KR100204982B1 - The method of culturing liquid starter of basidomycetis and liquid starter - Google Patents

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Abstract

본 발명은 담자균류의 액체종균 배양방법과 그의 액체종균에 관한 것으로서, 특히 고품질의 각종 버섯의 재배에 유용한 액체종균을 대량으로 생산할 수 있는 방법 및 그 방법에 의하여 수득된 액체종균에 관한 것이다.The present invention relates to a liquid spawn cultivation method of basidiomycetes and a liquid spawn thereof, and more particularly to a method capable of producing a large amount of liquid spawn useful for the cultivation of various mushrooms of high quality and a liquid spawn obtained by the method.

본 발명은 통상의 담자균류의 액체배양방법에 있어서, 전배양 공정을 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH2PO40~0.15%(w/v), MgSO4·7H2O 0~0.15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 전배양액에 평판배양된 담자균류를 접종시키고, (b) 상기의 접종된 전배양물을 80~200 rpm, 22~30℃의 진탕배양기에서 6일 내지 8일간 배양시키고; 상기의 액체배양공정을 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH2PO40~0.15%(w/v), MgSO4·7H2O 0~0.15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 액체배양액을 준비하고, (b) 상기의 액체배양액에 상기의 전배양접종원을 무균적으로 자동접종시키며, (c) 상기의 접종된 액체배양물을 22~28℃에서 0.1 내지 1.0vvm 정도의 제균된 공기로 5일 내지 12일 동안 통기배양시키는 단계로 구성된다.The present invention is a liquid culture method of common basidiomycetes, the pre-culture step (a) 2 ~ 7% (w / v) carbon source, 0.1 ~ 1.0% (w / v) nitrogen source, KH 2 PO 4 0 ~ 0.15 Inoculate the plated basidiomycetes in the preculture consisting of% (w / v), MgSO 4 · 7H 2 O 0-0.15% (w / v), and the remaining distilled water, and (b) the inoculated preculture Incubated at 80 ~ 200 rpm, 22 ~ 30 ℃ shaking culture in 6 to 8 days; The above liquid culture process was carried out by (a) carbon source 2-7% (w / v), nitrogen source 0.1-1.0% (w / v), KH 2 PO 4 0-0.15% (w / v), MgSO 4 7H 2 O 0 ~ 0.15% (w / v), and prepare a liquid culture consisting of the remaining distilled water, (b) aseptic auto-inoculation of the pre-inoculation source to the liquid culture solution, (c) the inoculated The liquid culture consists of aeration of the culture medium at 22-28 ° C. with sterilized air on the order of 0.1-1.0vvm for 5-12 days.

본 발명은 담자균류의 원균을 채취한 이후에, 전배양공정과 액체배양공정을 각각 엄격한 조건하에서 일련불가분적으로 연결된 일련의 단계로 구성된 점에 그 특징이 있는 것이다.The present invention is characterized in that it is composed of a series of steps which are inseparably connected to the preculture process and the liquid culture process under stringent conditions, respectively, after collecting the prokaryote of basidiomycetes.

Description

담자균류의 액체종균 배양방법 및 그 방법에 의한 액체종균Liquid spawn culture method of basidiomycetes and liquid spawn by the method

제1도는 전배양접종원의 접종단계에서 무균접종을 효율적으로 수행하기 위하여 개발된 접종기구의 개략도.1 is a schematic diagram of an inoculation device developed to efficiently perform sterile inoculation at the inoculation stage of pre-culture inoculation.

제2도는 액체배양물의 통기배양단계에서 투입.배양.배출과정을 효율적으로 수행하기 위하여 개발된 액체배양물의 통기배양기구의 개략도.2 is a schematic diagram of the aeration culture mechanism of the liquid culture developed to efficiently perform the input, culture, and discharge process in the aeration culture stage of the liquid culture.

제3도는 제2도의 액체배양물의 통기배양기구에 관한 또다른 실시형태를 나타낸 개략도이다.3 is a schematic view showing another embodiment of the aeration culture apparatus of the liquid culture of FIG.

* 도면의 주요부분에 대한 부호의 설명* Explanation of symbols for main parts of the drawings

10 : 접종기구 11 : 접종용기10: inoculation device 11: inoculation container

12 : 마개부 13 : 전배양접종원12: stopper 13: pre-culture inoculation

14 : 공기주입라인 15 : 여과수단14: air injection line 15: filtration means

16 : 공기공급수단 18 : 배출라인16: air supply means 18: discharge line

20 : 통기배양기구 21 : 액체종균 배양기20: Aeration culture 21: Liquid spawn incubator

22 : 뚜껑부 23 : 액체배양물22: lid 23: liquid culture

24 : 공기주입관 25a, 25b : 여과수단24: air injection pipe 25a, 25b: filtering means

26 : 접종관 27 : 액체유동량 측정기26: inoculation tube 27: liquid flow meter

28 : 공기배출관 29 : 액체종균의 배출관28: air discharge pipe 29: discharge pipe of liquid spawn

31 : 연결수단 32a,32b,32c,32d : 잠금장치31: connecting means 32a, 32b, 32c, 32d: locking device

[발명의 목적][Purpose of invention]

[발명이 속하는 기술분야][TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION]

본 발명은 담자균류의 액체종균 배양방법과 그의 액체종균에 관한 것으로서, 특히 고품질의 각종 버섯의 재배에 유용한 액체종균을 대량으로 생산할 수 있는 방법 및 그 방법에 의하여 수득된 액체종균에 관한 것이다.The present invention relates to a liquid spawn cultivation method of basidiomycetes and a liquid spawn thereof, and more particularly to a method capable of producing a large amount of liquid spawn useful for the cultivation of various mushrooms of high quality and a liquid spawn obtained by the method.

[발명의 배경][Background of invention]

버섯류는 생물의 분류 체계상 담자균류에 속하는 미생물로서, 독성이 있는 것을 제외하고 대부분 식용으로 이용되고 있다. 이러한 버섯류는 고단백 식품으로서 미래에 육류를 대체할 수 있는 식품으로 기대되고 있으며, 특히 최근의 각종 연구보고에 의하면, 버섯류에 함유된 다당류인 글루칸(glucan) 및 그 유도체가 항암 작용을 하는 것으로 알려져 있고 [김병각 외, 한국산 담자균류의 항암성분에 관한 연구. 한국균학회지, 8 : 107(1980); Chiraha et al., Fractionation and purification of the polysaccharides with marked antitumer activity from Lentinus edodes(Berk.). Cancer Res. 30 : 2776-2781(1970); 강창진 외, 한국산 담자균류의 항암성분에 관한 연구, 불노초의 균사 배양 및 항암 성분. 한국 생화학회지, 14 : 101(1981); Yamamura et al., A selective inhibitor of myxovirus from shiitake(Lentinus edodes). Mushroom Sci. 9(1) : 495-507(1976) 참조], 이로 인하여 버섯류는 통상의 식품대용으로서 뿐만 아니라 건강식품으로서 크게 각광을 받고 있다.Mushrooms are microorganisms belonging to basidiomycetes in the classification system of living organisms, and most of them are used for food except for toxicity. These mushrooms are expected to replace meat in the future as a high protein food, and according to various recent reports, glucan (glucan) and its derivatives contained in mushrooms are known to have anticancer activity. [Study on Anticancer Components of Korean Basidiomycetes. Korean Journal of Mycology, 8: 107 (1980); Chiraha et al., Fractionation and purification of the polysaccharides with marked antitumer activity from Lentinus edodes (Berk.). Cancer Res. 30: 2776-2781 (1970); Kang, Chang-Jin et al., Studies on the Anticancer Compounds of Korean Basidiomycetes, Mycelial Growth and Anticancer Constituents of Rhizome. Korean Journal of Biochemistry, 14: 101 (1981); Yamamura et al., A selective inhibitor of myxovirus from shiitake (Lentinus edodes). Mushroom Sci. 9 (1): 495-507 (1976)], and mushrooms have attracted much attention as health foods as well as normal food substitutes.

이러한 담자균류(버섯류)는 각각의 종류마다 그 재배방법내지 재배조건이 다르지만, 통상적으로는 최초의 원균을 채취하여 한천배지등에서 배양한 다음, 이를 액체 또는 고형물에 일정기간 배양하여 버섯종균을 얻고, 이러한 버섯종균을 일반 농가 등에서 재배하여 최종적인 버섯을 채취하게 된다.These basidiomycetes (mushrooms) differ in their cultivation methods or cultivation conditions for each type, but usually the first progenitors are collected and cultured in agar medium, and then cultured in a liquid or solid for a certain period of time to obtain a mushroom spawn, These mushroom spawns are grown in general farmhouses and the final mushrooms are harvested.

그런데, 원균의 채취 및 배양은 통상적인 방법으로 행해지는 반면, 버섯종균의 배양방법은 날로 새로운 방법이 등장하고 있다. 버섯종균의 배양방법은 통상적으로 톱밥을 주원재료로 하고 미강 등을 부재료로 하여 이것을 멸균시킨 후 담자균의 균사체를 접종시켜서 제조하는 고체종균배양법이 가장 일반화되어 있다. 그러나, 이 방법은 나무원목이나 볏짚 또는 병재배시에 배양용기내의 종균덩어리를 잘게 부수어 사용해야 하는 번거로움이 있었고, 더구나 종균덩어리를 잘게 부수는 과정에서 서로 뒤엉켜 있던 균사체들이 톡톡 끊어져 버려 톱밥종균에 심한 손상을 주게 되었으며, 이로 인해 톱밥종균의 활력을 현저하게 떨어뜨리게 되는 단점이 있었다. 또한, 이때 잡균의 혼입에 특히 유의하여야 하고, 그 종균덩어리를 고르게 잘 혼합하여야 할 뿐만 아니라, 적은 재배면적에 다량의 배양용기를 필요로 하므로 사용된 이후에 전량 회수하여 재활용하지 않는 한 환경오염의 문제가 심각하게 대두되고 있었던 것이다.By the way, the harvesting and cultivation of the original bacteria is carried out in a conventional method, while a new method for culturing mushroom spawns has emerged day by day. As for the mushroom spawn cultivation method, a solid spawn cultivation method is usually prepared by injecting sawdust as a main ingredient, rice bran, and the like as a subsidiary material, and then inoculating mycelia of basidiomycete. However, this method has the trouble of crushing spawns in the cultivation container when lumberwood, rice straw, or bottle cultivation is used, and furthermore, the myceliums intertwined in the process of crushing spawns are severely damaged by sawdust spawning. It was given, which caused a significant drop in the vitality of sawdust spawn. In addition, special attention should be paid to the mixing of various germs, and the spawn masses must be mixed evenly, and a large amount of culture vessels are required in a small growing area. The problem was seriously emerging.

