과 광측정계(photometer)가 필수적이며 또한 특정 파장을 선택하기 위한 필터(filter) 또는 모노크로메이터(monochromator)가 필요하다.
따라서 전체적인 시스템이 복잡해져 저가의 분석 시스템 제작에 문제점이 있다.
이미 보고된 바 있는 GOT 또는 GPT 활성측정용 바이오센서 시스템 중에서 파이루베이트 산화효소 또는 글루타메이트 산화효소의 반응을 이용하는 경우, 식(5)와 같이 반응산물인 과산화수소(H2O2)의 양을 측정하기 위해 백금 전극을 트랜스듀서로 활용하여 이들 트랜스듀서의 감응부위에 효소 고정화막을 부착시킨 형태로 개발되었다.
이 경우 막(membrane)형태로 고정화된 효소의 활성과 바탕전극인 트랜스듀서의 감도 및 성능에 의해 바이오센서의 특성이 좌우되며, 글루타메이트 산화효소의 정제된 효소가격이 매우 비싸고, 효소의 특이활성이 낮아 감도 및 정확성에 있어서 한계가 있어 실용화하기 어려우며, 또한 시료인 혈액 중에 존재하는 다른 전극활성의 간섭물질(interferences)에 의한 영향도 크기 때문에 정확한 정량이 어려웠다.
따라서, 본 발명에서는 기존에 보고된 GOT와 GPT 측정용 바이오센서의 측정방법과는 달리 글루타메이트 탈수소효소 한가지만을 사용하여 간기능의 정상유무 판단 및 초기 간염의 정확한 진단을 하는데 그 지표가 될 수 있는 GOT 및 GPT활성을 정확하게 측정할 수 있는 바이오센서를 제공하는 데에 그 목적이 있다. 또한, 본 발명에서는 전기화학발광을 트랜스듀서로 사용함으로써 전기장이나 자기장에 대한 간섭을 최소한으로 줄일 수 있고, 극히 미세한 양을 손쉽게 측정할 수 있는 장점을 기대할 수 있다.
도 1은, 글루타메이트-옥살로아세테이트 트랜스아미네이즈와 글루타메이트 탈수소효소에 의한 효소반응을 연속적으로 나타낸 설명도.
도 2는, 글루타메이트-파이루베이트 트랜스아미네이즈와 글루타메이트 탈수소효소에 의한 효소반응을 연속적으로 나타낸 설명도.
도 3은, 전기화학발광식에 의한 NAD(P)H의 정량원리를 나타낸 설명도.
도 4는, 본 발명의 한 실시예를 나타낸 광섬유바이오센서의 단면도와 그 광섬유바이오센서를 사용하는 전기화학발광식 측정장치를 나타낸 장치도.
도 5는, 본 발명의 흐름계 측정셀을 사용하는 흐름계 측정시스템의 구성을 나타낸 장치도.
도 6은, 본 발명의 다른 실시예인 샌드위치형 흐름계측정셀을 나타낸 단면도.
도 7은, 본 발명의 또 다른 실시예인 평행형 흐름계 측정셀을 나타낸 단면도.
- 도면의 주요부분에 대한 설명 -
10, 30, 50 : 글루타메이트 탈수소효소 고정층,
12, 40, 60 : 유리판,
20, 32, 52 : 트리스(2,2-비피리딜)루테늄(Ⅱ) 고정층,
100 : 광섬유바이오센서부,
104 : 측정셀,
312 : 시료투입구,
314 : 시료출구.
본 발명에서는 두 개의 효소반응에 의해 공히 생성되는 물질인 글루타메이트의 양을 글루타메이트 탈수소효소를 이용하여 측정하므로써 GOT와 GPT를 동시에 측정할 수 있는 광섬유바이오센서를 고안하였다.
