KR100207289B1

KR100207289B1 - 헬리코박터 파이로리 유래의 항원단백질을 함유하는 리포좀

Info

Publication number: KR100207289B1
Application number: KR1019960047370A
Authority: KR
Inventors: 박용식; 염정선; 김장성; 김동균; 유금주; 서원영; 장지훈; 최명준; 김태연; 정홍석; 문홍모
Original assignee: 허영섭; 재단법인목암생명공학연구소
Priority date: 1996-10-22
Filing date: 1996-10-22
Publication date: 1999-07-15
Also published as: KR19980028335A

Abstract

본 발명은 헬리코박터 파이로리(Helicpbacter pylori) 유래의 항원단백질을 함유하는 리포좀 제제(liposomes formulation)에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 본 발명은 헬리코박터 파이로리 유래의 재조합 단백질인 UreB, CagA 및 Omp22 항원을 점막면역 유도의 pH에 민감한 리포좀에 포획시켜, 체액성 면역과 점막 면역을 동시에 유발하고, 헬리코박터 파이로리균 공격에 대한 방어 효과를 나타내는 리포좀 제제 및 헬리코박터 파이로리 감염예방용 백신으로서의 용도를 제공한다. 따라서, 본 발명의 리포좀 제제는 헬리코박터 파이로리에 대한 예방 백신으로 효과적으로 이용될 수 있다.

Description

헬리코박터 파이로리 유래의 향원단백질을 함유하는 리포좀

본 발명은 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori) 유래의 항원단백질을 함유하는 리포좀 제제(Iiposomes formulation)에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 본 발명은 헬리코박터 파이로리 유래의 재조합 단백질인 UreB, CagA 및 Omp22 항원단백질을 점막면역을 유도하는 리포좀에 포획시켜, 헬리코박터 파이로리에 대한 항체를 형성하고, 생균공격에 대한 방어 효과를 나타내는 리포좀 제제 및 헬리코박터 파이로리 감염예방용 백신으로서의 용도에 관한 것이다.

헬리코박터 파이로리는 1983년 워렌(Warren)과 마샬(Marshall)에 의해 최초로 그의 존재 및 병원성이 제안된 이후로, 전세계적으로 이와 관련된 수많은 연구가 진행되고 있다(참조: Waren, J.R. and Marshall, B.J., Lancet, 1:1273-1275(1983)).이 세균은 사람의 위 유문부에서 균집락을 형성하여 B형 위염 및 십이지장궤양을 유발하는 것으로 알려졌으며, 또한 위암 발생의 일차적 요인이라는 역학적 증거가 계속하여 보고되고 있다(참조: parsonnet J. et al., N. Eng. J. Med., 325:1127-1131(1991): Blaser, M.J., Gastroenterology, 102:7290727(1992)).

실제적으로 위질환 환자와 헬리코박터 파이로리의 연관성을 조사한 보고를 살펴보면, 활동성 위염의 경우 64.95%, 위궤양의 경우 35.86%, 십이지장 궤양의 경우 75-100% 정도가 헬리코박터 파이로리에 의해 유발되며, 이러한 감염률은 국내외가 비슷한 것으로 알려져 있다. 현재, 십이지장 궤양을 치료하고자, 두 가지 종류의 항생제, 예를 들면 암옥시실린(Amoxycillin) 및 메트로니다졸(Metronidasole)을 비스무스염(bosmuth salt)이나 오메프라졸(Omeprasole)과 같은 제산제와 함께 투약하여, 잠정적으로는 20-90% 정도로 헬리코박터 파이로리를 제거하며, 위염 증세의 완화와 십이지장 궤양의 재발을 감소시키고 있다. 이와 같은 항생제 치료법은 한달 여에 걸쳐 하루 수회 복용하여야 하는 불편이 있으며, 실험실적 조건에서는 헬리코박터 파이로리가 항생제에 민감함에도 불구하고 셍체내에서는 그다지 효과적이지 못하고 재감염을 방지할 수도 없다는 문제점이 있었다. 또한, 장기적으로 볼 때, 항생제에 대하여 내성을 갖는 헬리코박터 파이로리가 나타날 가능성이 높은데, 이러한 경우 기존의 치료 방법으로 해결하기가 어렵다.