이러한 실정을 감안하고 보다 효율적인 버섯종균을 얻기 위하여 개발된 방법이 액체종균의 제조방법이다. 그러나, 이 방법은 고체종균배양법과는 달리 배양배지로서 순수한 액체를 사용하므로, 원균을 일정한 수준으로까지 배양시키는데 고도의 기술이 필요하고, 그 배양조건이 매우 까다로워, 실용화 단계에 이르지 못한 결점이 있었으며, 최근들어 연구가 진행되고 있는 실정이다 [박 영재, 배지 만드는 법과 종균 배양법. 영지·표고·느타리. 내외출판사. 308-322(1993); 대한민국 특허공개 제95-26976호. 참조]In view of these circumstances, the method developed for obtaining more efficient mushroom spawn is a method for preparing liquid spawn. However, this method uses pure liquid as a culture medium, unlike the solid spawn culture method, and thus requires a high level of technology for cultivating progeny to a certain level. In recent years, research is being conducted [Park Youngjae, how to make a medium and spawn culture method. Ganoderma lucidum, shiitake, louse. Publishers both inside and outside. 308-322 (1993); Korean Patent Publication No. 95-26976. Reference]

그런데, 위에서 간략히 소개된 액체배양법 [박 영재, 배지 만드는 법과 종균 배양법. 영지·표고·느타리. 내외출판사. 308-322(1993)]은 실험실적인 배양방법으로서 매우 간략히 그 액상조성물을 소개하는 정도로 그치고 있으며, 또다른 액체배양법 [대한민국 특허공개 제95-26976호]은 좀더 구체적으로 기술내용을 설명하고 있으나, 이 역시 반복적인 호화단계 및 멸균단계를 거쳐야 하므로 제조공정이 번거롭고, 다량의 에너지를 필요로 하며, 각각의 제품을 각각 개별적으로 반복하여 진행시켜야 하므로 잡균이 혼입될 염려가 있었으며, 이로인하여 액체종균의 균일화를 기하기 어렵고, 대량생산이 불가능한 단점이 있었다.By the way, the liquid culture method briefly introduced above [Park Youngjae, how to make a medium and spawn culture method. Ganoderma lucidum, shiitake, louse. Publishers both inside and outside. 308-322 (1993)] is just a brief introduction of the liquid composition as a laboratory culture method, another liquid culture method [Korean Patent Publication No. 95-26976] describes the technical content in more detail, This also has to go through repetitive gelatinization and sterilization, which is cumbersome, requires a large amount of energy, and each product has to be repeated individually, there is a risk of mixing of germs, It was difficult to achieve uniformity, and mass production was impossible.

[발명의 목적][Purpose of invention]

본 발명은 위와 같은 종래의 액체종균의 제조방법의 문제점을 해결하기 위하여 개발된 것으로서, 제조공정중에 잡균의 혼입을 방지할 수 있고 제품의 균일화를 기할 수 있으며, 일련의 공정에 의해 대량생산이 가능한 액체종균의 제조방법 및 그 방법에 의하여 제조된 액체종균을 제공하는데 그 목적이 있다.The present invention was developed to solve the problems of the conventional liquid spawn production method as described above, it is possible to prevent the mixing of various germs during the manufacturing process, it is possible to uniformize the product, mass production is possible by a series of processes It is an object of the present invention to provide a liquid spawn and a liquid spawn prepared by the method.

본 발명은 담자균류의 원균을 채취한 이후에, 전배양공정과 액체배양공정을 각각 엄격한 조건하에서 일련불가분적으로 연결된 일련의 단계로 구성된 액체종균의 제조방법이라는 점에 그 특징이 있는 것이다. 본 발명에 있어서 담자균류는 식용버섯인 느타리버섯, 검은비늘버섯, 만가닥버섯, 버들송이버섯, 표고버섯, 양송이버섯 등과 약용버섯으로 사용되는 복령, 영지버섯, 상황버섯 등을 포함한다.The present invention is characterized in that it is a method of producing a liquid spawn consisting of a series of steps which are irreversibly connected to each other in strict conditions under the preculture process and the liquid culture process after collecting the prokaryote of basidiomycetes. In the present invention, basidiomycetes include edible mushrooms such as oyster mushroom, black scale mushroom, mandala mushroom, willow mushroom, shiitake mushroom, mushroom mushroom, bokyeong, ganoderma lucidum mushroom, and situation mushroom.

[발명의 구성][Configuration of Invention]

[발명의 기술적 구성][Technical composition of the invention]

본 발명은 상기의 목적을 달성하기 위하여, 담자균류의 원균을 분양받아 이를 평판배양시키는 공정, 평판배양된 접종원을 전배양시키는 공정, 그리고 전배양된 접종원을 액체배양시키는 공정으로 구성된 담자균류의 액체배양방법에 있어서, 상기의 전배양공정은 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH2PO40~0.15%(w/v), MgSO4·7H2O 0~0.15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 전배양액의 준비단계, (b) 상기의 전배양액에 평판배양된 담자균류를 접종하는 단계, (c) 상기의 접종된 전배양물을 80~200 rpm, 22~30℃의 진탕배양기에서 6일 내지 8일간 배양시키는 단계로 구성되고; 상기의 액체배양공정은 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH2PO40~0.15%(w/v), MgSO4·7H2O 0~0.15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 액체배양액을 준비하는 단계, (b) 상기의 액체배양액에 상기의 전배양접종원을 무균적으로 자동접종시키되 상기의 액체배양액 : 상기의 전배양접종원 = 20 내지 200 : 1의 비율로 접종시키는 단계, (c) 상기의 접종된 액체배양물을 22~28℃에서 0.1 내지 1.0vvm 정도의 제균된 공기로 5일 내지 12일 동안 통기배양시키는 단계로 구성된다.In order to achieve the above object, the present invention is a liquid of the basidiomycetes consisting of the process of receiving the protococci of the basidiomycetes, plate culture, preculture of the plate cultured inoculum, and liquid culture of precultured inoculum In the culturing method, the pre-culture step (a) 2 ~ 7% (w / v) carbon source, 0.1 ~ 1.0% (w / v) nitrogen source, 0 ~ 0.15% (w / v) KH 2 PO 4 , MgSO 4 · 7H 2 O 0 ~ 0.15% (w / v), and the preparation step of the pre-culture consisting of the remaining distilled water, (b) inoculating the plate cultured basidiomycete in the pre-culture, (c) above The inoculated preculture is incubated for 6 to 8 days in a shaker at 80 to 200 rpm and 22 to 30 ° C .; The liquid culture process is (a) 2 to 7% (w / v) carbon source, 0.1 to 1.0% (w / v) nitrogen source, 0 to 0.15% (w / v) KH 2 PO 4 , MgSO 4 · 7H 2 O 0 ~ 0.15% (w / v), and preparing a liquid culture consisting of the remaining distilled water, (b) aseptic inoculation of the pre-inoculation source to the above liquid culture solution, but the liquid culture solution of the above Inoculating the pre-inoculation source = 20 to 200: 1, (c) aerated culture of the inoculated liquid culture with the sterilized air of 0.1 to 1.0vvm at 22 ~ 28 ℃ for 5 to 12 days It consists of a step.

또한 , 본 발명은 상기의 제반공정을 거쳐 배양된 담자균류의 액체종균을 제공한다.In addition, the present invention provides a liquid spawn of basidiomycete cultured through the above-mentioned general process.

[본 발명의 바람직한 실시형태]Preferred Embodiments of the Invention

이하, 본 발명의 바람직한 실시형태를 보다 상세히 설명한다.Hereinafter, preferred embodiment of this invention is described in detail.

(가) 원균채취 및 평판배양(A) Probiotics collection and plate culture

본 발명은 담자균류의 원균을 농촌진흥청이나 산림청으로부터 분양받거나 자연산의 식용버섯(담자균류)의 신선한 갓조직에서 조직분리하여 이용한다. 분양받거나 조직분리한 원균을 페트리접시에서 편판배양시켜서, 이르 전배양용 접종원으로 확대배양한다. 페트리접시에서의 평판배양은 통상의 방법으로 실시할 수 있다.The present invention is used to obtain the original bacteria of basidiomycetes from the Rural Development Administration or the Forest Service, or to separate the tissue from fresh fresh tissue of edible mushrooms of the wild (small fungi). The cultured or tissue-separated progeny are plate-cultured in a Petri dish and expanded to early incubation inoculum. Plate culture in a petri dish can be performed by a conventional method.

(나) 담자균류(원균)의 전배양공정(B) Pre-cultivation process of basidiomycetes

페트리접시에서 확대배양된 원균은 이어서 전배양공정으로 이행되어진다. 전배양공정은 소정의 액체배지를 준비하는 단계와, 확대배양된 원균을 상기의 액체배지에 접종시키는 단계와, 그 접종된 배양물을 엄격한 조건하에서 배양시키는 단계로 구성된다.Escherichia coli grown in a petri dish is then transferred to the preculture process. The pre-cultivation process comprises the steps of preparing a predetermined liquid medium, inoculating the expanded cultured prokaryote into the liquid medium, and culturing the inoculated culture under stringent conditions.

(a) 전배양액의 준비단계(a) Preparation of Preculture

페트리접시에서 확대배양된 원균은 본 발명에 의한 액체배지에서 충분히 배양되어야 한다. 본 발명에 의한 액체배지는 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH2PO40~0.15%(w/v), MgSO4·7H2O 0~0.15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진다.Probiotics expanded in Petri dishes should be sufficiently cultured in the liquid medium according to the present invention. The liquid medium according to the present invention has a carbon source of 2 to 7% (w / v), a nitrogen source of 0.1 to 1.0% (w / v), KH 2 PO 4 0 to 0.15% (w / v), MgSO 4 7H 2 O 0 ˜0.15% (w / v) and the remaining distilled water.

탄소원으로서는 설탕, 맥아당, 과당, 포도당, 자당, 맥아추출물, 그리고 물엿으로 구성된 그룹중에서 1 또는 2이상을 선택하여 사용한다. 2%(w/v) 이하에서는 균사체가 성장하는데 지장을 초래하고, 7%(w/v) 이상에서는 타영양원에 비해 과량으로서 비경제적이 되므로 적절하지 못하다.As a carbon source, one or more selected from the group consisting of sugar, maltose, fructose, glucose, sucrose, malt extract, and syrup are used. At 2% (w / v) or less, it is not suitable because it causes a mycelial growth, and at 7% (w / v) or more it is uneconomical as an excess of other nutrients.