즉, 본 발명은 GOT와 GPT 효소활성반응에 의하여 생성된 글루타메이트의 탈수소효소반응을 매개하는 글루타메이트탈수소효소층과, 상기 효소층에서 생성되는 NAD(P)H와 반응하여 빛을 발생하게 하는 트리스(2,2-비피리딜)루테늄(Ⅱ)층과, 전압이 인가되는 전극과, 상기한 NAD(P)H와 트리스(2,2-비피리딜)루테늄(Ⅱ)와의 반응에서 발생되는 빛을 감지하는 감지부를 포함하는 구성을 가진 광섬유바이오센서를 제공하여 글루타메이트-옥살로아세테이트 트랜스아미네이즈(GOT)와 글루타메이트-파이루베이트 트랜스아미네이즈(GPT) 효소활성을 순차적으로 측정할 수 있게 하였다.
상기한 구성에 의하면, GOT와 GPT의 효소활성반응결과 생성되는 글루타메이트는 탈수소효소층에서 글루타메이트 탈수소효소 반응에 의해 도 1, 도 2에 나타낸 바와 같이 알파케토글루타레이트(옥소글루타레이트라고 하기도 함)를 생성함과 동시에 조효소인 NAD(P)+가 NAD(P)H로 전환되는 반응이 일어난다. 도 3에 나타낸 바와 같이 일정 전압이 인가되어 있는 전극상에서 트리스(2,2-비피리딜)루테늄(Ⅱ)(이하 ＂Ru(bpy)3 2+＂라 함)로부터 산화 생성된 Ru(bpy)3 3+화학종은 상기한 탈수소효소층에서 전환된 NAD(P)H와 반응하여 610㎚에서 최대의 파장을 갖는 빛을 발생한다. 발생된 빛은 광섬유로 구성된 감지부에서 흡수한다.
이때 발생된 빛의 양은 NAD(P)H의 양에 비례하므로 이는 결국 GOT와 GPT의 효소활성에 비례하게 된다.
이하 본 발명에서 고안된 전기화학발광식 광섬유 바이오센서의 구조적 특성을 실시예를 들어 자세히 설명한다.
실시예 1 GOT 및 GPT효소 활성 측정을 위한 전기화학발광식 광섬유 바이오센서의 제작방법 및 그 측정 동작원리
(1) 전기화학발광식 광섬유바이오센서의 제작방법
광섬유바이오센서의 제작방법을 도 4를 참고하여 설명한다. 먼저 효소가 고정화된 층(10)의 제작 과정은 다음과 같다. 파이펫팁을 직경이 6㎜가 되도록 자른 후, 한쪽면에 에폭시 수지를 사용하여 유리판(12)을 붙인다. 이러한 유리면(12)의 한쪽은 효소 고정화층을 만드는 지지대로 이용한다. 즉, 효소 고정화층은 다음과 같은 고졍화방법을 사용하여 제조할 수 있다. 글루타메이트 탈수소효소(EC 1.4.1.3.) 10㎎(약200U)과 아데노신 디포스페이트(ADP) 10㎎을 Tris-HCl 완충용액(pH8) 20μL 및 보빈 세럼 알부민(BSA) 10%용액 20μL과 서로 섞어준 후, 여기에 폴리비닐알코올(PVA) 3% 용액 10μL를 섞는다. 이러한 용액을 앞서 언급한 파이펫팁의 안쪽 유리면에 잘 펴주고 1% 글루타알데히드용액 1μL을 사용하여 냉장고 내에서 1시간 동안 가교화(cross-linking)시킴으로써 효소의 고정화층을 완성한다. 그 다음, 효소고정화층이 형성된 유리면에 광섬유를 장착시킨다. 한편, 효소가 고정화된 층(10)은 필요시 새것으로 교체할 수 있게 된다. 백금 전극을 메탄올과 물로 차례로 씻은 후 건조시킨다. 약 25μL의 양이온 교환성 2.5% 내피온(Nafion)용액을 마이크로 파이펫을 이용해 백금 전극 표면(14)에 뿌려준 후 약 10분간 건조 시킨다. 내피온 필름이 접착된 백금 전극은 0.1M황산 용액에 약 10분 가량 담근 후 다시 1.0mM Ru(bpy)3 2+용액에 약 10분간 담근다. 제작된 백금 전극은 테프론 어댑터(22)에 의해 광섬유와 연결한다. 광섬유 바깥쪽에는 백금 대전극(18)과 Ag/AgCl비교전극(16)을 장착한다. 이와 같이 제작된 광섬유 바이오센서는 외부 빛이 차단된 측정셀에 설치한다.