따라서, 헬리코박터 파이로리에 의한 감염과 그에 따른 위장 질환의 예방과 치료를 위하여, 단순한 화학요법이 아닌 면역 체계의 활성호 등과 같은 근본적인 대책이 요구되고 있는 실정이다.

한편, 헬리코박터 파이로리에 대한 백신은 최근에 개발되기 시작하였는데, 우레아제 항원(urease antigen)은 백신개발에서의 사용 가능성이 가장 높은 항원으로 보고되도 있다. 우레아제 단백질은 표면에 발현되는 헬리코박터 파이로리의 주된 항원으로서, 헬리코박터 파이로리의 진단시약용으로 사용되고 있으며, 각종 실험을 통하여 가장 강력한 면역원성을 나타내는 단백질로 보고되었다. 이러한 우레아제는 UreA와 UreB의 소단위 단백질로 구성되는데, 이중 UreB 단백질이 주된 항원으로 알려져 있다.

그 외에, 헬리코박터 파이로리의 항원중에서 CagA 단백질이 잘 알려져 있는데, 이는 128kDa 크기의 단백질로서 헬리코박터 파이로리의 독성과 관련된 항원으로 밝혀졌으며, 헤리코박터 파이로리의 감염과 발병에 주요한 역할을 하는 단백질로 추정되고 있다(참조: Cover T.L et al., Infect. Immune., 58:603(1990)).

아울러, 세균감염에 대한 면역반응에 있어서 그 세균의 외막댄백질이 주요한 역할을 하는 것으로 알려져 있으며, 이러한 외막단백질 항원이 백신개발의 주요한 표적이 되고 있다. 이와 관련하여, 최근에 헤리코박터 파이로리에 대해 항원성과 면역원성을 가지는 외막단백질 Omp22의 존재 뿐만 아니라, 재조합 미생물에 의한 전기 외막단백질의 대량제조가 보고된 바 있다(참조: 대한민국 특허출원 제 96-2105호)

이러한 사실들에 근거하여, 본 발명자들은 상기의 3가지 단백질을 혼합한 형태의 백신을 개발하려는 연구를 진행하였다. 우선, 효율적인 백신의 개발을 위해서는 적절한 애쥬번트 시스템(adjuvant system)이 필수적이고, 이를 위해서는 헬리코박터 파이로리의 감염양상 및 균의 특성을 고려하여야 한다. 헬리코박터 파이로리는 일반적으로 위 유문부의 점막층에 증식하여 병원성을 일으키는데, 이러한 헬리코박터 파이로리의 예방 및 제거를 위해서 점막면역을 유도하는 것이 가장 효과적인 방법으로 추정할 수 있으며, 이러한 점막면역의 유도를 위해서는 점막면역에 특이적인 애쥬번트 시스템이 필요하다.

점막면역을 유도하는 애쥬번트로 가장 많이 사용되는 것은 콜레라 톡신인데, 실제로 헬리코박터 파이로리의 우레아제 항원을 콜레라 톡신에 결합시킨 백신으로 실험동물을 면역하였을 때, 헬리코박터 파이로리에 대한 방어효과가 확인되었다. 그러나, 콜레라 톡신은 각종 부작용으로 인해 인체에 직접 사용될 수 없으므로, 실제로 인체에 사용될 수 있는 백신 애쥬번트를 개발하려는 연구가 활발히 진행되고 있다. 최근에, 몇몇 연구자들은 리포좀을 이용한 점막면역의 증대 방법을 모색해 왔는데, 소혈청알부민을 모델 항원으로 사용하여 이를 함유한 리포좀을 경구투여한 결과, 점막 분비 IgA 뿐만 아니라, 혈중내의 IgG 및 IgA도 생성됨을 확인하였다(참조: Geno, R.J. et al., Ann. NY Acad. Sci., 409:650(1983)).

이와 관련하여, 본 발명자들은 항원의 선택적인 전달이 가능한 pH에 민감한 리포좀의 제조방법(참조: Choi, M.J. et al., J. Biochem., 112:694(192))과 그 조성에 대해서 특허를 출원한 바 있고(참조: 대한민국 특허공개 제 95-7834호 및 제95-7835호), 최근에는 이러한 리포좀의 경구투여 뿐만 아니라, 근육주사 방법으로도 분비성 IgA(secretory IgA)의 생성을 유도하는 리포좀의 조성을 발명하여 특허를 출원한 바 있다(참조: 대한민국 특허출원 제 95-65418호).