탄소원은 버섯균의 대사에 필요한 분자의 골격을 이루는 구성물질로 이용되는 동시에, 세포합성 및 분해대사에 필요한 에너지원으로 사용된다. 원래 버섯균은 자연계에서 죽거나 노화된 식물이나 그로부터 발생한 유기물을 기주로하여 살아가는 종속영양 생물이므로, 이들의 구성성분인 셀루로스, 헤미셀룰로스, 리그닌을 주요 영양원으로 하고 있다. 이러한 사실을 근거로하여, 통상의 버섯재배방법에서는 담자균의 영양배지로서 톱밥이나 미강(쌀겨) 또는 볏짚 등을 사용하고 있다. 그러나, 이 방버을 이용할 경우, 원균의 균사체가 살아가기 위해서는 상기의 톱밥 등을 다시 분해하여 흡수하기 쉬운 형태로 전환시켜야 하므로, 또다른 에너지가 필요하게 되고, 흡수량도 많지 못하게 된다. 한편, 상기의 대한민국 특허공개 제95-26976호에서는 탄소원으로서 쌀가루, 밀가루, 옥수수가루, 전분 등을 사용하고 있으나, 이 역시 담자균의 균사체가 이를 영양원으로하여 이용하기 쉽게 하기위해서는 이를 호화시켜야 하고, 이 과정에서 다량의 에너지를 필요로 하게되는 단점이 있다. 또한, 호화된 이후에도 역시 다당류의 형태를 벗어날 수 없으므로, 균사체가 이를 흡수하기 위해서는 효소를 분비하여 이를 분해하여야 하는 바, 흡수된 탄소원이 모두 균사체의 성장에 사용되지 못하고 그 중에서 일부가 에너지원으로 사용되어지는 단점이 있는 것이다. 따라서, 본 발명에서는 담자균의 균사체가 탄소원을 더 이상 분해할 필요없이 가장 흡수하기 쉬운 형태인 포도당, 맥아당, 설탕, 과당, 젖당 등의 단당류 또는 이당류로 구성된 그룹 중에서 1 또는 2 이상을 선택하여 사용한다. 이들은 모두 물에 잘 녹기 때문에 종래와 같이 별도의 호화(糊化)공정을 거칠 필요가 없고, 그 상태에서 흡수가 가능하므로 균사체가 이를 분해하기 위하여 별도의 에너지를 사용할 필요도 없게 되는 잇점이 있기 때문이다.The carbon source is used as a constituent that forms the backbone of molecules required for the metabolism of mushrooms, and is also used as an energy source for cell synthesis and metabolism. Originally, mushroom fungi are heterotrophic organisms that live on the basis of dead or aged plants or organic matters derived from them. Therefore, their main components are cellulose, hemicellulose, and lignin. On the basis of this fact, in the normal mushroom cultivation method, sawdust, rice bran (rice bran), rice straw or the like is used as a nutrient medium for basidiomycetes. However, in the case of using this chamber, in order to live the mycelium of the original bacteria, the above sawdust and the like must be decomposed again and converted into a form that is easily absorbed. Therefore, another energy is required and the amount of absorption is not large. On the other hand, in the Republic of Korea Patent Publication No. 95-26976 is used as a carbon source, rice flour, wheat flour, corn flour, starch, etc., but also to make it easy to use mycelium mycelium as a nutrient source, it must be luxury There is a disadvantage in that a large amount of energy is required in the process. In addition, even after gelatinization, polysaccharides cannot escape the form, so in order for the mycelium to absorb it, it is necessary to secrete and decompose the enzymes. All of the absorbed carbon sources are not used for the growth of the mycelium, and some of them are used as energy sources. It is a disadvantage. Therefore, in the present invention, one or two or more selected from the group consisting of monosaccharides or disaccharides such as glucose, maltose, sugar, fructose, lactose, etc., which are the most easily absorbed forms of mycelium mycelium without the need to decompose the carbon source any more, are used. . Since they are all soluble in water, they do not need to undergo a separate gelatinization process as in the prior art, and since they can be absorbed in the state, the mycelium does not need to use separate energy to decompose it. to be.

질소원으로서는 대두분이나 펩톤 중에서 어느 하나 또는 둘을 함께 사용하며, 0.1~1.0%(w/v)의 범위내에서 사용한다. 대두분이나 펩톤을 0.1%(w/v) 이하로 사용할 경우엔 균사체의 질소원이 부족하여 바람직스럽지 못하고, 1.0%(w/v) 이상으로 사용할 경우엔 균사체의 성장에 큰 차이가 없으므로 경제적인 측면에서 바람직스럽지 못하다. 질소원은 버섯균의 DNA와 같은 유전물질의 합성과 단백질의 합성.분해에 필요한 효소의 생성에 필수불가결한 영양원이다. 균사체의 배양에 통상적으로 사용되는 질소원은 효모추출액과 같은 유기질소원과, 염화암모늄(NH4Cl) 질산염(KNO3)과 같은 무기질소원이 있다. 그러나, 이들은 균사체의 단일의 질소원만을 제공할 뿐이고, 더 이상의 기능을 제공하지 아니한다. 따라서, 균사체의 정상적인 성장을 위해서는 그밖의 영양소의 제공이 필연적이다. 이에 반하여, 대두분은 다른 식품류(식물)에 비하여 단백질 성분과 기타 영양소가 풍부하여 균사체가 성장하는데 최적의 영양원이 되기 때문에, 이와 관련된 별도의 영양원을 제공하지 아니하여도 균사체의 성장에 큰 지장이 없게되는 잇점이 있다. 또한, 대두분은 언제 어느곳에서나 손쉽게 구할 수 있고, 값도 다른 유기질소원에 비하여 매우 저렴한 장점이 있다. 또한, 대두분은 미세하기는 하지만 액상 매질 속에서 균사체가 응집하여 균사체구를 형성하는 응집핵으로서의 기능을 수행하므로, 상기의 탄소원에 비하여 현저하게 적은 량으로서도 균사체가 성장하면서 계속하여 유기질소원 및 기타 영양원을 흡수하는데 매우 효과적인 것으로 여겨진다. 한편, 펩톤은 저분자 단백질 성분이므로 균사체가 질소원을 보다 쉽게 흡수할 수 있는 잇점이 있다. 상기의 질소원을 상기의 탄소원에 비하여 약 1/10정도의 범위내에서 사용하는 것이 가장 바람직한 것으로 관찰되었다.As a nitrogen source, either or both of soy flour and peptone are used together, and it is used within the range of 0.1 to 1.0% (w / v). If soy flour or peptone is used at 0.1% (w / v) or less, it is not preferable because the nitrogen source of mycelium is insufficient. Not preferred in Nitrogen is an indispensable nutrient source for the synthesis of genetic material such as DNA of mushrooms and the production of enzymes necessary for the synthesis and degradation of proteins. Nitrogen sources commonly used for the cultivation of mycelia include organic nitrogen sources such as yeast extract and inorganic nitrogen sources such as ammonium chloride (NH 4 Cl) nitrate (KNO 3 ). However, they only provide a single nitrogen source of mycelium and do not provide any further function. Therefore, it is necessary to provide other nutrients for the normal growth of mycelium. On the other hand, soybean meal is rich in protein and other nutrients compared to other foods (plants), so it is the optimal nutrient source for mycelial growth. There is an advantage of not being. In addition, soy flour can be easily obtained anywhere, anytime, and has the advantage of being very cheap compared to other organic nitrogen sources. In addition, the soy flour is fine but functions as an agglutinating nucleus in which the mycelium aggregates in the liquid medium to form the mycelium sphere. Therefore, the mycelium grows in a significantly smaller amount than the carbon source, and thus, the organic nitrogen source and other It is believed to be very effective at absorbing nutrients. On the other hand, since peptone is a low molecular protein component, the mycelia have an advantage of absorbing nitrogen sources more easily. It was observed that it is most preferable to use the nitrogen source in the range of about 1/10 of the said carbon source.

무기염류로서는 인의 공급원으로서 KH2PO4를 사용하고, 마그네슘의 공급원으로서 MgSO4·7H2O를 사용할 수 있다. 이들 무기염류는 담자균의 종류에 따라 액체배지에 선택적으로 사용할 수 있다는 점에서, 상기의 선특허출원(대한민국 특허공개 제95-26976호)과 상이하다. 예컨대, 양송이버섯과 상황버섯 등에 있어서는 이들 무기염류를 사용하지 않는 것이 바람직한 반면에, 느타리버섯, 검은비늘버섯, 만가닥버섯, 버들송이버섯, 표고버섯, 그리고 복령에 있어서는 이들 무기염류를 사용하는 것이 바람직하다. 그러나, 이들 무기염류를 사용한 경우에도, 각각 0.15%(w/v)를 초과하면 균사체의 성장에 장애를 일으키는 것으로 관찰되었으므로, 각각 0.15%(w/v) 이하로 제한하는 것이 바람직스럽다.As inorganic salts, KH 2 PO 4 can be used as a source of phosphorus, and MgSO 4 · 7H 2 O can be used as a source of magnesium. These inorganic salts differ from the above-mentioned prior patent application (Korean Patent Publication No. 95-26976) in that they can be selectively used for liquid medium depending on the type of basidiomycetes. For example, it is preferable not to use these inorganic salts in mushrooms and mushrooms, but in the case of oyster mushrooms, black scale mushrooms, mandala mushrooms, willow mushrooms, shiitake mushrooms, and bokyeong, desirable. However, even when these inorganic salts were used, since it was observed that the growth of the mycelium would be hindered when exceeding 0.15% (w / v), it is preferable to limit it to 0.15% (w / v) or less, respectively.

그리고, 나머지는 증류수 또는 멸균한 음용수를 사용한다. 통상의 음용수를 사용할 경우엔 반드시 고온고압하에서 살균하여 사용하여야 한다.And the rest uses distilled water or sterile drinking water. When using ordinary drinking water, it must be sterilized under high temperature and high pressure.

(b) 담자균류(원균)의 접종단계(b) Inoculation step of basidiomycetes

상기와 같이 구성된 전배양액을 전배양용기에 넣고, 그 상태에서 평판배양된 담자균류를 접종시켜서 전배양물을 얻는다. 전배양용기는 실험실적 배양에서는 삼각플라스크가 바람직하지만, 대량생산의 경우 반드시 이에 한정되는 것은 아니다. 접종 시기는 평판배양기의 균사체가 평판면적의 약 70%정도 자랐을 때이고, 코크보러 또는 백금구로 균사체 조각을 전배양용기 내의 전배양액에 무균접종시킨다. 접종방법 자체는 통상의 방법으로 시행할 수 있다. 이때, 접종되는 균사체 조각이 많을수록 접종원의 배양일수가 단축되어지고, 접종되는 균사체의 밀도가 높을수록 배양후 형성되는 균사구(펠렛 형상의 균사체 덩어리)의 직경이 작아지는 경향이 있는 것으로 관찰되었다.The preculture solution configured as described above is placed in a preculture vessel, and inoculated with the plate cultured basidiomycetes in that state to obtain a preculture. The preculture vessel is preferably a conical flask in laboratory culture, but is not necessarily limited to mass production. The inoculation time is when the mycelium of the plate incubator has grown to about 70% of the plate area, and the mycelia fragments are sterilely inoculated into the preculture in the preculture vessel using coke or platinum ball. The inoculation method itself can be carried out by conventional methods. At this time, it was observed that the more mycelia inoculated, the shorter the culture days of the inoculator, and the higher the density of the inoculated mycelium, the smaller the diameter of the mycelia (pellet-shaped mycelia) formed after the culture.