(2) GOT/GPT 효소의 활성도 측정과정
GOT 효소의 활성도 측정과정을 위한 과정은 아래와 같다. 먼저 100mM 포스페이트 완충용액이 주사된 상태에서 Ru(bpy)3 2+가 고정화된 백금 전극은 비교 전극 대비 1.3V의 전압이 인가된다. 다음 GOT의 경우 알파케토글루타레이트, 아스파테이트(L-aspartate, 100mM) 및 조효소 NAD(P)+(1mM)가 들어 있는 완충용액이 일정 온도가 유지되는 측정셀에 주사된다. 이때 GOT와 GPT에 공통으로 반응하는 기질인 알파케토글루타레이트의 경우, 도 1, 도 2에서와 같이 글루타메이트 탈수소효소 반응결과로도 생성되기 때문에, 반응에 필요한 초기 알파케토글루타레이트 양을 과량으로 하여 GOT및 GPT 효소반응이 기질인 알파케토글루타레이트의 양에 의해서 영향을 받지 않도록 하였다. 본 실시예에서는 500mM 알파케토글루타레이트 탈수소효소 반응에 의해 NAD(P)H를 형성하고 이는 다시 Ru(bpy)3 2+와 반응하여 610㎚에 최대의 파장을 갖는 오렌지색의 빛을 발생한다. 이때 광섬유를 통해 광측정기에 의해 측정된 빛의 양은 GOT효소의 활성에 비례하게 된다.
GPT활성 측정시 동작은 GPT 효소반응용 기질이 아스파테이트 대신 알라닌(L-alanine)용액인 것을 제외하고는 GOT측정의 경우와 같다.
실시예 2 GOT 및 GPT활성의 측정을 위한 전기화학발광식 흐름계분석(FIA)시스템의 구성
본 발명에서는 상기와 같은 윈리에 기초하여 효소반응에 필요한 조효소와 각각의 기질을 광섬유 바이오센서가 장착된 측정셀로 이동시켜주는 일반적인 흐름계 분석(FIA)시스템을 도 5와 같이 구성하였다. 흐름계분석(FIA) 시스템에 사용하는 흐름계 측정셀(flow cell)은 도 6과 도 7에서와 같이 샌드위치형 (sandwitch-type)과 평행형(parallel-type)의 두가지 형태가 가능하다.
(1) 샌드위치형(sandwitch-type) 흐름계 측정셀(flow cell)의 제작
샌드위치형 흐름계 측정셀의 제작 방법을 도 6을 참고하여 설명한다. 이의 제작 방법은 앞서 실시예 1에서와 같은 방법으로 먼저 파이펫팁을 이용하여 글루타메이트 탈수소 효소 고정화층(30)을 만든다. 또한 Ru(bpy)3 2+을 고정화시킨 백금전극(32)을 제작한다. 백금 전극과 광섬유 사이에는 프렉시글라스창(40)과 약 100μL의 부피를 갖게 하는 테프론 스페이서(38)를 삽입한 후 나사를 이용하여 모두 연결 고정시킨다. 유체의 흡입구(312)와 출구(314)가까이에는 Ag/AgCl 비교전극(34)과 백금 대전극(36)을 장착한다. 이와같이 제작된 광섬유 바이오센서는 외부 빛이 차단된 측정셀(104)에 설치한다.