이러한 배경하에서, 본 발명자들은 이미 공지된 pH에 민감한 리포좀 조성으로 헬리코박터 파이로리 유래의 재조합 단백질 UreB, CagA 및 Omp22 항원을 포획한 리포좀을 제조하고, 이를 실험 동물에 면역하면 항원에 대한 체액성 면역 및 점막면역이 동시에 유도될 뿐만 아니라, 생균공격에 대해 방어능이 나타나는 것으로 확인되어, 전기 재조합 단백질 함유 리포좀이 헬리코박터 파이로리 감염의 예방에 이용될 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

결국, 본 발명의 목적은 헬리코박터 파이로리의 항원단백질을 함유하여, 체액성 면역과 점막 면역을 동시에 유도하고, 생균공격에 대해 방어능력을 부여하는 헬리코박터 파이로리 감염 예방 백신용 리포좀 제제를 제공하는 것이다.

제1도는 헬리코박터 파이로리 UreB, CagA 및 Omp22 재조합 단백질의 3가지 혼합항원을 함유한 리포좀으로 면역된 마우스의 혈청내에 존재하는 면역 글로불린 G(IgG)의 형광항체가를 나타내는 그래프이다.

제2도는 헬리코박터 파이로리 UreB, CagA 및 Omp22 재조합 단백질의 3가지 혼합항원을 함유한 리포좀으로 면역된 마우스의 혈청내에 존재하는 면역 글로불린 A(IgA)의 형광항체를 나타내는 그래프이다.

제3도는 헬리코박터 파이로리 UreB, CagA 및 Omp22 재조합 단백질의 3가지 혼합항원을 함유한 리포좀으로 면역된 마우스의 가검물(대변)내에 존재하는 분비성 면역글로불린 A(sIgA)의 형광항체를 나타내는 그래프이다.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한다.

우선, 본 발명자들은 점막면역을 유도하는 pH에 민감한 리포좀에 포획시킬 헬리코박터 파이로리의 항원단백질, 바람직하게는 재조함 UreB 단백질, 재조합 CagA 단백질 및 재조합 Omp22 단백질을 제조하였다. 즉, GST(glutathione S-transferase)를 융합파트너로 갖는 발현벡터 pGEX-2T에 상기의 단백질에 해당되는 유전자를 각각 삽입하여, 재조합 발현벡터 pGEX-2T/UreB, pGEX-2T/CagA 및 pGEX-2T/Omp22를 제조한 다음, 그 발현벡터로 대장균을 형질전환시키고 배양하여, 각 단백질의 발현을 유도하고, 그 재조합 단백질을 수득하였다.

이어, 수득한 재조합 단백질들은 토끼 항-헬리코박터 파이로리 항체 및 헬리코박터 파이로리에 감염된 사람의 혈청에 의해서 자연형 단백질들과 동일한 정도로서 감지되므로, 우수한 항원성을 유지하고 있음을 알 수 있었다. 아울러, 상기에서 수득한 재조합 단백질들은 마우스에 근육주사하여 자연형 단백질과 동일한 정도로서 항체를 형성하는 면역원선이 있음을 확인하였다.

이와 같이 우수한 항원성과 면역원성을 가지는 재조합 단백질 항원으로 체액성면역과 점막면역을 높은 수준으로 동시에 유도하기 위하여, 상기 재조합 단백질 모두를 pH에 민감한 리포좀에 포획시켰다. 즉, 포스파티딜에탄올아민-β-올레일-γ-팔미토일(phosphatidylethanolamine-β-oleoyl-γ-palmitoyl: POPE)과 콜레스테롤헤미숙시네이트(cholesterol hemisuccinate: CHOH)를 몰비율로 6:4 내지 8:2, 가장 바람직하게는 7:3으로 혼합한 인지질이 얇은 막을 형성하게 한 다음, 포획시킬 단백질 혼합항원, 가장 바람직하게는 UreB, CagA 및 Omp22 재조합 단백질이 1:1:1의 질량비로 혼합된 항원을 첨가하여 pH에 민감한 리포좀을 제조하였다. 이때, 단백질 항원을 함유하는 리포좀은 항원과 인지질을 질량비율로 1:5 내지 1:25, 가장 바람직하게는 1:20이 되도록 혼합하여 제조한 것이다.