(c) 담자균류의 전배양단계(c) preculture stage of basidiomycete

균사체가 접종된 전배양물은 전배양용기에 충전된 상태로 진탕 배양과정으로 이행된다. 진탕배양은 회전진탕배양기 또는 왕복진탕배양기에서 상기의 접종된 전배양물을 80~200 rpm 정도의 회전수로 배양시킨다. 전배양물을 80 rpm 이하로 회전시키면, 성장한 균사체가 전배양물 내에 고르게 분포하지 못하고 서로 엉켜붙게 되고, 또한 이로인해 균사체가 성장하는데 필요한 산소의 공급이 전배양물 내에 충분하게 이루어지지 못하게 되므로, 이후에 액체배양단계에서 고품질의 액체종균을 얻을 수 없게 된다. 한편, 200 rpm 이상이 되면 산소의 공급은 충분하지만, 과도한 회전력 때문에 균사체의 성장이 저하되거나 균사체가 절단되어 바람직스럽지 못하다. 이러한 현상은 균사체가 배양된 초기에 현저하게 나타나고, 균사체가 배양된 환경에 어느정도 적응된 상태에서는 그 영향이 줄어들게 된다. 따라서, 전배양의 초기에는 저속회전이 바람직하고, 시간이 지남에 따라 상기의 범위내에서 고속회전시켜도 무방하다. 상기의 회전속도 범위에서는 액상배지에서 자라는 균사체가 성장하면서 어느정도의 길이로 자란 경우, 그 회전력에 의해 끊어져 새로운 균사체구를 형성하여 계속적으로 성장하는 것으로 추정된다. 그러나, 상기의 범위를 벗어날 경우, 이미 성장한 균사체 뿐만 아니라 아직도 더 자라나야 할 균사체마저 서로 끊어져버림으로써 액상배지내에서 균사체구가 제대로 형성되지 못하는 것으로 여겨지므로, 바람직스럽지 못하다.The preculture inoculated with mycelium is transferred to the shake culture in a state filled with the preculture vessel. Shake culture is incubated in a rotating shaker or reciprocating shaker incubator at a rotation speed of about 80 ~ 200 rpm. When the preculture is rotated at 80 rpm or less, the grown mycelium is not evenly distributed in the preculture and is entangled with each other, which also prevents sufficient supply of oxygen required for the growth of the mycelia in the preculture. Thereafter, high quality liquid seed cannot be obtained in the liquid culture step. On the other hand, when 200 rpm or more is sufficient to supply oxygen, it is not preferable because the growth of the mycelium is reduced or the mycelium is cut due to excessive rotational force. This phenomenon is remarkable early in the mycelial culture, and the effect is reduced when the mycelium is adapted to the environment in which the mycelium is cultured. Therefore, low speed rotation is preferable at the beginning of the preculture, and may be rotated at high speed within the above range as time passes. In the above rotational speed range, when the mycelium grows to a certain length while growing in the liquid medium, it is estimated that the mycelium is broken by the rotational force to form a new mycelium sphere and grow continuously. However, if it is outside the above range, it is not preferable because not only mycelium that has already grown but also mycelium that still needs to be grown are broken off from each other, so that mycelium spheres are not properly formed in the liquid medium.

한편, 진탕배양은 담자균의 배양온도조건에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 통상적으로는 22~30℃의 범위에서 6일 내지 8일간 배양한다. 동일한 담자균에 있어서는, 배양액의 온도가 균사체의 최적온도조건에 가까울수록 배양기간은 단축되어지는 경향이 있는것으로 관찰되었다.On the other hand, the shaking culture can be appropriately selected according to the culture temperature conditions of basidiomycetes. Usually, it incubates for 6 to 8 days in the range of 22-30 degreeC. In the same basidiomycetes, it was observed that the incubation period tends to be shorter as the temperature of the culture solution approaches the optimum temperature condition of the mycelium.

(다) 액체종균의 배양공정(C) Cultivation process of liquid spawn

진탕배양기에서 전배양된 균사체는 이어서 액체종균의 배양공정으로 이행되어진다. 액체종균의 배양공정은 소정의 액체배양액을 준비하는 단계와, 전배양된 균사체를 접종시키는 단계와, 그 접종된 배양물을 엄격한 조건하에서 배양시키는 단계로 구성된다.The mycelium precultured in the shake incubator is then transferred to the liquid spawn culture process. The culturing process of the liquid spawn comprises the steps of preparing a predetermined liquid culture solution, inoculating precultured mycelium, and culturing the inoculated culture under stringent conditions.

(a) 액체배양액의 준비단계(a) Preparation of liquid culture liquid

진탕배양기에서 전배양된 균사체는 본 발명에 의한 액체배양액에서 충분히 배양되어야 한다. 본 발명에 의한 액체배양액은 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH2PO40~0.15%(w/v), MgSO4·7H2O 0~0.15%(w/v), 그리고 나머지는 증류수로 이루어진 액체배양액으로 구성된다.Mycelium precultured in a shaker culture should be sufficiently cultured in the liquid culture solution according to the present invention. Liquid culture liquid according to the present invention is 2 ~ 7% (w / v) carbon source, 0.1 ~ 1.0% (w / v) nitrogen source, KH 2 PO 4 0 ~ 0.15% (w / v), MgSO 4 · 7H 2 O 0 ˜0.15% (w / v), with the remainder consisting of a liquid culture consisting of distilled water.

탄소원으로서는 설탕, 맥아당, 과당, 포도당, 자당, 맥아추출물, 그리고 물엿으로 구성된 그룹중에서 1 또는 2 이상을 선택하여 사용한다. 2%(w/v) 이하에서는 균사체가 성장하는데 지장을 초래하고, 7%(w/v) 이상에서는 타영양원에 비해 과량으로서 비경제적이 되므로 적절하지 못하다. 선택의 이유는 앞서 설명한 바와 같다(이하, 같음).As a carbon source, one or two or more selected from the group consisting of sugar, maltose, fructose, glucose, sucrose, malt extract, and starch syrup are used. At 2% (w / v) or less, it is not suitable because it causes a mycelial growth, and at 7% (w / v) or more it is uneconomical as an excess of other nutrients. The reason for the selection is as described above (hereinafter, the same).

질소원으로서는 대부분이나 펩톤 중에서 어느 하나 또는 둘을 함께 사용하며, 0.1~1.0%(w/v)의 범위내에서 사용한다. 대두분이나 펩톤을 0.1%(w/v) 이하로 사용할 경우엔 균사체의 질소원이 부족하여 바람직스럽지 못하고, 1.0%(w/v) 이상으로 사용할 경우엔 균사체의 성장에 큰 차이가 없으므로 경제적인 측면에서 바람직스럽지 못하다. 이 경우, 질소원의 보조성분으로 통상적으로 사용되는 효모추출물을 사용할 수도 있다.As the nitrogen source, either one or both of the peptones are used together, and they are used within the range of 0.1 to 1.0% (w / v). If soy flour or peptone is used at 0.1% (w / v) or less, it is not preferable because the nitrogen source of mycelium is insufficient. If it is used at 1.0% (w / v) or higher, there is no significant difference in the growth of mycelia. Not preferred in In this case, yeast extracts commonly used as auxiliary components of nitrogen sources may be used.

무기염류로서는 인의 공급원으로서 KH2PO4를 사용하고, 마그네슘의 공급원으로서 MgSO4·7H2O를 사용할 수 있다. 이들 무기염류는 역시 담자균의 종류에 따라 액체배양액에 선택적으로 사용할 수 있다. 이 점에서, 상기의 선특허출원(대한민국 특허공개 제95-26976호)과 상이하다. 예컨대, 액체종균의 배양공정에서는 느타리버섯, 검은비늘버섯, 만가닥버섯, 버들송이버섯, 양송이버섯, 그리고 상황버섯 등에 대하여 이들 무기염류를 사용하지 않는 것이 바람직한 반면에, 표고버섯과 복령 등에 있어서는 이들 무기염류를 사용하는 것이 바람직하다. 이 점에서 상기의 전 배양공정과 상이하다. 그러나, 이들 무기염류를 사용한 경우에도, 각각 0.15%(w/v)를 초과하면 균사체의 성장에 장애를 일으키는 것으로 관찰되었으므로, 역시 각각 0.15%(w/v) 이하로 제한하는 것이 바람직스럽다.As inorganic salts, KH 2 PO 4 can be used as a source of phosphorus, and MgSO 4 · 7H 2 O can be used as a source of magnesium. These inorganic salts can also be selectively used in the liquid culture liquid according to the type of basidiomycete. In this respect, it differs from the above-mentioned prior patent application (Korean Patent Publication No. 95-26976). For example, in the cultivation process of liquid spawn, it is preferable not to use these inorganic salts for oyster mushroom, black scale mushroom, mandala mushroom, willow mushroom, mushroom mushroom, and situation mushroom. It is preferable to use inorganic salts. It differs from the said preculture process in this respect. However, even when these inorganic salts were used, since it was observed that the growth of the mycelium exceeds 0.15% (w / v), it is preferable to limit the concentration to 0.15% (w / v) or less, respectively.

그리고, 나머지는 증류수 또는 멸균한 음용수를 사용한다. 통상의 음용수를 사용할 경우엔 반드시 고온고압하에서 살균하여 사용하여야 한다.And the rest uses distilled water or sterile drinking water. When using ordinary drinking water, it must be sterilized under high temperature and high pressure.