(2) 평행형(parallel-type)흐름계 측정셀(folw cell)의 제작
평행형 흐름계 측정셀의 제작 방법을 도 7를 참고하여 설명한다. 이의 제작 방법은 앞서 실시예1에서와 같은 방법으로 먼저Ru(bpy)3 2+을 고정화 시킨 백금 전극(52)을 제작한다. 다음 이웃한 백금 전극위에 글루타메이트 탈수소효소를 녹인 양이온 교환성 AQ 고분자 용액 25μL를 마이크로 파이펫을 이용해 뿌려준 후 약 10분간 건조 시킨다. 백금 전극과 광섬유 사이에는 프렉시글라스창과 약 100μL의 부피를 갖게 하는 테프론스페이서(58)를 삽입한 후 나사를 이용하여 모두 연결 고정시킨다. 유체의 흡입구(312)와 출구(314) 가까이에는 Ag/AgCl비교전극(54)과 백금 대전극(56)을 정착한다. 이와같이 제작된 광바이오센서는 외부 빛이 차단된 측정셀에 설치한다.
(3) GOT/GPT효소의 활성도 측정과정
GOT/GPT효소의 활성도 측정과정을 위한 과정을 도 5를 참조하여 설명하면 아래와 같다.
먼저 GOT의 경우 100mM 포스페이트와 암모늄 아세테이트혼합 완충 용액(302)은 연동펌프(300)에 의해 측정셀(104)로 항시 흐른다. Ru(bpy)3 2+가 고정화된 백금 전극(32),(52)은 비교 전극(34),(54) 대비 1.3V의전압이 인가된다. 다음 GOT의 경우 알파케토글루타레이트, 아스파테이트(100mM) 및 조효소 NAD(P)+(1mM)가 들어 있는 완충용액(304)이 일정 온도가 유지되는 측정셀(104)로 흘러들어간다. 이때 GOT와 GPT에 공통으로 반응하는 기질인 알파케토글루타레이트의 경우, 도 1, 도 2에서와 같이 글루타메이트 탈수소효소 반응 결과로도 생성되기 때문에, 반응에 필요한 초기알파케토글루타레이트 양을 과량으로 하여 GOT및 GPT효소반응이 기질인 알파케토글루타레이트의 양에 의해서 영향을 받지 않도록 하였다. 본 실시예에서는 500mM 알파케토글루타레이트 용액을 사용하였다. 다음 정량하고자 하는 GOT시료는 주사구(312)에 주입된다. 이에 따라 GOT 효소 반응에 의해 생성된 글루타메이트가 글루타메이트 탈수소효소 반응에 의해 NAD(P)H를 형성하고 이는 다시Ru(bpy)3 2+와 반응하여 610㎚에 최대의 파장을 갖는 오렌지색의 빛를 발생한다. 이때 광섬유를 통해 광측정기에 의해 측정된 빛의 양은 GOT효소의 활성에 비례하게 된다.
GPT활성 측정시 동작은 GPT효소반응용 기질이 아스파테이트 대신 알라닌(L-alanine)용액(반응(4))인 것을 제외하고는 GOT측정의 경우와 같다.
이와 같이 검출된 GOT, GPT활성에 비례하는 전기적신호는 컴퓨터의 마이크로프로세서 조절부(204)에 의해 각각의 효소활성 값으로 표시된다. 시료 투입을 포함한 모든 흐름계분석시스템의 기능 동작은 역시 내장된 마이크로프로세서 조절부에 의해 조절될 수 있다.
본 발명은 광섬유를 이용한 전기화학발광식 바이오센서 측정시스템을 구현시킴으로써, 간기능의 정상유무 판단 및 초기 간염의 정확한 진단을 하는데 그 지표가 될 수 있는 GOT 및 GPT활성을 정확하게 측정할 수 있는 광섬유바이오센서 제작기술 및 측정방법을 제공해 준다. 또한, 기존의 측정방법 보다 간단하게 흐름계분석법을 적용함으로써 단위시간당 분석가능한 시료의 수를 월등히 늘릴 수 있는 장점이 있다.