전기에서 제조된 단백질 항원 함유의 pH에 민감한 리포좀으로 면역된 마우스의 체액성 면역을 확인하기 위하여, 마우스의 혈청을 수득하고, 헬리코박터 파이로리항원이 코팅된 슬라이드를 이용한 간접면역 형광항체법으로 헬리코박터 파이로리에 대한 항체역가를 측정하였다. 그 결과, 상기의 3가지 혼합항원을 면역한 마우스 모두에서 100% 면역효과를 나타내었으며, 이때 IgG의 항체역가는 1,200 내지 1,400 정도이고, IgA의 항체역가는 250 내지 350 정도를 나타내었다, 또한, 사용한 항체역가측정용 항원은 헬리코박터 파이로리의 항원이므로, 면역 마우스에서 생성된 항체는 헬리코박터 파이로리에 특이적임을 확인할 수 있었다. 한편, 본 발명에 의해 제조된 pH에 민감한 리포좀은 체액성 면역을 유도할 수 있는 단일 인산화지질 A(monophosholipid A), 퀼 A(quil A), 뮤라밀 디펩타이드(muramyl dipeptide) 등의 면역보조제(adjuvant)를 추가로 함유할 수 있다.

또한, 전기에서 제조된 단백질 향원 함유의 pH에 민감한 리포좀으로 면역된 마우스의 점막 면역을 확인하기 위하여, 면역 마우스로부터 가검물(대변)을 채취하고 그로부터 항체를 추출하여, 헬리코박터 파이로리에 특기적인 분비성 면역글로불린 A(sIgA)의 생성여부를 상기의 간접멱역 형광항체법과 동일한 조건으로 확인한 결과, 헬리코박터 파이로리에 특이적인 sIgA가 생성됨을 확인하였다.

일반적으로, 백신으로의 효과를 검증하기 위해서는 최종적으로 실험동물에서의 그 균주에 대한 방어능력을 확인하여야 하므로, 헬리코박터 파이로리의 감염동물모델인 신생무균자돈(gnotobiotic piglet)에 상기의 리포좀 제제를 면역시킨 후, 항체형성여부를 확인하고, 헬리코박터 파이로리 공격에 대한 방어능을 확인하였다. 그결과, 상기의 3가지 혼합항원을 함유한 리포좀 제제는 무균돼지에서 체액성면역과 점막면역을 동시에 유도하였으며, 헬리코박터 파이로리의 공격에 대해 100% 방어능력을 나타내었다. 따라서, 본 발명의 리포좀 제제는 헬리코박터 파이로리에 대한 예방 백신으로 효과적으로 이용될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[실시예 1]

[헬리코박터 파이로리 유래의 재조합 단백질 항원을 함유한 pH에 민감한 리포좀의 제조]

POPE/CHOH(7:3 몰비율)으로 된 인지질을 유리병(glass vial)에 넣고 유기용매를 가하여, 유리병 내에 얇은 막을 형성시켰다. 그런 다음, 후술하는 바와 같이 제조된 헬리코박터 파이로리의 재조합 항원단백질 UreB, CagA 및 Omp22를 동일한 질량비로 함유하고 있는 완충용액(pH 8.0)을 첨가하여 충분히 소화시킨 다음, 강하게 교반하여 중첩된 다층막 리포좀(multiamellar vesicle, MLV)을 제조하고, 이를 초음파분쇄(sonication)하여 소형 단층막 리포좀(small unilamellar vesicle, SUV)을 제조하였다. 이렇게 하여 제조된 SUV를 상온에서 2-12시간 방치하고, 액체질소로 급속히 냉동시키고 다시 상온에서 천천히 해동시키는 과정을 3-4회 반복하여, 상기의 3가지 단백질 항원을 함유한 리포좀을 제조하였다. 이때, 혼합항원을 함유한 리포좀은 인지질과 단백질 항원의 질량비율이 1:20 되도록 혼합하여 제조되었으며, 리포좀 내에 들어가지 않는 단백질 항원은 세파덱스 G-25칼럼(1 x 20㎝)을 통과시켜 제거하고 리포좀 용액만을 모아서 하기의 실시예에 이용하였다.