본 발명에서는 상기의 배지성분을 물에 용해시켜 액체배양액을 준비한다. 액체배양액을 제조하기 위해서는 상기의 배지성분을 평량하여 물에 넣고, 임펠러(교반날개)가 부착된 혼합기에서 균일하게 혼합시킨다. 이때, 액체종균의 배양시에 발생하는 거품을 없애기 위하여, 혼합이 완료된 배양액에 거품제거제를 첨가하는 것이 바람직하다. 거품제거제로서는 액상배양액의 표면위에 얇은 피막을 형성하는 각종의 동물성 기름과 식물성 기름을 사용할 수 있다. 식물성 기름으로서는, 예컨대 가정용 식용유, 면실유, 피마자유, 올리브유, 야자유 등으로 구성된 그룹 중에서 1 또는 2 이상을 사용할 수 있다. 첨가량은 배양액의 상층부분에 전체적으로 퍼질 수 있는 정도이어야 하고, 이를 위해서는 액체배양액에 대하여 0.1~1.0%(w/v)인 것이 바람직하다. 거품제거제는 배양액의 표면에서 얇은 막을 형성하므로, 본 발명의 통기식 액상배양법에서와 같이 액상배양액에 공기(산소)를 강제적으로 공급하는 시스템에서는 별 문제가 없으나, 액상배양액에 공기를 강제적으로 공급하지 않는 시스템에서는 균사체의 성장에 필수적으로 요구되는 산소가 공급될 수 없으므로 절대 사용되어서는 아니됨을 유의하여야 한다. 따라서, 상기의 전배양공정에서는 사용될 수 없으며, 강제통기방식인 액체종균의 배양공정에서만 사용될 수 있는 것이다. (다만, 상기의 전배양공정을 강제통기방식으로 전환시킬 경우엔, 거품제거제의 사용이 가능하게 된다.)In the present invention, the culture medium is dissolved in water to prepare a liquid culture solution. In order to prepare a liquid culture solution, the above-mentioned media components are weighed into water and mixed uniformly in a mixer with an impeller (stirring blade) attached thereto. At this time, in order to remove the bubbles generated during the cultivation of the liquid spawn, it is preferable to add a defoamer to the culture medium is mixed. As the antifoaming agent, various animal oils and vegetable oils which form a thin film on the surface of the liquid culture liquid can be used. As the vegetable oil, for example, one or two or more of the group consisting of household cooking oil, cottonseed oil, castor oil, olive oil, palm oil and the like can be used. The addition amount should be such that it can be spread throughout the upper portion of the culture, for this purpose it is preferably 0.1 to 1.0% (w / v) relative to the liquid culture. Since the antifoaming agent forms a thin film on the surface of the culture medium, there is no problem in the system for forcibly supplying the air (oxygen) to the liquid culture solution as in the aeration liquid culture method of the present invention, but the air is not forcibly supplied to the liquid culture medium. It should be noted that in systems that do not use oxygen, which is essential for the growth of mycelium, it cannot be supplied. Therefore, it can not be used in the pre-cultivation process, it can be used only in the culture process of liquid spawn in a forced aeration method. (However, if the above pre-cultivation process is converted to a forced aeration method, it is possible to use a defoamer.)

본 발명에서는 액체배양액의 제조시 통상의 경우와 마찬가지로 액체배양액을 균일하게 혼합한 다음, 이를 고온고압솥에서 살균시키는 것이 바람직하다. 이는 액체배양액이 다른 잡균에 의해 오염됨으로써 소망하는 담자균의 액상배지로 사용할 수 없게되는 가능성을 사전에 차단하기 위함이다. 그러나, 대량 생산의 경우, 액체배양액을 별도의 용기에서 살균시키고, 이 액체배양액을 미리 살균된 액체종균의 배양기에 각각 충전시켜 제조할 수 있다.In the present invention, it is preferable to uniformly mix the liquid culture solution in the same manner as usual when preparing the liquid culture solution, and then sterilize it in a high-temperature autoclave. This is to prevent the liquid culture liquid from being contaminated by other various bacteria to prevent the use of the liquid medium of the desired basidiomycetes in advance. However, in the case of mass production, the liquid culture solution may be sterilized in a separate container, and the liquid culture solution may be prepared by filling each incubator of the sterilized liquid seed.

(b) 전배양접종원의 접종단계(b) Inoculation step of pre-inoculation center

본 발명은 살균된 액체배양액에 진탕배양시킨 전배양접종원을 접종시켜 균사체의 액체배양물을 제조한다. 접종과정은 반드시 무균적으로 실시되어야 한다. 본 발명에서는 이를 위하여 접종기구를 사용한다.The present invention inoculates the pre-culture inoculation shaken in sterile liquid culture solution to prepare a liquid culture of the mycelia. The vaccination process must be performed aseptically. In the present invention, an inoculation device is used for this purpose.

제1도는 상기의 접종기구(10)를 개략적으로 도시한 개념도이다. 이 접종기구(10)는 접종용기(11)의 마개부(12)에 공기의 주입라인(14)과 전배양접종원(13)의 배출라인(18)이 설치되어 있다. 상기의 공기주입라인(14)에는 공기 속의 잡균을 여과할 수 있는 여과수단(15)이 설치되어 있고, 그 일단은 접종용기(11)의 밑바닥에 위치하고, 그 타단은 외부의 공기 공급수단(16)(예컨대, 에어콤프레서)에 연결되어 있다. 이때, 상기의 여과수단(15)은 공기중의 잡균을 걸러내어 액체배양액 및 액체배양물이 잡균에 의해 오염되는 것을 방지해준다. 이러한 여과수단(15)은 미생물 배양용 필터, 공기제균용 필터, 솜마개 필터 등을 사용할 수 있다. 한편, 상기의 전배양접종원의 배출라인(18)은 그 일단이 상기 전배양접종원(13)의 액상 표면위에 위치하고, 그 타단은 액체종균 배양기(21)에 설치된 액체종균의 접종관(26)에 연결되어 있다.[제2도 참조.]1 is a conceptual diagram schematically showing the inoculation device 10 described above. The inoculation mechanism 10 is provided with an air injection line 14 and a discharge line 18 of the pre-culture inoculation source 13 at the stopper 12 of the inoculation container 11. The air injection line 14 is provided with filtration means 15 for filtering various germs in the air, one end of which is located at the bottom of the inoculation vessel 11, the other end of which is provided with an external air supply means 16. (E.g., air compressor). At this time, the filtering means 15 to filter the various bacteria in the air to prevent the liquid culture liquid and the liquid culture is contaminated by the various bacteria. The filtration means 15 may be a filter for microbial culture, an air bactericidal filter, a cotton plug filter, or the like. On the other hand, the discharge line 18 of the pre-inoculation source is located on the liquid surface of the pre-inoculation source 13, the other end is in the inoculation tube 26 of the liquid seedlings installed in the liquid seed incubator 21 [See also Figure 2].

따라서, 접종용기(11) 내에 들어있는 전배양접종원을 액체종균배양기(21) 속으로 접종시키기 위해서는, 진탕배양단계를 마친 이후에, 무균상내에서 진탕배양용기의 마개를 열고 그 중에서 소정량의 전배양접종원을 접종용기(11)내로 주입시키고, 주입이 완료된 접종기구의 공기주입라인(14)을 공기공급수단(16)에 연결시키고, 상기의 전배양접종원의 배출라인(18)을 상기의 접종관(26)에 연결시킨 다음, 상기의 접종용기(11)를 거꾸로 한 상태에서, 대기압 보다도 높은 압력으로 주입시키면, 접종용기(11) 속에 들어 있는 전배양접종원(13)이 상기의 배출라인(18)과 접종관(26)을 따라 이동하여, 액체종균 배양기(21)속으로 모두 이동하게 된다. 이때, 상기의 전배양접종원의 배출라인(18)과 접종관(26) 사이에 액체유동량 측정기(27)를 설치하면, 전배양접종원(13)의 첨가량을 보다 정확하게 측정할 수 있게 된다[제2도 참조]. 만약에, 상기의 접종용기(11)를 그대로 둔 상태에서 전배양접종원(13)을 이동시키고자 할 경우에는 상기의 공기주입라인(14)과 배출라인(18)의 일단을 각각 반대로 설치하면 된다.Therefore, in order to inoculate the pre-inoculation source contained in the inoculation container 11 into the liquid seed culture incubator 21, after completion of the shaking culture step, the stopper of the shaking culture container is opened in a sterile phase and a predetermined amount of pre-incubation is performed. Inoculate the inoculation vessel 11 into the inoculation vessel 11, connect the air injection line 14 of the inoculation device, which has been injected, to the air supply means 16, and inoculate the discharge line 18 of the pre-inoculation source. When the inoculation vessel 11 is inverted and injected at a pressure higher than atmospheric pressure, the pre-inoculation source 13 contained in the inoculation vessel 11 is connected to the pipe 26. 18) and to move along the inoculation tube 26, both into the liquid seed incubator 21. At this time, if the liquid flow rate measuring device 27 is installed between the discharge line 18 and the inoculation tube 26 of the pre-culture inoculation source, the added amount of the pre-culture inoculation source 13 can be more accurately measured. See also]. If you want to move the pre-inoculation source 13 in the state in which the inoculation vessel 11 is left as it is, one end of the air injection line 14 and the discharge line 18 may be installed oppositely. .

본 발명에 있어서, 상기의 액체배양액 : 상기의 전배양접종원 = 20 내지 200 : 1의 비율로 접종시킨다. 보다 바람직하기로는 50 내지 100 : 1의 비율이다. 전배양접종원을 너무 적게 접종시키면 균사체의 성장이 더디거나 실패할 가능성이 커지는 반면에, 상기의 양을 초과하여 접종시키면 경제적인 측면에서 바람직하지 않기 때문이다.In the present invention, the above liquid culture solution: the pre-inoculation source = 20 to 200: 1 to inoculate the ratio. More preferably, it is the ratio of 50-100: 1. Too little inoculation of the pre-inoculation source increases the likelihood that the growth of mycelium will slow down or fail, whereas inoculation in excess of the above amount is not economically desirable.

한편, 상기의 제1도에서는 전배양된 전배양접종원을 접종용기(11)에 옮겨 담은 다음, 상기의 제반공정으로 진행시키는 방법을 설명하였으나, 좀더 대량생산방법에 있어서는 진탕배양용기를 접종용기(11)로 삼아 직접 액체종균 배양기(21) 속으로 무균적으로 접종시킬 수도 있다.On the other hand, in Figure 1 above, the pre-cultured pre-inoculation source in the inoculation vessel (11), and then described the method of proceeding to the above-mentioned process, but in a more mass production method shaking culture vessel inoculation vessel ( 11) may be directly inoculated aseptically into the liquid seed incubator (21).

(c) 액체배양물의 통기배양단계(c) Aeration culture step of liquid culture

본 발명에서는 진탕배양된 균사체(전배양접종원)를 상기의 액체 종균 배양기에접종시킨 후, 균사체가 접종된 액체배양물을 22~28℃에서 0.1 내지 1.0 vvm 정도의 제균된 공기로 5일 내지 12일 동안 통기배양시킨다. 이로써 본 발명의 최종목적물인 액체종균을 얻게 된다. 본 발명에 있어서, 액체배양물의 통기배양단계는 소정의 액체배양물의 통기배양기구를 이용하여 효율적으로 수행되어진다.In the present invention, after inoculating a shaker cultured mycelium (pre-inoculation source) in the liquid seed culture incubator, the liquid culture inoculated with the mycelium with a sterilized air of about 0.1 to 1.0 vvm at 22 ~ 28 ℃ 5 to 12 days Aeration for days. This results in a liquid seed which is the final object of the present invention. In the present invention, the aeration culture step of the liquid culture is efficiently performed using the aeration culture device of the predetermined liquid culture.