특히 본 발명은 기존의 GOT, GPT 측정반응과 달리 두 효소반응에서 공히 생성되는 글루타메이트를 기질로 하는 글루타메이트 탈수소 효소 반응을 이용하여 생성된 NAD(P)H를 전기화학발광식으로 측정한다는 점이 가장 큰 특징이라고 할 수 있다.
이와 같은 본 발명에 의한 분석 기술은 향후 마이크로머시닝(micro machining)기술과 광다이오드제작 기술을 접목시킴으로써 소형화된 자동화 광섬유 측정 시스템을 개발할 수 있다.

Claims (6)

  1. GOT와 GPT효소활성반응에 의하여 생성된 글루타메이트의 탈수소효소반응을 매개하는 글루타메이트탈수소효소층과;
    상기 효소층에서 생성되는 NAD(P)H와 반응하여 빛을 발생하게 하는 트리스(2,2-비피리딜)루테늄(Ⅱ)층과;
    전압이 인가되는 전극과;
    상기한 NADPH와 트리스(2,2-비피리딜)루테늄(Ⅱ)와의 반응에서 발생되는 빛을 감지하는 감지부를 포함하는 것을 특징으로 하는 글루타메이트-파이루베이트 트랜스아미네이즈(GPT)와 글루타메이트-옥살로아세테이트 트랜스아미네이즈(GOT) 효소활성을 순차적으로 측정할 수 있는 전기화학발광식 광섬유 바이오센서.
  2. 제1항에 있어서, 상기한 감지부는 광섬유인 것을 특징으로 하는 글루타메이트-파이루베이트 트랜스아미네이즈(GPT)와 글루타메이트-옥살로아세테이트 트랜스아미네이즈(GOT) 효소활성을 순차적으로 측정할 수 있는 전기화학발광식 광섬유 바이오센서.
  3. 제1항에 있어서, 상기한 효소층과 상기한 감지부 사이에 투명한 기판이 포함된 것을 특징으로 하는 글루타메이트-파이루베이트 트랜스아미네이즈(GPT)와 글루타메이트-옥살로아세테이트 트랜스아미네이즈(GOT) 효소활성을 순차적으로 측정할 수 있는 전기화학발광식 광섬유 바이오센서.
  4. 제1항에 있어서, 상기한 트리스(2,2-비피리딜)루테늄(Ⅱ)층은 백금전극위에 고정된 것을 특징으로 하는 글루타메이트-파이루베이트 트랜스아미네이즈(GPT)와 글루타메이트-옥살로아세테이트 트랜스아미네이즈(GOT) 효소활성을 순차적으로 측정할 수 있는 전기화학발광식 광섬유 바이오센서.
  5. 제1항에 있어서, 상기한 효소층과 상기한 트리스(2,2-비피리딜)루테늄(Ⅱ)층이 상하로 배치된 것을 특징으로 하는 글루타메이트-파이루베이트 트랜스아미네이즈(GPT)와 글루타메이트-옥살로아세테이트 트랜스아미네이즈(GOT) 효소활성을 순차적으로 측정할 수 있는 전기화학발광식 광섬유 바이오센서.
  6. 제1항에 있어서, 상기한 효소층과 상기한 트리스(2,2-비피리딜)루테늄(Ⅱ)층이 옆으로 평행하게 배치된 것을 특징으로 하는 글루타메이트-파이루베이트 트랜스아미네이즈(GPT)와 글루타메이트-옥살로아세테이트 트랜스아미네이즈(GOT) 효소활성을 순차적으로 측정할 수 있는 전기화학발광식 광섬유 바이오센서.
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