한편, 상기에서 사용된 헬리포박터 파이로리의 재조합 항원단백질 UreB, CagA 및 Omp22는 다음과 같은 방법으로 제조하였다: GST를 융합 파트너로 갖는 pGEX-2T 벡터(Pharmacia, Sweden)에 UreB 유전자를 삽입하여 발현벡터 pGEX-2T/Ureb를 제조하고, 그 발현벡터로 대장균 DH5α를 형질전환시킨 다음, 이 대장균을 0.5mM IPTG 첨가하여서 37℃의 온도조건으로 4시간 동안 배양하였다. 그런 다음, 배양한 세포들을 초음파 파쇄하고, 원심 분리하여 수득한 상층액을 글루타치온 세파로즈 4B 친화성 컬럼(glutathione Sepharose 4B affinity column, Pharmcia, Sweden)에 주입하여, GST-UreB 융합 단백질을 정제하였다. 또한, CagA 및 Omp22 단백질도 상술한 방법으로 생산, 정제하였다. 이어, 토끼 항-헬리코박터 파이로리 항체 및 헬리코박터 파이로리에 감염된 사람의 혈청과의 면역반응을 통하여, 정제한 재조합 단백질들은 자연형 단백질들과 동일한 정도의 항원성을 지니고 있음을 확인하였고, 또한 정제한 재조합 단백질들은 마우스에 근육주사한 경우 자연형 단백질들과 동일한 정도로 항체를 형성하는 면역원성을 지니고 있음을 확인하였다.

[실시예 2]

[리포좀 제제의 면역원성 측정]

상기 실시예 1에서 제조한 3가지 혼합항원을 함유한 리포좀제제 75㎕(각 항원당 25㎕), 30㎕(각 항원당 10㎕), 15㎕(각 항원당 5㎕)의 각 접종양별로 10마리의 마우스에 근육주사 방식으로 면역시키고, 1주후 동일조건으로 추가접종하여 면역을 완료하였다.

이렇게 면역된 마우스로부터 혈청을 얻어서 간접면역 형광항체법으로 항체형성능과 항체역가를 측정하였다: 면양혈액한천 배지에서 배양한 헬리코박터 파이로리균을 수거하여 원심분리기로 침전시킨 다음, 이를 소량의 PBS(phoshate buffered saline)로 희석하여 균용액을 제조하고, 이 균용액을 웰-슬라이드(well-slide)의 각 웰에 5㎕씩 분주하고 자연건조시켜 웰상에 건조균층을 만든 후, 냉각 아세톤 용액에 담궈 고정시켰다. 이를 항체검사용 항원키드로 이용하여 다음과 같이 항체가를 측정하였다. 즉, 면역된 마우스에서 채취한 혈청을 PBS로 16배부터 두배 계대희석(2-fold dilutiion)하여, 상기의 항원 슬라이드에 각 희석배수별로 10㎕씩 중층하고 37℃에서 30분간 반응시켰다. 이어, 슬라이드를 PBS와 증류수로 반복 세척하고, FITC(fluorescein isothiocyanate)가 표지된 항-마우스 IgG 또는 항-마우스 IgA를 50배 희석하여 10㎕씩 분주하고 다시 37℃에서 30분간 반응시킨 다음, 형광현미경으로 관찰하여 측정된 형광광도와 희석배수를 대조하여 항체의 역가를 결정하였다(참조: 제1도 및 제2도). 그 결과, 혈청내 IgG와 IgA 항체가 높은 역가로서 접종양에 비례하여 형성됨을 확인하였다.

한편, 점막면역 유도여부를 확인하기 위하여, 상기에서 리포좀 제제로 면역된 마우스의 가검물(대변)을 채취하여, 이를 일정농도로 PBS에 용해시키고 원심분리하여 침전물을 제거한 다음, 상등액을 16배부터 두배계대 희석하여 상술한 간접면역 형광항체법으로 분비성 IgA의 항체가를 측정하였다. 이때, 분비성 IgA의 역가는 FITC가 표지된 항-마우스 Iga를 사용하여 측정하였다, 그 결과, 분비성 IgA 항체가 높은 역가로서 접종양에 비례하여 형성됨을 확인하였다(참조; 제3도).