제2도는 본 발명에 의한 액체배양물의 통기배양단계를 보다 효율적으로 수행하기 위하여 개발된 액체배양물의 통기배양기구(20)에 관한 개략도이다. 이 통기배양기구(20)는 액체배양물을 수용하는 액체종균 배양기(21)와 그의 뚜껑부(22)로 구성되어 있고, 그의 뚜껑부(22)에는 외부로부터 공기를 주입시키는 공기주입관(24)과, 외부에서 액체배양액을 투입시키거나 그 액체배양액에 균사체를 접종시키는 접종관(26)과, 액체종균 배양기(21)의 내부로부터 공기를 배출시키는 공기배출관(28)과, 통기배양후 액체종균을 배출시키는 액체종균의 배출관(29)이 설치되어 있다. 그러나, 상기의 접종관(26)과 배출관(29)을 하나로 통합시켜 2개의 기능을 동시에 수행할 수도 있다. 상기의 공기주입관(24)에는 공기 속의 잡균을 여과할 수 있는 여과수단(25a)이 설치되어 있고, 그 일단은 액체종균 배양기(21)의 바닥부분에 위치하고, 그 타단은 외부의 공기 공급수단(16)(예컨대, 에어콤프레서)에 연결되어진다. 또한, 상기의 접종관(26)은 그 일단이 액체종균 배양기(21)의 바닥부분에 위치하고, 그 타단은 다른 연결관(도시되지 않음)에 연결되어 액체배양액이나 전배양접종원을 공급받는다. 이대, 상기의 타단 안쪽에는 액체유동량 측정기(27)를 설치하는 것이 바람직하다. 또한, 상기의 공기배출관(28)은 그 일단이 액체배양물(23)의 표면위에 위치하고, 그 타단은 외부의 대기에 개방되어 있으나, 그 타단부에 여과수단(25b)을 설치하는 것이 바람직하다. 이때, 상기의 여과수단(25a)은 외부로부터 공급되는 공기중에서 잡균을 여과시키는 반면에, 상기의 또다른 여과수단(25b)은 액체종균 배양기(21)내에서 발생했을지도 모를 해독성 유해균이 외부로 방출되는 것을 막아준다. 한편, 상기의 액체종균의 배출관 (29)은 그 일단이 액체종균 배양기(21)의 밑바닥에 위치하고, 그 타단은 외부에 개방되어 있으나, 그 타단부에 액체유동량 측정기(27)를 설치하는 것이 바람직스럽다. 상기의 액체유동량 측정기(27)는 액체종균 배양기(21)로 유입되는 액체배양액이나 전배양접종원의 투입량과, 액체종규 배양기(21)로부터 유출되는 액체종균의 배출량을 정확히 계량할 수 있도록 한다. 상기의 공기주입관(24)과 접종관(26) 및 액체종균의 배출관(29)의 타단부에는 다른 부재와의 효율적인 연결을 위하여 각각 연결수단(31)을 설치하고, 그곳을 흐르는 유체(공기 또는 액체)의 통제를 위하여 각각 잠금장치(32a)(32b)(32c)(32d)를 설치하는 것이 바람직스럽다.2 is a schematic view of the aeration culture mechanism 20 of the liquid culture developed to more efficiently perform the aeration culture step of the liquid culture according to the present invention. The aeration culture device 20 is composed of a liquid spawn incubator 21 for receiving a liquid culture and a lid portion 22 thereof, and an air injection tube 24 for injecting air from the outside into the lid portion 22 thereof. ), An inoculation tube 26 into which the liquid culture liquid is introduced or inoculated with the mycelium in the liquid culture liquid, an air discharge tube 28 which discharges air from the inside of the liquid seed incubator 21, and a liquid after aeration culture. A discharge tube 29 for liquid spawn for discharging spawn is provided. However, the inoculation tube 26 and the discharge tube 29 may be integrated into one to perform two functions simultaneously. The air inlet tube 24 is provided with filtration means 25a capable of filtering various bacteria in the air, one end of which is located at the bottom of the liquid seed incubator 21, and the other end of which is provided with an external air supply means. (16) (e.g., air compressor). In addition, one end of the inoculation tube 26 is located at the bottom of the liquid spawn incubator 21, and the other end thereof is connected to another connecting tube (not shown) to receive the liquid culture solution or the preculture inoculation source. It is preferable to provide a liquid flow rate measuring device 27 inside the other end. In addition, the air discharge pipe 28, the one end is located on the surface of the liquid culture 23, the other end is open to the outside atmosphere, it is preferable to provide the filtering means 25b at the other end. . At this time, the filtering means (25a) filters the bacteria in the air supplied from the outside, while the other filtering means (25b) is detoxifying harmful bacteria that may have occurred in the liquid spawn incubator 21 to the outside Prevent release. On the other hand, the discharge tube 29 of the liquid spawn is located at the bottom of the liquid spawn incubator 21, the other end is open to the outside, it is preferable to install the liquid flow rate measuring device 27 on the other end That's right. The liquid flow rate measuring device 27 may accurately measure the amount of the liquid culture solution or the preculture inoculation source flowing into the liquid seed incubator 21 and the amount of the liquid seed flowing out of the liquid seed incubator 21. The other end of the air injection pipe 24, the inoculation pipe 26 and the discharge tube 29 of the liquid spawn is provided with a connecting means 31 for efficient connection with other members, respectively, and the fluid flowing therein (air Or locking devices 32a, 32b, 32c and 32d, respectively, for the control of the liquid).

따라서, 상기의 통기배양기구(20)를 이용할 경우, 다음과 같이 통기배양단계를 효율적으로 수행할 수 있게된다. 먼저, 상기의 접종관(26)을 통하여, 상기 액체배양액의 준비단계에서 준비한 액체배양액과 상기 전배양액의 준비단계에서 준비한 전배양접종원을 차례로 액체종균 배양기(21)에 투입함으로써, 균사체가 접종된 액체배양물(23)을 만든다. 이때, 상기의 액체배양액과 상기의 전배양접종원의 배합비율은 미리 설정된 용량의 배양용기를 통해 이루어질 수도 있으나, 대량생산의 경우, 상기의 액체유동량 측정기(27)를 통해 간편하게 해결할 수 있다. 그 후, 상기의 공기주입관(24)을 통하여 공기를 강제적으로 투입하면, 액체배양물(23)내에서 기포가 발생되고, 이 기포가 위쪽으로 이동함에 따라서 액체배양물(23)에 산소가 공급됨과 동시에, 액체배양물(23)을 계속적으로 끊임없이 유동시켜 균일하게 혼합시키게 된다. 공기의 주입량은 통상의 경우와 마찬가지로 0.1 내지 1.0 vvm 정도가 바람직하다. 공기의 주립량이 0.1 vvm 이하일 경우엔 액체배양물(23)에 충분한 산소의 공급이 어렵고 또한 혼합효과도 적은 반면에, 공기의 주입량이 1.0 vvm 이상일 경우엔 산소의 공급은 충분하나 액체배양물(23)을 지나치게 요동시키고, 불필요한 거품을 일으켜서 배양액의 손실을 가져와 고품질의 액체종균을 얻을 수 없기 때문이다. 또한, 이러한 배양과정은 22~28℃에서 행해지는데, 이는 담자균의 균사체가 이 온도범위에서 최적의 성장환경을 갖기 때문이다.Therefore, when using the aeration culture mechanism 20, it is possible to efficiently perform the aeration culture step as follows. First, the mycelium is inoculated by injecting the liquid culture solution prepared in the preparation step of the liquid culture solution and the preculture inoculation source prepared in the preparation step of the preculture solution into the liquid seed culture incubator 21 in order through the inoculation tube 26. Make a liquid culture (23). At this time, the mixing ratio of the liquid culture solution and the pre-culture inoculation source may be made through a culture vessel of a predetermined capacity, but in the case of mass production, it can be easily solved through the liquid flow rate measuring device 27. Subsequently, when air is forcibly introduced through the air injection pipe 24, bubbles are generated in the liquid culture 23, and oxygen flows into the liquid culture 23 as the bubbles move upward. At the same time as it is supplied, the liquid culture 23 continuously and continuously flows to be uniformly mixed. As for the injection amount of air, about 0.1-1.0 vvm is preferable like usual. When the amount of air is 0.1 vvm or less, supply of sufficient oxygen to the liquid culture 23 is difficult and the mixing effect is small. On the other hand, when the amount of air injection is 1.0 vvm or more, the supply of oxygen is sufficient but the liquid culture (23 This is because it is not possible to obtain a high quality liquid seed by excessively rocking) and causing unnecessary foaming, resulting in loss of culture solution. In addition, this culturing process is carried out at 22 ~ 28 ℃, because the mycelium of basidiomycete has the optimum growth environment in this temperature range.

이러한 조건하에서 5일 내지 12일 정도 배양시키면, 액체배양물(23)내에 존재하는 각각의 균사체가 점점 성장하여 작은 균사체구를 형성하고, 이러한 균사체구가 무수히 고르게 성장하여, 본 발명에서 요구하는 고품질의 액체종균이 되는 것이다.When cultured under these conditions for about 5 to 12 days, each mycelium present in the liquid culture 23 gradually grows to form small mycelial spheres, and these mycelium spheres grow innumerably and evenly, thereby requiring high quality required by the present invention. It becomes the liquid spawn of.

소망하는 액체종균이 얻어지면, 다음과 같은 과정을 거쳐 무균적으로 액체종균을 자동배출시킨다. 먼저, 공기배출관(28)의 잠금장치(32c)를 닫고(이 경우, 상기 접종관(26)의 잠금장치(32b)는 닫혀 있음.), 배출관(29)의 잠금장치(32d)를 열어주면, 공기주입관(24)을 통해 들어온 공기압에 의해, 액체종균 배양기(21) 속의 액체종균 [즉, 통기배양이 완료된 액체배양물(23)] 이 배출관(29)을 통해 외부로 자동적으로 배출되어진다.When the desired liquid spawn is obtained, the liquid spawn is automatically discharged aseptically through the following procedure. First, when the lock device 32c of the air discharge pipe 28 is closed (in this case, the lock device 32b of the inoculation pipe 26 is closed), and the lock device 32d of the discharge pipe 29 is opened. , By the air pressure introduced through the air inlet tube 24, the liquid spawn in the liquid spawn incubator 21 (that is, the liquid culture completed with the aeration culture) is automatically discharged to the outside through the discharge pipe 29. Lose.

[실시예]EXAMPLE

이하, 본 발명을 실시예에 의하여 보다 구체적으로 설명한다. 본 실시예에 있어서 제시된 조건은 본 발명의 기술사상을 보다 상세히 설명하기 위한 것으로서 이를 예시한 것에 불과하다. 따라서, 본 발명은 하기의 실시예에 제시된 조건으로 한정되는 것이 아니며, 또한 그러한 의미로 해석되어서도 안된다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. The conditions presented in this embodiment are merely to illustrate the technical spirit of the present invention in more detail. Accordingly, the invention is not limited to the conditions set forth in the following examples and should not be construed in that sense.

(가)느타리버섯의 액체종균 배양(A) Liquid spawn culture of the mushroom

페트리접시에서 확대배양된 느타리버섯의 균사체가 약 70% 정도 자랐을 때, 백금구로 3개의 균사체 조각을 표 1과 같은 조성의 액체배지에 접종시킨다.When the mycelium of Pleurotus eryngii grown in Petri dishes grows about 70%, three pieces of mycelium are inoculated into the liquid medium using platinum sphere.

Figure kpo00002
Figure kpo00002

위와 같은 액체배지에 균사체를 접종시켜 전배양물을 얻고, 이 전배양물을 100 ± 5rpm, 약 25℃에서 7일간 진탕배양시켜서 전배양접종원을 얻은 다음, 이를 별도의 접종기구에 따라놓는다. 그 후, 표 1과 같은 조성의 액체배양액을 준비하고, 이 액체배양액을 본 발명에 의한 통기배양기구에 모두 충전시킨다. 상기의 액체배양액 10,000ml에 대하여 상기의 전배양접종원 200ml를 접종시키고, 약 25℃에서 제균된 공기를 0.4vvm의 속도로 6일간 계속 공급하여 액체종균을 얻는다. 그 후, 배양이 완료된 액체종균을 볏짚배지에 균일하게 살포하여 느타리버섯을 재배한다.Inoculate the mycelium to the above liquid medium to obtain a preculture, the preculture was shaken at 100 ± 5rpm, about 25 ℃ for 7 days to obtain a pre-culture inoculation, and then placed in a separate inoculation device. Thereafter, a liquid culture liquid having the composition shown in Table 1 is prepared, and the liquid culture liquid is filled in all of the aeration culture apparatus according to the present invention. 200 ml of the pre-inoculation source was inoculated with 10,000 ml of the liquid culture solution, and the sterilized air at about 25 ° C. was continuously supplied for 6 days at a rate of 0.4 vvm to obtain a liquid seed. Thereafter, the cultured liquid spawn is uniformly sprayed on rice straw medium to grow oyster mushrooms.

(나) 표고버섯의 액체종균 배양(B) Culture of liquid spawn of shiitake mushrooms

페트리접시에서 확대배양된 표고버섯의 균사체가 약 70% 정도 자랐을 때, 백금구로 3개의 균사체 조각을 표 2와 같은 조성의 액체배지에 접종시킨다.When the mycelia of shiitake mushrooms grown in Petri dishes grow about 70%, three mycelium fragments are inoculated into the liquid medium using a platinum ball.

Figure kpo00003
Figure kpo00003

위와 같은 액체배지에 균사체를 접종시켜 전배양물을 얻고, 이 전배양물을 90 ± 5 rpm, 약 25℃에서 7일간 진탕배양시켜서 전배양접종원을 얻은 다음, 이를 별도의 접종기구에 따라놓는다. 그 후, 표 2와 같은 조성의 액체배양액을 준비하고, 이 액체배양액을 본 발명에 의한 통기배양기구에 모두 충전시킨다. 이때, 거품제거제로서는 가정용 식용유인 옥수수기름을 사용한다. 상기의 액체배양액 10,000ml에 대하여 상기의 전배양접종원 100ml를 접종시키고, 약 26℃에서 제균된 공기를 0.6 vvm의 속도로 6일간 계속 공급하여 액체종균을 얻는다. 그 후, 배양이 완료도니 액체종균을 원목배지에 접종하여 표고버섯을 재배한다.Inoculate the mycelium to the above liquid medium to obtain a preculture, the preculture is shaken at 90 ± 5 rpm, about 25 ℃ for 7 days to obtain a pre-culture inoculation, and then placed in a separate inoculation device. Thereafter, a liquid culture liquid having the composition shown in Table 2 is prepared, and the liquid culture liquid is filled in both the aeration culture apparatus according to the present invention. At this time, corn oil which is household cooking oil is used as the antifoaming agent. 100 ml of the pre-inoculation source was inoculated with 10,000 ml of the liquid culture solution, and the sterilized air at about 26 ° C. was continuously supplied for 6 days at a rate of 0.6 vvm to obtain a liquid seed. After that, the incubation is completed, the liquid seedlings are inoculated in a log medium to cultivate shiitake mushrooms.

(다) 복령의 액체종균 배양(C) Culture of liquid seedlings of Bokryeong

페트리접시에서 확대배양된 복령의 균사체가 약 70% 정도 자랐을 때, 백금구로 5개의 균사체 조각을 표 3와 같은 조성의 액체배지에 접종시킨다.When approximately 70% of the mycelium of Fuling expanded in Petri dishes was grown, 5 pieces of mycelium were inoculated into the liquid medium using the platinum sphere.

Figure kpo00004
Figure kpo00004

위와 같은 액체배지에 균사체를 접종시켜 전배양물을 얻고, 이 전배양물을 120 ± 5 rpm, 약 25℃에서 9일간 진탕배양시켜서 전배양접종원을 얻은 다음, 이를 별도의 접종기구에 따라놓는다. 그 후, 표 3과 같은 조성의 액체배양액을 준비하고, 이 액체배양액을 본 발명에 의한 통기배양기구에 모두 충전시킨다. 이때, 거품제거제로서는 가정용 식용유인 대두유를 사용한다. 상기의 액체배양액 10,000ml에 대하여 상기의 전배양접종원 300ml를 접종시키고, 약 27℃에서 제균된 공기를 0.6 vvm의 속도로 9일간 계속 공급하여 액체종균을 얻는다. 그 후, 배양이 완료된 액체종균을 배지에 접종하여 복령버섯을 재배한다.Inoculate the mycelium to the above liquid medium to obtain a preculture, the preculture was shaken at 120 ± 5 rpm, about 25 ℃ for 9 days to obtain a pre-culture inoculation, then placed in a separate inoculation device. Thereafter, a liquid culture liquid having the composition shown in Table 3 is prepared, and the liquid culture liquid is filled in all the aeration culture apparatus according to the present invention. At this time, soybean oil which is household cooking oil is used as a defoaming agent. 300 ml of the pre-inoculation source was inoculated with 10,000 ml of the liquid culture solution, and the sterilized air at about 27 ° C. was continuously supplied at a rate of 0.6 vvm for 9 days to obtain a liquid seed. After that, inoculate the medium after the completion of the culture of the liquid seed culture to cultivate Bokryong mushroom.

(라) 상황버섯의 액체종균 배양(D) Culture of liquid spawn of situation mushroom

페트리접시에서 확대배양된 상황버섯의 균사체가 약 80% 정도 자랐을 때, 백금구로 5개의 균사체 조각을 표 4와 같은 조성의 액체 배지에 접종시킨다.When the mycelium of the situation mushrooms expanded in Petri dishes grew about 80%, five mycelium fragments were inoculated into the liquid medium using a platinum ball.

Figure kpo00005
Figure kpo00005

위와 같은 액체배지에 균사체를 접종시켜 전배양물을 얻고, 이 전배양물을 120 ± 5 rpm, 약 25℃에서 9일간 진탕배양시켜서 전배양접종원을 얻는다. 그 후, 표 4과 같은 조성의 액체배양액을 준비하고, 이 액체배양액을 본 발명에 의한 통기배양기구에 모두 충전시킨다. 이때, 거품제거제로서는 가정용 식용유인 대두유를 사용한다. 상기의 액체배양액 10,000ml에 대하여 상기의 전배양접종원 400ml를 접종시키고, 약 27℃에서 제균된 공기를 0.6 vvm의 속도로 10일간 계속 공급하여 액체종균을 얻는다. 그 후, 배양이 완료된 액체종균을 배지에 접종하여 상황버섯을 재배한다.Inoculate the mycelium to the above liquid medium to obtain a preculture, the preculture is obtained by pre-incubation by shaking culture for 9 days at 120 ± 5 rpm, about 25 ℃. Thereafter, a liquid culture liquid having the composition shown in Table 4 is prepared, and the liquid culture liquid is filled in all the aeration culture apparatuses according to the present invention. At this time, soybean oil which is household cooking oil is used as a defoaming agent. 400 ml of the pre-inoculation source was inoculated with 10,000 ml of the liquid culture solution, and the sterilized air at about 27 ° C. was continuously supplied at a rate of 0.6 vvm for 10 days to obtain a liquid seed. Thereafter, the cultured liquid spawn is inoculated into the medium to grow the situation mushroom.

[발명의 효과][Effects of the Invention]

본 발명에 의한 액체종균의 제조방법은 종래와는 달리, 전 과정이 일련의 공정으로 진행되므로 대량생산이 가능하고, 또한 그 일련의 공정이 무균적으로 수행되므로 잡균의 감염에 의한 불량품의 발생이 현저하게 줄어들게 되는 효과가 있다.Unlike the conventional method for producing a liquid spawn according to the present invention, since the whole process proceeds in a series of processes, mass production is possible, and since the series of processes are performed aseptically, the occurrence of defective products due to infection of various germs is prevented. There is an effect that is significantly reduced.

또한, 본 발명의 제조방법에 의하여 제조된 액체종균은, 담자균의 균사체가 전배양의 초기부터 액체종균의 배양단계까지 심한 요동 내지 회전에 의한 환경속에서 성장한 반면에, 그 과정에서 종래와는 달리 효소분해과정이 없이 필요한 영양원을 직접 흡수하면서 성장하였으므로, 균사체의 자생력 및 활력이 뛰어난 효과가 있는 것이다. 따라서, 본 발명에 의한 액체종균을 사용할 경우, 동일한 재배조건하에서 비교할 때, 종래에 비하여 고품질의 버섯제품을 얻을 수 있다.In addition, the liquid spawn prepared by the production method of the present invention, while mycelia of the basidiomycetes grew in the environment by severe fluctuations or rotations from the beginning of the preculture to the culture stage of the liquid spawn, unlike in the process Since it grew while absorbing the necessary nutrients directly without the enzymatic degradation process, the mycelia and the vitality is excellent. Therefore, when using the liquid spawn according to the present invention, when compared under the same cultivation conditions, it is possible to obtain a high-quality mushroom product compared to the conventional.

이상에서 본 발명의 바람직한 실시형태를 첨부된 도면에 의거하여 설명하였고, 그 실시예를 들어 상세히 설명하였으나, 이는 본 발명의 기술사상을 설명하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 그에 한정되는 것은 아니다. 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자이면, 상기의 명세서를 기준으로하여 본 발명의 기술사상의 범위내에서 다양한 형태의 모방 및 변형이 가능함을 알 수 있을 것이다. 예컨대, 본 발명에 의한 액체종균의 배양방법에 통상의 방법을 부가하는 것들을 들 수 있다.Preferred embodiments of the present invention have been described above with reference to the accompanying drawings, which have been described in detail with reference to the examples. However, this is only to explain the technical spirit of the present invention, and the scope of the present invention is not limited thereto. . Those skilled in the art to which the present invention pertains will be understood that various forms of imitation and modification are possible within the scope of the technical idea of the present invention based on the above specification. For example, those which add a conventional method to the cultivation method of a liquid seed | seat according to this invention can be mentioned.