[실시예 3]

[리포좀 제제의 헬리코박터 파이로리균에 대한 방어능력 측정]

상기의 실시예 2에서 면역원성을 확인한 리포좀 제제의 실제적인 헬리코박터 파이로리균에 대한 방어능력을 확인하기 위하여, 헬리코박터 파이로리에 대한 감염동물모델인 신생무균자돈에 상기의 리포좀 제제를 면역시킨 다음, 항체형성여부를 확인하고, 헬리코박터 파이로리를 공격시켜 이를 방어시킬 수 있는지 조사하였다. 즉, 3마리의 어린 돼지 각각에 헬리코박터 파이로리의 3가지 항원을 함유한 리포좀 제제를 근육주사하고, 일주일 후에 2차 접종하여 면역을 완료하였다. 1차 접종으로부터 한달이 경과한 시점에서, 면역된 돼지의 혈액 및 위분비물을 채취하여, 실시예 2에서 기술한 간접면역 형광항체법으로 항체가를 측정하고, 이들 어린 돼지에 헬리코박터 파이로리균을 10⁸마리씩 각 개체의 위내에 접종하였다. 이때, 대조군은 동일한 조건으로 헬리코박터 파이로리균이 접종된 면역되지 않은(혼합항원을 함유하지 않는 PBS 만으로 접종된) 어린 돼지를 사용하였다.

상기의 헬리코박터 파이로리 접종일로부터 15일이 경과한 후에, 각 돼지의 위조직을 절취하여 헤리코박터 파이로리의 증식여부를 군집계수방법으로 측정하고, 이를 대조군의 군집수와 비교하여 면역집단에서의 헤리코박터 파이로리에 대한 방어능력을 결정하였다. 그 결과, 하기 표 1에서 보듯이, 3가지 혼합항원을 함유한 리포좀 제제를 면역한 돼지의 혈청에는 높은 역가의 IgA가 측정되었으며, 위분비물에서 측정한 분비성 IgA 역가도 높음을 확인하였다. 또한, 위조직에서 측정된 헬리코박터 파이로리 군집수는 대조군의 경우 평균 1.37x10⁶으로 매우 많은 균이 증식되었으나, 리포좀 제제로 면역된 돼지군의 경우 0으로 헤리코박터 파이로리의 증식이 없음을 확인 할 수 있었다. 따라서, 3가지 혼합항원을 함유한 리포좀 제제는 무균돼지에서 체액성면역과 점막면역을 동시에 유도하였으며, 헬리코박터 파이로리의 공격에 대해 100% 방어능력을 나타냄을 알 수 있었다.

이상에서 상세히 설명하고 입증하였듯이, 본 발명은 헬리코박터 파이로리 유래의 재조합 단백질인 UreB, CagA 및 Omp22 항원을 점막면역 유도의 pH에 민감한 리포좀에 포획시켜, 체액성 면역과 점막 면역을 동시에 유발하고, 헬리코박터 파이로리균 공격에 대한 방어 효과를 나타내는 리포좀 제제 및 헬리코박터 파이로리 감염예방용 백신으로서의 용도를 제공한다. 따라서, 본 발명의 리포좀 제제는 헬리코박터 파이로리에 대한 예방 백신으로 효과적으로 이용될 수 있다.

Claims

헬리코박터 파이로리 유래의 UreB, CagA 및 Omp22 재조합 단백질을 1:1:1의 질량비로 포함하는 혼합항원과 포스파티딜에탄올아민-β-올레일-γ-팔미토일(phosphatidylethanolamin-β-oleoyl-γ-palmitoyl)과 콜레스테롤헤미숙시네이트(cholesterol hemosucconate)를 몰비율로 6:4 내지 8:2로 혼합한 인지질을 1:5 내지 1:25의 질량비로 함유한 pH에 민감한 리포좀.
제1항에 있어서, 헬리코박터 파이로리에 대한 체액성 면역과 점막 면역을 동시에 유도하는 것을 특징으로 하는 pH에 민감한 리포좀.
제1항에 있어서, 헬리코박터 파이로리의 생균공격에 대한 방어능력을 부여하는 거을 특징으로 하는 pH에 민감한 리포좀.