( ※ 본 발명은 본 발명자인 강원대학교 농업생명과학대학 성 재모교수에 의해, 지난 1996. 11. 22.자로, '강원도'가 주최하고 '강원대학교 농촌개발연구소'에서 주관한 『버섯 경쟁력 제고방안 세미나』에서 간행물로 발표되었는 바, 본 발명자는 특허법 제30조 제1항 제1호에 의거하여 신규성의제의 적용을 받고자 합니다.)(※ The present invention was developed by Prof. Jae-Mo Sung, a professor of agricultural and life sciences at Kangwon National University, and was promoted by `` Gangwon-do Rural Development Institute '' hosted by Gangwon-do. It was published as a publication in the seminar, and the present inventor intends to be subject to the new agenda pursuant to Article 30 (1) 1 of the Patent Act.)

Claims (11)

담자균류의 원균을 분양받아 이를 평판배양시키는 공정, 평판배양된 접종원을 전배양시키는 공정, 그리고 전배양된 접종원을 액체 배양시키는 공정으로 구성된 담자균류의 액체배양방법에 있어서,In the liquid culture method of basidiomycetes comprising the steps of receiving the protococcus of basidiomycetes, plate culture, preculture of plate cultured inoculum, and liquid culture of precultured inoculum, 1) 상기의 전배양공정은 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH2PO40~0.15%(w/v), MgSO4·7H2O 0~0.15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 전배양액의 준비단계, (b) 상기의 전배양액에 평판배양된 담자균류를 접종하는 단계, (c) 상기의 접종된 전배양물을 80~200 rpm, 22~30℃의 진탕배양기에서 6일 내지 8일간 배양시키는 단계로 구성되고;1) The pre-culture step (a) 2 ~ 7% (w / v) carbon source, 0.1 ~ 1.0% (w / v) nitrogen source, 0 ~ 0.15% (w / v) KH 2 PO 4 , MgSO 4 · 7H 2 O 0 ~ 0.15% (w / v), and the step of preparing a pre-culture solution consisting of the remaining distilled water, (b) inoculating the plate cultured basidiomycete in the pre-culture solution, (c) the inoculated above Culturing the culture in a shaker at 80-200 rpm, 22-30 ° C. for 6 days to 8 days; 2) 상기의 액체배양공정은 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH2PO40~0.15%(w/v), MgSO4·7H2O 0~0.15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 액체배양액을 준비하는 단계, (b) 상기의 액체배양액에 상기의 전배양접종원을 무균적으로 자동접종 시키되 상기의 액체 배양액 : 상기의 전배양접종원 =20 내지 200 : 1의 비율로 접종시키는 단계, (c) 상기의 접종된 전배양물을 22~28℃에서 0.1 내지 1.0 vvm 정도의 제균된 공기로 5일 내지 12일 동안 통기배양시키는 단계로 구성되는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균의 배양방법.2) The above liquid culture process (a) 2 ~ 7% (w / v) carbon source, 0.1 ~ 1.0% (w / v) nitrogen source, 0 ~ 0.15% (w / v) KH 2 PO 4 , MgSO 4 · 7H 2 O 0 ~ 0.15% (w / v), and preparing a liquid culture consisting of the remaining distilled water, (b) aseptically inoculated the pre-inoculation source of the above liquid culture medium, but the liquid culture medium: Inoculating the pre-inoculation source = 20 to 200: 1 ratio, (c) the inoculated pre-culture at 5 ~ 12 days with the sterilized air of 0.1 to 1.0 vvm at 22 ~ 28 ℃ Culture method of liquid spawn of basidiomycete, characterized in that consisting of aeration culture. 제1항에 있어서, 1) (a).전배양액의 준비단계와 2) (a).액체배양액의 준비단계에서 각각의 탄소원은 설탕, 맥아당, 과당, 포도당, 자당, 맥아추출물, 그리고 물엿으로 구성된 그룹 중에서 1 또는 2 이상을 선택적으로 사용하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균의 배양방법.The method of claim 1, wherein 1) (a) .Preparation of the preculture and 2) (a) .In the preparation of the liquid culture, the respective carbon sources are sugar, maltose, fructose, glucose, sucrose, malt extract, and starch syrup. Cultivation method of the liquid spawn of basidiomycete, characterized in that selectively using one or two or more from the group consisting of. 제1항 또는 제2항에 있어서, 1) (a).전배양액의 준비단계와 2) (a).액체배양액의 준비단계에서 질소원은 대두분이나 펩톤 중에서 어느 하나 또는 둘을 함께 사용하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균의 배양방법.The method of claim 1 or 2, wherein 1) (a) .preparation of the preculture and 2) (a) .preparation of the liquid culture, the nitrogen source is one or both of soy flour and peptone. Cultivation method of liquid spawn of basidiomycete characterized in that. 제3항에 있어서, 2) (a).액체배양액의 준비단계에서 액체종균의 배양시에 발생하는 거품을 없애기 위하여, 혼합이 완료된 배양액에 거품제거제를 첨가하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균의 배양방법.2) (a). Liquid spawn of basidiomycete, characterized in that the addition of a defoamer to the mixed culture medium in order to eliminate the bubbles generated during the culture of the liquid spawn in the preparation step of the liquid culture solution. Cultivation method of. 제4항에 있어서, 거품제거제는 각종의 동물성 기름과 식물성 기름인 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균의 배양방법.The method of culturing liquid spawn of basidiomycetes according to claim 4, wherein the antifoaming agent is various animal oils and vegetable oils. 제5항에 있어서, 식물성 기름은 가정용 식용유, 면실유, 피마자유, 올리브유, 야자유 등으로 구성된 그룹 중에서 1 또는 2 이상을 사용하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균의 배양방법.The method of cultivating a liquid spawn of basidiomycete according to claim 5, wherein the vegetable oil is used in the group consisting of household cooking oil, cottonseed oil, castor oil, olive oil, palm oil, and the like. 제1항에 있어서, 2) (b) 액체배양액의 자동 접종단계는 접종기구(10)를 사용하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균의 배양방법.The method of claim 1, wherein 2) (b) the automatic inoculation step of the liquid culture solution is characterized by using the inoculation device (10). 제1항에 있어서, 2) (c) 액체배양물의 통기배양단계는 통기배양기구(20)를 사용하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균의 배양방법.According to claim 1, 2) (c) Aeration culture step of the liquid culture method of culturing the liquid spawn of basidiomycete, characterized in that using the aeration culture mechanism (20). 제8항에 있어서, 상기의 통기배양기구(20)는 액체배양물을 수용하는 액체종균 배양기(21)와 그의 뚜껑부(22)로 구성되어 있고, 그의 뚜껑부(22)에는 외부로부터 공기를 주입시키는 공기주입관(24)0과, 외부에서 액체배양액을 투입시키거나 그 액체배양액에 균사체를 접종시키는 접종관(26)과, 액체종균 배양기(21)의 내부로부터 공기를 배출시키는 공기배출관(28)과, 통기배양후 액체종균을 배출시키는 액체종균의 배출관(29)이 설치되어 있는 것을 사용하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균의 배양방법.9. The aeration culture apparatus (20) according to claim 8, wherein the aeration culture device (20) is composed of a liquid seed incubator (21) for accommodating a liquid culture and a lid portion thereof (22). An air injection tube 24 for injecting, an inoculation tube 26 for injecting a liquid culture solution from the outside or inoculating a mycelium into the liquid culture solution, and an air discharge tube for discharging air from the inside of the liquid seed incubator 21 ( 28) and a liquid spawn culture method of basidiomycetes, characterized in that the discharge tube 29 of the liquid spawn for discharging the liquid spawn after the aeration culture is used. 제9항에 있어서, 상기의 통기배양기구(20)는 접종관(26)과 배출관(29)을 하나로 통합시켜 2개의 기능을 동시에 수행하는 것을 특징으로 하는 담자균류의 액체종균의 배양방법.10. The method of claim 9, wherein the aeration culture apparatus 20 is a method for culturing the liquid spawn of basidiomycete, characterized in that to perform two functions simultaneously by integrating the inoculation tube (26) and the discharge tube (29) into one. 담자균류의 원균을 분양받아 이를 평판배양시키는 공정, 평판배양된 접종원을 전배양시키는 공정, 그리고 전배양된 접종원을 액체 배양시키는 공정을 거쳐 배양되는 담자균류의 액체종균에 있어서,In the liquid spawn of basidiomycete cultivated through the process of receiving a culture of the progeny of basidiomycete, plate culture, preculture of plate cultured inoculum, and liquid culture of precultured inoculum, 1). 상기의 전배양공정으로서 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH2PO40~0.15%(w/v), MgSO4·7H2O 0~0.15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 전배양액의 준비단계, (b) 상기의 전배양액에 평판배양된 담자균류를 접종하는 단계, (c) 상기의 접종된 전배양물을 80~200 rpm, 22~30℃의 진탕배양기에서 6일 내지 8일간 배양시키는 단계로 이행되고;One). As the pre-culture step (a) 2 to 7% (w / v) carbon source, 0.1 to 1.0% (w / v) nitrogen source, 0 to 0.15% (w / v) KH 2 PO 4 , MgSO 4 · 7H 2 O 0 ~ 0.15% (w / v), and the preparation step of the pre-culture solution consisting of the remaining distilled water, (b) inoculating the plate cultured basidiomycetes in the pre-culture solution, (c) the inoculated pre-culture It is carried out to the step of culturing 6 to 8 days in a shaker at 80 ~ 200 rpm, 22 ~ 30 ℃; 2). 상기의 액체배양공정으로서 (a) 탄소원 2~7%(w/v), 질소원 0.1~1.0%(w/v), KH2PO40~0.15%(w/v), MgSO4·7H2O 0~0.15%(w/v), 그리고 나머지 증류수로 이루어진 액체배양액을 준비하는 단계, (b) 상기의 액체배양액에 상기의 전배양접종원을 무균적으로 자동접종시키되 상기의 액체배양액 : 상기의 전배양접종원 = 20 내지 200 : 1의 비율로 접종시키는 단계, (c) 상기의 접종된 액체배양물을 22~28℃에서 0.1 내지 1.0 vvm 정도의 제균된 공기로 5일 내지 12일 동안 통기배양시키는 단계로 이행되는 것을 특징으로 하여 배양되어지는 담자균류의 액체종균.2). As the above liquid culture process, (a) 2 to 7% (w / v) carbon source, 0.1 to 1.0% (w / v) nitrogen source, 0 to 0.15% (w / v) KH 2 PO 4 , MgSO 4 · 7H 2 O 0 ~ 0.15% (w / v), and preparing a liquid culture consisting of the remaining distilled water, (b) aseptic inoculation of the pre-inoculation source to the above liquid culture solution, but the liquid culture solution of the above Inoculating the pre-inoculation source = 20 to 200: 1, (c) aerated culture of the inoculated liquid culture with sterilized air at 0.1-1.0 vvm at 22-28 ° C. for 5-12 days Liquid spawn of basidiomycetes to be cultured, characterized in that the step is shifted to.
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